JPWO2019049957A1 - 幼若ブタ由来幹細胞およびその調製方法 - Google Patents
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Abstract
Description
2つ目の免疫調節能は、体性幹細胞からの抗炎症性サイトカイン、ケモカイン、エクソソームなどの分泌を介し、あるいは、細胞間の接着因子などを介し、患者の免疫担当細胞に働きかけ、炎症や移植片対宿主病などの免疫反応を抑制することで治療効果を発揮する。
3つ目の細胞外環境のリモデリング能については、虚血性疾患における梗塞部位や、炎症によって引き起こされた線維化部位などに対し、体性幹細胞からの血管誘導因子、成長因子、抗線維化因子などの分泌により治療効果を発揮するものである。
1.幼若ブタより単離された、幹細胞。
2.平均直径が17μm以下である前記1に記載の幹細胞。
3.対数増殖期における倍加時間が36時間以下である前記1または2に記載の幹細胞。
4.間葉系幹細胞である前記1〜3のいずれか1に記載の幹細胞。
5.幼若ブタがヒトへ細胞移植することができる幼若ブタである前記1〜4のいずれか1に記載の幹細胞。
6.幼若ブタの骨髄または膵島より単離された前記1〜5のいずれか1に記載の幹細胞。
7.移植用幹細胞である前記1〜6のいずれか1に記載の幹細胞。
8.ヒト移植用幹細胞である前記7に記載の幹細胞。
9.フィーダー細胞用幹細胞である前記1〜6のいずれか1に記載の幹細胞。
10.ヒト移植用幹細胞を増殖するためのフィーダー細胞用幹細胞である前記9に記載の幹細胞。
11.幼若ブタから細胞を単離する工程を含む、幹細胞の調製方法。
12.幹細胞を播種後3〜12日後に継代する工程を含む、前記11に記載の幹細胞の調製方法。
13.幼若ブタから単離する細胞が単核球細胞画分の細胞である前記11または12に記載の幹細胞の調製方法。
14.幼若ブタからの細胞の単離が、幼若ブタの骨髄または膵島からの細胞の単離である前記11〜13のいずれか1に記載の幹細胞の調製方法。
15.単離した単核球細胞画分の細胞を凍結する工程を含む、前記13または14に記載の幹細胞の調製方法。
(1)幼若ブタから細胞を採取する工程
(2)工程(1)において採取した細胞を培養し、幼若ブタ由来幹細胞を調製する工程
以下、各工程について説明する。
工程(1)では幼若ブタの骨髄、脂肪、皮膚、膵臓等から細胞を採取する。
具体的には例えば、幼若ブタの骨髄から細胞を採取する場合、幼若ブタの大腿骨、腸骨稜及び胸骨などから骨髄細胞を採取することができる。例えば、幼若ブタから大腿骨を回収し、両端を切断して針を挿入し、ヘパリンを添加した生理的緩衝液(例えば燐酸緩衝液、以後PBSとも言う)で洗い流し、反対側の場所から流出液を骨髄液として回収する。流出液の量が減少したら、骨を逆にして針を反対側に挿入し、PBSで再び洗い流して、細胞含有溶液である骨髄液を調製する。
上記工程(1)で採取した細胞、細胞画分、または細胞塊には、幹細胞以外の目的外の細胞が多く含まれる。通常、これらの目的外細胞の生存に必須である、ビタミンCを含まない基礎培地(例えば、後述のMSC基礎培地)を用いることで、これらの細胞を除去する培養方法が用いられている。
〔幼若ブタ由来骨髄細胞の回収〕
幼若ブタの大腿骨から骨髄を採取した。幼若ブタ(生後23日の医療用ランドレース種ブタ)から大腿骨を回収し、両端を切断して12G針を挿入し、50mLのヘパリン処理したPBS(3mLのヘパリン(1000U/mL)、47mLのPBS)で洗い流し、反対側の場所から50mLの骨髄の流出液(以下、骨髄液とも略す)を回収した。流出液の量が減少したら、骨を逆にして針を反対側に挿入し、PBSで再び洗い流して骨髄液を収集した。カウント用の15mLコニカルチューブで1950μLのPBS(40倍希釈)に50μLのサンプルを取り、セルカウンターで細胞数を測定した。
上記手順で得られた骨髄液を静かに再懸濁した。骨髄液全体を50mLチューブ4本に各10mLずつに分け、各々PBSで30mLに希釈し、細胞がチューブに付着していないことを確認してよく混合した。10mLのFicoll−Paque PLUS(GEヘルスケアライフサイエンス社製)を4本の新しい50mLチューブに加え、Ficoll−Paque PLUS層の上にPBSと混合した30mLの骨髄液を入れた。
単離された単核球細胞画分の細胞を、107細胞/mLのDMSOを混合したFBS(90%FBSと10%DMSO)を含むクライオバイアルに入れ、細胞懸濁液の全容量を1mlとした[細胞数/10×106=DMSOを混合したFBSの容量(mL)とした]。クライオバイアルを−20℃にて1時間保存し、続いて−80℃にて24時間保存後、最終的に長期保存用の液体窒素タンクに移した。
