JPWO2020067392A1 - 金属材料、発酵微生物の応答制御方法及び発酵食品の製造方法 - Google Patents
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Abstract
Description
前記結晶粒の平均結晶粒径が互いに異なる複数の前記金属材料を準備する工程、
前記複数の金属材料のそれぞれと前記発酵微生物とを接触させる工程、
前記接触後に前記金属材料の結晶粒の平均結晶粒径ごとの前記発酵微生物の応答プロファイルを取得する工程、及び
前記応答プロファイルに基づき前記発酵微生物の最適な応答を与える前記結晶粒の平均結晶粒径を決定する工程
を含む発酵微生物の応答制御方法に関する。
本実施形態に係る金属材料を組織する結晶粒は、発酵微生物の応答を制御するための平均結晶粒径を有する。本発明は、結晶粒が特定の平均結晶粒径を有する場合に、金属材料と接触する発酵微生物の応答が顕著に変化するという事象を利用した新規なコンセプトに基づくものである。発酵微生物の応答とは、発酵微生物を利用するプロセスにおいて目的とされる発酵微生物が示すあらゆる反応をいい、例えば、発酵微生物の増殖や固定化(吸着)、集合(凝集)、分散(離散)、場合によっては死滅とともに、発酵微生物からの発酵生成物(例えば、アルコール、乳酸、アミノ酸等)や機能性成分(例えば、タンパク質、脂質、ペプチド等)の産生、発酵微生物からの遺伝子の発現等が挙げられる。本実施形態に係る金属材料によれば、この金属材料を利用する発酵食品の製造プロセスにおいて微生物の応答の最適化を図ることができ、その結果、発酵食品の製造歩留まりの向上や発酵食品の高機能化を達成することができる。
本実施形態に係る発酵微生物の応答制御方法は、上述した結晶粒により組織される金属材料を用いて発酵微生物の応答を制御する方法である。当該方法は、金属材料準備工程、接触工程、応答プロファイル取得工程、及び平均結晶粒径決定工程を含む。以下、各工程について順に説明する。
本工程では、結晶粒の平均結晶粒径が互いに異なる複数の金属材料を準備する。例えば、結晶粒の平均結晶粒径を100nmから10μmまでの範囲内に調整したステンレス鋼を複数準備する。平均結晶粒径の点数は多い方が発酵微生物の応答のプロファイルの極値の読み取りが容易となる点で好ましい。金属材料が板状の場合の代表的な平均結晶粒径の値としては0.5μm(500nm)、1μm、1.5μm、2μm、3μm、9μm等が挙げられる。金属材料が線状(ワイヤ状)の代表的な平均結晶粒径の値としては、0.5μm〜0.8μm、1μm〜2μm、2μm〜3μm、4μm〜6μm、8μm〜10μmのそれぞれの範囲から選ばれる値等が挙げられる。
本工程では、複数の金属材料のそれぞれと発酵微生物とを接触させる。接触の態様は特に限定されず、金属材料の表面に発酵微生物を直接載置してもよく、発酵微生物の分散液(又は懸濁液)を金属材料の表面に載置してもよく、発酵微生物の分散液(又は懸濁液)中に金属材料を投入してもよく、金属材料で形成された容器中に発酵微生物(発酵微生物の分散液を含む。)を収容してもよい。必要に応じて、加温、冷却、攪拌、振とう等の処理を併せて行ってもよい。目的とする発酵微生物の応答に応じて適宜接触態様を選択することができる。
炭素源としては、グルコース、フルクトース等の単糖類;ラクトース、スクロース、マルトース等の二糖類;オリゴ糖類、セルロース、アミロース、キチン、アガロース等の多糖類;酢酸、プロピオン酸等の有機酸;エタノール、プロパノール等のアルコール類が挙げられる。これらの中でもグルコース、フルクトース、ラクトース、スクロース、マルトース等が好ましく、グルコース、ラクトース、マルトースがより好ましい。
(i)ペプトン
ペプトンとは、タンパク質を加水分解、酵素分解又は発酵することによって得られる、アミノ酸が複数結合した物質をいう。由来によって様々なペプトンが存在し、例えば、肉エキス、カゼインペプトン、魚肉ペプトン、大豆ペプトン、エンドウ豆ペプトン、小麦ペプトン、大麦ペプトン、綿実ペプトン等が挙げられる。本発明では、これらの中でもカゼインペプトン、大豆ペプトンを用いることが好ましい。
