JPWO2020021338A5

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Publication number: JPWO2020021338A5
Application number: JP2021504450A
Authority: JP
Publication date: 2022-08-03

Claims

キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を標的に結合するためのアプタマーブリッジであって、１つ以上のＣＡＲ結合アプタマーおよび１つ以上の標的結合アプタマーを含むブリッジで、前記１つ以上のＣＡＲ結合アプタマーが１つ以上のリンカーによって前記標的結合アプタマーに接続され、前記１つ以上のＣＡＲ結合アプタマーのうちの少なくとも１つが前記ＣＡＲの細胞外ドメインに結合している、前記アプタマーブリッジ。
前記ＣＡＲ細胞外ドメインが特異的にペプチドネオエピトープ（ＰＮＥ）を結合することができる、請求項１に記載のアプタマーブリッジ。
免疫細胞上に発現されるＣＡＲへのブリッジのＣＡＲ結合アプタマーの結合が（ｉ）免疫細胞を活性化する、または（ｉｉ）免疫細胞を活性化しない、請求項１または請求項２に記載のアプタマーブリッジ。
前記免疫細胞がＴ細胞、ＮＫ細胞、またはマクロファージであり、前記結合が、前記アプタマーブリッジの標的結合アプタマーに結合した標的細胞の破壊につながる、請求項３に記載のアプタマーブリッジ。
前記リンカーが、共有結合、一本鎖核酸、二本鎖核酸、ペプチド、ポリペプチド、オリゴ糖、多糖、合成ポリマー、ヒドラゾン、チオエーテル、エステル、トリアゾール、ナノ粒子、ミセル、リポソーム、細胞、およびそれらの組合せからなる群から選択されるリンカー部分を含むか、またはからなる、請求項１～４のいずれか一項に記載のアプタマーブリッジ。
（ｉ）免疫グロブリンペプチドまたはそのフラグメントを含有しない、および／または（ｉｉ）ペプチドまたはポリペプチドを含有しない、請求項１～５のいずれ一項に記載のアプタマーブリッジ。
（ｉ）前記リンカー部分がＤＮＡ、ＲＮＡ、およびＸＮＡから選択される一本鎖または二本鎖核酸を含む、または
（ｉｉ）前記リンカー部分が免疫グロブリンポリペプチドまたはそのフラグメントであり、好ましくは免疫グロブリンポリペプチドは単鎖Ｆｖである、または
（ｉｉｉ）前記リンカー部分がグルカン、デキストラン、グリコーゲン、デンプン、およびそれらの誘導体からなる群から選択される多糖である、または
（ｉｖ）前記リンカー部分がポリ（アミドアミン）（ＰＡＭＡＭ）およびポリ（βアミノエステル）（ＰＢＡＥ）から選択される合成ポリマーである、
請求項５に記載のアプタマーブリッジ。
前記ＣＡＲ細胞外ドメインが免疫グロブリンポリペプチドまたはそのフラグメントまたは誘導体を含む、請求項１～７のいずれか一項に記載のアプタマーブリッジ。
（ｉ）前記ＰＮＥがヒトプロテオームに見つからないアミノ酸配列を有する、または
（ｉｉ）前記ＰＮＥが、配列番号１～７からなる群より選択される、
請求項２に記載のアプタマーブリッジ。
少なくとも１つの標的結合アプタマーが、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ１２３、ＢＣＭＡ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、メソセリン、ＰＳＡ、ＰＳＭＡ、ＭＡＲＴ－１、ＭＡＲＴ－２、Ｇｐ１００、チロシナーゼ、ｐ５３、ｒａｓ、ＭＵＣ１、ＳＡＰ－１、サバイビン、ＣＥＡ、Ｅｐ－ＣＡＭ、Ｈｅｒ２、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＢＲＣＡ１／２、ＣＤ７０、ＣＤ７３、および変異ＳＯＤからなる群から選択された標的に結合する、請求項１～９のいずれか一項に記載のアプタマーブリッジ。
２つ以上の同一または非同一のＣＡＲ結合アプタマーを含む、好ましくは２つ上の同一または非同一の標的結合アプタマーを含む、請求項１～１０のいずれか一項に記載のアプタマーブリッジ。
（ｉ）環状、星形、デンドリマー、線形、分岐、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される分子形態を含む、および／または
（ｉｉ）ＣＡＲ結合アプタマーの１つ以上と約７０～約２００オングストロームの範囲内の１つ以上の標的結合アプタマーとの間に距離を有する、および／または
