JPWO2019169351A5

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Publication number: JPWO2019169351A5
Application number: JP2020568947A
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Publication date: 2022-03-09
Anticipated expiration: 2039-03-01

Description

[0489]本開示の好ましい実施形態が本明細書において示され、記載されてきたが、このような実施形態は、例としてのみ提供される。多数の変化、変更、および置換が、現在、本開示から逸脱することなく当業者に対して生じるであろう。本明細書に記載の本開示の実施形態に対する様々な変更が本開示の実践において用いられ得ることが理解されるべきである。以下の特許請求の範囲が本開示の範囲を規定し、これらの請求項の範囲内の方法および構造ならびにこれらの均等物がそれらによって網羅されることが意図される。
本明細書は以下の発明の開示を包含する。
［１］膵前駆細胞またはその前駆体の集団をエピジェネティック修飾化合物と接触させるステップを含み、前記接触させるステップが、前記エピジェネティック修飾化合物と接触していない内分泌細胞の対応する集団と比較して、クロモグラニンＡ陽性（ＣＨＧＡ＋）細胞の割合が増加した、またはＣ－ペプチド陽性かつＮＫＸ６．１陽性（Ｃ－ＰＥＰ＋、ＮＫＸ６．１＋）の細胞の割合が増加した内分泌細胞の集団をもたらす、方法。
［２］膵前駆細胞またはその前駆体の集団をエピジェネティック修飾化合物と接触させるステップを含み、前記接触させるステップが、前記エピジェネティック修飾化合物と接触していない内分泌細胞の対応する集団と比較して、ＶＭＡＴまたはＣｄｘ２を発現する細胞の割合が減少した内分泌細胞の集団をもたらす、方法。
［３］前記エピジェネティック修飾化合物が、ＤＮＡメチル化阻害剤、ヒストンアセチルトランスフェラーゼ阻害剤、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤、またはブロモドメイン阻害剤のうち１つまたは複数を含む、［１］または［２］に記載の方法。
［４］前記エピジェネティック修飾化合物がヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤を含む、［３］に記載の方法。
［５］前記ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤がＥＺＨ２阻害剤である、［４］に記載の方法。
［６］前記ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤がＤＺＮｅｐ、ＧＳＫ１２６、およびＥＰＺ６４３８からなる群から選択される、［４］または［５］に記載の方法。
［７］前記ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤がＤＺＮｅｐである、［６］に記載の方法。
［８］前記膵前駆細胞またはその前駆体の集団に接触させる前記ＤＺＮｅｐの濃度が、約０．０５μＭ～約５０μＭ、約０．１μＭ～約１０μＭ、約０．５μＭ～約５μＭ、約０．７５μＭ～約２．５μＭ、または約１μＭ～約２μＭである、［７］に記載の方法。
［９］前記ＤＺＮｅｐの前記濃度が少なくとも約０．５μＭである、［８］に記載の方法。
［１０］前記ＤＺＮｅｐの前記濃度が約１μＭである、［８］に記載の方法。
［１１］前記エピジェネティック修飾化合物がヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤を含む、［１］から［１０］のいずれかに記載の方法。
［１２］前記ＨＤＡＣ阻害剤がクラスＩＨＤＡＣ阻害剤、クラスＩＩＨＤＡＣ阻害剤、またはそれらの組合せである、［１１］に記載の方法。
［１３］前記ＨＤＡＣ阻害剤がＫＤ５１７０、ＭＣ１５６８、およびＴＭＰ１９５からなる群から選択される、［１２］に記載の方法。
［１４］前記ＨＤＡＣ阻害剤がＫＤ５１７０である、［１３］に記載の方法。
［１５］前記エピジェネティック修飾化合物がＨＤＡＣ阻害剤およびＥＺＨ２阻害剤を含む、［１］または［２］に記載の方法。
［１６］前記エピジェネティック修飾化合物がＤＺＮｅｐおよびＫＤ５１７０を含む、［１］または［２］に記載の方法。
［１７］ｉｎｖｉｔｒｏで実施される、［１］から［１６］のいずれかに記載の方法。
［１８］前記膵前駆細胞またはその前駆体の集団を（ｉ）ＳＨＨ経路阻害剤、（ｉｉ）レチノイン酸（ＲＡ）シグナル伝達経路活性化剤、（ｉｉｉ）γ－セクレターゼ阻害剤、（ｉｖ）上皮細胞成長因子（ＥＧＦ）ファミリーからの成長因子、（ｖ）骨形成タンパク質（ＢＭＰ）シグナル伝達経路阻害剤、（ｖｉ）ＴＧＦ－βシグナル伝達経路阻害剤、（ｖｉｉ）甲状腺ホルモンシグナル伝達経路活性化剤、（ｖｉｉｉ）プロテインキナーゼ阻害剤、および（ｉｘ）ＲＯＣＫ阻害剤からなる群から選択される薬剤と接触させるステップをさらに含む、［１］から［１７］のいずれかに記載の方法。
［１９］（Ａ）前記ＳＨＨ経路阻害剤がＳＡＮＴ１を含む、
（Ｂ）前記ＲＡシグナル伝達経路活性化剤がレチノイン酸を含む、
（Ｃ）前記γ－セクレターゼ阻害剤がＸＸＩを含む、
（Ｄ）前記ＥＧＦファミリーからの成長因子がベータセルリンを含む、
（Ｅ）前記ＢＭＰシグナル伝達経路阻害剤がＬＤＮを含む、
（Ｆ）前記ＴＧＦ－βシグナル伝達経路阻害剤がＡｌｋ５ｉＩＩを含む、
（Ｇ）前記甲状腺ホルモンシグナル伝達経路活性化剤がＧＣ－１を含む、
（Ｈ）前記プロテインキナーゼ阻害剤がスタウロスポリンを含む、または
（Ｉ）前記ＲＯＣＫ阻害剤がチアゾビニンを含む、
［１８］に記載の方法。
［２０］前記膵前駆細胞またはその前駆体の集団を、ベータセルリン、チアゾビニン、レチノイン酸、ＳＡＮＴ１、ＸＸＩ、Ａｌｋ５ｉＩＩ、ＧＣ－１、ＬＤＮ、およびスタウロスポリンからなる群から選択される薬剤と接触させるステップを含む、［１８］または［１９］に記載の方法。
