CN114981406A - 制备乳酸菌培养物的方法 - Google Patents
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Abstract
微生物起子培养物。更具体而言，制备微生物培养物例如乳酸菌(LAB)起子培养物的方法，其中将至少一种微生物菌株例如乳酸菌和至少一种灭活酵母菌株接种在培养基中。
Description
技术领域
本发明涉及微生物起子培养物领域。具体而言，本发明提供了制备微生物起子培养物的方法。微生物起子培养物可以是乳酸菌(LAB)起子培养物，其中将乳酸菌接种在培养基中，并且其中培养基包含至少一种灭活酵母菌株。新方法采用符合素食监管的原料。因此，通过新方法获得的起子培养物可用于制造素食食品、饲料产品和药品。
背景技术
微生物培养物广泛用于食品、饲料和制药工业，用于制造发酵制品，包括大多数乳制品，例如奶酪、酸奶和黄油，还广泛用于肉类、烘焙食品、葡萄酒或蔬菜制品。此外，微生物培养物还用于生产蛋白质，包括酶和各种有用的化合物。这类微生物培养物通常称为起子培养物，并且在工业繁殖工厂生产并分配到发酵工业，例如乳制品厂，其中起子培养物用于它们的生产过程中。特别是，乳酸菌培养物广泛用作起子培养物。
乳酸菌(LAB)起子培养物的产生涉及将LAB细胞接种在特定的发酵培养基中，并在适当的发酵条件下繁殖适当数量的细胞。在工业环境中，为了在发酵过程结束时获得高浓度的繁殖细胞而付出了很多努力。发酵条件和发酵培养基必须支持细胞生长以获得所需的高生物质产量。
目前用于产生乳酸菌起子培养物例如乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)起子培养物的方法在发酵培养基中使用不适用于素食的来源作为原料。不适用于素食的来源被用作外源性来源。外源性来源可以是血红素源，并且添加它以支持乳酸菌的呼吸过程。由于使用不适用于素食的血红素源，通过已知方法获得的这类起子培养物不能应用于素食食品、饲料产品和药品中。因此，本领域需要开发用于产生微生物(例如乳酸菌)起子培养物，同时产量与本领域已知方法相似的呼吸过程，并且其中该过程应用了适用于素食的血红素源。
发明内容
本发明要解决的问题是，提供可应用于制造素食食品、饲料产品和药品的微生物培养物，例如乳酸菌培养物。
因此，本发明的第一方面涉及获得微生物培养物的方法，所述方法包括以下步骤：
(i)在通气条件下在培养基中培养至少一种微生物菌株并获得发酵物(fermentate)，
(ii)从所述发酵物中收获所述至少一种微生物菌株以获得微生物培养物，
其中所述培养基包含至少一种灭活酵母菌株。
在第二方面，本发明涉及通过本发明的方法能获得的培养物。
在第三方面，本发明涉及包含至少一种灭活酵母菌株的培养物。
本发明的第四方面涉及包含至少一种灭活酵母菌株的培养基。
本发明的第五方面涉及制备食品、饲料产品、药品、乳制品调味剂和奶酪调味产品的方法，所述方法包括将有效量的本发明培养物添加到食品、饲料产品或药品起始材料中，并将接种的培养物保持在所述至少一种微生物菌株具有代谢活性的条件下。
本发明的第六方面涉及可通过本发明的方法获得的发酵食品、饲料产品或药品。
本发明的第七方面涉及至少一种灭活酵母菌株在发酵方法和/或发酵过程中的用途。
具体实施方式
发明人已经开发了用于获得微生物培养物例如微生物菌株(例如乳酸菌) 的起子培养物的方法，其中酵母细胞用作适用于素食的替代性血红素源而不是不适用于素食的血红素源。应用酵母作为外源性血红素源令人惊讶地显示支持微生物菌株(例如乳酸菌)的呼吸。酵母是适用于素食的原料。新方法提供的产量与本领域已知的方法相当。
在讨论本发明的详细实施方案之前，提供本文所用的选定术语的进一步定义。
本文中，术语“嘌呤碱”旨在涵盖具有嘌呤核心结构的环状含氮碱基。因此，在本文中，术语“嘌呤碱”旨在表示任选取代的嘌呤。嘌呤碱的具体实例包括腺嘌呤、鸟嘌呤、黄嘌呤和次黄嘌呤。
类似地，术语“嘧啶碱”旨在涵盖具有嘧啶核心结构的环状含氮碱基。因此，在本文中，术语“嘧啶碱”旨在表示任选取代的嘧啶。嘧啶碱的具体实例包括胞嘧啶、胸腺嘧啶和尿嘧啶。
在本上下文中，术语“核苷酸”是指通过第一个碳原子与诸如腺嘌呤、鸟嘌呤、黄嘌呤或次黄嘌呤的嘌呤碱键合，或通过第一个碳原子与诸如胞嘧啶、胸腺嘧啶或尿嘧啶的嘧啶碱键合的2-脱氧核糖(DNA)单体或核糖 (RNA)单体。此外，DNA或RNA单体通过其第五个碳原子与磷酸基团键合。核苷酸的具体实例包括腺苷一磷酸(AMP)、鸟苷一磷酸(GMP)、尿苷一磷酸(UMP)、胞苷一磷酸(CMP)、黄嘌呤一磷酸(XMP)、肌苷一磷酸 (IMP)、脱氧腺苷一磷酸(dAMP)、脱氧鸟苷一磷酸(dGMP)、胸苷一磷酸 (dTMP)、脱氧胞苷一磷酸(dCMP)、脱氧黄嘌呤一磷酸(dXMP)和脱氧肌苷一磷酸(dIMP)。IMP是特别优选的。
当在本文中使用时，术语“核苷”旨在表示通过第一个碳原子与诸如腺嘌呤、鸟嘌呤、黄嘌呤或次黄嘌呤的嘌呤碱键合，或通过第一个碳原子与诸如胞嘧啶、胸腺嘧啶或尿嘧啶的嘧啶碱键合的2-脱氧核糖(DNA)单体或核糖(RNA)单体。核苷的具体实例包括腺苷、鸟苷、尿苷、胞苷、肌苷、脱氧腺苷、脱氧鸟苷、脱氧胸苷、脱氧胞苷和脱氧肌苷。肌苷是特别优选的。
从术语“核苷”和“核苷酸”的上述定义可以理解，核苷酸可以视为包含通过糖单元的第五个碳原子键合的磷酸基团的核苷。因此，本文所述的核苷酸也可以称为“核苷”-5'-磷酸。例如，肌苷酸盐(IMP)可以称为肌苷5'-磷酸，脱氧肌苷酸盐(dIMP)可以称为脱氧肌苷-5'-磷酸等。
在本上下文中，当与术语“核苷酸”或“核苷”结合使用时，术语“衍生物”旨在表示，所讨论的核苷酸或核苷的糖(即2-脱氧核糖或核糖)单元已被修饰，或所讨论的核苷酸或核苷的环状含氮碱基中已被修饰，或所讨论的核苷酸或核苷的糖单元和环状含氮碱基均已被修饰。例如，脱氧核糖单元的 2'-H基团或核糖单元的2'-OH基团可能已被修饰，例如通过掺入2'-F基团、 2'-O-甲基等。同样，环状含氮碱基可含有一个或多个通常在腺嘌呤、鸟嘌呤、黄嘌呤、次黄嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶和尿嘧啶中不存在的取代基。具体实例包括5-甲基胞嘧啶(MeC)、异胞嘧啶、假异胞嘧啶、5-溴尿嘧啶、 5-丙炔基尿嘧啶、5-丙炔-6-氟尿嘧啶、5-甲基噻唑尿嘧啶、6-氨基嘌呤、2- 氨基嘌呤、2,6-二氨基嘌呤、7-丙炔-7-脱氮腺嘌呤(7-propyne-7- deazaadenine)、7-丙炔-7-脱氮鸟嘌呤(7-propyne-7-deazaguanine)和2-氯-6-氨基嘌呤。
如本文所用，术语“发酵”是指在需氧或厌氧条件下繁殖或培养微生物细胞的过程。
术语“起子培养物”是指包含微生物细胞、旨在用于接种在待发酵的培养基中的制剂。
在本上下文中，术语“产量”是指在给定体积的发酵中产生的生物质的量。产量可以以多种方式测量；在本文中，产量以两种不同的方式测量。 1)作为每单位体积的生物质，通过发酵结束时发酵培养基的1cm光路的 600nm光密度(OD600)测量(减去背景)，或2)根据实施例3所述的Pearce 测试：发酵结束时的分析程序QAm-043，以公斤计“酸化活性”为4.8-5.2 的F-DVS培养物。
术语“F-DVS”是指实施例所述的所谓冷冻直投式(Direct Vat Set)培养物。
术语“卟啉化合物”是指环状四吡咯衍生物，其结构通过用各种官能团取代位于吡咯核心顶端的碳原子而衍生自卟啉结构。它还指所述衍生物与金属原子的配合物，该金属原子与卟啉环的四个氮中的两个形成配位键。该定义包括但不限于：尿卟啉、粪卟啉、原卟啉和血卟啉，以及它们的盐和酯以及它们与金属原子的配合物。特别优选的卟啉化合物是原卟啉IX 及其与铁原子的配合物，特别是血红素，以及叶绿素的衍生物，例如叶绿酸。
欧洲关于素食要求的法律框架目前正在修订中，目前没有统一的规则。欧洲食品立法、纯素食和素食声明下的所有声明都是在欧盟或国家立法下非强制性的任何信息或表示，包括任何形式的图片、图形或符号表示，其陈述、提示或暗示食品具有特殊的特征(NeliSochirca(2018),EFFL,6,第 514页)。因此，在本上下文中，术语“适用于素食的血红素源”是指不是从动物和/或多细胞生物获得或衍生的血红素源。酵母是一种真菌和单细胞生物。相反，术语“不适用于素食的血红素源”是指从动物和/或多细胞生物获得或衍生的血红素源。
在本发明的实施方案中，一种或多种微生物菌株是在不补充呼吸链的成分/替代成分的情况下不能呼吸生长的微生物菌株。应当理解，补充呼吸链的成分/替代成分可以是补充外源性血红素源。
至少一种微生物菌株可以选自由以下组成的组：乳球菌属 (Lactococcus)、链球菌属(Streptococcus)、现在称为乳杆菌属(Lactobacillus) 的乳杆菌属(Lactobacillus)、霍尔扎普菲尔氏菌属(Holzapfelia)、淀粉乳杆菌属(Amylolactobacillus)、蜂乳杆菌属(Bombilactobacillus)、伴生乳杆菌属(Companilactobacillus)、石墙乳杆菌属(Lapidilactobacillus)、农田乳杆菌属(Agrilactobacillus)、施莱弗乳杆菌属(Schleiferilactobacillus)、腐败乳杆菌属(Loigolactobacilus)、乳酪杆菌属(Lacticaseibacillus)、广布乳杆菌属(Latilactobacillus)、德拉格里奥氏菌属(Dellaglioa)、液体乳杆菌属(Liquorilactobacillus)、联合乳杆菌属(Ligilactobacillus)、乳植物杆菌属(Lactiplantibacillus)、糠乳杆菌属(Furfurilactobacillus)、寡食乳杆菌属(Paucilactobacillus)、粘液乳杆菌属(Limosilactobacillus)、果实乳杆菌属(Fructilactobacillus)、醋酸乳杆菌属(Acetilactobacillus)、蜜蜂乳杆菌属(Apilactobacillus)、促生乳杆菌属(Levilactobacillus)、次乳杆菌属(Secundilactobacillus)和迟缓乳杆菌属(Lentilactobacillus)，如描述于Zheng et al,Int.J.Syst.Evol.Microbiol.DOI 10.1099/ijsem.0.004107中，明串珠菌属(Leuconostoc)、酒球菌属(Oenococcus)、魏斯氏菌属(Weissella)、片球菌属(Pediococcus)、肠球菌属(Enterococcus)、双歧杆菌属(Bifidobacterium)、短杆菌属(Brevibacterium)、丙酸杆菌属(Propionibacterium)及其组合。该组中的大多数属是“乳酸菌”，然而，工业上重要的属是双歧杆菌属，尽管在系统发育上不相关，但有时也包括在乳酸菌组中，因为乳酸是主要的发酵终产物之一。该列表还包括未包括在乳酸菌属中、属于短杆菌属和丙酸杆菌属的其他工业上重要的起子培养物。