酵母エキスとは、酵母の有効成分を自己消化、酵素処理、熱水処理等で抽出したものをいう。例えば、パン酵母、ビール酵母、トルラ酵母由来のものが挙げられ、本発明ではいずれの酵母を用いてもよい。
接触時に存在し得る無機塩類の種類は、特には限定されない。例えば、カリウム、マグネシウム、ナトリウム、カルシウム、マンガン、コバルト、ニッケル、モリブデン、タングステン、鉄、亜鉛、銅等の、酢酸、リン酸、硫酸、炭酸、塩化物等の塩が挙げられる。これらの中でも、塩化カリウム、リン酸2水素カリウム、リン酸水素2カリウム、硫酸マグネシウム、リン酸マグネシウム、塩化ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化カルシウム、炭酸カルシウム、硫酸マンガン、硫酸第一鉄、硫酸亜鉛、硫酸銅からなる群から選ばれる少なくとも1種が好ましい。
その他、ビタミンや、接触時の発泡を防ぐための消泡剤等を添加してもよい。
本工程では、金属材料と発酵微生物との接触後に、金属材料の結晶粒の平均結晶粒径ごとの発酵微生物の応答プロファイルを取得する。x軸に結晶粒の平均結晶粒径をとり、y軸に発酵微生物の応答量の種類に応じた項目をとって二次元プロットを作成することで発酵微生物の応答プロファイルを取得することができる。さらに、x軸に結晶粒の平均結晶粒径をとり、応答量に影響を及ぼす他の因子(例えば、温度等)をy軸にとり、z軸に発酵微生物の応答量の種類に応じた項目をとって三次元プロットを作成してもよい。発酵微生物の応答量に対応する項目としては、上述のような発酵微生物の(増殖)数や金属材料への固定化数(吸着数)、集合度(凝集度)、分散度(離散度)、発酵微生物からの機能性成分(例えば、タンパク質、遺伝子等)の産生量や発現量等が挙げられる。
本工程では、上記手順で得られた応答プロファイルに基づき発酵微生物の最適な応答を与える結晶粒の平均結晶粒径を決定する。最適な応答であるか否かの判断は応答の種類によって行えばよい。図1A、図1B及び図1Cを参照しつつ、この決定手順を説明する。
本実施形態に係る発酵食品の製造方法は、金属材料と発酵微生物とを接触させる工程を含む。発酵食品としては特に限定されず、原材料を発酵微生物の作用により発酵させる発酵プロセスを経て得られる食品全般を含む。具体例としては、ヨーグルト、乳酸菌飲料、チーズ、パン、納豆、醤油、味噌、漬物、鰹節、紅茶、キムチ、酒、醸造酢等が挙げられる。
他の実施形態について、以下に例示する。
[1]結晶粒により組織される金属材料を用いる発酵食品の製造方法であって、
前記結晶粒の平均結晶粒径が互いに異なる複数の前記金属材料を準備する工程、
前記複数の金属材料のそれぞれと発酵微生物とを接触させる工程、
前記接触後に前記金属材料の結晶粒の平均結晶粒径ごとの前記発酵微生物の応答プロファイルを取得する工程、
前記応答プロファイルに基づき前記発酵微生物の最適な応答を与える前記結晶粒の平均結晶粒径を決定する工程、及び
前記決定された前記発酵微生物の最適な応答を与える前記結晶粒の平均結晶粒径を有する前記金属材料と前記発酵微生物とを接触させる工程
を含む発酵食品の製造方法。
[2]結晶粒により組織される金属材料を用いる発酵食品の製造方法であって、
前記結晶粒の平均結晶粒径が100nm以上10μm以下である金属材料と発酵微生物とを接触させる工程を含み、
前記接触により前記発酵微生物の個体数を増加させる発酵食品の製造方法。
[3]前記発酵微生物は、乳酸菌、納豆菌、酢酸菌、麹菌及び酵母からなる群より選択される少なくとも1種である[1]又は[2]に記載の発酵食品の製造方法。
[4]前記結晶粒の平均結晶粒径が100nm以上10μm以下である[1]に記載の発酵食品の製造方法。
[5]前記金属材料がステンレス鋼である[1]〜[4]のいずれか1項に記載の発酵食品の製造方法。
前記金属材料と酵母とを接触させる工程
を含む酵母の個体数を増加させる方法。
[7]前記平均結晶粒径が0.3〜0.8μmである[6]に記載の酵母の個体数を増加させる方法。
前記金属材料と乳酸菌とを接触させる工程
を含む乳酸菌の個体数を増加させる方法。
[9]前記平均結晶粒径が1.2〜1.8μmである[8]に記載の乳酸菌の個体数を増加させる方法。
《金属材料の準備》
