RU2021131650A - Отличные от человека животные, имеющие ограниченный репертуар легких лямбда-цепей, экспрессируемый из локуса капли, и их применение - Google Patents

Claims (129)

1. Генетически модифицированный грызун, геном зародышевой линии которого содержит:

сконструированный эндогенный локус легкой κ-цепи иммуноглобулина, содержащий одну реаранжированную человеческую вариабельную область легкой λ-цепи иммуноглобулина, функционально связанную с генным сегментом Cλ грызуна, причем одна реаранжированная человеческая вариабельная область легкой λ-цепи иммуноглобулина содержит человеческий генный сегмент Vλ и человеческий генный сегмент Jλ,

при этом все легкие λ-цепи иммуноглобулина, экспрессируемые В-клетками генетически модифицированного грызуна, содержат человеческие вариабельные домены легкой λ-цепи иммуноглобулина, экспрессируемые из одной реаранжированной человеческой вариабельной области легкой λ-цепи иммуноглобулина или ее соматически гипермутированной версии.

2. Генетически модифицированный грызун по п. 1, в котором геном зародышевой линии генетически модифицированного грызуна является гомозиготным по сконструированному эндогенному локусу легкой κ-цепи иммуноглобулина.

3. Генетически модифицированный грызун по п. 1, в котором геном зародышевой линии генетически модифицированного грызуна является гетерозиготным по сконструированному эндогенному локусу легкой κ-цепи иммуноглобулина.

4. Генетически модифицированный грызун по любому из пп. 1-3, геном зародышевой линии которого дополнительно содержит:

сконструированный эндогенный локус тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащий один или более нереаранжированных человеческих генных сегментов V_H, один или более нереаранжированных человеческих генных сегментов D_H и один или более нереаранжированных человеческих генных сегментов J_H, функционально связанных с одним или более эндогенными генами константной области тяжелой цепи иммуноглобулина,

при этом все тяжелые цепи, экспрессируемые В-клетками генетически модифицированного грызуна, содержат человеческие вариабельные домены тяжелой цепи иммуноглобулина и константные домены тяжелой цепи иммуноглобулина грызуна.

5. Генетически модифицированный грызун по п. 4, в котором геном зародышевой линии генетически модифицированного грызуна является гомозиготным по сконструированному эндогенному локусу тяжелой цепи иммуноглобулина.

6. Генетически модифицированный грызун по любому из пп. 1-5, в котором у генетически модифицированного грызуна отсутствует ген Cκ грызуна в сконструированном эндогенном локусе легкой κ-цепи иммуноглобулина.

7. Генетически модифицированный грызун по любому из пп. 1-6, в котором человеческий генный сегмент Vλ включает Vλ1-51, Vλ5-45, Vλ1-44, Vλ1-40, Vλ3-21 или Vλ2-14.

8. Генетически модифицированный грызун по любому из пп. 1-7, в котором человеческий генный сегмент Vλ включает Vλ1-51.

9. Генетически модифицированный грызун по любому из пп. 1-7, в котором человеческий генный сегмент Vλ включает Vλ2-14.

10. Генетически модифицированный грызун по любому из пп. 1-9, в котором человеческий генный сегмент Jλ включает Jλ1, Jλ2, Jλ3, Jλ6 или Jλ7.

11. Генетически модифицированный грызун по любому из пп. 1-10, в котором человеческий генный сегмент Jλ включает Jλ2.

12. Генетически модифицированный грызун по любому из пп. 4-11, в котором один или более нереаранжированных генных человеческих сегментов V_H, один или более нереаранжированных человеческих генных сегментов D_H и один или более нереаранжированных человеческих генных сегментов J_H помещаются на место одного или более эндогенных генных сегментов V_H, одного или более эндогенных генных сегментов D_H, одного или более эндогенных генных сегментов J_H или их комбинации.

