JP7451430B2 - 幹細胞のベータ細胞への分化を促進する方法 - Google Patents
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Description
[0001]本出願は、参照により全体として本明細書に組み込まれる2018年3月2日出願の米国仮特許出願第62/637,923号の利益を主張する。
参照による組込み
[0001]本明細書に記述する全ての刊行物、特許、および特許出願は、それぞれの個別の刊行物、特許、または特許出願が参照により組み込まれていると具体的にかつ個別に示されていると同程度に、参照により本明細書に組み込まれる。他に指示がなければ、本明細書に記述する刊行物、特許、および特許出願は、参照により全体として本明細書に組み込まれる。
[0007]一部の態様では、細胞集団を含む組成物であって、細胞集団がフローサイトメトリーによって測定して、(a)C-ペプチドおよびNKX6.1を発現する少なくとも約20%の細胞、(b)CHGAを発現する少なくとも約60%の細胞、(c)Cdx2を発現する多くとも約20%の細胞、または(d)VMAT1を発現する多くとも約45%の細胞を含む、組成物が本明細書で提供される。
[0015]一部の態様では、(a)Pdx1陰性、NKX6.1陰性の原腸管細胞の集団を骨形成タンパク質(BMP)シグナル伝達経路阻害剤およびトランスフォーメーション成長因子β(TGF-β)スーパーファミリーからの成長因子と接触させ、それによりPdx1陽性、NKX6.1陽性の膵前駆細胞を含む細胞集団を産生させるステップ、および(b)Pdx1陽性、NKX6.1陽性の膵前駆細胞を含む細胞集団をエピジェネティック修飾化合物と接触させて内分泌細胞を含む細胞集団を産生させるステップを含む方法が本明細書で提供される。
[0030]膵前駆細胞、ヒストンデアセチラーゼ(HDAC)阻害剤、ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤、および任意選択で内分泌細胞を含む組成物が本明細書で提供される。一部の実施形態では、HDAC阻害剤はクラスI HDAC阻害剤、クラスII HDAC阻害剤、またはそれらの組合せである。一部の実施形態では、HDAC阻害剤はKD5170、MC1568、またはTMP195のうち少なくとも1つである。一部の実施形態では、HDAC阻害剤はKD5170である。一部の実施形態では、組成物中のKD5170の濃度は少なくとも0.1μMである。一部の実施形態では、KD5170の濃度は少なくとも0.5μMである。一部の実施形態では、KD5170の濃度は約1μMである。一部の実施形態では、ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤はEZH2阻害剤である。一部の実施形態では、ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤はDZNep、GSK126、またはEPZ6438のうち少なくとも1つである。一部の実施形態では、ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤はDZNepである。一部の実施形態では、DZNepの濃度は少なくとも0.1μMである。一部の実施形態では、DZNepの濃度は少なくとも0.5μMである。一部の実施形態では、DZNepの濃度は約1μMである。一部の実施形態では、HDAC阻害剤はKD5170であり、ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤はDZNepである。一部の実施形態では、組成物はin vitro組成物である。一部の実施形態では、組成物はベータセルリン、チアゾビニン、レチノイン酸、SANT1、XXI、Alk5i II、GC-1、LDN、またはスタウロスポリンのうち少なくとも1つをさらに含む。
[0085]本開示の種々の特徴を単一の実施形態に関連して記述することができるが、特徴を個別にまたは任意の適切な組合せで提供することもできる。逆に、明確にするために本開示を個別の実施形態に関連して本明細書に記載することができるが、本開示を単一の実施形態で実行することもできる。
定義
[0087]本出願において単数形の使用は、特に他の記述がなければ、複数形を含む。本明細書で用いる場合、単数形「a」、「an」、および「the」は、文脈によって他が明確に記述されない限り、複数の指示物を含むことに留意しなければならない。
[0090]明細書中における「一部の実施形態」、「一実施形態(an embodiment、one embodiment)」、または「他の実施形態」への言及は、その実施形態に関連して記述された特定の特徴、構造、または特性が本開示の少なくとも一部の実施形態に含まれるが、必ずしも全ての実施形態には含まれないことを意味する。
[0093]用語「約」または「ほぼ」は、当業者によって決定される特定の値についての許容される誤差範囲内を意味し、これは部分的にその値がどのようにして測定されまたは決定されたか、例えば測定システムの限界によることになる。例えば、「約」は当技術における慣例によって標準偏差の1倍以内または1倍を超えることを意味し得る。あるいは、「約」は所与の値の20%まで、10%まで、5%まで、または1%までの範囲を意味し得る。別の例では、「約10」の量は、10および9から11までの任意の量を含む。さらに別の例では、参照数値に関連する用語「約」は、その値のプラスマイナス10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、または1%の範囲をも含み得る。あるいは、特に生物学的なシステムまたはプロセスに関しては、用語「約」は、ある値の1桁以内、好ましくは5倍以内、より好ましくは2倍以内を意味し得る。出願および特許請求の範囲において特定の値が記載されている場合には、他に記述がなければ、特定の値についての許容される誤差範囲内を意味する用語「約」を前提とすべきである。
[0109]用語「選択マーカー」は、発現された場合に、細胞毒性もしくは細胞増殖抑制性の薬剤に対する耐性(例えば抗生剤耐性)、原栄養性、またはそのタンパク質を発現する細胞を発現しない細胞から区別するための基礎として用いることができる特定のタンパク質の発現等の選択可能な表現型を細胞に付与する遺伝子、RNA、またはタンパク質を意味する。本明細書で用いる用語「選択マーカー」は、遺伝子または遺伝子の発現生成物、例えばコードされたタンパク質を意味し得る。一部の実施形態では、選択マーカーは、それを発現しない細胞または顕著に低いレベルでそれを発現する細胞と比較して、それを発現する細胞に増殖および/または生存の有利性を付与する。そのような増殖および/または生存の有利性は、典型的には細胞がある条件、即ち「選択的条件」下に維持されている場合に生じる。効果的な選択を確実にするため、細胞の集団は、そのマーカーを発現しない細胞が増殖せずおよび/または生存せず、それらがその集団から排除されまたはその数が集団のごく少ない部分にまで減少するような条件下および十分な時間で維持することができる。細胞の集団を選択的条件下に維持することによって増殖および/または生存の有利性を付与するマーカーを発現する細胞を選択して、そのマーカーを発現しない細胞を主としてまたは完全に排除するプロセスは、本明細書において「陽性選択」と称され、そのマーカーは「陽性選択に有用」と呼ばれる。陰性選択および陰性選択に有用なマーカーも、本明細書に記載した方法のある場合には目的である。そのようなマーカーの発現は、そのマーカーを発現しない細胞または顕著に低いレベルでそれを発現する細胞と比較して、そのマーカーを発現する細胞に増殖および/または生存の不利益を付与する(あるいは、別の方式で考慮すると、そのマーカーを発現しない細胞は、そのマーカーを発現する細胞と比較して、増殖および/または生存の有利性を有する)。したがって、そのマーカーを発現する細胞は、選択的条件で十分な時間維持されれば、細胞の集団から主としてまたは完全に排除され得る。
[0115]本明細書で用いる場合、用語「内胚葉細胞」は極めて早期の胚の中の3つの一次胚細胞層のうちの1つからのものである細胞を意味し得る(他の2つの胚細胞層は中胚葉および外胚葉である)。内胚葉は3つの層のうち最も内側にある。内胚葉細胞は分化して最初に胚性腸を生じ、次いで呼吸管および消化管(例えば腸)のライニング、肝臓、ならびに膵を生じる。
[0119]本明細書で用いる用語「原腸管細胞」または「腸管細胞」は、内胚葉細胞から分化し、SC-β細胞(例えば膵β細胞)に分化することができる細胞を意味し得る。原腸管細胞は以下のマーカー、HNP1-β、HNF3-β、またはHNF4-αのうち少なくとも1つを発現する。原腸管細胞は肺、肝臓、膵、胃、および腸の細胞を含む細胞に分化する能力を有している。HNF1-βおよびその他の原腸管のマーカーの発現は、例えば抗HNF1-β抗体を用いる免疫化学等の当業者には公知の任意の方法によって評価することができる。
i)Xは少なくとも100である、
ii)Xは少なくとも200である、
iii)Xは少なくとも約100である、および
iv)Xは少なくとも約200である
の全てが含まれる。
i)Xは1日目と2日目の間に投与される、
ii)Xは2日目と3日目の間に投与される、
iii)Xは約1日目と2日目の間に投与される、
iv)Xは約2日目と3日目の間に投与される、
v)Xは1日目と約2日目の間に投与される、
vi)Xは2日目と約3日目の間に投与される、
vii)Xは約1日目と約2日目の間に投与される、および
viii)Xは約2日目と約3日目の間に投与される
の全てが含まれる。
I.要旨
[0131]態様では、本開示は膵前駆細胞を分化する組成物および方法を提供する。本明細書で提供する組成物および方法は、高純度の膵β細胞、高インスリン含量、および天然の膵β細胞または天然の膵島と類似し得る優れたグルコース依存性インスリン分泌応答を有する膵β細胞、細胞集団、または細胞クラスターを提案することができる。
II.内分泌細胞を産生する方法
[0141]態様では、本開示は膵前駆細胞または前駆体から内分泌細胞を産生する組成物および方法に関する。幹細胞から内分泌細胞を産生して少なくとも1個のSC-β細胞を提供するある例示的な詳細なプロトコールは、それぞれ参照により全体として本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第2015/0240212号および第2015/0218522号に記載されている。
エピジェネティック修飾
[0156]エピジェネティクスはDNA配列の変化によらない遺伝性の改変を意味し得る。むしろ、DNAのメチル化およびヒストンの修飾等のエピジェネティック修飾はDNAの接近容易性およびクロマチンの構造を改変し、それにより遺伝子発現のパターンを規制することができる。これらのプロセスは成体生命体における独特の細胞系統の正常な発生および分化に重要であり得る。これらは外因性の影響によって修飾することができ、したがって表現型または病態表現型の環境的改変に寄与し得るか、またはその結果であり得る。重要なことに、エピジェネティックプログラミングは多能性遺伝子の規制において重要な役割を有し得、これは分化の間に不活性化される。
エピジェネティック修飾化合物
[0164]用語「エピジェネティック修飾化合物」は、遺伝子にエピジェネティクスを起こさせる、即ちDNA配列を変化させずに遺伝子の発現を変化させる化合物を意味し得る。エピジェネティクスは遺伝子がオンまたはオフされるかを決定することを助け、ある種の細胞、例えばβ-細胞におけるタンパク質の生成に影響することができる。DNAのメチル化およびヒストンの修飾等のエピジェネティック修飾はDNAの接近可能性およびクロマチンの構造を改変し、それにより遺伝子発現のパターンを規制することができる。これらのプロセスは成体生命体における独特の細胞系統の正常な発生および分化に重要であり得る。これらは外因性の影響によって修飾することができ、したがって表現型または病態表現型の環境的改変に寄与し得るか、またはその結果であり得る。重要なことに、エピジェネティック修飾は多能性遺伝子の規制において重要な役割を有し得、これは分化の間に不活性化される。非限定的なエピジェネティック修飾化合物の例には、DNAメチル化阻害剤、ヒストンアセチルトランスフェラーゼ阻害剤、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤、ブロモドメイン阻害剤、またはそれらの任意の組合せが含まれる。
III.膵前駆細胞を産生する方法
[0167]態様では、本開示は原腸管細胞をPdx1陽性膵β細胞に分化させる組成物および方法に関する。一部の例では、本方法は原腸管細胞を骨形成タンパク質(BMP)シグナル伝達経路阻害剤およびトランスフォーメーション成長因子β(TGF-β)スーパーファミリーからの成長因子を含む組成物と接触させるステップを含む。一部の例では、組成物はそれだけに限らないが線維芽細胞成長因子(FGF)ファミリーからの成長因子、ソニックヘッジホッグ(SHH)経路阻害剤、レチノイン酸(RA)シグナル伝達経路活性化剤、プロテインキナーゼC(PKC)活性化剤、およびRho関連タンパク質キナーゼ(ROCK)阻害剤を含む1つまたは複数の追加的な分化因子をさらに含む。
IV.幹細胞および再プログラミング
[0175]SC-β細胞(例えば成熟膵β細胞またはβ-様細胞)またはその前駆体を生成するための幹細胞の使用が本明細書で提供される。一実施形態では、それぞれが参照により全体として本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第2015/0240212号および第2015/0218522号に記載されたものと同様のプロトコールを用い、少なくとも1個のSC-β細胞を提供するために、幹細胞の代わりに、またはそれとともに胚細胞を使用してよい。好適な胚細胞は、例えば最後の生理周期の約8~11週後に採取したヒト胎児材料中に存在する原初胚細胞から調製することができる。説明的な胚細胞の調製法は、例えばShamblottら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95:13726, 1998および米国特許第6,090,622号に記載されている。
幹細胞
[0182]本開示の実施形態は膵β細胞またはその前駆体の産生のための幹細胞の使用に関し得る。本明細書で用いる用語「幹細胞」は、自己更新し、分化した細胞型を産生する能力を有する細胞(例えば植物幹細胞、脊椎動物幹細胞)を意味し得る(Morrisonら、(1997) Cell 88:287-298)。細胞発生学の文脈においては、形容詞「分化した」または「分化している」は相対的な用語である。「分化した細胞」は、それと比較している細胞よりも発生の経路をさらに下流に進行した細胞であり得る。したがって、多能性幹細胞は系統が制限された前駆細胞(例えば中胚葉幹細胞)に分化することができ、これは次にさらに制限された細胞(例えばニューロン前駆細胞)に分化することができ、これは最終段階の細胞(例えば最終分化細胞、例えばニューロン、心筋細胞等)に分化することができる。最終段階の細胞はある種の組織型において特徴的な役割を果たし、さらに増殖する能力を保持できることも保持できないこともある。幹細胞は特定のマーカー(例えばタンパク質、RNA等)の存在および特定のマーカーの非存在によって特徴付けることができる。幹細胞はin vitroとin vivoの両方の機能性アッセイ、特に多種の分化した子孫を生じる幹細胞の能力に関連するアッセイによっても同定することができる。一実施形態では、宿主細胞は成体幹細胞、体幹細胞、非胚幹細胞、胚幹細胞、造血幹細胞であり、多能性幹細胞、およびトロホブラスト幹細胞を含む。
