JPH057619A - 血清不含医療用規定溶液およびその溶液を用いた角膜の保存方法 - Google Patents
血清不含医療用規定溶液およびその溶液を用いた角膜の保存方法Info
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Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
- A01N1/02—Preservation of living parts
- A01N1/0205—Chemical aspects
- A01N1/021—Preservation or perfusion media, liquids, solids or gases used in the preservation of cells, tissue, organs or bodily fluids
- A01N1/0215—Disinfecting agents, e.g. antimicrobials for preserving living parts
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Abstract
(57)【要約】
【目的】角膜の移植に際し、提供者の角膜を移植前の保
存中、視覚組織、特に角膜組織を強化する物質または方
法を提供することを目的とし、また、低温保存中、正常
な生理代謝と角膜の脱腫脹を維持することによって角膜
組織の生存力を強化し、さらには、眼組織、特に角膜組
織が新鮮な組織の特徴を維持できる期間を延長すること
を目的とする。 【構成】水性栄養素および電解液、グリコサミノグリカ
ン、脱腫脹剤、エネルギ源、緩衝剤、抗酸化剤、膜安定
剤、抗生物質および／または抗真菌剤、ＡＴＰ前駆物質
並びに細胞栄養補助剤からなることを特徴とする血清不
含医療用規定溶液と、角膜の移植に際して、該血清不含
医療用規定溶液を用いた角膜の保存方法。
存中、視覚組織、特に角膜組織を強化する物質または方
法を提供することを目的とし、また、低温保存中、正常
な生理代謝と角膜の脱腫脹を維持することによって角膜
組織の生存力を強化し、さらには、眼組織、特に角膜組
織が新鮮な組織の特徴を維持できる期間を延長すること
を目的とする。 【構成】水性栄養素および電解液、グリコサミノグリカ
ン、脱腫脹剤、エネルギ源、緩衝剤、抗酸化剤、膜安定
剤、抗生物質および／または抗真菌剤、ＡＴＰ前駆物質
並びに細胞栄養補助剤からなることを特徴とする血清不
含医療用規定溶液と、角膜の移植に際して、該血清不含
医療用規定溶液を用いた角膜の保存方法。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、医療用規定栄養水溶液
中での眼組織の保存、一層詳細には、提供者の角膜組織
の切除から移植までの間のヒト角膜組織の保存および劣
化の防止に関する。
中での眼組織の保存、一層詳細には、提供者の角膜組織
の切除から移植までの間のヒト角膜組織の保存および劣
化の防止に関する。
【０００２】
【従来の技術】角膜移植は、角膜の病気に冒された多く
の人の視覚回復に有効である。この方法は広く受け入れ
られているが、例外なくドナー組織の有効性不適合によ
って著しく妨げられている。この問題は保存溶液の緊急
開発を促し、ＭＫTM−保存媒体および硫酸コンドロイチ
ン含有媒体の開発がなされ、ドナー組織の品質の有効性
に良好な影響を与えた。
の人の視覚回復に有効である。この方法は広く受け入れ
られているが、例外なくドナー組織の有効性不適合によ
って著しく妨げられている。この問題は保存溶液の緊急
開発を促し、ＭＫTM−保存媒体および硫酸コンドロイチ
ン含有媒体の開発がなされ、ドナー組織の品質の有効性
に良好な影響を与えた。
【０００３】この分野では、提供された角膜の保存時間
を延長し、移植の成功の大きな要因となる生存内皮を保
持するという観点のもとに研究が続行された。今日の技
術では、通常の室温では、２〜３日以上は組織を適性に
保存できないが、４℃では１４日未満の角膜保存が報告
されている。角膜基質の腫張が増加することによって示
されるように、９６時間以上の保存は上皮破壊および角
膜の透明度の喪失が起こる。この基質浮腫は角膜内皮
（角膜基質を裏打ちする特別な細胞層）の障害物ポンプ
機能の維持が低下するためである。
を延長し、移植の成功の大きな要因となる生存内皮を保
持するという観点のもとに研究が続行された。今日の技
術では、通常の室温では、２〜３日以上は組織を適性に
保存できないが、４℃では１４日未満の角膜保存が報告
されている。角膜基質の腫張が増加することによって示
されるように、９６時間以上の保存は上皮破壊および角
膜の透明度の喪失が起こる。この基質浮腫は角膜内皮
（角膜基質を裏打ちする特別な細胞層）の障害物ポンプ
機能の維持が低下するためである。
【０００４】角膜保存後の浮腫と維持された角膜の脱腫
脹の機能的状態は臨床的に非常に重要であり、そして外
科手術の結果の成否に直接影響を与える。角膜の透明度
を維持するには、相対的に脱水状態を維持するのが角膜
の有効性にとって重要である。角膜の脱腫脹は基本的に
内皮細胞によって行われるエネルギ依存現象である。角
膜を生存状態にしておくには、高レベルのＡＴＰによっ
て維持されたエネルギ依存機能を保持するために種々の
酵素反応が行わなければならない。
脹の機能的状態は臨床的に非常に重要であり、そして外
科手術の結果の成否に直接影響を与える。角膜の透明度
を維持するには、相対的に脱水状態を維持するのが角膜
の有効性にとって重要である。角膜の脱腫脹は基本的に
内皮細胞によって行われるエネルギ依存現象である。角
膜を生存状態にしておくには、高レベルのＡＴＰによっ
て維持されたエネルギ依存機能を保持するために種々の
酵素反応が行わなければならない。
【０００５】角膜の４℃保存法における低温は、角膜の
代謝速度を遅くするが、保存用媒体は角膜の基本的要求
を満たすものでなければならない。従って、角膜保存媒
体は、均衡のとれた塩、アミノ酸、エネルギ源、抗酸化
剤、緩衝剤、膜安定剤、グリコサミノグリカン、脱腫脹
剤および抗生物質の複雑な混合物となる。温度を低下さ
せることは膜脂質、蛋白質および水の構造を変化させ
る。なお、それぞれのものは、能動拡散、担体−基体相
互作用およびカップリング関係の容易性を妨げることに
よって能動輸送機構を変えることができる。このように
形態学的および生化学的変化と膜機能の障害は、低代謝
速度と非常に大きな因果関係があると考えられる。従っ
て、イオンおよびアミノ酸組成、炭酸水素塩平衡、利用
可能なエネルギ源、溶解酸素レベル、浸透圧モル濃度お
よびｐＨ等の生理学的パラメータのしっかりした評価を
各保存媒体についてなされるべきである。拡張４℃保存
に関するパラメータは、保存中に受ける細胞劣化の回復
力について定義されるであろう。
代謝速度を遅くするが、保存用媒体は角膜の基本的要求
を満たすものでなければならない。従って、角膜保存媒
体は、均衡のとれた塩、アミノ酸、エネルギ源、抗酸化
剤、緩衝剤、膜安定剤、グリコサミノグリカン、脱腫脹
剤および抗生物質の複雑な混合物となる。温度を低下さ
せることは膜脂質、蛋白質および水の構造を変化させ
る。なお、それぞれのものは、能動拡散、担体−基体相
互作用およびカップリング関係の容易性を妨げることに
よって能動輸送機構を変えることができる。このように
形態学的および生化学的変化と膜機能の障害は、低代謝
速度と非常に大きな因果関係があると考えられる。従っ
て、イオンおよびアミノ酸組成、炭酸水素塩平衡、利用
可能なエネルギ源、溶解酸素レベル、浸透圧モル濃度お
よびｐＨ等の生理学的パラメータのしっかりした評価を
各保存媒体についてなされるべきである。拡張４℃保存
に関するパラメータは、保存中に受ける細胞劣化の回復
力について定義されるであろう。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】ところで、成人角膜内
皮の再生力は限度があり、有糸分裂像はｉｎ ｖｉｖｏ
では滅多に観察されない。ｉｎ ｖｉｖｏでのヒト角膜
内皮は、通常、細胞移動によって損傷部位へ移動して外
傷に対応する。しかし、ｉｎ ｖｉｖｏにおける内皮細
胞有糸分裂は、ウナギ、ネコおよび霊長類で示されてい
る。組織培養では、有糸分裂はウナギおよびヒト角膜内
皮で観察されている。Ｉｎ ｖｉｔｒｏにおける角膜の
慣例損傷および機械損傷後のオートラジオブラフィーチ
ミジン摂取に関する研究は単層内皮での有糸分裂像の存
在を証明している。外科手術による外周および疾患は内
皮細胞の損失を促進し、さらに角膜を傷つける。このよ
うに角膜内皮の長期保存および強化は眼組織のアイバン
クでの保存の非常に重要な点である。
皮の再生力は限度があり、有糸分裂像はｉｎ ｖｉｖｏ
では滅多に観察されない。ｉｎ ｖｉｖｏでのヒト角膜
内皮は、通常、細胞移動によって損傷部位へ移動して外
傷に対応する。しかし、ｉｎ ｖｉｖｏにおける内皮細
胞有糸分裂は、ウナギ、ネコおよび霊長類で示されてい
る。組織培養では、有糸分裂はウナギおよびヒト角膜内
皮で観察されている。Ｉｎ ｖｉｔｒｏにおける角膜の
慣例損傷および機械損傷後のオートラジオブラフィーチ
ミジン摂取に関する研究は単層内皮での有糸分裂像の存
在を証明している。外科手術による外周および疾患は内
皮細胞の損失を促進し、さらに角膜を傷つける。このよ
うに角膜内皮の長期保存および強化は眼組織のアイバン
クでの保存の非常に重要な点である。
【０００７】角膜組織の保存および取り扱いに係る組織
概論は、Corneal Surgery 、１−４章、１−１２８頁
［医学博士 フェデリック エス．ブライトビル（Fede
rick S. Brightbill, M.D.）編集、シー. ブイ. モスビ
ー社（C.V. Mosby Company）、ミズーリ州セントルイス
市、１９８６年］に記載されている。種々の保存媒体お
よび方法が提案され、そして最近の研究は、ドナーから
組織を摘出し移植するまでの間ドナー組織の品質を維持
し実際に強化し、角膜組織の保存期間を延長する方法で
続けられている。
概論は、Corneal Surgery 、１−４章、１−１２８頁
［医学博士 フェデリック エス．ブライトビル（Fede
rick S. Brightbill, M.D.）編集、シー. ブイ. モスビ
ー社（C.V. Mosby Company）、ミズーリ州セントルイス
市、１９８６年］に記載されている。種々の保存媒体お
よび方法が提案され、そして最近の研究は、ドナーから
組織を摘出し移植するまでの間ドナー組織の品質を維持
し実際に強化し、角膜組織の保存期間を延長する方法で
続けられている。
【０００８】従って、本発明は移植前の保存中、視覚組
織、特に角膜組織を劣化を防ぐ物質または方法を提供す
ることを目的とする。本発明は一面において低温保存
中、正常な生理代謝と角膜の脱腫脹を維持することによ
って角膜組織の生存力を強化する。本発明の別の面で
は、眼組織、特に角膜組織が新鮮な組織の特徴を維持で
きる期間を延長する。
織、特に角膜組織を劣化を防ぐ物質または方法を提供す
ることを目的とする。本発明は一面において低温保存
中、正常な生理代謝と角膜の脱腫脹を維持することによ
って角膜組織の生存力を強化する。本発明の別の面で
は、眼組織、特に角膜組織が新鮮な組織の特徴を維持で
きる期間を延長する。
【０００９】
【課題を解決するための手段】前記の目的を達成するた
めに、本発明は、水性栄養素および電解液、グリコサミ
ノグリカン、脱腫脹剤、エネルギ源、緩衝剤、抗酸化
剤、膜安定剤、抗生物質および／または抗真菌剤、ＡＴ
Ｐ前駆物質並びに細胞栄養補助剤からなることを特徴と
する。
めに、本発明は、水性栄養素および電解液、グリコサミ
ノグリカン、脱腫脹剤、エネルギ源、緩衝剤、抗酸化
剤、膜安定剤、抗生物質および／または抗真菌剤、ＡＴ
Ｐ前駆物質並びに細胞栄養補助剤からなることを特徴と
する。
【００１０】また、本発明は、
ａ． イーグル最少必須培地（ＭＥＭ）、ＴＣ１９９培
地、およびイーグル最少必須培地とＴＣ１９９培地の混
合培地からなる群から選ばれる水性栄養素および電解液
と、 ｂ． 硫酸コンドロイチン、硫酸デルマタン、硫酸デル
マチン、硫酸ヘパリン、硫酸ヘパラン、硫酸ケラチン、
硫酸ケラタン、およびヒアルロン酸からなる群から選ば
れる０．０１ｍｇ／ｍｌから１００ｍｇ／ｍｌのグリコ
サミノグリカンと、 ｃ． デキストラン、硫酸デキストラン、ポリビニルピ
ロリドン、ポリエチレングリコール、酢酸ポリビニル、
ヒドロキシプロピルメチルセルロース、およびカルボキ
シプロピルメチルセルロースからなる群から選ばれる
０．０１ｍｇ／ｍｌから１００ｍｇ／ｍｌの脱腫脹剤