13. Генетически модифицированный грызун по любому из пп. 4-12, в котором один или более нереаранжированных человеческих генных сегментов V_H, один или более нереаранжированных человеческих генных сегментов D_H и один или более нереаранжированных человеческих генных сегментов J_H заменяют один или более эндогенных генных сегментов V_H, один или более эндогенных генных сегментов D_H и один или более эндогенных генных сегментов J_H, соответственно.

14. Генетически модифицированный грызун по п. 12 или п. 13, в котором один или более генов константной области тяжелой цепи иммуноглобулина грызуна представляют собой один или более эндогенных генов константной области тяжелой цепи иммуноглобулина грызуна.

15. Генетически модифицированный грызун по любому из пп. 4-14, в котором:

(i) один или более нереаранжированных человеческих генных сегментов V_H включают V_H3-74, V_H3-73, V_H3-72, V_H2-70, V_H1-69, V_H3-66, V_H3-64, V_H4-61, V_H4-59, V_H1-58, V_H3-53, V_H5-51, V_H3-49, V_H3-48, V_H1-46, V_H1-45, V_H3-43, V_H4-39, V_H4-34, V_H3-33, V_H4-31, V_H3-30, V_H4-28, V_H2-26, V_H1-24, V_H3-23, V_H3-21, V_H3-20, V_H1-18, V_H3-15, V_H3-13, V_H3-11, V_H3-9, V_H1-8, V_H3-7, V_H2-5, V_H7-4-1, V_H4-4, V_H1-3, V_H1-2, V_H6-1, или любую их комбинацию,

(ii) один или более человеческих генных сегментов D_H включают D_H1-1, D_H2-2, D_H3-3, D_H4-4, D_H5-5, D_H6-6, D_H1-7, D_H2-8, D_H3-9, D_H3-10, D_H5-12, D_H6-13, D_H2-15, D_H3-16, D_H4-17, D_H6-19, D_H1-20, D_H2-21, D_H3-22, D_H6-25, D_H1-26, D_H7-27 или любую их комбинацию; и

(iii) один или более нереаранжированных человеческих генных сегментов J_H включают J_H1, J_H2, J_H3, J_H4, J_H5, J_H6, или любую их комбинацию.

16. Генетически модифицированный грызун по любому из пп. 4-15, в котором геном зародышевой линии генетически модифицированного грызуна содержит одну или более нуклеотидных последовательностей, кодирующих один или более полипептидов ADAM6 грызуна, функциональных ортологов, функциональных гомологов или их функциональных фрагментов.

17. Генетически модифицированный грызун по любому из пп. 1-16, в котором ген Cλ грызуна имеет последовательность, которая на по меньшей мере 80% идентична: (i) гену Cλ1 мыши, (ii) гену Cλ2 мыши, или (iii) гену Cλ3 мыши.

18. Генетически модифицированный грызун по любому из пп. 1-17, в котором ген Cλ грызуна включает ген Cλ крысы.

19. Генетически модифицированный грызун по любому из пп. 1-17, в котором ген Cλ грызуна включает ген Cλ1 мыши.

20. Генетически модифицированный грызун по любому из пп. 1-19, в котором одна реаранжированная человеческая вариабельная область легкой λ-цепи иммуноглобулина помещается на место одного или более генных сегментов Vκ грызуна, одного или более генных сегментов Jκ грызуна или любой их комбинации.

21. Генетически модифицированный грызун по любому из пп. 1-20, дополнительно содержащий инактивированный эндогенный локус легкой λ-цепи иммуноглобулина.

22. Генетически модифицированный грызун по любому из пп. 1-21, в котором все легкиецепи иммуноглобулина, экспрессируемые В-клетками генетически модифицированного грызуна, содержат человеческие вариабельные домены легкой λ-цепи иммуноглобулина, экспрессируемые из одной реаранжированной человеческой вариабельной области легкой λ-цепи иммуноглобулина или ее соматически гипермутированной версии.