再プログラミング
[0195]本明細書で用いる用語「再プログラミング」は、体細胞の分化状態を改変または逆行させるプロセスを意味し得る。細胞は再プログラミングの前に部分的にまたは最終的に分化させることができる。再プログラミングは体細胞の分化状態の多能性細胞への完全な逆行を包含し得る。そのような分化の完全な逆行は人工多能性(iPS)細胞を生成し得る。本明細書で用いる再プログラミングは、細胞の分化状態の、例えば、多能性でも万能性でもないがそれが生じた元の分化した細胞の1つまたは複数の特定の特徴を失った細胞である万能性状態の細胞または体細胞への部分的な逆行、例えば分化した細胞の様々な体細胞型への直接的再プログラミングをも包含し得る。再プログラミングには、接合子が成体に成長する際の細胞の分化の間に起こる核酸の修飾(例えばメチル化)、クロマチンの縮合、エピジェネティクス、ゲノムの刷り込み等の遺伝可能なパターンの少なくともいくつかの改変、例えば逆行が含まれ得る。
V.ゼノフリー培地
[0204]態様では、本開示は、ゼノフリー培地中で前駆細胞(例えばiPSC細胞等の幹細胞、胚体内胚葉細胞、原腸管細胞、Pdx1陽性膵前駆細胞、NKX6.1陽性膵前駆細胞、またはインスリン陽性内分泌細胞)を分化するステップを含む、膵β細胞、例えばSC-β細胞を産生する方法に関する。動物起源の細胞および/または細胞クラスターを培養するためのゼノフリー培地は、他の動物からの製品を有しなくてよい。一部の例では、ヒトの細胞および/または細胞クラスターを培養するためのゼノフリー培地はいかなる非ヒト動物からの製品をも有しなくてよい。例えば、ヒトの細胞および/または細胞クラスターを培養するためのゼノフリー培地は、ウシ胎児血清(FBS)またはウシ血清アルブミン(BSA)の代わりに、ヒト血清アルブミン(HSA)またはヒト血小板溶解物(PLT)を含んでよい。
VI.幹細胞から誘導されたベータ細胞を産生する方法
[0209]SC-β細胞(例えば膵β細胞)を産生する方法が本明細書で提供される。幹細胞から内分泌細胞を産生して少なくとも1個のSC-β細胞を提供する詳細なプロトコールは、それぞれが参照により全体として本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第2015/0240212号および同第2015/0218522号に記載されている。
[0302]本開示の態様は、例えば、インスリン陽性内分泌細胞の成熟または他の前駆細胞のSC-β細胞(例えば、成熟膵β細胞)への分化を誘導するために、前駆細胞(例えば、幹細胞、例えば、iPS細胞、胚体内胚葉細胞、原腸管細胞、Pdx1陽性膵前駆細胞、NKX6.1陽性膵前駆細胞、インスリン陽性内分泌細胞)をβ細胞分化因子と接触させることに関する。一部の実施形態では、分化因子は、例えば、本明細書に記載の方法に従って、多能性細胞(例えば、iPSCまたはhESC)の胚体内胚葉細胞への分化を誘導することができる。一部の実施形態では、分化因子は、例えば、本明細書に記載の方法に従って、胚体内胚葉細胞の原腸管細胞への分化を誘導することができる。一部の実施形態では、分化因子は、例えば、本明細書に記載の方法に従って、原腸管細胞のPdx1陽性膵前駆細胞への分化を誘導することができる。一部の実施形態では、分化因子は、例えば、本明細書に記載の方法に従って、Pdx1陽性膵前駆細胞のNKX6-1陽性膵前駆細胞への分化を誘導することができる。一部の実施形態では、分化因子は、例えば、本明細書に記載の方法に従って、NKX6-1陽性膵前駆細胞のインスリン陽性内分泌細胞への分化を誘導することができる。一部の実施形態では、分化因子は、例えば、本明細書に記載の方法に従って、インスリン陽性内分泌細胞のSC-β細胞への成熟を誘導することができる。
[0305]本開示の態様は、分化因子としての形質転換成長因子-β(TGF-β)スーパーファミリーからの成長因子の使用に関する。「TGF-βスーパーファミリー」は、公知のTGFβファミリーのメンバーの構造的および機能的特徴を有するタンパク質を意味する。タンパク質のTGFβファミリーとしては、TGFβシリーズのタンパク質、インヒビン(インヒビンAおよびインヒビンBを含む)、アクチビン(アクチビンA、アクチビンB、およびアクチビンABを含む)、MIS(ミュラー管阻害物質)、BMP(骨形成タンパク質)、dpp(デカペンタプレジック)、Vg-1、MNSF(モノクローナル非特異的抑制因子)などが挙げられる。このファミリーのタンパク質の活性は、様々な細胞型の特定の受容体への特異的結合に基づき得る。このファミリーのメンバーは、特にC末端において、それらの機能に相関する配列同一性の領域を共有することができる。TGFβファミリーは、100を超える別々のタンパク質を含むことができ、これらは全て、アミノ酸配列同一性の少なくとも1つの領域を共有する。本明細書に開示されている方法において使用することができるファミリーのメンバーとしては、以下のタンパク質が挙げられるが、これらに限定されず、以下のタンパク質は、GenBank受託番号:P07995、P18331、P08476、Q04998、P03970、P43032、P55102、P27092、P42917、P09529、P27093、P04088、Q04999、P17491、P55104、Q9WUK5、P55103、O88959、O08717、P58166、O61643、P35621、P09534、P48970、Q9NR23、P25703、P30884、P12643、P49001、P21274、O46564、O19006、P22004、P20722、Q04906、Q07104、P30886、P18075、P23359、P22003、P34821、P49003、Q90751、P21275、Q06826、P30885、P34820、Q29607、P12644、Q90752、O46576、P27539、P48969、Q26974、P07713、P91706、P91699、P27091、O42222、Q24735、P20863、O18828、P55106、Q9PTQ2、O14793、O08689、O42221、O18830、O18831、O18836、O35312、O42220、P43026、P43027、P43029、O95390、Q9R229、O93449、Q9Z1W4、Q9BDW8、P43028、Q7Z4P5、P50414、P17246、P54831、P04202、P01137、P09533、P18341、O19011、Q9Z1Y6、P07200、Q9Z217、O95393、P55105、P30371、Q9MZE2、Q07258、Q96S42、P97737、AAA97415.1、NP-776788.1、NP-058824.1、EAL24001.1、1 S4Y、NP-001009856.1、NP-1-032406.1、NP-999193.1、XP-519063.1、AAG17260.1、CAA40806.1、NP-1-001009458.1、AAQ55808.1、AAK40341.1、AAP33019.1、AAK21265.1、AAC59738.1、CAI46003.1、B40905、AAQ55811.1、AAK40342.1、XP-540364.1、P55102、AAQ55810.1、NP-990727.1、CAA51163.1、AAD50448.1、JC4862、PN0504、BAB17600.1、AAH56742.1、BAB17596.1、CAG06183.1、CAG05339.1、BAB17601.1、CAB43091.1、A36192、AAA49162.1、AAT42200.1、NP-789822.1、AAA59451.1、AAA59169.1、XP-541000.1、NP-990537.1、NP-1-002184.1、AAC14187.1、AAP83319.1、AAA59170.1、BAB16973.1、AAM66766.1、WFPGBB、1201278C、AAH30029.1、CAA49326.1、XP-344131.1、AA-148845.1、XP-1-148966.3、148235、B41398、AAH77857.1、AAB26863.1、1706327A、BAA83804.1、NP-571143.1、CAG00858.1、BAB17599.1、BAB17602.1、AAB61468.1、PN0505、PN0506、CAB43092.1、BAB17598.1、BAA22570.1、BAB16972.1、BAC81672.1、BAA12694.1、BAA08494.1、B36192、C36192、BAB16971.1、NP-034695.1、AAA49160.1、CAA62347.1、AAA49161.1、AAD30132.1、CAA58290.1、NP-005529.1、XP-522443.1、AAM27448.1、XP-538247.1、AAD30133. I、AAC36741.1、AAH10404.1、NP-032408.1、AAN03682.1、XP-509161.1、AAC32311.1、NP-651942.2、AAL51005.1、AAC39083.1、AAH85547.1、NP-571023.1、CAF94113.1、EAL29247.1、AAW30007.1、AAH90232.1、A29619、NP-001007905.1、AAH73508.1、AADO2201.1、NP-999793.1、NP-990542.1、AAF19841.1、AAC97488.1、AAC60038.1、NP 989197.1、NP-571434.1、EAL41229.1、AAT07302.1、CAI19472.1、NP-031582.1、AAA40548.1、XP-535880.1、NP-1-037239.1、AAT72007.1、XP-418956.1、CAA41634.1、BAC30864.1、CAA38850.1、CAB81657.2、CAA45018.1、CAA45019.1、BAC28247.1、NP-031581.1、NP-990479.1、NP-999820.1、AAB27335.1、S45355、CAB82007.1、XP-534351.1、NP-058874.1、NP-031579.1、1REW、AAB96785.1、AAB46367.1、CAA05033.1、BAA89012.1、IES7、AAP20870.1、BAC24087.1、AAG09784.1、BAC06352.1、AAQ89234.1、AAM27000.1、AAH30959.1、CAGO1491.1、NP-571435.1、1REU、AAC60286.1、BAA24406.1、A36193、AAH55959.1、AAH54647.1、AAH90689.1、CAG09422.1、BAD16743.1、NP-032134.1、XP-532179.1、AAB24876.1、AAH57702.1、AAA82616.1、CAA40222.1、CAB90273.2、XP-342592.1、XP-534896.1、XP-534462.1、1LXI、XP-417496.1、AAF34179.1、AAL73188.1、CAF96266.1、AAB34226.1、AAB33846.1、AAT12415.1、AA033819.1、AAT72008.1、AAD38402.1、BAB68396.1、CAA45021.1、AAB27337.1、AAP69917.1、AATI2416.1、NP-571396.1、CAA53513.1、AA033820.1、AAA48568.1、BAC02605.1、BAC02604.1、BAC02603.1、BAC02602.1、BAC02601.1、BAC02599.1、BAC02598.1、BAC02597.1、BAC02595.1、BAC02593.1、BAC02592.1、BAC02590.1、AAD28039.1、AAP74560.1、AAB94786.1、NP-001483.2、XP-528195.1、NP-571417.1、NP-001001557. I、AAH43222.1、AAM33143.1、CAG10381.1、BAA31132.1、EAL39680.1、EAA12482.2、P34820、AAP88972.1、AAP74559.1、CAI16418.1、AAD30538.1、XP-345502.1、NP-1-038554.1、CAG04089.1、CAD60936.2、NP-031584.1、B55452、AAC60285.1、BAA06410.1、AAH52846.1、NP-031580.1、NP-1-036959.1、CAA45836.1、CAA45020.1、Q29607、AAB27336.1、XP-547817.1、AAT12414.1、AAM54049.1、AAH78901.1、AA025745.1、NP-570912.1、XP-392194.1、AAD20829.1、AAC97113.1、AAC61694.1、AAH60340.1、AAR97906.1、BAA32227.1、BAB68395.1、BAC02895.1、AAWS 1451.1、AAF82188.1、XP-544189.1、NP-990568.1、BAC80211.1、AAW82620.1、AAF99597.1、NP-571062.1、CAC44179.1、AAB97467.1、AAT99303.1、AAD28038.1、AAH52168.1、NP-001004122.1、CAA72733.1、NP-032133.2、XP-394252.1、XP-224733.2、JH0801、AAP97721.1、NP-989669.1、S43296、P43029、A55452、AAH32495.1、XP-542974.1、NP-032135.1、AAK30842.1、AAK27794.1、BAC30847.1、EAA12064.2、AAP97720.1、XP-525704.1、AAT07301.1、BAD07014.1、CAF94356.1、AAR27581.1、AAG13400.1、AAC60127.1、CAF92055.1、XP-540103.1、AA020895.1、CAF97447.1、AAS01764.1、BAD08319.1、CAA10268.1、NP-998140.1、AAR03824.1、AAS48405.1、AAS48403.1、AAK53545.1、AAK84666.1、XP-395420.1、AAK56941.1、AAC47555.1、AAR88255.1、EAL33036.1、AAW47740.1、AAW29442.1、NP-722813.1、AARO8901.1、AAO 15420.2、CAC59700.1、AAL26886.1、AAK71708.1、AAK71707.1、CAC51427.2、AAK67984.1、AAK67983.1、AAK28706.1、P07713、P91706、P91699、CAG02450.1、AAC47552.1、NP-005802.1、XP-343149.1、AW34055.1、XP-538221.1、AAR27580.1、XP-125935.3、AAF21633.1、AAF21630.1、AAD05267.1、Q9Z1 W4、NP-1-031585.2、NP-571094.1、CAD43439.1、CAF99217.1、CAB63584.1、NP-722840.1、CAE46407.1、XP-1-417667.1、BAC53989.1、BAB19659.1、AAM46922.1、AAA81169