と、 ｄ． グルコース、ピルベート、シュークロース、フル
クトース、およびデキストロースからなる群から選ばれ
る０．０５ｍＭから１０ｍＭのエネルギ源と、 ｅ． 炭酸水素塩緩衝液、およびＨＥＰＥＳ緩衝液から
なる群から選ばれる０．１ｍＭから１００ｍＭの緩衝剤
と、 ｆ． アスコルビン酸、２−メルカプトエタノール、グ
ルタチオン、およびα−トコフェロールからなる群から
選ばれる０．００１ｍＭから１０ｍＭの抗酸化剤と、 ｇ． ビタミンＡ、ビタミンＢ、レチン酸、エタノール
アミン、ホスホエタノールアミン、セレン、およびトラ
ンスフェリンからなる群から選ばれる０．０１ｍｇ／ｍ
ｌから５００ｍｇ／ｍｌの膜安定剤と、 ｈ． アンホテリシン−Ｂ、硫酸ゲンタマイシン、硫酸
カナマイシン、硫酸ネオマイシン、ナイスタチン、ペニ
シリン、トブラマイシン、およびストレプトマイシンか
らなる群から選ばれる０．１μｇ／ｍｌから１ｍｇ／ｍ
ｌの抗生物質および／または抗真菌剤と、 ｉ． アデノシン、イノシン、およびアデニンからなる
群から選ばれる０．００１ｍＭから１０ｍＭのＡＴＰ前
駆物質と、 ｊ． コレステロール、Ｌ−ヒドロキシプロリン、ｄ−
ビオチン、カルシフェロール、ナイアシン、ｐ−アミノ
安息香酸、塩酸ピリドキシン、ビタミンＢ12、Ｆe(ＮＯ
3)3 、および非必須アミノ酸からなる群から選ばれる
０．００１ｍＭから１０ｍＭの細胞栄養補助剤と、 からなることを特徴とする。
地、およびイーグル最少必須培地とＴＣ１９９培地の混
合培地からなる群から選ばれる水性栄養素および電解液
と、 ｂ． 硫酸コンドロイチン、硫酸デルマタン、硫酸デル
マチン、硫酸ヘパリン、硫酸ヘパラン、硫酸ケラチン、
硫酸ケラタン、およびヒアルロン酸からなる群から選ば
れる０．０１ｍｇ／ｍｌから１００ｍｇ／ｍｌのグリコ
サミノグリカンと、 ｃ． デキストラン、硫酸デキストラン、ポリビニルピ
ロリドン、ポリエチレングリコール、酢酸ポリビニル、
ヒドロキシプロピルメチルセルロース、およびカルボキ
シプロピルメチルセルロースからなる群から選ばれる
０．０１ｍｇ／ｍｌから１００ｍｇ／ｍｌの脱腫脹剤
と、 ｄ． グルコース、ピルベート、シュークロース、フル
クトース、およびデキストロースからなる群から選ばれ
る０．０５ｍＭから１０ｍＭのエネルギ源と、 ｅ． 炭酸水素塩緩衝液、およびＨＥＰＥＳ緩衝液から
なる群から選ばれる０．１ｍＭから１００ｍＭの緩衝剤
と、 ｆ． アスコルビン酸、２−メルカプトエタノール、グ
ルタチオン、およびα−トコフェロールからなる群から
選ばれる０．００１ｍＭから１０ｍＭの抗酸化剤と、 ｇ． ビタミンＡ、ビタミンＢ、レチン酸、エタノール
アミン、ホスホエタノールアミン、セレン、およびトラ
ンスフェリンからなる群から選ばれる０．０１ｍｇ／ｍ
ｌから５００ｍｇ／ｍｌの膜安定剤と、 ｈ． アンホテリシン−Ｂ、硫酸ゲンタマイシン、硫酸
カナマイシン、硫酸ネオマイシン、ナイスタチン、ペニ
シリン、トブラマイシン、およびストレプトマイシンか
らなる群から選ばれる０．１μｇ／ｍｌから１ｍｇ／ｍ
ｌの抗生物質および／または抗真菌剤と、 ｉ． アデノシン、イノシン、およびアデニンからなる
群から選ばれる０．００１ｍＭから１０ｍＭのＡＴＰ前
駆物質と、 ｊ． コレステロール、Ｌ−ヒドロキシプロリン、ｄ−
ビオチン、カルシフェロール、ナイアシン、ｐ−アミノ
安息香酸、塩酸ピリドキシン、ビタミンＢ12、Ｆe(ＮＯ
3)3 、および非必須アミノ酸からなる群から選ばれる
０．００１ｍＭから１０ｍＭの細胞栄養補助剤と、 からなることを特徴とする。
【００１１】また、本発明は、水性栄養素および電解
液、グリコサミノグリカン、脱腫脹剤、エネルギ源、緩
衝剤、抗酸化剤、膜安定剤、抗生物質および／または抗
真菌剤、ＡＴＰ前駆物質並びに細胞栄養補助剤からなる
生理的ｐＨ、低温（２℃から１５℃）でヒト角膜組織を
含む眼組織の保存効果を維持あるいは強化する成分を含
むことを特徴とする。
液、グリコサミノグリカン、脱腫脹剤、エネルギ源、緩
衝剤、抗酸化剤、膜安定剤、抗生物質および／または抗
真菌剤、ＡＴＰ前駆物質並びに細胞栄養補助剤からなる
生理的ｐＨ、低温（２℃から１５℃）でヒト角膜組織を
含む眼組織の保存効果を維持あるいは強化する成分を含
むことを特徴とする。
【００１２】また、本発明は、
ａ． イーグル最少必須培地（ＭＥＭ）、ＴＣ１９９培
地およびイーグル最少必須培地とＴＣ１９９培地の混合
培地からなる群から選ばれる水性栄養素、および電解液
と、 ｂ． 硫酸コンドロイチン、硫酸デルマタン、硫酸デル
マチン、硫酸ヘパリン、硫酸ヘパラン、硫酸ケラチン、
硫酸ケラタン、およびヒアルロン酸からなる群から選ば
れる０．０１ｍｇ／ｍｌから１００ｍｇ／ｍｌのグリコ
サミノグリカンと、 ｃ． デキストラン、硫酸デキストラン、ポリビニルピ
ロリドン、ポリエチレングリコール、酢酸ポリビニル、
ヒドロキシプロピルメチルセルロース、およびカルボキ
シプロピルメチルセルロースからなる群から選ばれる
０．０１ｍｇ／ｍｌから１００ｍｇ／ｍｌの脱腫脹剤
と、 ｄ． グルコース、ピルベート、シュークロース、フル
クトース、およびデキストロースからなる群から選ばれ
る０．０５ｍＭから１０ｍＭのエネルギ源と、 ｅ． 炭酸水素塩緩衝液、およびＨＥＰＥＳ緩衝液から
なる群から選ばれる０．１ｍＭから１００ｍＭの緩衝剤
と、 ｆ． アスコルビン酸、２−メルカプトエタノール、グ
ルタチオン、およびα−トコフェロールからなる群から
選ばれる０．００１ｍＭから１０ｍＭの抗酸化剤と、 ｇ． ビタミンＡ、ビタミンＢ、レチン酸、エタノール
アミン、ホスホエタノールアミン、セレン、およびトラ
ンスフェリンからなる群から選ばれる０．０１ｍｇ／ｍ
ｌから５００ｍｇ／ｍｌの膜安定剤と、 ｈ． アンホテリシン−Ｂ、硫酸ゲンタマイシン、硫酸
カナマイシン、硫酸ネオマイシン、ナイスタチン、ペニ
シリン、トブラマイシン、およびストレプトマイシンか
らなる群から選ばれる０．１μｇ／ｍｌから１ｍｇ／ｍ
ｌの抗生物質および／または抗真菌剤と、 ｉ． アデノシン、イノシン、およびアデニンからなる
群から選ばれる０．００１ｍＭから１０ｍＭのＡＴＰ前
駆物質と、 ｊ． コレステロール、Ｌ−ヒドロキシプロリン、ｄ−
ビオチン、カルシフェロール、ナイアシン、ｐ−アミノ
安息香酸、塩酸ピリドキシン、ビタミンＢ12、Ｆe(ＮＯ
3)3 、および非必須アミノ酸からなる群から選ばれる
０．００１ｍＭから１０ｍＭの細胞栄養補助剤と、 からなる生理的ｐＨ、低温（２℃から１５℃）でヒト角
膜組織を含む眼組織の保存効果を維持あるいは強化する
成分を含むことを特徴とする。
地およびイーグル最少必須培地とＴＣ１９９培地の混合
培地からなる群から選ばれる水性栄養素、および電解液
と、 ｂ． 硫酸コンドロイチン、硫酸デルマタン、硫酸デル
マチン、硫酸ヘパリン、硫酸ヘパラン、硫酸ケラチン、
硫酸ケラタン、およびヒアルロン酸からなる群から選ば
れる０．０１ｍｇ／ｍｌから１００ｍｇ／ｍｌのグリコ
サミノグリカンと、 ｃ． デキストラン、硫酸デキストラン、ポリビニルピ
ロリドン、ポリエチレングリコール、酢酸ポリビニル、
ヒドロキシプロピルメチルセルロース、およびカルボキ
シプロピルメチルセルロースからなる群から選ばれる
０．０１ｍｇ／ｍｌから１００ｍｇ／ｍｌの脱腫脹剤
と、 ｄ． グルコース、ピルベート、シュークロース、フル
クトース、およびデキストロースからなる群から選ばれ
る０．０５ｍＭから１０ｍＭのエネルギ源と、 ｅ． 炭酸水素塩緩衝液、およびＨＥＰＥＳ緩衝液から
なる群から選ばれる０．１ｍＭから１００ｍＭの緩衝剤
と、 ｆ． アスコルビン酸、２−メルカプトエタノール、グ
ルタチオン、およびα−トコフェロールからなる群から
選ばれる０．００１ｍＭから１０ｍＭの抗酸化剤と、 ｇ． ビタミンＡ、ビタミンＢ、レチン酸、エタノール
アミン、ホスホエタノールアミン、セレン、およびトラ
ンスフェリンからなる群から選ばれる０．０１ｍｇ／ｍ
ｌから５００ｍｇ／ｍｌの膜安定剤と、 ｈ． アンホテリシン−Ｂ、硫酸ゲンタマイシン、硫酸
カナマイシン、硫酸ネオマイシン、ナイスタチン、ペニ
シリン、トブラマイシン、およびストレプトマイシンか
らなる群から選ばれる０．１μｇ／ｍｌから１ｍｇ／ｍ
ｌの抗生物質および／または抗真菌剤と、 ｉ． アデノシン、イノシン、およびアデニンからなる
群から選ばれる０．００１ｍＭから１０ｍＭのＡＴＰ前
駆物質と、 ｊ． コレステロール、Ｌ−ヒドロキシプロリン、ｄ−
ビオチン、カルシフェロール、ナイアシン、ｐ−アミノ
安息香酸、塩酸ピリドキシン、ビタミンＢ12、Ｆe(ＮＯ
3)3 、および非必須アミノ酸からなる群から選ばれる
０．００１ｍＭから１０ｍＭの細胞栄養補助剤と、 からなる生理的ｐＨ、低温（２℃から１５℃）でヒト角
膜組織を含む眼組織の保存効果を維持あるいは強化する
成分を含むことを特徴とする。
【００１３】また、本発明は、
ａ． 水性栄養素および電解液としてのイーグル最少培
地（ＭＥＭ）と、 ｂ． グリコサミノグリカンとしての０．０１ｍｇ／ｍ
ｌから１００ｍｇ／ｍｌの硫酸コンドロイチンと、 ｃ． 脱腫脹剤としての０．０１ｍｇ／ｍｌから１００
ｍｇ／ｍｌのデキストランと、 ｄ． エネルギ源としての０．０５ｍＭから１０ｍＭの
ピルベートまたはデキストロースと、 ｅ． 緩衝剤としての０．１ｍＭから１００ｍＭの炭酸
水素塩緩衝液またはＨＥＰＥＳ緩衝液と、 ｆ． 抗酸化剤としての０．００１ｍＭから１０ｍＭの
２−メルカプトエタノールまたはα−トコフェロール
と、 ｇ． 抗生物質および／または抗真菌剤としての０．１
μｇ／ｍｌから１ｍｇ／ｍｌの硫酸ゲンタマイシンと、 ｈ． ＡＴＰ前駆物質としての０．００１ｍＭから１０
ｍＭのアデノシン、イノシンまたはアデニンと、 ｉ． 細胞栄養補助剤としての０．００１ｍＭから１０
ｍＭのコレステロール、Ｌ−ヒドロキシプロリン、ｄ−
ビオチン、カルシフェロール、ナイアシン、ｐ−アミノ
安息香酸、塩酸ピリドキシン、ビタミンＢ12、Ｆe(ＮＯ
3)3 、または非必須アミノ酸からなる生理的ｐＨ、低温
（２℃から１５℃）でヒト角膜組織を含む眼組織の保存
効果を維持あるいは強化する成分を含むことを特徴とす
る。
地（ＭＥＭ）と、 ｂ． グリコサミノグリカンとしての０．０１ｍｇ／ｍ
ｌから１００ｍｇ／ｍｌの硫酸コンドロイチンと、 ｃ． 脱腫脹剤としての０．０１ｍｇ／ｍｌから１００
ｍｇ／ｍｌのデキストランと、 ｄ． エネルギ源としての０．０５ｍＭから１０ｍＭの
ピルベートまたはデキストロースと、 ｅ． 緩衝剤としての０．１ｍＭから１００ｍＭの炭酸
水素塩緩衝液またはＨＥＰＥＳ緩衝液と、 ｆ． 抗酸化剤としての０．００１ｍＭから１０ｍＭの
２−メルカプトエタノールまたはα−トコフェロール
と、 ｇ． 抗生物質および／または抗真菌剤としての０．１
μｇ／ｍｌから１ｍｇ／ｍｌの硫酸ゲンタマイシンと、 ｈ． ＡＴＰ前駆物質としての０．００１ｍＭから１０
ｍＭのアデノシン、イノシンまたはアデニンと、 ｉ． 細胞栄養補助剤としての０．００１ｍＭから１０
ｍＭのコレステロール、Ｌ−ヒドロキシプロリン、ｄ−
ビオチン、カルシフェロール、ナイアシン、ｐ−アミノ
安息香酸、塩酸ピリドキシン、ビタミンＢ12、Ｆe(ＮＯ
3)3 、または非必須アミノ酸からなる生理的ｐＨ、低温
（２℃から１５℃）でヒト角膜組織を含む眼組織の保存
効果を維持あるいは強化する成分を含むことを特徴とす
る。
【００１４】さらに、本発明は、
ａ． 水性栄養素および電解液としてのイーグル最少培
地（ＭＥＭ）と、 ｂ． グリコサミノグリカンとしての２．５％硫酸コン
ドロイチンと、 ｃ． 脱腫脹剤としての１％デキストランと、 ｄ． エネルギ源としての１１０ｍｇ／ｌピルベートま
たは１０００ｍｇ／ｌグルコースと、 ｅ． 緩衝剤としての２２００ｍｇ／ｌ炭酸水素塩緩衝
液または２５ｍＭＨＥＰＥＳ緩衝液と、 ｆ． 抗酸化剤としての０．５ｍＭ ２−メルカプトエ
タノールまたは０．０１ｍｇ／α−トコフェロールと、 ｇ． 抗生物質および／または抗真菌剤としての１００
ｍｇ／ｌ硫酸ゲンタマイシンと、 ｈ． ＡＴＰ前駆物質としての５ｍｇ／ｌアデノシン、
１０ｍｇ／ｌイノシンまたは１０ｍｇ／ｌアデニンと、 ｉ． 細胞栄養補助剤としての０．２ｍｇ／ｌコレステ
ロール、１０ｍｇ／ｌＬ−ヒドロキシプロリン、０．０
１ｍｇ／ｌｄ−ビオチン、０．１ｍｇ／ｌカルシフェロ
ール、０．０２５ｍｇ／ｌナイアシン、０．０５ｍｇ／
ｌｐ−アミノ安息香酸、０．２５ｍｇ／ｌ塩酸ピリドキ
シン、１．３６ｍｇ／ｌビタミンＢ12、０．５ｍｇ／ｌ
Ｆe(ＮＯ3)3 、または０．１ｍＭ非必須アミノ酸からな
る生理的ｐＨ、低温（２℃から１５℃）でヒト角膜組織
を含む眼組織の保存効果を維持あるいは強化する成分を
含むことを特徴とする。
地（ＭＥＭ）と、 ｂ． グリコサミノグリカンとしての２．５％硫酸コン
