JPWO2020189538A1 - 哺乳動物細胞の保存液 - Google Patents
哺乳動物細胞の保存液 Download PDFInfo
- Publication number
- JPWO2020189538A1 JPWO2020189538A1 JP2021507298A JP2021507298A JPWO2020189538A1 JP WO2020189538 A1 JPWO2020189538 A1 JP WO2020189538A1 JP 2021507298 A JP2021507298 A JP 2021507298A JP 2021507298 A JP2021507298 A JP 2021507298A JP WO2020189538 A1 JPWO2020189538 A1 JP WO2020189538A1
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- solution
- cells
- storage
- cell
- salt
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 45
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 title claims description 91
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 title claims description 90
- PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N Niacin Chemical compound OC(=O)C1=CC=CN=C1 PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 239
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 235
- 238000003860 storage Methods 0.000 claims abstract description 187
- 229960003512 nicotinic acid Drugs 0.000 claims abstract description 140
- 235000001968 nicotinic acid Nutrition 0.000 claims abstract description 138
- 239000011664 nicotinic acid Substances 0.000 claims abstract description 128
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 claims abstract description 70
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 54
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 claims abstract description 53
- 210000003593 megakaryocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 50
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 claims abstract description 32
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 claims abstract description 30
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 claims abstract description 27
- 239000000644 isotonic solution Substances 0.000 claims abstract description 15
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 90
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 73
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 56
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 34
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 31
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 claims description 24
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 claims description 22
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 claims description 22
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 21
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 claims description 17
- AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N Riboflavin Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N 0.000 claims description 15
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 claims description 13
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 claims description 13
- AUNGANRZJHBGPY-UHFFFAOYSA-N D-Lyxoflavin Natural products OCC(O)C(O)C(O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 11
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 claims description 11
- 229960002477 riboflavin Drugs 0.000 claims description 11
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 claims description 9
- 229930003471 Vitamin B2 Natural products 0.000 claims description 9
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 claims description 9
- 235000019164 vitamin B2 Nutrition 0.000 claims description 9
- 239000011716 vitamin B2 Substances 0.000 claims description 9
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 claims description 8
- 239000008156 Ringer's lactate solution Substances 0.000 claims description 7
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 6
- 150000004347 all-trans-retinol derivatives Chemical class 0.000 claims description 5
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims description 5
- 125000002791 glucosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 claims description 4
- 239000003761 preservation solution Substances 0.000 abstract description 256
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 abstract description 201
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 abstract description 46
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 abstract description 31
- 230000007774 longterm Effects 0.000 abstract description 9
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 abstract description 5
- 238000002156 mixing Methods 0.000 abstract description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 81
- 108010035766 P-Selectin Proteins 0.000 description 71
- 102100023472 P-selectin Human genes 0.000 description 71
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 61
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 50
- DFPAKSUCGFBDDF-UHFFFAOYSA-N nicotinic acid amide Natural products NC(=O)C1=CC=CN=C1 DFPAKSUCGFBDDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 40
- 108090000672 Annexin A5 Proteins 0.000 description 39
- 102000004121 Annexin A5 Human genes 0.000 description 39
- 229960005552 PAC-1 Drugs 0.000 description 34
- YQNRVGJCPCNMKT-LFVJCYFKSA-N 2-[(e)-[[2-(4-benzylpiperazin-1-ium-1-yl)acetyl]hydrazinylidene]methyl]-6-prop-2-enylphenolate Chemical compound [O-]C1=C(CC=C)C=CC=C1\C=N\NC(=O)C[NH+]1CCN(CC=2C=CC=CC=2)CC1 YQNRVGJCPCNMKT-LFVJCYFKSA-N 0.000 description 32
- 101000838335 Homo sapiens Dual specificity protein phosphatase 2 Proteins 0.000 description 32
- 101001080401 Homo sapiens Proteasome assembly chaperone 1 Proteins 0.000 description 32
- 102100027583 Proteasome assembly chaperone 1 Human genes 0.000 description 32
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 31
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 31
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 27
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 26
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 25
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 24
- 235000005152 nicotinamide Nutrition 0.000 description 24
- 239000011570 nicotinamide Substances 0.000 description 24
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 20
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 20
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 20
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 19
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 19
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 19
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 19
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 18
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 18
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 18
- -1 tocopherol nicotinic acid ester Chemical class 0.000 description 18
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 16
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 16
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 14
- 229960003966 nicotinamide Drugs 0.000 description 14
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 13
- 101001078143 Homo sapiens Integrin alpha-IIb Proteins 0.000 description 12
- 102100025306 Integrin alpha-IIb Human genes 0.000 description 12
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 12
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 12
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 12
- BPKIGYQJPYCAOW-FFJTTWKXSA-I calcium;potassium;disodium;(2s)-2-hydroxypropanoate;dichloride;dihydroxide;hydrate Chemical compound O.[OH-].[OH-].[Na+].[Na+].[Cl-].[Cl-].[K+].[Ca+2].C[C@H](O)C([O-])=O BPKIGYQJPYCAOW-FFJTTWKXSA-I 0.000 description 11
- 150000002814 niacins Chemical class 0.000 description 11
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 11
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 11
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 10
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 10
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 10
- XTWYTFMLZFPYCI-KQYNXXCUSA-N 5'-adenylphosphoric acid Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O XTWYTFMLZFPYCI-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 9
- XTWYTFMLZFPYCI-UHFFFAOYSA-N Adenosine diphosphate Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(COP(O)(=O)OP(O)(O)=O)C(O)C1O XTWYTFMLZFPYCI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 9
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 9
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 9
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 9
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 9
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 9
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 9
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 9
- 239000000047 product Substances 0.000 description 9
- 101000872170 Homo sapiens Polycomb complex protein BMI-1 Proteins 0.000 description 8
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 8
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 8
- 102100033566 Polycomb complex protein BMI-1 Human genes 0.000 description 8
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 8
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 8
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 8
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 8
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 7
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 7
- 230000006870 function Effects 0.000 description 7
- PJUIMOJAAPLTRJ-UHFFFAOYSA-N monothioglycerol Chemical compound OCC(O)CS PJUIMOJAAPLTRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 210000001778 pluripotent stem cell Anatomy 0.000 description 7
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 7
- 108010063955 thrombin receptor peptide (42-47) Proteins 0.000 description 7
- 229940074410 trehalose Drugs 0.000 description 7
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M Bicarbonate Chemical compound OC([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 150000000996 L-ascorbic acids Chemical class 0.000 description 6
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 6
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 6
- 229960002086 dextran Drugs 0.000 description 6
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 6
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 6
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 5
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 5
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 5
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 5
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 5
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 5
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- UZOVYGYOLBIAJR-UHFFFAOYSA-N 4-isocyanato-4'-methyldiphenylmethane Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1CC1=CC=C(N=C=O)C=C1 UZOVYGYOLBIAJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000000412 Annexin Human genes 0.000 description 4