.1、AAK28707.1、AAL05943.1、AAB17573.1、CAH25443.1、CAG10269.1、BAD16731.1、EAA00276.2、AAT07320.1、AAT07300.1、AAN15037.1、CAH25442.1、AAK08152.2、2009388A、AAR12161.1、CAGO1961.1、CAB63656.1、CAD67714.1、CAF94162.1、NP-477340.1、EAL24792.1、NP-1-001009428.1、AAB86686.1、AAT40572.1、AAT40571.1、AAT40569.1、NP-033886.1、AAB49985.1、AAG39266.1、Q26974、AAC77461.1、AAC47262.1、BAC05509.1、NP-055297.1、XP-546146.1、XP-525772.1、NP-060525.2、AAH33585.1、AAH69080.1、CAG12751.1、AAH74757.2、NP-034964.1、NP-038639.1、042221、AAF02773.1、NP-062024.1、AAR18244.1、AAR14343.1、XP-228285.2、AAT40573.1、AAT94456.1、AAL35278.1、AAL35277.1、AAL17640.1、AAC08035.1、AAB86692.1、CAB40844.1、BAC38637.1、BAB16046.1、AAN63522.1、NP-571041.1、AAB04986.2、AAC26791.1、AAB95254.1、BAA11835.1、AAR18246.1、XP-538528.1、BAA31853.1、AAK18000.1、XP-1-420540.1、AAL35276.1、AAQ98602.1、CAE71944.1、AAW50585.1、AAV63982.1、AAW29941.1、AAN87890.1、AAT40568.1、CAD57730.1、AAB81508.1、AAS00534.1、AAC59736.1、BAB79498.1、AAA97392.1、AAP85526.1、NP-999600.2、NP-878293.1、BAC82629.1、CAC60268.1、CAG04919.1、AAN10123.1、CAA07707.1 AAK20912.1、AAR88254.1、CAC34629.1、AAL35275.1、AAD46997. I、AAN03842.1、NP-571951.2、CAC50881.1、AAL99367.1、AAL49502.1、AAB71839.1、AAB65415.1、NP-624359.1、NP-990153.1、AAF78069.1、AAK49790.1、NP-919367.2、NP-001192.1、XP-544948.1、AAQ18013.1、AAV38739.1、NP-851298.1、CAA67685.1、AAT67171.1、AAT37502.1、AAD27804.1、AAN76665.1、BAC11909.1、XP-1-421648.1、CAB63704.1、NP-037306.1、A55706、AAF02780.1、CAG09623.1、NP-067589.1、NP-035707.1、AAV30547.1、AAP49817.1、BAC77407.1、AAL87199.1、CAG07172.1、B36193、CAA33024.1、NP-1-001009400.1、AAP36538.1、XP-512687.1、XP-510080.1、AAH05513.1、1KTZ、AAH14690.1、AAA31526.1によって特定される。
[0311]本開示の態様は、β細胞分化因子としてのBMPシグナル伝達経路阻害剤の使用に関する。BMPシグナル伝達ファミリーは、TGF-βスーパーファミリーの多様なサブセットである(Sebaldら Biol. Chem. 385:697~710頁、2004年)。20種を超える公知のBMPリガンドは、3つの異なるII型(BMPRII、ActRIIa、およびActRIIb)および少なくとも3つのI型(ALK2、ALK3、およびALK6)受容体によって認識される。二量体のリガンドは、受容体ヘテロマーのアセンブリーを促進し、構成的に活性なII型受容体セリン/トレオニンキナーゼにI型受容体セリン/トレオニンキナーゼをリン酸化させる。活性化I型受容体は、BMP応答性(BR-)SMADエフェクター(SMAD1、5、および8)をリン酸化して、TGFシグナル伝達も促進するco-SMADであるSMAD4との複合体における核移行を促進する。さらに、BMPシグナルは、SMADに依存しない手法で、MAPK p38などの細胞内エフェクターを活性化し得る(Noheら Cell Signal 16:291~299頁、2004年)。可溶性BMPアンタゴニスト、例えば、ノギン、コーディン、グレムリン、およびフォリスタチンは、リガンド隔離によってBMPシグナル伝達を制限する。
[0318]本開示の態様は、β細胞分化因子としてのTGF-βシグナル伝達経路阻害剤の使用に関する。
[0324]本開示の態様は、β細胞分化因子としてのWNTシグナル伝達経路の活性化剤の使用に関する。
[0327]本開示の態様は、β細胞分化因子としてのFGFファミリーからの成長因子の使用に関する。
[0334]本開示の態様は、β細胞分化因子としてのSHHシグナル伝達経路阻害剤の使用に関する。
[0337]本開示の態様は、β細胞分化因子としてのROCKシグナル伝達経路阻害剤(ROCK阻害剤)の使用に関する。
[0342]本開示の態様は、β細胞分化因子としてのレチノイン酸シグナル伝達のモジュレーターの使用に関する。
[0348]本開示の態様は、β細胞分化因子としてのプロテインキナーゼC活性化剤の使用に関する。プロテインキナーゼCは、プロテインキナーゼ酵素の最も大きなファミリーのうちの1つであり、種々のアイソフォームから構成される。従来のアイソフォームとしては、a、βI、βII、γが挙げられ;新規アイソフォームとしては、δ、ε、η、Θが挙げられ;および非典型的アイソフォームとしては、ξ、およびι/λが挙げられる。PKC酵素は、主にサイトゾルであるが、活性化されると膜に移動する。細胞質では、PKCは、他のキナーゼによってリン酸化されるかまたは自己リン酸化する。活性化されるために、一部のPKCアイソフォーム(例えば、PKC-ε)は、ジアシルグリセロール(「DAG」)結合部位またはホスファチジルセリン(「PS」)結合部位に結合するために分子を必要とする。他のものは、いずれの二次的結合メッセンジャーも必要とせず活性化され得る。DAG部位に結合するPKC活性化剤としては、以下に限定されないが、ブリオスタチン、ピコローグ(picologue)、ホルボールエステル、アプリシアトキシン、およびグニジマクリンが挙げられる。PS部位に結合するPKC活性化剤としては、以下に限定されないが、多価不飽和脂肪酸およびその誘導体が挙げられる。単独でまたは1つまたは複数の他のβ細胞分化因子と組み合わせて、少なくとも1つのインスリンを産生する内分泌細胞またはその前駆体の、SC-β細胞への分化を誘導することが可能である任意のプロテインキナーゼC活性化剤を本明細書に記載の方法、組成物、およびキットにおいて使用することができることが企図される。
[0351]本開示の態様は、β細胞分化因子としてのγ-セクレターゼ阻害剤の使用に関する。
[0354]本開示の態様は、β細胞分化因子としての甲状腺ホルモンシグナル伝達経路活性化剤の使用に関する。
[0359]本開示の態様は、β細胞分化因子としてのEGFファミリーからの成長因子の使用に関する。
[0362]本開示の態様は、β細胞分化因子としてのプロテインキナーゼ阻害剤の使用に関する。
VII.SC-β細胞
[0368]本開示のSC-β細胞は、正常なβ細胞の機能に重要であるβ細胞の多くの特徴的な特徴を共有する。一部の実施形態では、SC-β細胞は、in vitroで、グルコース刺激インスリン分泌(GSIS)応答を呈する。一部の実施形態では、SC-β細胞は、in vivoで、GSIS応答を呈する。一部の実施形態では、SC-β細胞は、in vitroおよびin vivoでのGSIS応答を呈する。一部の実施形態では、GSIS応答は、内因性成熟膵β細胞のGSIS応答に似ている。一部の実施形態では、SC-β細胞は、少なくとも1つのグルコースチャレンジに対するGSIS応答を呈する。一部の実施形態では、SC-β細胞は、少なくとも2つの連続的グルコースチャレンジに対するGSIS応答を呈する。一部の実施形態では、SC-β細胞は、少なくとも3つの連続的グルコースチャレンジに対するGSIS応答を呈する。一部の実施形態では、GSIS応答は、複数のグルコースチャレンジに対する内因性ヒト膵島のGSIS応答に似ている。一部の実施形態では、GSIS応答は、細胞をヒトまたは動物へと移植した直後に観察される。一部の実施形態では、GSIS応答は、細胞をヒトまたは動物へと移植してからおよそ24時間以内に観察される。一部の実施形態では、GSIS応答は、細胞をヒトまたは動物へと移植してからおよそ1週間以内に観察される。一部の実施形態では、GSIS応答は、細胞をヒトまたは動物へと移植してからおよそ2週間以内に観察される。一部の実施形態では、低いグルコース濃度と比較して、高いグルコース濃度に応答して分泌されるインスリンの比率によって特徴付けられる細胞の刺激指数は、内因性成熟膵β細胞の刺激指数に類似している。一部の実施形態では、SC-β細胞は、1より大きい刺激指数を呈する。一部の実施形態では、SC-β細胞は、1より大きいかまたは1に等しい刺激指数を呈する。一部の実施形態では、SC-β細胞は、1.1より大きい刺激指数を呈する。一部の実施形態では、SC-β細胞は、1.1より大きいかまたは1.1に等しい刺激指数を呈する。一部の実施形態では、SC-β細胞は、2より大きい刺激指数を呈する。一部の実施形態では、SC-β細胞は、1より大きいかまたは1に等しい刺激指数を呈する。一部の実施形態では、SC-β細胞は、少なくとも2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、もしくは5.0またはそれより大きい刺激指数を呈する。
VIII.増殖を低減する方法
[0393]本明細書に記載の方法に従って産生されるSC-β細胞の細胞集団において増殖を低減するための方法が本明細書において提供される。方法は、内分泌細胞を含むin vitro細胞集団に照射するステップを含む。一部の事例では、内分泌細胞を含む細胞集団の照射は、約100rad~約100,000radの線量で約1分~約60分の時間である。
IX.幹細胞由来ベータ細胞を濃縮する方法
[0400]SC-β細胞およびインスリン陽性内分泌細胞またはSC-β細胞が由来するその前駆体を含む細胞の混合集団などの、細胞の異種集団由来のSC-β細胞の集団を単離する方法が本明細書において提供される。上記プロセスのいずれかによって産生されたSC-β細胞の集団を、いずれかの細胞表面マーカー、例えば、SC-β細胞上に存在する(インスリン陽性内分泌細胞またはそれが由来するその前駆体上に存在しない)ポリシアル化神経細胞接着分子(PSA-NCAM)を使用することによって、濃縮、単離および/または精製することができる。このような細胞表面マーカーは、SC-β細胞に対して特異的であるアフィニティータグとも称される。
細胞選別
[0402]本明細書において提供される方法は、内分泌細胞の第1の集団および内分泌細胞の第2の集団を含む細胞組成物であって、内分泌細胞の第1の集団の低減した割合の集団が、内分泌細胞の第2の集団と比較して、VMAT+またはCdx2+を発現する、組成物に関する。一部の実施形態では、内分泌細胞の第1および第2の集団は、グルコースおよび幹細胞(hPSCまたはEC)によって誘導され得るベータ細胞を含む。一部の実施形態では、幹細胞は、イソプロテレノールによって誘導される。一部の実施形態では、細胞集団は、誘導されたインスリン産生ベータ細胞および非インスリン産生細胞である細胞の混合物を含む。一部の実施形態では、PSA-NCAMは、「白紙状態」を創出するために全ての細胞から切断されることが可能であり、細胞型特異的刺激物質を用いて細胞表面に誘導して、表面に多量のPSA-NCAMを有する唯一の細胞型を得ることができ、かつアフィニティータグ、例えば、抗PSA-NCAM抗体を使用して、誘導されたSC-β細胞を選択的に選別することができる。このように、分化したSC-β細胞が、内分泌細胞の集団において、他の内分泌細胞から選別され、濃縮され得る。SC-β細胞。一部の実施形態では、細胞集団のうちの1つまたは複数の細胞は、刺激性化合物と接触した場合に、細胞表面に選択マーカーを局在化することができない。
照射
[0411]一部の実施形態では、インスリン産生内分泌細胞(例えば、幹細胞由来ベータ細胞)は、細胞のフィーダー層の存在下で培養することができる。このような細胞は、例えば、マウスまたはヒト起源であってもよい。インスリン産生内分泌細胞(例えば、幹細胞由来ベータ細胞)はまた、照射されるか、マイトマイシンcなどの化学的不活性化剤による処理によって化学的に不活性化されるか、またはそうでなければ、所望の場合、それらの増殖を阻害するために処理され得る。他の実施形態では、インスリン産生内分泌細胞(例えば、幹細胞由来ベータ細胞)は、フィーダー細胞なしで培養される。
X.医薬組成物
[0413]本開示は、前記方法のいずれかによって産生された細胞を含有するかまたは前記細胞集団のいずれかを含有する治療用組成物に関する。治療用組成物は、例えば、人工脳脊髄液またはリン酸緩衝生理食塩水を含む生理学的に適合性の溶液をさらに含むことができる。治療用組成物を使用して、糖尿病を処置、予防、または安定化することができる。例えば、体細胞または幹細胞は、処置を必要としている個体または健康な個体から得ることができ、本開示の方法によって幹細胞由来ベータ細胞に再プログラムすることができる。本開示の一実施形態では、幹細胞由来ベータ細胞は、選別され、濃縮され、状態を処置するために個体中に導入される。別の実施形態では、幹細胞は、個体への導入前に、ベータ細胞への分化に好適な条件下で培養され、疾患組織または損傷を受けた組織の正常な機能を置き換えるかまたは補助するために使用することができる。本開示の大きな利点は、移植に好適な同じHLA型を有する健康な個体からの、患者に特異的なヒトベータ細胞または適合性幹細胞由来ベータ細胞の本質的に制限のない供給を提供することである。細胞療法において、自家細胞および/または適合性細胞の使用は、免疫拒絶を受けやすい非自家細胞の使用に対して、より大きな利益をもたらす。対照的に、自家細胞は、重大な免疫応答を誘発しにくい。
XI.処置方法
[0440]対象における疾患を処置または予防するための方法がさらに本明細書において提供される。本明細書において提供されるかまたは本明細書において提供される方法に従って産生される細胞クラスターまたは細胞を含む組成物は、対象の膵機能の度合を回復させるために、対象へと投与することができる。例えば、内因性膵島に似ている細胞クラスター、もしくは内因性膵β細胞に似ている細胞(例えば、非天然膵β細胞またはSC-β細胞)またはこれらの前駆体は、糖尿病を処置するために、対象に移植することができる。
[0460]用語「希釈剤」は、送達前に目的の化合物を希釈するために使用される化学化合物を指す。希釈剤は、それらがより安定な環境を提供し得るため、化合物を安定化させるためにも使用され得る。リン酸緩衝生理食塩水溶液を含むが、これらに限定されない、緩衝溶液中に溶解した塩(これはまた、pH制御または維持も提供し得る)が当技術分野で希釈剤として利用される。ある特定の実施形態では、希釈剤は、カプセル充填のための均一な配合のために圧縮を促進するかまたは十分なかさを作り出すために、組成物のかさを増加させる。このような化合物としては、例えば、ラクトース、デンプン、マンニトール、ソルビトール、デキストロース、Avicel(登録商標)などの微結晶性セルロース;第二リン酸カルシウム、リン酸二カルシウム二水和物;リン酸三カルシウム、リン酸カルシウム;無水ラクトース、噴霧乾燥ラクトース;アルファ化デンプン、Di-Pac(登録商標)(Amstar)などの圧縮糖;マンニトール、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートステアレート、スクロース系希釈剤、精製粉末糖;第一硫酸カルシウム一水和物、硫酸カルシウム二水和物;乳酸カルシウム三水和物、デキストレート;加水分解した穀物固形物、アミロース;粉末化セルロース、炭酸カルシウム;グリシン、カオリン;マンニトール、塩化ナトリウム;イノシトール、ベントナイトなどが挙げられる。
