RU2022109215A

RU2022109215A - Гуманизированные грызуны, которые экспрессируют тяжелые цепи, содержащие домены vl

Info

Publication number: RU2022109215A
Application number: RU2022109215A
Authority: RU
Inventors: Линн МАКДОНАЛЬД; Саган ГУРЕР; Каролина А. МЕАГХЕР; Шон СТИВЕНС; Эндрю Джей. МЕРФИ
Original assignee: Регенерон Фармасьютикалз, Инк.
Priority date: 2012-02-01
Filing date: 2022-04-07
Publication date: 2023-10-09

Claims

1. Отличное от человека животное, содержащее

(a) вставку одного или нескольких генных сегментов V_L человека и одного или нескольких генных сегментов J_L человека выше не относящейся к человеку константной области легкой цепи иммуноглобулина,

(b) вставку одного или нескольких генных сегментов V_L человека и одного или нескольких генных сегментов J_L человека выше не относящейся к человеку константной области тяжелой цепи иммуноглобулина, и

(c) нуклеотидную последовательность, которая кодирует белок ADAM6 или его функциональный фрагмент, причем белок ADAM6 экспрессируется из эктопической последовательности нуклеиновой кислоты ADAM6.

2. Отличное от человека животное по п. 1, у которого не относящиеся к человеку константные области тяжелой и/или легкой цепи представляют собой константные области грызуна.

3. Отличное от человека животное по п. 1 или 2, у которого константная область легкой цепи представляет собой Cκ мыши.

4. Отличное от человека животное по любому из предыдущих пунктов, у которого генные сегменты V_L и J_L человека выше не относящейся к человеку константной области легкой цепи иммуноглобулина представляют собой генные сегменты Vκ и Jκ человека.

5. Отличное от человека животное по любому из предыдущих пунктов, у которого генные сегменты V_L и J_L человека выше не относящейся к человеку константной области тяжелой цепи иммуноглобулина представляют собой генные сегменты Vκ и Jκ человека.

6. Отличное от человека животное по любому из предыдущих пунктов, у которого нуклеотидная последовательность, которая кодирует белок ADAM6 или его функциональный фрагмент, присутствует в таком же положении по сравнению с не относящимся к человеку локусом ADAM6 дикого типа.

7. Отличное от человека животное по любому из предыдущих пунктов, у которого нуклеотидная последовательность, которая кодирует белок ADAM6 или его функциональный фрагмент, присутствует в пределах генных сегментов иммуноглобулина.

8. Отличное от человека животное по п. 7, у которого генные сегменты иммуноглобулина представляют собой генные сегменты κ легкой цепи человека.

9. Отличное от человека животное по п. 7 или 8, у которого генные сегменты иммуноглобулина представляют собой эндогенные генные сегменты тяжелой цепи отличного от человека животного.

10. Отличное от человека животное по любому из предыдущих пунктов, причем отличное от человека животное содержит эндогенные генные сегменты V_L и/или J_L иммуноглобулина, которые являются неспособными к реаранжировке для образования домена V_L иммуноглобулина у отличного от человека животного.

11. Генетически модифицированное отличное от человека животное, которое содержит

(a) один или несколько нереаранжированных генных сегментов Vκ человека и один или несколько нереаранжированных генных сегментов Jκ человека на эндогенном локусе тяжелой цепи иммуноглобулина указанного отличного от человека животного,

(b) один или несколько нереаранжированных генных сегментов Vκ человека и один или несколько нереаранжированных генных сегментов Jκ человека на эндогенном локусе легкой цепи иммуноглобулина указанного отличного от человека животного, причем указанное отличное от человека животное способно экспрессировать белок ADAM6 или его функциональный фрагмент.

12. Клетка, полученная от отличного от человека животного по п. 1 или 11.

13. Клетка по п. 12, причем клетка представляет собой B-клетку.

14. Гибридома, образованная из B-клетки по п. 13.

15. Клетка по п. 12, причем отличное от человека животное представляет собой грызуна.

16. Клетка по п. 15, причем грызун выбран из мыши и крысы.