- 108050008874 Annexin Proteins 0.000 description 4
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 4
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 4
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 4
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002211 L-ascorbic acid Substances 0.000 description 4
- 235000000069 L-ascorbic acid Nutrition 0.000 description 4
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 4
- DFPAKSUCGFBDDF-ZQBYOMGUSA-N [14c]-nicotinamide Chemical compound N[14C](=O)C1=CC=CN=C1 DFPAKSUCGFBDDF-ZQBYOMGUSA-N 0.000 description 4
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 4
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 4
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 4
- 230000008859 change Effects 0.000 description 4
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 4
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 4
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 4
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 4
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 4
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 4
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 4
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 4
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 4
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 4
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920001342 Bakelite® Polymers 0.000 description 3
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- 229920001612 Hydroxyethyl starch Polymers 0.000 description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N all-trans-retinol Chemical compound OC\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 239000004637 bakelite Substances 0.000 description 3
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 3
- ZEWYCNBZMPELPF-UHFFFAOYSA-J calcium;potassium;sodium;2-hydroxypropanoic acid;sodium;tetrachloride Chemical compound [Na].[Na+].[Cl-].[Cl-].[Cl-].[Cl-].[K+].[Ca+2].CC(O)C(O)=O ZEWYCNBZMPELPF-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 3
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 3
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N d-alpha-tocopherol Natural products OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 210000004700 fetal blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 230000023597 hemostasis Effects 0.000 description 3
- 230000002439 hemostatic effect Effects 0.000 description 3
- 229940050526 hydroxyethylstarch Drugs 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 3
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 3
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 3
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 3
- 239000013587 production medium Substances 0.000 description 3
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 3
- 210000001988 somatic stem cell Anatomy 0.000 description 3
- 206010043554 thrombocytopenia Diseases 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 3
- SGKRLCUYIXIAHR-AKNGSSGZSA-N (4s,4ar,5s,5ar,6r,12ar)-4-(dimethylamino)-1,5,10,11,12a-pentahydroxy-6-methyl-3,12-dioxo-4a,5,5a,6-tetrahydro-4h-tetracene-2-carboxamide Chemical compound C1=CC=C2[C@H](C)[C@@H]([C@H](O)[C@@H]3[C@](C(O)=C(C(N)=O)C(=O)[C@H]3N(C)C)(O)C3=O)C3=C(O)C2=C1O SGKRLCUYIXIAHR-AKNGSSGZSA-N 0.000 description 2
- FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 13-cis retinol Natural products OCC=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ALYNCZNDIQEVRV-UHFFFAOYSA-N 4-aminobenzoic acid Chemical compound NC1=CC=C(C(O)=O)C=C1 ALYNCZNDIQEVRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 2
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101150062914 BMI1 gene Proteins 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 2
- ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N D-erythro-ascorbic acid Natural products OCC1OC(=O)C(O)=C1O ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OHCQJHSOBUTRHG-KGGHGJDLSA-N FORSKOLIN Chemical compound O=C([C@@]12O)C[C@](C)(C=C)O[C@]1(C)[C@@H](OC(=O)C)[C@@H](O)[C@@H]1[C@]2(C)[C@@H](O)CCC1(C)C OHCQJHSOBUTRHG-KGGHGJDLSA-N 0.000 description 2
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 2
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 2
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 2
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 2
- 229920002683 Glycosaminoglycan Polymers 0.000 description 2
- 229920002971 Heparan sulfate Polymers 0.000 description 2
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000629400 Homo sapiens Mesoderm-specific transcript homolog protein Proteins 0.000 description 2
- 101001070790 Homo sapiens Platelet glycoprotein Ib alpha chain Proteins 0.000 description 2
- JUUBCHWRXWPFFH-UHFFFAOYSA-N Hydroxytyrosol Chemical compound OCCC1=CC=C(O)C(O)=C1 JUUBCHWRXWPFFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010076876 Keratins Proteins 0.000 description 2
- 102000011782 Keratins Human genes 0.000 description 2
- 241000713666 Lentivirus Species 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 102100026821 Mesoderm-specific transcript homolog protein Human genes 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 241000209094 Oryza Species 0.000 description 2
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 2
- BYPFEZZEUUWMEJ-UHFFFAOYSA-N Pentoxifylline Chemical compound O=C1N(CCCCC(=O)C)C(=O)N(C)C2=C1N(C)C=N2 BYPFEZZEUUWMEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100034173 Platelet glycoprotein Ib alpha chain Human genes 0.000 description 2
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 2
- 102000003978 Tissue Plasminogen Activator Human genes 0.000 description 2
- 108090000373 Tissue Plasminogen Activator Proteins 0.000 description 2
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 2
- 229930003537 Vitamin B3 Natural products 0.000 description 2
- 229930003268 Vitamin C Natural products 0.000 description 2
- MECHNRXZTMCUDQ-UHFFFAOYSA-N Vitamin D2 Natural products C1CCC2(C)C(C(C)C=CC(C)C(C)C)CCC2C1=CC=C1CC(O)CCC1=C MECHNRXZTMCUDQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 2
- 150000001242 acetic acid derivatives Chemical class 0.000 description 2
- OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N adenosine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 2
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 229910052784 alkaline earth metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 2
- 210000003850 cellular structure Anatomy 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 2
- VFLDPWHFBUODDF-FCXRPNKRSA-N curcumin Chemical compound C1=C(O)C(OC)=CC(\C=C\C(=O)CC(=O)\C=C\C=2C=C(OC)C(O)=CC=2)=C1 VFLDPWHFBUODDF-FCXRPNKRSA-N 0.000 description 2
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 229960003722 doxycycline Drugs 0.000 description 2
- 239000003792 electrolyte Substances 0.000 description 2
- 210000001671 embryonic stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 229960002061 ergocalciferol Drugs 0.000 description 2
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 2
- FVTCRASFADXXNN-SCRDCRAPSA-N flavin mononucleotide Chemical compound OP(=O)(O)OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O FVTCRASFADXXNN-SCRDCRAPSA-N 0.000 description 2
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 2
- BRZYSWJRSDMWLG-CAXSIQPQSA-N geneticin Natural products O1C[C@@](O)(C)[C@H](NC)[C@@H](O)[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](C(C)O)O2)N)[C@@H](N)C[C@H]1N BRZYSWJRSDMWLG-CAXSIQPQSA-N 0.000 description 2
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 2
- 238000013168 hemostasis test Methods 0.000 description 2
- 239000012510 hollow fiber Substances 0.000 description 2
- 150000003840 hydrochlorides Chemical class 0.000 description 2
- JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N hydrocortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 2
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CGIGDMFJXJATDK-UHFFFAOYSA-N indomethacin Chemical compound CC1=C(CC(O)=O)C2=CC(OC)=CC=C2N1C(=O)C1=CC=C(Cl)C=C1 CGIGDMFJXJATDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003978 infusion fluid Substances 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 2
- PGHMRUGBZOYCAA-UHFFFAOYSA-N ionomycin Natural products O1C(CC(O)C(C)C(O)C(C)C=CCC(C)CC(C)C(O)=CC(=O)C(C)CC(C)CC(CCC(O)=O)C)CCC1(C)C1OC(C)(C(C)O)CC1 PGHMRUGBZOYCAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PGHMRUGBZOYCAA-ADZNBVRBSA-N ionomycin Chemical compound O1[C@H](C[C@H](O)[C@H](C)[C@H](O)[C@H](C)/C=C/C[C@@H](C)C[C@@H](C)C(/O)=C/C(=O)[C@@H](C)C[C@@H](C)C[C@@H](CCC(O)=O)C)CC[C@@]1(C)[C@@H]1O[C@](C)([C@@H](C)O)CC1 PGHMRUGBZOYCAA-ADZNBVRBSA-N 0.000 description 2
- 238000005304 joining Methods 0.000 description 2
- 230000000366 juvenile effect Effects 0.000 description 2
- 159000000003 magnesium salts Chemical class 0.000 description 2
- 210000003071 memory t lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- YNBADRVTZLEFNH-UHFFFAOYSA-N methyl nicotinate Chemical compound COC(=O)C1=CC=CN=C1 YNBADRVTZLEFNH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 2
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 2
- 239000007758 minimum essential medium Substances 0.000 description 2
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 2
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 2
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 239000007793 ph indicator Substances 0.000 description 2
- XAEFZNCEHLXOMS-UHFFFAOYSA-M potassium benzoate Chemical compound [K+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1 XAEFZNCEHLXOMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N puromycin Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1C[C@H](N)C(=O)N[C@H]1[C@@H](O)[C@H](N2C3=NC=NC(=C3N=C2)N(C)C)O[C@@H]1CO RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N 0.000 description 2
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 2
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 2
- 235000019192 riboflavin Nutrition 0.000 description 2
- 239000002151 riboflavin Substances 0.000 description 2
- 229950001574 riboflavin phosphate Drugs 0.000 description 2
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 2
- 230000007651 self-proliferation Effects 0.000 description 2
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 2
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- MFBOGIVSZKQAPD-UHFFFAOYSA-M sodium butyrate Chemical compound [Na+].CCCC([O-])=O MFBOGIVSZKQAPD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 239000000021 stimulant Substances 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 150000003467 sulfuric acid derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 229960000187 tissue plasminogen activator Drugs 0.000 description 2
- 125000005270 trialkylamine group Chemical group 0.000 description 2