本文所用术语“乳酸菌”(LAB)表示革兰氏阳性、微需氧或厌氧细菌，其发酵糖并产生酸，包括乳酸(作为主要产生的酸)和乙酸。工业上最有用的乳酸菌见于以下属中：乳球菌属、链球菌属、现在称为乳杆菌属的乳杆菌属、霍尔扎普菲尔氏菌属、淀粉乳杆菌属、蜂乳杆菌属、伴生乳杆菌属、石墙乳杆菌属、农田乳杆菌属、施莱弗乳杆菌属、腐败乳杆菌属、乳酪杆菌属、广布乳杆菌属、德拉格里奥氏菌属、液体乳杆菌属、联合乳杆菌属、乳植物杆菌属、糠乳杆菌属、寡食乳杆菌、粘液乳杆菌属、果实乳杆菌属、醋酸乳杆菌属、蜜蜂乳杆菌属、促生乳杆菌属、次乳杆菌属和迟缓乳杆菌属，如描述于Zheng et al,Int.J.Syst.Evol.Microbiol.DOI 10.1099/ijsem.0.004107中，明串珠菌属、酒球菌属、魏斯氏菌属、片球菌属和肠球菌属。如上所述，另一个工业上重要的属是双歧杆菌属，尽管在系统发育上不相关，但由于乳酸是主要的发酵终产物之一，它有时被包括在乳酸菌组中。
因此，在一个实施方案中，至少一种乳酸菌选自由以下组成的组：乳球菌属、链球菌属、现在称为乳杆菌属的乳杆菌属、霍尔扎普菲尔氏菌属、淀粉乳杆菌属、蜂乳杆菌属、伴生乳杆菌属、石墙乳杆菌属、农田乳杆菌属、施莱弗乳杆菌属、腐败乳杆菌属、乳酪杆菌属、广布乳杆菌属、德拉格里奥氏菌属、液体乳杆菌属、联合乳杆菌属、乳植物杆菌属、糠乳杆菌属、寡食乳杆菌属、粘液乳杆菌属、果实乳杆菌属、醋酸乳杆菌属、蜜蜂乳杆菌属、促生乳杆菌属、次乳杆菌属和迟缓乳杆菌属，如描述于Zheng et al,Int.J.Syst.Evol.Microbiol.DOI10.1099/ijsem.0.004107中，明串珠菌属、酒球菌属、魏斯氏菌属、片球菌属、肠球菌属、双歧杆菌属及其组合。
常用的乳酸菌LAB起子培养菌株一般分为最佳生长温度为约30℃的嗜温生物和最佳生长温度为约40℃至约45℃的嗜热生物。
将理解的是乳杆菌属分类法于2020年更新。郑等人(Zheng et al.2020) 公开了新的分类法,对本发明重要的那些总结如下：
属于嗜温组的典型生物包括乳酸乳球菌、乳酸乳球菌乳脂亚种 (Lactococcuslactis subsp.cremoris)、肠膜明串珠菌乳脂亚种(Leuconostoc mesenteroidessubsp.cremoris)、戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)、乳酸乳球菌乳亚种双乙酰生物变型(Lactococcus lactis subsp.lactis biovar. diacetylactis)、干酪乳杆菌干酪亚种(干酪乳酪杆菌)和副干酪乳杆菌副干酪亚种(副干酪乳酪杆菌副干酪亚种和副干酪乳酪杆菌坚韧亚种)。嗜热乳酸菌物种作为实例包括嗜热链球菌(Streptococcusthermophilus)、屎肠球菌 (Enterococcus faecium)、德氏乳杆菌乳亚种(Lactobacillusdelbrueckii subsp. lactis)、瑞士乳杆菌(Lactobacillus helveticus)、德氏乳杆菌保加利亚亚种 (Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus)和嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)。
由于培养基中产量增强剂、乳酸菌、灭活酵母或任何其他养分的量和因此浓度会随时间而变化这一事实，例如由于掺入到微生物细胞中，因此有必要及时提及必须测量或测定产量增强剂浓度的特定时间点。因此，当与培养基中产量增强剂、乳酸菌、灭活酵母或任何其他养分的浓度结合使用时，术语“最初”或“发酵前”(在本文中也可互换使用)是指，将待培养的微生物细胞加入培养基之前立即存在于培养基中的产量增强剂、乳酸菌、灭活酵母或任何其他养分的浓度。
本发明的起子培养物的一个重要应用是所谓的益生菌。在本上下文中，术语“益生菌”应理解为，当以活细胞的形式被人类或动物摄入时，例如通过抑制胃肠道中的有害微生物、增强免疫系统或促进养分消化，赋予改善的健康状况的微生物培养物。这种益生菌活性产品的典型实例是“甜嗜酸乳”。
对本说明书列出或讨论的明显在先公开的文件，不应视为承认该文件是现有技术的一部分或者是公知常识。
除非上下文另有说明，否则本发明的给定方面、特征或参数的实施方案、优选和选择，应视为已与本发明所有其他方面、实施方案、特征和参数的任何和所有实施方案、优选和选择组合公开。例如，与通过本发明的方法可获得的乳酸菌培养物相关的实施方案可以同样适用于乳酸菌起子培养物。此外，与本发明的方法相关叙述的实施方案可以与本发明的产品相关，反之亦然。
下面仅以举例的方式描述本发明的实施方案。
本发明的一个方面涉及获得微生物培养物的方法，所述方法包括以下步骤：
(i)在通气条件下在培养基中培养至少一种微生物菌株并获得发酵物，
(ii)从所述发酵物中收获所述至少一种微生物菌株以获得微生物培养物。
在实施方案中，本发明涉及获得乳酸菌培养物的方法，所述方法包括以下步骤：
(i)在通气条件下在培养基中培养乳酸菌并获得发酵物，
(ii)从所述发酵物中收获所述乳酸菌以获得乳酸菌培养物，
其中所述培养基包含至少一种灭活酵母菌株。
在一个实施方案中，本发明的方法还可以包括以下步骤：
(iii)浓缩所述微生物培养物以获得浓缩微生物培养物。
在一个实施方案中，本发明的方法还可以包括以下步骤：
(iii)浓缩所述乳酸菌培养物以获得浓缩乳酸菌。
可以使用本领域已知的方法进行浓缩，例如但不限于离心或超滤。为了在步骤(iii)中获得的浓缩物中获得数量增加的微生物(例如乳酸菌)，可以考虑步骤(iv)中的浓缩系数范围为2-20，例如6-19的范围，例如7-18的范围，例如8-17，例如9-16，例如10-15，例如11-14，例如12-13，例如2- 4，例如3-6。
商业起子培养物通常可以作为冷冻培养物分配。在通常维持这种冷冻培养物的低温下，细胞中的大多数代谢活性停止，并且细胞可以长时间维持在这种暂停但有活力的状态。
浓缩冷冻培养物在商业上非常有吸引力，因为这种培养物可以直接接种到生产容器中。通过使用这种浓缩冷冻培养物，最终用户避免了放大起子培养物的其他必要的、耗时的中间发酵步骤，并且最终用户还大大降低了污染风险。这种浓缩培养物可以称为DVS——直投式TM(direct vat setTM) 培养物。
作为浓缩冷冻培养物的替代品，可以制备浓缩的冻干直投式TM培养物 FD-DVSTM。这种培养物具有额外的优势，即它们可以在没有冷藏的情况下运输。
因此，在实施方案中，本发明的方法还可以包括以下步骤：
(iv)冷冻步骤(ii)中的所述微生物细菌培养物或步骤(iii)中的所述浓缩微生物培养物，以获得冷冻微生物培养物。
因此，在实施方案中，本发明的方法还可以包括以下步骤：
(iv)冷冻步骤(ii)中的所述乳酸菌培养物或步骤(iii)中的所述浓缩乳酸菌，以获得冷冻乳酸菌培养物。
为了从冷冻微生物细菌培养物中去除液体，本发明的方法还可以包括以下步骤：
(v)使所述冷冻微生物培养物的水升华，以获得干燥微生物培养物。
为了从冷冻乳酸菌培养物中去除液体，本发明的方法还可以包括以下步骤：
(v)使所述冷冻乳酸菌培养物的水升华，以获得干燥乳酸菌培养物。
可以通过选自由喷雾干燥、喷雾冷冻、真空干燥、风干、冻干、盘式干燥和真空盘式干燥组成的组的技术进行步骤(v)。
在另一个实施方案中，本发明的方法还包括以下步骤：
(vii)包装步骤(iv)中获得的所述冷冻微生物培养物或步骤(v)中获得的冻干微生物培养物。
可以理解，本发明的方法还包括以下步骤：
(vii)包装步骤(iv)中获得的冷冻乳酸菌培养物或步骤(v)中获得的干燥乳酸菌培养物。
经常观察到冷冻和解冻对活细胞活力的破坏性影响。通常，它们归因于冷冻过程中细胞脱水和胞质溶胶中冰晶的形成。
然而，已经发现，许多冷冻保护剂可以确保冷冻以受控和伤害最小的方式进行，例如通过确保在冷冻过程中排除或最小化胞质溶胶中的冰结晶。
优选，将至少一种冷冻保护剂添加到步骤(ii)中获得的收获的微生物培养物或收获的乳酸菌培养物中，或添加到步骤(iii)中获得的浓缩的微生物培养物或浓缩的乳酸菌培养物中。
优选，冷冻保护剂选自由以下组成的组：参与核酸生物合成的一种或多种化合物或任何此类化合物的一种或多种衍生物。适合添加到收获的微生物中的优选冷冻保护剂的实例基本上对应于本文所述的优选产量增强剂。在申请号为PCT/DK2004/000477的较早提交的专利申请中描述了向收获的微生物中添加这类冷冻保护剂。PCT/DK2004/000477中描述的优选冷冻保护剂也是本发明优选的冷冻保护剂。PCT/DK2004/000477的完整描述通过引用并入本文。在本发明的另一个优选实施方案中，一种或多种冷冻保护剂选自核苷一磷酸。在优选的实施方案中，至少一种或唯一的冷冻保护剂是IMP。碳水化合物或蛋白质类型的冷冻保护剂通常没有被描述为增加解冻或重构培养物的代谢活性。当将培养物接种到待发酵、加工或转化的培养基中时，本发明的冷冻保护剂除了冷冻保护活性外还可以赋予培养物增加的代谢活性(增强作用)。因此，本发明的一个实施方案是冷冻或干燥培养物，其中冷冻保护剂是除了冷冻保护性外还具有增强作用的一种试剂或多种试剂的混合物。表述“增强作用”用于描述这样的情形：其中，当将解冻或重构培养物接种到待发酵或转化的培养基中时，冷冻保护剂赋予解冻或重构培养物增加的代谢活性(增强作用)。活力和代谢活性不是同义概念。尽管商业冷冻或干燥(例如冻干)的培养物可能已经失去了很大一部分代谢活性，但它们可保留其活力，例如当将培养物储存甚至较短的时间段，该培养物也可能会失去产酸(酸化)活性。因此，活力和增强作用必须通过不同的测定来评估。活力是通过活力测定来评估的，例如测定菌落形成单位，而增强作用是通过量化解冻或重构培养物相对于该培养物的活力的相关代谢活性来评估的。