17. Способ получения антигенсвязывающего белка, который связывается с представляющим интерес антигеном, причем способ предусматривает

(a) воздействие на отличное от человека животное по п. 1 или 11 представляющего интерес антигена,

(b) выделение одного или нескольких B-лимфоцитов отличного от человека животного, причем один или несколько B-лимфоцитов экспрессируют связывающий белок V_L, который связывает представляющий интерес антиген, и

(c) идентификацию последовательности нуклеиновой кислоты, которая кодирует домен V_L связывающего белка V_L, который связывает указанный представляющий интерес антиген, причем связывающий белок V_L содержит домен Vκ человека и не относящийся к человеку константный домен легкой цепи и домен Vκ человека и не относящийся к человеку константный домен тяжелой цепи, и

(d) использование последовательности нуклеиновой кислоты согласно (c) с последовательностью нуклеиновой кислоты константной области иммуноглобулина человека для получения антигенсвязывающего белка человека, который связывает представляющий интерес антиген.

18. Способ по п. 17, при котором не относящаяся к человеку константная область легкой цепи связывающего белка V_L представляет собой Cκ мыши, и не относящаяся к человеку константная область тяжелой цепи представляет собой константную область тяжелой цепи мыши.

19. Способ по п. 17 или 18, при котором отличное от человека животное представляет собой мышь.

20. Грызун, содержащий один или несколько генных сегментов легкой цепи иммуноглобулина человека, функционально связанных с не относящимся к человеку геном константной области тяжелой цепи иммуноглобулина, причем грызун экспрессирует один или несколько белков ADAM6.

21. Грызун по п. 20, у которого один или несколько генных сегментов легкой цепи иммуноглобулина человека представляют собой генные сегменты Vκ и Jκ человека.

22. Грызун по п. 20 или 21, у которого не относящийся к человеку ген константной области тяжелой цепи иммуноглобулина представляет собой ген константной области тяжелой цепи мыши или крысы.

23. Грызун по любому из пп. 20–22, у которого ген константной области тяжелой цепи иммуноглобулина содержит C_H1 и/или шарнирную область.

24. Грызун по любому из пп. 20–23, причем грызун содержит делецию или замещение одной или нескольких эндогенных генных последовательностей тяжелой цепи иммуноглобулина.

25. Грызун по любому из пп. 20–24, у которого эндогенные генные сегменты V_H, D_H и J_H являются неспособными к реаранжировке для образования реаранжированной последовательности V/D/J.

26. Грызун по любому из пп. 20–25, причем грызун содержит делецию эндогенного гена ADAM6 и дополнительно содержит эктопический ген ADAM6 мыши.

27. Грызун по любому из пп. 20–26, причем грызун выбран из мыши или крысы.

28. Способ модификации локуса тяжелой цепи иммуноглобулина грызуна, предусматривающий:

(a) осуществление первой модификации локуса тяжелой цепи иммуноглобулина грызуна, которая приводит к снижению или устранению эндогенной активности ADAM6 у самца грызуна, причем первая модификация включает в себя вставку генного сегмента, выбранного из одного или нескольких генных сегментов V_L человека, одного или нескольких генных сегментов J_L человека и их комбинации; и,

(b) осуществление второй модификации для добавления последовательности нуклеиновой кислоты в организм грызуна, которая предоставляет грызуну активность ADAM6, которая является функциональной у самца грызуна.

29. Способ по п. 28, при котором первая модификация дополнительно предусматривает вставку одного или нескольких генных сегментов D_H человека, которые способны к реаранжировке с одним или несколькими генными сегментами V_L и одним или несколькими генными сегментами J_L.

30. Способ по п. 28, при котором один или несколько генных сегментов V_L человека и один или несколько генных сегментов J_L человека представляют собой генные сегменты Vκ и Jκ или генные сегменты Vλ и Jλ.

31. Способ по любому из пп. 28–30, при котором последовательность нуклеиновой кислоты, которая предоставляет грызуну активность ADAM6, которая является функциональной у самца грызуна, является смежной с одним или несколькими генными сегментами V_L человека и/или одним или несколькими генными сегментами J_L человека.

32. Способ по любому из пп. 28–31, при котором первую и вторую модификацию осуществляют в отдельной ES клетке, и отдельную ES клетку вводят в зародыш - хозяин для получения грызуна.