- 239000003656 tris buffered saline Substances 0.000 description 2
- HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K trisodium citrate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 2
- 235000019160 vitamin B3 Nutrition 0.000 description 2
- 239000011708 vitamin B3 Substances 0.000 description 2
- 235000019154 vitamin C Nutrition 0.000 description 2
- 239000011718 vitamin C Substances 0.000 description 2
- 235000001892 vitamin D2 Nutrition 0.000 description 2
- MECHNRXZTMCUDQ-RKHKHRCZSA-N vitamin D2 Chemical compound C1(/[C@@H]2CC[C@@H]([C@]2(CCC1)C)[C@H](C)/C=C/[C@H](C)C(C)C)=C\C=C1\C[C@@H](O)CCC1=C MECHNRXZTMCUDQ-RKHKHRCZSA-N 0.000 description 2
- 239000011653 vitamin D2 Substances 0.000 description 2
- GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N α-tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2O[C@@](CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N 0.000 description 2
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 description 1
- WMFHUUKYIUOHRA-UHFFFAOYSA-N (3-phenoxyphenyl)methanamine;hydrochloride Chemical compound Cl.NCC1=CC=CC(OC=2C=CC=CC=2)=C1 WMFHUUKYIUOHRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OYHQOLUKZRVURQ-NTGFUMLPSA-N (9Z,12Z)-9,10,12,13-tetratritiooctadeca-9,12-dienoic acid Chemical compound C(CCCCCCC\C(=C(/C\C(=C(/CCCCC)\[3H])\[3H])\[3H])\[3H])(=O)O OYHQOLUKZRVURQ-NTGFUMLPSA-N 0.000 description 1
- TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoserine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 0.000 description 1
- CIWBSHSKHKDKBQ-SZSCBOSDSA-N 2-[(1s)-1,2-dihydroxyethyl]-3,4-dihydroxy-2h-furan-5-one Chemical compound OC[C@H](O)C1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-SZSCBOSDSA-N 0.000 description 1
- ZQZAHPFFZWEUCL-UHFFFAOYSA-N 2-chloropyridine-3-carboxamide Chemical compound NC(=O)C1=CC=CN=C1Cl ZQZAHPFFZWEUCL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IJRKANNOPXMZSG-SSPAHAAFSA-N 2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid;(2r,3s,4r,5r)-2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O.OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O IJRKANNOPXMZSG-SSPAHAAFSA-N 0.000 description 1
- WYKHFQKONWMWQM-UHFFFAOYSA-N 2-sulfanylidene-1h-pyridine-3-carboxylic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CN=C1S WYKHFQKONWMWQM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- APIXJSLKIYYUKG-UHFFFAOYSA-N 3 Isobutyl 1 methylxanthine Chemical compound O=C1N(C)C(=O)N(CC(C)C)C2=C1N=CN2 APIXJSLKIYYUKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OSMAGAVKVRGYGR-UHFFFAOYSA-N 3-methylpyridine-4-carboxylic acid Chemical compound CC1=CN=CC=C1C(O)=O OSMAGAVKVRGYGR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FARGKMUKCFJLSU-UHFFFAOYSA-N 5-(1-methylpyrrolidin-2-yl)pyridin-2-amine Chemical compound CN1CCCC1C1=CC=C(N)N=C1 FARGKMUKCFJLSU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NMUSYJAQQFHJEW-KVTDHHQDSA-N 5-azacytidine Chemical compound O=C1N=C(N)N=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 NMUSYJAQQFHJEW-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- SQDAZGGFXASXDW-UHFFFAOYSA-N 5-bromo-2-(trifluoromethoxy)pyridine Chemical compound FC(F)(F)OC1=CC=C(Br)C=N1 SQDAZGGFXASXDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LXAHHHIGZXPRKQ-UHFFFAOYSA-N 5-fluoro-2-methylpyridine Chemical compound CC1=CC=C(F)C=N1 LXAHHHIGZXPRKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IJXDURUAYOKSIS-UHFFFAOYSA-N 6-methylpyridine-3-carboxamide Chemical compound CC1=CC=C(C(N)=O)C=N1 IJXDURUAYOKSIS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000029791 ADAM Human genes 0.000 description 1
- 108091022885 ADAM Proteins 0.000 description 1
- ORILYTVJVMAKLC-UHFFFAOYSA-N Adamantane Natural products C1C(C2)CC3CC1CC2C3 ORILYTVJVMAKLC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 102000006306 Antigen Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010083359 Antigen Receptors Proteins 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 239000002126 C01EB10 - Adenosine Substances 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 102100035882 Catalase Human genes 0.000 description 1
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 229920001287 Chondroitin sulfate Polymers 0.000 description 1
- YASYEJJMZJALEJ-UHFFFAOYSA-N Citric acid monohydrate Chemical compound O.OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O YASYEJJMZJALEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UDMBCSSLTHHNCD-UHFFFAOYSA-N Coenzym Q(11) Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(COP(O)(O)=O)C(O)C1O UDMBCSSLTHHNCD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ACTIUHUUMQJHFO-UHFFFAOYSA-N Coenzym Q10 Natural products COC1=C(OC)C(=O)C(CC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)C)=C(C)C1=O ACTIUHUUMQJHFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000005956 Cosmos caudatus Nutrition 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- SUZLHDUTVMZSEV-UHFFFAOYSA-N Deoxycoleonol Natural products C12C(=O)CC(C)(C=C)OC2(C)C(OC(=O)C)C(O)C2C1(C)C(O)CCC2(C)C SUZLHDUTVMZSEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 102100027186 Extracellular superoxide dismutase [Cu-Zn] Human genes 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylserin Natural products OC(=O)C(N)COP(O)(=O)OCC(O)CO ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100031573 Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Human genes 0.000 description 1
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 1
- SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N Hexa-Ac-myo-Inositol Natural products CC(=O)OC1C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C1OC(C)=O SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000836222 Homo sapiens Extracellular superoxide dismutase [Cu-Zn] Proteins 0.000 description 1
- 101000777663 Homo sapiens Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Proteins 0.000 description 1
- 101000716729 Homo sapiens Kit ligand Proteins 0.000 description 1
- 101001018097 Homo sapiens L-selectin Proteins 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical compound O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091008036 Immune checkpoint proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037982 Immune checkpoint proteins Human genes 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N Inosine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C2=NC=NC(O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- XDBMXUKHMOFBPJ-ZAFYKAAXSA-N L-ascorbic acid 2-sulfate Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(OS(O)(=O)=O)=C1O XDBMXUKHMOFBPJ-ZAFYKAAXSA-N 0.000 description 1
- 102100033467 L-selectin Human genes 0.000 description 1
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M Lactate Chemical compound CC(O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 1
- 101150039798 MYC gene Proteins 0.000 description 1
- 241000711408 Murine respirovirus Species 0.000 description 1
- ZYVXHFWBYUDDBM-UHFFFAOYSA-N N-methylnicotinamide Chemical compound CNC(=O)C1=CC=CN=C1 ZYVXHFWBYUDDBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- KUEUWHJGRZKESU-UHFFFAOYSA-N Niceritrol Chemical compound C=1C=CN=CC=1C(=O)OCC(COC(=O)C=1C=NC=CC=1)(COC(=O)C=1C=NC=CC=1)COC(=O)C1=CC=CN=C1 KUEUWHJGRZKESU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VRAHPESAMYMDQI-UHFFFAOYSA-N Nicomol Chemical compound C1CCC(COC(=O)C=2C=NC=CC=2)(COC(=O)C=2C=NC=CC=2)C(O)C1(COC(=O)C=1C=NC=CC=1)COC(=O)C1=CC=CN=C1 VRAHPESAMYMDQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SUHOOTKUPISOBE-UHFFFAOYSA-N O-phosphoethanolamine Chemical compound NCCOP(O)(O)=O SUHOOTKUPISOBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 241000282579 Pan Species 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N Phenolsulfonephthalein Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1(C=2C=CC(O)=CC=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 241000282405 Pongo abelii Species 0.000 description 1
- NPYPAHLBTDXSSS-UHFFFAOYSA-N Potassium ion Chemical compound [K+] NPYPAHLBTDXSSS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 101710089372 Programmed cell death protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 102100040678 Programmed cell death protein 1 Human genes 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000007327 Protamines Human genes 0.000 description 1
- 108010007568 Protamines Proteins 0.000 description 1
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M Pyruvate Chemical compound CC(=O)C([O-])=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- MJNIWUJSIGSWKK-BBANNHEPSA-N Riboflavin butyrate Chemical compound CCCC(=O)OC[C@@H](OC(=O)CCC)[C@@H](OC(=O)CCC)[C@@H](OC(=O)CCC)CN1C2=CC(C)=C(C)C=C2N=C2C1=NC(=O)NC2=O MJNIWUJSIGSWKK-BBANNHEPSA-N 0.000 description 1
- 239000012891 Ringer solution Substances 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- BUGBHKTXTAQXES-UHFFFAOYSA-N Selenium Chemical compound [Se] BUGBHKTXTAQXES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004783 Serene Substances 0.000 description 1
- FKNQFGJONOIPTF-UHFFFAOYSA-N Sodium cation Chemical compound [Na+] FKNQFGJONOIPTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 108010021188 Superoxide Dismutase-1 Proteins 0.000 description 1
- 102100038836 Superoxide dismutase [Cu-Zn] Human genes 0.000 description 1
- 102100032891 Superoxide dismutase [Mn], mitochondrial Human genes 0.000 description 1
- 241000973887 Takayama Species 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- 108090000992 Transferases Proteins 0.000 description 1
- 102000004357 Transferases Human genes 0.000 description 1
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 description 1
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 description 1
- LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N Uric Acid Chemical compound N1C(=O)NC(=O)C2=C1NC(=O)N2 LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N Uric acid Natural products N1C(=O)NC(=O)C2NC(=O)NC21 TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000003990 Urokinase-type plasminogen activator Human genes 0.000 description 1
- 108090000435 Urokinase-type plasminogen activator Proteins 0.000 description 1
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 1
- FPIPGXGPPPQFEQ-BOOMUCAASA-N Vitamin A Natural products OC/C=C(/C)\C=C\C=C(\C)/C=C/C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-BOOMUCAASA-N 0.000 description 1
- 229930003779 Vitamin B12 Natural products 0.000 description 1
- QYSXJUFSXHHAJI-XFEUOLMDSA-N Vitamin D3 Natural products C1(/[C@@H]2CC[C@@H]([C@]2(CCC1)C)[C@H](C)CCCC(C)C)=C/C=C1\C[C@@H](O)CCC1=C QYSXJUFSXHHAJI-XFEUOLMDSA-N 0.000 description 1
- 229930003427 Vitamin E Natural products 0.000 description 1
- 229930003448 Vitamin K Natural products 0.000 description 1
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 1