［２１］前記接触させるステップが少なくとも３日間である、［１８］から［２０］のいずれかに記載の方法。
［２２］前記接触させるステップが、前記膵前駆細胞またはその前駆体の集団を前記エピジェネティック修飾化合物と３日を超える期間接触させるステップ、および前記期間のうち最初の３日間に前記膵前駆細胞またはその前駆体の集団と前記接触させるステップの後で、前記ＳＨＨ経路阻害剤、前記ＲＡシグナル伝達経路活性化剤、または前記ＥＧＦファミリーからの前記成長因子を除去するステップを含む、［２１］に記載の方法。
［２３］前記接触させるステップが少なくとも５日間である、［１８］から［２２］のいずれかに記載の方法。
［２４］前記接触させるステップが約７日間である、［１８］から［２３］のいずれかに記載の方法。
［２５］前記膵前駆細胞の集団のうち少なくとも１個の細胞がＰＤＸ１およびＮＫＸ６－１のうち少なくとも１つを発現する、［１］から［２４］のいずれかに記載の方法。
［２６］前記膵前駆細胞の集団のうち少なくとも１個の細胞がＰＤＸ１およびＮＫＸ６－１の両
方を発現する、［１］から［２５］のいずれかに記載の方法。
［２７］前記内分泌細胞の集団のうち少なくとも１個の細胞がＣＨＧＡを発現する、［１］から［２６］のいずれかに記載の方法。
［２８］前記内分泌細胞の集団のうち少なくとも１個の細胞がＣ－ペプチドおよびＮＫＸ６．１を発現する、［１］から［２７］のいずれかに記載の方法。
［２９］前記内分泌細胞の集団が、フローサイトメトリーによって測定して、前記エピジェネティック修飾化合物と接触していない内分泌細胞の対応する集団よりも少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１２０％、１５０％、１８０％、２００％、２２０％、２５０％、２８０％、３００％、３２０％、３５０％、３８０％、４００％、４２０％、４５０％、４８０％、または５００％高い割合のＣＨＧＡ＋細胞を含む、［１］から［２８］のいずれかに記載の方法。
［３０］前記内分泌細胞の集団が、フローサイトメトリーによって測定して、前記エピジェネティック修飾化合物と接触していない内分泌細胞の対応する集団よりも少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１２０％、１５０％、１８０％、２００％、２２０％、２５０％、２８０％、３００％、３２０％、３５０％、３８０％、４００％、４２０％、４５０％、４８０％、または５００％高い割合のＣ－ＰＥＰ＋、ＮＫＸ６．１＋細胞を含む、［１］から［２９］のいずれかに記載の方法。
［３１］前記内分泌細胞の集団が、フローサイトメトリーによって測定して、前記少なくとも１つのエピジェネティック修飾化合物と接触していない内分泌細胞の対応する集団よりも少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１２０％、１５０％、１８０％、２００％、２２０％、２５０％、２８０％、３００％、３２０％、３５０％、３８０％、または４００％低い割合の、ＶＭＡＴまたはＣｄｘ２を発現する細胞を含む、［１］から［３０］のいずれかに記載の方法。
［３２］［１］から［３１］のいずれかに記載の方法によって生成された細胞。
［３３］細胞集団を含む組成物であって、前記細胞集団が、フローサイトメトリーによって測定して、
（ａ）少なくとも約２０％の、Ｃ－ペプチドおよびＮＫＸ６．１を発現する細胞、
（ｂ）少なくとも約６０％の、ＣＨＧＡを発現する細胞、
（ｃ）多くとも約２０％の、Ｃｄｘ２を発現する細胞、または
（ｄ）多くとも約４５％の、ＶＭＡＴ１を発現する細胞
を含む、組成物。
［３４］フローサイトメトリーによって測定して、少なくとも約３０％のＩＳＬ１陽性、ＮＫＸ６．１陽性の細胞および多くとも約２０％のＩＳＬ１陰性ＮＫＸ６．１陰性の細胞を含む細胞集団を含む組成物。
［３５］前記細胞集団が、少なくとも約３５％のＩＳＬ１陽性、ＮＫＸ６．１陽性の細胞を含む、［３４］に記載の組成物。
［３６］前記細胞集団が、少なくとも約４０％のＩＳＬ１陽性、ＮＫＸ６．１陽性の細胞を含む、［３４］に記載の組成物。
［３７］前記細胞集団が、多くとも約１５％のＩＳＬ１陰性、ＮＫＸ６．１陰性の細胞を含む、［３４］から［３６］のいずれかに記載の組成物。
［３８］フローサイトメトリーによって測定して、
（ａ）少なくとも約２０％の、Ｃ－ペプチドおよびＮＫＸ６．１を発現する細胞、
（ｂ）少なくとも約６０％の、ＣＨＧＡを発現する細胞、および
（ｃ）多くとも約２０％の、Ｃｄｘ２を発現する細胞
を含む、［３３］から［３７］のいずれかに記載の組成物。
［３９］フローサイトメトリーによって測定して、多くとも約４５％の、ＶＭＡＴ１を発現する細胞を含む、［３８］に記載の組成物。
［４０］エピジェネティック修飾化合物をさらに含む、［３３］から［３９］のいずれかに記載の組成物。
［４１］前記エピジェネティック修飾化合物が、ＤＮＡメチル化阻害剤、ヒストンアセチルトランスフェラーゼ阻害剤、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤、またはブロモドメイン阻害剤のうち１つまたは複数を含む、［４０］に記載の組成物。
［４２］前記エピジェネティック修飾化合物がヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤を含む、［４０］に記載の組成物。
［４３］前記ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤がＥＺＨ２阻害剤である、［４２］に記載の組成物。
［４４］前記ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤がＤＺＮｅｐ、ＧＳＫ１２６、およびＥＰＺ６４３８からなる群から選択される、［４２］または［４３］に記載の組成物。