37℃の水浴でクライオバイアルに冷凍保存していた幼若ブタ由来単核球細胞(npMNCs)画分の細胞を含む細胞懸濁液を素早く解凍し、マイクロピペットを用いて、解凍した細胞懸濁液を30mLの温度平衡(37℃)に調整したMSC基礎培地[500mLのGibco社製MEMα(Nucleosides、no Ascorbic acid)に55mLのGibco社製Fetal bovine serum (FBS)及び5.5mLのSigma−Aldorich社製Penicillin−Streptomycinを添加した培地、以下同様]に静かに加えた。室温にて5分間、500×gで遠心分離し、ペレットを4mLの温度で平衡化したMSC基礎培地に再懸濁し、上下に穏やかにピペッティングした。総細胞数および生細胞数を計測した結果、総細胞数4.18×106個、生細胞数6.6×105個、生存率:15.8%であった。
幼若ブタ骨髄由来間葉系幹細胞(npBM−MSC)がほぼ100%コンフルエンスに達した後、2ウェルから細胞を回収し、0.1%ゼラチンコート有りまたは無しでT75フラスコにそれらを再播種した。
幼若ブタ骨髄由来間葉系幹細胞(npBM−MSC)がほぼ100%コンフルエンスに達した後、0.1%ゼラチンコートを含むまたは含まないT75フラスコの2つのフラスコから細胞を回収した。8mLのPBS(−)で細胞を洗浄し、1ウェルあたり0.25%のトリプシン2.4mLを加え、インキュベーターに数分間静置し、細胞が剥がれたら12.6mLのMSC培地で中和した。細胞懸濁液を50mLのチューブに集めて、室温にて5分間、500×gで遠心分離した。
0.1%ゼラチンコートされたフラスコ(×2)からの細胞:総細胞数1.62×107個、生細胞数1.60×107個、生存率:98.8%
ゼラチンコートなしのフラスコ(×2)からの細胞:総細胞数1.48×107個、生細胞数1.46×107個、生存率:98.6%
上記した培養とは別に、早期継代の幼若ブタ骨髄由来間葉系幹細胞(npBM−MSC)を凍結して細胞ストックを作製した。所望の濃度のCELLBANKER(登録商標)1またはOPF−301[3%トレハロース及び5%デキストランを含有する乳酸リンゲル液(国際公開第2014/208053号)]とDMSOを9:1の比率で混合した溶液中でトリプシン処理したnpBM−MSCペレットを再懸濁し、1.5×106細胞/1mL/バイアルとした。バイアルをバイセルに入れて−80℃にて24時間保存した後、細胞を−80℃から液体窒素に移して長期保存した。
幼若ブタ骨髄由来間葉系幹細胞(npBM−MSC)(P2)を、21cm2培養ディッシュ(ゼラチンコート無しまたは0.1%ゼラチンコート)に630細胞を30細胞/cm2の密度で播種し、MSC培地中で培養した。MSC培地は3日毎に交換した。6日間の培養後、接着細胞を4mLのPBSで2回洗浄し、4mLの氷冷メタノールで4℃にて15分間固定した。コロニーを可視化するために、リン酸緩衝液で1:19に希釈した4mLのギムザで30分間細胞を染色後、室温(RT)で洗浄し、H2Oで2回洗浄した。
ヒト骨髄由来間葉系幹細胞(hBM−MSC、継代回数P4)および得られた幼若ブタ骨髄由来間葉系幹細胞(npBM−MSC)について、細胞の平均直径を計測した結果を表2に示す。細胞の平均直径はNucleo Counter NC−200(商標)を用いて計測し、平均値(n=3)を算出した。
ヒト骨髄由来間葉系幹細胞(hBM−MSC)および幼若ブタ骨髄由来間葉系幹細胞(npBM−MSC)について、細胞をT25フラスコ中で5000細胞/cm2(1.25×105細胞/フラスコ)の密度で播種し、MSC培地を用いて培養した。MSC培地は3日毎に交換した。培養開始から1、2、4および8日後に生存可能な細胞および死んだ細胞の総数を数えた。結果を表3および表4、並びに図1Aおよび図1Bに示す。なお、表3および表4の値は平均値±SD(n=4)である。
ヒト骨髄由来間葉系幹細胞(hBM−MSC)および幼若ブタ骨髄由来間葉系幹細胞(npBM−MSC)について、hMSC differentiation BulletKit(商標)−adipogeni、PT−3004(Lonza Walkersville社製)を用いて、プロトコールに従って脂肪細胞への分化を誘導した。誘導開始後17日目にSigma−Aldorich社製Oil Redを用いて染色した結果をそれぞれ図2Aおよび図2Bに示す。
ヒト骨髄由来間葉系幹細胞(hBM−MSC)および幼若ブタ骨髄由来間葉系幹細胞(npBM−MSC)について、hMSC differentiation BulletKit(商標)−osteogenic、PT−3002(Lonza Walkersville社製)を用いて、プロトコールに従って骨細胞への分化を誘導した。誘導開始後14日目に、コスモ・バイオ社製アルカリフォスファターゼ染色キットを用いて染色した結果をそれぞれ図3Aおよび図3Bに、コスモ・バイオ社製石灰化染色キットを用いて染色した結果をそれぞれ図4Aおよび図4Bに示す。