- 206010051373 Wound haemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 1
- 229960005305 adenosine Drugs 0.000 description 1
- UDMBCSSLTHHNCD-KQYNXXCUSA-N adenosine 5'-monophosphate Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O UDMBCSSLTHHNCD-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 1
- LNQVTSROQXJCDD-UHFFFAOYSA-N adenosine monophosphate Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(CO)C(OP(O)(O)=O)C1O LNQVTSROQXJCDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004523 agglutinating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 150000001342 alkaline earth metals Chemical class 0.000 description 1
- SHGAZHPCJJPHSC-YCNIQYBTSA-N all-trans-retinoic acid Chemical compound OC(=O)\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C SHGAZHPCJJPHSC-YCNIQYBTSA-N 0.000 description 1
- 229940087168 alpha tocopherol Drugs 0.000 description 1
- AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N alpha-glycerophosphate Natural products OCC(O)COP(O)(O)=O AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000003368 amide group Chemical group 0.000 description 1
- 229960004050 aminobenzoic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 1
- 229940072065 ascorbic acid 2-sulfate Drugs 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000007640 basal medium Substances 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229960005069 calcium Drugs 0.000 description 1
- 229940043430 calcium compound Drugs 0.000 description 1
- 150000001674 calcium compounds Chemical class 0.000 description 1
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000002619 cancer immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 1
- 229940105657 catalase Drugs 0.000 description 1
- 238000002659 cell therapy Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 229940059329 chondroitin sulfate Drugs 0.000 description 1
- AGVAZMGAQJOSFJ-WZHZPDAFSA-M cobalt(2+);[(2r,3s,4r,5s)-5-(5,6-dimethylbenzimidazol-1-yl)-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] [(2r)-1-[3-[(1r,2r,3r,4z,7s,9z,12s,13s,14z,17s,18s,19r)-2,13,18-tris(2-amino-2-oxoethyl)-7,12,17-tris(3-amino-3-oxopropyl)-3,5,8,8,13,15,18,19-octamethyl-2 Chemical compound [Co+2].N#[C-].[N-]([C@@H]1[C@H](CC(N)=O)[C@@]2(C)CCC(=O)NC[C@@H](C)OP(O)(=O)O[C@H]3[C@H]([C@H](O[C@@H]3CO)N3C4=CC(C)=C(C)C=C4N=C3)O)\C2=C(C)/C([C@H](C\2(C)C)CCC(N)=O)=N/C/2=C\C([C@H]([C@@]/2(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=N\C\2=C(C)/C2=N[C@]1(C)[C@@](C)(CC(N)=O)[C@@H]2CCC(N)=O AGVAZMGAQJOSFJ-WZHZPDAFSA-M 0.000 description 1
- 235000017471 coenzyme Q10 Nutrition 0.000 description 1
- ACTIUHUUMQJHFO-UPTCCGCDSA-N coenzyme Q10 Chemical compound COC1=C(OC)C(=O)C(C\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CCC=C(C)C)=C(C)C1=O ACTIUHUUMQJHFO-UPTCCGCDSA-N 0.000 description 1
- OHCQJHSOBUTRHG-UHFFFAOYSA-N colforsin Natural products OC12C(=O)CC(C)(C=C)OC1(C)C(OC(=O)C)C(O)C1C2(C)C(O)CCC1(C)C OHCQJHSOBUTRHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 description 1
- 235000012754 curcumin Nutrition 0.000 description 1
- 239000004148 curcumin Substances 0.000 description 1
- 229940109262 curcumin Drugs 0.000 description 1
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229940068840 d-biotin Drugs 0.000 description 1
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 1
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 description 1
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 description 1
- 229960000633 dextran sulfate Drugs 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- VFLDPWHFBUODDF-UHFFFAOYSA-N diferuloylmethane Natural products C1=C(O)C(OC)=CC(C=CC(=O)CC(=O)C=CC=2C=C(OC)C(O)=CC=2)=C1 VFLDPWHFBUODDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001484 edetic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 210000003162 effector t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol bis(2-aminoethyl)tetraacetic acid Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCOCCOCCN(CC(O)=O)CC(O)=O DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 235000019197 fats Nutrition 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- VWWQXMAJTJZDQX-UYBVJOGSSA-N flavin adenine dinucleotide Chemical compound C1=NC2=C(N)N=CN=C2N1[C@@H]([C@H](O)[C@@H]1O)O[C@@H]1CO[P@](O)(=O)O[P@@](O)(=O)OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)CN1C2=NC(=O)NC(=O)C2=NC2=C1C=C(C)C(C)=C2 VWWQXMAJTJZDQX-UYBVJOGSSA-N 0.000 description 1
- 235000019162 flavin adenine dinucleotide Nutrition 0.000 description 1
- 239000011714 flavin adenine dinucleotide Substances 0.000 description 1
- 229940013640 flavin mononucleotide Drugs 0.000 description 1
- 239000011768 flavin mononucleotide Substances 0.000 description 1
- FVTCRASFADXXNN-UHFFFAOYSA-N flavin mononucleotide Natural products OP(=O)(O)OCC(O)C(O)C(O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O FVTCRASFADXXNN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940093632 flavin-adenine dinucleotide Drugs 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N gamma-tocopherol Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC1CCC2C(C)C(O)C(C)C(C)C2O1 WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001031 glucose Drugs 0.000 description 1
- 229960002743 glutamine Drugs 0.000 description 1
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 102000055151 human KITLG Human genes 0.000 description 1
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 description 1
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 description 1
- 229960000890 hydrocortisone Drugs 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- JRFKIOFLCXKVOT-UHFFFAOYSA-N hydroxymethylnicotinamide Chemical compound OCNC(=O)C1=CC=CN=C1 JRFKIOFLCXKVOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001866 hydroxypropyl methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920003088 hydroxypropyl methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 235000010979 hydroxypropyl methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N hydroxypropyl methyl cellulose Chemical compound OC1C(O)C(OC)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(OC2C(C(O)C(OC3C(C(O)C(O)C(CO)O3)O)C(CO)O2)O)C(CO)O1 UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940095066 hydroxytyrosol Drugs 0.000 description 1
- 235000003248 hydroxytyrosol Nutrition 0.000 description 1
- 150000003949 imides Chemical class 0.000 description 1
- 229940126546 immune checkpoint molecule Drugs 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 1
- 229960000905 indomethacin Drugs 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N iron Substances [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N isomaltotriose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)O1 FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N 0.000 description 1
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- AGBQKNBQESQNJD-UHFFFAOYSA-M lipoate Chemical compound [O-]C(=O)CCCCC1CCSS1 AGBQKNBQESQNJD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000019136 lipoic acid Nutrition 0.000 description 1
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 241001515942 marmosets Species 0.000 description 1
- 229960001238 methylnicotinate Drugs 0.000 description 1
- 238000001565 modulated differential scanning calorimetry Methods 0.000 description 1
- XONPDZSGENTBNJ-UHFFFAOYSA-N molecular hydrogen;sodium Chemical compound [Na].[H][H] XONPDZSGENTBNJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 210000002894 multi-fate stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004985 myeloid-derived suppressor cell Anatomy 0.000 description 1
- FJEVKYZLIRAAKE-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethylpyridine-3-carboxamide Chemical compound CN(C)C(=O)C1=CC=CN=C1 FJEVKYZLIRAAKE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ABXIUYMKZDZUDC-UHFFFAOYSA-N n-[2-(1h-indol-3-yl)ethyl]-2-(5-methylpyridin-3-yl)-9-propan-2-ylpurin-6-amine Chemical compound N1=C2N(C(C)C)C=NC2=C(NCCC=2C3=CC=CC=C3NC=2)N=C1C1=CN=CC(C)=C1 ABXIUYMKZDZUDC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JIAOUYONZMRJJD-UHFFFAOYSA-N n-benzylpyridine-3-carboxamide Chemical compound C=1C=CN=CC=1C(=O)NCC1=CC=CC=C1 JIAOUYONZMRJJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZXOAHASJYIUCBG-UHFFFAOYSA-N n-ethylpyridine-3-carboxamide Chemical compound CCNC(=O)C1=CC=CN=C1 ZXOAHASJYIUCBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NYQXIOZBHWFCBU-UHFFFAOYSA-N n-phenylpyridine-3-carboxamide Chemical compound C=1C=CN=CC=1C(=O)NC1=CC=CC=C1 NYQXIOZBHWFCBU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- OIXVKQDWLFHVGR-WQDIDPJDSA-N neomycin B sulfate Chemical compound OS(O)(=O)=O.N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](N)C[C@@H](N)[C@@H]2O)O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O2)N)O[C@@H]1CO OIXVKQDWLFHVGR-WQDIDPJDSA-N 0.000 description 1
- 229940053050 neomycin sulfate Drugs 0.000 description 1
- 210000001178 neural stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 229960000827 niceritrol Drugs 0.000 description 1
- 229950001071 nicomol Drugs 0.000 description 1
- 229960000988 nystatin Drugs 0.000 description 1
- VQOXZBDYSJBXMA-NQTDYLQESA-N nystatin A1 Chemical compound O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1/C=C/C=C/C=C/C=C/CC/C=C/C=C/[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 VQOXZBDYSJBXMA-NQTDYLQESA-N 0.000 description 1
- QNDVLZJODHBUFM-WFXQOWMNSA-N okadaic acid Chemical compound C([C@H](O1)[C@H](C)/C=C/[C@H]2CC[C@@]3(CC[C@H]4O[C@@H](C([C@@H](O)[C@@H]4O3)=C)[C@@H](O)C[C@H](C)[C@@H]3[C@@H](CC[C@@]4(OCCCC4)O3)C)O2)C(C)=C[C@]21O[C@H](C[C@@](C)(O)C(O)=O)CC[C@H]2O QNDVLZJODHBUFM-WFXQOWMNSA-N 0.000 description 1
- VEFJHAYOIAAXEU-UHFFFAOYSA-N okadaic acid Natural products CC(CC(O)C1OC2CCC3(CCC(O3)C=CC(C)C4CC(=CC5(OC(CC(C)(O)C(=O)O)CCC5O)O4)C)OC2C(O)C1C)C6OC7(CCCCO7)CCC6C VEFJHAYOIAAXEU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 229960003531 phenolsulfonphthalein Drugs 0.000 description 1
- WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N phenyl(114C)methanol Chemical compound O[14CH2]C1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid Substances OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SHUZOJHMOBOZST-UHFFFAOYSA-N phylloquinone Natural products CC(C)CCCCC(C)CCC(C)CCCC(=CCC1=C(C)C(=O)c2ccccc2C1=O)C SHUZOJHMOBOZST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000010118 platelet activation Effects 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 239000011118 polyvinyl acetate Substances 0.000 description 1
- 229920002689 polyvinyl acetate Polymers 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 229910001414 potassium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- LJPYJRMMPVFEKR-UHFFFAOYSA-N prop-2-ynylurea Chemical compound NC(=O)NCC#C LJPYJRMMPVFEKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940048914 protamine Drugs 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 229950010131 puromycin Drugs 0.000 description 1