23. Генетически модифицированный грызун по любому из пп. 1-22, в котором сконструированный эндогенный локус легкой κ-цепи иммуноглобулина дополнительно содержит один или более эндогенных энхансеров в их эндогенном положении в эндогенном локусе легкой κ-цепи иммуноглобулина.

24. Генетически модифицированный грызун по любому из пп. 1-23, в котором указанный грызун представляет собой крысу или мышь.

25. Генетически модифицированная мышь, геном зародышевой линии которой содержит:

сконструированный эндогенный локус легкой κ-цепи иммуноглобулина, содержащий одну реаранжированную человеческую вариабельную область легкой λ-цепи иммуноглобулина, функционально связанную с мышиным генным сегментом Cλ1, причем одна реаранжированная человеческая вариабельная область легкой λ-цепи иммуноглобулина содержит человеческий генный сегмент Vλ1-51 и человеческий генный сегмент Jλ2,

при этом все легкие λ-цепи иммуноглобулина, экспрессируемые В-клетками генетически модифицированной мыши, включают человеческие вариабельные домены легкой λ-цепи иммуноглобулина, экспрессируемые из одной реаранжированной человеческой вариабельной области легкой λ-цепи иммуноглобулина или ее соматически гипермутированной версии.

26. Генетически модифицированная мышь, геном зародышевой линии которой содержит:

сконструированный эндогенный локус легкой κ-цепи иммуноглобулина, содержащий одну реаранжированную человеческую вариабельную область легкой λ-цепи иммуноглобулина, функционально связанную с мышиным генным сегментом Cλ1, причем одна реаранжированная человеческая вариабельная область легкой λ-цепи иммуноглобулина содержит человеческий генный сегмент Vλ2-14 и человеческий генный сегмент Jλ2,

при этом все легкие λ-цепи иммуноглобулина, экспрессируемые В-клетками генетически модифицированной мыши, содержат человеческие вариабельные домены легкой λ-цепи иммуноглобулина, экспрессируемые из одной реаранжированной человеческой вариабельной области легкой λ-цепи иммуноглобулина или ее соматически гипермутированной версии.

27. Эмбрион грызуна, геном которого содержит сконструированный эндогенный локус легкой κ-цепи иммуноглобулина, содержащий одну реаранжированную человеческую вариабельную область легкой λ-цепи иммуноглобулина, функционально связанную с генным сегментом Cλ грызуна, причем одна реаранжированная человеческая вариабельная область легкой λ-цепи иммуноглобулина содержит человеческий генный сегмент Vλ и человеческий генный сегмент Jλ.

28. B-клетка генетически модифицированного грызуна или мыши по любому из пп. 1-26, содержащая:

одну реаранжированную человеческую вариабельную область легкой λ-цепи иммуноглобулина сконструированного эндогенного локуса легкой κ-цепи или его соматически гипермутированную версию.

29. Гибридома, полученная из В-клетки по п. 28.

30. Популяция В-клеток одного генетически модифицированного грызуна, причем геном зародышевой линии грызуна содержит:

(a) сконструированный эндогенный локус легкой κ-цепи иммуноглобулина, содержащий одну реаранжированную человеческую вариабельную область легкой λ-цепи иммуноглобулина, функционально связанную с генным сегментом Cλ грызуна, причем одна реаранжированная человеческая вариабельная область легкой λ-цепи иммуноглобулина содержит человеческий генный сегмент Vλ, функционально связанный с человеческим генным сегментом Jλ, и

(b) сконструированный эндогенный локус тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащий один или более нереаранжированных человеческих генных сегментов V_H, один или более нереаранжированных человеческих генных сегментов D_H и один или более нереаранжированных человеческих генных сегментов J_H, функционально связанных с одним или более эндогенными генами константной области тяжелой цепи иммуноглобулина,

при этом все антитела, экспрессируемые популяцией В-клеток, содержат:

(i) человеческие вариабельные домены легкой λ-цепи иммуноглобулина, экспрессируемые из одной реаранжированной человеческой вариабельной области легкой λ-цепи иммуноглобулина или ее соматически гипермутированной версии, и

(ii) множество человеческих вариабельных доменов тяжелой цепи иммуноглобулина, экспрессируемых по меньшей мере из двух различных реаранжированных человеческих вариабельных областей тяжелой цепи иммуноглобулина или их соматически гипермутированных версий.