ドロイチンと、 ｃ． 脱腫脹剤としての１％デキストランと、 ｄ． エネルギ源としての１１０ｍｇ／ｌピルベートま
たは１０００ｍｇ／ｌグルコースと、 ｅ． 緩衝剤としての２２００ｍｇ／ｌ炭酸水素塩緩衝
液または２５ｍＭＨＥＰＥＳ緩衝液と、 ｆ． 抗酸化剤としての０．５ｍＭ ２−メルカプトエ
タノールまたは０．０１ｍｇ／α−トコフェロールと、 ｇ． 抗生物質および／または抗真菌剤としての１００
ｍｇ／ｌ硫酸ゲンタマイシンと、 ｈ． ＡＴＰ前駆物質としての５ｍｇ／ｌアデノシン、
１０ｍｇ／ｌイノシンまたは１０ｍｇ／ｌアデニンと、 ｉ． 細胞栄養補助剤としての０．２ｍｇ／ｌコレステ
ロール、１０ｍｇ／ｌＬ−ヒドロキシプロリン、０．０
１ｍｇ／ｌｄ−ビオチン、０．１ｍｇ／ｌカルシフェロ
ール、０．０２５ｍｇ／ｌナイアシン、０．０５ｍｇ／
ｌｐ−アミノ安息香酸、０．２５ｍｇ／ｌ塩酸ピリドキ
シン、１．３６ｍｇ／ｌビタミンＢ12、０．５ｍｇ／ｌ
Ｆe(ＮＯ3)3 、または０．１ｍＭ非必須アミノ酸からな
る生理的ｐＨ、低温（２℃から１５℃）でヒト角膜組織
を含む眼組織の保存効果を維持あるいは強化する成分を
含むことを特徴とする。
【００１５】
【構成の具体的説明】４℃での角膜保存の中間時点で
は、内皮の機能状態を維持し得る組織保存が提供される
べきである。ヒトおよび動物の眼組織、特に角膜は規定
の血清不含の栄養素補給保存液中で低温でアイバンクに
おける保存中に劣化することなく、しかも実際に強化さ
れることが実験で証明された。血清不含医療用規定溶液
中で保存した場合の好ましくない特徴は回避され、しか
も、低温保存中、正常な生理代謝および角膜脱腫脹を保
持する角膜内皮細胞のポテンシャルは増加する。
は、内皮の機能状態を維持し得る組織保存が提供される
べきである。ヒトおよび動物の眼組織、特に角膜は規定
の血清不含の栄養素補給保存液中で低温でアイバンクに
おける保存中に劣化することなく、しかも実際に強化さ
れることが実験で証明された。血清不含医療用規定溶液
中で保存した場合の好ましくない特徴は回避され、しか
も、低温保存中、正常な生理代謝および角膜脱腫脹を保
持する角膜内皮細胞のポテンシャルは増加する。
【００１６】角膜内皮は全角膜層の透明度の保存に関与
する。内皮は種々の角膜層のイオン組成を調整し、それ
によって浸透圧を維持し、角膜を永続的に水和し、一定
の厚さと透明度を保つ。内皮細胞機能の阻害は、結果と
して角膜浮腫を誘発し、透明度の部分的または完全な喪
失を引き起こす。合成樹脂媒体の組成は、保存時間の延
長と温度の低下によって引き起こされる基質水和を増加
させるようにするものでなければならない。
する。内皮は種々の角膜層のイオン組成を調整し、それ
によって浸透圧を維持し、角膜を永続的に水和し、一定
の厚さと透明度を保つ。内皮細胞機能の阻害は、結果と
して角膜浮腫を誘発し、透明度の部分的または完全な喪
失を引き起こす。合成樹脂媒体の組成は、保存時間の延
長と温度の低下によって引き起こされる基質水和を増加
させるようにするものでなければならない。
【００１７】角膜基質の著しい水分接種力は、膠原線維
間の硫酸コンドロイチン、硫酸デルマタンまたは硫酸ケ
ラタン等のグリコサミノグリカン（ＧＡＧＳ）の存在に
よる。腫張角膜基質内の膠原線維の電子顕微鏡研究で膠
原線維の直径は正常であり、原線維の直径と大きな相違
はない。この発見は基質の腫張がむしろ原線維間基質の
用量増加によることを示している。さらなる屈折につい
ての研究は角膜がほぼ乾燥した状態から正常厚の３倍ま
で腫張し得るという事実に拘らず原線維の水和は変化し
ないことを示している。角膜をヒアルロニダーゼまたは
セチルピリジニウムクロリドで処理すると、基質主張は
著しく減少する。この研究も主張は原線維間気質で起こ
ることを示している。
間の硫酸コンドロイチン、硫酸デルマタンまたは硫酸ケ
ラタン等のグリコサミノグリカン（ＧＡＧＳ）の存在に
よる。腫張角膜基質内の膠原線維の電子顕微鏡研究で膠
原線維の直径は正常であり、原線維の直径と大きな相違
はない。この発見は基質の腫張がむしろ原線維間基質の
用量増加によることを示している。さらなる屈折につい
ての研究は角膜がほぼ乾燥した状態から正常厚の３倍ま
で腫張し得るという事実に拘らず原線維の水和は変化し
ないことを示している。角膜をヒアルロニダーゼまたは
セチルピリジニウムクロリドで処理すると、基質主張は
著しく減少する。この研究も主張は原線維間気質で起こ
ることを示している。
【００１８】硫酸コンドロイチンのようなグリコサミノ
グリカンは、二糖類の反復単位からなる長い不均衡な多
糖類である。グリコサミノグリカンは多くの糖残基が硫
酸基またはカルボキシル基、またはその両基の存在故に
高く負電荷を帯びている。グリコサミノグリカン鎖は、
伸張ランダムコイルコンホメーションとその質量のた
め、大用量を占める傾向がある。親水性なので、大量の
水を引きつけ、それによって低濃度でさえ水和ゲルを形
成する。この傾向はその高密度の負電荷で非常に強化さ
れ、浸透性に活性カチオンを引きつける。このグリコサ
ミノグリカンの水和力は、分子間マトリクス内において
伸縮力に抵抗し、また、圧縮力と抵抗する腫張圧または
膨圧を生じる。その極性と水和機構によりグリコサミノ
グリカン鎖は水溶性分子の迅速拡散を許容する。
グリカンは、二糖類の反復単位からなる長い不均衡な多
糖類である。グリコサミノグリカンは多くの糖残基が硫
酸基またはカルボキシル基、またはその両基の存在故に
高く負電荷を帯びている。グリコサミノグリカン鎖は、
伸張ランダムコイルコンホメーションとその質量のた
め、大用量を占める傾向がある。親水性なので、大量の
水を引きつけ、それによって低濃度でさえ水和ゲルを形
成する。この傾向はその高密度の負電荷で非常に強化さ
れ、浸透性に活性カチオンを引きつける。このグリコサ
ミノグリカンの水和力は、分子間マトリクス内において
伸縮力に抵抗し、また、圧縮力と抵抗する腫張圧または
膨圧を生じる。その極性と水和機構によりグリコサミノ
グリカン鎖は水溶性分子の迅速拡散を許容する。
【００１９】最近の研究では、プロテオグリカンを基本
とする物質は全体として角膜水和に重要な役割を果たし
ており、異なるプロテオグリカン（それらは異なる水和
力を有する）は角膜全体で水分勾配を確立する役割も果
たしている。角膜全体で硫酸ケラタンおよび４−硫酸ケ
ラタンの拡散は、角膜の非対称水和に直接的に関与す
る。４−硫酸コンドロイチンの濃度は内皮近くより上皮
近くで大きい。硫酸ケラタンは内皮近くでより大きい。
硫酸ケラタンおよび支配的には硫酸ケラタン含有プロテ
オグリカンは、水収着力は大きいが水保持力は小さい。
従って、硫酸ケラタン含有プロテオグリカン勾配（内皮
で最大）は、その収着力が大きいので総水分含量勾配を
上昇させるのに役立つ。反対に、４−硫酸コンドロイチ
ンおよび硫酸デルマタン含有プロテオグリカン（水保持
力が大きい）は上皮近くで最大の結合水勾配を確立する
のに役立つ。この勾配は大気にさらされる角膜の前面の
脱水を減少させるのに役立つ。従って、角膜全体の水分
勾配はプロテオグリカンの拡散とその水収着力および水
保持力と高い相関がある。
とする物質は全体として角膜水和に重要な役割を果たし
ており、異なるプロテオグリカン（それらは異なる水和
力を有する）は角膜全体で水分勾配を確立する役割も果
たしている。角膜全体で硫酸ケラタンおよび４−硫酸ケ
ラタンの拡散は、角膜の非対称水和に直接的に関与す
る。４−硫酸コンドロイチンの濃度は内皮近くより上皮
近くで大きい。硫酸ケラタンは内皮近くでより大きい。
硫酸ケラタンおよび支配的には硫酸ケラタン含有プロテ
オグリカンは、水収着力は大きいが水保持力は小さい。
従って、硫酸ケラタン含有プロテオグリカン勾配（内皮
で最大）は、その収着力が大きいので総水分含量勾配を
上昇させるのに役立つ。反対に、４−硫酸コンドロイチ
ンおよび硫酸デルマタン含有プロテオグリカン（水保持
力が大きい）は上皮近くで最大の結合水勾配を確立する
のに役立つ。この勾配は大気にさらされる角膜の前面の
脱水を減少させるのに役立つ。従って、角膜全体の水分
勾配はプロテオグリカンの拡散とその水収着力および水
保持力と高い相関がある。
【００２０】本発明は、硫酸コンドロイチン含有保存溶
液を用いた手術中および手術後の主張を減少させる。角
膜腫張の増加は、長い低温保存中の基質中への硫酸コン
ドロイチンの低分子量部の流入によるらしい。余分な液
体が強膜−角膜縁の切断部を通して吸収される。デキス
トランおよび濃縮硫酸コンドロイチン糖の脱腫脹剤の使
用は、低温保存中の角膜の水和をコントロールする。電
荷的に中性の分子であるデキストランは保存中角膜を腫
張させる過剰の水を浸透圧的に制限し、一方、負に電荷
している硫酸コンドロイチンは実際に細胞膜に結合し、
膜安定効果を付与する。硫酸コンドロイチンおよびデキ
ストランは、保存角膜を取り囲む水性環境中のコロイド
浸透圧を増加することによって基質水和の防止を助け
る。角膜保存中、保存後の角膜脱腫脹の維持は、手間、
移植外科医が出くわす縫合問題、およびそれに続く移植
の失敗の危険を減らすのに臨床的に重要である。
液を用いた手術中および手術後の主張を減少させる。角
膜腫張の増加は、長い低温保存中の基質中への硫酸コン
ドロイチンの低分子量部の流入によるらしい。余分な液
体が強膜−角膜縁の切断部を通して吸収される。デキス
トランおよび濃縮硫酸コンドロイチン糖の脱腫脹剤の使
用は、低温保存中の角膜の水和をコントロールする。電
荷的に中性の分子であるデキストランは保存中角膜を腫
張させる過剰の水を浸透圧的に制限し、一方、負に電荷
している硫酸コンドロイチンは実際に細胞膜に結合し、
膜安定効果を付与する。硫酸コンドロイチンおよびデキ
ストランは、保存角膜を取り囲む水性環境中のコロイド
浸透圧を増加することによって基質水和の防止を助け
る。角膜保存中、保存後の角膜脱腫脹の維持は、手間、
移植外科医が出くわす縫合問題、およびそれに続く移植
の失敗の危険を減らすのに臨床的に重要である。
【００２１】角膜保存後の内皮機能の状態と角膜の脱腫
脹維持は臨床的に重要であり、基本的に外科手術結果の
成功に寄与する。
脹維持は臨床的に重要であり、基本的に外科手術結果の
成功に寄与する。
【００２２】本発明は、細胞栄養補助の使用により中の
細胞の正常な進行性損傷の減少または除去および角膜損
傷治癒の強化を含む。時宜を得た、そして適切な角膜組
織の治癒は視力回復には必要である。
細胞の正常な進行性損傷の減少または除去および角膜損
傷治癒の強化を含む。時宜を得た、そして適切な角膜組
織の治癒は視力回復には必要である。
【００２３】障害を通して角膜内皮細胞を喪失する。さ
らに内皮細胞は前室を含む手術でしばしば損傷を生じ
る。外傷による損傷または加齢による喪失は内皮細胞の
大きさの成長（デスメ膜（Descemet's membrane ）の露
出表面を覆うように移動する）により補われる。臨床例
では、内皮機能不全は、細胞密度よりも細胞サイズ変化
と関係がある。巨大細胞の数の増加の様子は角膜浮腫の
増加に関連がある。巨大細胞の接合は異常である。細胞
接合の異常は、細胞間隙の等価性を増し、角膜への液体
拡散が増加する。ミトコンドリアまたは粗面小胞体等の
小器官密度低下が、巨大細胞では減少する。これらの小
器官は適性な生物ポンプの機能にとって重要である。ポ
ンプ機能が不十分であれば角膜基質へ液体が過剰に蓄積
する。さらに、これらの巨大細胞は拡張外部膜を有し、
低下生物ポンプ部位、増加角膜腫張を伴う機能変化を補
足する。角膜浮腫を惹起する内皮細胞機能障害は、内皮
細胞密度が正常値の４０％におちた時、内皮細胞密度の
変化率が３倍から４倍に増加し、巨大細胞の大きさが正
常内皮細胞の７．５倍まで大きくなった時におこること
に注目すべきである。
らに内皮細胞は前室を含む手術でしばしば損傷を生じ
る。外傷による損傷または加齢による喪失は内皮細胞の
大きさの成長（デスメ膜（Descemet's membrane ）の露
出表面を覆うように移動する）により補われる。臨床例
では、内皮機能不全は、細胞密度よりも細胞サイズ変化
と関係がある。巨大細胞の数の増加の様子は角膜浮腫の
増加に関連がある。巨大細胞の接合は異常である。細胞
接合の異常は、細胞間隙の等価性を増し、角膜への液体
拡散が増加する。ミトコンドリアまたは粗面小胞体等の
小器官密度低下が、巨大細胞では減少する。これらの小
器官は適性な生物ポンプの機能にとって重要である。ポ
ンプ機能が不十分であれば角膜基質へ液体が過剰に蓄積
する。さらに、これらの巨大細胞は拡張外部膜を有し、
低下生物ポンプ部位、増加角膜腫張を伴う機能変化を補
足する。角膜浮腫を惹起する内皮細胞機能障害は、内皮
細胞密度が正常値の４０％におちた時、内皮細胞密度の
変化率が３倍から４倍に増加し、巨大細胞の大きさが正