（ｉｉｉ）Ｔ細胞、ＮＫ細胞、Ｂ細胞、またはマクロファージにおいて発現する場合に、前記ＣＡＲに結合する、好ましくは前記ＣＡＲに結合した際に、前記Ｔ細胞、ＮＫ細胞、Ｂ細胞、またはマクロファージを活性化する、および／または
（ｉｖ）１つ以上のＣＡＲ結合アプタマーおよび１つ以上の標的結合アプタマーがそれぞれ１０ｎＭ未満、好ましくは１ｎＭ未満、より好ましくは１００ｐＭ未満または１０ｐＭ未満の結合親和性を有する、
請求項１～１１のいずれか一項に記載のアプタマーブリッジ。
請求項１～１２のいずれか一項に記載のアプタマーブリッジと、前記ＣＡＲを発現する免疫細胞を含み、好ましくは前記アプタマーブリッジのＣＡＲ結合アプタマーに結合した際に前記免疫細胞が活性化される、免疫療法のためのシステム。
がん、病原体、または炎症細胞またはタンパク質に対する免疫応答を増強させるために用いる、請求項１３に記載のシステム。
請求項１～１２のいずれか一項に記載のアプタマーブリッジと、前記ＣＡＲをコードするウイルスベクターを含み、好ましくはウイルスベクターがレンチウイルスベクターである、対象に免疫療法を提供するためのキット。
さらに前記ＣＡＲ結合アプタマーまたはその一部の相補配列を有するアプタマーを含む、請求項１５に記載のキット。
（ｉ）生体内または生体外の免疫細胞における発現のためのＣＡＲをコードするウイルスベクターと、（ｉｉ）前記ＣＡＲに高い親和性結合が可能なアプタマーを含み、好ましくはウイルスベクターがレンチウイルスベクターである、対象に免疫療法を提供するためのキット。
請求項１～請求項１２のいずれか一項に記載のアプタマーブリッジと、前記ブリッジのＣＡＲ結合アプタマーと同じＣＡＲに結合するが、前記ブリッジによって結合される前記標的には結合しない、標識および／または非標識ＣＡＲ結合アプタマーとを含むキット。
請求項１～１２のいずれか一項に記載のアプタマーブリッジと、前記ブリッジの標的結合アプタマーと同じ標的に結合するが、前記ブリッジによって結合されたＣＡＲには結合しない、標識および／または非標識の標的結合アプタマーを含むキット。
その必要とする対象において免疫療法を行う方法に用いるためのアプタマーブリッジであって、当該方法は以下のステップを含む：
（ａ）ＣＡＲを発現する細胞の集団を対象に投与し、ここで前記ＣＡＲは、ペプチドネオエピトープ（ＰＮＥ）を特異的に結合することができる細胞外ドメインを含み、および
（ｂ）請求項１～１２のいずれか一項に記載のアプタマーブリッジを対象に投与すること；
それによって、前記アプタマーブリッジが前記対象のＣＡＲ発現細胞に結合し、前記ＣＡＲ発現細胞と前記標的との相互作用を誘導する。
請求項２０に記載のアプタマーブリッジであって、前記方法は、さらに以下のステップを含む：
（ａ１）前記ＣＡＲに結合する標識された単一特異性アプタマーを前記対象に投与し、前記対象に存在するＣＡＲまたはＣＡＲ発現細胞の量を決定すること。
前記工程（ｂ）が、ＣＡＲまたはＣＡＲ発現細胞の量が、前記免疫療法が成功するために必要と推定される所定量に達するか、超えた場合にのみ行われる、好ましくは、ＣＡＲまたはＣＡＲ発現細胞の量が所定量以下に低下し、一定期間経過後にステップ（ａ１）が繰り返される、請求項２１に記載のアプタマーブリッジ。
（ｉ）前記標的が標的細胞上にあり、そしてその相互作用が標的細胞の死をもたらす、または
（ｉｉ）前記相互作用が対象において増強された免疫応答をもたらす、好ましくは前記増強された免疫応答ががん、病原体、または炎症細胞またはタンパク質に対するものである、または
（ｉｉｉ）前記相互作用が対象における免疫寛容をもたらす、または
（ｉｖ）前記相互作用が対象における免疫応答の低下または終了をもたらす、または
（ｖ）前記免疫応答の強度または持続時間が、ステップ（ｂ）におけるアプタマーブリッジの投与量または投与期間によって調節される、
請求項２０～２２のいずれか一項に記載の方法。
前記免疫応答の強度または持続時間が次のステップによって制限される、請求項２０～２３のいずれか一項に記載のアプタマーブリッジ:
（ｃ）ＣＡＲ結合アプタマーまたはその一部のそれに対して相補的配列を有するアプタマーを対象に投与すること。
さらに以下のステップを含む、請求項２０～２４のいずれか一項に記載のアプタマーブリッジ：
（ａ０）前記細胞内のＣＡＲを発現するウイルスベクターを用いて対象から細胞を形質導入すること、好ましくは形質導入が体外（ｅｘｖｉｖｏ）で行われる、または形質導入が対象（体内）において行われる。