31. Эмбриональная стволовая клетка, содержащая сконструированный эндогенный локус легкой κ-цепи иммуноглобулина, содержащий одну реаранжированную человеческую вариабельную область легкой λ-цепи иммуноглобулина, функционально связанную с генным сегментом Cλ грызуна, причем одна реаранжированная человеческая вариабельная область легкой λ-цепи иммуноглобулина содержит человеческий генный сегмент Vλ и человеческий генный сегмент Jλ.

32. Клетка млекопитающего, экспрессирующая антитело, причем антитело содержит тяжелую цепь, содержащую человеческий вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина и легкую цепь, содержащую человеческий вариабельный домен легкой λ-цепи иммуноглобулина, причем человеческий вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина, человеческий вариабельный домен легкой λ-цепи иммуноглобулина, или оба были идентифицированы у генетически модифицированного грызуна или мыши по любому из пп. 4-26.

33. Способ получения антитела, включающий:

(а) воздействие антигена на генетически модифицированного грызуна или мышь по любому из пп. 1-26;

(b) обеспечение возможности развития иммунного ответа у генетически модифицированного грызуна на антиген; и

(c) выделение антитела, специфичного к антигену, B-клетки, экспрессирующей антитело, специфичное к антигену, или одной или более нуклеотидных последовательностей, кодирующих антитело, специфичное к антигену, от генетически модифицированного грызуна.

34. Способ получения антитела, включающий стадии:

(а) экспрессии в клетке млекопитающего указанного антитела, содержащего две человеческие легкие λ-цепи иммуноглобулина и две человеческие тяжелые цепи иммуноглобулина, при этом каждая человеческая легкая λ-цепь иммуноглобулина содержит человеческую вариабельную область легкой λ-цепи иммуноглобулина, и каждая человеческая тяжелая цепь иммуноглобулина содержит человеческий вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина, при этом аминокислотная последовательность по меньшей мере одного из человеческих вариабельных доменов тяжелой цепи иммуноглобулина, по меньшей мере одного из вариабельных доменов легкой λ-цепи или их комбинации была идентифицирована в генетически модифицированном грызуне или мыши по любому из пп. 4-26; и

(b) получения антитела.

35. Способ получения биспецифического антитела, включающий:

(а) приведение в контакт первого генетически модифицированного грызуна или мыши по любому из пп. 4-26 с первым эпитопом первого антигена,

(b) приведение в контакт второго генетически модифицированного грызуна или мыши по любому из пп. 4-26 со вторым эпитопом второго антигена,

(c) выделение В-клетки, которая экспрессирует первое антитело, специфичное к первому эпитопу первого антигена, от первого генетически модифицированного грызуна и определение первого человеческого вариабельного домена тяжелой цепи иммуноглобулина первого антитела;

(d) выделение B-клетки, которая экспрессирует второе антитело, специфичное ко второму эпитопу второго антигена, от второго генетически модифицированного грызуна и определение второго человеческого вариабельного домена тяжелой цепи иммуноглобулина второго антитела;

(e) функциональное связывание нуклеотидной последовательности, кодирующей первый человеческий вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина, с нуклеотидной последовательностью, кодирующей первый человеческий константный домен иммуноглобулина, для получения первой нуклеотидной последовательности, кодирующей первую человеческую тяжелую цепь;