幼若ブタ骨髄由来間葉系幹細胞(npBM−MSC)について、hMSC differentiation BulletKit(商標)−chondrogenic、PT−3003(Lonza Walkersville社製)を用いて、プロトコールに従って骨細胞への分化を誘導した。誘導開始後19日目に、HE染色した結果およびアルシアンブルー染色した結果をそれぞれ図5Aおよび図5Bに示す。
〔幼若ブタ由来単核球細胞(npMNC)画分の細胞の培養および幼若ブタ骨髄由来間葉系幹細胞(npBM−MSC)調製〕
MSC基礎培地またはMSC培地は、使用前にインキュベーター(37℃、5%CO2)中に10〜15分間静置した。試験例1と同様に、37℃の水浴でクライオバイアルに冷凍保存していた幼若ブタ由来単核球細胞(npMNC)画分の細胞を含む細胞懸濁液を素早く解凍した。マイクロピペットを用いて、解凍した細胞懸濁液を30mLの温度平衡(37℃)MSC基礎培地に静かに加え、50mLのチューブ2本に15mLずつ分注した。
2mLのMSC基礎培地:総細胞数2.60×106個、生細胞数4.8×105個、生存率18.5%
2mLのMSC培地:総細胞数2.55×10個、生細胞数4.5×105個、生存率17.6%
2mLのMSC基礎培地:2.60×106個/1ウェルの細胞を播種
2mLのMSC培地:2.55×106個/1ウェルの細胞を播種
幼若ブタ骨髄由来間葉系幹細胞(npBM−MSC)がほぼ50〜60%コンフルエントに達した後、1ウェルから細胞を回収し、ゼラチンコートなしでT75フラスコにそれらを再播種した。
P0播種時にMSC基本培地の群:総細胞数5.0×105個、生細胞数5.0×105個、生存率:100%
P0播種時にMSC培地の群:総細胞数3.3×105個、生細胞数3.3×105個、生存率:100%
P0播種時にMSC基礎培地の群:生細胞数5.0×105個/フラスコ
P0播種時にMSC培地の群:生細胞数3.3×105個/フラスコ
前記手順により再播種した細胞がほぼ80〜90%のコンフルエンスに達した後、T75フラスコ(ゼラチンコート無し)の1フラスコから細胞を集めた。8mLのPBS(−)で細胞を洗浄し、0.25mL/1ウェルのトリプシン2.4mLを加え、インキュベーターに数分間静置し、細胞が剥がれたら12.6mLのMSC培地で中和した。細胞懸濁液を50mLのチューブに集めて、室温にて5分間、500×gで遠心分離した。
1つのフラスコからの細胞(P0の播種後の3日間のMSC基礎培地):総細胞数5.12×106個、生細胞数5.09×106個、生存率:99.5%
1つのフラスコからの細胞(P0の播種時からMSC培地):総細胞数4.76×106個、生細胞数4.73×106個、生存率:99.4%
上記した培養とは別に、試験例1と同様にして、早期継代の細胞を凍結して細胞ストックを作製した。
試験例1および試験例2で調製した幼若ブタ由来単核球細胞(npMNC)の細胞表面抗原を解析した。解析に用いた各サンプルの調製方法について、表5に示す。表5において、「Switch」とは、初期培養時はMSC基礎培地(ビタミンCフリー)を用い、増殖培養時には増殖培地であるMSC培地(ビタミンC含有)に変更して培養したことを示す。
各細胞サンプルを液体窒素タンクより取出して蓋を緩めて圧を抜き、再びふたを閉め、37℃に予め加温しておいた恒温槽で1〜2分間軽く撹拌しながら融解した。Stain Buffer(BD社製)5mLを入れた15mL遠沈管に融解させた各細胞を移し、4℃にて500×g、5分間遠心し、上清を取り除いた。5mLのStain Bufferを入れ、4℃にて500×g、5分間遠心し、2回洗浄した。
〔幼若ブタ膵島由来間葉系幹細胞の調製〕
幼若ブタから膵島を回収し、浮遊培養することにより細胞塊を調製した後、試験例1と同様にして、冷凍保存した。37℃の水浴でクライオバイアルに冷凍保存していた幼若ブタ膵島を素早く解凍した。
幼若ブタ膵島由来間葉系幹細胞(npISLET−MSC)が約80%〜ほぼ95%コンフルエンスに達した後、2ウェルから細胞を回収し、ゼラチンコートなしでT75フラスコにそれらを再播種した。
20mLの前記MSC培地をゼラチンコート無しのT75フラスコに加えて再播種し、CO2インキュベーター中で、37℃にて5%CO2、90%湿度の条件下で培養した。これらの細胞を第1継代とした。第1継代を播種した3日後に、初期凍結の有無にかかわらず、100%コンフルエントに達した。このことから、幼若ブタの膵島から調製した間葉系幹細胞の増殖速度は、幼若ブタの骨髄から調製した間葉系幹細胞の増殖速度と同程度であることがわかった。得られた幼若ブタ膵島由来間葉系幹細胞の平均直径を表7に示す。