[0466]「懸濁化剤」としては、例えば、ポリビニルピロリドン、例えば、ポリビニルピロリドンK12、ポリビニルピロリドンK17、ポリビニルピロリドンK25、またはポリビニルピロリドンK30、ビニルピロリドン/酢酸ビニルコポリマー(S630)、ポリエチレングリコール(例えば、ポリエチレングリコールは、約300~約6000、または約3350~約4000、または約7000~約5400の分子量を有し得る)、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロースアセテートステアレート、ポリソルベート80、ヒドロキシエチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、例えば、トラガカントガムおよびおよびアカシアガム、グアーガム、キサンタンガムを含むキサンタンなどのガム、糖類、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムなどのセルロース系材料、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ポリソルベート80、アルギン酸ナトリウム、ポリエトキシ化モノラウリン酸ソルビタン、ポリエトキシ化モノラウリン酸ソルビタン、ポビドンなどの化合物が挙げられる。
[0471]例示的実施形態
[1]膵前駆細胞またはその前駆体の集団を少なくとも1つのエピジェネティック修飾化合物を含む組成物と接触させるステップを含み、前記接触させるステップが、前記少なくとも1つのエピジェネティック修飾化合物と接触していない内分泌細胞の対応する集団と比較して、VMATまたはCdx2を発現する細胞の割合が減少した内分泌細胞の集団をもたらす、方法。
[2]前記少なくとも1つのエピジェネティック修飾化合物が、DNAメチル化阻害剤、ヒストンアセチルトランスフェラーゼ阻害剤、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤、またはブロモドメイン阻害剤のうち1つまたは複数を含む、段落[1]に記載の方法。
[3]前記少なくとも1つのエピジェネティック修飾化合物がヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤を含む、段落[2]に記載の方法。
[4]前記ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤がEZH2阻害剤である、段落[3]に記載の方法。
[5]前記ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤がDZNep、GSK126、またはEPZ6438のうち少なくとも1つである、段落[3]または[4]に記載の方法。
[6]前記ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤がDZNepである、段落[5]に記載の方法。
[7]前記組成物中の前記DZNepの濃度が0.1μMより大きい、段落[6]に記載の方法。
[8]前記DZNepの前記濃度が少なくとも0.5μMである、段落[7]に記載の方法。
[9]前記DZNepの前記濃度が約1μMである、段落[7]に記載の方法。
[10]前記少なくとも1つのエピジェネティック修飾化合物がヒストンデアセチラーゼ(HDAC)阻害剤を含む、段落[1]から[9]のいずれか一項に記載の方法。
[11]前記HDAC阻害剤がクラスI HDAC阻害剤、クラスII HDAC阻害剤、またはそれらの組合せである、段落[10]に記載の方法。
[12]前記HDAC阻害剤がKD5170、MC1568、またはTMP195のうち少なくとも1つである、段落[11]に記載の方法。
[13]前記HDAC阻害剤がKD5170である、段落[12]に記載の方法。
[14]前記少なくとも1つのエピジェネティック修飾化合物がHDAC阻害剤およびEZH2阻害剤を含む、段落[1]に記載の方法。
[15]前記少なくとも1つのエピジェネティック修飾化合物がDZNepおよびKD5170を含む、段落[1]に記載の方法。
[16]前記VMATを発現する細胞のうち少なくとも1個がINS-である、段落[1]から[15]のいずれか一項に記載の方法。
[17]前記膵前駆細胞の集団のうち少なくともいくつかの細胞がPH細胞の集団に分化する、段落[1]から[16]のいずれか一項に記載の方法。
[18]前記少なくとも1つのエピジェネティック修飾化合物と接触していない前記内分泌細胞の対応する集団と比較して、前記内分泌細胞の集団のうちの増加した割合の細胞がNKX6.1-またはChromA+である、段落[17]に記載の方法。
[19]前記増加した割合の細胞のうち少なくとも1個の細胞がNKX6.1-かつChromA+である、段落[18]に記載の方法。
[20]前記膵前駆細胞の集団のうち少なくともいくつかの細胞がβ細胞の集団に分化する、段落[1]から[19]のいずれか一項に記載の方法。
[21]前記β細胞が幹細胞から誘導されたβ(SC-β)細胞である、段落[20]に記載の方法。
[22]前記β細胞がC-PEPおよびNKX6-1を発現する、段落[20]または[21]に記載の方法。
[23]前記β細胞がグルコースチャレンジに対してin vitroグルコース刺激インスリン分泌応答を呈する、段落[20]から[22]のいずれか一項に記載の方法。
[24]in vitroで実施される、段落[1]から[23]のいずれか一項に記載の方法。
[25]前記組成物が、ベータセルリン、チアゾビニン、レチノイン酸、SANT1、XXI、Alk5i II、GC-1、LDN、またはスタウロスポリンのうち少なくとも1つを含む、段落[24]に記載の方法。
[26]前記接触させるステップが少なくとも3日間である、段落[24]または[25]に記載の方法。
[27]前記接触させるステップが少なくとも5日間である、段落[24]または[25]に記載の方法。
[28]前記接触させるステップが約7日間である、段落[24]または[25]に記載の方法。
[29]前記膵前駆細胞の集団のうち少なくとも1個の膵前駆細胞がPDX1およびNKX6-1のうち少なくとも1つを発現する、段落[1]から[28]のいずれか一項に記載の方法。
[30]前記内分泌細胞の集団のうち少なくとも1個の内分泌細胞がCHGAを発現する、段落[1]から[29]のいずれか一項に記載の方法。
[31]段落[1]から[30]のいずれか一項に記載の方法によって生成された細胞。
[32]膵前駆細胞、ヒストンデアセチラーゼ(HDAC)阻害剤、ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤、および任意選択で内分泌細胞を含む組成物。
[33]前記HDAC阻害剤がクラスI HDAC阻害剤、クラスII HDAC阻害剤、またはそれらの組合せである、段落[32]に記載の組成物。
[34]前記HDAC阻害剤がKD5170、MC1568、またはTMP195のうち少なくとも1つである、段落[33]に記載の組成物。
[35]前記HDAC阻害剤がKD5170である、段落[34]に記載の組成物。
[36]前記組成物中の前記KD5170の濃度が少なくとも0.1μMである、段落[35]に記載の組成物。
[37]前記KD5170の前記濃度が少なくとも0.5μMである、段落[36]に記載の組成物。
[38]前記KD5170の前記濃度が約1μMである、段落[37]に記載の組成物。
[39]前記ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤がEZH2阻害剤である、段落[32]から[38]のいずれか一項に記載の組成物。
[40]前記ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤がDZNep、GSK126、またはEPZ6438のうち少なくとも1つである、段落[39]に記載の組成物。
[41]前記ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤がDZNepである、段落[40]に記載の組成物。
[42]前記DZNepの濃度が少なくとも0.1μMである、段落[41]に記載の組成物。
[43]前記DZNepの前記濃度が少なくとも0.5μMである、段落[42]に記載の組成物。
[44]前記DZNepの前記濃度が約1μMである、段落[42]に記載の組成物。
[45]前記HDAC阻害剤がKD5170であり、前記ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤がDZNepである、段落[32]に記載の組成物。
[46]in vitro組成物である、段落[32]から[45]のいずれか一項に記載の組成物。
[47]ベータセルリン、チアゾビニン、レチノイン酸、SANT1、XXI、Alk5i II、GC-1、LDN、またはスタウロスポリンのうち少なくとも1つをさらに含む、段落[46]に記載の組成物。
[48]膵前駆細胞またはその前駆体をヒストンデアセチラーゼ(HDAC)阻害剤およびヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤と接触させるステップを含み、前記接触させるステップが前記膵前駆細胞の分化を誘起する、方法。
[49]前記膵前駆細胞がβ細胞に分化する、段落[48]に記載の方法。
[50]前記β細胞が幹細胞から誘導されたβ(SC-β)細胞である、段落[49]に記載の方法。
[51]前記β細胞がC-PEPおよびNKX6-1を発現する、段落[49]または[50]に記載の方法。
[52]前記β細胞がグルコースチャレンジに対してin vitroグルコース刺激インスリン分泌応答を呈する、段落[49]から[51]のいずれか一項に記載の方法。
[53]前記HDAC阻害剤がクラスI HDAC阻害剤、クラスII HDAC阻害剤、またはそれらの組合せである、段落[48]から[52]のいずれか一項に記載の方法。
[54]前記HDAC阻害剤がKD5170、MC1568、またはTMP195のうち少なくとも1つである、段落[53]に記載の方法。
[55]前記HDAC阻害剤がKD5170である、段落[54]に記載の方法。
[56]前記ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤がEZH2阻害剤である、段落[48]から[55]のいずれか一項に記載の方法。
[57]前記ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤がDZNep、GSK126、またはEPZ6438のうち少なくとも1つである、段落[56]に記載の方法。
[58]前記ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤がDZNepである、段落[57]に記載の方法。
[59]前記HDAC阻害剤がKD5170であり、前記ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤がDZNepである、段落[48]に記載の方法。
[60]in vitroで実施される、段落[48]から[59]のいずれか一項に記載の方法。
[61]膵前駆細胞またはその前駆体を、前記細胞の分化をもたらすために十分な量のKD5170と接触させるステップを含む方法。
[62]前記膵前駆細胞をヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤と接触させるステップをさらに含む、段落[61]に記載の方法。
[63]前記ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤がDZNep、GSK126、またはEPZ6438のうち少なくとも1つである、段落[62]に記載の方法。
[64]前記ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤がDZNepである、段落[63]に記載の方法。
[65]前記膵前駆細胞が内分泌細胞に分化する、段落[61]から[64]のいずれか一項に記載の方法。
[66]前記膵前駆細胞がβ細胞に分化する、段落[61]から[65]のいずれか一項に記載の方法。
[67]前記β細胞が幹細胞から誘導されたβ(SC-β)細胞である、段落[66]に記載の方法。
[68]前記β細胞がC-PEPおよびNKX6-1を発現する、段落[66]または[67]に記載の方法。
[69]前記β細胞がグルコースチャレンジに対してin vitroグルコース刺激インスリン分泌応答を呈する、段落[66]から[68]のいずれか一項に記載の方法。
[70]a)複数の幹細胞をin vitroで分化させて膵前駆細胞またはその前駆体を含む細胞集団を得るステップ、
b)前記細胞集団をin vitroでヒストンデアセチラーゼ(HDAC)阻害剤と接触させて少なくとも1個の内分泌細胞を産生させるステップ、および
c)前記内分泌細胞をin vitroで成熟させて少なくとも1個のSC-β細胞を得るステップ
を含む方法。
[71]前記幹細胞がヒト多能性幹細胞である、段落[70]に記載の方法。
[72]前記細胞集団をベータセルリン、チアゾビニン、レチノイン酸、SANT1、XXI、Alk5i II、GC-1、LDN、またはスタウロスポリンのうち少なくとも1つと接触させるステップをさらに含む、段落[70]または[71]に記載の方法。
[73]前記SC-β細胞がC-PEPおよびNKX6-1を発現する、段落[70]から[72]のいずれか一項に記載の方法。
[74]前記SC-β細胞がグルコースチャレンジに対してin vitroグルコース刺激インスリン分泌応答を呈する、段落[70]から[73]のいずれか一項に記載の方法。
[75]前記細胞集団をヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤と接触させるステップをさらに含む、段落[70]から[74]のいずれか一項に記載の方法。
[76]前記ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤がDZNep、GSK126、またはEPZ6438のうち少なくとも1つである、段落[75]に記載の方法。
[77]前記ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤がDZNepである、段落[76]に記載の方法。
[78]前記HDAC阻害剤がKD5170である、段落[70]から[77]のいずれか一項に記載の方法。
[79]膵前駆細胞またはその前駆体を含む細胞集団を、内分泌細胞を産生するために十分な量のヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤とin vitroで接触させるステップ、および前記内分泌細胞をin vitroで成熟させて、グルコースチャレンジに対してin vitroグルコース刺激インスリン分泌応答を呈する少なくとも1つのSC-β細胞を得るステップを含む方法。
[80]複数の幹細胞をin vitroで分化させて前記膵前駆細胞またはその前駆体を含む前記細胞集団を得るステップをさらに含む、段落[79]に記載の方法。