常内皮細胞の７．５倍まで大きくなった時におこること
に注目すべきである。
【００２４】前室環境が内皮の細胞再生を制限し、細胞
移動により損傷治癒を助ける。過剰の細胞喪失は巨大細
胞の形成によって補われる。さらに、このような方法で
細胞喪失に対応するように細胞に信号を送るのはヒト角
膜内皮細胞と細胞外マトリクスの複雑な相互作用であ
る。
移動により損傷治癒を助ける。過剰の細胞喪失は巨大細
胞の形成によって補われる。さらに、このような方法で
細胞喪失に対応するように細胞に信号を送るのはヒト角
膜内皮細胞と細胞外マトリクスの複雑な相互作用であ
る。
【００２５】本発明は、さらに、細胞代謝、損傷治癒お
よび生存を強化するために追加のアミノ酸、ビタミン、
微量無幾塩類およびエネルギ促進前駆物質を角膜に補給
する栄養溶液を提供する。細胞増殖はＤＮＡ合成を導く
事象によって規制され、細胞がＤＮＡ合成を続けるかど
うか、あるいは細胞周期の早い段階で停止するかどうか
は、細胞外条件に依存する。細胞代謝は必須栄養素の低
下により、ヘキソース輸送、グリコーゲン輸送、タンパ
ク質合成、アミノ酸およびイオン輸送を増加することに
よって強化することができる。
よび生存を強化するために追加のアミノ酸、ビタミン、
微量無幾塩類およびエネルギ促進前駆物質を角膜に補給
する栄養溶液を提供する。細胞増殖はＤＮＡ合成を導く
事象によって規制され、細胞がＤＮＡ合成を続けるかど
うか、あるいは細胞周期の早い段階で停止するかどうか
は、細胞外条件に依存する。細胞代謝は必須栄養素の低
下により、ヘキソース輸送、グリコーゲン輸送、タンパ
ク質合成、アミノ酸およびイオン輸送を増加することに
よって強化することができる。
【００２６】新規な栄養素含有溶液は血清不含である。
血清補給溶液は組織培養中、ヒト角膜内皮細胞の制限さ
れた有糸分裂を刺激できるが、ヒトの移植用の組織に使
用するための製品中に血清が存在すると、多くの欠点を
有する。血清はウィルス性疾患等の病気を移す媒体とな
り得る。ヒト由来ではない血清は、免疫反応を誘発し得
る沢山の物質を含み、全ての血清はエンドトキシン等の
物質や成長因子（それらは実際に細胞の有糸分裂を阻止
する）を含有する。これら問題点は本発明の血清不含医
療用規定溶液によって回避される。
血清補給溶液は組織培養中、ヒト角膜内皮細胞の制限さ
れた有糸分裂を刺激できるが、ヒトの移植用の組織に使
用するための製品中に血清が存在すると、多くの欠点を
有する。血清はウィルス性疾患等の病気を移す媒体とな
り得る。ヒト由来ではない血清は、免疫反応を誘発し得
る沢山の物質を含み、全ての血清はエンドトキシン等の
物質や成長因子（それらは実際に細胞の有糸分裂を阻止
する）を含有する。これら問題点は本発明の血清不含医
療用規定溶液によって回避される。
【００２７】角膜保存液はよく知られている。本発明
は、一般に、水性栄養素および電解溶液、グリコサミノ
グリカン、脱腫脹剤、エネルギ原、緩衝剤、抗酸化剤、
膜安定剤、抗生物質、ＡＴＰ前駆物質および細胞栄養補
助剤を含む。栄養素および電解溶液は組成培養の当分野
でよく定義されている。このような溶液は、細胞維持お
よび細胞成長に必要な最小濃度で必須栄養素と電解質を
含む。溶液の実際の組成は非常に様々である。一般的に
は、無機塩類（カルシウム、マグネシウム、鉄並びに炭
酸、硝酸、リン酸のナトリウム塩およびカリウム塩、塩
化ナトリウムおよびカリウム塩等）、必須および非必須
アミノ酸、ビタミンおよび他の必須栄養素を含む。
は、一般に、水性栄養素および電解溶液、グリコサミノ
グリカン、脱腫脹剤、エネルギ原、緩衝剤、抗酸化剤、
膜安定剤、抗生物質、ＡＴＰ前駆物質および細胞栄養補
助剤を含む。栄養素および電解溶液は組成培養の当分野
でよく定義されている。このような溶液は、細胞維持お
よび細胞成長に必要な最小濃度で必須栄養素と電解質を
含む。溶液の実際の組成は非常に様々である。一般的に
は、無機塩類（カルシウム、マグネシウム、鉄並びに炭
酸、硝酸、リン酸のナトリウム塩およびカリウム塩、塩
化ナトリウムおよびカリウム塩等）、必須および非必須
アミノ酸、ビタミンおよび他の必須栄養素を含む。
【００２８】化学的に規定された基本的な栄養媒体は商
業的に入手可能である。例えば、ギブコ ラボラトリー
（Gibco Laboratories) （ニューヨーク州 グランドア
イランド市 スタンレーロード３１７５、郵便番号１４
０７３）、およびマイクロバイオロジカル アソシエー
ト（メリーランド州 ウォーカーズヴィル市 ブリッグ
フォールロード 私書箱１２７、郵便番号２１７９３）
からイーグル最小必須培地（ＭＥＭ）およびＴＣ１９９
の名称で市販されている。角膜保存溶液はこれらの栄養
媒体の応用である。
業的に入手可能である。例えば、ギブコ ラボラトリー
（Gibco Laboratories) （ニューヨーク州 グランドア
イランド市 スタンレーロード３１７５、郵便番号１４
０７３）、およびマイクロバイオロジカル アソシエー
ト（メリーランド州 ウォーカーズヴィル市 ブリッグ
フォールロード 私書箱１２７、郵便番号２１７９３）
からイーグル最小必須培地（ＭＥＭ）およびＴＣ１９９
の名称で市販されている。角膜保存溶液はこれらの栄養
媒体の応用である。
【００２９】本発明の血清不含医療用規定溶液は、ＭＥ
ＭおよびＴＣ１９９にＡＴＰ前駆物質、ビタミン、アミ
ノ酸および成長促進補助剤を添加した成分からなる。
ＭおよびＴＣ１９９にＡＴＰ前駆物質、ビタミン、アミ
ノ酸および成長促進補助剤を添加した成分からなる。
【００３０】本発明の血清不含医療用規定溶液を市販の
角膜保存培地ＣＳＭTM（医学博士Ｒ．Ｌ．リンドストロ
ーム (Lindstrom)および理学士 デブラ Ｌ．スケルニ
ック (Debra Ｌ．Skelnik)の開発、シロン アフサルマ
イクス社（Chiron Ophthalmics. Inc.) （カリフォルニ
ア州アービン）から市販））、およびＴＣ１９９（ギブ
コ ラボラトリー（ニューヨーク州 グランドアイラン
ド市）から市販）と表１において比較した。
角膜保存培地ＣＳＭTM（医学博士Ｒ．Ｌ．リンドストロ
ーム (Lindstrom)および理学士 デブラ Ｌ．スケルニ
ック (Debra Ｌ．Skelnik)の開発、シロン アフサルマ
イクス社（Chiron Ophthalmics. Inc.) （カリフォルニ
ア州アービン）から市販））、およびＴＣ１９９（ギブ
コ ラボラトリー（ニューヨーク州 グランドアイラン
ド市）から市販）と表１において比較した。
【００３１】本発明の組成物および方法に使用する好適
な血清不含医療用規定溶液は、水性電解液（例えば、イ
ーグル最小必須培地および／またはＴＣ１９９）、０．
０１ｍｇ／ｍｌから１００ｍｇ／ｍｌのグリコサミノグ
リカン（例えば、標準または精製高または低分子量硫酸
コンドロイチン（Ａ、ＢまたはＣ異性体）、硫酸デルマ
タン、硫酸デルマチン、硫酸ヘバリン、硫酸ヘバラン、
硫酸ケラチン、硫酸ケラタンおよび／またはヒアルロン
酸）、０．０１ｍｇ／ｍｌから１００ｍｇ／ｍｌの脱腫
脹剤（例えば、デキストラン、硫酸デキストラン、ポリ
ビニルーロリドン、ポリエチレングリコール、酢酸ポリ
ビニル、ヒドロキシメチルプロピルメチルセルロース、
カルボキシプロピルメチルセルロース等の低または高分
子量多糖類）、０．０５ｍＭから１０ｍＭのエネルギ源
および炭素源（例えば、グルコース、ピルベート、シュ
ークロース、フルクトース、デキストロース）、０．１
ｍＭから１００ｍＭの緩衝剤（例えば、炭酸水素緩衝液
およびヒドロキシエチルピペリゼンエタンスルホン酸緩
衝液（ＨＥＰＥＳ））、生理的ｐＨ（好ましくは、６．
８〜７．６）を維持するために０．００１ｍＭから１０
ｍＭの抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸、２−メルカ
プトエタノール、グルタチオン、α−トコフェロー
ル）、０．０１ｍｇ／ｍｌから５００ｍｇ／ｍｌの膜安
定剤（例えば、ビタミンＡおよびＢ、レチン酸および／
または補因子、エタノールアミンおよびホスホエタノー
ルアミン、セレンおよびトランスフェリン）、０．００
１ｍＭから１０ｍＭの構成物質および／または抗真菌剤
（例えば、アンホテリシン−Ｂ、硫酸ゲンタマイシン、
硫酸カナマイシン、硫酸ネオマイシン、ナイスタチン、
ペニシリン、トブラマイシン、硫酸ストレプトマイシ
ン）および０．００１ｍＭから１０ｍＭのＡＴＰ前駆物
質、および０．００１ｍＭから１０ｍＭの細胞栄養補助
剤（例えば、コレステロール、Ｌ−ヒドロキシプロリ
ン、ｄ−ビオチン、カルシフェロール、ナイアシン、ｐ
−アミノ安息香酸、塩酸ピリドキシン、ビタミンＢ 12、
Ｆe(ＮＯ3)3 、非必須アミノ酸）を含む。
な血清不含医療用規定溶液は、水性電解液（例えば、イ
ーグル最小必須培地および／またはＴＣ１９９）、０．
０１ｍｇ／ｍｌから１００ｍｇ／ｍｌのグリコサミノグ
リカン（例えば、標準または精製高または低分子量硫酸
コンドロイチン（Ａ、ＢまたはＣ異性体）、硫酸デルマ
タン、硫酸デルマチン、硫酸ヘバリン、硫酸ヘバラン、
硫酸ケラチン、硫酸ケラタンおよび／またはヒアルロン
酸）、０．０１ｍｇ／ｍｌから１００ｍｇ／ｍｌの脱腫
脹剤（例えば、デキストラン、硫酸デキストラン、ポリ
ビニルーロリドン、ポリエチレングリコール、酢酸ポリ
ビニル、ヒドロキシメチルプロピルメチルセルロース、
カルボキシプロピルメチルセルロース等の低または高分
子量多糖類）、０．０５ｍＭから１０ｍＭのエネルギ源
および炭素源（例えば、グルコース、ピルベート、シュ
ークロース、フルクトース、デキストロース）、０．１
ｍＭから１００ｍＭの緩衝剤（例えば、炭酸水素緩衝液
およびヒドロキシエチルピペリゼンエタンスルホン酸緩
衝液（ＨＥＰＥＳ））、生理的ｐＨ（好ましくは、６．
８〜７．６）を維持するために０．００１ｍＭから１０
ｍＭの抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸、２−メルカ
プトエタノール、グルタチオン、α−トコフェロー
ル）、０．０１ｍｇ／ｍｌから５００ｍｇ／ｍｌの膜安
定剤（例えば、ビタミンＡおよびＢ、レチン酸および／
または補因子、エタノールアミンおよびホスホエタノー
ルアミン、セレンおよびトランスフェリン）、０．００
１ｍＭから１０ｍＭの構成物質および／または抗真菌剤
（例えば、アンホテリシン−Ｂ、硫酸ゲンタマイシン、
硫酸カナマイシン、硫酸ネオマイシン、ナイスタチン、
ペニシリン、トブラマイシン、硫酸ストレプトマイシ
ン）および０．００１ｍＭから１０ｍＭのＡＴＰ前駆物
質、および０．００１ｍＭから１０ｍＭの細胞栄養補助
剤（例えば、コレステロール、Ｌ−ヒドロキシプロリ
ン、ｄ−ビオチン、カルシフェロール、ナイアシン、ｐ
−アミノ安息香酸、塩酸ピリドキシン、ビタミンＢ 12、
Ｆe(ＮＯ3)3 、非必須アミノ酸）を含む。
【００３２】本発明の血清不含医療用規定溶液は、アイ
バンクでの低温保存後に細胞代謝、細胞生存、損傷治癒
および角膜脱腫脹を強化するのに充分な量のグリコサミ
ノグリカン、脱腫脹剤、エネルギ源、緩衝剤、抗酸化
剤、膜安定剤、抗生物質、ＡＴＰ前駆物質および細胞栄
養補助剤を補った水性栄養電解液からなる。摘出角膜を
無菌的に角膜保存溶液の容器に移し、次いで容器を密閉
する。保存および輸送のためには、角膜を低温（例え
ば、２℃〜１５℃、最適には４℃）に維持し、細菌繁殖
の危険を最小化し、角膜組織の代謝損傷を減ずる。この
ような低温でも、内皮細胞は１４日まで維持できること
が発見された。移植時に、正常角膜の脱腫脹は手術中お
よび手術後も維持される。内皮細胞機能および代謝が維
持され、角膜の永続的水和、そして手術後も一定の厚さ
と透明度が確保される。移植用の生存角膜の提供に加
え、損傷治癒を強化する。
バンクでの低温保存後に細胞代謝、細胞生存、損傷治癒
および角膜脱腫脹を強化するのに充分な量のグリコサミ
ノグリカン、脱腫脹剤、エネルギ源、緩衝剤、抗酸化
剤、膜安定剤、抗生物質、ＡＴＰ前駆物質および細胞栄
養補助剤を補った水性栄養電解液からなる。摘出角膜を
無菌的に角膜保存溶液の容器に移し、次いで容器を密閉
する。保存および輸送のためには、角膜を低温（例え
ば、２℃〜１５℃、最適には４℃）に維持し、細菌繁殖
の危険を最小化し、角膜組織の代謝損傷を減ずる。この
ような低温でも、内皮細胞は１４日まで維持できること
が発見された。移植時に、正常角膜の脱腫脹は手術中お
よび手術後も維持される。内皮細胞機能および代謝が維
持され、角膜の永続的水和、そして手術後も一定の厚さ
と透明度が確保される。移植用の生存角膜の提供に加
え、損傷治癒を強化する。
【００３３】本発明はその範囲を逸脱することなく種々
の変更が可能である。例えば、本血清不含医療用規定溶