［４５］前記ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤がＤＺＮｅｐである、［４４］に記載の組成物。
［４６］前記膵前駆細胞またはその前駆体の集団に接触させる前記ＤＺＮｅｐの濃度が、約０．０５μＭ～約５０μＭ、約０．１μＭ～約１０μＭ、約０．５μＭ～約５μＭ、約０．７５μＭ～約２．５μＭ、または約１μＭ～約２μＭである、［４５］に記載の組成物。
［４７］前記ＤＺＮｅｐの前記濃度が少なくとも約０．５μＭである、［４６］に記載の組成物。
［４８］前記ＤＺＮｅｐの前記濃度が約１μＭである、［４６］に記載の組成物。
［４９］前記エピジェネティック修飾化合物がヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤を含む、［４０］から［４８］のいずれかに記載の組成物。
［５０］前記ＨＤＡＣ阻害剤がクラスＩＨＤＡＣ阻害剤、クラスＩＩＨＤＡＣ阻害剤、またはそれらの組合せである、［４９］に記載の組成物。
［５１］前記ＨＤＡＣ阻害剤がＫＤ５１７０、ＭＣ１５６８、およびＴＭＰ１９５からなる群から選択される、［５０］に記載の組成物。
［５２］前記ＨＤＡＣ阻害剤がＫＤ５１７０である、［５０］に記載の組成物。
［５３］前記エピジェネティック修飾化合物がＨＤＡＣ阻害剤およびＥＺＨ２阻害剤を含む、［４０］に記載の組成物。
［５４］前記エピジェネティック修飾化合物がＤＺＮｅｐおよびＫＤ５１７０を含む、［４０］に記載の組成物。
［５５］（ｉ）ＳＨＨ経路阻害剤、（ｉｉ）レチノイン酸（ＲＡ）シグナル伝達経路活性化剤、（ｉｉｉ）γ－セクレターゼ阻害剤、（ｉｖ）上皮細胞成長因子（ＥＧＦ）ファミリーからの成長因子、（ｖ）骨形成タンパク質（ＢＭＰ）シグナル伝達経路阻害剤、（ｖｉ）ＴＧＦ－βシグナル伝達経路阻害剤、（ｖｉｉ）甲状腺ホルモンシグナル伝達経路活性化剤、（ｖｉｉｉ）プロテインキナーゼ阻害剤、および（ｉｘ）ＲＯＣＫ阻害剤からなる群から選択される薬剤をさらに含む、［３３］から［５４］のいずれかに記載の組成物。
［５６］（Ａ）前記ＳＨＨ経路阻害剤がＳＡＮＴ１を含む、
（Ｂ）前記ＲＡシグナル伝達経路活性化剤がレチノイン酸を含む、
（Ｃ）前記γ－セクレターゼ阻害剤がＸＸＩを含む、
（Ｄ）前記ＥＧＦファミリーからの成長因子がベータセルリンを含む、
（Ｅ）前記ＢＭＰシグナル伝達経路阻害剤がＬＤＮを含む、
（Ｆ）前記ＴＧＦ－βシグナル伝達経路阻害剤がＡｌｋ５ｉＩＩを含むか
（Ｇ）前記甲状腺ホルモンシグナル伝達経路活性化剤がＧＣ－１を含む、
（Ｈ）前記プロテインキナーゼ阻害剤がスタウロスポリンを含む、または
（Ｉ）前記ＲＯＣＫ阻害剤がチアゾビニンを含む、
［５５］に記載の組成物。
［５７］ベータセルリン、チアゾビニン、レチノイン酸、ＳＡＮＴ１、ＸＸＩ、Ａｌｋ５ｉＩＩ、ＧＣ－１、ＬＤＮ、およびスタウロスポリンからなる群から選択される薬剤を含む、［５５］または［５６］に記載の組成物。
［５８］膵前駆細胞、およびヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤またはヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤のうち少なくとも１つを含む組成物。
［５９］内分泌細胞をさらに含む、［５８］に記載の組成物。
［６０］前記ＨＤＡＣ阻害剤がクラスＩＨＤＡＣ阻害剤、クラスＩＩＨＤＡＣ阻害剤、またはそれらの組合せである、［５８］または［５９］に記載の組成物。
［６１］前記ＨＤＡＣ阻害剤がＫＤ５１７０、ＭＣ１５６８、およびＴＭＰ１９５からなる群から選択される、［６０］に記載の組成物。
［６２］前記ＨＤＡＣ阻害剤がＫＤ５１７０である、［６１］に記載の組成物。
［６３］前記組成物中の前記ＫＤ５１７０の濃度が、約０．０５μＭ～約５０μＭ、約０．１μＭ～約１０μＭ、約０．５μＭ～約５μＭ、約０．７５μＭ～約２．５μＭ、または約１μＭ～約２μＭである、［６２］に記載の組成物。
［６４］前記ＫＤ５１７０の前記濃度が少なくとも０．５μＭである、［６３］に記載の組成物。
［６５］前記ＫＤ５１７０の前記濃度が約１μＭである、［６４］に記載の組成物。
［６６］前記ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤がＥＺＨ２阻害剤である、［５８］から［６５］のいずれかに記載の組成物。
［６７］前記ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤がＤＺＮｅｐ、ＧＳＫ１２６、およびＥＰＺ６４３８からなる群から選択される、［６６］に記載の組成物。
［６８］前記ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤がＤＺＮｅｐである、［６７］に記載の組成物。
［６９］前記組成物中の前記ＤＺＮｅｐの濃度が、約０．０５μＭ～約５０μＭ、約０．１μＭ～約１０μＭ、約０．５μＭ～約５μＭ、約０．７５μＭ～約２．５μＭ、または約１μＭ～約２μＭである、［６８］に記載の組成物。
［７０］前記ＤＺＮｅｐの前記濃度が少なくとも約０．５μＭである、［６９］に記載の組成物。
［７１］前記ＤＺＮｅｐの前記濃度が約１μＭである、［６９］に記載の組成物。
［７２］前記ＨＤＡＣ阻害剤がＫＤ５１７０であり、前記ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤がＤＺＮｅｐである、［５８］に記載の組成物。
［７３］ｉｎｖｉｔｒｏ組成物である、［５８］から［７２］のいずれかに記載の組成物。
［７４］（ｉ）ＳＨＨ経路阻害剤、（ｉｉ）レチノイン酸（ＲＡ）シグナル伝達経路活性化剤、（ｉｉｉ）γ－セクレターゼ阻害剤、（ｉｖ）上皮細胞成長因子（ＥＧＦ）ファミリーからの成長因子、（ｖ）骨形成タンパク質（ＢＭＰ）シグナル伝達経路阻害剤、（ｖｉ）ＴＧＦ－βシグナル伝達経路阻害剤、（ｖｉｉ）甲状腺ホルモンシグナル伝達経路活性化剤、（ｖｉｉｉ）プロテインキナーゼ阻害剤、および（ｉｘ）ＲＯＣＫ阻害剤からなる群から選択される薬剤をさらに含む、［５８］から［７３］のいずれかに記載の組成物。