[81]前記細胞集団をベータセルリン、チアゾビニン、レチノイン酸、SANT1、XXI、Alk5i II、GC-1、LDN、またはスタウロスポリンのうち少なくとも1つと接触させるステップをさらに含む、段落[79]または[80]に記載の方法。
[82]前記細胞集団をヒストンデアセチラーゼ(HDAC)阻害剤と接触させるステップをさらに含む、段落[79]から[81]のいずれか一項に記載の方法。
[83]前記HDAC阻害剤がKD5170である、段落[82]に記載の方法。
[84]前記ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤がDZNep、GSK126、またはEPZ6438のうち少なくとも1つである、段落[79]から[83]のいずれか一項に記載の方法。
[85]前記ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤がDZNepである、段落[84]に記載の方法。
[86](i)標的細胞を刺激性化合物と接触させるステップであって、前記接触させるステップが前記標的細胞の選択マーカーを誘起して前記標的細胞の細胞表面に局在化させるステップ、および
(ii)前記細胞表面の前記選択マーカーの前記局在化に基づいて前記標的細胞を選択するステップ
を含む、細胞の集団から前記標的細胞を選択するための方法。
[87]前記選択マーカーがPSA-NCAMを含む、段落[86]に記載の方法。
[88]前記標的細胞を選択する前記ステップが細胞ソーティングによる、段落[87]に記載の方法。
[89]前記選択するステップが、前記選択マーカーが前記標的細胞の前記表面に局在化しているときに前記標的細胞の前記選択マーカーを抗原結合ポリペプチドと接触させるステップを含む、段落[88]に記載の方法。
[90]前記抗原結合ポリペプチドが抗体を含む、段落[89]に記載の方法。
[91]前記抗原結合ポリペプチドが前記PSA-NCAMに結合する、段落[90]に記載の方法。
[92]前記細胞の集団を、前記細胞の集団のうちの少なくとも1個の細胞の細胞表面から前記選択マーカーを除去する化合物と処理するステップをさらに含む、段落[86]から[91]のいずれか一項に記載の方法。
[93]前記細胞の集団が、前記標的細胞を前記刺激性化合物と接触させる前記ステップの前に前記化合物と処理される、段落[92]に記載の方法。
[94]前記化合物が、前記選択マーカーを前記少なくとも1個の細胞の前記細胞表面から開裂させる、段落[92]または[93]に記載の方法。
[95]前記化合物が酵素である、段落[94]に記載の方法。
[96]前記化合物がエンドシアリダーゼである、段落[95]に記載の方法。
[97]前記エンドシアリダーゼがエンドニューラミニダーゼ(Endo-N)である、段落[96]に記載の方法。
[98]前記標的細胞が内分泌細胞である、段落[86]から[97]のいずれか一項に記載の方法。
[99]前記刺激性化合物がアルギニンまたはグルコースのうち少なくとも1つを含む、段落[86]から[98]のいずれか一項に記載の方法。
[100]前記内分泌細胞がβ細胞である、段落[98]に記載の方法。
[101]前記β細胞がSC-β細胞である、段落[101]に記載の方法。
[102]前記刺激性化合物がイソプロテレノールを含む、段落[98]に記載の方法。
[103]前記内分泌細胞がEC細胞である、段落[98]に記載の方法。
[104]前記細胞の集団のうち1個または複数の細胞が、前記刺激性化合物と接触したときに前記選択マーカーを細胞表面に局在化することができない、段落[86]から[103]のいずれか一項に記載の方法。
[105]前記刺激性化合物がグルコースまたはアルギニンのうち少なくとも1つであり、前記1個または複数の細胞がEC細胞である、段落[104]に記載の方法。
[106]前記刺激性化合物がイソプロテレノールであり、前記1個または複数の細胞がβ細胞である、段落[104]に記載の方法。
[107]前記標的細胞を選択する前記ステップが前記細胞の集団のうち前記1個または複数の細胞から前記標的細胞を分離する、段落[104]から[106]のいずれか一項に記載の方法。
[108]膵前駆細胞またはその前駆体の集団を少なくとも1つのエピジェネティック修飾化合物を含む組成物と接触させるステップを含み、前記接触させるステップが前記少なくとも1つのエピジェネティック修飾化合物と接触していない膵前駆細胞の対応する集団と比較して増加した割合の膵島細胞をもたらす、方法。
[109]前記膵島細胞が少なくとも1個のβ細胞を含む、段落[108]に記載の方法。
[110]前記β細胞がSC-β細胞を含む、段落[109]に記載の方法。
[111]前記SC-β細胞がグルコースチャレンジに対してin vitroグルコース刺激インスリン分泌応答を呈する、段落[110]に記載の方法。
[112]前記膵島細胞が少なくとも1個のアルファ細胞を含む、段落[108]に記載の方法。
[113]前記膵島細胞がデルタ細胞を含む、段落[108]に記載の方法。
[114]前記膵島細胞がポリホルモナル(PH)細胞を含む、段落[108]に記載の方法。
[115]複数の幹細胞をin vitroで分化して前記膵前駆細胞またはその前駆体の集団を得るステップをさらに含む、段落[108]から[114]のいずれか一項に記載の方法。
[116]前記幹細胞がヒト多能性幹細胞である、段落[115]に記載の方法。
[117]前記少なくとも1つのエピジェネティック修飾化合物がDNAメチル化阻害剤、ヒストンアセチルトランスフェラーゼ阻害剤、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤、またはブロモドメイン阻害剤のうち1つまたは複数を含む、段落[108]から[116]のいずれか一項に記載の方法。
[118]前記少なくとも1つのエピジェネティック修飾化合物がヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤を含む、段落[117]に記載の方法。
[119]前記ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤がEZH2阻害剤である、段落[118]に記載の方法。
[120]前記ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤がDZNep、GSK126、またはEPZ6438のうち少なくとも1つである、段落[118]または[119]に記載の方法。
[121]前記ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤がDZNepである、段落[120]に記載の方法。
[122]前記組成物中の前記DZNepの濃度が0.1μMより大きい、段落[121]に記載の方法。
[123]前記DZNepの前記濃度が少なくとも0.5μMである、段落[122]に記載の方法。
[124]前記DZNepの前記濃度が約1μMである、段落[123]に記載の方法。
[125]前記少なくとも1つのエピジェネティック修飾化合物がヒストンデアセチラーゼ(HDAC)阻害剤を含む、段落[108]から[124]のいずれか一項に記載の方法。
[126]前記HDAC阻害剤がクラスI HDAC阻害剤、クラスII HDAC阻害剤、またはそれらの組合せである、段落[125]に記載の方法。
[127]前記HDAC阻害剤がKD5170、MC1568、またはTMP195のうち少なくとも1つである、段落[126]に記載の方法。
[128]前記HDAC阻害剤がKD5170である、段落[127]に記載の方法。
[129]前記少なくとも1つのエピジェネティック修飾化合物がHDAC阻害剤およびEZH2阻害剤を含む、段落[108]に記載の方法。
[130]前記少なくとも1つのエピジェネティック修飾化合物がDZNepおよびKD5170を含む、段落[108]に記載の方法。
実施例1.hPSC由来のベータ細胞におけるヒストンアセチル化
[0473]システムズアプローチ(例えば、Ardaら(Cell Metabolism 23: 909~920頁、2016年))を使用して、(1)小児および成人からの膵組織の獲得、(2)安定した信頼性の高い細胞精製方法を開発すること、(3)包括的なトランスクリプトームおよびヒストン修飾マップの作成、ならびに(4)膵島の生理および機能の系統的アッセイを含む、ヒト膵島細胞における年齢に依存した遺伝子発現プログラムを特定する。若年および成人のヒト膵島細胞における年齢に依存した遺伝子のヒストン媒介性調節の別々の方式は、記載されたゲノムワイドヒストンマップで明らかにされる。Xuら(EMBO J 2014)は、ヒストンメチル化が、内分泌前駆細胞におけるNGN3、NKX6.1、およびNKX2.2遺伝子において低減されることを記載している。NGN3細胞では、H3K27me3は、NGN3、NeuroD1、およびNKX6.1エレメントから枯渇しており、これは、各遺伝子の活性化と一致している。Haumaitreら(MCB 2013)は、膵臓の分化の間のHDAC発現および活性の全体的低減について報告している。Xie(Cell Stem Cell, 2013)は、in vitro分化の間に、クロマチン構造が不適切に再構築されることを報告している。EZH2阻害およびHDAC阻害によりNGN3発現が増加し、より多くの幹細胞由来ベータ細胞をもたらされ、このことは、NGN3がベータ細胞の発生にとって重要であることを示唆する。
実施例2.ヒストンメチル化および脱アセチル化の阻害
[0474]NGN3のmRNA発現を本明細書に記載の分化誘導の各ステップにおいて調査し(図5)、細胞がNGN3を発現し、SC-β細胞の分化を開始することを確認した(図7)。SC-β細胞の分化におけるヒストンメチル化および脱アセチル化の阻害効果を調査した(図6)。hESC株(D97、D114、およびD241 HUES8)において本明細書に記載の分化誘導のステージ5(図5~6)をEZH2阻害剤(DZNep)、HDAC阻害剤(KD5170)、およびこれらの組合せで処理した(図6)。
実施例3.幹細胞の膵β細胞(SC-β細胞)への分化
[0478]図39に例示したように、2つの例示的な分化プロトコールv11およびv12を試験した。2つのプロトコールは、共に、同様の試薬を共有する6ステージの段階的プロトコールであり、最初の5ステージのそれらの分化ステップは、図5に示したような分化プロトコールに大部分は基づいており、それらの差異は以下の通りである:(a)v12プロトコールでは、ステージ3の1日目(S3d1)に培地中に0.25μMのDMH-1が存在し、ステージ3の1日目と2日目(S3d1~S3d2)に培地中に20ng/mLのアクチビンAが存在した;(b)v11プロトコールでは、ステージ3においてDMH-1もアクチビンAも添加されなかった;(c)v11プロトコールおよびv12プロトコールの両方では、ステージ5の1、3、5、7日目に100nMの培地中にDZNepが存在した。v11プロトコールとv12プロトコールの両方のステージ6を、外因性分化因子を含まない1%のHASを補充したDMEM/F12培地中で、ステージ5から産生細胞を培養することによって実施した。培地は、ステージ6を通して1日おきに交換した。
実施例4.SC-β細胞表面マーカーの特定スクリーニングおよび選別
[0482]選択的SC-β細胞表面マーカーの特定のための細胞表面マーカーライブラリースクリーニング(Miltenyi MACSマーカースクリーニング)を、371種のAPCコンジュゲートモノクローナル抗体を用いて実施した(図22~23)。スクリーニングにより、ウェルの52.3%(371のうちの194)が分析に十分な細胞を含有したことが示された。ニューポートグリーンまたはフルオジン3によるSC-β生細胞の標識およびMACSマーカーのスクリーニングは、図24に記載したように実施することができる。
実施例5.hESCの品質およびDE誘導の改良
[0485]分化の初期に腸系統を特定し、特定された腸前駆細胞からEC細胞を生じされることができる(図29)。ステージ0における低いOct4%によって、後のステージにおいてより高いCDX2のパーセンテージがもたらされた。安定した分化には、高いOct4%が必要であった。Sox17による誘導のばらつきは、高いOct4%でも一定のままであった(図30)。CDX2+腸集団は、ステージ1の因子濃度によって決まった。Chir/AA濃度とタイミングを微調整することにより、CDX2集団を低減させ、SC-β細胞の分化を改善することができる。
実施例6.EC細胞分化阻害剤のスクリーニング
[0486]EC細胞分化の阻害剤を特定するためのステージ5の細胞に関するさらなる化合物スクリーニング戦略を図31~32に示す。Matrigelをコーティングした96ウェルプレートを使用して、分化細胞を播種する。1ウェル当たり0.1~0.3×106個の細胞で、細胞をプレーティングする。対照として、DMSOのみを使用する。0.1%のDMSO中0.1μM、1.0μM、および10μMの濃度で、Wnt経路ライブラリー、エピジェネティックスライブラリー、GPCR化合物ライブラリー、および幹細胞シグナル伝達化合物ホルモンライブラリーをスクリーニングする。早期ステージマーカーとしてCDX2+および後期ステージマーカーとしてVMAT+を用いて、高含量画像分析によりEC細胞の定量を決定する。
実施例7.幹細胞由来膵島細胞のγ照射
[0487]幹細胞由来膵島細胞集団の増殖を様々な照射線量(8,000radおよび10,000rad)で阻害した。照射を実施しなかった場合、細胞の増殖および移植片の拡大を観察した(図33)。高いγ照射線量(10,000rad)は、幹細胞由来膵島細胞の組成および機能に有意な影響を及ぼさなかった(図34)。照射した凍結保存幹細胞由来膵島細胞について、血中グルコースを制御する能力を調査した。凍結保存細胞を解凍し、照射し、回収せずに照射直後に移植した。照射の60日後に、凍結保存幹細胞由来膵島細胞は、血中グルコースを制御する能力を失った(図35)。照射した試料において、増強されたベータ細胞数を観察した(図35~36)。一実験では、凍結保存幹細胞由来膵島細胞を解凍する前に、γ照射を行い、その後、動物モデル中に移植される前に、細胞を凍結保存から回収し、再凝集させた(解凍前照射)。図37に示したように、凍結保存からの回収後に照射された(解凍後照射)幹細胞由来膵島細胞の移植を受ける動物と比較して、解凍前照射を受ける幹細胞由来膵島細胞を移植した動物は、より長い期間血糖コントロールを呈した。照射した幹細胞由来膵島細胞を移植した全ての動物は、移植片が外植されるまで血糖コントロールを示した。(図38)
[0488]まとめると、増殖細胞の数は、γ照射の放射線量に依存した。増殖細胞数は、幹細胞由来膵島細胞がより高い放射線量で照射された場合により低下した。γ照射は、幹細胞由来膵島細胞の組成および機能に有意な影響を与えなかった。細胞が凍結されている間にγ照射を行った場合、得られた幹細胞由来膵島細胞の移植片は、移植された動物モデルにおいてより長い血糖コントロール効果を有した。
本明細書は以下の発明の開示を包含する。
[1]膵前駆細胞またはその前駆体の集団をエピジェネティック修飾化合物と接触させるステップを含み、前記接触させるステップが、前記エピジェネティック修飾化合物と接触していない内分泌細胞の対応する集団と比較して、クロモグラニンA陽性(CHGA+)細胞の割合が増加した、またはC-ペプチド陽性かつNKX6.1陽性(C-PEP+、NKX6.1+)の細胞の割合が増加した内分泌細胞の集団をもたらす、方法。
[2]膵前駆細胞またはその前駆体の集団をエピジェネティック修飾化合物と接触させるステップを含み、前記接触させるステップが、前記エピジェネティック修飾化合物と接触していない内分泌細胞の対応する集団と比較して、VMATまたはCdx2を発現する細胞の割合が減少した内分泌細胞の集団をもたらす、方法。