下面描述的酸化活性测定是量化解冻或重构培养物的相关代谢活性的测定的一个实例。
尽管在此例示了产酸活性，但本发明旨在包括稳定培养物的任何类型的代谢活性。因此，术语“代谢活性”是指培养物的除氧活性，其产酸活活性，即产生例如乳酸、乙酸、甲酸和/或丙酸，或其产代谢物活性，例如产生芳香化合物，例如乙醛(α-乙酰乳酸、乙偶姻、二乙酰和2,3-丁二醇(丁二醇))。
在本发明的实施方案中，以冷冻材料的％w/w测量，冷冻培养物含有或包含0.2％至20％的冷冻保护剂或冷冻保护剂混合物。然而，优选以以下范围的量添加冷冻保护剂或冷冻保护剂混合物：按重量计0.2％至15％，更优选0.2％至10％，更优选0.5％至7％，更优选1％至6％，包括以按重量计冷冻材料的％w/w测量，2％至5％范围的冷冻保护剂或冷冻保护剂混合物。在优选的实施方案中，以按重量计冷冻材料的％w/w测量，培养物包含约3％的冷冻保护剂或冷冻保护剂混合物。约3％的冷冻保护剂的优选量对应于100mM范围的浓度。应当认识到，对于本发明实施方案的每个方面，范围可以是所述范围的增量。
在培养物是干燥培养物(例如冻干)的情况下，优选以下述范围内的量添加冷冻保护剂或冷冻保护剂混合物，按重量计0.8％至60％，或按重量计0.8％至55％，或按重量计1.3％至40％，或按重量计3％至30％，或按重量计6％至25％，包括按重量计10％至24％的干燥培养物。在一个优选的实施方案中，以干燥培养物的％w/w测量，干燥培养物(例如冻干)包含约16％的冷冻保护剂或冷冻保护剂混合物。
此外，冷冻或干燥培养物可以进一步含有常规添加剂，包括酵母提取物、糖、抗氧化剂、惰性气体和维生素等养分。包括
化合物在内的表面活性剂也可以用作本发明培养物的进一步添加剂。可以另外添加到本发明培养物的这种常规添加剂的其他实例可以选自蛋白质、蛋白质水解物和氨基酸。这些物质的优选的合适实例包括选自由谷氨酸、赖氨酸、谷氨酸钠、酪蛋白酸钠、麦芽提取物、脱脂乳粉、乳清粉、酵母提取物、麸质、胶原蛋白、明胶、弹性蛋白、角蛋白和白蛋白或其混合物组成的组的那些。
更优选，常规添加剂是碳水化合物。这些碳水化合物合适的实例包括选自由戊糖(例如核糖、木糖)、己糖(例如果糖、甘露糖、山梨糖)、二糖 (例如蔗糖、海藻糖、蜜二糖、乳果糖)、寡糖(例如棉子糖)、低聚果糖(例如Actilight、Fribroloses)、多糖(例如麦芽糖糊精、黄原胶、果胶、褐藻胶、微晶纤维素、葡聚糖、PEG)和糖醇(山梨醇、甘露醇和肌醇)组成的组的那些。
目前优选至少一种冷冻保护剂与浓缩微生物培养物或浓缩乳酸菌培养物的比例(wt％/wt％)范围为1:0.5至1:5，例如1:1至1:4或1:11/2至1:3。
本发明的替代性实施方案是本文所述以增加的产量制备微生物培养物的方法，其进一步包括通过冻干、盘式干燥、喷雾干燥、喷雾冷冻、真空干燥、风干或适合干燥细菌培养物的任何干燥过程，干燥步骤(iii)中获得的浓缩微生物培养物或浓缩乳酸菌培养物。
所述至少一种灭活酵母菌株可存在于培养基中，或在将至少一种微生物菌株和/或乳酸菌添加到培养基之前，将其添加到培养基中，或在已将至少一种微生物菌株和/或乳酸菌添加到培养基中之后立即添加所述至少一种灭活酵母菌株。在一个实施方案中，所述至少一种灭活酵母菌株是热灭活酵母菌株。热灭活可以通过本领域已知的任何方法进行，例如但不限于高压灭菌和/或UHT。
在优选的实施方案中，所述至少一种灭活酵母菌株是全细胞酵母。本发明的方法与现有技术的方法之间的差异之一是，所述至少一种灭活酵母菌株可以是全细胞酵母。全酵母细胞不同于例如酵母提取物，在于全酵母细胞的细胞壁是完整的。酵母提取物由裂解的酵母细胞制成，因此酵母提取物仅包含酵母细胞壁的片段，而不包含完整的酵母细胞壁。可以在显微镜下确定完整的酵母细胞。如果细胞壁裂解，则在显微镜下看不到细胞壁，而在显微镜下可以看到具有完整细胞壁的细胞作为完整的全细胞。
培养基添加了或存在所述至少一种灭活酵母菌株，作为旨在帮助发酵的原料。本发明人惊奇地发现，可以用至少一种灭活酵母菌株代替培养基中非素食来源的应用，而不会降低产量。确定至少一种酵母菌株是否为灭活酵母菌株的一种方法是，将灭活酵母涂布在YGC琼脂板上并在25℃下孵育4天——如果没有发生生长，则酵母是灭活酵母。因此可以想到，灭活酵母是当涂布在YGC琼脂平板上并在25℃下孵育4天时不可培养的酵母。本发明的方面因此涉及至少一种灭活酵母菌株在发酵方法和/或发酵过程中的用途。
步骤(i)中的培养基可以是复合发酵培养基。
复合发酵培养基可以是本领域已知的任何复合发酵培养基，然而复合发酵培养基可以包含选自由乳糖、养分、维生素、胰蛋白胨、大豆蛋白胨、酵母提取物、抗坏血酸、硫酸镁及其组合组成的组的化合物。
可以考虑培养基中存在或添加至少一种卟啉化合物。同样，可以考虑培养基中存在或添加至少一种产量增强剂。
可以设想，新方法的产量涉及其中至少一种产量增强剂在整个发酵过程中持续出现在发酵培养基中的情形。已经观察到，培养基中产量增强剂的耗尽导致各种酶系统开始从头合成，并且假定这种需要能量的从头合成导致产量降低。
在整个发酵过程中至少一种产量增强剂持续出现在发酵培养基中的情形，可以通过在培养基中培养至少一种微生物菌株例如LAB来获得，该培养基最初包含足够的产量增强剂以确保至少一种这类试剂在整个发酵过程中保留在培养基中。一种这样的培养基是，包含范围为至少3mM至至少5mM，例如3mM-4mM范围，例如至少3mM，例如4mM或例如5 mM的至少一种产量增强剂(即在添加至少一种微生物菌株之前)的培养基，所述产量增强剂选自由参与核酸生物合成的一种或多种化合物或任何此类化合物的一种或多种衍生物组成的组。
此类培养基可以通过使用相对于产量增强剂特别丰富的组分来配制培养基而获得，所述产量增强剂选自由参与核酸生物合成的一种或多种化合物或任何此类化合物的一种或多种衍生物组成的组。
可以将纯化的试剂添加到其他标准培养基制剂中，代替使用特别富含产量增强剂的制剂来配制培养基。例如，培养基可以是每升已经添加了至少0.2g，优选至少0.8g，甚至更优选至少2g的至少一种产量增强剂(即在添加至少一种微生物菌株之前)的复合发酵培养基。
还可以通过一次或多次添加至少一种产量增强剂到发酵中来确保所述至少一种产量增强剂在整个发酵过程中都保留在培养基中。
在优选的实施方案中，所述产量增强剂选自由嘌呤碱、嘧啶碱、核苷、核苷酸及其衍生物组成的组。
在本发明的实施方案中，所述产量增强剂是嘌呤碱。
所述产量增强剂可以是嘌呤减，嘌呤碱优选选自由腺嘌呤、鸟嘌呤、黄嘌呤和次黄嘌呤组成的组。
在另一个实施方案中，产量增强剂是嘧啶碱。
所述产量增强剂可以是嘧啶碱，嘧啶碱优选选自由胞嘧啶、胸腺嘧啶和尿嘧啶组成的组。
在又一个实施方案中，产量增强剂是核苷。
所述产量增强剂可以是核苷，优选地，其中所述核苷选自由腺苷、鸟苷、尿苷、胞苷、肌苷、脱氧腺苷、脱氧鸟苷、脱氧胸苷、脱氧胞苷和脱氧肌苷组成的组。
在优选的实施方案中，所述核苷选自由腺苷、鸟苷、尿苷、胞苷、胸苷和肌苷组成的组。最优选，其中所述核苷是肌苷。
在另一个实施方案中，产量增强剂是核苷酸。
所述产量增强剂可以是核苷酸，优选其中所述核苷酸选自由腺苷一磷酸(AMP)、鸟苷一磷酸(GMP)、尿苷一磷酸(UMP)、胞苷一磷酸(CMP)、黄嘌呤一磷酸(XMP)、肌苷一磷酸(IMP)、脱氧腺苷一磷酸(dAMP)、脱氧鸟苷一磷酸dGMP)、胸苷一磷酸(dTMP)、脱氧胞苷一磷酸(dCMP)、脱氧黄嘌呤一磷酸(dXMP)和脱氧肌苷一磷酸(dIMP)组成的组。
在优选的实施方案中，所述核苷酸选自由AMP、GMP、UMP、CMP、 XMP和IMP组成的组。最优选，其中所述核苷酸是IMP。
优选的实施方案是，其中所述培养基包含至少两种产量增强剂，其优选选自由嘌呤碱、嘧啶碱、核苷、核苷酸及其衍生物组成的组。
优选所述培养基包含至少两种选自由核苷和核苷酸组成的组的产量增强剂。最优选，其中所述核苷是肌苷并且所述核苷酸是IMP。
优选的实施方案是，其中所述培养基最初包含(即在添加至少一种微生物菌株之前)或步骤(i)中的培养基包含1-70mM的每种产量增强剂。
更优选，其中所述培养基最初包含(即在添加至少一种微生物菌株之前) 或步骤(i)中的培养基包含1-60mM的每种产量增强剂，例如1.3-60mM，例如1.5-50mM，优选2-40mM，例如2.5-30mM，例如3-20mM，更优选3-15mM，例如4-10mM，例如约7mM。
在一个实施方案中，相对于培养基的重量(即在添加至少一种微生物菌株之前)，步骤(i)中的培养基在发酵之前(即在添加至少一种微生物菌株之前)包含至少0.5％w/w的至少一种灭活酵母菌株，例如1％w/w，例如2％ w/w，例如3％w/w，例如4％w/w，例如0.5-4％w/w范围，例如1-3.5％ w/w，例如1.5-3％w/w，例如2-2.5％w/w的至少一种灭活酵母菌株。
在另一个实施方案中，相对于培养基的重量(即在添加至少一种微生物菌株之前)，步骤(i)中的培养基在发酵之前包含至少0.5％w/w的微生物接种培养物，例如乳酸菌接种培养物，例如至少1％w/w，例如1.5％w/w，例如2％w/w，例如2.5％w/w，例如3％w/w，例如3.5％w/w，例如4％ w/w，例如0.5-4％w/w的范围，例如1-3.5％w/w，例如1.5-3％w/w，例如 2-2.5％w/w的乳酸菌接种培养物。接种培养可按实施例1说明的方法进行。
令人惊奇的是，通过本发明的方法，有时可以获得经充分浓缩用于生产F-DVS而无需浓缩培养物的微生物培养物，例如乳酸菌培养物。然而，即使应用本方法，大多数培养物也需要浓缩以获得商业利益的起子培养物。可以优选收获此类培养物并通过离心或超滤浓缩。
可以考虑在高光密度条件下培养乳酸菌。在本上下文中，高光密度条件下的培养应理解为，在允许发酵进行到超过600nm下测量的为10的光密度(OD600)的条件下，在培养基中培养至少一种微生物菌，例如乳酸菌。在一个优选的实施方案中，在工业相关条件下在高光密度条件下进行微生物的培养。
在本发明的选择实施方案中，所述高光密度条件的特征在于在发酵终止时或在步骤(ii)中，OD600高于15，优选高于20，更优选高于30，甚至更优选40以上，最优选50以上。