液はいろいろな医療に応用することができ、眼科にのみ
厳密に限定されるものではない。
の変更が可能である。例えば、本血清不含医療用規定溶
液はいろいろな医療に応用することができ、眼科にのみ
厳密に限定されるものではない。
【００３４】
【実施例１】本発明を以下の実施例によりさらに詳細に
説明するが、これに限定されるものではない。血清不含医療用規定溶液 ４℃での角膜保存中間期間は、内皮の機能と移植後の角
膜脱腫脹を維持する組織を保存する。ＣＳＭTMとＫ−Ｓ
ｏｌTMは４℃で保存するための標準媒体となっている。
カウフマン（Kaufman)Ｈ．Ｅ．、バーネル（Varnell)
Ｅ. Ｄ．、カウフマン（Kaufman)Ｓ．等で述べられてい
る通り、Ｋ−ＳｏｌTM角膜を保存する。Am. Ｊ．Ophtha
lmol １９８５、１００、２９９−３０４、ボルネ（Bo
urne) Ｗ．Ｍ．２．５％硫酸コンドロイチン中に４℃で
１〜１３日保存した移植ヒト角膜の内皮細胞の生存、A
m．Ｊ．Ophthalmol １９８６、１０２、３８２−６、
リンドストローム（ Lindstrom) Ｒ．Ｌ．、スケルニッ
ク(Skelnik)Ｄ．Ｌ．、マインドラップ(Mindrup) Ｅ．
Ａ．等、硫酸コンドロイチン含有媒体での角膜の４℃保
存、Invest Ophthalmol Vis Sci （Suppl) １９８７、
２８（３）、１６７、ブーグラ（Bhugra) Ｍ．Ｋ．、シ
ュガー（Suger)Ａ、メイヤー（Meyer)Ｒ．等、ＭＫTMお
よびＫ−ＳｏｌTM保存の一組の実験結果、Invest Ophth
almol VisSci （Suppl)１９８８、２９、１１２、およ
びラス（Lass) Ｊ．Ｈ．、ラインハート（Reinhart)
Ｗ．Ｊ．、ブルナー（Bruner) Ｗ．Ｅ．等、ヒト角膜移
植におけるＫ−ＳｏｌTMと硫酸コンドロイチン角膜保存
媒体中での角膜保存の比較、Ophthalmology １９８９、
９６、６８８−９７に記載されている通りである。
説明するが、これに限定されるものではない。血清不含医療用規定溶液 ４℃での角膜保存中間期間は、内皮の機能と移植後の角
膜脱腫脹を維持する組織を保存する。ＣＳＭTMとＫ−Ｓ
ｏｌTMは４℃で保存するための標準媒体となっている。
カウフマン（Kaufman)Ｈ．Ｅ．、バーネル（Varnell)
Ｅ. Ｄ．、カウフマン（Kaufman)Ｓ．等で述べられてい
る通り、Ｋ−ＳｏｌTM角膜を保存する。Am. Ｊ．Ophtha
lmol １９８５、１００、２９９−３０４、ボルネ（Bo
urne) Ｗ．Ｍ．２．５％硫酸コンドロイチン中に４℃で
１〜１３日保存した移植ヒト角膜の内皮細胞の生存、A
m．Ｊ．Ophthalmol １９８６、１０２、３８２−６、
リンドストローム（ Lindstrom) Ｒ．Ｌ．、スケルニッ
ク(Skelnik)Ｄ．Ｌ．、マインドラップ(Mindrup) Ｅ．
Ａ．等、硫酸コンドロイチン含有媒体での角膜の４℃保
存、Invest Ophthalmol Vis Sci （Suppl) １９８７、
２８（３）、１６７、ブーグラ（Bhugra) Ｍ．Ｋ．、シ
ュガー（Suger)Ａ、メイヤー（Meyer)Ｒ．等、ＭＫTMお
よびＫ−ＳｏｌTM保存の一組の実験結果、Invest Ophth
almol VisSci （Suppl)１９８８、２９、１１２、およ
びラス（Lass) Ｊ．Ｈ．、ラインハート（Reinhart)
Ｗ．Ｊ．、ブルナー（Bruner) Ｗ．Ｅ．等、ヒト角膜移
植におけるＫ−ＳｏｌTMと硫酸コンドロイチン角膜保存
媒体中での角膜保存の比較、Ophthalmology １９８９、
９６、６８８−９７に記載されている通りである。
【００３５】角膜の厚さの増加は、ＣＳＭTM保存角膜で
もあり、手術時に明らかに再腫張が起こる。しかし、手
術後１ヶ月正常な角膜厚になる。角膜腫張の増加は、４
℃で長く保存中に硫酸コンドロイチンの低分子量部分が
基質に流入するためであろう。角膜腫張を少なくするた
めに、血清不含硫酸コンドロイチン含有媒体へのデキス
トランの添加が角膜水和を最少化するかどうかをみるた
めの研究がなされた。
もあり、手術時に明らかに再腫張が起こる。しかし、手
術後１ヶ月正常な角膜厚になる。角膜腫張の増加は、４
℃で長く保存中に硫酸コンドロイチンの低分子量部分が
基質に流入するためであろう。角膜腫張を少なくするた
めに、血清不含硫酸コンドロイチン含有媒体へのデキス
トランの添加が角膜水和を最少化するかどうかをみるた
めの研究がなされた。
【００３６】ＭＫTM媒体中の有効な浸透剤であるデキス
トランは角膜を薄く保ち、角膜内皮のバリア機能を有効
に維持する。デキストラン含有媒体中に保存された角膜
は、デキストランのコロイド浸透圧によって主張が抑制
される。デキストランは角膜内皮に浸透し、基質に侵入
する。このデキストランの侵入および排出は、保存期間
および内皮の状態に応じたデキストランの浸透の程度に
より４℃で速やかに起こる。このようにデキストラン
は、硫酸コンドロイチン含有媒体による低温保存に伴う
角膜腫張を減じる魅力的な試薬である。イーグル最少必
須培地（ＭＥＭ）からなる血清不含医療用規定溶液は、
アールス塩(Earle・s salt) 、炭酸水素ナトリウム、２
５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、０．１ｍＭ 非必須アミノ酸、１
ｍＭ ピルビン酸ナトリウム、２ｍＭ Ｌ−グルタミ
ン、０．５ｍＭ ２−メルカプトエタノール、１．０％
デキストラン、２．５％硫酸コンドロイチンおよび１０
０μｇ／ｍｌゲンタマイシンが添加されている。
トランは角膜を薄く保ち、角膜内皮のバリア機能を有効
に維持する。デキストラン含有媒体中に保存された角膜
は、デキストランのコロイド浸透圧によって主張が抑制
される。デキストランは角膜内皮に浸透し、基質に侵入
する。このデキストランの侵入および排出は、保存期間
および内皮の状態に応じたデキストランの浸透の程度に
より４℃で速やかに起こる。このようにデキストラン
は、硫酸コンドロイチン含有媒体による低温保存に伴う
角膜腫張を減じる魅力的な試薬である。イーグル最少必
須培地（ＭＥＭ）からなる血清不含医療用規定溶液は、
アールス塩(Earle・s salt) 、炭酸水素ナトリウム、２
５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、０．１ｍＭ 非必須アミノ酸、１
ｍＭ ピルビン酸ナトリウム、２ｍＭ Ｌ−グルタミ
ン、０．５ｍＭ ２−メルカプトエタノール、１．０％
デキストラン、２．５％硫酸コンドロイチンおよび１０
０μｇ／ｍｌゲンタマイシンが添加されている。
【００３７】基本媒体にはさらに以下の成分が添加され
ている。
ている。
【００３８】Ｆe(ＮＯ3)3 ・９Ｈ2 Ｏ、硫酸アデニン、
コレステロール、Ｌ−ヒドロキシプロリン、アスコルビ
ン酸、リン酸α−トコフェロール、Ｄ−ビオチン、カル
シフェロール、ナイアシン、ｐ−アミノ安息香酸、塩酸
ピリドキシン、アデノシン、イノシンおよびビタミンＢ
12。これらの成分は基本培地を完全に規定するために添
加され、細胞成長と細胞機能を強化する（表１Ａ乃至表
１Ｃ参照）。
コレステロール、Ｌ−ヒドロキシプロリン、アスコルビ
ン酸、リン酸α−トコフェロール、Ｄ−ビオチン、カル
シフェロール、ナイアシン、ｐ−アミノ安息香酸、塩酸
ピリドキシン、アデノシン、イノシンおよびビタミンＢ
12。これらの成分は基本培地を完全に規定するために添
加され、細胞成長と細胞機能を強化する（表１Ａ乃至表
１Ｃ参照）。
【００３９】この血清不含医療用規定溶液の安全性およ
び有効性を評価するために、４℃で１２日間保存したヒ
ト角膜を用いて硫酸コンドロイチン濃度の容量応答曲線
を描いた。硫酸コンドロイチン濃度は、１．５％、１．
７５％、２．０％および２．５％であった。角膜厚の測
定は、４℃保存で０日、１日、７日および１２日行っ
た。
び有効性を評価するために、４℃で１２日間保存したヒ
ト角膜を用いて硫酸コンドロイチン濃度の容量応答曲線
を描いた。硫酸コンドロイチン濃度は、１．５％、１．
７５％、２．０％および２．５％であった。角膜厚の測
定は、４℃保存で０日、１日、７日および１２日行っ
た。
【００４０】さらに、我々の研究室で開発した単離技術
が、自然の内皮の特徴を残しているヒト角膜内皮の第一
次、そして続く継代培養の確立を可能にした。Ｉｎ ｖ
ｉｔｒｏで条件をこれらのヒト角膜内皮細胞を増殖状態
に維持し、活発に有糸分裂を行わせる。［ 3Ｈ］−チミ
ジン取り込みによって測定するようにＤＮＡ合成の刺激
と阻害における種々の試験媒体の効果を評価するために
定量的バイオアッセイが開発された。
が、自然の内皮の特徴を残しているヒト角膜内皮の第一
次、そして続く継代培養の確立を可能にした。Ｉｎ ｖ
ｉｔｒｏで条件をこれらのヒト角膜内皮細胞を増殖状態
に維持し、活発に有糸分裂を行わせる。［ 3Ｈ］−チミ
ジン取り込みによって測定するようにＤＮＡ合成の刺激
と阻害における種々の試験媒体の効果を評価するために
定量的バイオアッセイが開発された。
【００４１】次に、臨床試験を行い、血清不含医療用規
定溶液（配合Ａ）中に保存し、次いで患者に移植した角
膜の厚さおよび生存内皮を評価した。材料および方法 ヒト角膜における硫酸コンドロイチン用量応答曲線 ヒトドナー眼球を生理食塩水（normal sallne ）中、
１．０％ヨウ化ポビドン中に３分間浸し、次に生理食塩
水中に１分間浸した。次に、１８−ゲージ針装着用シリ
ンジを用いて生理食塩水１２ｃｃで洗浄した。年齢また
は死因のために移植には不適当な１６対の提供者からの
角膜を死から平均１２時間後に認証アイバンクで摘出
し、１・５％、１．７５％、２．０％および２．５％硫
酸コンドロイチンを添加した医療用規定溶液２０ｍｌ中
に放置した。コントロール媒体は市販のＤｅｘｓｏｌTM
（シロン アフサルマイクス社、カリフォルニア州 ア
ービン）を用いた。角膜を媒体中に入れる前に、成分補
充媒体を室温に暖め、角膜厚を測定した。角膜厚の測定
は、マイクロメーターで調整したロイツ型顕微鏡を用い
て行った。マイクロメーターダイヤル指示器をステージ
上にダイヤル指示器脚部直下ステージを貫通する調整ね
じで顕微鏡スタンドに取り付けた。角膜厚の測定は内皮
にピントを合わせ、調整ねじをダイヤルが“０”になる
ように調整し、上皮が焦点にくるようにステージを上
げ、ダイヤル指示器の目盛りを読み取ることにより行
う。次いで、角膜を４℃に冷却し、１２日間保存した。
角膜を保存媒体から取り出し、２ｍＭ Ｌ−グルタミン
および１００μｇ／ｍｌゲンタマインシを添加したＭＥ
Ｍ１５ｍｌ中に入れた。次に、角膜を３４℃に２時間暖
め、角膜の中央部厚の測定を加温介し後３０、６０およ
び１２０分時に行った。角膜内皮は、最後の角膜厚測定
を行った後、０．１％トリパンブルーおよびアリザリン
レッドＳで染色して評価した。ヒト角膜内皮細胞の［ 3Ｈ］−チミジン取り込み １４種の媒質成分を以下のようにして試験した。
定溶液（配合Ａ）中に保存し、次いで患者に移植した角
膜の厚さおよび生存内皮を評価した。材料および方法 ヒト角膜における硫酸コンドロイチン用量応答曲線 ヒトドナー眼球を生理食塩水（normal sallne ）中、
１．０％ヨウ化ポビドン中に３分間浸し、次に生理食塩
水中に１分間浸した。次に、１８−ゲージ針装着用シリ
ンジを用いて生理食塩水１２ｃｃで洗浄した。年齢また
は死因のために移植には不適当な１６対の提供者からの
角膜を死から平均１２時間後に認証アイバンクで摘出
し、１・５％、１．７５％、２．０％および２．５％硫
酸コンドロイチンを添加した医療用規定溶液２０ｍｌ中
に放置した。コントロール媒体は市販のＤｅｘｓｏｌTM
（シロン アフサルマイクス社、カリフォルニア州 ア
ービン）を用いた。角膜を媒体中に入れる前に、成分補
充媒体を室温に暖め、角膜厚を測定した。角膜厚の測定
は、マイクロメーターで調整したロイツ型顕微鏡を用い
て行った。マイクロメーターダイヤル指示器をステージ
上にダイヤル指示器脚部直下ステージを貫通する調整ね
じで顕微鏡スタンドに取り付けた。角膜厚の測定は内皮
にピントを合わせ、調整ねじをダイヤルが“０”になる
ように調整し、上皮が焦点にくるようにステージを上
げ、ダイヤル指示器の目盛りを読み取ることにより行
う。次いで、角膜を４℃に冷却し、１２日間保存した。
角膜を保存媒体から取り出し、２ｍＭ Ｌ−グルタミン
および１００μｇ／ｍｌゲンタマインシを添加したＭＥ
Ｍ１５ｍｌ中に入れた。次に、角膜を３４℃に２時間暖
め、角膜の中央部厚の測定を加温介し後３０、６０およ
び１２０分時に行った。角膜内皮は、最後の角膜厚測定
を行った後、０．１％トリパンブルーおよびアリザリン