［７５］（Ａ）前記ＳＨＨ経路阻害剤がＳＡＮＴ１を含むか、
（Ｂ）前記ＲＡシグナル伝達経路活性化剤がレチノイン酸を含むか、
（Ｃ）前記γ－セクレターゼ阻害剤がＸＸＩを含むか、
（Ｄ）前記ＥＧＦファミリーからの成長因子がベータセルリンを含むか、
（Ｅ）前記ＢＭＰシグナル伝達経路阻害剤がＬＤＮを含むか、
（Ｆ）前記ＴＧＦ－βシグナル伝達経路阻害剤がＡｌｋ５ｉＩＩを含むか、
（Ｇ）前記甲状腺ホルモンシグナル伝達経路活性化剤がＧＣ－１を含むか、
（Ｈ）前記プロテインキナーゼ阻害剤がスタウロスポリンを含むか、または
（Ｉ）前記ＲＯＣＫ阻害剤がチアゾビニンを含む、
［７４］に記載の組成物。
［７６］ベータセルリン、チアゾビニン、レチノイン酸、ＳＡＮＴ１、ＸＸＩ、Ａｌｋ５ｉＩＩ、ＧＣ－１、ＬＤＮ、およびスタウロスポリンからなる群から選択される薬剤をさらに含む、［７４］または［７５］に記載の組成物。
［７７］膵前駆細胞またはその前駆体を含む細胞集団をヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤と接触させて、内分泌細胞を含む細胞集団を産生させるステップ、および
前記内分泌細胞を含む細胞集団を成熟させて、グルコースチャレンジに対してｉｎｖｉ
ｔｒｏグルコース刺激インスリン分泌応答を呈する少なくとも１個の膵β細胞を得るステップ
を含む方法。
［７８］前記細胞集団を（ｉ）ＳＨＨ経路阻害剤、（ｉｉ）レチノイン酸（ＲＡ）シグナル伝達経路活性化剤、（ｉｉｉ）γ－セクレターゼ阻害剤、（ｉｖ）上皮細胞成長因子（ＥＧＦ）ファミリーからの成長因子、（ｖ）骨形成タンパク質（ＢＭＰ）シグナル伝達経路阻害剤、（ｖｉ）ＴＧＦ－βシグナル伝達経路阻害剤、（ｖｉｉ）甲状腺ホルモンシグナル伝達経路活性化剤、（ｖｉｉｉ）プロテインキナーゼ阻害剤、および（ｉｘ）ＲＯＣＫ阻害剤からなる群から選択される薬剤と接触させるステップをさらに含む、［７７］に記載の方法。
［７９］（Ａ）前記ＳＨＨ経路阻害剤がＳＡＮＴ１を含む、
（Ｂ）前記ＲＡシグナル伝達経路活性化剤がレチノイン酸を含む、
（Ｃ）前記γ－セクレターゼ阻害剤がＸＸＩを含む、
（Ｄ）前記ＥＧＦファミリーからの成長因子がベータセルリンを含む、
（Ｅ）前記ＢＭＰシグナル伝達経路阻害剤がＬＤＮを含む、
（Ｆ）前記ＴＧＦ－βシグナル伝達経路阻害剤がＡｌｋ５ｉＩＩを含む、
（Ｇ）前記甲状腺ホルモンシグナル伝達経路活性化剤がＧＣ－１を含む、
（Ｈ）前記プロテインキナーゼ阻害剤がスタウロスポリンを含む、または
（Ｉ）前記ＲＯＣＫ阻害剤がチアゾビニンを含む、
［７８］に記載の方法。
［８０］前記細胞集団をベータセルリン、チアゾビニン、レチノイン酸、ＳＡＮＴ１、ＸＸＩ、Ａｌｋ５ｉＩＩ、ＧＣ－１、ＬＤＮ、およびスタウロスポリンからなる群から選択される薬剤と接触させるステップを含む、［７８］または［７９］に記載の方法。
［８１］前記細胞集団をヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤と接触させるステップをさらに含む、［７７］から［８０］のいずれかに記載の方法。
［８２］前記ＨＤＡＣ阻害剤がＫＤ５１７０である、［８１］に記載の方法。
［８３］前記ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤がＤＺＮｅｐ、ＧＳＫ１２６、およびＥＰＺ６４３８からなる群から選択される、［７７］から［８２］のいずれかに記載の方法。
［８４］前記ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤がＤＺＮｅｐである、［８３］に記載の方法。
［８５］前記ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤と接触させる前記ステップが、前記内分泌細胞を含み、前記ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤と接触していない内分泌細胞の対応する集団と比較して、クロモグラニンＡ陽性（ＣＨＧＡ＋）細胞の割合が増加した、またはＣ－ペプチド陽性かつＮＫＸ６．１陽性（Ｃ－ＰＥＰ＋、ＮＫＸ６．１＋）の細胞の割合が増加した集団をもたらす、［７７］から［８４］のいずれかに記載の方法。
［８６］前記ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤と接触させる前記ステップが、前記内分泌細胞を含み、前記ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤と接触していない内分泌細胞の対応する集団と比較して、ＶＭＡＴまたはＣｄｘ２を発現する細胞の割合が減少した集団をもたらす、［７７］から［８５］のいずれかに記載の方法。
［８７］前記膵前駆細胞またはその前駆体のうち前記少なくとも１個の細胞がＰｄｘ１およびＮＫＸ６．１の両方を発現する、［７７］から［８６］のいずれかに記載の方法。
［８８］複数の幹細胞をｉｎｖｉｔｒｏで分化させて前記膵前駆細胞またはその前駆体を含む前記細胞集団を得るステップをさらに含む、［７７］から［８７］のいずれかに記載の方法。
［８９］［７７］から［８８］のいずれかに記載の方法によって産生された膵β細胞。
［９０］（ａ）Ｐｄｘ１陰性ＮＫＸ６．１陰性の原腸管細胞の集団を骨形成タンパク質（ＢＭＰ）シグナル伝達経路阻害剤およびトランスフォーメーション成長因子β（ＴＧＦ－β）スーパーファミリーからの成長因子と接触させ、それによりＰｄｘ１陽性、ＮＫＸ６．１陽性の膵前駆細胞を含む細胞集団を産生させるステップ、および
（ｂ）前記Ｐｄｘ１陽性、ＮＫＸ６．１陽性の膵前駆細胞を含む前記細胞集団をエピジェネティック修飾化合物と接触させて、内分泌細胞を含む細胞集団を産生させるステップ
を含む方法。
［９１］前記ＢＭＰシグナル伝達経路阻害剤がＤＭＨ－１、その誘導体、類似体、または変異体を含む、［９０］に記載の方法。