ステンレス鋼(SUS304)の圧延処理及び加熱再結晶にて結晶粒の平均結晶粒径を0.5μm、1μm、1.5μm、2μm、3μm、9μmに調整した金属材料をそれぞれ用意した。金属材料の形状は、長さ10mm×幅10mm×厚さ0.1mmの板状であった。圧延処理及び加熱再結晶は次の手順で行った。すなわち、ステンレス鋼(SUS304)を回転ミルに複数回通過させて約40〜65%まで冷間圧延させ(1回につき約3〜15%の圧縮率)、次いで焼鈍を600〜850℃で10〜100秒間行う(昇温速度200℃/秒)ことで再結晶させ、最後に冷却して(冷却速度200〜400℃/秒)オーステナイト系ステンレス鋼を得た。
金属材料の平均結晶粒径は、上記で準備した金属材料の試験サンプルをイオン研磨装置(日立ハイテクノロジーズ社製、「IM4000」)によりアルゴンイオンによる研磨を行ったのち、結晶方位解析機能を持った電子顕微鏡(日立ハイテクノロジーズ社製、「SU−70」)により常温、真空環境(1×10−3Pa)にて測定を行った。各結晶粒のサイズの決定は、ある任意の測定範囲(すなわち観察画像;倍率1000倍)にある一つ一つの結晶粒の面積を求め、その面積と同じ面積を有する円を想定したときのその円の直径を算出することで行った。結晶粒の面積の算出及び同面積の円の直径の算出は、画像処理装置(TSLソリューションズ社製、「TSL OMI Analysis 7」)を用いて行った。次いで、その任意の測定範囲にあるすべての結晶粒径の和を結晶粒の数で除したものを平均結晶粒径(nm)とした。
ヨーグルト材料として、市販の「meiji プロビオヨーグルトLG21 砂糖ゼロ」(LG21 Lactobacillus gasseri OLL 2716(グラム陽性桿菌 通性嫌気性菌)含有)を準備した。シャーレにヨーグルトを展開し、各平均結晶粒径の金属材料をヨーグルトに完全に埋没させて35±2℃、24時間吸着反応を行った。コントロールとしてポリプロピレンフィルム(金属材料と同形状)をヨーグルトに埋没させた。吸着反応後、2〜3mLのPBS(滅菌済み)で直接洗浄し、さらに15mLのPBS(滅菌済み)で2回洗浄した。次いで、5mLのPBS(滅菌済み)中でボルテックスに40秒間かけて乳酸菌を遊離させた。これを原液のまま及び10倍希釈したものをそれぞれ3M社製「3Mペトリフィルム培地 乳酸菌数測定用プレート(LABプレート)」上に展開した。コントロールとして、ヨーグルトを106倍希釈したものと107倍希釈したものとを用意した。最後に35℃で46時間培養し、培養後の乳酸菌をステンレス鋼片1cm2当たりに吸着していた乳酸菌数(CFU/cm2(CFU:コロニーフォーミングユニット))としてカウントした。
《金属材料の準備》
実施例1と同様の金属材料を用いた。
試験用に、市販の「株式会社パイオニア企画 ドライイースト」1包分(3g)を37℃±2℃にて平衡化させた30mLのPBS(滅菌済み)に溶かした。そのうち3mLを「株式会社パイオニア企画 スキムミルク」1包分(6g)を300mLの蒸留水に溶かしたスキムミルク液(滅菌済み、25℃±2℃で平衡化)中に均一に混ぜ、反応液を準備した。反応液をシャーレに展開し、各平均結晶粒径の金属材料を反応液に完全に埋没させて35±2℃、2時間吸着反応を行った。コントロールとしてポリプロピレンフィルム(金属材料と同形状)を反応液に埋没させた。吸着反応後、2〜3mLのPBS(滅菌済み)で直接洗浄し、さらに15mLのPBS(滅菌済み)で2回洗浄した。次いで、5mLのPBS(滅菌済み)中でボルテックスに40秒間かけて酵母を遊離させた。これを原液のまま及び10倍希釈したものをそれぞれ3M社製「3Mペトリフィルム カビ・酵母迅速測定用プレート(RYMプレート)」上に展開した。コントロールとして、反応液を104倍希釈したものと105倍希釈したものとを用意した。最後に25℃±2℃で48時間培養し、培養後の酵母をステンレス鋼片1cm2当たりに吸着していた酵母数(CFU/cm2(CFU:コロニーフォーミングユニット))としてカウントした。
《金属材料の準備》