- QJZUKDFHGGYHMC-UHFFFAOYSA-N pyridine-3-carbaldehyde Chemical compound O=CC1=CC=CN=C1 QJZUKDFHGGYHMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XQWBMZWDJAZPPX-UHFFFAOYSA-N pyridine-3-carbothioamide Chemical compound NC(=S)C1=CC=CN=C1 XQWBMZWDJAZPPX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZUFQODAHGAHPFQ-UHFFFAOYSA-N pyridoxine hydrochloride Chemical compound Cl.CC1=NC=C(CO)C(CO)=C1O ZUFQODAHGAHPFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019171 pyridoxine hydrochloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000011764 pyridoxine hydrochloride Substances 0.000 description 1
- HNJBEVLQSNELDL-UHFFFAOYSA-N pyrrolidin-2-one Chemical compound O=C1CCCN1 HNJBEVLQSNELDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NPCOQXAVBJJZBQ-UHFFFAOYSA-N reduced coenzyme Q9 Natural products COC1=C(O)C(C)=C(CC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)C)C(O)=C1OC NPCOQXAVBJJZBQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 229930002330 retinoic acid Natural products 0.000 description 1
- 229960003471 retinol Drugs 0.000 description 1
- 235000020944 retinol Nutrition 0.000 description 1
- 239000011607 retinol Substances 0.000 description 1
- 235000019231 riboflavin-5'-phosphate Nutrition 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052711 selenium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011669 selenium Substances 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N serine Chemical compound OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001626 skin fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- AWUCVROLDVIAJX-GSVOUGTGSA-N sn-glycerol 3-phosphate Chemical compound OC[C@@H](O)COP(O)(O)=O AWUCVROLDVIAJX-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- HRZFUMHJMZEROT-UHFFFAOYSA-L sodium disulfite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S(=O)S([O-])(=O)=O HRZFUMHJMZEROT-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910001415 sodium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000010262 sodium metabisulphite Nutrition 0.000 description 1
- KFLRWGSAMLBHBV-UHFFFAOYSA-M sodium;pyridine-3-carboxylate Chemical compound [Na+].[O-]C(=O)C1=CC=CN=C1 KFLRWGSAMLBHBV-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 108010045815 superoxide dismutase 2 Proteins 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 1
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 1
- 229960002663 thioctic acid Drugs 0.000 description 1
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 1
- 229960000707 tobramycin Drugs 0.000 description 1
- NLVFBUXFDBBNBW-PBSUHMDJSA-N tobramycin Chemical compound N[C@@H]1C[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N NLVFBUXFDBBNBW-PBSUHMDJSA-N 0.000 description 1
- 229960000984 tocofersolan Drugs 0.000 description 1
- 229930003799 tocopherol Natural products 0.000 description 1
- 229960001295 tocopherol Drugs 0.000 description 1
- 235000010384 tocopherol Nutrition 0.000 description 1
- 239000011732 tocopherol Substances 0.000 description 1
- FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N trans-L-hydroxy-proline Natural products ON1CCCC1C(O)=O FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 description 1
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 1
- 229960001727 tretinoin Drugs 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940035936 ubiquinone Drugs 0.000 description 1
- 210000002444 unipotent stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940116269 uric acid Drugs 0.000 description 1
- 229960005356 urokinase Drugs 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 description 1
- 235000019155 vitamin A Nutrition 0.000 description 1
- 239000011719 vitamin A Substances 0.000 description 1
- 235000019163 vitamin B12 Nutrition 0.000 description 1
- 239000011715 vitamin B12 Substances 0.000 description 1
- QYSXJUFSXHHAJI-YRZJJWOYSA-N vitamin D3 Chemical compound C1(/[C@@H]2CC[C@@H]([C@]2(CCC1)C)[C@H](C)CCCC(C)C)=C\C=C1\C[C@@H](O)CCC1=C QYSXJUFSXHHAJI-YRZJJWOYSA-N 0.000 description 1
- 235000005282 vitamin D3 Nutrition 0.000 description 1
- 239000011647 vitamin D3 Substances 0.000 description 1
- 235000019165 vitamin E Nutrition 0.000 description 1
- 229940046009 vitamin E Drugs 0.000 description 1
- 239000011709 vitamin E Substances 0.000 description 1
- 235000019168 vitamin K Nutrition 0.000 description 1
- 239000011712 vitamin K Substances 0.000 description 1
- 150000003721 vitamin K derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229940045997 vitamin a Drugs 0.000 description 1
- 229940021056 vitamin d3 Drugs 0.000 description 1
- 229940046010 vitamin k Drugs 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
- 238000002689 xenotransplantation Methods 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940100888 zinc compound Drugs 0.000 description 1
- 150000003752 zinc compounds Chemical class 0.000 description 1
- 235000004835 α-tocopherol Nutrition 0.000 description 1
- 239000002076 α-tocopherol Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/04—Preserving or maintaining viable microorganisms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0618—Cells of the nervous system
- C12N5/0622—Glial cells, e.g. astrocytes, oligodendrocytes; Schwann cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0636—T lymphocytes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0644—Platelets; Megakaryocytes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0652—Cells of skeletal and connective tissues; Mesenchyme
- C12N5/0662—Stem cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0652—Cells of skeletal and connective tissues; Mesenchyme
- C12N5/0662—Stem cells
- C12N5/0663—Bone marrow mesenchymal stem cells (BM-MSC)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/30—Organic components
- C12N2500/38—Vitamins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/60—Transcription factors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/60—Transcription factors
- C12N2501/606—Transcription factors c-Myc
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2506/00—Differentiation of animal cells from one lineage to another; Differentiation of pluripotent cells
- C12N2506/45—Differentiation of animal cells from one lineage to another; Differentiation of pluripotent cells from artificially induced pluripotent stem cells
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Neurology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
Abstract
Description
PCT/JP2018/034667に記載の方法に従ってiPS細胞由来血小板を作製した。具体的な手順を以下の(1−1)〜(1−12)に示す。
Takayamaら(J.Exp.Med.,2010,vol.13,2817−2830)の方法に従って、ヒトiPS細胞(TKDN SeV2及びNIH5:センダイウイルスを用いて樹立されたヒト胎児皮膚繊維芽細胞由来iPS細胞)から血球細胞への分化培養を実施した。詳細には、ヒトES/iPS細胞コロニーを、20ng/mLのVEGF(R&D SYSTEMS社製)存在下で、C3H10T1/2フィーダ細胞と共に14日間共培養して造血前駆細胞(Hematopoietic Progenitor Cells;HPC)を作製した。上記培養は、37℃、20%O2、5%CO2の条件で実施した。
遺伝子導入システムは、レンチウイルスベクターシステムを利用した。レンチウイルスベクターは、Tetracycline制御性のTet−on(登録商標)遺伝子発現誘導システムベクターである。LV−TRE−mOKS−Ubc−tTA−I2G(Kobayashiら、Cell,2010,vol.142,No.5,787−799)のmOKSカセットを、c−MYC、BMI1、又はBCL−xLに組み替えることで作製した。c−MYC、BMI1、又はBCL−xLが導入されたベクターを、それぞれ、LV−TRE−c−Myc−Ubc−tTA−I2G、LVTRE−BMI1−Ubc−tTA−I2G、及びLV−TRE−BCL−xL−Ubc−tTA−I2Gとした。c−MYC、BMI1、及びBCL−xLウイルスは、293T細胞へ上記レンチウイルスベクターで遺伝子導入することにより作製した。得られたウイルスを目的の細胞に感染させることによって、c−MYC、BMI1、及びBCL−xL遺伝子が目的の細胞のゲノム配列に導入される。安定的にゲノム配列に導入されたこれらの遺伝子は、培地にドキシサイクリン(clontech#631311)を加えることによって強制発現させることができる。
予めC3H10T1/2フィーダ細胞を播種した6well plate上に、上記(1−1)の方法で得られたHPCを5×104cells/wellとなるように播種し、BMI1ウイルス及びc−MYCウイルスを用いたレンチウイルス法にてc−MYC及びBMI1を強制発現させた。このとき、細胞株1種類につき6 wellずつ使用した。具体的には、それぞれMOI(multiplicity of infection)20となるように培地中にウイルス粒子を添加し、スピンインフェクション(32℃、900rpm、60分間遠心)で感染させた。上記スピンインフェクションは、12時間おきに2回実施した。培地は、基本培地(15% Fetal Bovine Serum(GIBCO社製)、1% Penicillin−Streptomycin−Glutamine(GIBCO社製)、1% Insulin,Transferrin,Selenium Solution(ITS−G)(GIBCO社製)、0.45mmol/L 1−Thioglycerol(Sigma−Aldrich社製)、50μg/mL L−Ascorbic Acid(Sigma−Aldrich社製)を含有するIMDM(Sigma−Aldrich社製))に、50ng/mL Human thrombopoietin(TPO)(R&D SYSTEMS社製)、50ng/mL Human Stem Cell Factor(SCF)(R&D SYSTEMS社製)及び2μg/mL Doxycycline(DOX、clontech社製、#631311)を添加した培地に(以下、「分化培地」と称する)、さらに、Protamineを最終濃度が10μg/mLとなるように添加して用いた。
上記(1−3)の方法でc−MYC及びBMI1ウイルスの感染を実施した日を感染0日目として、以下の通りに、c−MYC遺伝子及びBMI1遺伝子が導入されたHPCを培養することで、巨核球自己増殖株をそれぞれ作製した。c−MYC遺伝子及びBMI1遺伝子の強制発現は、培地に1μg/mL DOXを添加することにより実施した。
感染2日目〜感染11日目:
感染2日目に、ピペッティングにて上記の方法で得られたウイルス感染済み血球細胞を回収し、1200rpm、5分間遠心操作を行って上清を除去した後、新しい分化培地で懸濁して新しいC3H10T1/2フィーダ細胞上に播種した(6well plate)。感染9日目に同様の操作をすることによって継代を実施した。上記再播種時は、細胞数を計測後、1×105cells/2mL/wellとなるようにC3H10T1/2フィーダ細胞上に播種した(6well plate)。
感染12日目〜感染13日目:
感染2日目と同様の操作を実施した。細胞数を計測後3×105cells/10mL/100mm dishとなるように、C3H10T1/2フィーダ細胞上に播種した(100mm dish)。
感染14日目:
ウイルス感染済み血球細胞を回収し、細胞1.0×105個あたり、2μLの抗ヒトCD41a−APC抗体(BioLegend社製)、1μLの抗ヒトCD42b−PE抗体(eBioscience社製)、及び1μLの抗ヒトCD235ab−pacific blue抗体(BioLegend社製)をそれぞれ用いて、上記血球細胞と抗体とを反応させた。上記反応後、FACS Verse(商標)(BD Biosciences社製)を用いて解析した。感染14日目において、CD41a陽性率が50%以上である細胞を、巨核球自己増殖株とした。
上記感染14日目の巨核球自己増殖株に、BCL−xLウイルスを用いたレンチウイルス法にてBCL−xLを遺伝子導入した。MOI 10になるように培地中にウイルス粒子を添加し、スピンインフェクション(32℃、900rpm、60分間遠心)で感染させた。BCL−xL遺伝子の強制発現は、培地に1μg/mL DOXとなるようにDO
Xを添加することにより実施した。
感染14日目〜感染18日目:
上記(1−5)の方法で得られたBCL−xL遺伝子を導入した巨核球自己増殖株を回収し、1200rpm、5分間遠心操作を行った。上記遠心後、沈殿した細胞を新しい分化培地で懸濁した後、新しいC3H10T1/2フィーダ細胞上に2×105cells/2mL/wellとなるように播種した(6well plate)。
感染18日目(継代):
BCL−xL遺伝子を導入後の巨核球自己増殖株を回収し、細胞数を計測後、3×105cells/10mL/100mm dishとなるように播種した。
感染24日目(継代):
BCL−xL遺伝子を導入後の巨核球自己増殖株を回収し、細胞数を計測後、1×105cells/10mL/100mm dishとなるように播種した。以後、4−7日毎に同様にして継代を行い、維持培養を行った。なお、継代時には、新たな分化培地に懸濁の上、播種した。
感染24日目にBCL−xLを遺伝子導入した巨核球自己増殖株を回収し、細胞1.0×105個あたり、2μLの抗ヒトCD41a−APC抗体(BioLegend社製)、1μLの抗ヒトCD42b−PE抗体(eBioscience社製)、及び1μLの抗ヒトCD235ab−Pacific Blue抗体(Anti−CD235ab−PB;BioLegend社製)を用いて免疫染色した後に、FACS Verse(商標)を用いて解析した。そして、感染24日目において、CD41a陽性率が50%以上である株を不死化巨核球細胞株とした。感染後24日以上増殖することができたこれらの細胞を、不死化巨核球細胞株SeV2−MKCL及びNIH5−MKCLとした。得られたSeV2−MKCL及びNIH5−MKCLを、10cmディッシュ(10mL/ディッシュ)で静置培養した。培地は、IMDMを基本培地として、以下の成分を加えた(濃度は終濃度)。培養条件は、27℃、5%CO2とした。
FBS(シグマ社製、#172012、lot.12E261) 15%
L−Glutamin(Gibco社製、#25030−081) 2mmol/L
ITS(Gibco社製、#41400−045) 100倍希釈
MTG(monothioglycerol、sigma社製、#M6145−25ML) 450μmol/L
アスコルビン酸(sigma社製、#A4544) 50μg/mL
Puromycin(sigma社製、#P8833−100MG) 2μg/mL
SCF(和光純薬社製、#193−15513) 50ng/mL
TPO様作用物質 200ng/mL
DOXを含まない培地で培養することで強制発現を解除した。具体的には、上記(1−6)の方法で得た不死化巨核球細胞株(SeV2−MKCL及びNIH5−MKCL)を、PBS(−)で2度洗浄し、下記血小板生産培地に懸濁した。細胞の播種密度は、1.0×105cells/mLとした。そして、上記血小板生産培地存在下で6日間培養して、血小板を産生させることにより、巨核球の培養物を生産させた。また、上記血小板生産培地は、IMDMを基本培地として、以下の成分を加えた(濃度は、終濃度)。
human plasma 5%
L−Glutamin(Gibco社製、#25030−081) 4mmol/L
ITS(Gibco社製、#41400−045) 100倍希釈
MTG(monothioglycerol、sigma社製、#M6145−25ML) 450μmol/L
アスコルビン酸(sigma社製、#A4544) 50μg/mL
SCF(和光純薬社製、#193−15513) 50ng/mL
TPO様作用物質 200ng/mL
ADAM阻害剤 15μmol/L
GNF351(Calbiochem社製、#182707) 500nmol/L
Y39983(Chemscene LLC社製、#CS−0096) 500nmol/L
Urokinase 5U/mL