レッドＳで染色して評価した。ヒト角膜内皮細胞の［ 3Ｈ］−チミジン取り込み １４種の媒質成分を以下のようにして試験した。
【００４２】Ｆe(ＮＯ3)3 ・９Ｈ2 Ｏ、硫酸アデニン、
コレステロール、Ｌ−ヒドロキシプロリン、アスコルビ
ン酸、リン酸α−トコフェロール、Ｄ−ビオチン、カル
シフェロール、ナイアシン、ｐ−アミノ安息香酸、塩酸
ピリドキシン、アデノシン、イノシンおよびビタミンＢ
12。成分は別々に、あるいは一緒に、アールス塩、炭酸
水素ナトリウム、２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、０．１ｍＭ
非必須アミノ酸、１ｍＭ ピルビン酸ナトリウム、２ｍ
Ｍ Ｌ−グルタミン、０．５ｍＭ ２−メルカプトエタ
ノール、２．５％硫酸コンドロイチンおよび１００μｇ
／ｍｌゲンタマイシンを添加したイーグル最少必須培地
（ＭＥＭ）からなる基本媒体に添加した。１．７５％お
よび２．０％の硫酸コンドロイチンも試験した。コント
ロール媒体は１０％ウシ胎児血清を添加した市販のＤｅ
ｘｓｏｌTM（シロン アフサルマイクス社、カリフォル
ニア州 アービン）およびＣＳＭTMからなる。全ての試
験媒体サンプルは実験時に新たに調整され、室温に暖め
られた。定量的バイオアッセイ 定量的バイオアッセイは血清不含または含有媒体中でイ
ンキュベートされたヒト角膜内皮細胞のＤＮＡの
［ 3Ｈ］−チミジンの取り込みに基づく。
コレステロール、Ｌ−ヒドロキシプロリン、アスコルビ
ン酸、リン酸α−トコフェロール、Ｄ−ビオチン、カル
シフェロール、ナイアシン、ｐ−アミノ安息香酸、塩酸
ピリドキシン、アデノシン、イノシンおよびビタミンＢ
12。成分は別々に、あるいは一緒に、アールス塩、炭酸
水素ナトリウム、２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、０．１ｍＭ
非必須アミノ酸、１ｍＭ ピルビン酸ナトリウム、２ｍ
Ｍ Ｌ−グルタミン、０．５ｍＭ ２−メルカプトエタ
ノール、２．５％硫酸コンドロイチンおよび１００μｇ
／ｍｌゲンタマイシンを添加したイーグル最少必須培地
（ＭＥＭ）からなる基本媒体に添加した。１．７５％お
よび２．０％の硫酸コンドロイチンも試験した。コント
ロール媒体は１０％ウシ胎児血清を添加した市販のＤｅ
ｘｓｏｌTM（シロン アフサルマイクス社、カリフォル
ニア州 アービン）およびＣＳＭTMからなる。全ての試
験媒体サンプルは実験時に新たに調整され、室温に暖め
られた。定量的バイオアッセイ 定量的バイオアッセイは血清不含または含有媒体中でイ
ンキュベートされたヒト角膜内皮細胞のＤＮＡの
［ 3Ｈ］−チミジンの取り込みに基づく。
【００４３】コスター（Coctar）９６ウエル組織培養プ
レートの指定された媒体最終容量２００μｌ中に３×１
０3 接種した。４代継代したヒト角膜内皮細胞を９５％
空気、５％ＣＯ2 中、３５．５℃で加湿インキュベータ
中に保存した。１０％ウシ胎児血清を添加したＣＳＭTM
中で２４時間インキュベーション後、媒体を除去し、各
ウエルをアールス塩および２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ含有血
清不含最少必須培地で一度洗浄した。次に細胞を洗浄
し、適当な試験溶液でインキュベートした。次にヒト角
膜内皮細胞を１microcuvie／ウエルの［ 3Ｈ］−チミジ
ンの存在下でさらに７２時間インキュベートした。摂取
を放射性媒体の吸引によって終結させ、細胞を血清不含
最少必須培地で２回洗浄した。ヒト角膜細胞を０．５％
トリプシンで剥離し、液体シンチレーション計数用に調
整した。［ 3Ｈ］−チミジンカウントは酸不溶カウント
を表す。一元変動分析（One-way analysis of varianc
e）とニューマン−ケウルス マルチプルレンジテスト
（Newman-Keuls multiple range test）を用いて統計的
有意差（ｐ＜０．０５）を評価した。臨床試験 アイバンク法 ヒトドナー眼球を１．０％ヨウ化ホビドン生理食塩水に
３分間浸し、次に生理食塩水中に１分間浸した。次に、
１８ゲージ針装着シリンジを用いて生理食塩水１２ｃｃ
で洗浄した。適性な提供者からの角膜を平均死後８．６
時間にアイバンクで摘出し、血清不含医療用規定溶液
（配合Ａ）中に入れた。角膜を溶液中に入れる前に該溶
液を室温に戻した。次いで角膜を４℃に冷却し、平均
４．３日間保存した（平均１〜７日）。被移植者の基準 以下の被移植者の診断結果を用いた。
レートの指定された媒体最終容量２００μｌ中に３×１
０3 接種した。４代継代したヒト角膜内皮細胞を９５％
空気、５％ＣＯ2 中、３５．５℃で加湿インキュベータ
中に保存した。１０％ウシ胎児血清を添加したＣＳＭTM
中で２４時間インキュベーション後、媒体を除去し、各
ウエルをアールス塩および２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ含有血
清不含最少必須培地で一度洗浄した。次に細胞を洗浄
し、適当な試験溶液でインキュベートした。次にヒト角
膜内皮細胞を１microcuvie／ウエルの［ 3Ｈ］−チミジ
ンの存在下でさらに７２時間インキュベートした。摂取
を放射性媒体の吸引によって終結させ、細胞を血清不含
最少必須培地で２回洗浄した。ヒト角膜細胞を０．５％
トリプシンで剥離し、液体シンチレーション計数用に調
整した。［ 3Ｈ］−チミジンカウントは酸不溶カウント
を表す。一元変動分析（One-way analysis of varianc
e）とニューマン−ケウルス マルチプルレンジテスト
（Newman-Keuls multiple range test）を用いて統計的
有意差（ｐ＜０．０５）を評価した。臨床試験 アイバンク法 ヒトドナー眼球を１．０％ヨウ化ホビドン生理食塩水に
３分間浸し、次に生理食塩水中に１分間浸した。次に、
１８ゲージ針装着シリンジを用いて生理食塩水１２ｃｃ
で洗浄した。適性な提供者からの角膜を平均死後８．６
時間にアイバンクで摘出し、血清不含医療用規定溶液
（配合Ａ）中に入れた。角膜を溶液中に入れる前に該溶
液を室温に戻した。次いで角膜を４℃に冷却し、平均
４．３日間保存した（平均１〜７日）。被移植者の基準 以下の被移植者の診断結果を用いた。
【００４４】無水晶体水疱性角膜症、フックスジストロ
フィー、偽水晶体水疱性角膜症、角膜瘢痕、円錐角膜お
よび移植の失敗。手術前の試験は細孔強制視力、眼内
圧、、細隙灯および検眼鏡試験からなる。The United S
tates of Health and Human Servicesのガイドラインに
準拠し、臨床試験の全関係者から同意を得た。この任意
的臨床試験は Institutional Review Board の同意とモ
ニタを得て行われた。手術法 移植時に角膜を室温に戻した。提供者の角膜を角トレフ
ィンプレスを用いて内皮側から切断した。ヒアルロン酸
ナトリウム（Healon）またはヒアルロン酸ナトリウム−
硫酸コンドロイチン（Viscoat ）を全てのケースで用い
た。手術中および手術後の治療は全例で略同様である。
縫合術は１２インタラプテッド１０−０縫合とランニン
グ１１−０縫合［ナイロンまたはメルシレン（mersilen
e)］の組み合わせからなる。各施術の最後にゲンタマイ
シン、ベタメサゾンおよびアンセフ（Ancef)を結膜下に
注射した。手術後の処置 手術後全ての患者は最初の１ヶ月１日４回ネオマイシン
またはゲンタマインシ点滴を受けた。必要な場合には代
表的なステロイドを塗布した。手術後最初の２ヶ月間、
患者の合併症、拒絶反応、角膜の欠陥新生、感染症、傷
漏れ（wound leak）、創傷離開、上皮欠損の存続および
全体的な角膜状態を観察した。角膜の超音波膜厚測定
は、手術前、手術後１日、１週間、１ヶ月および２ヶ月
で行った。この研究を行った患者総数は１５人である。
角膜膜厚のグループ間差を分析し、対ｔ−テストを用い
て有意差があるかどうか評価した。結論 ヒト角膜におけるデキストラン用量応答曲線 角膜厚についての４℃で１２日間インキュベートしたヒ
ト角膜の硫酸コンドロイチン用量応答曲線を図１に示
す。１．３５％硫酸コンドロイチン含有ＤｅｘｓｏｌTM
でインキュベートした角膜は、１日、７日および１２日
で有効な薄さであった。これらの時点での角膜厚の測定
値は、０．４２５±０．０８２ｍｍ、０．５３０±０．
０４０ｍｍおよび０．５７２±０．０４３ｍｍであっ
た。１．５％−２．０％硫酸コンドロイチン含有媒体で
インキュベートした角膜は、同時点で角膜脱腫脹が増加
し、２．５％硫酸コンドロイチンで角膜は最も薄いこと
を示した。インキュベーション後１日、７日および１２
日後の角膜厚はそれぞれ０．４０５±０．０２１ｍｍ、
０．４８０±０．０４２ｍｍ、０．４８０±０．０２８
ｍｍであった。１２日間ＤｅｘｓｏｌTM中に保存した角
膜は３４℃に暖めた後腫脹は１９．６％増加することを
示した。硫酸コンドロイチン１．５％−１．７５％に保
存した角膜の加温後の腫脹は統計的には差のない増加で
あった。２．０％および２．５％硫酸コンドロイチン中
に保存した角膜は加温後の腫脹は１５．６％および１
３．５％増加を示した（図２）。
フィー、偽水晶体水疱性角膜症、角膜瘢痕、円錐角膜お
よび移植の失敗。手術前の試験は細孔強制視力、眼内
圧、、細隙灯および検眼鏡試験からなる。The United S
tates of Health and Human Servicesのガイドラインに
準拠し、臨床試験の全関係者から同意を得た。この任意
的臨床試験は Institutional Review Board の同意とモ
ニタを得て行われた。手術法 移植時に角膜を室温に戻した。提供者の角膜を角トレフ
ィンプレスを用いて内皮側から切断した。ヒアルロン酸
ナトリウム（Healon）またはヒアルロン酸ナトリウム−
硫酸コンドロイチン（Viscoat ）を全てのケースで用い
た。手術中および手術後の治療は全例で略同様である。
縫合術は１２インタラプテッド１０−０縫合とランニン
グ１１−０縫合［ナイロンまたはメルシレン（mersilen
e)］の組み合わせからなる。各施術の最後にゲンタマイ
シン、ベタメサゾンおよびアンセフ（Ancef)を結膜下に
注射した。手術後の処置 手術後全ての患者は最初の１ヶ月１日４回ネオマイシン
またはゲンタマインシ点滴を受けた。必要な場合には代
表的なステロイドを塗布した。手術後最初の２ヶ月間、
患者の合併症、拒絶反応、角膜の欠陥新生、感染症、傷
漏れ（wound leak）、創傷離開、上皮欠損の存続および
全体的な角膜状態を観察した。角膜の超音波膜厚測定
は、手術前、手術後１日、１週間、１ヶ月および２ヶ月
で行った。この研究を行った患者総数は１５人である。
角膜膜厚のグループ間差を分析し、対ｔ−テストを用い
て有意差があるかどうか評価した。結論 ヒト角膜におけるデキストラン用量応答曲線 角膜厚についての４℃で１２日間インキュベートしたヒ
ト角膜の硫酸コンドロイチン用量応答曲線を図１に示
す。１．３５％硫酸コンドロイチン含有ＤｅｘｓｏｌTM
でインキュベートした角膜は、１日、７日および１２日
で有効な薄さであった。これらの時点での角膜厚の測定
値は、０．４２５±０．０８２ｍｍ、０．５３０±０．
０４０ｍｍおよび０．５７２±０．０４３ｍｍであっ
た。１．５％−２．０％硫酸コンドロイチン含有媒体で
インキュベートした角膜は、同時点で角膜脱腫脹が増加
し、２．５％硫酸コンドロイチンで角膜は最も薄いこと
を示した。インキュベーション後１日、７日および１２
日後の角膜厚はそれぞれ０．４０５±０．０２１ｍｍ、
０．４８０±０．０４２ｍｍ、０．４８０±０．０２８
ｍｍであった。１２日間ＤｅｘｓｏｌTM中に保存した角
膜は３４℃に暖めた後腫脹は１９．６％増加することを
示した。硫酸コンドロイチン１．５％−１．７５％に保
存した角膜の加温後の腫脹は統計的には差のない増加で
あった。２．０％および２．５％硫酸コンドロイチン中
に保存した角膜は加温後の腫脹は１５．６％および１
３．５％増加を示した（図２）。
【００４５】試験した全硫酸コンドロイチン濃度につい
て全ての単層内皮細胞は無傷で、正常な内皮細胞形態で
あった。より高い硫酸コンドロイチン濃度でインキュベ
ートした角膜は基質ひだおよびデスメー膜のアリザリン
レッドＳ染色域は殆どなかった。全てのアリザリンレッ
ドＳ染色は全角膜で最小であり、基質ひだの部分に限ら
れていた。結論として、１．３５％−２．５％硫酸コン
ドロイチン中に保存した全ての角膜は、４℃で１２日間
の保存後も無傷の角膜内皮を有していた。医療用規定溶
液（２．５％硫酸コンドロイチン含有）中に保存された
角膜は１２日の保存期間中、最も優れた角膜脱腫脹を維
持した。この試験グループについては３４℃に再加温後