(f) функциональное связывание нуклеотидной последовательности, кодирующей второй человеческий вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина, с нуклеотидной последовательностью, кодирующей второй человеческий константный домен иммуноглобулина, с получением второй нуклеотидной последовательности, кодирующей вторую человеческую тяжелую цепь;

(g) экспрессию в клетке млекопитающего:

(i) первой нуклеотидной последовательности;

(ii) второй нуклеотидной последовательности; и

(iii) третьей нуклеотидной последовательности, содержащей одну реаранжированную человеческую вариабельную область легкой λ-цепи иммуноглобулина или ее соматически гипермутированную версию, функционально связанную с человеческой константной областью легкой λ-цепи иммуноглобулина.

36. Способ получения биспецифического антитела, включающий:

(a) экспрессию в клетке млекопитающего:

(i) первой нуклеотидной последовательности, содержащей первую человеческую вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, функционально связанную с первой человеческой константной областью иммуноглобулина;

(ii) второй нуклеотидной последовательности, содержащей вторую человеческую вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, функционально связанную со второй человеческой константной областью иммуноглобулина; и

(iii) третьей нуклеотидной последовательности, содержащей человеческую вариабельную область легкой λ-цепи иммуноглобулина, функционально связанную с человеческой константной областью легкой λ-цепи иммуноглобулина;

при этом первая человеческая вариабельная область тяжелой цепи иммуноглобулина кодирует первый человеческий вариабельный домен тяжелой цепи, идентифицированный в первом антителе у первого генетически модифицированного грызуна, который был иммунизирован первым эпитопом первого антигена, причем первое антитело специфически связывает первый эпитоп первого антигена; и

при этом вторая человеческая вариабельная область тяжелой цепи иммуноглобулина кодирует второй человеческий вариабельный домен тяжелой цепи, идентифицированный во втором антителе у второго генетически модифицированного грызуна, который был иммунизирован вторым эпитопом второго антигена, причем второе антитело специфически связывает второй эпитоп второго антигена;

при этом каждый из первого и второго генетически модифицированных грызунов является генетически модифицированным грызуном или мышью в соответствии с любым из пп. 4-26; и

при этом человеческая вариабельная область легкой λ-цепи иммуноглобулина третьей нуклеотидной последовательности представляет собой одну реаранжированную человеческую вариабельную область легкой λ-цепи иммуноглобулина или ее соматически гипермутированную версию.

37. Способ получения человеческой тяжелой цепи иммуноглобулина, включающий стадии:

(а) воздействия представляющего интерес антигена на генетически модифицированного грызуна или мышь по любому из пп. 4-26;

(b) получения последовательности человеческого вариабельного домена тяжелой цепи из антитела, которое специфически связывает антиген и которое было образовано генетически модифицированным грызуном; и

(c) функционального связывания последовательности человеческого вариабельного домена тяжелой цепи иммуноглобулина с последовательностью человеческого константного домена тяжелой цепи иммуноглобулина с образованием человеческой тяжелой цепи иммуноглобулина.

38. Способ получения человеческого вариабельного домена тяжелой цепи иммуноглобулина, включающий стадии:

(а) воздействия представляющего интерес антигена на генетически модифицированного грызуна или мышь по любому из пп. 4-26; и

(b) получения последовательности человеческого вариабельного домена тяжелой цепи из антитела, которое специфически связывает антиген и которое было образовано генетически модифицированным грызуном.

39. Способ создания коллекции человеческих вариабельных доменов тяжелой цепи иммуноглобулина, включающий

(а) воздействие представляющего интерес антигена на генетически модифицированного грызуна или мышь по любому из пп. 4-26; и

(b) выделение коллекции человеческих вариабельных доменов тяжелой цепи иммуноглобулина от генетически модифицированного грызуна,

при этом каждый набор человеческих вариабельных доменов тяжелой цепи иммуноглобулина связывается с человеческим вариабельным доменом легкой λ-цепи иммуноглобулина, экспрессируемым из одной реаранжированной человеческой вариабельной области легкой λ-цепи иммуноглобулина или ее соматически гипермутированной версии, и

при этом человеческий вариабельный домен легкой λ-цепи, соединенный с любым из человеческих вариабельных доменов тяжелой цепи иммуноглобулина в коллекции, связывает антиген.