[3]前記エピジェネティック修飾化合物が、DNAメチル化阻害剤、ヒストンアセチルトランスフェラーゼ阻害剤、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤、またはブロモドメイン阻害剤のうち1つまたは複数を含む、[1]または[2]に記載の方法。
[4]前記エピジェネティック修飾化合物がヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤を含む、[3]に記載の方法。
[5]前記ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤がEZH2阻害剤である、[4]に記載の方法。
[6]前記ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤がDZNep、GSK126、およびEPZ6438からなる群から選択される、[4]または[5]に記載の方法。
[7]前記ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤がDZNepである、[6]に記載の方法。
[8]前記膵前駆細胞またはその前駆体の集団に接触させる前記DZNepの濃度が、約0.05μM~約50μM、約0.1μM~約10μM、約0.5μM~約5μM、約0.75μM~約2.5μM、または約1μM~約2μMである、[7]に記載の方法。
[9]前記DZNepの前記濃度が少なくとも約0.5μMである、[8]に記載の方法。
[10]前記DZNepの前記濃度が約1μMである、[8]に記載の方法。
[11]前記エピジェネティック修飾化合物がヒストンデアセチラーゼ(HDAC)阻害剤を含む、[1]から[10]のいずれかに記載の方法。
[12]前記HDAC阻害剤がクラスI HDAC阻害剤、クラスII HDAC阻害剤、またはそれらの組合せである、[11]に記載の方法。
[13]前記HDAC阻害剤がKD5170、MC1568、およびTMP195からなる群から選択される、[12]に記載の方法。
[14]前記HDAC阻害剤がKD5170である、[13]に記載の方法。
[15]前記エピジェネティック修飾化合物がHDAC阻害剤およびEZH2阻害剤を含む、[1]または[2]に記載の方法。
[16]前記エピジェネティック修飾化合物がDZNepおよびKD5170を含む、[1]または[2]に記載の方法。
[17]in vitroで実施される、[1]から[16]のいずれかに記載の方法。
[18]前記膵前駆細胞またはその前駆体の集団を(i)SHH経路阻害剤、(ii)レチノイン酸(RA)シグナル伝達経路活性化剤、(iii)γ-セクレターゼ阻害剤、(iv)上皮細胞成長因子(EGF)ファミリーからの成長因子、(v)骨形成タンパク質(BMP)シグナル伝達経路阻害剤、(vi)TGF-βシグナル伝達経路阻害剤、(vii)甲状腺ホルモンシグナル伝達経路活性化剤、(viii)プロテインキナーゼ阻害剤、および(ix)ROCK阻害剤からなる群から選択される薬剤と接触させるステップをさらに含む、[1]から[17]のいずれかに記載の方法。
[19](A)前記SHH経路阻害剤がSANT1を含む、
(B)前記RAシグナル伝達経路活性化剤がレチノイン酸を含む、
(C)前記γ-セクレターゼ阻害剤がXXIを含む、
(D)前記EGFファミリーからの成長因子がベータセルリンを含む、
(E)前記BMPシグナル伝達経路阻害剤がLDNを含む、
(F)前記TGF-βシグナル伝達経路阻害剤がAlk5i IIを含む、
(G)前記甲状腺ホルモンシグナル伝達経路活性化剤がGC-1を含む、
(H)前記プロテインキナーゼ阻害剤がスタウロスポリンを含む、または
(I)前記ROCK阻害剤がチアゾビニンを含む、
[18]に記載の方法。
[20]前記膵前駆細胞またはその前駆体の集団を、ベータセルリン、チアゾビニン、レチノイン酸、SANT1、XXI、Alk5i II、GC-1、LDN、およびスタウロスポリンからなる群から選択される薬剤と接触させるステップを含む、[18]または[19]に記載の方法。
[21]前記接触させるステップが少なくとも3日間である、[18]から[20]のいずれかに記載の方法。
[22]前記接触させるステップが、前記膵前駆細胞またはその前駆体の集団を前記エピジェネティック修飾化合物と3日を超える期間接触させるステップ、および前記期間のうち最初の3日間に前記膵前駆細胞またはその前駆体の集団と前記接触させるステップの後で、前記SHH経路阻害剤、前記RAシグナル伝達経路活性化剤、または前記EGFファミリーからの前記成長因子を除去するステップを含む、[21]に記載の方法。
[23]前記接触させるステップが少なくとも5日間である、[18]から[22]のいずれかに記載の方法。
[24]前記接触させるステップが約7日間である、[18]から[23]のいずれかに記載の方法。
[25]前記膵前駆細胞の集団のうち少なくとも1個の細胞がPDX1およびNKX6-1のうち少なくとも1つを発現する、[1]から[24]のいずれかに記載の方法。
[26]前記膵前駆細胞の集団のうち少なくとも1個の細胞がPDX1およびNKX6-1の両
方を発現する、[1]から[25]のいずれかに記載の方法。
[27]前記内分泌細胞の集団のうち少なくとも1個の細胞がCHGAを発現する、[1]から[26]のいずれかに記載の方法。
[28]前記内分泌細胞の集団のうち少なくとも1個の細胞がC-ペプチドおよびNKX6.1を発現する、[1]から[27]のいずれかに記載の方法。
[29]前記内分泌細胞の集団が、フローサイトメトリーによって測定して、前記エピジェネティック修飾化合物と接触していない内分泌細胞の対応する集団よりも少なくとも約10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%、120%、150%、180%、200%、220%、250%、280%、300%、320%、350%、380%、400%、420%、450%、480%、または500%高い割合のCHGA+細胞を含む、[1]から[28]のいずれかに記載の方法。
[30]前記内分泌細胞の集団が、フローサイトメトリーによって測定して、前記エピジェネティック修飾化合物と接触していない内分泌細胞の対応する集団よりも少なくとも約10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%、120%、150%、180%、200%、220%、250%、280%、300%、320%、350%、380%、400%、420%、450%、480%、または500%高い割合のC-PEP+、NKX6.1+細胞を含む、[1]から[29]のいずれかに記載の方法。
[31]前記内分泌細胞の集団が、フローサイトメトリーによって測定して、前記少なくとも1つのエピジェネティック修飾化合物と接触していない内分泌細胞の対応する集団よりも少なくとも約10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%、120%、150%、180%、200%、220%、250%、280%、300%、320%、350%、380%、または400%低い割合の、VMATまたはCdx2を発現する細胞を含む、[1]から[30]のいずれかに記載の方法。
[32][1]から[31]のいずれかに記載の方法によって生成された細胞。
[33]細胞集団を含む組成物であって、前記細胞集団が、フローサイトメトリーによって測定して、
(a)少なくとも約20%の、C-ペプチドおよびNKX6.1を発現する細胞、
(b)少なくとも約60%の、CHGAを発現する細胞、
(c)多くとも約20%の、Cdx2を発現する細胞、または
(d)多くとも約45%の、VMAT1を発現する細胞
を含む、組成物。
[34]フローサイトメトリーによって測定して、少なくとも約30%のISL1陽性、NKX6.1陽性の細胞および多くとも約20%のISL1陰性NKX6.1陰性の細胞を含む細胞集団を含む組成物。
[35]前記細胞集団が、少なくとも約35%のISL1陽性、NKX6.1陽性の細胞を含む、[34]に記載の組成物。
[36]前記細胞集団が、少なくとも約40%のISL1陽性、NKX6.1陽性の細胞を含む、[34]に記載の組成物。
[37]前記細胞集団が、多くとも約15%のISL1陰性、NKX6.1陰性の細胞を含む、[34]から[36]のいずれかに記載の組成物。
[38]フローサイトメトリーによって測定して、
(a)少なくとも約20%の、C-ペプチドおよびNKX6.1を発現する細胞、
(b)少なくとも約60%の、CHGAを発現する細胞、および
(c)多くとも約20%の、Cdx2を発現する細胞
を含む、[33]から[37]のいずれかに記載の組成物。
[39]フローサイトメトリーによって測定して、多くとも約45%の、VMAT1を発現する細胞を含む、[38]に記載の組成物。
[40]エピジェネティック修飾化合物をさらに含む、[33]から[39]のいずれかに記載の組成物。
[41]前記エピジェネティック修飾化合物が、DNAメチル化阻害剤、ヒストンアセチルトランスフェラーゼ阻害剤、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤、またはブロモドメイン阻害剤のうち1つまたは複数を含む、[40]に記載の組成物。
[42]前記エピジェネティック修飾化合物がヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤を含む、[40]に記載の組成物。
[43]前記ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤がEZH2阻害剤である、[42]に記載の組成物。
[44]前記ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤がDZNep、GSK126、およびEPZ6438からなる群から選択される、[42]または[43]に記載の組成物。
[45]前記ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤がDZNepである、[44]に記載の組成物。
[46]前記膵前駆細胞またはその前駆体の集団に接触させる前記DZNepの濃度が、約0.05μM~約50μM、約0.1μM~約10μM、約0.5μM~約5μM、約0.75μM~約2.5μM、または約1μM~約2μMである、[45]に記載の組成物。
[47]前記DZNepの前記濃度が少なくとも約0.5μMである、[46]に記載の組成物。
[48]前記DZNepの前記濃度が約1μMである、[46]に記載の組成物。
[49]前記エピジェネティック修飾化合物がヒストンデアセチラーゼ(HDAC)阻害剤を含む、[40]から[48]のいずれかに記載の組成物。
[50]前記HDAC阻害剤がクラスI HDAC阻害剤、クラスII HDAC阻害剤、またはそれらの組合せである、[49]に記載の組成物。
[51]前記HDAC阻害剤がKD5170、MC1568、およびTMP195からなる群から選択される、[50]に記載の組成物。
[52]前記HDAC阻害剤がKD5170である、[50]に記載の組成物。
[53]前記エピジェネティック修飾化合物がHDAC阻害剤およびEZH2阻害剤を含む、[40]に記載の組成物。
[54]前記エピジェネティック修飾化合物がDZNepおよびKD5170を含む、[40]に記載の組成物。
[55](i)SHH経路阻害剤、(ii)レチノイン酸(RA)シグナル伝達経路活性化剤、(iii)γ-セクレターゼ阻害剤、(iv)上皮細胞成長因子(EGF)ファミリーからの成長因子、(v)骨形成タンパク質(BMP)シグナル伝達経路阻害剤、(vi)TGF-βシグナル伝達経路阻害剤、(vii)甲状腺ホルモンシグナル伝達経路活性化剤、(viii)プロテインキナーゼ阻害剤、および(ix)ROCK阻害剤からなる群から選択される薬剤をさらに含む、[33]から[54]のいずれかに記載の組成物。
[56](A)前記SHH経路阻害剤がSANT1を含む、
(B)前記RAシグナル伝達経路活性化剤がレチノイン酸を含む、
(C)前記γ-セクレターゼ阻害剤がXXIを含む、
(D)前記EGFファミリーからの成長因子がベータセルリンを含む、
(E)前記BMPシグナル伝達経路阻害剤がLDNを含む、
(F)前記TGF-βシグナル伝達経路阻害剤がAlk5i IIを含むか
(G)前記甲状腺ホルモンシグナル伝達経路活性化剤がGC-1を含む、
(H)前記プロテインキナーゼ阻害剤がスタウロスポリンを含む、または
(I)前記ROCK阻害剤がチアゾビニンを含む、
[55]に記載の組成物。
[57]ベータセルリン、チアゾビニン、レチノイン酸、SANT1、XXI、Alk5i II、GC-1、LDN、およびスタウロスポリンからなる群から選択される薬剤を含む、[55]または[56]に記載の組成物。
[58]膵前駆細胞、およびヒストンデアセチラーゼ(HDAC)阻害剤またはヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤のうち少なくとも1つを含む組成物。
[59]内分泌細胞をさらに含む、[58]に記載の組成物。
[60]前記HDAC阻害剤がクラスI HDAC阻害剤、クラスII HDAC阻害剤、またはそれらの組合せである、[58]または[59]に記載の組成物。
[61]前記HDAC阻害剤がKD5170、MC1568、およびTMP195からなる群から選択される、[60]に記載の組成物。
[62]前記HDAC阻害剤がKD5170である、[61]に記載の組成物。
[63]前記組成物中の前記KD5170の濃度が、約0.05μM~約50μM、約0.1μM~約10μM、約0.5μM~約5μM、約0.75μM~約2.5μM、または約1μM~約2μMである、[62]に記載の組成物。
[64]前記KD5170の前記濃度が少なくとも0.5μMである、[63]に記載の組成物。
[65]前記KD5170の前記濃度が約1μMである、[64]に記載の組成物。
[66]前記ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤がEZH2阻害剤である、[58]から[65]のいずれかに記載の組成物。
[67]前記ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤がDZNep、GSK126、およびEPZ6438からなる群から選択される、[66]に記載の組成物。
[68]前記ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤がDZNepである、[67]に記載の組成物。
[69]前記組成物中の前記DZNepの濃度が、約0.05μM~約50μM、約0.1μM~約10μM、約0.5μM~約5μM、約0.75μM~約2.5μM、または約1μM~約2μMである、[68]に記載の組成物。
[70]前記DZNepの前記濃度が少なくとも約0.5μMである、[69]に記載の組成物。
[71]前記DZNepの前記濃度が約1μMである、[69]に記載の組成物。
[72]前記HDAC阻害剤がKD5170であり、前記ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤がDZNepである、[58]に記載の組成物。
[73]in vitro組成物である、[58]から[72]のいずれかに記載の組成物。
[74](i)SHH経路阻害剤、(ii)レチノイン酸(RA)シグナル伝達経路活性化剤、(iii)γ-セクレターゼ阻害剤、(iv)上皮細胞成長因子(EGF)ファミリーからの成長因子、(v)骨形成タンパク質(BMP)シグナル伝達経路阻害剤、(vi)TGF-βシグナル伝達経路阻害剤、(vii)甲状腺ホルモンシグナル伝達経路活性化剤、(viii)プロテインキナーゼ阻害剤、および(ix)ROCK阻害剤からなる群から選択される薬剤をさらに含む、[58]から[73]のいずれかに記載の組成物。