因此，在一个实施方案中，高光密度条件的特征在于，在步骤(ii)的培养基中OD600高于10。因此，步骤(ii)中培养基OD600的范围可以为OD600＝10至OD600＝200，更优选OD600＝15至OD600＝100的OD，最优选 OD600＝20至OD600＝80的OD。
因此，优选的实施方案是，其中培养物的光密度(OD)在1cm光路培养基600nm处达到OD600＝10至OD600＝200的OD，更优选OD600＝15至 OD600＝100的OD，甚至更优选OD600＝20到OD600＝90的OD，最优选 OD600＝25至OD600＝80的OD。
此外，优选的实施方案是，其中在包含5L至100.000L培养基，优选 300L至20.000L培养基的大规模发酵罐中进行培养。
优选的实施方案是，其中培养包括控制温度和/或pH。
在实施方案中，步骤(i)和/或步骤(ii)中的培养基包含一种或多种微生物菌株，它们是在不补充呼吸链的组分/替代组分的情况下不能呼吸生长的微生物菌株。
在一个实施方案中，步骤(i)和/或步骤(ii)中的培养基包含至少一种选自由以下组成的组的微生物菌株：乳球菌属、链球菌属、现在称为乳杆菌属的乳杆菌属、霍尔扎普菲尔氏菌属、淀粉乳杆菌属、蜂乳杆菌属、伴生乳杆菌属、石墙乳杆菌属、农田乳杆菌属、施莱弗乳杆菌属、腐败乳杆菌属、乳酪杆菌属、广布乳杆菌属、德拉格里奥氏菌属、液体乳杆菌属、联合乳杆菌属、乳植物杆菌属、糠乳杆菌属、寡食乳杆菌属、粘液乳杆菌属、果实乳杆菌属、醋酸乳杆菌属、蜜蜂乳杆菌属、促生乳杆菌属、次乳杆菌属和迟缓乳杆菌属，如描述于Zheng et al,Int.J.Syst.Evol.Microbiol.DOI 10.1099/ijsem.0.004107，明串珠菌属、酒球菌属、魏斯氏菌属、片球菌属、肠球菌属、双歧杆菌属、短杆菌属、丙酸杆菌属及其组合。
在一个实施方案中，步骤(i)和/或步骤(ii)中的培养基包含至少一种选自由以下组成的组的乳酸菌：乳球菌属、链球菌属、现在称为乳杆菌属的乳杆菌属、霍尔扎普菲尔氏菌属、淀粉乳杆菌属、蜂乳杆菌属、伴生乳杆菌属、石墙乳杆菌属、农田乳杆菌属、施莱弗乳杆菌属、腐败乳杆菌属、乳酪杆菌属、广布乳杆菌属、德拉格里奥氏菌属、液体乳杆菌属、联合乳杆菌属、乳植物杆菌属、糠乳杆菌属、寡食乳杆菌属、粘液乳杆菌属、果实乳杆菌属、醋酸乳杆菌属、蜜蜂乳杆菌属、促生乳杆菌属、次乳杆菌属和迟缓乳杆菌属，如描述于Zhenget al,Int.J.Syst.Evol.Microbiol.DOI 10.1099/ijsem.0.004107，明串珠菌属、酒球菌属、魏斯氏菌属、片球菌属、肠球菌属和双歧杆菌属。
在实施方案中，步骤(i)和/或步骤(ii)中的培养基包含一种或多种选自由以下组成的组的嗜温生物：乳酸乳球菌、乳乳球菌乳脂亚种、肠膜明串珠菌乳脂亚种、戊糖片球菌、乳酸乳球菌乳亚种双乙酰生物变型、干酪乳杆菌干酪亚种(新名称干酪乳酪杆菌)、副干酪乳杆菌副干酪亚种((副干酪乳酪杆菌副干酪亚种和副干酪乳酪杆菌坚韧亚种))和酒酒球菌(Oenococcus oeni)。
在另一个实施方案中，步骤(i)和/或步骤(ii)中的培养基包含一种或多种最佳生长温度为约40℃至约45℃的嗜热生物。
在又一个实施方案中，步骤(i)和/或步骤(ii)中的培养基包含一种或多种选自包含嗜热链球菌、屎肠球菌、德氏乳杆菌乳亚种、瑞士乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种和嗜酸乳杆菌的组的嗜热生物。
在实施方案中，步骤(i)和/或步骤(ii)中的培养基是包含一种或多种选自包含乳酸乳球菌乳亚种、乳酸乳球菌乳脂亚种、乳酸乳球菌乳亚种双乙酰生物变型和肠膜明串珠菌乳脂亚种的组的生物的LD培养物。在本上下文中，术语“LD培养物”将理解为乳酸乳球菌物种和明串珠菌属物种的组合。
可以理解，步骤(i)和/或步骤(ii)中的培养基是包含一种或多种选自包含乳酸乳球菌乳亚种和乳酸乳球菌乳脂亚种的组的生物的O培养物。在本上下文中，“O培养物”应理解为包含乳酸乳球菌乳亚种和乳酸乳球菌乳脂亚种的培养基。O培养物通常用于制作无孔奶酪(切达奶酪(Cheddar)、柴郡奶酪(Chesh-ire)、菲达奶酪(Feta))。该特定培养物可从丹麦的Hansen A/S 以R 604名称商业获得(目录号200113)。
在优选的实施方案中，步骤(i)和/或步骤(ii)中的培养基是包含乳酸乳球菌的培养物。
在一个实施方案中，所述至少一种酵母菌株选自由戴尔有孢圆酵母(Torulaspora delbrueckii)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、克鲁维毕赤酵母(Pichia kluyveri)、汉逊德巴利酵母(Debaromyces hansenii)、耐热拉钱斯氏酵母(Lachanceather motolerans)、串酵母属(Torula)酵母及其组合组成的组。
在优选的实施方案中，至少一种酵母菌株选自由戴尔有孢圆酵母、酿酒酵母及其组合组成的组。
用于本发明的特别优选的酵母菌株选自由以下组成的组：2020年5月 27日由丹麦的Chr.Hansen A/S保藏为DSM 33529的戴尔有孢圆酵母、 2020年5月27日由丹麦的Chr.Hansen A/S保藏为DSM 33527的酿酒酵母和2020年5月27日由丹麦的Chr.Hansen A/S保藏为DSM 33528的酿酒酵母，上述菌株均已根据专家解决方案选项并根据布达佩斯条约的规定保藏在德国布伦瑞克因霍芬街25 7B,38124的DSMZ(DSMZ of lnhoffenstrasse 257B,38124Braunschweig)。
本发明的优选实施方案涉及获得微生物培养物的方法，所述方法包括以下步骤：
(i)在通气条件下在培养基中培养至少一种微生物菌株并获得发酵物，
(ii)从所述发酵物中收获所述至少一种微生物菌株以获得微生物培养物，
其中培养基包含至少一种灭活酵母菌株，并且其中所述至少一种灭活酵母菌株选自由保藏为DSM 33529的戴尔有孢圆酵母、保藏为DSM 33527的酿酒酵母、保藏为DSM 33528的酿酒酵母及其组合组成的组。
本发明的优选实施方案涉及获得微生物培养物的方法，所述方法包括以下步骤：
(i)在通气条件下在培养基中培养至少一种微生物菌株并获得发酵物，
(ii)从所述发酵物中收获所述至少一种微生物菌株以获得微生物培养物，
其中所述培养基包含至少一种热灭活酵母菌株，并且其中所述至少一种灭活酵母菌株选自由保藏为DSM 33529的戴尔有孢圆酵母、保藏为 DSM 33527的酿酒酵母、保藏为DSM 33528的酿酒酵母及其组合组成的组。
本发明的优选实施方案涉及获得乳酸菌培养物的方法，所述方法包括以下步骤：
(i)在通气条件下在培养基中培养乳酸菌并获得发酵物，
(ii)从所述发酵物中收获所述乳酸菌以获得乳酸菌培养物，
其中所述培养基包含至少一种灭活酵母菌株，并且其中所述至少一种灭活酵母菌株选自由保藏为DSM 33529的戴尔有孢圆酵母、保藏为DSM 33527的酿酒酵母、保藏为DSM33528的酿酒酵母及其组合组成的组。
在另一优选的实施方案中，本发明涉及获得乳酸菌培养物的方法，所述方法包括以下步骤：
(i)在通气条件下在培养基中培养乳酸菌并获得发酵物，
(ii)从所述发酵物中收获所述乳酸菌以获得乳酸菌培养物，
其中所述培养基包含至少一种热灭活酵母菌株，并且其中所述至少一种灭活酵母菌株选自由保藏为DSM 33529的戴尔有孢圆酵母、保藏为 DSM 33527的酿酒酵母、保藏为DSM 33528的酿酒酵母及其组合组成的组。
可以对培养物进行通气以便在整个培养持续期间保持氧含量等于至少 5毫摩尔/升培养基。
为了获得最大产量，可以优选在培养开始后5和24小时进行步骤(ii) 中的收获。
本发明的方法可以进一步包括储存步骤(ii)中获得的收获的微生物培养物或乳酸菌培养物或步骤(iii)中获得的浓缩微生物培养物或乳酸菌培养物。
由于新方法的产量高，步骤(i)中获得的发酵物中的微生物培养物可以包含2.0E+10-5.0E+10活微生物细胞/g微生物培养物，例如2.5E+10– 4.5E+10，例如3.0E+10–4.0E+10活微生物细胞/g微生物培养物。同样，步骤(i)中获得的发酵物中的微生物培养物可以包含2.0E+10–5,0E+10总微生物细胞/g微生物培养物，例如2.5E+10–4.5E+10，例如3.0E+10–4.0E+10总微生物细胞/g微生物培养物。在实验部分的表2中可以看出，活乳酸菌细胞数和乳酸菌细胞总数几乎相同，因此这表明通过本发明可获得的乳酸菌培养物和乳酸菌起子培养物具有高活力。
由于新方法的产量高，步骤(i)中获得的发酵物中的乳酸菌培养物可以包含2.0E+10-5.0E+10活乳酸菌细胞/g乳酸菌培养物，例如2.5E+10– 4.5E+10，例如3.0E+10–4.0E+10活乳酸菌细胞/g乳酸菌培养物。同样，步骤(i)中获得的发酵物中的乳酸菌培养物可以包含范围为2.0E+10– 5,0E+10总乳酸菌细胞/g酸性细菌培养物，例如2.5E+10–4.5E+10，例如3.0E+10–4.0E+10总乳酸菌细胞/g酸性细菌培养物。在实验部分的表2中可以看出，活乳酸菌细胞数和乳酸菌细胞总数几乎相同，这表明通过本发明可获得的乳酸菌培养物和乳酸菌起子培养物具有高活力。
使用流式细胞术测定活性细胞和/或总细胞的数量，流式细胞术是本领域技术人员已知的技术。
在优选的实施方案中，其中与不包括血红素源过程的厌氧过程相比，该方法的所述收获的微生物菌株(例如乳酸菌)或微生物培养物(例如乳酸菌培养物)的增加的产量为增加至少1.2倍，优选至少1.3倍，更优选至少1.4 倍，甚至更优选至少1.5倍，最优选至少1.6倍。
实施例1公开了不包括血红素源的厌氧过程，而实施例3公开了包括非素食血红素源的有氧呼吸过程。
根据本发明，微生物在需氧条件下发酵。优选，乳酸菌的发酵在通气下和在培养基中进行，其中存在或添加了至少一种卟啉化合物。在优选的实施方案中，在通气条件下在含卟啉的培养基中培养LAB，其中所述培养基进一步包含至少一种选自由参与核酸生物合成的一种或多种化合物或任何此类化合物的一种或多种衍生物组成的组的产量增强剂。通气可以通过本领域技术人员已知的任何方式实现，例如通过摇动或搅拌培养基，或通过将含有氧的气体混合物例如空气通入培养基中。