40. Способ получения человеческой легкой λ-цепи иммуноглобулина, включающий стадии:

(а) воздействия представляющего интерес антигена на генетически модифицированного грызуна или мышь по любому из пп. 1-26;

(b) получения последовательности человеческого вариабельного домена легкой λ-цепи из антитела, которое специфически связывает антиген и которое было образовано генетически модифицированным грызуном; и

(c) функционального связывания последовательности человеческого вариабельного домена легкой λ-цепи иммуноглобулина с последовательностью человеческого константного домена легкой λ-цепи иммуноглобулина с образованием человеческой легкой λ-цепи иммуноглобулина.

41. Способ создания человеческого вариабельного домена легкой λ-цепи иммуноглобулина, включающий стадии:

(а) воздействия представляющего интерес антигена на генетически модифицированного грызуна или мышь по любому из пп. 1-26; и

(b) получения последовательности человеческого вариабельного домена легкой λ-цепи из антитела, которое специфически связывает антиген и которое было образовано генетически модифицированным грызуном.

42. Способ получения нуклеотидной последовательности, кодирующей человеческую тяжелую цепь иммуноглобулина, включающий стадии:

(а) воздействия представляющего интерес антигена на генетически модифицированного грызуна или мышь по любому из пп. 4-26;

(b) получения человеческой вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина, кодирующей последовательность человеческой вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина антитела, которое специфически связывает антиген и которое было образовано генетически модифицированным грызуном; и

(c) функционального связывания человеческой вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина с последовательностью человеческой константной области тяжелой цепи иммуноглобулина с образованием нуклеотидной последовательности, кодирующей человеческую тяжелую цепь иммуноглобулина.

43. Способ получения нуклеотидной последовательности, содержащей человеческую вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, включающий стадии:

(а) воздействия представляющего интерес антигена на генетически модифицированного грызуна или мышь по любому из пп. 4-26; и

(b) получения человеческой вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина, кодирующей последовательность человеческой вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина антитела, которое специфически связывает антиген и которое было образовано генетически модифицированным грызуном.

44. Способ получения нуклеотидной последовательности, кодирующей человеческую легкую λ-цепь иммуноглобулина, включающий стадии:

(а) воздействия представляющего интерес антигена на генетически модифицированного грызуна или мышь по любому из пп. 1-26;

(b) получения человеческой вариабельной области легкой λ-цепи иммуноглобулина, кодирующей последовательность человеческой вариабельной области легкой λ-цепи иммуноглобулина антитела, которое специфически связывает антиген и которое было образовано генетически модифицированным грызуном; и

(c) функционального связывания человеческой вариабельной области легкой λ-цепи иммуноглобулина с последовательностью человеческой константной области легкой λ-цепи иммуноглобулина с образованием нуклеотидной последовательности, кодирующей человеческую легкую λ-цепь иммуноглобулина.

45. Способ получения нуклеотидной последовательности, содержащей человеческую вариабельную область легкой λ-цепи иммуноглобулина, включающий стадии:

(а) воздействия представляющего интерес антигена на генетически модифицированного грызуна или мышь по любому из пп. 1-26; и

(b) получения человеческой вариабельной области легкой λ-цепи иммуноглобулина, кодирующей последовательность человеческой вариабельной области легкой λ-цепи иммуноглобулина антитела, которое специфически связывает антиген и которое было образовано генетически модифицированным грызуном.