[75](A)前記SHH経路阻害剤がSANT1を含むか、
(B)前記RAシグナル伝達経路活性化剤がレチノイン酸を含むか、
(C)前記γ-セクレターゼ阻害剤がXXIを含むか、
(D)前記EGFファミリーからの成長因子がベータセルリンを含むか、
(E)前記BMPシグナル伝達経路阻害剤がLDNを含むか、
(F)前記TGF-βシグナル伝達経路阻害剤がAlk5i IIを含むか、
(G)前記甲状腺ホルモンシグナル伝達経路活性化剤がGC-1を含むか、
(H)前記プロテインキナーゼ阻害剤がスタウロスポリンを含むか、または
(I)前記ROCK阻害剤がチアゾビニンを含む、
[74]に記載の組成物。
[76]ベータセルリン、チアゾビニン、レチノイン酸、SANT1、XXI、Alk5i II、GC-1、LDN、およびスタウロスポリンからなる群から選択される薬剤をさらに含む、[74]または[75]に記載の組成物。
[77]膵前駆細胞またはその前駆体を含む細胞集団をヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤と接触させて、内分泌細胞を含む細胞集団を産生させるステップ、および
前記内分泌細胞を含む細胞集団を成熟させて、グルコースチャレンジに対してin vi
troグルコース刺激インスリン分泌応答を呈する少なくとも1個の膵β細胞を得るステップ
を含む方法。
[78]前記細胞集団を(i)SHH経路阻害剤、(ii)レチノイン酸(RA)シグナル伝達経路活性化剤、(iii)γ-セクレターゼ阻害剤、(iv)上皮細胞成長因子(EGF)ファミリーからの成長因子、(v)骨形成タンパク質(BMP)シグナル伝達経路阻害剤、(vi)TGF-βシグナル伝達経路阻害剤、(vii)甲状腺ホルモンシグナル伝達経路活性化剤、(viii)プロテインキナーゼ阻害剤、および(ix)ROCK阻害剤からなる群から選択される薬剤と接触させるステップをさらに含む、[77]に記載の方法。
[79](A)前記SHH経路阻害剤がSANT1を含む、
(B)前記RAシグナル伝達経路活性化剤がレチノイン酸を含む、
(C)前記γ-セクレターゼ阻害剤がXXIを含む、
(D)前記EGFファミリーからの成長因子がベータセルリンを含む、
(E)前記BMPシグナル伝達経路阻害剤がLDNを含む、
(F)前記TGF-βシグナル伝達経路阻害剤がAlk5i IIを含む、
(G)前記甲状腺ホルモンシグナル伝達経路活性化剤がGC-1を含む、
(H)前記プロテインキナーゼ阻害剤がスタウロスポリンを含む、または
(I)前記ROCK阻害剤がチアゾビニンを含む、
[78]に記載の方法。
[80]前記細胞集団をベータセルリン、チアゾビニン、レチノイン酸、SANT1、XXI、Alk5i II、GC-1、LDN、およびスタウロスポリンからなる群から選択される薬剤と接触させるステップを含む、[78]または[79]に記載の方法。
[81]前記細胞集団をヒストンデアセチラーゼ(HDAC)阻害剤と接触させるステップをさらに含む、[77]から[80]のいずれかに記載の方法。
[82]前記HDAC阻害剤がKD5170である、[81]に記載の方法。
[83]前記ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤がDZNep、GSK126、およびEPZ6438からなる群から選択される、[77]から[82]のいずれかに記載の方法。
[84]前記ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤がDZNepである、[83]に記載の方法。
[85]前記ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤と接触させる前記ステップが、前記内分泌細胞を含み、前記ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤と接触していない内分泌細胞の対応する集団と比較して、クロモグラニンA陽性(CHGA+)細胞の割合が増加した、またはC-ペプチド陽性かつNKX6.1陽性(C-PEP+、NKX6.1+)の細胞の割合が増加した集団をもたらす、[77]から[84]のいずれかに記載の方法。
[86]前記ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤と接触させる前記ステップが、前記内分泌細胞を含み、前記ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤と接触していない内分泌細胞の対応する集団と比較して、VMATまたはCdx2を発現する細胞の割合が減少した集団をもたらす、[77]から[85]のいずれかに記載の方法。
[87]前記膵前駆細胞またはその前駆体のうち前記少なくとも1個の細胞がPdx1およびNKX6.1の両方を発現する、[77]から[86]のいずれかに記載の方法。
[88]複数の幹細胞をin vitroで分化させて前記膵前駆細胞またはその前駆体を含む前記細胞集団を得るステップをさらに含む、[77]から[87]のいずれかに記載の方法。
[89][77]から[88]のいずれかに記載の方法によって産生された膵β細胞。
[90](a)Pdx1陰性NKX6.1陰性の原腸管細胞の集団を骨形成タンパク質(BMP)シグナル伝達経路阻害剤およびトランスフォーメーション成長因子β(TGF-β)スーパーファミリーからの成長因子と接触させ、それによりPdx1陽性、NKX6.1陽性の膵前駆細胞を含む細胞集団を産生させるステップ、および
(b)前記Pdx1陽性、NKX6.1陽性の膵前駆細胞を含む前記細胞集団をエピジェネティック修飾化合物と接触させて、内分泌細胞を含む細胞集団を産生させるステップ
を含む方法。
[91]前記BMPシグナル伝達経路阻害剤がDMH-1、その誘導体、類似体、または変異体を含む、[90]に記載の方法。
[92]前記Pdx1陰性、NKX6.1陰性の原腸管細胞の集団に接触させる前記DMH-1の濃度が、約0.01μM~約10μM、約0.05μM~約5μM、約0.1μM~約1μM、または約0.15μM~約0.5μMである、[91]に記載の方法。
[93]前記Pdx1陰性、NKX6.1陰性の原腸管細胞の集団に接触させる前記DMH-1の濃度が約0.25μMのDMH-1である、[91]に記載の方法。
[94]前記TGF-βスーパーファミリーからの成長因子がアクチビンAを含む、[91]から[93]のいずれかに記載の方法。
[95]前記Pdx1陰性、NKX6.1陰性の原腸管細胞の集団に接触させる前記アクチビンAの濃度が、約0.5ng/mL~約200ng/mL、約1ng/mL~約100ng/mL、約2ng/mL~約50ng/mL、または約5ng/mL~約30ng/mLである、[94]に記載の方法。
[96]前記Pdx1陰性、NKX6.1陰性の原腸管細胞の集団に接触させる前記アクチビンAの濃度が少なくとも約5ng/mLまたは少なくとも約10ng/mLのアクチビンAである、[94]に記載の方法。
[97]前記Pdx1陰性、NKX6.1陰性の原腸管細胞の集団に接触させる前記アクチビンAの濃度が約20ng/mLのアクチビンAである、[94]に記載の方法。
[98]前記Pdx1陰性、NKX6.1陰性の原腸管細胞の集団を接触させる前記ステップが、FGFファミリーからの成長因子、SHH経路阻害剤、RAシグナル伝達経路活性化剤、プロテインキナーゼC活性化剤、およびROCK阻害剤からなる群から選択される薬剤と接触させるステップをさらに含む、[90]から[97]のいずれかに記載の方法。
[99]前記エピジェネティック修飾化合物が、DNAメチル化阻害剤、ヒストンアセチルトランスフェラーゼ阻害剤、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、ヒストンメチルトランスフェラ
ーゼ阻害剤、およびブロモドメイン阻害剤からなる群から選択される化合物を含む、[90]から[98]のいずれかに記載の方法。
[100]前記エピジェネティック修飾化合物がヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤を含む、[99]に記載の方法。
[101]前記ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤がEZH2阻害剤である、[100]に記載の方法。
[102]前記ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤がDZNep、GSK126、およびEPZ6438からなる群から選択される、[100]または[101]に記載の方法。
[103]前記ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤がDZNepである、[102]に記載の方法。
[104]前記膵前駆細胞またはその前駆体の集団に接触させる前記DZNepの濃度が、約0.05μM~約50μM、約0.1μM~約10μM、約0.5μM~約5μM、約0.75μM~約2.5μM、または約1μM~約2μMである、[103]に記載の方法
[105]前記DZNepの前記濃度が少なくとも約0.5μMである、[104]に記載の方法。
[106]前記DZNepの前記濃度が約1μMである、[104]に記載の方法。
[107]前記エピジェネティック修飾化合物がヒストンデアセチラーゼ(HDAC)阻害剤を含む、[90]から[106]のいずれかに記載の方法。
[108]前記HDAC阻害剤がクラスI HDAC阻害剤、クラスII HDAC阻害剤、またはそれらの組合せである、[107]に記載の方法。
[109]前記HDAC阻害剤がKD5170、MC1568、およびTMP195からなる群から選択される、[108]に記載の方法。
[110]前記HDAC阻害剤がKD5170である、[109]に記載の方法。
[111]in vitroで実施される、[90]から[110]のいずれかに記載の方法。
[112]前記Pdx1陽性、NKX6.1陽性の膵前駆細胞を含む前記集団を(i)SHH経路阻害剤、(ii)レチノイン酸(RA)シグナル伝達経路活性化剤、(iii)γ-セクレターゼ阻害剤、(iv)上皮細胞成長因子(EGF)ファミリーからの成長因子、(v)骨形成タンパク質(BMP)シグナル伝達経路阻害剤、(vi)TGF-βシグナル伝達経路阻害剤、(vii)甲状腺ホルモンシグナル伝達経路活性化剤、(viii)プロテインキナーゼ阻害剤、および(ix)ROCK阻害剤からなる群から選択される薬剤と接触させるステップをさらに含む、[90]から[111]のいずれかに記載の方法。
[113](A)前記SHH経路阻害剤がSANT1を含む、
(B)前記RAシグナル伝達経路活性化剤がレチノイン酸を含む、
(C)前記γ-セクレターゼ阻害剤がXXIを含む、
(D)前記EGFファミリーからの成長因子がベータセルリンを含む、
(E)前記BMPシグナル伝達経路阻害剤がLDNを含む、
(F)前記TGF-βシグナル伝達経路阻害剤がAlk5i IIを含むか、
(G)前記甲状腺ホルモンシグナル伝達経路活性化剤がGC-1を含む、
(H)前記プロテインキナーゼ阻害剤がスタウロスポリンを含む、または
(I)前記ROCK阻害剤がチアゾビニンを含む、
[112]に記載の方法。
[114]前記Pdx1陽性、NKX6.1陽性の膵前駆細胞を含む前記集団をベータセルリン、チアゾビニン、レチノイン酸、SANT1、XXI、Alk5i II、GC-1、LDN、およびスタウロスポリンからなる群から選択される薬剤と接触させるステップを含む、[112]または[113]に記載の方法。
[115]前記接触させるステップが少なくとも3日間である、[112]から[114]のいずれかに記載の方法。
[116]前記接触させるステップが、前記Pdx1陽性、NKX6.1陽性の膵前駆細胞を含む前記集団を前記エピジェネティック修飾化合物と3日を超える期間接触させるステップ、および前記期間のうち最初の3日間に前記膵前駆細胞またはその前駆体の集団と前記接触させるステップの後で、前記SHH経路阻害剤、前記RAシグナル伝達経路活性化剤、または前記EGFファミリーからの成長因子を除去するステップを含む、[115]に記載の方法。
[117]前記接触させるステップが少なくとも5日間である、[112]から[116]のいずれかに記載の方法。
[118]前記接触させるステップが約7日間である、[112]から[116]のいずれかに記載の方法。
[119]前記Pdx1陽性、NKX6.1陽性の膵前駆細胞を含む細胞集団が、フローサイトメトリーによって測定して多くとも約10%の、Cdx2を発現する細胞を含む、[90]から[118]のいずれかに記載の方法。
[120]前記Pdx1陽性、NKX6.1陽性の膵前駆細胞を含む細胞集団が、前記骨形成タンパク質(BMP)シグナル伝達経路阻害剤および前記トランスフォーメーション成長因子β(TGF-β)スーパーファミリーからの成長因子と接触していない対応する細胞集団と比較して、より少ない割合の、Cdx2を発現する細胞を含む、[90]から[119]のいずれかに記載の方法。
[121]前記内分泌細胞を含む細胞集団が、フローサイトメトリーによって測定して、少なくとも約40%の、ISL1およびNKX6.1を発現する細胞を含む、[90]から[120]のいずれかに記載の方法。
[122]前記内分泌細胞を含む細胞集団が、前記骨形成タンパク質(BMP)シグナル伝達経路阻害剤および前記トランスフォーメーション成長因子β(TGF-β)スーパーファミリーからの成長因子と前記接触をしていない対応する細胞集団と比較して、より多い割合の、ISL1およびNKX6.1を発現する細胞を含む、[90]から[121]のいずれかに記載の方法。
[123]前記内分泌細胞を含む細胞集団が、フローサイトメトリーによって測定して、多くとも約15%のISL1陰性、NKX6.1陰性の細胞を含む、[90]から[122]のいずれかに記載の方法。
[124]前記内分泌細胞を含む細胞集団が、前記骨形成タンパク質(BMP)シグナル伝達経路阻害剤および前記トランスフォーメーション成長因子β(TGF-β)スーパーファミリーからの成長因子と前記接触をしていない対応する細胞集団と比較して、より少ない割合のISL1陰性、NKX6.1陰性の細胞を含む、[90]から[122]のいずれかに記載の方法。
[125]前記内分泌細胞を含む細胞集団を凍結保存するステップをさらに含む、[90]から[124]のいずれかに記載の方法。
[126]前記内分泌細胞を含む細胞集団が細胞クラスターであり、前記方法が、
(a)前記細胞クラスターから複数の細胞を分離するステップ、および
(b)ステップ(a)からの前記複数の細胞を再凝集培地中で培養して、前記複数の細胞の少なくとも一部に第2の細胞クラスターを形成させるステップ
をさらに含む、[90]から[125]のいずれかに記載の方法。
[127]前記分離するステップが、前記複数の細胞をフローサイトメトリーに供するステップを含まない、[126]に記載の方法。
[128]前記再凝集培地が血清を含まない、[126]または[127]に記載の方法。
[129]前記再凝集培地が外因性分化因子を含まない、[126]から[128]のいずれかに記載の方法。
[130]前記内分泌細胞をin vitroで成熟させて、グルコースチャレンジに対してin
vitroグルコース刺激インスリン分泌応答を呈する少なくとも1個の膵β細胞を得るステップをさらに含む、[90]から[129]のいずれかに記載の方法。
[131]前記成熟させるステップが無血清培地中で実施される、[130]に記載の方法。
[132]前記成熟させるステップがゼノフリー培地中で実施される、[130]または[131]に記載の方法。