［９２］前記Ｐｄｘ１陰性、ＮＫＸ６．１陰性の原腸管細胞の集団に接触させる前記ＤＭＨ－１の濃度が、約０．０１μＭ～約１０μＭ、約０．０５μＭ～約５μＭ、約０．１μＭ～約１μＭ、または約０．１５μＭ～約０．５μＭである、［９１］に記載の方法。
［９３］前記Ｐｄｘ１陰性、ＮＫＸ６．１陰性の原腸管細胞の集団に接触させる前記ＤＭＨ－１の濃度が約０．２５μＭのＤＭＨ－１である、［９１］に記載の方法。
［９４］前記ＴＧＦ－βスーパーファミリーからの成長因子がアクチビンＡを含む、［９１］から［９３］のいずれかに記載の方法。
［９５］前記Ｐｄｘ１陰性、ＮＫＸ６．１陰性の原腸管細胞の集団に接触させる前記アクチビンＡの濃度が、約０．５ｎｇ／ｍＬ～約２００ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１００ｎｇ／ｍＬ、約２ｎｇ／ｍＬ～約５０ｎｇ／ｍＬ、または約５ｎｇ／ｍＬ～約３０ｎｇ／ｍＬである、［９４］に記載の方法。
［９６］前記Ｐｄｘ１陰性、ＮＫＸ６．１陰性の原腸管細胞の集団に接触させる前記アクチビンＡの濃度が少なくとも約５ｎｇ／ｍＬまたは少なくとも約１０ｎｇ／ｍＬのアクチビンＡである、［９４］に記載の方法。
［９７］前記Ｐｄｘ１陰性、ＮＫＸ６．１陰性の原腸管細胞の集団に接触させる前記アクチビンＡの濃度が約２０ｎｇ／ｍＬのアクチビンＡである、［９４］に記載の方法。
［９８］前記Ｐｄｘ１陰性、ＮＫＸ６．１陰性の原腸管細胞の集団を接触させる前記ステップが、ＦＧＦファミリーからの成長因子、ＳＨＨ経路阻害剤、ＲＡシグナル伝達経路活性化剤、プロテインキナーゼＣ活性化剤、およびＲＯＣＫ阻害剤からなる群から選択される薬剤と接触させるステップをさらに含む、［９０］から［９７］のいずれかに記載の方法。
［９９］前記エピジェネティック修飾化合物が、ＤＮＡメチル化阻害剤、ヒストンアセチルトランスフェラーゼ阻害剤、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、ヒストンメチルトランスフェラ
ーゼ阻害剤、およびブロモドメイン阻害剤からなる群から選択される化合物を含む、［９０］から［９８］のいずれかに記載の方法。
［１００］前記エピジェネティック修飾化合物がヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤を含む、［９９］に記載の方法。
［１０１］前記ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤がＥＺＨ２阻害剤である、［１００］に記載の方法。
［１０２］前記ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤がＤＺＮｅｐ、ＧＳＫ１２６、およびＥＰＺ６４３８からなる群から選択される、［１００］または［１０１］に記載の方法。
［１０３］前記ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤がＤＺＮｅｐである、［１０２］に記載の方法。
［１０４］前記膵前駆細胞またはその前駆体の集団に接触させる前記ＤＺＮｅｐの濃度が、約０．０５μＭ～約５０μＭ、約０．１μＭ～約１０μＭ、約０．５μＭ～約５μＭ、約０．７５μＭ～約２．５μＭ、または約１μＭ～約２μＭである、［１０３］に記載の方法
［１０５］前記ＤＺＮｅｐの前記濃度が少なくとも約０．５μＭである、［１０４］に記載の方法。
［１０６］前記ＤＺＮｅｐの前記濃度が約１μＭである、［１０４］に記載の方法。
［１０７］前記エピジェネティック修飾化合物がヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤を含む、［９０］から［１０６］のいずれかに記載の方法。
［１０８］前記ＨＤＡＣ阻害剤がクラスＩＨＤＡＣ阻害剤、クラスＩＩＨＤＡＣ阻害剤、またはそれらの組合せである、［１０７］に記載の方法。
［１０９］前記ＨＤＡＣ阻害剤がＫＤ５１７０、ＭＣ１５６８、およびＴＭＰ１９５からなる群から選択される、［１０８］に記載の方法。
［１１０］前記ＨＤＡＣ阻害剤がＫＤ５１７０である、［１０９］に記載の方法。
［１１１］ｉｎｖｉｔｒｏで実施される、［９０］から［１１０］のいずれかに記載の方法。
［１１２］前記Ｐｄｘ１陽性、ＮＫＸ６．１陽性の膵前駆細胞を含む前記集団を（ｉ）ＳＨＨ経路阻害剤、（ｉｉ）レチノイン酸（ＲＡ）シグナル伝達経路活性化剤、（ｉｉｉ）γ－セクレターゼ阻害剤、（ｉｖ）上皮細胞成長因子（ＥＧＦ）ファミリーからの成長因子、（ｖ）骨形成タンパク質（ＢＭＰ）シグナル伝達経路阻害剤、（ｖｉ）ＴＧＦ－βシグナル伝達経路阻害剤、（ｖｉｉ）甲状腺ホルモンシグナル伝達経路活性化剤、（ｖｉｉｉ）プロテインキナーゼ阻害剤、および（ｉｘ）ＲＯＣＫ阻害剤からなる群から選択される薬剤と接触させるステップをさらに含む、［９０］から［１１１］のいずれかに記載の方法。
［１１３］（Ａ）前記ＳＨＨ経路阻害剤がＳＡＮＴ１を含む、
（Ｂ）前記ＲＡシグナル伝達経路活性化剤がレチノイン酸を含む、
（Ｃ）前記γ－セクレターゼ阻害剤がＸＸＩを含む、
（Ｄ）前記ＥＧＦファミリーからの成長因子がベータセルリンを含む、
（Ｅ）前記ＢＭＰシグナル伝達経路阻害剤がＬＤＮを含む、
（Ｆ）前記ＴＧＦ－βシグナル伝達経路阻害剤がＡｌｋ５ｉＩＩを含むか、
（Ｇ）前記甲状腺ホルモンシグナル伝達経路活性化剤がＧＣ－１を含む、
（Ｈ）前記プロテインキナーゼ阻害剤がスタウロスポリンを含む、または
（Ｉ）前記ＲＯＣＫ阻害剤がチアゾビニンを含む、
［１１２］に記載の方法。
［１１４］前記Ｐｄｘ１陽性、ＮＫＸ６．１陽性の膵前駆細胞を含む前記集団をベータセルリン、チアゾビニン、レチノイン酸、ＳＡＮＴ１、ＸＸＩ、Ａｌｋ５ｉＩＩ、ＧＣ－１、ＬＤＮ、およびスタウロスポリンからなる群から選択される薬剤と接触させるステップを含む、［１１２］または［１１３］に記載の方法。
［１１５］前記接触させるステップが少なくとも３日間である、［１１２］から［１１４］のいずれかに記載の方法。