46. Нацеленный вектор, содержащий:

(i) 5'-плечо гомологии, содержащее нуклеотидную последовательность, соответствующую 5'-последовательности-мишени в эндогенном локусе легкой κ-цепи грызуна;

(ii) одну реаранжированную человеческую вариабельную область легкой λ-цепи иммуноглобулина, содержащую генный сегмент Vλ и генный сегмент Jλ;

(iii) генный сегмент Cλ грызуна; и

(iv) 3'-плечо гомологии, содержащее нуклеотидную последовательность, соответствующую 3'-последовательности-мишени в эндогенном локусе легкой κ-цепи грызуна.

47. Способ получения генетически модифицированного грызуна, включающий стадии:

(а) введения одной реаранжированной человеческой вариабельной области легкой λ-цепи иммуноглобулина, содержащей человеческий генный сегмент Vλ и человеческий генный сегмент Jλ, в сконструированный эндогенный локус легкой κ-цепи иммуноглобулина в геноме ЭС клетки грызуна; и

(b) создания грызуна с использованием ЭС клеток грызуна, созданных на стадии (а).

48. Способ получения генетически модифицированного грызуна, включающий стадии:

(a) введения одной реаранжированной человеческой вариабельной области легкой λ-цепи иммуноглобулина, функционально связанной с генным сегментом Cλ грызуна, в сконструированный эндогенный локус легкой κ-цепи иммуноглобулина в геноме ЭС клетки грызуна, где одна реаранжированная человеческая вариабельная область легкой λ-цепи иммуноглобулина содержит человеческий генный сегмент Vλ и человеческий генный сегмент Jλ; и

(b) создания грызуна с использованием ЭС клеток грызуна, созданных на стадии (а).

49. Способ получения генетически модифицированной ЭС клетки грызуна, включающий стадии:

введения одной реаранжированной человеческой вариабельной области легкой λ-цепи иммуноглобулина человека, содержащей человеческий генный сегмент Vλ и человеческий генный сегмент Jλ, в сконструированный эндогенный локус легкой κ-цепи иммуноглобулина в геноме ЭС клетки.

50. Способ получения генетически модифицированной ЭС клетки грызуна, включающий стадии:

введения одной реаранжированной человеческой вариабельной области легкой λ-цепи иммуноглобулина, функционально связанной с генным сегментом Cλ грызуна, в сконструированный эндогенный локус легкой κ-цепи иммуноглобулина в геноме ЭС клетки грызуна, где одна реаранжированная человеческая вариабельная область легкой λ-цепи иммуноглобулина содержит человеческий генный сегмент Vλ и человеческий генный сегмент Jλ.

51. Способ получения генетически модифицированного грызуна, включающий стадию:

(a) конструирования эндогенного локуса легкой κ-цепи иммуноглобулина в геноме зародышевой линии грызуна для включения одной реаранжированной человеческой вариабельной области легкой λ-цепи иммуноглобулина, функционально связанной с генным сегментом Cλ грызуна, причем одна реаранжированная человеческая вариабельная область легкой λ-цепи иммуноглобулина содержит человеческий генный сегмент Vλ и человеческий генный сегмент Jλ,

так что все легкие λ-цепи иммуноглобулина, экспрессируемые В-клетками генетически модифицированного грызуна, включают человеческие вариабельные домены легкой λ-цепи иммуноглобулина, экспрессируемые из одной реаранжированной человеческой вариабельной области легкой λ-цепи иммуноглобулина или ее соматически гипермутированной версии.

52. Способ получения рекомбинантной клетки грызуна in vitro, включающий модификацию генома рекомбинантной клетки грызуна для включения в него:

сконструированного эндогенного локуса легкой κ-цепи иммуноглобулина, содержащего одну реаранжированную человеческую вариабельную область легкой λ-цепи иммуноглобулина, функционально связанную с генным сегментом Cλ грызуна, причем одна реаранжированная человеческая вариабельная область легкой λ-цепи иммуноглобулина содержит человеческий генный сегмент Vλ и человеческий генный сегмент Jλ.