の最小の角膜の折り畳みと腫脹も注目に値する。これら
の結果は、移植用に４℃でヒト角膜を保存するのに本発
明の血清不含医療用規定溶液を使用するのを支持するも
のである。ヒト角膜内皮細胞の［ 3Ｈ］−チミジン取り込み 血清不含医療用規定溶液の成分を評価するためにこの研
究を行った。
て全ての単層内皮細胞は無傷で、正常な内皮細胞形態で
あった。より高い硫酸コンドロイチン濃度でインキュベ
ートした角膜は基質ひだおよびデスメー膜のアリザリン
レッドＳ染色域は殆どなかった。全てのアリザリンレッ
ドＳ染色は全角膜で最小であり、基質ひだの部分に限ら
れていた。結論として、１．３５％−２．５％硫酸コン
ドロイチン中に保存した全ての角膜は、４℃で１２日間
の保存後も無傷の角膜内皮を有していた。医療用規定溶
液（２．５％硫酸コンドロイチン含有）中に保存された
角膜は１２日の保存期間中、最も優れた角膜脱腫脹を維
持した。この試験グループについては３４℃に再加温後
の最小の角膜の折り畳みと腫脹も注目に値する。これら
の結果は、移植用に４℃でヒト角膜を保存するのに本発
明の血清不含医療用規定溶液を使用するのを支持するも
のである。ヒト角膜内皮細胞の［ 3Ｈ］−チミジン取り込み 血清不含医療用規定溶液の成分を評価するためにこの研
究を行った。
【００４６】試験媒体をヒト角膜内皮細胞を用いた［ 3
Ｈ］−チミジン取り込みバイオアッセイで評価した。こ
のバイオアッセイはこれらの細胞のＤＮＡへの［ 3Ｈ］
−チミジンの取り込みを阻害または刺激するかどうかを
評価するための感度の高い方法である。１または１４成
分以上を含む試験溶液でインキュベートしたヒト角膜の
内皮細胞による［ 3Ｈ］−チミジンの取り込みを血清不
含ＤｅｘｓｏｌTM培地と１０％ＦＢＳ添加ＣＳＭTM培地
と比較した（図３）。統計的有意差（Ｐ＜０．０５）の
評価には、一元変動分析とニューマン−ケウルス マル
チプルレンジテストを用いた。
Ｈ］−チミジン取り込みバイオアッセイで評価した。こ
のバイオアッセイはこれらの細胞のＤＮＡへの［ 3Ｈ］
−チミジンの取り込みを阻害または刺激するかどうかを
評価するための感度の高い方法である。１または１４成
分以上を含む試験溶液でインキュベートしたヒト角膜の
内皮細胞による［ 3Ｈ］−チミジンの取り込みを血清不
含ＤｅｘｓｏｌTM培地と１０％ＦＢＳ添加ＣＳＭTM培地
と比較した（図３）。統計的有意差（Ｐ＜０．０５）の
評価には、一元変動分析とニューマン−ケウルス マル
チプルレンジテストを用いた。
【００４７】このバイオアッセイでは、細胞は増殖状態
（活発に有糸分裂をしている状態）に保った。ヒト角膜
内皮細胞ＤＮＡへの［ 3Ｈ］−チミジン取り込みの阻害
は、細胞代謝の阻害、細胞状態の悪化および細胞毒の可
能性の指標である。１０％ＦＢＳを低下したＣＳＭTM培
地でインキュベートしたヒト角膜内皮細胞は、新たに調
整したコントロールの血清不含ＤｅｘｓｏｌTM培地と比
較すると、統計的に有意に高い［ 3Ｈ］−チミジン取り
込み率を示した。１．７５％または２．０％硫酸コンド
ロイチンでインキュベートしたＨＣＥ細胞は、血清不含
ＤｅｘｓｏｌTMでインキュベートしたＨＣＥ細胞と統計
的に近似した［ 3Ｈ］−チミジン取り込み率を示した。
以下の各成分と組み合わせた２．５％硫酸コンドロイチ
ンおよび１％デキストランの添加は、血清不含Ｄｅｘｓ
ｏｌTMでインキュベーションしたＨＣＥ細胞と統計的に
近似する［ 3Ｈ］−チミジン取り込み率を示した（成
分：Ｆe(ＮＯ3)3 ・９Ｈ2 Ｏ、硫酸アデニン、Ｌ−ヒド
ロキシプロリン、アスコルビン酸、リン酸α−トコフェ
ロール、Ｄ−ビオチン、塩酸ピリドキシン、イノシンお
よびビタミンＢ12）。アデノミンまたはアデノミン、ア
デミンおよびイノシンの組み合わせを添加した２．５％
硫酸コンドロイチンおよび１％デキストラン添加媒体
は、ＤｅｘｓｏｌTMコントロール培地でインキュベート
したＨＣＥ細胞より統計的に大きい［ 3Ｈ］−チミジン
取り込み率を示した。全ての１４種の成分を補充ＭＥＭ
基礎培地中、２．５％硫酸コンドロイチンと組み合わせ
ると、ＤｅｘｓｏｌTMコントロールと比べ統計的に大き
い［ 3Ｈ］−チミジン取り込み率を示した。試験した全
ての媒体は、７２時間のインキュベーション期間を通し
て正常内皮細胞の形態を維持した。
（活発に有糸分裂をしている状態）に保った。ヒト角膜
内皮細胞ＤＮＡへの［ 3Ｈ］−チミジン取り込みの阻害
は、細胞代謝の阻害、細胞状態の悪化および細胞毒の可
能性の指標である。１０％ＦＢＳを低下したＣＳＭTM培
地でインキュベートしたヒト角膜内皮細胞は、新たに調
整したコントロールの血清不含ＤｅｘｓｏｌTM培地と比
較すると、統計的に有意に高い［ 3Ｈ］−チミジン取り
込み率を示した。１．７５％または２．０％硫酸コンド
ロイチンでインキュベートしたＨＣＥ細胞は、血清不含
ＤｅｘｓｏｌTMでインキュベートしたＨＣＥ細胞と統計
的に近似した［ 3Ｈ］−チミジン取り込み率を示した。
以下の各成分と組み合わせた２．５％硫酸コンドロイチ
ンおよび１％デキストランの添加は、血清不含Ｄｅｘｓ
ｏｌTMでインキュベーションしたＨＣＥ細胞と統計的に
近似する［ 3Ｈ］−チミジン取り込み率を示した（成
分：Ｆe(ＮＯ3)3 ・９Ｈ2 Ｏ、硫酸アデニン、Ｌ−ヒド
ロキシプロリン、アスコルビン酸、リン酸α−トコフェ
ロール、Ｄ−ビオチン、塩酸ピリドキシン、イノシンお
よびビタミンＢ12）。アデノミンまたはアデノミン、ア
デミンおよびイノシンの組み合わせを添加した２．５％
硫酸コンドロイチンおよび１％デキストラン添加媒体
は、ＤｅｘｓｏｌTMコントロール培地でインキュベート
したＨＣＥ細胞より統計的に大きい［ 3Ｈ］−チミジン
取り込み率を示した。全ての１４種の成分を補充ＭＥＭ
基礎培地中、２．５％硫酸コンドロイチンと組み合わせ
ると、ＤｅｘｓｏｌTMコントロールと比べ統計的に大き
い［ 3Ｈ］−チミジン取り込み率を示した。試験した全
ての媒体は、７２時間のインキュベーション期間を通し
て正常内皮細胞の形態を維持した。
【００４８】ヒト角膜内皮細胞を用いた［ 3Ｈ］−チミ
ジン取り込みの研究から、結論として、２．５％硫酸コ
ンドロイチン、１％デキストラン、Ｆe(ＮＯ3)3 ・９Ｈ
2 Ｏ、硫酸アデニン、コレステロール、Ｌ−ヒドロキシ
プロリン、アスコルビン酸、リン酸α−トコフェロー
ル、Ｄ−ビオチン、カルシフェロール、ナイアシン、ｐ
−アミノ安息香酸、塩酸ピリドキシン、アデノシン、イ
ノシンおよびビタミンＢ 12からなる血清不含医療用規定
溶液（配合Ａ）はバイオアッセイのパラメータによって
評価すると血清不含ＤｅｘｓｏｌTM培地より統計的に大
きく［ 3Ｈ］−チミジン取り込み率を刺激できた。この
血清不含医療用規定溶液は、さらに完全な規定溶液を提
供することによって、コントロールＤｅｘｓｏｌTMより
もヒト角膜内皮細胞の有糸分裂ポテンシャルを強化する
ことができる。従って、この溶液は４℃保存媒体として
使用し得る。臨床試験 １５角膜を血清不含医療用規定溶液（配合Ａ）を用い移
植した。一人の外科医によって全患者の手術をし、全患
者について以下の研究を行った。提供者の角膜は以下の
特徴を持っていた。
ジン取り込みの研究から、結論として、２．５％硫酸コ
ンドロイチン、１％デキストラン、Ｆe(ＮＯ3)3 ・９Ｈ
2 Ｏ、硫酸アデニン、コレステロール、Ｌ−ヒドロキシ
プロリン、アスコルビン酸、リン酸α−トコフェロー
ル、Ｄ−ビオチン、カルシフェロール、ナイアシン、ｐ
−アミノ安息香酸、塩酸ピリドキシン、アデノシン、イ
ノシンおよびビタミンＢ 12からなる血清不含医療用規定
溶液（配合Ａ）はバイオアッセイのパラメータによって
評価すると血清不含ＤｅｘｓｏｌTM培地より統計的に大
きく［ 3Ｈ］−チミジン取り込み率を刺激できた。この
血清不含医療用規定溶液は、さらに完全な規定溶液を提
供することによって、コントロールＤｅｘｓｏｌTMより
もヒト角膜内皮細胞の有糸分裂ポテンシャルを強化する
ことができる。従って、この溶液は４℃保存媒体として
使用し得る。臨床試験 １５角膜を血清不含医療用規定溶液（配合Ａ）を用い移
植した。一人の外科医によって全患者の手術をし、全患
者について以下の研究を行った。提供者の角膜は以下の
特徴を持っていた。
【００４９】角膜の提供者の年齢（平均５３±１９
才）、死から摘出までの時間（平均４．３±２．７時
間）および死からの保存時間（平均４．３±３．２時
間）。４℃での角膜の保存時間は４．３日であった（１
〜７日）１００％配合Ａで保存された移植角膜は２ヶ月
でも澄明であった。この患者群中では永続的な上皮欠損
はみられなかった。手術中の角膜厚は０．６２３±０．
０５４ｍｍであった。同様の条件のもとでＤｅｘｓｏｌ
TM中に保存した角膜の手術中の厚さの測定値は、０．７
８７±０．０４７ｍｍであった。配合ＡおよびＤｅｘｓ
ｏｌTM保存角膜の１週間時の厚さはそれぞれ０．６５０
±０．０８４ｍｍおよび０．７４３±０．０９３ｍｍで
あった。配合Ａ保存膜は、手術中および手術後１週間に
おいて有意に薄かった（図４）。２ヶ月の追跡期間中に
全患者で角膜は段々薄くなった（角膜厚：１ヶ月０．６
１２±０．１６７ｍｍ、２ヶ月０．５４４±０．０６２
ｍｍ）。眼内圧は全患者正常範囲内であった。配合Ａ保
存角膜群では基本的に提供角膜に問題はなかった。
才）、死から摘出までの時間（平均４．３±２．７時
間）および死からの保存時間（平均４．３±３．２時
間）。４℃での角膜の保存時間は４．３日であった（１
〜７日）１００％配合Ａで保存された移植角膜は２ヶ月
でも澄明であった。この患者群中では永続的な上皮欠損
はみられなかった。手術中の角膜厚は０．６２３±０．
０５４ｍｍであった。同様の条件のもとでＤｅｘｓｏｌ
TM中に保存した角膜の手術中の厚さの測定値は、０．７
８７±０．０４７ｍｍであった。配合ＡおよびＤｅｘｓ
ｏｌTM保存角膜の１週間時の厚さはそれぞれ０．６５０
±０．０８４ｍｍおよび０．７４３±０．０９３ｍｍで
あった。配合Ａ保存膜は、手術中および手術後１週間に
おいて有意に薄かった（図４）。２ヶ月の追跡期間中に
全患者で角膜は段々薄くなった（角膜厚：１ヶ月０．６
１２±０．１６７ｍｍ、２ヶ月０．５４４±０．０６２
ｍｍ）。眼内圧は全患者正常範囲内であった。配合Ａ保
存角膜群では基本的に提供角膜に問題はなかった。
【００５０】血清不含医療用規定溶液（配合Ａ）は手術
中および手術後に正常角膜脱腫脹を維持するのに有効で
あった。内皮細胞機能および代謝が維持され、角膜の正
常水和を許容し、一定の角膜厚と手術後の透明性が保た
れた。
中および手術後に正常角膜脱腫脹を維持するのに有効で
あった。内皮細胞機能および代謝が維持され、角膜の正
常水和を許容し、一定の角膜厚と手術後の透明性が保た
れた。
【００５１】
【００５２】
【００５３】
【００５４】ＴＣ−１９９、ＣＳＭTMおよび血清不含医
療用規定溶液の配合である。
療用規定溶液の配合である。
【図１】４℃保存後のヒト角膜の角膜厚である。
【図２】４℃１２日間保存後および保存後２４℃に暖め
るまでの角膜厚である。
るまでの角膜厚である。
【図３】血清不含医療用規定溶液組成物でインキュベー
トしたヒト角膜内皮細胞の［ 3Ｈ］−チミジン取り込み
である。
トしたヒト角膜内皮細胞の［ 3Ｈ］−チミジン取り込み
である。
【図４】手術後の角膜厚（ｍｍ）である。
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(72)発明者 リチヤード エル．リンドストローム
アメリカ合衆国、ミネソタ州 55331、エ
クセルシオール、レイクビユー アベニユ
ー 20050
(72)発明者 デブラ スケルニツク
アメリカ合衆国、ミネソタ州 55008、ケ
ンブリツジ、ルート ５、ボツクス 344
Claims (10)
- 【請求項１】水性栄養素および電解液、グリコサミノグ
リカン、脱腫脹剤、エネルギ源、緩衝剤、抗酸化剤、膜
安定剤、抗生物質および／または抗真菌剤、ＡＴＰ前駆
物質並びに細胞栄養補助剤からなることを特徴とする血
清不含医療用規定溶液。 - 【請求項２】ａ． イーグル最少必須培地（ＭＥＭ）、
ＴＣ１９９培地、およびイーグル最少必須培地とＴＣ１
９９培地の混合培地からなる群から選ばれる水性栄養素
および電解液と、 ｂ． 硫酸コンドロイチン、硫酸デルマタン、硫酸デル
マチン、硫酸ヘパリン、硫酸ヘパラン、硫酸ケラチン、
硫酸ケラタン、およびヒアルロン酸からなる群から選ば
れる０．０１ｍｇ／ｍｌから１００ｍｇ／ｍｌのグリコ
サミノグリカンと、 ｃ． デキストラン、硫酸デキストラン、ポリビニルピ
ロリドン、ポリエチレングリコール、酢酸ポリビニル、
ヒドロキシプロピルメチルセルロース、およびカルボキ
シプロピルメチルセルロースからなる群から選ばれる