［１１６］前記接触させるステップが、前記Ｐｄｘ１陽性、ＮＫＸ６．１陽性の膵前駆細胞を含む前記集団を前記エピジェネティック修飾化合物と３日を超える期間接触させるステップ、および前記期間のうち最初の３日間に前記膵前駆細胞またはその前駆体の集団と前記接触させるステップの後で、前記ＳＨＨ経路阻害剤、前記ＲＡシグナル伝達経路活性化剤、または前記ＥＧＦファミリーからの成長因子を除去するステップを含む、［１１５］に記載の方法。
［１１７］前記接触させるステップが少なくとも５日間である、［１１２］から［１１６］のいずれかに記載の方法。
［１１８］前記接触させるステップが約７日間である、［１１２］から［１１６］のいずれかに記載の方法。
［１１９］前記Ｐｄｘ１陽性、ＮＫＸ６．１陽性の膵前駆細胞を含む細胞集団が、フローサイトメトリーによって測定して多くとも約１０％の、Ｃｄｘ２を発現する細胞を含む、［９０］から［１１８］のいずれかに記載の方法。
［１２０］前記Ｐｄｘ１陽性、ＮＫＸ６．１陽性の膵前駆細胞を含む細胞集団が、前記骨形成タンパク質（ＢＭＰ）シグナル伝達経路阻害剤および前記トランスフォーメーション成長因子β（ＴＧＦ－β）スーパーファミリーからの成長因子と接触していない対応する細胞集団と比較して、より少ない割合の、Ｃｄｘ２を発現する細胞を含む、［９０］から［１１９］のいずれかに記載の方法。
［１２１］前記内分泌細胞を含む細胞集団が、フローサイトメトリーによって測定して、少なくとも約４０％の、ＩＳＬ１およびＮＫＸ６．１を発現する細胞を含む、［９０］から［１２０］のいずれかに記載の方法。
［１２２］前記内分泌細胞を含む細胞集団が、前記骨形成タンパク質（ＢＭＰ）シグナル伝達経路阻害剤および前記トランスフォーメーション成長因子β（ＴＧＦ－β）スーパーファミリーからの成長因子と前記接触をしていない対応する細胞集団と比較して、より多い割合の、ＩＳＬ１およびＮＫＸ６．１を発現する細胞を含む、［９０］から［１２１］のいずれかに記載の方法。
［１２３］前記内分泌細胞を含む細胞集団が、フローサイトメトリーによって測定して、多くとも約１５％のＩＳＬ１陰性、ＮＫＸ６．１陰性の細胞を含む、［９０］から［１２２］のいずれかに記載の方法。
［１２４］前記内分泌細胞を含む細胞集団が、前記骨形成タンパク質（ＢＭＰ）シグナル伝達経路阻害剤および前記トランスフォーメーション成長因子β（ＴＧＦ－β）スーパーファミリーからの成長因子と前記接触をしていない対応する細胞集団と比較して、より少ない割合のＩＳＬ１陰性、ＮＫＸ６．１陰性の細胞を含む、［９０］から［１２２］のいずれかに記載の方法。
［１２５］前記内分泌細胞を含む細胞集団を凍結保存するステップをさらに含む、［９０］から［１２４］のいずれかに記載の方法。
［１２６］前記内分泌細胞を含む細胞集団が細胞クラスターであり、前記方法が、
（ａ）前記細胞クラスターから複数の細胞を分離するステップ、および
（ｂ）ステップ（ａ）からの前記複数の細胞を再凝集培地中で培養して、前記複数の細胞の少なくとも一部に第２の細胞クラスターを形成させるステップ
をさらに含む、［９０］から［１２５］のいずれかに記載の方法。
［１２７］前記分離するステップが、前記複数の細胞をフローサイトメトリーに供するステップを含まない、［１２６］に記載の方法。
［１２８］前記再凝集培地が血清を含まない、［１２６］または［１２７］に記載の方法。
［１２９］前記再凝集培地が外因性分化因子を含まない、［１２６］から［１２８］のいずれかに記載の方法。
［１３０］前記内分泌細胞をｉｎｖｉｔｒｏで成熟させて、グルコースチャレンジに対してｉｎ
ｖｉｔｒｏグルコース刺激インスリン分泌応答を呈する少なくとも１個の膵β細胞を得るステップをさらに含む、［９０］から［１２９］のいずれかに記載の方法。
［１３１］前記成熟させるステップが無血清培地中で実施される、［１３０］に記載の方法。
［１３２］前記成熟させるステップがゼノフリー培地中で実施される、［１３０］または［１３１］に記載の方法。
［１３３］前記成熟させるステップが外因性分化因子を含まない培地中で実施される、［１３０］から［１３２］のいずれかに記載の方法。
［１３４］前記成熟させるステップがヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）の存在下で実施される、［１３０］から［１３３］のいずれかに記載の方法。
［１３５］前記ＨＳＡが約０．１％～約５％、約０．５％～約２％の濃度で存在する、［１３４］に記載の方法。
［１３６］前記ＨＳＡが約１％の濃度で存在する、［１３４］に記載の方法。
［１３７］（ａ）集団中の多能性幹細胞をＴＧＦ－βスーパーファミリーからの成長因子およびＷＮＴシグナル伝達経路活性化剤と接触させることによって、前記多能性幹細胞を胚体内胚葉細胞に分化させるステップ、
（ｂ）前記胚体内胚葉細胞をＦＧＦファミリーからの成長因子と接触させることによって、前記胚体内胚葉細胞の少なくとも一部を原腸管細胞に分化させるステップ、
（ｃ）前記原腸管細胞をＲＯＣＫ阻害剤、ＦＧＦファミリーからの成長因子、ＢＭＰシグ
ナル伝達経路阻害剤、ＰＫＣ活性化剤、レチノイン酸シグナル伝達経路活性化剤、ＳＨＨ経路阻害剤、およびＴＧＦ－βスーパーファミリーからの成長因子と接触させることによって前記原腸管細胞の少なくとも一部をＰｄｘ１陽性膵前駆細胞に分化させるステップ、（ｄ）前記Ｐｄｘ１陽性膵前駆細胞をＲＯＣＫ阻害剤、ＴＧＦβスーパーファミリーからの成長因子、ＦＧＦファミリーからの成長因子、ＲＡシグナル伝達経路活性化剤、およびＳＨＨ経路阻害剤と接触させることによって前記Ｐｄｘ１陽性膵前駆細胞の少なくとも一部をＰｄｘ１陽性、ＮＫＸ６．１陽性の膵前駆細胞に分化させるステップ、ならびに
（ｅ）前記Ｐｄｘ１陽性、ＮＫＸ６．１陽性の膵前駆細胞をＴＧＦ－βシグナル伝達経路阻害剤、ＥＧＦファミリーからの成長因子、ＲＡシグナル伝達経路活性化剤、ＳＨＨ経路阻害剤、ＴＨシグナル伝達経路活性化剤、γ－セクレターゼ阻害剤、プロテインキナーゼ阻害剤、ＲＯＣＫ阻害剤、ＢＭＰシグナル伝達経路阻害剤、およびエピジェネティック修飾化合物と接触させることによって前記Ｐｄｘ１陽性、ＮＫＸ６．１陽性の膵前駆細胞の少なくとも一部を少なくとも１個のＮＫＸ６．１＋かつＣ－ペプチド＋の細胞を含む細胞集団に分化させるステップ