ステンレス鋼(SUS316L)の圧延処理及び加熱再結晶にて結晶粒の平均結晶粒径を0.7μm、1.5μm、2.8μm、4.9μm、9.6μmに調整した金属材料をそれぞれ用意した。金属材料の形状は、直径1mm、長さ13mmの線状(ワイヤ状)であった。圧延処理及び加熱再結晶は次の手順で行った。すなわち、ステンレス鋼(SUS316L)を回転ミルに複数回通過させて約40〜65%まで冷間圧延させ(1回につき約3〜15%の圧縮率)、次いで焼鈍を600〜850℃で10〜3600秒間行う(昇温速度200℃/秒)ことで再結晶させ、最後に冷却して(冷却速度200〜400℃/秒)オーステナイト系ステンレス鋼を得た。なお、平均結晶粒径は実施例1と同様の手順で測定した。
ヨーグルト材料として、市販の「meiji プロビオヨーグルトLG21 砂糖ゼロ」(LG21 Lactobacillus gasseri OLL 2716(グラム陽性桿菌 通性嫌気性菌)含有)を準備した。シャーレにヨーグルトを展開し、各平均結晶粒径の金属材料をヨーグルトに完全に埋没させて35±2℃、2時間吸着反応を行った。コントロールとして市販のSUS316L製で金属材料と同形状のもの(平均結晶粒径17.4μm)を反応液に埋没させた。吸着反応後、15mLのPBS(滅菌済み)で2回洗浄し、その後1mLのPBSで軽くリンスした。次いで、5mLのPBS(滅菌済み)中でボルテックスに40秒間かけて乳酸菌を遊離させた。これを原液のまま及び10倍希釈したものをそれぞれ3M社製「3Mペトリフィルム培地 乳酸菌数測定用プレート(LABプレート)」上に展開した。コントロールとして、ヨーグルトを106倍希釈したものと107倍希釈したものとを用意した。最後に35℃で48時間培養し、培養後の乳酸菌をステンレス鋼片1mm2当たりに吸着していた乳酸菌数(CFU/mm2(CFU:コロニーフォーミングユニット))としてカウントした。
Claims (14)
- 発酵微生物の応答を制御するための平均結晶粒径を有する結晶粒により組織される金属材料。
- 前記結晶粒の平均結晶粒径が100nm以上10μm以下である請求項1に記載の金属材料。
- 前記金属材料がステンレス鋼である請求項1に記載の金属材料。
- 前記発酵微生物の応答が、前記金属材料上での前記発酵微生物の吸着又は増殖である請求項1〜3のいずれか1項に記載の金属材料。
- 前記発酵微生物を異なる平均結晶粒径の結晶粒を有する金属材料上で培養させ、前記平均結晶粒径に対する前記培養後の前記微生物の数のプロットの結果である応答プロファイルより決定した前記発酵微生物の最適な吸着又は増殖を与える平均結晶粒径を有する請求項1〜4のいずれか1項に記載の金属材料。
- 前記発酵微生物は、乳酸菌、納豆菌、酢酸菌、麹菌及び酵母からなる群より選択される少なくとも1種である請求項1〜5のいずれか1項に記載の金属材料。
- 結晶粒により組織される金属材料を用いて発酵微生物の応答を制御する方法であって、
前記結晶粒の平均結晶粒径が互いに異なる複数の前記金属材料を準備する工程、
前記複数の金属材料のそれぞれと前記発酵微生物とを接触させる工程、
前記接触後に前記金属材料の結晶粒の平均結晶粒径ごとの前記発酵微生物の応答プロファイルを取得する工程、及び
前記応答プロファイルに基づき前記発酵微生物の最適な応答を与える前記結晶粒の平均結晶粒径を決定する工程
を含む発酵微生物の応答制御方法。 - 前記応答の制御は、前記金属材料上での前記発酵微生物の吸着又は増殖である請求項7に記載の発酵微生物の応答制御方法。
- 前記応答プロファイルは、前記結晶粒の平均結晶粒径に対する前記接触後の前記発酵微生物の数のプロットである請求項8に記載の発酵微生物の応答制御方法。
- 前記最適な応答は、前記発酵微生物の数の最大化である請求項9に記載の発酵微生物の応答制御方法。
- 前記発酵微生物は、乳酸菌、納豆菌、酢酸菌、麹菌及び酵母からなる群より選択される少なくとも1種である請求項7〜10のいずれか1項に記載の発酵微生物の応答制御方法。
- 前記結晶粒の平均結晶粒径が100nm以上10μm以下である請求項7〜11のいずれか1項に記載の発酵微生物の応答制御方法。
- 前記金属材料がステンレス鋼である請求項7〜12のいずれか1項に記載の発酵微生物の応答制御方法。
- 請求項1〜6のいずれか1項に記載の金属材料と発酵微生物とを接触させる工程を含む発酵食品の製造方法。
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