在第二方面，本发明涉及通过本发明的方法能获得的微生物培养物，例如起子培养物。微生物培养物，例如起子培养物，可以作为培养物浓缩物例如起子培养物浓缩物来提供。
在第三方面，本发明涉及包含至少一种灭活酵母菌株的微生物培养物，例如起子培养物。
第四方面涉及包含至少一种灭活酵母菌株的培养基。
在第五方面，本发明涉及制备食品、饲料产品、药品、乳制品调味剂、奶酪调味产品的方法，所述方法包括将有效量的本发明培养物添加到食品、饲料产品或药品起始材料并将接种的培养物保持在所述至少一种微生物菌株具有代谢活性的条件下。
优选，本发明第五方面的食品选自由乳基制品、蔬菜制品、肉制品、饮料、果汁、葡萄酒、烘焙食品、乳制品调味剂和奶酪调味产品组成的组。
优选，乳基制品选自由奶酪、酸奶、黄油、接种的甜乳和液体发酵乳制品组成的组。
在第六方面，本发明涉及通过本发明的方法能获得的发酵食品、饲料或药品。
本发明的第七方面涉及至少一种灭活酵母菌株在发酵方法和/或发酵过程中的用途。
在有吸引力的方面，本发明提供了获得微生物产生的化合物增加的产量的方法，所述方法包括以下步骤：
i)在包含至少一种灭活酵母菌株的培养基中培养至少一种微生物菌株；和
ii)获得所述微生物产生的化合物，
其中与在没有所述至少一种灭活酵母菌株的相同培养基中培养所述至少一种微生物菌株相比，该方法提供了微生物产生的化合物的增加的产量。
在有吸引力的方面，本发明提供了获得微生物产生的化合物增加的产量的方法，所述方法包括以下步骤：
i)在包含至少一种灭活酵母菌株的培养基中培养乳酸菌；和
iii)获得所述微生物产生的化合物，
其中与在没有所述至少一种灭活酵母菌株的相同培养基中培养微生物相比，该方法提供了微生物产生的化合物的增加的产量。
如所述的微生物产生的化合物包括但不限于酶、蛋白质、代谢物、糖脂、抗生素、细菌素、氨基酸、香料、挥发物。此类化合物可以通过重组 DNA技术或通过常规方式产生。
在以下非限制性实施例和附图中进一步说明本发明。
附图说明
图1.乳酸乳球菌在发酵过程中的A)碱基流、B)使用的总碱基、C) 溶解氧(DO％)和D)CO2的趋势曲线。曲线显示了支持呼吸的酵母即戴尔有孢圆酵母(DSM 33529)、酿酒酵母(DSM 33527)和生产培养基中的酵母提取物减少了40％的酿酒酵母(DSM 33527)的呼吸生长。对照是需氧阳性对照和厌氧阴性对照，需氧阳性对照是利用不适用于素食的血红素源的呼吸发酵过程，厌氧阴性对照是在N2位于顶空的情况下运行的厌氧(和素食)发酵，因此没有DO探针和废气分析。图C和D中没有厌氧阴性对照的曲线，因为没有测量该过程的DO％和CO2。
图2.发酵结束时的收集细胞体积(packed cell volume)和最终产品(F- DVS)的外观。从左到右：酵母细胞作为血红素源(DSM 33527和DSM 33529为代表)，小型和大型PCV管；需氧阳性对照；厌氧阴性对照。大型PCV管有助于更精确地指示发酵物中细胞和酵母的量。
图3.发酵结束时乳酸乳球菌培养物100x油物镜的显微镜检查，采用以下四个过程：酵母细胞作为血红素源(顶部；DSM 33527为代表)、需氧阳性对照(左下)和厌氧阴性对照(右下)。
图4.在25℃下孵育4天后的YGC琼脂板。左侧为带有酵母细胞菌落的阳性对照，右侧为DSM 33527作为代表的F-DVS。注意后者没有菌落。
图5.呼吸生长产生的总细胞(总细胞/g*产量)的比较，使用DSM 33527 (4％w/w)、DSM 33529(4％w/w)、培养基中酵母提取物减少40％的DSM 33527(4％w/w)、DSM 33528(3％和4％w/w)以及需氧阳性对照和厌氧阴性对照，厌氧阴性对照是素食过程的替代方案。计算值并将其归一化为 100％的需氧阳性对照过程。
图6.乳酸乳球菌在发酵过程中的A)碱基流、B)使用的总碱基、C)溶解氧(DO％)和D)CO2的趋势曲线。曲线显示了三种支持呼吸的酵母即戴尔有孢圆酵母(DSM 33529)、酿酒酵母(DSM 33529)和酿酒酵母(DSM 33528) 在M17培养基中的呼吸生长。对照是在M17培养基中使用氯化血红素的需氧阳性对照和在M17培养基中的厌氧阴性对照。在顶空具有N2的情况下运行厌氧阴性对照，因此没有DO探针和废气分析。图C和D中没有厌氧阴性对照的曲线，因为没有测量该过程的DO％和CO2。
图7.呼吸生长所产生的总细胞(总细胞/g*产量)的比较，分别使用在 M17培养基中的DSM 33527(4％w/w)、DSM 33529(4％w/w)和DSM 33528(4％w/w)以及作为对照的使用氯化血红素的需氧过程和厌氧过程。计算值并将其归一化为100％的发酵过程，该发酵过程利用使用氯化血红素的需氧阳性对照。
项目
1.获得微生物培养物的方法，所述方法包括以下步骤：
(i)在通气条件下在培养基中培养至少一种微生物菌株并获得发酵物，
(ii)从所述发酵物中收获所述至少一种微生物菌株以获得所述微生物培养物，
其中所述培养基包含至少一种灭活酵母菌株。
2.根据第1项所述的方法，所述方法进一步包括：
(iii)浓缩所述微生物培养物以获得浓缩微生物培养物。
3.根据前述项目中任一项所述的方法，所述方法进一步包括：
(iv)冷冻所述微生物培养物以获得冷冻微生物培养物。
4.根据前述项目中任一项所述的方法，所述方法进一步包括：
(v)使所述冷冻微生物培养物的水升华以获得干燥微生物培养物。
5.根据第4项所述的方法，其中通过选自由喷雾干燥、喷雾冷冻、真空干燥、风干、冻干、盘式干燥和真空盘式干燥组成的组的技术进行步骤 v)。
6.根据前述项目中任一项所述的方法，所述方法进一步包括：
(vii)包装步骤(iv)中获得的所述冷冻微生物培养物或步骤(v)中获得的所述干燥微生物培养物。
7.根据前述项目中任一项所述的方法，其中所述至少一种灭活酵母菌株是热灭活酵母菌株。
8.根据前述项目中任一项所述的方法，其中所述至少一种灭活酵母菌株是全酵母细胞。
9.根据前述项目中任一项所述的方法，其中当涂布在YGC琼脂平板上并在25℃孵育4天时，所述灭活酵母是不可培养的酵母。
10.根据前述项目中任一项所述的方法，其中所述培养基不包含不适用于素食的血红素源。
11.根据前述项目中任一项所述的方法，其中所述培养基进一步包含选自由蛋白胨、胰蛋白胨、酵母提取物、硫酸镁、抗坏血酸、糖、维生素、矿物质及其组合组成的组的成分。
12.根据前述项目中任一项所述的方法，其中所述培养基中存在或添加了至少一种卟啉化合物。
13.根据前述项目中任一项所述的方法，其中所述培养基中存在或添加了至少一种产量增强剂。
14.根据第13项所述的方法，其中所述产量增强剂选自由嘌呤碱、嘧啶碱、核苷、核苷酸及其衍生物组成的组。
15.根据第13项所述的方法，其中所述产量增强剂是嘌呤碱。
16.根据第15项所述的方法，其中所述嘌呤碱选自腺嘌呤、鸟嘌呤、黄嘌呤和次黄嘌呤组成的组。
17.根据第13项所述的方法，其中所述产量增强剂是嘧啶碱。
18.根据第17项所述的方法，其中所述嘧啶碱选自由胞嘧啶、胸腺嘧啶和尿嘧啶组成的组。
19.根据第13项所述的方法，其中所述产量增强剂是核苷。
20.根据第19项所述的方法，其中所述核苷选自由腺苷、鸟苷、尿苷、胞苷、肌苷、脱氧腺苷、脱氧鸟苷、脱氧胸苷、脱氧胞苷和脱氧肌苷组成的组。
21.根据第19项所述的方法，其中所述核苷选自由腺苷、鸟苷、尿苷、胞苷和肌苷组成的组。
22.根据第13项所述的方法，其中所述核苷是肌苷。
23.根据第13项所述的方法，其中所述产量增强剂是核苷酸。
24.根据第23项所述的方法，其中所述核苷酸选自由腺苷酸(AMP)、鸟苷酸(GMP)、尿苷酸(UMP)、胞苷酸(CMP)、黄苷酸(XMP)、肌苷酸 (IMP)、脱氧腺苷酸(dAMP)、脱氧鸟苷酸(dGMP)、脱氧胸苷酸(dTMP)、脱氧胞苷酸(dCMP)、脱氧黄苷酸(dXMP)和脱氧肌苷酸(dIMP)组成的组。
25.根据第23项的方法，其中所述核苷酸选自由AMP、GMP、UMP、 CMP、XMP和IMP组成的组。
26.根据第23项所述的方法，其中所述核苷酸是IMP。
27.根据前述项目中任一项所述的方法，其中所述培养基包含至少两种选自嘌呤碱、嘧啶碱、核苷、核苷酸及其衍生物的产量增强剂。
28.根据第27项所述的方法，其中至少两种产量增强剂是核苷和核苷酸。
29.根据第27-28项所述的方法，其中所述核苷是肌苷并且所述核苷酸是IMP。
30.根据前述项目中任一项所述的方法，其中步骤(i)中的培养基包含1-70mM的每种产量增强剂。
31.根据前述项目中任一项所述的方法，其中步骤(i)中的培养基包含 1-60mM的每种产量增强剂，例如1.3-60mM，例如1.5-50mM，优选2- 40mM，例如2.5-30mM，例如3-20mM，更优选3-15mM，例如4-10 mM，例如约7mM。
32.根据前述项目中任一项所述的方法，其中步骤(i)中的培养基在发酵前包含至少0.5％w/w的所述至少一种灭活酵母菌株。
33.根据前述项目中任一项所述的方法，其中步骤(i)中的培养基在发酵前包含至少0.5％w/w的所述至少一种微生物菌株。
34.根据前述项目中任一项所述的方法，其中所述高光密度条件的特征在于，在步骤(ii)的培养基中OD600高于10。
35.根据前述项目中任一项所述的方法，其中步骤(ii)中培养基的OD600的范围为OD600＝10至OD600＝200，更优选OD600＝15至OD600＝100的 OD，最优选OD600＝20至OD600＝80的OD。
36.根据前述项目中任一项所述的方法，其中在包含5L至100.000L培养基、优选300L至20.000L培养基的大规模发酵罐中进行培养。
37.根据前述项目中任一项所述的方法，其中所述培养包括控制温度和/或pH。
38.根据前述项目中任一项所述的方法，其中步骤(iv)中的浓缩系数为 5-20的范围。
39.根据前述项目中任一项所述的方法，其中所述一种或多种微生物菌株是在不补充呼吸链的组分/替代组分的情况下不能呼吸生长的菌株微生物菌株。