低分子heparin(SANOFI社製、クレキサン) 1U/mL
上記(1−7)で得られた巨核球の培養物から、血小板を製造(精製)した。なお、同様の精製を2回実施した。具体的には、上記(1−7)で得られた巨核球の培養物について、培養物バッグに導入した。そして、上記培養物バッグについて、図1のように、濃縮システムに接続した。図1において、洗浄保存液バッグ1及び2は、洗浄保存液を含む。上記洗浄保存液は、ビカネイト輸液(大塚製薬社製)に20%ACD及び2.5%ヒト血清アルブミンを添加し、NaOHでpH7.2に調整したものを使用した。そして、下記表1にしたがって、中空糸膜(プラズマフローOP、旭化成メディカル社製)を用いて、上記巨核球の培養物を濃縮し、得られた巨核球の培養物の濃縮液を貯蔵バッグに回収した。
まず、無菌接合装置を用いて、ACP215ディスポーザブルセットの廃液バッグを回収用バッグに置換した。上記回収用バッグは、ハイカリックIVHバッグ(テルモ社製、HC−B3006A)を用いた。次に、上記巨核球の培養物の濃縮液に対して10%量のACD−A液(テルモ社製)を添加した。上記添加後、ACD−A液を添加した濃縮液を、細胞バッグに注入した。上記細胞バッグは、ハイカリックIVHバッグ(テルモ社製、HC−B3006A)を用いた。
さらに、無菌接合装置を用いて、ACD−A液を添加した培養物を含む細胞バッグをACP215ディスポーザブルセットに接合した。そして、ACP215をサービスモードで立ち上げ、回転数を2500rpm(350×g)にセットした。ACP215をスタートさせ、上記細胞バッグ中の培養物を約100mL/minで分離ボウルに導入した。上記分離ボウルより流出する液体成分は、回収バッグに回収した。上記細胞バッグ中の培養物の全量を分離ボウルに導入後、さらに500mLの洗浄保存液を上記分離ボウルに導入した。上記分離ボウルに上記洗浄保存液を導入後、遠心を止めてチューブシーラーを用いて回収液(血小板を含む回収された液体成分)を含む回収バッグを切り離した。
新しいACP215ディスポーザブルセットに、上記無菌接合装置を用いて回収液(血小板を含む)を含んだ回収バッグを接合した。ACP215を通常モードで立ち上げた。プログラム設定はWPCを選択し、機器の指示に従い、上記回収バッグを接合したACP215ディスポーザブルセットをセットした。なお、回収液を含んだ回収バッグはスタンドに設置した。
次に、ACP215の遠心速度を5000rpm(1398.8×g)に変更し、遠心をスタートさせた。上記分離ボウルへ上記回収液が導入され始めたとき、自動注入から手動注入に変更した。具体的には、上記回収液を約100mL/minの導入速度で上記分離ボウルに導入した。上記回収液全量を分離ボウルに添加後、さらに500mLの洗浄保存液を追加した。
洗浄は、ACP215のプログラムに従って、2000mLの上記洗浄保存液で洗浄した。
ACP215のプログラムに従って、200mLの洗浄済み培養物(血小板を含む)を血小板製剤バッグに回収した。
上記血小板製剤バッグについて、上記中空糸膜を用いて、常法により血小板を分離し、回収用バッグに回収した。
(2−1)血小板保存液の調製
重炭酸リンゲル液(ビカネイト輸液;大塚製薬工場社製)(塩化ナトリウム 5.84g/L、塩化カリウム 0.30g/L、塩化カルシウム水和物 0.22g/L、塩化マグネシウム 0.20g/L、炭酸水素ナトリウム 2.35g/L、及びクエン酸ナトリウム水和物 0.20g/L)に、ヒト血清アルブミン製剤(HSA;CSLベーリング社製)、及び、血液保存液(ACD−A液;テルモ社製)(クエン酸ナトリウム水和物 2.20W/V%、クエン酸水和物、0.80W/V%、及びブドウ糖 2.20W/V%)を加えた溶液を調製した。本明細書においては、当該溶液を「第1世代保存液」ともいう。また、第1世代保存液にVC製剤(添加剤を含む注射製剤;沢井製薬社製)を加えた溶液を調製した。本明細書においては、当該溶液を「VC添加保存液」ともいう。各保存液における上記添加剤の最終濃度を以下の表2に示す。また、いずれの保存液も1MのNaOHによりpH7.3±0.1となるように調整し、使用時まで1時間以上インキュベートした(遮光下、室温、5%CO2)。
実施例1により得られた培養物に含まれる血小板の濃度を、FACSにより測定した。必要量の血小板を含む培養物を分取してACD−A液(10v/v%)及びPEG1(終濃度2μM;Cayman Chemical Company社製)を添加し、12分間の遠心分離(1200×g、22℃)を行った。上清を除去した後に、ペレットに上記(2−1)で調製した保存液を加え、均一な懸濁液となるように穏やかに懸濁した(血小板濃度:約0.3×109plts/mL)。各懸濁液を24ウェルプレートに播種して最長5日間水平振盪保存(遮光下、22度、50rpm)した後に、以下の(2−3)及び(2−4)の実験に供した。
Annexin Vは血小板の劣化(活性化)の指標の一つであり、陽性率が高い場合には血小板が劣化している、又は異常であると評価される。そこで、上記(2−2)により得られた血小板サンプルにおけるAnnexin V陽性率を測定し、各保存液による血小板の劣化抑制効果を調べた。
具体的には、上記(2−2)により得られた血小板サンプルをAnnexin Buffer(Beckton Dickinson社製)で500倍希釈し、3本の遠心管に分注した(それぞれ、ネガティブコントロール、ポジティブコントロール、及び無刺激サンプル)。ネガティブコントロールサンプルにはEDTAを、ポジティブコントロールサンプルにはIonomycinをそれぞれ添加した後に、全てのサンプルを抗CD41抗体(BioLegend社製)及びAnnexin V(Beckton Dickinson社製)により染色した(遮光下、室温、20分間)。染色後に、Annexin Bufferを加えて速やかにFACSで測定した。ネガティブコントロールにおけるiPS血小板(CD41+分画)中のAnnexin V陽性率を1.0±0.1%とし、無刺激サンプルにおけるAnnexin V陽性率を算出した。
結果を図2の上段に示す(いずれも、5日間保存後血小板サンプルから得られた結果)。血小板(CD41+分画)のAnnexin V陽性率は、第1世代保存液を用いた場合には60.5±0.3〜64.4±0.1%であったのに対し、VC添加保存液を用いた場合には53.9±2.1〜56.7±1.8%であり、VC添加により低下することが明らかとなった。これらの結果から、300〜3000mg/LのVCを添加することによって、血小板保存液の血小板劣化抑制作用が改善することが明らかとなった。
P―Selectinは血小板の劣化(活性化)の指標の一つであり、無刺激時のP―Selectin陽性率が高い場合には血小板が劣化又は異常であると評価される。そこで、上記(2−2)により得られた血小板サンプルにおけるP―Selectin陽性率を測定し、各保存液による血小板の劣化抑制効果を調べた。
また、血小板機能の保存状態を知るために、血小板活性化剤であるアデノシン二リン酸(ADP)及びトロンビン受容体活性化ペプチド−6(TRAP−6)により各血小板サンプルを刺激した時の、PAC−1及びP―Selectin陽性率を調べた(以下、ADP及びTRAP−6の組合せを「ATR」と称する場合がある)。
具体的には、上記(2−2)により得られた血小板サンプルをTyroad HEPES Buffer(THB)により500倍希釈し、3本の遠心管に分注した(それぞれ、ネガティブコントロール、ポジティブコントロール、及び無刺激サンプル)。ポジティブコントロールサンプルにADP(Sigma社製、終濃度20μM)及びTRAP−6(BACHEM社製、終濃度30μM)の混合液を添加し、刺激後のポジティブコントロールサンプル及び無刺激サンプルを、抗CD41抗体(BioLegend社製)、抗P―Selectin抗体(BioLegend社製)、及び抗PAC−1抗体(Beckton Dickinson社製)により染色した(遮光下、室温、30分間)。また、ネガティブコントロールサンプルは、抗CD41抗体(BioLegend社製)、抗P―Selectin抗体のアイソタイプコントロール抗体(BioLegend社製)、及び抗PAC−1抗体のアイソタイプコントロール抗体(BioLegend社製)により染色した(遮光下、室温、30分間)。染色後のサンプルに1%パラホルムアルデヒドを加えて固定し(遮光下、4℃、30分以上)、その後24時間以内にFACSによりP―Selectin及び/又はPAC―1陽性率を測定した。解析の際には、ネガティブコントロールサンプルにおけるiPS血小板(CD41+分画)中の、P−Selectin陽性率及びPAC−1陽性率が1.0±0.1%以下となるようにゲーティングを行った。
また、ATR刺激後の血小板(CD41+分画)におけるPAC―1/P―Selectin陽性率は、第1世代保存液を用いた場合には17.6〜20.8%であったのに対し、VC添加保存液を用いた場合には23.9〜26.9%であり、VC添加により上昇することが明らかとなった。これらの結果から、300〜3000mg/LのVCを添加することによって、血小板保存液の血小板機能維持作用が改善することが示された。
(3−1)血小板保存液の調製
VC添加保存液にニコチン酸(ニコチン酸注射製剤;トーアエイヨー社製)を添加した溶液を調製した。なお、上述の通り、本願明細書において、「VB3」はニコチン酸及び/又はニコチンアミドを意味するが、実施例3〜5、及び8〜13ではVB3としてニコチン酸が使用されており、実施例6ではVB3としてニコチン酸又はニコチンアミドが使用されている。また、本明細書においては、VC添加保存液にVB3(ニコチン酸又はニコチンアミド)を添加した溶液を「VC/VB3添加保存液」又は「第2世代保存液」ともいう。各保存液における、上記添加剤の最終濃度は以下の表3に示す通りである。また、いずれの保存液も1MのNaOHによりpH7.3±0.1となるように調整し、使用時まで1時間以上インキュベートした(遮光下、室温、5%CO2)。
実施例1に記載の方法によって作製したiPS細胞由来血小板製剤に、上記(3−1)で調製した保存液を加え、均一な懸濁液となるように穏やかに懸濁した(血小板濃度:約0.3×109plts/mL)。各懸濁液を直ちに、又は24ウェルプレートに播種して最長5日間水平振盪保存(遮光下、22度、50rpm)した後に、以下の(3−3)〜(3−5)の実験に供した。
実施例2の(2−3)に記載の方法によって、上記(3−2)により得られた血小板サンプル(5日間保存後)におけるAnnexin V陽性率を測定し、各保存液による血小板の劣化抑制効果を調べた。
結果を図3に示す。血小板(CD41+分画)のAnnexin V陽性率は、第1世代保存液を用いた場合には61.4±1.9%、VC添加保存液を用いた場合には46.3±0.7%、VC/VB3添加保存液を用いた場合には44.3±0.5%であった。これらの結果から、VCとVB3を組み合わせて使用することによって、VCのみと比較して、血小板の劣化がより強く抑制されることが明らかとなった。
保存中の血小板製剤では嫌気的代謝により乳酸が産生されており、乳酸濃度の上昇に伴ってpHが低下し、結果として血小板の劣化が起こることが知られている。そこで、上記(3−2)により得られた血小板サンプルにおける乳酸濃度を測定し、各保存液による乳酸産生抑制作用を調べた。
具体的には、上記(3−2)により得られた血小板サンプル(5日間保存後)を、1.5mLチューブに入れて遠心した(1200×g、22℃、10分間)。上清を回収して新しいチューブに入れ、測定まで−80℃で凍結保存した。N−アッセイL LACニットーボー(ニットーボーメディカル株式会社製)及び自動分析装置7180(株式会社日立ハイテクノロジーズ製)を用いて、上記上清中の乳酸濃度を測定した。
結果を図4に示す。サンプル上清中の乳酸濃度は、第1世代保存液を用いた場合には0.35±0.01g/L、VC添加保存液を用いた場合には0.16±0.01g/L、VC/VB3添加保存液を用いた場合には0.13±0.01g/Lであった。これらの結果から、VCとVB3を組み合わせて使用することによって、VCのみと比較して、保存中の血小板における嫌気的代謝がより強く抑制されることが明らかとなった。
保存時における血小板の活性化は、容器への付着や、凝集塊の形成を引き起こし、血小板回収率低下の原因となると考えられている。そこで、上記(3−2)により得られた、保存前及び保存後の血小板サンプルにおける血小板濃度を測定し、各保存液による回収率の変化を調べた。
具体的には、上記(3−2)で作製した血小板サンプル(保存前、及び5日間保存後)をTHBにより500倍希釈し、TruCOUNTチューブ(Beckton Dickinson社製)に分注した。抗CD41抗体(BioLegend社製)及び抗CD42b抗体(BioLegend社製)により染色し(遮光下、室温、20分間)、再度THBを加えた後にFACSで測定した。TruCOUNTチューブのビーズカウント値に基づいて、CD41+細胞(血小板)の濃度を算出した。各血小板サンプルについて、保存前の血小板濃度を分母とし、保存後の血小板濃度を分子として、回収率を算出した。
結果を図5に示す。血小板の回収率は、第1世代保存液を用いた場合には102.0±4.2%、VC添加保存液を用いた場合には101.1±6.8%、VC/VB3添加保存液を用いた場合には99.9±3.9%であった。これらの結果から、VC及び/又はVB3を添加しても、回収率に差が認められないことが明らかとなった。
(4−1)血小板保存液の調製と、血小板サンプルの作製
第1世代保存液(20%のACD−A液を含む)に、VC製剤(1000mg/L、沢井製薬社製)を添加し、VC添加保存液を調製した。また、当該VC添加保存液にニコチン酸(400mg/L、トーアエイヨー社製)を添加し、第2世代保存液を調製した。各溶液のpHは7.3±0.1となるように調整した。以下の表4に、本実施例で使用した第2世代保存液の組成を示す。
上記(2−4)でも述べたように、保存中の血小板製剤では嫌気的代謝により乳酸が産生されており、それがpHの低下の原因となることが知られている。本実験では、上記(4−1)により得られた血小板サンプルにおける乳酸濃度及びpHを測定し、各保存液による乳酸産生抑制作用を調べた。
具体的には、上記(4−1)により得られた血小板サンプル(保存前、5日間保存後、及び10日間保存後)を1.5mLチューブに入れ、細胞培養用分析装置FLEX(Nova Biomedical社製)により、乳酸濃度及びpHを測定した。
結果を図6に示す。図6の左グラフに示すように、乳酸濃度はいずれの保存液を用いた場合でも経時的に上昇していたが、第2世代保存液を用いたサンプルでは上昇の程度が最も低かった。また、図6の右グラフに示すように、pHはいずれの保存液を用いた場合でも経時的に低下していたが、第2世代保存液を用いたサンプルでは低下の程度が最も低く、10日間保存後でも中性に保たれていた。
実施例2の(2−4)でも述べたように、P―Selectinは血小板の劣化マーカーとして知られており、また、ATR(ADP/TRAP−6)刺激時のPAC―1/P―Selectinは血小板の反応性マーカーとして知られている。そこで本実験では、実施例2の(2−4)に記載の方法によって、上記(4−1)により得られた血小板サンプルにおける無刺激時のP―Selectin陽性率、及びATR刺激時のPAC―1/P―Selectin陽性率を測定し、各保存液による血小板の劣化抑制効果を調べた。
図7の左に無刺激時P―Selectin陽性率を、図7の右にATR刺激時PAC―1/P―Selectin陽性率をそれぞれ示す。P―Selectin陽性率は、第1世代保存液を用いた場合、保存前(Day1)が18.0%であったのに対し、5日間保存後(Day5)では33.0%、10日間保存後(Day10)では31.1%と上昇していた。一方、VC添加保存液を用いた場合、5及び10日間保存後のP―Selectin陽性率はいずれも第1世代保存液を用いた場合と比較して低く、それぞれ26.2%(Day5)及び24.4%(Day10)であった。また、第2世代保存液を用いた場合、5及び10日間保存後のP―Selectin陽性率は、VC添加保存液を用いた場合よりもさらに低く、それぞれ24.2%(Day5)及び19.3%(Day10)であった。以上の結果から、第2世代保存液を使用することによって、10日間保存後でも血小板の劣化が抑制されることが明らかとなった。
また、ATR刺激PAC―1/P―Selectin陽性率は、第1世代保存液を用いた場合、保存前(Day1)では43.4%であったのに対し、5日間保存後(Day5)では34.5%、10日間保存後(Day10)では5.9%と急激に低下していた。一方、VC添加保存液、又は第2世代保存液を用いた場合、ATR刺激PAC―1/P―Selectin陽性率は、5日間保存後(Day5)では第1世代保存液を用いた場合と同程度(それぞれ、35.9%及び35.3%)であったが、10日間保存後(Day10)では第1世代保存液よりも顕著に高い値を示した(それぞれ、19.4%及び19.9%)。以上の結果から、VC添加保存液、又は第2世代保存液を使用することによって、10日間保存後でも血小板の反応性が維持されることが明らかとなった。
上記(3−5)に記載の方法によって、上記(4−1)により得られた血小板サンプルにおける血小板濃度及び回収率を測定した。
結果を図8に示す。第1世代保存液を用いた場合の血小板回収率は、5日間保存後(Day5)では85.4%、10日間保存後(Day10)では86.8%であった。一方、VC添加保存液、又は第2世代保存液を用いた場合には、10日間保存後(Day10)でも血小板回収率が90%以上であった(それぞれ、90.0%及び91.4%)。これらの結果は、VC添加保存液、又は第2世代保存液を使用することによって、保存時の血小板活性化が抑制されるという上記(4−3)の結果と一致するものである。
(5−1)保存液及び血小板サンプルの調製
実施例3の(3−1)に記載の方法によって、第1世代保存液及び第2世代保存液を調製した。実施例1に記載の方法によって作製したiPS細胞由来血小板製剤に、上記保存液を加え、均一な懸濁液となるように穏やかに懸濁した(血小板濃度:約1.0×109plts/mL)。各懸濁液を直ちに、又は血液保存バッグに充填して5若しくは10日間水平振盪保存(遮光下、22度、50rpm、)した後に、以下の(5−2)の実験に供した。
上記(5−1)により得られた血小板サンプルを遠心して(1200×g、室温、10分間)、上清を除去した。5%ACD−Aを含む重炭酸リンゲル液を加えて、細胞濃度が1.0×109plts/mlとなるように懸濁した。得られた懸濁液をヒト血漿/CaCl2溶液(コスモ・バイオ社製)により希釈し、以下の表5に示す刺激剤を添加して刺激した。刺激後の各サンプルの凝集率を、血小板凝集能測定装置PRP313M(タイヨウ社製)により測定した。
(6−1)保存液及び血小板サンプルの調製
第1世代保存液(20%のACD−A液を含む)に、VC(1000mg/L)と、ニコチン酸(400mg/L;富士フイルム和光純薬社製)又はニコチンアミド(400mg/L;富士フイルム和光純薬社製)とを添加し、1M NaOHを用いてpH7.3±0.1となるように調整した。以下、第1世代保存液にVC及びニコチン酸を添加した保存液を「第2世代保存液(ニコチン酸)」と、第1世代保存液にVC及びニコチンアミドを添加した保存液を「第2世代保存液(ニコチンアミド)」と、それぞれ称する場合がある。
実施例1に記載の方法によって作製したiPS細胞由来血小板製剤に、上記保存液を加え、均一な懸濁液となるように穏やかに懸濁した(血小板濃度:約0.3×109plts/mL)。各懸濁液を直ちに、又は24ウェルプレートに播種して5日間水平振盪保存(遮光下、22度、50rpm)した後に、以下の(6−2)及び(6−3)の実験に供した。
実施例2の(2−3)に記載の方法によって、上記(6−1)により得られた血小板サンプルにおけるAnnexin V(劣化マーカー)陽性率を測定し、各保存液による血小板の劣化抑制効果を調べた。
結果を図13の上段に示す。図中、「Day1」は保存前のサンプルを、「第1世代」、「第2世代(ニコチン酸)」、「第2世代(ニコチンアミド)」は5日間保存後のサンプルをそれぞれ示す。血小板(CD41+分画)のAnnexin V陽性率は、ニコチン酸を添加した保存液では38.2±0.3%であり、ニコチンアミドを添加した保存液では38.5±0.3%であった。これらの値はいずれも、第1世代保存液を用いた場合(53.1±0.4%)よりも低かった。これらの結果から、広くビタミンB3(ニコチン酸及び/又はニコチンアミド)でも、保存中の血小板の劣化が抑制されることが明らかとなった。
実施例2の(2−4)に記載の方法によって、上記(6−1)により得られた血小板サンプルにおける無刺激時のP―Selectin(劣化マーカー)陽性率、及びATR刺激時のPAC―1/P―Selectin(反応性マーカー)陽性率を測定し、各保存液による血小板の劣化抑制効果を調べた。
図13の中段に無刺激時P―Selectin陽性率を、図13の下段にATR刺激時PAC―1/P―Selectin陽性率をそれぞれ示す。P―Selectin陽性率は、第1世代保存液を用いた場合、保存前(Day1)の11.6%から5日間保存後(Day5)の28.3±0.5%へと上昇していた。一方、ニコチン酸又はニコチンアミドを添加した第2世代保存液を用いた場合には、5日間保存後でも9.4±0.2%〜10.6±0.2%と低く抑えられていた。
また、ATR刺激PAC―1/P―Selectin陽性率は、第1世代保存液を用いた場合には33.9±2.4%であったが、ニコチン酸又はニコチンアミドを添加した第2世代保存液を用いた場合には41.6±0.8%〜41.2±1.9%であった。これらの結果から、ニコチン酸又はニコチンアミドにより保存中の血小板の反応性が維持されることが明らかとなった。
(7−1)保存液及び血小板サンプルの調製
上記実施例2〜6では、「VC」として沢井製薬社製のVC製剤を用いた。当該VC製剤には、ピロ亜硫酸ナトリウム、L−システイン塩酸塩一水和物及びベンジルアルコールからなる添加物が含まれていることから、これら添加物が実験結果に影響していないかを、以下の実験により確認した。
第1世代保存液(20%のACD−A液を含む)に、VC試薬(添加剤を含まないVC;1000mg/L、富士フイルム和光純薬社製)を添加し、pH7.3±0.1となるように調整した。以下、かかる保存液を「第1世代保存液(VC試薬)」と称する場合がある。実施例1に記載の方法によって作製したiPS細胞由来血小板製剤に、上記保存液を加え、均一な懸濁液となるように穏やかに懸濁した(血小板濃度:約0.3×109plts/mL)。各懸濁液を直ちに、又は24ウェルプレートに播種して5日間水平振盪保存(遮光下、22度、50rpm)した後に、以下の(7−2)及び(7−3)の実験に供した。
実施例2の(2−3)に記載の方法によって、上記(7−1)により得られた血小板サンプルにおけるAnnexin V(劣化マーカー)陽性率を測定し、各保存液による血小板の劣化抑制効果を調べた。
結果を図14の上段に示す(Day1は保存前のサンプルを、第1世代及び第1世代VC試薬は5日間保存後のサンプルをそれぞれ示す)。血小板(CD41+分画)のAnnexin V陽性率は、第1世代保存液を用いた場合(53.1±0.4%)よりも、第1世代VC試薬を用いた場合(38.9±0.4%)の方が低かった。これらの結果から、VCのみの添加(VB3を含まない)により、保存中のiPS由来血小板の劣化が抑制されることが明らかとなった。
実施例2の(2−4)に記載の方法によって、上記(7−1)により得られた血小板サンプルにおける無刺激時のP―Selectin(劣化マーカー)陽性率、及びATR刺激時のPAC―1/P―Selectin(反応性マーカー)陽性率を測定し、各保存液による血小板の劣化抑制効果を調べた。
図14の中段に無刺激時P―Selectin陽性率を、図14の下段にATR刺激時PAC―1/P―Selectin陽性率をそれぞれ示す。無刺激時P―Selectin陽性率は、第1世代保存液を用いた場合(28.3±0.5%)よりも、第1世代VC試薬を用いた場合(9.5±0.4%)の方が低かった。これらの結果から、VCのみの添加により、保存中のiPS由来血小板の劣化が抑制されることが明らかとなった。