０．０１ｍｇ／ｍｌから１００ｍｇ／ｍｌの脱腫脹剤
と、 ｄ． グルコース、ピルベート、シュークロース、フル
クトース、およびデキストロースからなる群から選ばれ
る０．０５ｍＭから１０ｍＭのエネルギ源と、 ｅ． 炭酸水素塩緩衝液、およびＨＥＰＥＳ緩衝液から
なる群から選ばれる０．１ｍＭから１００ｍＭの緩衝剤
と、 ｆ． アスコルビン酸、２−メルカプトエタノール、グ
ルタチオン、およびα−トコフェロールからなる群から
選ばれる０．００１ｍＭから１０ｍＭの抗酸化剤と、 ｇ． ビタミンＡ、ビタミンＢ、レチン酸、エタノール
アミン、ホスホエタノールアミン、セレン、およびトラ
ンスフェリンからなる群から選ばれる０．０１ｍｇ／ｍ
ｌから５００ｍｇ／ｍｌの膜安定剤と、 ｈ． アンホテリシン−Ｂ、硫酸ゲンタマイシン、硫酸
カナマイシン、硫酸ネオマイシン、ナイスタチン、ペニ
シリン、トブラマイシン、およびストレプトマイシンか
らなる群から選ばれる０．１μｇ／ｍｌから１ｍｇ／ｍ
ｌの抗生物質および／または抗真菌剤と、 ｉ． アデノシン、イノシン、およびアデニンからなる
群から選ばれる０．００１ｍＭから１０ｍＭのＡＴＰ前
駆物質と、 ｊ． コレステロール、Ｌ−ヒドロキシプロリン、ｄ−
ビオチン、カルシフェロール、ナイアシン、ｐ−アミノ
安息香酸、塩酸ピリドキシン、ビタミンＢ12、Ｆe(ＮＯ
3)3 、および非必須アミノ酸からなる群から選ばれる
０．００１ｍＭから１０ｍＭの細胞栄養補助剤と、 からなることを特徴とする血清不含医療用規定溶液。 - 【請求項３】水性栄養素および電解液、グリコサミノグ
リカン、脱腫脹剤、エネルギ源、緩衝剤、抗酸化剤、膜
安定剤、抗生物質および／または抗真菌剤、ＡＴＰ前駆
物質並びに細胞栄養補助剤からなる生理的ｐＨ、低温
（２℃から１５℃）でヒト角膜組織を含む眼組織の保存
効果を維持あるいは強化する成分を含むことを特徴とす
る血清不含医療用規定溶液。 - 【請求項４】請求項３記載の血清不含医療用規定溶液中
で、提供者の角膜組織を切除し、該組織を保存し、次い
で該組織受容者である患者に移植することからなる浸透
角膜移植法において、該組織の保存温度は、約２℃から
１５℃であることを特徴とする血清不含医療用規定溶液
を用いた角膜の保存方法。 - 【請求項５】ａ． イーグル最少必須培地（ＭＥＭ）、
ＴＣ１９９培地およびイーグル最少必須培地とＴＣ１９
９培地の混合培地からなる群から選ばれる水性栄養素、
および電解液と、 ｂ． 硫酸コンドロイチン、硫酸デルマタン、硫酸デル
マチン、硫酸ヘパリン、硫酸ヘパラン、硫酸ケラチン、
硫酸ケラタン、およびヒアルロン酸からなる群から選ば
れる０．０１ｍｇ／ｍｌから１００ｍｇ／ｍｌのグリコ
サミノグリカンと、 ｃ． デキストラン、硫酸デキストラン、ポリビニルピ
ロリドン、ポリエチレングリコール、酢酸ポリビニル、
ヒドロキシプロピルメチルセルロース、およびカルボキ
シプロピルメチルセルロースからなる群から選ばれる
０．０１ｍｇ／ｍｌから１００ｍｇ／ｍｌの脱腫脹剤
と、 ｄ． グルコース、ピルベート、シュークロース、フル
クトース、およびデキストロースからなる群から選ばれ
る０．０５ｍＭから１０ｍＭのエネルギ源と、 ｅ． 炭酸水素塩緩衝液、およびＨＥＰＥＳ緩衝液から
なる群から選ばれる０．１ｍＭから１００ｍＭの緩衝剤
と、 ｆ． アスコルビン酸、２−メルカプトエタノール、グ
ルタチオン、およびα−トコフェロールからなる群から
選ばれる０．００１ｍＭから１０ｍＭの抗酸化剤と、 ｇ． ビタミンＡ、ビタミンＢ、レチン酸、エタノール
アミン、ホスホエタノールアミン、セレン、およびトラ
ンスフェリンからなる群から選ばれる０．０１ｍｇ／ｍ
ｌから５００ｍｇ／ｍｌの膜安定剤と、 ｈ． アンホテリシン−Ｂ、硫酸ゲンタマイシン、硫酸
カナマイシン、硫酸ネオマイシン、ナイスタチン、ペニ
シリン、トブラマイシン、およびストレプトマイシンか
らなる群から選ばれる０．１μｇ／ｍｌから１ｍｇ／ｍ
ｌの抗生物質および／または抗真菌剤と、 ｉ． アデノシン、イノシン、およびアデニンからなる
群から選ばれる０．００１ｍＭから１０ｍＭのＡＴＰ前
駆物質と、 ｊ． コレステロール、Ｌ−ヒドロキシプロリン、ｄ−
ビオチン、カルシフェロール、ナイアシン、ｐ−アミノ
安息香酸、塩酸ピリドキシン、ビタミンＢ12、Ｆe(ＮＯ
3)3 、および非必須アミノ酸からなる群から選ばれる
０．００１ｍＭから１０ｍＭの細胞栄養補助剤と、 からなる生理的ｐＨ、低温（２℃から１５℃）でヒト角
膜組織を含む眼組織の保存効果を維持あるいは強化する
成分を含むことを特徴とする血清不含医療用規定溶液。 - 【請求項６】請求項５記載の血清不含医療用規定溶液中
で、提供者の角膜組織を切除し、該組織を保存し、次い
で該組織受容者である患者に移植することからなる浸透
角膜移植法において、該組織の保存を約２℃から１５℃
の温度で行うことを特徴とする血清不含医療用規定溶液
を用いた角膜の保存方法。 - 【請求項７】ａ． 水性栄養素および電解液としてのイ
ーグル最少培地（ＭＥＭ）と、 ｂ． グリコサミノグリカンとしての０．０１ｍｇ／ｍ
ｌから１００ｍｇ／ｍｌの硫酸コンドロイチンと、 ｃ． 脱腫脹剤としての０．０１ｍｇ／ｍｌから１００
ｍｇ／ｍｌのデキストランと、 ｄ． エネルギ源としての０．０５ｍＭから１０ｍＭの
ピルベートまたはデキストロースと、 ｅ． 緩衝剤としての０．１ｍＭから１００ｍＭの炭酸
水素塩緩衝液またはＨＥＰＥＳ緩衝液と、 ｆ． 抗酸化剤としての０．００１ｍＭから１０ｍＭの
２−メルカプトエタノールまたはα−トコフェロール
と、 ｇ． 抗生物質および／または抗真菌剤としての０．１
μｇ／ｍｌから１ｍｇ／ｍｌの硫酸ゲンタマイシンと、 ｈ． ＡＴＰ前駆物質としての０．００１ｍＭから１０
ｍＭのアデノシン、イノシンまたはアデニンと、 ｉ． 細胞栄養補助剤としての０．００１ｍＭから１０
ｍＭのコレステロール、Ｌ−ヒドロキシプロリン、ｄ−
ビオチン、カルシフェロール、ナイアシン、ｐ−アミノ
安息香酸、塩酸ピリドキシン、ビタミンＢ12、Ｆe(ＮＯ
3)3 、または非必須アミノ酸からなる生理的ｐＨ、低温
（２℃から１５℃）でヒト角膜組織を含む眼組織の保存
効果を維持あるいは強化する成分を含むことを特徴とす
る血清不含医療用規定溶液。 - 【請求項８】請求項７記載の血清不含医療用規定溶液中
で、提供者の角膜組織を切除し、該組織を保存し、次い
で該組織受容者である患者に移植することからなる浸透
角膜移植法において、該組織の保存を約２℃から１５℃
の温度で行うことを特徴とする血清不含医療用規定溶液
を用いた角膜の保存方法。 - 【請求項９】ａ． 水性栄養素および電解液としてのイ
ーグル最少培地（ＭＥＭ）と、 ｂ． グリコサミノグリカンとしての２．５％硫酸コン
ドロイチンと、 ｃ． 脱腫脹剤としての１％デキストランと、 ｄ． エネルギ源としての１１０ｍｇ／ｌピルベートま
たは１０００ｍｇ／ｌグルコースと、 ｅ． 緩衝剤としての２２００ｍｇ／ｌ炭酸水素塩緩衝
液または２５ｍＭＨＥＰＥＳ緩衝液と、 ｆ． 抗酸化剤としての０．５ｍＭ ２−メルカプトエ
タノールまたは０．０１ｍｇ／α−トコフェロールと、 ｇ． 抗生物質および／または抗真菌剤としての１００
ｍｇ／ｌ硫酸ゲンタマイシンと、 ｈ． ＡＴＰ前駆物質としての５ｍｇ／ｌアデノシン、
１０ｍｇ／ｌイノシンまたは１０ｍｇ／ｌアデニンと、 ｉ． 細胞栄養補助剤としての０．２ｍｇ／ｌコレステ
ロール、１０ｍｇ／ｌＬ−ヒドロキシプロリン、０．０
１ｍｇ／ｌｄ−ビオチン、０．１ｍｇ／ｌカルシフェロ
ール、０．０２５ｍｇ／ｌナイアシン、０．０５ｍｇ／
ｌｐ−アミノ安息香酸、０．２５ｍｇ／ｌ塩酸ピリドキ
シン、１．３６ｍｇ／ｌビタミンＢ12、０．５ｍｇ／ｌ
Ｆe(ＮＯ3)3 、または０．１ｍＭ 非必須アミノ酸から
なる生理的ｐＨ、低温（２℃から１５℃）でヒト角膜組
織を含む眼組織の保存効果を維持あるいは強化する成分
を含むことを特徴とする血清不含医療用規定溶液。 - 【請求項１０】請求項９記載の血清不含医療用規定溶液
中で、提供者の角膜組織を切除し、該組織を保存し、次
いで該組織受容者である患者に移植することからなる浸
透角膜移植法において、該組織の保存を約２℃から１５
℃の温度で行うことを特徴とする血清不含医療用規定溶
液を用いた角膜の保存方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3152056A JPH057619A (ja) | 1991-06-24 | 1991-06-24 | 血清不含医療用規定溶液およびその溶液を用いた角膜の保存方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3152056A JPH057619A (ja) | 1991-06-24 | 1991-06-24 | 血清不含医療用規定溶液およびその溶液を用いた角膜の保存方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH057619A true JPH057619A (ja) | 1993-01-19 |
Family
ID=15532086
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3152056A Pending JPH057619A (ja) | 1991-06-24 | 1991-06-24 | 血清不含医療用規定溶液およびその溶液を用いた角膜の保存方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH057619A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1998053806A1 (fr) * | 1997-05-26 | 1998-12-03 | New Vision Co., Ltd. | Compositions medicinales a administration topique renfermant les vitamines d et les vitamines k |
| JP2010059200A (ja) * | 2002-05-22 | 2010-03-18 | Fushimi Pharm Co Ltd | Ｄ−アロースの生理活性作用の利用への使用 |
| AU2020241910A1 (en) * | 2019-03-15 | 2021-10-07 | Megakaryon Corporation | Storage liquid for mammalian cells |
| CN114052008A (zh) * | 2021-11-23 | 2022-02-18 | 中山大学附属第三医院（中山大学肝脏病医院） | 一种保存液及其应用 |
-
1991
- 1991-06-24 JP JP3152056A patent/JPH057619A/ja active Pending
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1998053806A1 (fr) * | 1997-05-26 | 1998-12-03 | New Vision Co., Ltd. | Compositions medicinales a administration topique renfermant les vitamines d et les vitamines k |
| JP2010059200A (ja) * | 2002-05-22 | 2010-03-18 | Fushimi Pharm Co Ltd | Ｄ−アロースの生理活性作用の利用への使用 |
| AU2020241910A1 (en) * | 2019-03-15 | 2021-10-07 | Megakaryon Corporation | Storage liquid for mammalian cells |
| EP3940061A4 (en) * | 2019-03-15 | 2023-01-04 | Megakaryon Corporation | PRESERVATION LIQUID FOR MAMMALIAN CELLS |
| AU2020241910B2 (en) * | 2019-03-15 | 2023-12-21 | Megakaryon Corporation | Storage liquid for mammalian cells |
| CN114052008A (zh) * | 2021-11-23 | 2022-02-18 | 中山大学附属第三医院（中山大学肝脏病医院） | 一种保存液及其应用 |
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