40.根据前述项目中任一项的方法，其中所述一种或多种微生物菌株选自由以下组成的组：枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、地衣芽孢杆菌 (Bacilluslicheniformis)、动物双歧杆菌(Bifidobacterium animalis)、两歧双歧杆菌(Bifidobacterium bifidum)、短双歧杆菌(Bifidobacterium breve)、长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)、屎肠球菌、乳酸乳球菌、嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌(Lactobacillus delbrueckii)、格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)、瑞士乳杆菌、约氏乳杆菌(Lactobacillus johnsoniim)、动物乳杆菌 (Lactobacillus animalis)(动物联合乳杆菌(Ligilactobacillus animalis))、布赫内氏乳杆菌(Lactobacillus buchneri)(布赫内氏迟缓乳杆菌(Lentilactobacillus buchneri))、弯曲乳杆菌(Lactobacilluscurvatus)(弯曲广布乳杆菌 (Latilactobacillus curvatus))、福菜乳杆菌(Lactobacillus futsaii)(福菜伴生乳杆菌(Companilactobacillus futsaii))、发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum) (发酵粘液乳杆菌(Limosilactobacillusfermentum))、副干酪乳杆菌 (Lactobacillus paracasei)(副干酪乳酪杆菌(Lacticaseibacillus paracasei))、戊糖乳杆菌(Lactobacillus pentosus)(戊糖乳植物杆菌(Lactiplantibacillus pentosus))、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)(植物乳植物杆菌 (Lactiplantibacillus plantarum))、罗伊氏乳杆菌(Lactobacillusreuteri)(粘液乳杆菌粘液乳杆菌(Limosilactobacillus reuteri))、鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)(鼠李糖乳酪杆菌(Lacticaseibacillus rhamnosus))、清酒乳杆菌(Lactobacillus sakei)(清酒广布乳杆菌(Latilactobacillus sakei))、唾液乳杆菌(Lactobacillus salivarius)(唾液联合乳杆菌(Ligilactobacillus salivarius))、肉色明串珠菌(Leuconostoc carnosum)、肠膜明串珠菌 (Leuconostoc mesenteroides)、假肠膜明串珠菌(Leuconostoc pseudomesenteroides)、酒酒球菌(Oenococcus oeni)、乳酸片球菌 (Pediococcus acidilactici)、戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)、费氏丙酸杆菌(Propionibacterium freudenreichii)、肉葡萄球菌(Staphylococcus carnosus)、小牛葡萄球菌(Staphylococcus vitulinus)、木糖葡萄球菌 (Staphylococcus xylosus)、嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)及其组合。
41.根据前述项目中任一项所述的方法，其中步骤(i)和/或步骤(ii)中的培养基包含一种或多种选自由以下组成的组的嗜温微生物：乳酸乳球菌、乳酸乳球菌乳脂亚种、肠膜明串珠菌乳脂亚种、戊糖片球菌、乳酸乳球菌乳亚种双乙酰生物变型、干酪乳酪杆菌干酪亚种(干酪乳酪杆菌)、副干酪乳杆菌副干酪亚种(副干酪乳酪杆菌副干酪亚种和副干酪乳酪杆菌坚韧亚种)、酒酒球菌及其组合。
42.根据前述项目中任一项所述的方法，其中步骤(i)和/或步骤(ii)中的培养基包含一种或多种最佳生长温度为约40℃至约45℃的嗜热微生物。
43.根据前述项目中任一项所述的方法，其中步骤(i)和/或步骤(ii)中的培养基包含一种或多种选自由以下组成的组的嗜热微生物：嗜热链球菌、屎肠球菌、德氏乳杆菌乳亚种、瑞士乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种、嗜酸乳杆菌及其组合。
44.根据前述项目中任一项所述的方法，其中步骤(i)和/或步骤(ii)中的培养基是包含一种或多种选自由乳酸乳球菌乳亚种、乳酸乳球菌乳脂亚种、乳酸乳球菌乳亚种双乙酰生物变型和肠膜明串珠菌乳脂亚种组成的组的微生物的LD培养基。
45.根据前述项目中任一项所述的方法，其中步骤(i)和/或步骤(ii)中的培养基是，其包含一种或多种选自包含乳酸乳球菌乳亚种和乳酸乳球菌乳脂亚种的组的生物的O-培养物
46.根据前述项目中任一项所述的方法，其中步骤(i)和/或步骤(ii)中的培养基是包含乳酸乳球菌的培养物。
47.根据前述项目中任一项所述的方法，其中所述至少一种酵母菌株选自由以下组成的组：戴尔有孢圆酵母、酿酒酵母、克鲁维毕赤酵母、汉逊德巴利酵母、耐热拉钱斯氏酵母、串酵母属(Torula)酵母及其组合。
48.根据前述项目中任一项所述的方法，其中所述至少一种酵母菌株选自由戴尔有孢圆酵母、酿酒酵母及其组合组成的组。
49.根据前述项目中任一项所述的方法，其中所述至少一种灭活酵母菌株选自由以下组成的组：保藏为DSM 33529的戴尔有孢圆酵母、保藏为 DSM 33527的酿酒酵母、保藏为DSM 33528的酿酒酵母及其组合。
50.根据前述项目中任一项所述的方法，其中将至少一种冷冻保护剂添加到步骤(ii)中获得的收获的乳酸菌培养物或步骤(iii)中获得的浓缩乳酸菌培养物中。
51.根据前述项目中任一项所述的方法，其中对培养物进行通气，以在整个培养持续期间保持氧含量等于至少5毫摩尔/升培养基。
52.根据前述项目中任一项所述的方法，其中在培养开始后5-24小时之间进行步骤(ii)中的收获。
53.根据前述项目中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包括储存步骤(ii)中获得的收获的乳酸菌培养物或步骤(iii)中获得的浓缩乳酸菌培养物。
54.根据前述项目中任一项所述的方法，其中步骤(i)中获得的发酵物包含范围为2.0E+10-5.0E+10的活微生物细胞/g培养物。
55.根据前述项目中任一项所述的方法，其中步骤(i)中获得的发酵物包含范围为2.0E+10-5.0E+10的总微生物细胞/g培养物。
56.根据前述项目中任一项的方法，其中当与通过应用不适用于素食的血红素源的相同过程获得的产量相比时，产量增加至少1.2倍。
57.通过第1-56项中任一项所述的方法能获得的培养物。
58.根据第56项所述的培养物，其中培养物是起子培养物。
59.根据第57项所述的培养物，其中所述起子培养物作为起子培养物浓缩物提供。
60.培养物，其包含至少一种灭活酵母菌株。
61.根据第60项所述的培养物，其中所述培养物是起子培养物。
62.根据第61项所述的培养物，其中所述至少一种灭活酵母菌株是全酵母细胞。
63.根据第61或62项中任一项所述的培养物，其中所述至少一种灭活酵母菌株选自由以下组成的组：保藏为DSM 33529的戴尔有孢圆酵母、保藏为DSM 33527的酿酒酵母、保藏为DSM 33528的酿酒酵母及其组合。
64.培养基，包含至少一种灭活酵母菌株。
65.根据第64项所述的培养基，其中所述至少一种灭活酵母菌株是全酵母细胞。
66.根据第64项所述的培养基，其中所述至少一种灭活酵母菌株选自由以下组成的组：保藏为DSM 33529的戴尔有孢圆酵母、保藏为DSM 33527的酿酒酵母、保藏为DSM33528的酿酒酵母及其组合。
67.根据第64项所述的培养基，其中所述培养基如前述项目中任一项所定义。
68.制备食品、饲料产品、药品、乳制品调味剂和奶酪调味产品的方法，所述方法包括将有效量的第57-63项所述的培养物添加到食品、饲料产品或药品起始材料中并将接种的培养物保持在所述至少一种微生物菌株具有代谢活性的条件下。
69.根据第68项所述的方法，其中所述食品选自由以下组成的组：乳基制品、蔬菜制品、肉制品、饮料、果汁、葡萄酒和烘焙食品。
70.根据第69项所述所述的方法，其中所述乳基制品选自由奶酪、酸奶、黄油、接种的甜乳和液体发酵乳制品组成的组。
71.通过第1-56项中任一项所述的方法能获得的发酵食品、饲料或药品。
72.至少一种灭活酵母菌株在发酵方法和/或发酵过程中的用途。
73.根据第72项所述的用途，其中所述至少一种灭活酵母菌株选自由以下组成的组：保藏为DSM 33529的戴尔有孢圆酵母、保藏为DSM 33527的酿酒酵母、保藏为DSM 33528的酿酒酵母及其组合。
74.食品、饲料产品、药品、乳制品调味剂和奶酪调味产品，其包含第57-63项中任一项所述的培养物。
实施例
实施例1：在Chr Hansen A/S的复合发酵培养基中用不同类型的酵母作为血红素
源进行发酵的产量
测试酵母支持呼吸生长的能力的概述：
测试了作为替代性素食血红素源的11种不同酵母(表1)的支持乳酸乳球菌呼吸的能力。三种酵母能够支持呼吸：戴尔有孢圆酵母(DSM 33529)、酿酒酵母(DSM 33527)和酿酒酵母(DSM 33528)。
表1.已测试支持乳酸乳球菌呼吸生长的能力的酵母概述。将所有酵母都添加到发酵培养基中。
培养物:
本实验使用商业可得的DSM 24648培养物进行，该DSM 24648培养物可从丹麦赫斯霍尔姆的Chr.Hansen A/S(科.汉森有限公司)(Chr. Hansen A/S,Hoersholm,Denmark)获得。
发酵培养基：
实施例1使用了三种不同的发酵培养基：
1-应用Chr Hansen A/S专有的素食友好型复合发酵培养基，包括不同类型的酵母作为血红素源
2-厌氧复合发酵培养基用作阴性对照培养基。该培养基是Chr Hansen A/S的专有素食友好型复合发酵培养基，不包括血红素源。
3-需氧复合发酵培养基用作阳性对照培养基。该培养基是Chr Hansen A/S专有的素食友好型复合发酵培养基，包括非素食血红素源。