を含む方法。
［１３８］［９０］から［１２９］のいずれかまたは［１３７］に記載の方法によって産生された内分泌細胞を含む細胞集団。
［１３９］［１３０］から［１３６］のいずれかに記載の方法によって産生されるＳＣ－β細胞を含む細胞集団。
［１４０］内分泌細胞を含むｉｎｖｉｔｒｏの細胞集団を約１００ｒａｄ～約１００，０００ｒａｄの線量で約１分～約６０分の時間の照射に曝露するステップを含む方法。
［１４１］幹細胞、胚体内胚葉細胞、原腸管細胞、膵前駆細胞、または内分泌細胞を含む細胞集団を照射に曝露するステップを含み、前記照射が、照射に供されていない対応する細胞集団と比較して増殖能力が低減した細胞集団をもたらす、細胞の増殖を低減させる方法。
［１４２］前記細胞集団が、約１００ｒａｄ～約５０，０００ｒａｄ、約１００ｒａｄ～約２５，０００ｒａｄ、約１００ｒａｄ～約１０，０００ｒａｄ、約２５０ｒａｄ～約２５，０００ｒａｄ、約５００ｒａｄ～約２５，０００ｒａｄ、約１，０００ｒａｄ～約２５，０００ｒａｄ、約２，５００ｒａｄ～約２５，０００ｒａｄ、約５，０００ｒａｄ～約２５，０００ｒａｄ、または約１０，０００ｒａｄ～約１５，０００ｒａｄの照射に曝露される、［１４０］または［１４１］に記載の方法。
［１４３］前記細胞集団が約１０，０００ｒａｄの照射に曝露される、［１４０］または［１４１］に記載の方法。
［１４４］前記細胞集団が、約１分～約５５分、約１分～約５０分、約１分～約４５分、約１分～約４０分、約１分～約３５分、約１分～約３０分、約１分～約２５分、約１分～約２０分、約１分～約１０分、約１分～約５分、約１０分～約５５分、約１５分～約５５分、約２０分～約５５分、約２５分～約５５分、約３０分～約５５分、約２０分～約４０分、または約２５分～約３５分、照射に曝露される、［１４０］から［１４３］のいずれかに記載の方法。
［１４５］前記細胞集団が約３０分、照射に曝露される、［１４０］から［１４３］のいずれかに記載の方法。
［１４６］前記照射がイオン化照射を含む、［１４０］から［１４５］のいずれかに記載の方法
。
［１４７］前記イオン化照射がガンマ線、Ｘ線、紫外線放射、アルファ線、ベータ線、または中性子線を含む、［１４０］から［１４６］のいずれかに記載の方法。
［１４８］前記照射が、前記照射に供されていない対応する細胞クラスターと比較して増殖が低減した細胞集団をもたらす、［１４０］から［１４７］のいずれかに記載の方法。
［１４９］前記細胞集団が、約５０μｍ～約５００μｍ、約５０μｍ～約３００μｍ、約５０μｍ～約２００μｍ、約５０μｍ～約１５０μｍ、約６００μｍ～約１５０μｍ、約７００μｍ～約１５０μｍ、約８０μｍ～約１５０μｍ、または約６０μｍ～約１００μｍの直径を有する第２の細胞クラスターを含む、［１４０］から［１４８］のいずれかに記載の方法。
［１５０］（ａ）第１の細胞クラスターから複数の細胞を分離するステップ、および
（ｂ）ステップ（ａ）からの前記複数の細胞を再凝集培地中で培養して、前記複数の細胞の少なくとも一部に前記第２の細胞クラスターを形成させるステップ
をさらに含む、［１４９］に記載の方法。
［１５１］前記分離するステップが、前記複数の細胞をフローサイトメトリーに供するステップを含まない、［１５０］に記載の方法。
［１５２］前記第１の細胞クラスターが、第３の細胞クラスターを分離し、前記第３の細胞クラスターから分離した細胞を培養して、前記第１の細胞クラスターを形成させることによって得られる、［１５０］または［１５１］に記載の方法。
［１５３］前記細胞クラスターが前記照射の前に凍結保存され、前記方法が、凍結保存された前記細胞クラスターを前記照射の前に解凍するステップをさらに含む、［１４９］に記載の方法。
［１５４］前記細胞クラスターが前記照射に供されている間に凍結保存される、［１４９］に記載の方法。
［１５５］凍結保存された前記細胞クラスターを照射の後に解凍し、前記内分泌細胞の少なくとも一部を分化させるステップをさらに含む、［１５４］に記載の方法。
［１５６］膵前駆細胞またはその前駆体をｉｎｖｉｔｒｏで分化させることによって前記内分泌細胞を含む前記細胞集団を得るステップをさらに含む、［１４０］から［１５５］のいずれかに記載の方法。
［１５７］幹細胞をｉｎｖｉｔｒｏで分化させ、それにより前記内分泌細胞を含む前記細胞集団を産生させるステップをさらに含む、［１４０］から［１５６］のいずれかに記載の方法。
［１５８］前記内分泌細胞の少なくとも一部をｉｎｖｉｔｒｏで膵β細胞に成熟させ、それにより細胞集団を産生させるステップをさらに含む、［１４０］から［１５７］のいずれかに記載の方法。
［１５９］前記膵β細胞をそれを必要とする対象に埋め込むステップをさらに含む、［１５８］に記載の方法。
［１６０］埋め込まれた前記膵β細胞が、前記対象において少なくとも約５０日、６０日、７０日、８０日、９０日、またはそれより長く、血中グルコースレベルを制御するように構成されている、［１５９］に記載の方法。
［１６１］［１４０］から［１５７］のいずれかに記載の方法によって産生された内分泌細胞を含む細胞集団。
［１６２］［１５８］から［１６０］のいずれかに記載の方法によって産生された膵β細胞を含む細胞集団。

Claims

エピジェネティック修飾化合物、およびＰＤＸ１およびＮＫＸ６．１を発現する細胞の集団を含む、ｉｎｖｉｔｒｏ組成物。
エピジェネティック修飾化合物が、ＤＮＡメチル化阻害剤、ヒストンアセチルトランスフェラーゼ阻害剤、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤、またはブロモドメイン阻害剤のうち１つまたは複数を含む、請求項１に記載のｉｎｖｉｔｒｏ組成物。
エピジェネティック修飾化合物が、ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤を含む、請求項１に記載のｉｎｖｉｔｒｏ組成物。
ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤が、ＤＺＮｅｐ、ＧＳＫ１２６、およびＥＰＺ６４３８からなる群から選択される、請求項３に記載のｉｎｖｉｔｒｏ組成物。
約０．０５μＭ～約５０μＭ、約０．１μＭ～約１０μＭ、約０．５μＭ～約５μＭ、約０．７５μＭ～約２．５μＭ、または約１μＭ～約２μＭのエピジェネティック修飾化合物を含む、請求項１～４のいずれか１項に記載のｉｎｖｉｔｒｏ組成物。
エピジェネティック修飾化合物が、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤を含む、請求項１に記載のｉｎｖｉｔｒｏ組成物。
ＨＤＡＣ阻害剤が、ＫＤ５１７０、ＭＣ１５６８、およびＴＭＰ１９５からなる群から選択される、請求項６に記載のｉｎｖｉｔｒｏ組成物。
ＴＧＦ－βシグナル伝達経路阻害剤さらに含む、請求項１～７のいずれか１項に記載のｉｎｖｉｔｒｏ組成物。
ＴＧＦ－βシグナル伝達経路阻害剤が、Ａｌｋ５ｉＩＩ、Ａ８３－０１、ＳＢ４３１５４２、Ｄ４４７６、ＧＷ７８８３８８、ＬＹ３６４９４７、ＬＹ５８０２７６、ＳＢ５０５１２４、ＧＷ６６０４、ＳＢ－５２５３３４、およびＳＤ－２０８からなる群から選択される、請求項８に記載のｉｎｖｉｔｒｏ組成物。
甲状腺ホルモンシグナル伝達経路活性化剤をさらに含む、請求項１～９のいずれか１項に記載のｉｎｖｉｔｒｏ組成物。
甲状腺ホルモンシグナル伝達経路活性化剤が、Ｔ３またはＧＣ－１を含む、請求項１０に記載のｉｎｖｉｔｒｏ組成物。
ＲＯＣＫ阻害剤をさらに含む、請求項１～１１のいずれか１項に記載のｉｎｖｉｔｒｏ組成物。
ＲＯＣＫ阻害剤が、チアゾビビン、Ｙ－２７６３２、ファスジル／ＨＡ１０７７、および１４－１１５２からなる群から選択される、請求項１２に記載のｉｎｖｉｔｒｏ組成物。
骨形成タンパク質（ＢＭＰ）シグナル伝達経路阻害剤をさらに含む、請求項１～１３のいずれか１項に記載のｉｎｖｉｔｒｏ組成物。
骨形成タンパク質（ＢＭＰ）シグナル伝達経路阻害剤が、ＬＤＮ１９３１８９またはＤＭＨ－Ｉを含む、請求項１４に記載のｉｎｖｉｔｒｏ組成物。
レチノイン酸シグナル伝達経路活性化剤をさらに含む、請求項１～１５のいずれか１項に記載のｉｎｖｉｔｒｏ組成物。
レチノイン酸シグナル伝達経路活性化剤が、レチノイン酸、ＣＤ１５３０、ＡＭ５８０、ＴＴＨＰＢ、ＣＤ４３７、Ｃｈ５５、ＢＭＳ９６１、ＡＣ２６１０６６、ＡＣ５５６４９、ＡＭ８０、ＢＭＳ７５３、タザロテン、アダパレン、およびＣＤ２３１４からなる群から選択される、請求項１６に記載のｉｎｖｉｔｒｏ組成物。
ソニックヘッジホッグ経路阻害剤をさらに含む、請求項１～１７のいずれか１項に記載のｉｎｖｉｔｒｏ組成物。
ソニックヘッジホッグ（ＳＨＨ）経路阻害剤が、ＳＡＮＴ１、ＳＡＮＴ２、ＳＡＮＴ４、ＳＡＮＴ４、Ｃｕｒ６１４１４、フォルスコリン、トマチジン、ＡＹ９９４４、トリパラノール、およびシクロパミンからなる群から選択される、請求項１６に記載のｉｎｖｉｔｒｏ組成物。
γ－セクレターゼ阻害剤をさらに含む、請求項１～１９のいずれか１項に記載のｉｎｖｉｔｒｏ組成物。
γ－セクレターゼ阻害剤がＸＸＩまたはＤＡＰＴを含む、請求項２０に記載のｉｎｖｉｔｒｏ組成物。
スタウロスポリン、Ｒｏ－３１－８２２０、ビスインドリルマレイミド（Ｂｉｓ）化合物、１０’－｛５”－［（メトキシカルボニル）アミノ］－２”－メチル｝－フェニルアミノカルボニルスタウロスポリン、およびスタラログからなる群から選択されるプロテインキナーゼ阻害剤をさらに含む、請求項１～２１のいずれか１項に記載のｉｎｖｉｔｒｏ組成物。
（ａ）ＳＡＮＴ１、ＳＡＮＴ２、ＳＡＮＴ４、ＳＡＮＴ４、Ｃｕｒ６１４１４、フォルスコリン、トマチジン、ＡＹ９９４４、トリパラノール、およびシクロパミンからなる群から選択されるソニックヘッジホッグ経路阻害剤；
（ｂ）レチノイン酸、ＣＤ１５３０、ＡＭ５８０、ＴＴＨＰＢ、ＣＤ４３７、Ｃｈ５５、ＢＭＳ９６１、ＡＣ２６１０６６、ＡＣ５５６４９、ＡＭ８０、ＢＭＳ７５３、タザロテン、アダパレン、およびＣＤ２３１４からなる群から選択されるレチノイン酸シグナル伝達経路活性化剤；
（ｃ）ＸＸＩまたはＤＡＰＴを含むγ－セクレターゼ阻害剤；
（ｄ）ベータ－セルリン、またはＥＧＦを含む上皮細胞成長因子ファミリー由来の成長因子；
（ｅ）ＬＤＮ１９３１８９またはＤＭＨ－Ｉを含む骨形成タンパク質シグナル伝達経路阻害剤；
（ｆ）Ａｌｋ５ｉＩＩ、Ａ８３－０１、ＳＢ４３１５４２、Ｄ４４７６、ＧＷ７８８３８８、ＬＹ３６４９４７、ＬＹ５８０２７６、ＳＢ５０５１２４、ＧＷ６６０４、ＳＢ－５２５３３４、およびＳＤ－２０８からなる群から選択されるＴＧＦ－βシグナル伝達経路阻害剤；
（ｇ）Ｔ３またはＧＣ－１を含む甲状腺ホルモンシグナル伝達経路活性化剤；
（ｈ）スタウロスポリン、Ｒｏ－３１－８２２０、ビスインドリルマレイミド（Ｂｉｓ）化合物、１０’－｛５”－［（メトキシカルボニル）アミノ］－２”－メチル｝－フェニルアミノカルボニルスタウロスポリン、およびスタラログからなる群から選択されるプロテインキナーゼ阻害剤；または
（ｉ）チアゾビビン、Ｙ－２７６３２、ファスジル／ＨＡ１０７７、および１４－１１５２からなる群から選択されるＲＯＣＫ阻害剤
をさらに含む、請求項１～１７のいずれか１項に記載のｉｎｖｉｔｒｏ組成物。
チアゾビビン、レチノイン酸、ＳＡＮＴ１、ＸＸＩ、Ａｌｋ５ｉＩＩ、ＧＣ－１、ＬＤＮ１９３１８９、およびスタウロスポリンをさらに含む、請求項１～７のいずれか１項に記載のｉｎｖｉｔｒｏ組成物。
ベータ－セルリンをさらに含む、請求項２４に記載のｉｎｖｉｔｒｏ組成物。
細胞集団が、フローサイトメトリーによって測定して、
（ａ）少なくとも約２０％の、Ｃ－ペプチドおよびＮＫＸ６．１を発現する細胞、
（ｂ）少なくとも約６０％の、ＣＨＧＡを発現する細胞、
（ｃ）多くとも約２０％の、Ｃｄｘ２を発現する細胞、または
（ｄ）多くとも約４５％の、ＶＭＡＴ１を発現する細胞
を含む、組成物。