また、ATR刺激PAC―1/P―Selectin陽性率は、第1世代保存液を用いた場合(33.9±2.4%)よりも、第1世代VC試薬を用いた場合(38.2±1.6%)の方が高かった。これらの結果から、VC試薬のみの添加により、保存中のiPS由来血小板の反応性が維持されることが明らかとなった。すなわち、VCの添加効果は、沢井製薬社製のVC製剤に含まれる添加剤によるものではないことが明らかになった。
(8−1)保存液及び血小板サンプルの調製
ビカネイト輸液に、以下の表6に示す添加剤を添加して、第2世代保存液を調製した。また、既知の血小板保存液(日本赤十字社、照射洗浄血小板−LR「日赤」の添付文書、2016年3月、及び、Japanese Journal of Transfusion and Cell Therapy, Vol. 59.No. 3 59(3):492―498, 2013)と同じ組成の溶液を調製した。本明細書においては、当該既知の保存液を「日赤血小板洗浄液」ともいう。いずれの保存液も1MのNaOHによりpH7.3±0.1となるように調整し、使用時まで1時間以上インキュベートした(遮光下、室温、5%CO2)。実施例1に記載の方法によって作製したiPS細胞由来血小板製剤に、上記保存液を加え、均一な懸濁液となるように穏やかに懸濁した(血小板濃度:約1.0×109plts/mL)。各懸濁液を直ちに、又は血液保存バッグに充填して5日間水平振盪保存(遮光下、22度、50rpm)した後に、以下の(8−2)及び(8−3)の実験に供した。
実施例2の(2−3)に記載の方法によって、上記(8−1)により得られた血小板サンプルにおけるAnnexin V(劣化マーカー)陽性率を測定し、各保存液による血小板の劣化抑制効果を調べた。
結果を図15上段の上段に示す(「Day1」は保存前のサンプルを、「Day5」は5日間保存後のサンプルをそれぞれ示す)。血小板(CD41+分画)のAnnexinV陽性率は、日赤血小板洗浄液を用いた場合(73.9%)よりも、第2世代保存液を用いた場合(49.3%)の方が低かった。これらの結果から、第2世代保存液により、保存中のiPS由来血小板の劣化が抑制されることが明らかとなった。
実施例2の(2−4)に記載の方法によって、上記(8−1)により得られた血小板サンプルにおける無刺激時のP―Selectin(劣化マーカー)陽性率、及びATR刺激時のPAC―1/P―Selectin(反応性マーカー)陽性率を測定し、各保存液による血小板の劣化抑制効果を調べた。
図15の中段に無刺激時P―Selectin陽性率を、図15の下段にATR刺激時PAC―1/P―Selectin陽性率をそれぞれ示す。無刺激時P―Selectin陽性率は、日赤血小板洗浄液を用いた場合(30.4%)よりも、第2世代保存液を用いた場合(16.5%)の方が低かった。これらの結果から、iPS由来血小板の保存において第2世代保存液は、日赤血小板洗浄液により優れた劣化抑制効果を奏することが明らかとなった。
また、ATR刺激PAC―1/P―Selectin陽性率は、日赤血小板洗浄液を用いた場合(9.8%)よりも、第2世代保存液を用いた場合(24.8%)の方が高かった。これらの結果から、iPS由来血小板の保存において第2世代保存液は、日赤血小板洗浄液により優れた機能維持効果を奏することが明らかとなった。
(9−1)血小板サンプルの調製
実施例1に記載の方法によって作製したiPS細胞由来血小板製剤に、第2世代保存液を加え、均一な懸濁液となるように穏やかに懸濁した(血小板濃度:約1.0×109plts/mL)。各懸濁液を直ちに、又は血液保存バッグに充填して水平振盪保存(遮光下、22度、50rpm、10日間)した後に、以下の(9−2)の実験に供した。
血小板減少症モデルNOGマウスの尾静脈内に、上記(9−1)により得られた血小板サンプルを投与した(マウス1匹あたり200μL(2×108plts))。投与10分後、注射針を用いて腹側の尾動脈に切創を作製した。切創は1個体あたり1か所とした。切創からの出血を確認した後に、切創箇所を含む尾先端部を37℃の生理食塩水に漬けて、止血までの時間を測定した。測定時間は最大600秒とした。また、対照群(Vehicle)として、第2世代保存液のみ(血小板を含まない)を用いて同様の試験を行った。
結果を図16に示す。Vehicle投与群では全てのマウスにおいて、600秒間以内での止血は認められなかった。一方、血小板投与群では、止血までの時間は平均で391秒であり、最も短い個体では130秒であった。これらの結果から、本発明の第2世代保存液により保存されたiPS細胞由来血小板が止血効果を有することが明らかとなった。
(10−1)間葉系幹細胞保存液の調製
乳酸リンゲル液(ラクテック輸液;大塚製薬工場社製)に、3%トレハロース及び5%デキストランを添加した(以下、かかる溶液を「CSP−01溶液」と称する場合がある。特開2012−115253、及びWO2014/208053参照)。上記CSP−01溶液に、VC製剤(1000mg/L、沢井製薬社製)及びニコチン酸(400mg/L、トーアエイヨー社製)を加え、間葉系幹細胞保存液を調製した。また、CSP−01溶液に、VC及びニコチン酸に代えて蒸留水(大塚蒸留液;大塚製薬工場社製)を加えたコントロール保存液を調製した。
上記(10−1)により調製した保存液を用いてヒト骨髄由来間葉系幹細胞(Lonza社製)を懸濁した(5×105細胞/mL)。懸濁液を5℃で24、48、96、及び168時静置した後に、顕微鏡を用いて全細胞数及び死細胞数を計測した。各時点での細胞生存率(%)及び生細胞回収率(%)を以下の式1及び2を用いて算出した。
細胞生存率(%)=(全細胞数−死細胞数)/全細胞数×100
生細胞回収率(%)=各時点の生存細胞数/懸濁直後(保存前)の生存細胞数×100
(11−1)iPS細胞由来巨核球の調製
実施例1により得られた培養物に含まれる血小板の濃度を、FACSにより測定した。必要量の培養物を分取してACD−A液(10v/v%)及びPEG1(終濃度2μM;Cayman Chemical Company社製)を添加し、12分間の遠心分離(1200×g、22℃、ブレーキ最小)を行った。上清を除去した後に、ペレットに第1世代又は第2世代保存液を加え、均一な懸濁液となるように穏やかに懸濁した(血小板濃度:約1.3×109plts/mL)。各懸濁液を直ちに、又は血液保存バッグに充填して5又は10日間水平振盪保存(遮光下、22度、50rpm)した後に、以下の(11−2)の実験に供した。
Annexin Vは、アポトーシス細胞における細胞膜の変化(フォスファチジルセリンの細胞膜外側への表出)を検出するプローブとしても知られている。そこで、上記(11−1)により得られた巨核球サンプルにおけるAnnexin V陰性率を測定し、各保存液による巨核球のアポトーシス抑制効果を調べた。
具体的には、上記(11−1)により得られた巨核球サンプル(巨核球及び血小板を含む培養物)をAnnexin Buffer(Beckton Dickinson社製)で500倍希釈し、3本の遠心管に分注した(それぞれ、ネガティブコントロール、ポジティブコントロール、及び無刺激サンプル)。ネガティブコントロールサンプルにはEDTAを、ポジティブコントロールサンプルにはIonomycinをそれぞれ添加した後に、全てのサンプルを抗CD41抗体(BioLegend社製)及びAnnexin V(Beckton Dickinson社製)により染色した(遮光下、室温、20分間)。染色後に、Annexin Bufferを加えて速やかにFACSで測定した。得られたFSC(前方散乱光)及びSSC(側方散乱光)の値に基づき血小板と巨核球とを区分した。そして、ネガティブコントロールにおけるiPS血小板(CD41+分画)中のAnnexin V陽性率を1.0±0.1%とし、無刺激サンプルにおける巨核球のAnnexin V陰性率を算出した。
結果を図18に示す(「Day1」は保存前のサンプルを、「Day5」は5日間保存後のサンプルを、「Day10」は10日間保存後のサンプルをそれぞれ示す)。Annexin V陰性率は、第1世代保存液を用いたサンプルでも、第2世代保存液を用いたサンプルでも、経時的に低下した。しかし、第2世代保存液を用いた場合には、第1世代保存液を用いた場合よりも、Annexin V陰性率の低下が抑制されることが明らかとなった。これらの結果から、第2世代保存液を用いたサンプルにおいては、アポトーシスを起こしていない、細胞膜が安定した生細胞がより高い割合で含まれることが示された。したがって、本実施例により、第2世代保存液がiPS細胞由来巨核球の保存にも有効であることが示された。
(12−1)T細胞保存液の調製
乳酸リンゲル液(ラクテック輸液;大塚製薬工場社製)に3%トレハロースを添加した(以下、かかる溶液を「CSP−11溶液」と称する場合がある)。上記CSP−11溶液に、VC製剤(1000mg/L、沢井製薬社製)及び/又はニコチン酸(400mg/L、トーアエイヨー社製)を加え、以下の4種類のT細胞保存液を調製した。
CSP−11
CSP−11+VC
CSP−11+ニコチン酸
CSP−11+VC+ニコチン酸
市販の凍結CD8陽性T細胞(ベリタス社製)を融解して、リンパ球培養培地(LGM3、Lonza社製)で洗浄した後に、約1時間インキュベートした(37℃、5%CO2)。必要量のCD8陽性T細胞を分取して、10分間の遠心分離(300×g、室温)を行った。上清を取り除いた後に、TLY CULTUREキット25(GCリンフォテック社製)を用いて細胞を浮遊させ、37℃、5%CO2条件下で培養して増殖させた(T細胞濃度:約1.1×106cells/5ml)。拡大培養開始から7日後に、CSP−11溶液で細胞を洗浄して、ステムフルチューブ(住友ベークライト社製)に分注し、10分間の遠心分離(300×g、室温)を行った。上清を取り除いた後に、上記(12−1)で調製した保存液を加えて懸濁した(T細胞濃度:約5×105cells/1ml)。各ステムフルチューブから20μLの細胞懸濁液を分取し、20μLトリパンブルー(gibco社製)を混合し、ワンセルカウンター(バイオメディカルサイエンス社製)を用いて生存率を測定した(1ヵ所の細胞計数部の四隅の細胞計数室のエリアの合計細胞数及び死細胞数を計測した)。また、上記細胞懸濁液を5℃で48時間保存した後に、同様に生存率を測定した。
(13−1)T細胞保存液の調製
CSP−01溶液に、VC製剤(1000mg/L、沢井製薬社製)、ニコチン酸(400mg/L、トーアエイヨー社製)、及び/又はグルコース(80mg/dL、大塚製薬工場社製)を加え、以下の4種類のT細胞保存液を調製した。
CSP−01
CSP−01+VC+ニコチン酸
CSP−01+グルコース
CSP−01+グルコース+VC+ニコチン酸
市販の凍結CD8陽性T細胞(ベリタス社製)を融解して、リンパ球培養培地(LGM3、Lonza社製)で洗浄した後に、約6時間インキュベートした(37℃、5%CO2)。必要量のCD8陽性T細胞を分取して、10分間の遠心分離(300×g、室温)を行った。上清を取り除いた後に、TLY CULTUREキット25(GCリンフォテック社製)を用いて細胞を浮遊させ、37℃、5%CO2条件下で培養して増殖させた(T細胞濃度:約1.2×106cells/5ml)。拡大培養開始から6日後に、3%トレハロース含有乳酸リンゲル液で細胞を洗浄して、ステムフルチューブ(住友ベークライト社製)に分注し、10分間の遠心分離(300×g、室温)を行った。上清を取り除いた後に、上記(12−1)で調製した保存液を加えて懸濁した(T細胞濃度:約5×105cells/1ml)。各ステムフルチューブから20μLの細胞懸濁液を分取し、20μLトリパンブルー(gibco社製)を混合し、ワンセルカウンター(バイオメディカルサイエンス社製)を用いて生存率を測定した(1ヵ所の細胞計数部の四隅の細胞計数室のエリアの合計細胞数及び死細胞数を計測した)。また、上記細胞懸濁液を5℃で24又は48時間保存した後に、同様に生存率を測定した。得られた各時点での生存率から、以下の式3を用いて生細胞回収率を算出した。
生細胞回収率(%)=(保存後の生細胞数)÷(保存前の生細胞数)×100
(14−1)水溶性ビタミン群を添加した保存液の調製
第1世代保存液(20%のACD−A液を含む)に、水溶性ビタミン群(B1、VB2、VB3、VB5、VB6、VB7、VB9、VB12、及びVC)を添加した(以下、かかる保存液を「第1世代+水溶性ビタミン」と称する場合がある)。また、第1世代保存液(20%のACD−A液を含む)に、上記水溶性ビタミン群からVB2を除いた群(B1、VB3、VB5、VB6、VB7、VB9、VB12、及びVC)を添加した(以下、かかる保存液を「第1世代+水溶性ビタミン(VB2除く)」と称する場合がある)。いずれの保存液も、1M NaOHを用いてpH7.3±0.1となるように調整した。
実施例1に記載の方法によって作製したiPS細胞由来血小板製剤に、上記保存液を加え、均一な懸濁液となるように穏やかに懸濁した(血小板濃度:約0.3×109plts/mL)。各懸濁液を直ちに、又は24ウェルプレートに播種して5日間水平振盪保存(遮光下、22度、50rpm)した後に、以下の(13−2)及び(13−3)の実験に供した。
実施例2の(2−3)に記載の方法によって、上記(14−1)により得られた血小板サンプルにおけるAnnexin V(劣化マーカー)陽性率を測定し、各保存液による血小板の劣化抑制効果を調べた。
結果を図21に示す。図中、「Day1」は保存前のサンプルを、「Day5」は5日間保存後のサンプルをそれぞれ示す。5日間保存後の血小板(CD41+分画)のAnnexin V陽性率は、第1世代保存液を用いた場合には、52.0%であったのに対し、水溶性ビタミン群を添加した保存液では43.0%に低下していた。また、Annexin V陽性率は、水溶性ビタミン群(VB2除く)を添加した保存液ではさらに低下しており、40.3%であった。これらの結果から、VC及びVB3による血小板劣化抑制効果が、VB2により阻害される可能性が示された。
図22の左側に無刺激時P―Selectin陽性率を、図22の右側にATR刺激時PAC―1/P―Selectin陽性率をそれぞれ示す。P―Selectin陽性率は、第1世代保存液を用いた場合、保存前(Day1)の27.4%から5日間保存後(Day5)の42.9%へと上昇していた。一方、5日間保存後のP―Selectin陽性率は、水溶性ビタミン群を添加した保存液を用いた場合には34.9%と低く抑えられており、水溶性ビタミン群(VB2除く)を添加した保存液を用いた場合には24.0%とさらに低く抑えられていた。
また、ATR刺激PAC―1/P―Selectin陽性率は、第1世代保存液を用いた場合、保存前(Day1)の35.6%から5日間保存後(Day5)の32.4%へと低下していた。一方、水溶性ビタミン群を添加した保存液を用いた場合には、5日間保存後でも36.8%であった。さらに、水溶性ビタミン群(VB2除く)を添加した保存液を用いた場合には、5日間保存後に43.0%と上昇することが明らかとなった。これらの結果から、VC及びVB3による血小板機能維持効果が、VB2により阻害される可能性が示された。
(15−1)間葉系幹細胞保存液の調製
実施例10の(10−1)の記載に従ってCSP−01溶液を調製した。かかるCSP−01溶液に、VC製剤(1000mg/L、沢井製薬社製)及びニコチン酸(400mg/L、トーアエイヨー社製)を加え、間葉系幹細胞保存液を調製した。また、CSP−01溶液に、VC及びニコチン酸に代えて、溶媒である蒸留水(大塚蒸留液;大塚製薬工場社製)を加えたコントロール保存液を調製した。
上記(15−1)により調製した保存液を用いてヒト骨髄由来間葉系幹細胞(Lonza社製)を懸濁した(5x105細胞/mL)。懸濁液を5℃で、1、2、4、7、14、21、28、35及び63日静置した後に、顕微鏡を用いて全細胞数及び死細胞数を計測した。各時点での細胞生存率(%)及び生細胞回収率(%)は、実施例10の(10−2)に記載の式1及び2を用いて算出した。
(16−1)間葉系幹細胞保存液の調製
CSP−01溶液又は乳酸リンゲル液(ラクテック輸液;大塚製薬工場社製)に、VC製剤(1000mg/L、沢井製薬社製)及びニコチン酸(400mg/L、トーアエイヨー社製)を加え、以下の4種の間葉系幹細胞保存液を調製した。
CSP−01
CSP−01+VC+ニコチン酸
乳酸リンゲル液
乳酸リンゲル液+VC+ニコチン酸
上記(16−1)により調製した保存液を用いてヒト脂肪由来間葉系幹細胞(Lonza社製)を懸濁した(5x105細胞/mL)。懸濁液を5℃で7、14、21及び28日静置した後に、顕微鏡を用いて全細胞数及び死細胞数を計測した。各時点での細胞生存率(%)及び生細胞回収率(%)は、実施例10の(10−2)に記載の式1及び2を用いて算出した。
(17−1)間葉系幹細胞保存液の調製
CSP−01溶液に、VC製剤(1000mg/L、沢井製薬社製)及び/又はニコチン酸(400mg/L、トーアエイヨー社製)を加え、さらに炭酸水素ナトリウム製剤(メイロン静注8.4%、大塚製薬工場社製)を加えてpHを7.0〜7.3に調整した。また、コントロール保存液として、CSP−01溶液に、炭酸水素ナトリウム製剤(メイロン静注8.4%、大塚製薬工場社製)を加えてpHを7.0〜7.3に調整した。以上のようにして、以下の4種の間葉系幹細胞保存液を調製した。
CSP−01
CSP−01+VC
CSP−01+ニコチン酸
CSP−01+VC+ニコチン酸
上記(17−1)により調製した保存液を用いてヒト脂肪由来間葉系幹細胞(Lonza社製)を懸濁した(5x105細胞/mL)。懸濁液を5℃で7、14、21及び28日静置した後に、顕微鏡を用いて全細胞数及び死細胞数を計測した。各時点での細胞生存率(%)及び生細胞回収率(%)は、実施例10の(10−2)に記載の式1及び2を用いて算出した。
(18−1)間葉系幹細胞保存液の調製
CSP−01溶液に、VC製剤(1000mg/L、沢井製薬社製)及びニコチン酸(400mg/L、トーアエイヨー社製)を加え、間葉系幹細胞保存液(CSP−01+VC+ニコチン酸)を調製した。また、コントロール保存液として、CSP−01溶液にのみを用いた。
Nishimuraら(Xenotransplantation. 2019 May;26(3):e12501.)の方法に従って、幼若ブタ骨髄由来間葉系幹細胞(np間葉系幹細胞)を作製した。かかるnp間葉系幹細胞を、上記(18−1)により調製した保存液を用いて懸濁した(5x105細胞/mL)。懸濁液を5℃で7、14、21及び28日静置した後に、顕微鏡を用いて全細胞数及び死細胞数を計測した。各時点での細胞生存率(%)及び生細胞回収率(%)は、実施例10の(10−2)に記載の式1及び2を用いて算出した。
(19−1)T細胞保存液の調製
乳酸リンゲル液(ラクテック輸液;大塚製薬工場社製)に、VC製剤(1000mg/L、沢井製薬社製)、ニコチン酸(400mg/L、トーアエイヨー社製)、及び/又はグルコース(80mg/dL、大塚製薬工場社製)を加え、以下の8種類のT細胞保存液を調製した。
LR
LR+グルコース
LR+VC
LR+ニコチン酸
LR+VC+ニコチン酸
LR+VC+グルコース
LR+ニコチン酸+グルコース
LR+VC+ニコチン酸+グルコース
市販の凍結CD8陽性T細胞(ベリタス社製)を融解して、リンパ球培養培地(LGM3、Lonza社製)で洗浄した後に、1時間インキュベートした(37℃、5%CO2)。必要量のCD8陽性T細胞を分取して、10分間の遠心分離(300×g、室温)を行った。上清を取り除いた後に、TLY CULTUREキット25(GCリンフォテック社製)を用いて細胞を浮遊させ、37℃、5%CO2条件下で培養して増殖させた(T細胞濃度:約8×105cells/5ml)。拡大培養開始から7日後に、PBS(−)で細胞を洗浄して、ステムフルチューブ(住友ベークライト社製)に分注し、10分間の遠心分離(300×g、室温)を行った。上清を取り除いた後に、上記(19−1)で調製した保存液を加えて懸濁した(T細胞濃度:約5×105cells/1ml)。上記細胞懸濁液を5℃で24時間保存した時点、及び、その後さらに25℃で6時間保存した時点(合計30時間保存後)で、顕微鏡を用いて全細胞数及び死細胞数を計測した。各時点での細胞生存率(%)及び生細胞回収率(%)は、実施例10の(10−2)に記載の式1及び2を用いて算出した。
Claims (51)
- ナイアシン若しくはその誘導体又はそれらの塩、及び抗酸化剤を含む、哺乳動物細胞の保存液。
- 抗酸化剤が、アスコルビン酸若しくはその誘導体又はそれらの塩である、請求項1に記載の保存液。
- ナイアシン若しくはその誘導体又はそれらの塩の濃度が、1〜10000mg/Lである、請求項1又は2に記載の保存液。
- ナイアシン若しくはその誘導体又はそれらの塩の濃度が、30〜3000mg/Lである、請求項1又は2に記載の保存液。
- ナイアシン若しくはその誘導体又はそれらの塩の濃度が、120〜1200mg/Lである、請求項1又は2に記載の保存液。
- アスコルビン酸若しくはその誘導体又はそれらの塩の濃度が、1〜10000mg/Lである、請求項2〜5のいずれか1項に記載の保存液。
- アスコルビン酸若しくはその誘導体又はそれらの塩の濃度が、30〜6000mg/Lである、請求項2〜5のいずれか1項に記載の保存液。
- アスコルビン酸若しくはその誘導体又はそれらの塩の濃度が、300〜3000mg/Lである、請求項2〜5のいずれか1項に記載の保存液。
- 哺乳動物細胞を0〜40℃で保存するための、請求項1〜8のいずれか1項に記載の保存液。
- ビタミンB2若しくはその誘導体又はそれらの塩を含まない、請求項1〜9のいずれか1項に記載の保存液。
- 哺乳動物細胞が、血小板又は巨核球である、請求項1〜10のいずれか1項に記載の保存液。
- 血小板が、以下の(A)及び(B)を含む方法により得られた精製血小板である、請求項11に記載の保存液。
(A)巨核球の培養物を濃縮する濃縮工程;
(B)得られた濃縮物から血小板を遠心分離する遠心分離工程; - さらにアルブミンを含む、請求項11又は12に記載の保存液。
- アルブミンの濃度が、1.25〜10%(w/v)である、請求項13に記載の保存液。
- さらに糖を含む、請求項13又は14に記載の保存液。
- 糖が、ブドウ糖である、請求項15に記載の保存液。
- 血小板又は巨核球を、5〜10日間保存するための、請求項11〜16のいずれか1項に記載の保存液。
- 哺乳動物細胞が、幹細胞又は免疫細胞である、請求項1〜10のいずれか1項に記載の保存液。
- 幹細胞が、間葉系幹細胞である、請求項18に記載の保存液。
- 免疫細胞が、T細胞である、請求項18に記載の保存液。
- ナイアシン若しくはその誘導体又はそれらの塩、及び抗酸化剤を等張液中に含む、請求項18〜20のいずれか1項に記載の保存液。
- 等張液が、乳酸リンゲル液である、請求項21に記載の保存液。
- さらにトレハロースを含む、請求項21又は22に記載の保存液。
- さらにデキストランを含む、請求項21〜23のいずれか1項に記載の保存液。
- 幹細胞を、1〜63日間保存するための、請求項18〜24のいずれか1項に記載の保存液。
- ナイアシン若しくはその誘導体又はそれらの塩、及び抗酸化剤を含む、請求項1〜25のいずれか1項に記載の保存液を調製するための粉末製剤。
- ナイアシン若しくはその誘導体又はそれらの塩、及び抗酸化剤を含む液中で、哺乳動物細胞を保存する工程を含む、哺乳動物細胞の保存方法。
- 抗酸化剤が、アスコルビン酸若しくはその誘導体又はそれらの塩である、請求項27に記載の方法。
- ナイアシン若しくはその誘導体又はそれらの塩の濃度が、1〜10000mg/Lである、請求項27又は28に記載の方法。
- ナイアシン若しくはその誘導体又はそれらの塩の濃度が、30〜3000mg/Lである、請求項27又は28に記載の方法。
- ナイアシン若しくはその誘導体又はそれらの塩の濃度が、120〜1200mg/Lである、請求項27又は28に記載の方法。
- アスコルビン酸若しくはその誘導体又はそれらの塩の濃度が、1〜10000mg/Lである、請求項28〜31のいずれか1項に記載の方法。
- アスコルビン酸若しくはその誘導体又はそれらの塩の濃度が、30〜6000mg/Lである、請求項28〜31のいずれか1項に記載の方法。
- アスコルビン酸若しくはその誘導体又はそれらの塩の濃度が、300〜3000mg/Lである、請求項28〜31のいずれか1項に記載の方法。
- 哺乳動物細胞を0〜40℃で保存することを特徴とする、請求項27〜34のいずれか1項に記載の方法。
- 液が、ビタミンB2若しくはその誘導体又はそれらの塩を含まないことを特徴とする、請求項27〜35のいずれか1項に記載の方法。
- 哺乳動物細胞が、血小板又は巨核球である、請求項27〜36のいずれか1項に記載の方法。