培养基通过UHT处理(143℃8sec.)灭菌。最终培养基的pH为6.5。
发酵条件和培养物
使用1％(w/w)的上述培养物作为接种物，上述灭活酵母之一作为血红素源，在30℃下通气，在2L实验室规模发酵罐中进行发酵。对于作为阳性对照的需氧发酵，应用与需氧发酵相同的条件，在包括非素食血红素源的Chr Hansen A/S专有素食友好型复合发酵培养基中通气。对于作为阴性对照的厌氧发酵，应用与需氧发酵相同的条件，但在不包括血红素源的 Chr Hansen A/S专有素食友好型复合发酵培养基中不通气。使培养物酸化至pH 6.0。随后通过控制添加27％NH4OH将pH值维持在6.0。
当没有检测到进一步的碱消耗时，将各培养物冷却至约10℃。
冷却后，通过离心将培养基中的细菌浓缩6-18倍，随后在液氮中在一个大气压下冷冻成颗粒，以产生所谓的冷冻直投式培养物(F-DVS)。将F- DVS颗粒储存在–50℃，直至进一步分析。
以两种不同的方式具体说明发酵产量：
1.通过在600nm(OD600)作为光密度测量的获得的生物质，或
2.通过每100L发酵培养基以kg(千克)计的F-DVS培养物，其中根据实施例3：分析程序QAm-043中描述的Pearce测试，F-DVS培养物的“酸化活性”为4.8-5.1。
工艺参数评估
当从厌氧生长到呼吸生长时，乳酸乳球菌深刻地改变代谢。与厌氧生长相比，生物质大约增加了一倍，并且在呼吸生长期间，酸的产生减少。酸产生的减少从碱基流(每次每体积使用的碱基量)和用于在发酵过程中保持指定pH设定值的总碱基中显而易见。明显可见，厌氧过程(对照)的碱基消耗高得多(图1A、B)。使用DSM 33529(4％w/w)、DSM 33527(4％w/w) 和DSM 33527(4％w，且培养基中的酵母提取物减少40％)作为血红素源的呼吸发酵过程，与需氧阳性对照(即以非素食来源作为血红素源的呼吸发酵过程)相比，显示出相似的碱基流和总碱基曲线。
呼吸生长的另一个关键特征是溶解氧(DO％)减少和CO2产生(图1C、 D)。与需氧阳性对照相比，使用DSM 33529(4％w/w)、DSM 33527(4％ w/w)和DSM 33527(4％w/w，且培养基中的酵母提取物减少40％)的呼吸发酵过程显示出相似的溶解氧(DO％)和CO2产生曲线(图1C、D)。图1C、 D不包括厌氧生长参照即厌氧阴性对照过程，因为该过程是氮气位于顶空的情况下运行的。
作为结论，根据图1中的过程曲线，使用DSM 33529、DSM 33527和 DSM 33528的呼吸发酵过程支持呼吸生长的表现与需氧阳性对照(图1，非素食血红素源)一样好。
此外，图1显示具有减少的酵母提取物(来自含有DSM 33527的培养基)的发酵过程也支持呼吸生长，表明酵母细胞而不是酵母提取物支持呼吸。
下游工艺评估
发酵后，对发酵物进行收集细胞体积(PCV)测试(在专用离心管中对发酵物进行离心)。这是生物质的第一个指示。PCV测试表明，使用DSM 33529、DSM 33527和DSM 33528发酵产生与需氧阳性对照过程相同水平的细菌细胞10％PCV，而厌氧阴性对照产生较低水平的4％PCV(图3)。虽然对于DSM 33529、DSM 33527和DSM 33528的细菌水平与需氧阳性对照相关，但首先提到的三个也显示来自酵母细胞的10％PCV水平(底部米色层)。最终产物(F-DVS)的外观与参照需氧阳性对照过程没有差异(图2)。颗粒的颜色是白色/米白色颗粒。
发酵结束时的显微镜检查
发酵培养基中酵母的使用在显微图片中也很明显(图3)。
发酵后酵母细胞的可培养性
为确保最终产物(F-DVS)中没有可培养的酵母细胞，将其涂布在YGC 琼脂板上。此处描述的任何试验均未观察到生长(图4)。
酵母细胞作为替代性素食原料而不是不适用于素食的血红素源的呼吸生长性能
总结
表2给出了发酵物、浓缩物和F-DVS产物的工艺响应(发酵时间、碱基消耗和OD)和分析结果(活细胞量和细胞总量以及酸化活性(Ta))的概述。在图5中，显示了总细胞(总细胞/g*产量)，这是从表2计算的关键特征，并且已归一化为100％的需氧阳性对照过程(图5)。从表2和图5中可以看出，利用酵母的呼吸过程与需氧阳性对照产量非常相关，与厌氧阴性对照相比，该产量增加了一倍。培养基中酵母提取物减少40％未影响呼吸生长产量，这证实产量的增加是由于呼吸而不是培养基中氮含量的增加。
表2.使用DSM 33527、DSM 33529、DSM 33528运行的选定发酵、需氧阳性对照和厌氧阴性对照的批概述，包括发酵响应和分析结果
实施例2：在M17培养基中并使用不同类型的酵母作为血红素源进行的发酵的产量
测试支持呼吸生长的能力的酵母的概述：
测试了11种不同的酵母(表1)，测试其作为替代性素食血红素源——即它们支持乳酸乳球菌呼吸的能力。三种酵母能够支持呼吸：戴尔有孢圆酵母(DSM 33529)、酿酒酵母(DSM 33527)和酿酒酵母(DSM 33528)。
表3.已测试支持乳酸乳球菌呼吸生长的能力的酵母概述。所有酵母都添加到发酵培养基中。
培养物：
本实验使用商业可得的DSM 24648培养物进行，该培养物可从丹麦赫斯霍尔姆的Chr.Hansen A/S获得。
发酵培养基：
1.将培养物培养在商业可得的M17培养基中，其组成如下：胰蛋白胨 (酪蛋白经胰蛋白酶消化)，5g/L；大豆蛋白胨，5g/L；Lab-lemco粉末， 5g/L；
酵母提取物，2.5g/L；抗坏血酸0,5g/L；硫酸镁，0.25g/L；和乳糖， 40g/L
使用相同的M17培养基组成进行发酵，使用酵母作为血红素源、需氧阳性对照(其中氯化血红素(Sigma Aldrich)用作血红素源)和厌氧阴性对照 (没有血红素源)。
培养基通过UHT处理(143℃8sec.)灭菌。最终培养基的pH为6.5。
发酵条件和培养物：
使用1％(w/w)的上述培养物作为接种物，上述灭活酵母之一作为血红素源，在30℃下通气，在2L实验室规模发酵罐中进行发酵。对于作为阳性对照的需氧发酵，应用与需氧发酵相同的条件，在包括氯化血红素作为血红素源的M17培养基中通气。对于作为阴性对照的厌氧发酵，应用与需氧发酵相同的条件，但在不包括血红素源的M17培养基中不通气。使培养物酸化至pH 6.0。随后通过控制添加27％NH4OH将pH维持在6.0。
当没有检测到进一步的碱基消耗时，将各培养物冷却至约10℃。
冷却后，通过离心将培养基中的细菌浓缩6-18倍，随后在液氮中在一个大气压下冷冻成颗粒，以产生所谓的冷冻直投式培养物(F-DVS)。将F- DVS颗粒储存在–50℃，直至进一步分析。
以两种不同的方式具体说明发酵产量：
-通过在600nm(OD600)作为光密度测量的获得的生物质，或
-通过每100L发酵培养基以kg(千克)计的F-DVS培养物，其中根据实施例3：分析程序QAm-043中描述的Pearce测试，F-DVS培养物的“酸化活性”为4.8-5.1。
工艺参数评估
当从厌氧生长到呼吸生长时，乳酸乳球菌深刻地改变代谢。与厌氧生长相比，生物质大约增加了一倍，并且在呼吸生长期间酸的产生减少。酸的产生减少从碱基流(每次每体积使用的碱基量)和用于在发酵过程中保持指定pH设定点的总碱基中显而易见。
在M17培养基中使用DSM 33529(4％w/w)、DSM 33527(4％w/w)和 DSM 33528(4％w/w)作为血红素源的呼吸发酵过程(图6A、B)，与需氧阳性对照相比，显示出相似的碱基流和总碱基曲线。
在图6C、D中，在M17培养基中进行使用DSM 33529(4％w/w)、 DSM 33527(4％w/w)和DSM 33528(4％w/w)的呼吸发酵过程。与需氧阳性对照相比，使用DSM 33529(4％w/w)、DSM 33527(4％w/w)和DSM 33528(4％w/w)获得了相似的溶解氧(DO％)和CO2产生曲线(图6C、D)。不包括厌氧生长参照(厌氧阴性对照)，因为它是在氮气位于顶空的情况下运行的。
作为结论，基于图6中的过程曲线，使用DSM 33529、DSM 33527和 DSM 33528的呼吸发酵过程支持呼吸生长的表现与图6中的需氧阳性对照 (使用氯化血红素作为血红素源的对照发酵)一样好。
酵母细胞作为替代素食原料代替氯化血红素作为血红素源的呼吸生长性能总结
表4给出了发酵物、浓缩物和F-DVS产物的工艺响应(发酵时间、碱基消耗和OD)和分析结果(活细胞量和细胞总量以及酸化活性(Ta))。在图7 中，显示了总细胞(总细胞/g*产量)，这是从表4计算的关键特征。此外，它已归一化为使用氯化血红素的发酵过程(需氧阳性对照)(图7)。从表4和图7中可以看出，使用酵母的呼吸过程与需氧阳性对照产量非常相关，与厌氧阴性对照相比，该产量显著增加。
实施例3：分析程序QAm-043，酸化活性-“程序化温度曲线”Chr.Hansen A/S(丹麦)
应用
该方法用于根据Pearce测试测定酸化活性。Pearce测试包含在IDF 标准(国际乳制品标准(international dairy standard))中。
原理
酸化是根据反映温度过程的温度曲线进行的，当在乳制品中用于生产给定的乳制品时，培养物通常会经历该温度过程。
对于Pearce测试，这是切达奶酪生产过程中的奶酪制作温度。
在固定时间测量pH。
对于在分析过程中不添加凝乳酶的培养物，可以应用连续的pH测量。
分析参数
LIMS中给出了产品特异性分析参数。
温度曲线的定义(用于不使用Pearce曲线的产品)。
要使用的对照标准品。
pH测量类型。
样品和对照标准品的接种百分比。
稀释乳：206.9g冷(4℃)LAB乳(即UHT灭菌的复原脱脂乳(RSM)，含有9.5％(w/w)固体物质并在99℃下加热30分钟)。
活性乳：200g冷(4℃)低巴氏杀菌全脂乳3.5％脂肪。
凝乳酶：
标准190，用水按1:40稀释。
仪器和试剂
pH计/用于半连续pH测量的pH计，例如
PHM92。
pH电极
PFC2401。
缓冲液：pH 7.00±0.01和pH 4.01±0.01。
带有编程为根据预定的温度曲线±0.2℃进行加热的恒温器的水浴。
温度感应器。
天平，精度0.01g，小数点后至少两位
手表。
磁力搅拌器。
磁铁
烧杯，50ml。
小塑料杯。
旋转装置。
程序
分析准备
所有瓶子均应来自同一批次，即具有同一日期。
将水浴调整到要使用的温度曲线的初始温度。
将用于稀释(＝第一次称重)和用于活性(第二次称重)的瓶子置于4℃，直到即将使用。
在校准pH计前至少30min(分钟)，将pH 4.01和pH 7.00的缓冲液置于指定测量温度±0.2℃的水浴中。
分析前样品的制备。
冷冻培养物：
在第一次称重之前将冷冻样品/对照标准品置于带有干冰的泡沫箱中，并保存在那里，直到所有称重完成。
使用前解冻的冷冻培养物：
对于使用一整盒的冷冻产品，根据当前说明解冻产品。
解冻后，使用前，可以将样品在4℃下最多保存30min。
冻干培养物：
在开始分析之前，使冻干样品和对照标准品在室温下适应至少15 min。
如果样品将在第二天用于重新测试，则可以将其储存在+8℃下。
接种程序：
将产品/对照标准品直接称重到乳中。
输入具有至少两位小数的接种物的实际量(第一次称量)。
将冷冻和解冻的产品小心转动约4次，然后瓶子静置约50sec。
对于冻干产品，必须使用旋转装置。必须以经常的速度将它驱动5分钟，或直到产品完全溶解。这通过将瓶子在桌子上放片刻，然后通过查看瓶子底部来检查溶液来控制。
注意：
如果方便操作程序，第二次称重前，冷的第一次称重可以在室温下静置最多15分钟。
第二次称重：
进行第二次称重前转动稀释瓶。
输入具有至少2位小数的接种物的实际量(第二次称重)。
转动活性瓶，对样品/对照标准品重复接种程序。
给从相同的第一次称重接种的活性瓶连续接种。
在第二次称重之前或之后，向每个瓶子添加2ml凝乳酶。在此之后，转动瓶子，这样就分配了凝乳酶。
如6中所述，随后将瓶子一次性孵育。
最后将2个未接种的乳瓶置于水浴中；一个用于测量水浴温度，另一种用于测量空白乳(blind milk)中的pH。
孵育
注意：当需要更多水浴时，必须在同一个水浴中孵育带有相应样品的对照标准品。
将所有活性瓶同时孵育在为温度曲线定义的起始温度下的预热的水浴中。
在将瓶子置于水浴中的同时开始温度曲线。
此后，孵育温度由编程为遵循特定温度曲线的恒温器控制。对于 Pearce测试，请参见表4。
水浴中的水位应比乳表面高至少2cm。
表5.Pearce曲线中的温度程序(遵循IDF)
| 时间，分钟 | 温度，℃ | 变动 |
| 0 | 31.0 | ±0.2℃ |
| 50 | 31.0 | ±0.2℃ |
| 54 | 31.7 | ±0.5℃ |
| 58 | 32.2 | ±0.5℃ |
| 62 | 32.8 | ±0.5℃ |
| 66 | 33.3 | ±0.5℃ |
| 70 | 33.9 | ±0.5℃ |
| 73 | 34.4 | ±0.5℃ |
| 76 | 35.0 | ±0.5℃ |
| 79 | 35.6 | ±0.5℃ |
| 82 | 36.1 | ±0.5℃ |
| 85 | 36.7 | ±0.5℃ |
| 87.5 | 37.2 | ±0.5℃ |
| 90 | 37.8 | ±0.2℃ |
| 360 | 37.8 | ±0.2℃ |
pH电极的校准
根据有关电极校准和维护的当前说明，在初始温度下进行校准。
pH测量
孵育后，充分摇动瓶子并测量pH。
在瓶子中或在样品中进行pH测量，样品倒入50ml烧杯中并进行磁力搅拌。
输入具有至少2位小数的pH。
输入有关测量的可能备注。
测量程序一直持续到测量了所有样品/对照标准品和未接种的牛奶。
最后测量并输入缓冲液中的pH。
连续pH测量
从温度曲线开始的那一刻开始采样pH值。孵育完成后，记录在初始温度下两种缓冲液中测量的pH。
参考文献
Mogensen et al.(2002)Bulletin of the IDF No.377,10-19
Zeng et al.2020,A taxonomic note on the genus Lactobacillus:Description of 23novel genera,emended description of the genus LactobacillusBeijerinck 1901,and union of Lactobacillaceae and Leuconostoc aceae,International Journal of Systemic and Evolutionary Microbiology；Volume 70；Issue 4.
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由国际局填写
Claims (15)
1.获得微生物培养物的方法，所述方法包括以下步骤：
(i)在通气条件下在培养基中培养至少一种微生物菌株并获得发酵物，
(ii)从所述发酵物中收获所述至少一种微生物菌株以获得所述微生物培养物，
其中所述培养基包含至少一种灭活酵母菌株。
2.根据权利要求1所述的方法，所述方法进一步包括：
(iii)浓缩所述微生物培养物以获得浓缩微生物培养物。
3.根据前述权利要求中任一项所述的方法，所述方法进一步包括：
(iv)冷冻所述微生物培养物以获得冷冻微生物培养物。
4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，所述方法进一步包括：
(v)使所述冷冻微生物培养物的水升华以获得干燥微生物培养物。
5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，所述方法进一步包括：
(vii)包装步骤(iv)中获得的所述冷冻微生物培养物或步骤(v)中获得的所述干燥微生物培养物。
6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述至少一种灭活酵母菌株是热灭活酵母菌株。
7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述至少一种灭活酵母菌株是全酵母细胞。
8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述培养基不包含不适用于素食的血红素源。
9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述至少一种灭活酵母菌株选自由以下组成的组：保藏为DSM 33529的戴尔有孢圆酵母(Torulaspora delbrueckii)、保藏为DSM33527的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、保藏为DSM 33528的酿酒酵母及其组合。
10.通过权利要求1-9中任一项所述的方法能获得的培养物。
11.培养物或培养基，包含至少一种灭活酵母菌株。
12.制备食品、饲料产品、药品、乳制品调味剂和奶酪调味产品的方法，所述方法包括将有效量的根据权利要求10或11所述的培养物添加到食品、饲料产品或药品起始材料中并将接种的培养物保持在其中所述至少一种微生物菌株具有代谢活性的条件下。
13.通过权利要求1-9中任一项所述的方法能获得的发酵食品、饲料产品或药品。
14.至少一种灭活酵母菌株在发酵方法和/或发酵过程中的用途。
15.食品、饲料产品、药品、乳制品调味剂和奶酪调味产品，包含根据权利要求10或11中任一项所述的培养物。
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Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20020034815A1 (en) * | 2000-07-05 | 2002-03-21 | Lars Blank | Method of improving biomass yield of lactic acid bacterial cultures |
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Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1493806A1 (en) | 2003-07-02 | 2005-01-05 | Chr. Hansen A/S | Use of compounds involved in biosynthesis of nucleic acids as cryoprotective agents |
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Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20020034815A1 (en) * | 2000-07-05 | 2002-03-21 | Lars Blank | Method of improving biomass yield of lactic acid bacterial cultures |
| CN101137745A (zh) * | 2005-01-05 | 2008-03-05 | 科·汉森有限公司 | 化合物在生物合成核酸以增加细菌培养物的产率中的应用 |
| WO2015063282A1 (en) * | 2013-11-01 | 2015-05-07 | Dupont Nutrition Biosciences Aps | Use of algae to increase the viable active biomass of lactic acid bacteria |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| SHINO YAMASAKI-YASHIKI ET AL: "Analysis of gene expression profiles of Lactobacillus paracasei induced by direct contact with Saccharomyces cerevisiae through recognition of yeast mannan", BIOSCIENCE OF MICROBIOTA，FOOD AND HEALTH, vol. 26, no. 1, 12 November 2016 (2016-11-12), pages 8 - 10 * |
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