[133]前記成熟させるステップが外因性分化因子を含まない培地中で実施される、[130]から[132]のいずれかに記載の方法。
[134]前記成熟させるステップがヒト血清アルブミン(HSA)の存在下で実施される、[130]から[133]のいずれかに記載の方法。
[135]前記HSAが約0.1%~約5%、約0.5%~約2%の濃度で存在する、[134]に記載の方法。
[136]前記HSAが約1%の濃度で存在する、[134]に記載の方法。
[137](a)集団中の多能性幹細胞をTGF-βスーパーファミリーからの成長因子およびWNTシグナル伝達経路活性化剤と接触させることによって、前記多能性幹細胞を胚体内胚葉細胞に分化させるステップ、
(b)前記胚体内胚葉細胞をFGFファミリーからの成長因子と接触させることによって、前記胚体内胚葉細胞の少なくとも一部を原腸管細胞に分化させるステップ、
(c)前記原腸管細胞をROCK阻害剤、FGFファミリーからの成長因子、BMPシグ
ナル伝達経路阻害剤、PKC活性化剤、レチノイン酸シグナル伝達経路活性化剤、SHH経路阻害剤、およびTGF-βスーパーファミリーからの成長因子と接触させることによって前記原腸管細胞の少なくとも一部をPdx1陽性膵前駆細胞に分化させるステップ、(d)前記Pdx1陽性膵前駆細胞をROCK阻害剤、TGFβスーパーファミリーからの成長因子、FGFファミリーからの成長因子、RAシグナル伝達経路活性化剤、およびSHH経路阻害剤と接触させることによって前記Pdx1陽性膵前駆細胞の少なくとも一部をPdx1陽性、NKX6.1陽性の膵前駆細胞に分化させるステップ、ならびに
(e)前記Pdx1陽性、NKX6.1陽性の膵前駆細胞をTGF-βシグナル伝達経路阻害剤、EGFファミリーからの成長因子、RAシグナル伝達経路活性化剤、SHH経路阻害剤、THシグナル伝達経路活性化剤、γ-セクレターゼ阻害剤、プロテインキナーゼ阻害剤、ROCK阻害剤、BMPシグナル伝達経路阻害剤、およびエピジェネティック修飾化合物と接触させることによって前記Pdx1陽性、NKX6.1陽性の膵前駆細胞の少なくとも一部を少なくとも1個のNKX6.1+かつC-ペプチド+の細胞を含む細胞集団に分化させるステップ
を含む方法。
[138][90]から[129]のいずれかまたは[137]に記載の方法によって産生された内分泌細胞を含む細胞集団。
[139][130]から[136]のいずれかに記載の方法によって産生されるSC-β細胞を含む細胞集団。
[140]内分泌細胞を含むin vitroの細胞集団を約100rad~約100,000radの線量で約1分~約60分の時間の照射に曝露するステップを含む方法。
[141]幹細胞、胚体内胚葉細胞、原腸管細胞、膵前駆細胞、または内分泌細胞を含む細胞集団を照射に曝露するステップを含み、前記照射が、照射に供されていない対応する細胞集団と比較して増殖能力が低減した細胞集団をもたらす、細胞の増殖を低減させる方法。
[142]前記細胞集団が、約100rad~約50,000rad、約100rad~約25,000rad、約100rad~約10,000rad、約250rad~約25,000rad、約500rad~約25,000rad、約1,000rad~約25,000rad、約2,500rad~約25,000rad、約5,000rad~約25,000rad、または約10,000rad~約15,000radの照射に曝露される、[140]または[141]に記載の方法。
[143]前記細胞集団が約10,000radの照射に曝露される、[140]または[141]に記載の方法。
[144]前記細胞集団が、約1分~約55分、約1分~約50分、約1分~約45分、約1分~約40分、約1分~約35分、約1分~約30分、約1分~約25分、約1分~約20分、約1分~約10分、約1分~約5分、約10分~約55分、約15分~約55分、約20分~約55分、約25分~約55分、約30分~約55分、約20分~約40分、または約25分~約35分、照射に曝露される、[140]から[143]のいずれかに記載の方法。
[145]前記細胞集団が約30分、照射に曝露される、[140]から[143]のいずれかに記載の方法。
[146]前記照射がイオン化照射を含む、[140]から[145]のいずれかに記載の方法
。
[147]前記イオン化照射がガンマ線、X線、紫外線放射、アルファ線、ベータ線、または中性子線を含む、[140]から[146]のいずれかに記載の方法。
[148]前記照射が、前記照射に供されていない対応する細胞クラスターと比較して増殖が低減した細胞集団をもたらす、[140]から[147]のいずれかに記載の方法。
[149]前記細胞集団が、約50μm~約500μm、約50μm~約300μm、約50μm~約200μm、約50μm~約150μm、約600μm~約150μm、約700μm~約150μm、約80μm~約150μm、または約60μm~約100μmの直径を有する第2の細胞クラスターを含む、[140]から[148]のいずれかに記載の方法。
[150](a)第1の細胞クラスターから複数の細胞を分離するステップ、および
(b)ステップ(a)からの前記複数の細胞を再凝集培地中で培養して、前記複数の細胞の少なくとも一部に前記第2の細胞クラスターを形成させるステップ
をさらに含む、[149]に記載の方法。
[151]前記分離するステップが、前記複数の細胞をフローサイトメトリーに供するステップを含まない、[150]に記載の方法。
[152]前記第1の細胞クラスターが、第3の細胞クラスターを分離し、前記第3の細胞クラスターから分離した細胞を培養して、前記第1の細胞クラスターを形成させることによって得られる、[150]または[151]に記載の方法。
[153]前記細胞クラスターが前記照射の前に凍結保存され、前記方法が、凍結保存された前記細胞クラスターを前記照射の前に解凍するステップをさらに含む、[149]に記載の方法。
[154]前記細胞クラスターが前記照射に供されている間に凍結保存される、[149]に記載の方法。
[155]凍結保存された前記細胞クラスターを照射の後に解凍し、前記内分泌細胞の少なくとも一部を分化させるステップをさらに含む、[154]に記載の方法。
[156]膵前駆細胞またはその前駆体をin vitroで分化させることによって前記内分泌細胞を含む前記細胞集団を得るステップをさらに含む、[140]から[155]のいずれかに記載の方法。
[157]幹細胞をin vitroで分化させ、それにより前記内分泌細胞を含む前記細胞集団を産生させるステップをさらに含む、[140]から[156]のいずれかに記載の方法。
[158]前記内分泌細胞の少なくとも一部をin vitroで膵β細胞に成熟させ、それにより細胞集団を産生させるステップをさらに含む、[140]から[157]のいずれかに記載の方法。
[159]前記膵β細胞をそれを必要とする対象に埋め込むステップをさらに含む、[158]に記載の方法。
[160]埋め込まれた前記膵β細胞が、前記対象において少なくとも約50日、60日、70日、80日、90日、またはそれより長く、血中グルコースレベルを制御するように構成されている、[159]に記載の方法。
[161][140]から[157]のいずれかに記載の方法によって産生された内分泌細胞を含む細胞集団。
[162][158]から[160]のいずれかに記載の方法によって産生された膵β細胞を含む細胞集団。
Claims (23)
- PDX1およびNKX6.1を発現する膵前駆細胞の集団;DZNep;およびRho関連タンパク質キナーゼ(ROCK)阻害剤または上皮細胞成長因子(EGF)ファミリーからの成長因子の少なくとも1つを含む、in vitro組成物。
- 0.05μM~50μMのDZNepを含む、請求項1に記載のin vitro組成物。
- 0.1μMのDZNepを含む、請求項1に記載のin vitro組成物。
- 上皮細胞成長因子(EGF)ファミリーからの成長因子が、ベータセルリンまたはEGFである、請求項1~3のいずれか1項に記載のin vitro組成物。
- Ngn3陽性内分泌前駆細胞、またはインスリン陽性内分泌細胞をさらに含む、請求項1~4のいずれか1項に記載のin vitro組成物。
- ヒストンデアセチラーゼ(HDAC)阻害剤をさらに含む、請求項1~5のいずれか1項に記載のin vitro組成物。
- HDAC阻害剤が、KD5170、MC1568、およびTMP195からなる群から選択される、請求項6に記載のin vitro組成物。
- TGF-βシグナル伝達経路阻害剤さらに含む、請求項1~7のいずれか1項に記載のin vitro組成物。
- TGF-βシグナル伝達経路阻害剤が、Alk5i II、A83-01、SB431
542、D4476、GW788388、LY364947、LY580276、SB505124、GW6604、SB-525334、およびSD-208からなる群から選択される、請求項8に記載のin vitro組成物。 - 甲状腺ホルモンシグナル伝達経路活性化剤をさらに含む、請求項1~9のいずれか1項に記載のin vitro組成物。
- 甲状腺ホルモンシグナル伝達経路活性化剤が、T3またはGC-1を含む、請求項10に記載のin vitro組成物。
- ROCK阻害剤が、チアゾビビン、Y-27632、ファスジル/HA1077、および14-1152からなる群から選択される、請求項1~11のいずれか1項に記載のin vitro組成物。
- 骨形成タンパク質(BMP)シグナル伝達経路阻害剤をさらに含む、請求項1~12のいずれか1項に記載のin vitro組成物。
- 骨形成タンパク質(BMP)シグナル伝達経路阻害剤が、LDN193189またはDMH-Iを含む、請求項13に記載のin vitro組成物。
- レチノイン酸シグナル伝達経路活性化剤をさらに含む、請求項1~14のいずれか1項に記載のin vitro組成物。
- レチノイン酸シグナル伝達経路活性化剤が、レチノイン酸、CD1530、AM580、TTHPB、CD437、Ch55、BMS961、AC261066、AC55649、AM80、BMS753、タザロテン、アダパレン、およびCD2314からなる群から選択される、請求項15に記載のin vitro組成物。
- ソニックヘッジホッグ経路阻害剤をさらに含む、請求項1~16のいずれか1項に記載のin vitro組成物。
- ソニックヘッジホッグ(SHH)経路阻害剤が、SANT1、SANT2、SANT4、Cur61414、フォルスコリン、トマチジン、AY9944、トリパラノール、およびシクロパミンからなる群から選択される、請求項17に記載のin vitro組成物。
- γ-セクレターゼ阻害剤をさらに含む、請求項1~18のいずれか1項に記載のin vitro組成物。
- γ-セクレターゼ阻害剤がXXIまたはDAPTを含む、請求項19に記載のin vitro組成物。
- スタウロスポリン、Ro-31-8220、ビスインドリルマレイミド(Bis)化合物、10’-{5”-[(メトキシカルボニル)アミノ]-2”-メチル}-フェニルアミノカルボニルスタウロスポリン、およびスタラログからなる群から選択されるプロテインキナーゼ阻害剤をさらに含む、請求項1~20のいずれか1項に記載のin vitro組成物。
- (a)SANT1、SANT2、SANT4、Cur61414、フォルスコリン、トマチジン、AY9944、トリパラノール、およびシクロパミンからなる群から選択され
るソニックヘッジホッグ経路阻害剤;
(b)レチノイン酸、CD1530、AM580、TTHPB、CD437、Ch55、BMS961、AC261066、AC55649、AM80、BMS753、タザロテン、アダパレン、およびCD2314からなる群から選択されるレチノイン酸シグナル伝達経路活性化剤;
(c)XXIまたはDAPTを含むγ-セクレターゼ阻害剤;
(d)LDN193189またはDMH-Iを含む骨形成タンパク質シグナル伝達経路阻害剤;
(e)Alk5i II、A83-01、SB431542、D4476、GW788388、LY364947、LY580276、SB505124、GW6604、SB-525334、およびSD-208からなる群から選択されるTGF-βシグナル伝達経路阻害剤;
(f)T3またはGC-1を含む甲状腺ホルモンシグナル伝達経路活性化剤;または
(g)スタウロスポリン、Ro-31-8220、ビスインドリルマレイミド(Bis)化合物、10’-{5”-[(メトキシカルボニル)アミノ]-2”-メチル}-フェニルアミノカルボニルスタウロスポリン、およびスタラログからなる群から選択されるプロテインキナーゼ阻害剤
をさらに含む、請求項1~7のいずれか1項に記載のin vitro組成物。 - レチノイン酸、SANT1、XXI、Alk5i II、GC-1、LDN193189、およびスタウロスポリンをさらに含む、請求項1~7のいずれか1項に記載のin vitro組成物。
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Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2016021734A1 (ja) | 2014-08-04 | 2016-02-11 | 武田薬品工業株式会社 | 膵前駆細胞の増殖方法 |
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---|---|---|---|---|
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US20110305672A1 (en) * | 2008-07-25 | 2011-12-15 | University Of Georgia Research Foundation, Inc. | COMPOSITIONS FOR MESODERM DERIVED ISL1+ MULTIPOTENT CELLS (IMPs), EPICARDIAL PROGENITOR CELLS (EPCs) AND MULTIPOTENT CD56C CELLS (C56Cs) AND METHODS OF PRODUCING AND USING SAME |
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US20140030234A1 (en) * | 2012-07-12 | 2014-01-30 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Methods and compositions for modulating islet beta cell development |
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MA45329A (fr) * | 2016-04-08 | 2019-02-13 | Univ California | Production de cellules bêta matures pleinement fonctionnelles à partir de progénitrices pancréatiques humaines |
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JP2017515507A (ja) | 2014-05-16 | 2017-06-15 | ヤンセン バイオテツク,インコーポレーテツド | 膵内分泌細胞内のmafa発現を強化するための小分子の使用 |
WO2016021734A1 (ja) | 2014-08-04 | 2016-02-11 | 武田薬品工業株式会社 | 膵前駆細胞の増殖方法 |
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