- 血小板が、以下の(A)及び(B)を含む方法により得られた精製血小板である、請求項37に記載の方法。
(A)巨核球の培養物を濃縮する濃縮工程;
(B)得られた濃縮物から血小板を遠心分離する遠心分離工程; - 液中にさらにアルブミンを含む、請求項37又は38に記載の方法。
- アルブミンの濃度が、1.25〜10%(w/v)である、請求項39に記載の方法。
- 液中にさらに糖を含む、請求項39又は40に記載の方法。
- 糖が、ブドウ糖である、請求項41に記載の方法。
- 血小板又は巨核球を、5〜10日間保存することを特徴とする、請求項37〜42のいずれか1項に記載の方法。
- 哺乳動物細胞が、幹細胞又は免疫細胞である、請求項27〜36のいずれか1項に記載の方法。
- 幹細胞が、間葉系幹細胞である、請求項44に記載の方法。
- 免疫細胞が、T細胞である、請求項44に記載の方法。
- 液が、等張液である、請求項44〜46のいずれか1項に記載の方法。
- 等張液が、乳酸リンゲル液である、請求項47に記載の方法。
- 液中にさらにトレハロースを含む、請求項47又は48に記載の方法。
- 液中にさらにデキストランを含む、請求項47〜49のいずれか1項に記載の方法。
- 幹細胞を、1〜63日間保存することを特徴とする、請求項44〜50のいずれか1項に記載の方法。
Priority Applications (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2021158368A JP2021192640A (ja) | 2019-03-15 | 2021-09-28 | 哺乳動物細胞の保存液 |
JP2022036343A JP2022071183A (ja) | 2019-03-15 | 2022-03-09 | 哺乳動物細胞の保存液 |
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2019047852 | 2019-03-15 | ||
JP2019047852 | 2019-03-15 | ||
PCT/JP2020/011002 WO2020189538A1 (ja) | 2019-03-15 | 2020-03-13 | 哺乳動物細胞の保存液 |
Related Child Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2021158368A Division JP2021192640A (ja) | 2019-03-15 | 2021-09-28 | 哺乳動物細胞の保存液 |
JP2022036343A Division JP2022071183A (ja) | 2019-03-15 | 2022-03-09 | 哺乳動物細胞の保存液 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPWO2020189538A1 true JPWO2020189538A1 (ja) | 2021-09-13 |
JP7169503B2 JP7169503B2 (ja) | 2022-11-11 |
Family
ID=72519323
Family Applications (3)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2021507298A Active JP7169503B2 (ja) | 2019-03-15 | 2020-03-13 | 哺乳動物細胞の保存液 |
JP2021158368A Pending JP2021192640A (ja) | 2019-03-15 | 2021-09-28 | 哺乳動物細胞の保存液 |
JP2022036343A Pending JP2022071183A (ja) | 2019-03-15 | 2022-03-09 | 哺乳動物細胞の保存液 |
Family Applications After (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2021158368A Pending JP2021192640A (ja) | 2019-03-15 | 2021-09-28 | 哺乳動物細胞の保存液 |
JP2022036343A Pending JP2022071183A (ja) | 2019-03-15 | 2022-03-09 | 哺乳動物細胞の保存液 |
Country Status (10)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20220145235A1 (ja) |
EP (1) | EP3940061A4 (ja) |
JP (3) | JP7169503B2 (ja) |
KR (1) | KR20210126086A (ja) |
CN (1) | CN113557295A (ja) |
AU (2) | AU2020241910B2 (ja) |
CA (1) | CA3129733A1 (ja) |
SG (1) | SG11202109825SA (ja) |
TW (1) | TW202102664A (ja) |
WO (1) | WO2020189538A1 (ja) |
Families Citing this family (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20220192178A1 (en) * | 2019-04-26 | 2022-06-23 | Otsuka Pharmaceutical Factory, Inc. | Trehalose-containing liquid for mammalian cell preservation |
CN112998009A (zh) * | 2021-03-31 | 2021-06-22 | 北京益华生物科技有限公司 | Nk细胞冻存液及其制备方法和应用 |
CN115039759B (zh) * | 2022-03-07 | 2023-11-03 | 细胞生态海河实验室 | 一种红细胞保存液及其应用 |
CN115281180A (zh) * | 2022-07-04 | 2022-11-04 | 四川大学华西医院 | 一种mRNA-血小板复合物冻存液及其制备方法 |
CN115363016B (zh) * | 2022-08-09 | 2023-07-18 | 广州明迅生物科技有限责任公司 | 细胞储存液及其应用 |
CN117736985A (zh) * | 2023-12-20 | 2024-03-22 | 深圳泽医细胞治疗集团有限公司 | 适用于干细胞样记忆t细胞培养的血液保存液及应用 |
Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2014208053A1 (ja) * | 2013-06-28 | 2014-12-31 | 株式会社大塚製薬工場 | トレハロース及びデキストラン含有哺乳動物細胞移植用溶液 |
US20160205923A1 (en) * | 2015-01-21 | 2016-07-21 | Hong Seung Kim | Activated platelet preservation composition, method for preserving activated platelet and preserved activated platelet using the same |
JP2016538859A (ja) * | 2013-11-19 | 2016-12-15 | プラトードPlatod | 血小板産生流体装置 |
WO2017065280A1 (ja) * | 2015-10-14 | 2017-04-20 | 株式会社メガカリオン | 精製血小板の製造方法 |
WO2018097226A1 (ja) * | 2016-11-25 | 2018-05-31 | テルモ株式会社 | 生細胞または生細胞を含む組成物の保存液 |
JP2018515099A (ja) * | 2015-05-12 | 2018-06-14 | プラトードPlatod | 改善された血小板産生のための薬理学的特徴およびマイクロ流体特徴の組み合わせ |
JP2018516955A (ja) * | 2015-06-09 | 2018-06-28 | プレジデント・アンド・フェロウズ・オブ・ハーバード・カレッジ | 血小板の長期貯蔵および保存の方法 |
Family Cites Families (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5104787A (en) * | 1990-03-05 | 1992-04-14 | Lindstrom Richard L | Method for apparatus for a defined serumfree medical solution useful for corneal preservation |
JPH057619A (ja) * | 1991-06-24 | 1993-01-19 | L Lyndstrom Richard | 血清不含医療用規定溶液およびその溶液を用いた角膜の保存方法 |
AU2003250529A1 (en) * | 2003-06-20 | 2005-01-04 | Terumo Penpol Limited | A FORMULATION AND A PROCESS FOR REDUCING THE DETERIORATION OF RBCs OF BLOOD DURING STORAGE WITH PARTICULAR REFERENCE TO DECREASE IN THE LEVEL OF 2,3 DIPHOSPHOGLYCERATE |
US7892724B2 (en) * | 2007-07-12 | 2011-02-22 | Warsaw Orthopedic, Inc | Method for enhancing the viability of mammalian cells, tissues and organs using a solution comprising two low molecular weight PEGs |
AU2011280985C1 (en) * | 2010-07-22 | 2016-04-21 | Reven Pharmaceuticals, Inc. | Methods of treating or ameliorating diseases and enhancing performance comprising the use of a magnetic dipole stabilized solution |
JP5341059B2 (ja) | 2010-11-09 | 2013-11-13 | 株式会社大塚製薬工場 | 幹細胞懸濁液 |
CN103404509B (zh) * | 2013-08-07 | 2015-04-08 | 彭乐 | 一种细胞保存液、其制备方法和应用 |
ES2536605B1 (es) * | 2013-10-24 | 2016-03-02 | Fundación Pública Andaluza Progreso Y Salud | Método de obtención de megacariocitos y plaquetas |
US20180362922A1 (en) | 2015-10-27 | 2018-12-20 | Kaneka Corporation | Method for producing cell population comprising mesenchymal stem cells, mesenchymal stem cells, cell population, and pharmaceutical composition |
RU2741871C2 (ru) | 2015-11-02 | 2021-01-29 | Мегакарион Корпорейшн | Способ получения тромбоцитов с помощью устройства для возвратно-поступательного перемешивания |
CA3046169C (en) | 2016-12-14 | 2022-08-16 | Otsuka Pharmaceutical Factory, Inc. | Mammalian cell cryopreservation liquid |
-
2020
- 2020-03-13 SG SG11202109825S patent/SG11202109825SA/en unknown
- 2020-03-13 CA CA3129733A patent/CA3129733A1/en active Pending
- 2020-03-13 TW TW109108466A patent/TW202102664A/zh unknown
- 2020-03-13 JP JP2021507298A patent/JP7169503B2/ja active Active
- 2020-03-13 WO PCT/JP2020/011002 patent/WO2020189538A1/ja active Application Filing
- 2020-03-13 CN CN202080020194.5A patent/CN113557295A/zh active Pending
- 2020-03-13 AU AU2020241910A patent/AU2020241910B2/en active Active
- 2020-03-13 KR KR1020217029129A patent/KR20210126086A/ko not_active Application Discontinuation
- 2020-03-13 EP EP20773511.9A patent/EP3940061A4/en active Pending
- 2020-03-13 US US17/438,025 patent/US20220145235A1/en active Pending
-
2021
- 2021-09-28 JP JP2021158368A patent/JP2021192640A/ja active Pending
-
2022
- 2022-03-09 JP JP2022036343A patent/JP2022071183A/ja active Pending
-
2024
- 2024-02-19 AU AU2024201062A patent/AU2024201062A1/en active Pending
Patent Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2014208053A1 (ja) * | 2013-06-28 | 2014-12-31 | 株式会社大塚製薬工場 | トレハロース及びデキストラン含有哺乳動物細胞移植用溶液 |
JP2016538859A (ja) * | 2013-11-19 | 2016-12-15 | プラトードPlatod | 血小板産生流体装置 |
US20160205923A1 (en) * | 2015-01-21 | 2016-07-21 | Hong Seung Kim | Activated platelet preservation composition, method for preserving activated platelet and preserved activated platelet using the same |
JP2018515099A (ja) * | 2015-05-12 | 2018-06-14 | プラトードPlatod | 改善された血小板産生のための薬理学的特徴およびマイクロ流体特徴の組み合わせ |
JP2018516955A (ja) * | 2015-06-09 | 2018-06-28 | プレジデント・アンド・フェロウズ・オブ・ハーバード・カレッジ | 血小板の長期貯蔵および保存の方法 |
WO2017065280A1 (ja) * | 2015-10-14 | 2017-04-20 | 株式会社メガカリオン | 精製血小板の製造方法 |
WO2018097226A1 (ja) * | 2016-11-25 | 2018-05-31 | テルモ株式会社 | 生細胞または生細胞を含む組成物の保存液 |
Non-Patent Citations (4)
Title |
---|
"岡田英俊 ほか, 血小板の人工保存液におけるアルブミンの存在意義について", 血液事業, 1988, 増刊号, 第12回日本血液事業学会総会 抄録集, P.109, 一般演題 149, JPN6018050378, 1988, ISSN: 0004764947 * |
"比嘉幸恵他, 水溶性ビタミン剤添加による保存PCの血小板機能への影響 ビタミンCの影響について", 日本輸血学会雑誌, 2002, VOL.48, NO.1, P.48, NO.16, JPN6020018545, ISSN: 0004764946 * |
BRITISH JOURNAL OF HAEMATOLOGY, 2006, VOL.135, PP.554-566, JPN6020018546, ISSN: 0004764948 * |
EXPERIMENTAL CELL RESEARCH, 2018, VOL.370, PP.409-416, JPN6020018547, ISSN: 0004764949 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP3940061A4 (en) | 2023-01-04 |
WO2020189538A1 (ja) | 2020-09-24 |
AU2020241910B2 (en) | 2023-12-21 |
CA3129733A1 (en) | 2020-09-24 |
US20220145235A1 (en) | 2022-05-12 |
SG11202109825SA (en) | 2021-10-28 |
AU2024201062A1 (en) | 2024-03-07 |
JP2022071183A (ja) | 2022-05-13 |
JP7169503B2 (ja) | 2022-11-11 |
CN113557295A (zh) | 2021-10-26 |
AU2020241910A1 (en) | 2021-10-07 |
EP3940061A1 (en) | 2022-01-19 |
KR20210126086A (ko) | 2021-10-19 |
TW202102664A (zh) | 2021-01-16 |
JP2021192640A (ja) | 2021-12-23 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
WO2020189538A1 (ja) | 哺乳動物細胞の保存液 | |
JP5998265B2 (ja) | トレハロース及びデキストラン含有哺乳動物細胞移植用溶液 | |
US10273456B2 (en) | Automated methods and systems for washing platelet concentrates | |
Douay et al. | Ex vivo production of human red blood cells from hematopoietic stem cells: what is the future in transfusion? | |
US10851343B2 (en) | Method for producing purified platelets | |
AU2009203893B2 (en) | Method of producing a population of cells | |
Gupta et al. | Hematopoiesis and stem cell renewal in long-term bone marrow cultures containing catalase | |
JP2023100831A (ja) | 精製血小板の製造方法、血小板製剤の製造方法、血液製剤の製造方法、血小板保存液、血小板保存剤および血小板の保存方法 | |
CN110882276B (zh) | 细胞治疗组合物及治疗血管病变的方法 | |
Glück et al. | Characterization and transfusion of in vitro cultivated hematopoietic progenitor cells | |
WO2021193606A1 (ja) | アカルボース及びデキストランを含む哺乳動物細胞保存用液 | |
TW202132557A (zh) | 包含海藻醣之血球系列細胞保存用液 | |
McFarland et al. | ASH 2010 meeting report—Top 10 clinically oriented abstracts in transfusion medicine |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20210301 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20210305 |
|
A871 | Explanation of circumstances concerning accelerated examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A871 Effective date: 20210305 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20210301 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20210607 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20210806 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20210928 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20211115 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20220111 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20220309 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20220509 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20220804 |
|
C60 | Trial request (containing other claim documents, opposition documents) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C60 Effective date: 20220804 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20220810 |
|
C21 | Notice of transfer of a case for reconsideration by examiners before appeal proceedings |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C21 Effective date: 20220815 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20220921 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20221006 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7169503 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |