JPWO2020033537A5

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Publication number: JPWO2020033537A5
Application number: JP2021504204A
Authority: JP
Publication date: 2022-08-16
Anticipated expiration: 2039-08-07

Claims

（１）生体サンプルを少なくとも１つのタンパク質分解酵素と接触させて、前記生体サンプル中に存在するタンパク質Ｃ１ｑの少なくとも１つのペプチドフラグメントを産生すること、ここで、前記少なくとも１つのペプチドフラグメントは、ＳＬＧＦＣＤＴＴＮＫ（配列番号２６）及び／又はＱＴＨＱＰＰＡＰＮＳＬＩＲ（配列番号３６）を含む；そして
（２）選択反応モニタリング質量分析（ＳＲＭ－ＭＳ）を実施して、前記少なくとも１つのＣ１ｑペプチドフラグメントの存在量であって、前記生体サンプル中のＣ１ｑの濃度を決定する前記少なくともＣ１ｑペプチドフラグメントの存在量、を測定すること、
を含むアッセイ。
前記少なくとも１つのペプチドフラグメントが、ＩＡＦＳＡＴＲ（配列番号２９）をさらに含む、請求項１に記載のアッセイ。
前記少なくとも１つのペプチドフラグメントが、ＳＬＧＦＣＤＴＴＮＫ（配列番号２６）、ＩＡＦＳＡＴＲ（配列番号２９）及びＱＴＨＱＰＰＡＰＮＳＬＩＲ（配列番号３６）の各々を含む、請求項２に記載のアッセイ。
ステップ（１）とステップ（２）との間で、前記生体サンプルに、前記少なくとも１つのＣ１ｑペプチドフラグメントのアミノ酸配列と同じアミノ酸配列を含む少なくとも１つの標識された合成Ｃ１ｑペプチドフラグメントを添加することをさらに含む、請求項１～３のいずれか一項に記載のアッセイ。
前記少なくとも１つのＣ１ｑペプチドフラグメントの前記存在量を測定することが、ＳＲＭ－ＭＳによって得られた少なくとも１つのＣ１ｑペプチドに対応するシグナルを標準曲線と比較することを含む、請求項１～４のいずれか一項に記載のアッセイ。
前記標準曲線が、
（ａ）既知量の精製Ｃ１ｑタンパク質とＣ１ｑ枯渇血清とを混合することによって少なくとも２つのＣ１ｑ濃度標準を調製し；
（ｂ）前記少なくとも２つのＣ１ｑ濃度標準に、前記Ｃ１ｑ濃度標準をタンパク質分解酵素と接触させた後に生成することが予想されるＣ１ｑの少なくとも１つのペプチドフラグメントと同じアミノ酸配列を有する少なくとも１つの標識された合成ペプチドフラグメントを添加し；
（ｃ）前記少なくとも２つの標識されたＣ１ｑ濃度標準をタンパク質分解酵素と接触させて、Ｃ１ｑの少なくとも１つのペプチドフラグメントを産生し；
（ｄ）選択反応モニタリング質量分析を実施して、Ｃ１ｑの前記少なくとも１つのペプチドフラグメントに対応するシグナルの強度、及び前記少なくとも２つの標識されたＣ１ｑ濃度標準の各々において前記少なくとも１つの標識された合成ペプチドフラグメントに対応するシグナルの強度を決定し；そして
（ｅ）前記シグナル及び前記既知量のＣ１ｑタンパク質を用いて標準曲線を決定すること、
を含む方法を用いて作成される、請求項５に記載のアッセイ。
前記生体サンプルが：
ｉ）血液サンプル；及び／又は
ｉｉ）ヒトサンプル若しくは非ヒト霊長類サンプルである、請求項１～６のいずれか一項に記載のアッセイ。
前記選択反応モニタリング質量分析がＬＣ－ＳＲＭ－ＭＳ／ＭＳである、請求項１～７のいずれか一項に記載のアッセイ。
少なくとも１つの単離された合成ペプチドを含む組成物であって、前記組成物は、タンパク質Ｃ１ｑから選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つの単離された合成ペプチドを含み、前記タンパク質Ｃ１ｑから選択される前記アミノ酸配列が、Ｃ１ｑを少なくとも１つのタンパク質分解酵素と接触させることによって生成するＣ１ｑペプチドフラグメントの配列であり、ここで、前記少なくとも１つの単離された合成ペプチドは、ＳＬＧＦＣＤＴＴＮＫ（配列番号２６）及び／又はＱＴＨＱＰＰＡＰＮＳＬＩＲ（配列番号３６）を含む、組成物。
前記少なくとも１つのタンパク質分解酵素がトリプシンである、請求項１～８のいずれか一項に記載のアッセイ又は請求項９に記載の組成物。
前記少なくとも１つの単離された合成ペプチドが標識されている、請求項９又は請求項１０に記載の組成物。
前記少なくとも１つの単離された合成ペプチドが、ＩＡＦＳＡＴＲ（配列番号２９）をさらに含む、請求項９に記載の組成物。
前記合成ペプチドＳＬＧＦＣＤＴＴＮＫ（配列番号２６）中のシステインが修飾されている、請求項９～１２のいずれか一項に記載の組成物。
前記システインがカルバミドメチル化によって修飾されている、請求項１３に記載の組成物。
少なくとも１つの遷移イオン対を含む組成物であって、前記組成物は前記タンパク質Ｃ１ｑの少なくとも１つの遷移イオン対を含み、前記少なくとも１つの遷移イオン対が、対応するｍ／ｚを有する前駆イオンと対応するイオンｍ／ｚを有するフラグメントイオンとからなり、前記遷移イオン対が、前駆体ＳＬＧＦＣ（Ｃａｍ）ＤＴＴＮＫ（配列番号４１）遷移対５７１．８－９４２．３、及び前駆体ＱＴＨＱＰＰＡＰＮＳＬＩＲ（配列番号３６）遷移対４８７．０－３５０．３から選択される、組成物。