各細胞サンプルを液体窒素タンクより取出して蓋を緩めて圧を抜き、再びふたを閉め、37℃に予め加温しておいた恒温槽で1〜2分間軽く撹拌しながら融解した。Stain Buffer(BD社製)5mLを入れた15mL遠沈管に融解させた各細胞を移し、4℃にて500×g、5分間遠心し、上清を取り除いた。5mLのStain Bufferを入れ、4℃にて500×g、5分間遠心し、2回洗浄した。
Claims (15)
- 幼若ブタより単離された、幹細胞。
- 平均直径が17μm以下である請求項1に記載の幹細胞。
- 対数増殖期における倍加時間が36時間以下である請求項1または2に記載の幹細胞。
- 間葉系幹細胞である請求項1〜3のいずれか1項に記載の幹細胞。
- 幼若ブタがヒトへ細胞移植することができる幼若ブタである請求項1〜4のいずれか1項に記載の幹細胞。
- 幼若ブタの骨髄または膵島より単離された請求項1〜5のいずれか1項に記載の幹細胞。
- 移植用幹細胞である請求項1〜6のいずれか1項に記載の幹細胞。
- ヒト移植用幹細胞である請求項7に記載の幹細胞。
- フィーダー細胞用幹細胞である請求項1〜6のいずれか1項に記載の幹細胞。
- ヒト移植用幹細胞を増殖するためのフィーダー細胞用幹細胞である請求項9に記載の幹細胞。
- 幼若ブタから細胞を単離する工程を含む、幹細胞の調製方法。
- 幹細胞を播種後3〜12日後に継代する工程を含む、請求項11に記載の幹細胞の調製方法。
- 幼若ブタから単離する細胞が単核球細胞画分の細胞である請求項11または12に記載の幹細胞の調製方法。
- 幼若ブタからの細胞の単離が、幼若ブタの骨髄または膵島からの細胞の単離である請求項11〜13のいずれか1項に記載の幹細胞の調製方法。
- 単離した単核球細胞画分の細胞を凍結する工程を含む、請求項13または14に記載の幹細胞の調製方法。
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Citations (6)
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---|---|---|---|---|
JP2006230316A (ja) * | 2005-02-25 | 2006-09-07 | Japan Health Science Foundation | 瘢痕のない創傷治癒能を有する細胞およびその調製方法 |
JP2006522597A (ja) * | 2003-04-14 | 2006-10-05 | アヴェンティス ファーマ エス.エー. | ブタ組織から肥満細胞系統を得る方法およびヘパリンタイプの分子を製造する方法 |
WO2007091409A1 (ja) * | 2006-02-08 | 2007-08-16 | Keio University | 組織幹細胞由来フィーダー細胞 |
JP2016537414A (ja) * | 2013-10-29 | 2016-12-01 | ベスティオン、インク. | 心臓神経堤細胞、及びその使用方法 |
WO2017040548A1 (en) * | 2015-08-31 | 2017-03-09 | I Peace, Inc. | Pluripotent stem cell manufacturing system and method for producing induced pluripotent stem cells |
WO2017061392A1 (ja) * | 2015-10-05 | 2017-04-13 | メビオール株式会社 | 細胞の保存方法 |
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---|---|---|---|---|
WO2002008389A2 (en) * | 2000-07-26 | 2002-01-31 | Scimed Life Systems, Inc. | Therapeutic angiogenesis by bone marrow-derived cell transplantation in myocardial ischemic tissue and skeletal muscle ischemic tissue |
US20090004661A1 (en) * | 2003-05-26 | 2009-01-01 | Reliance Life Sciences Pvt Ltd. | Method of growing mesenchymal stem cells from bone marrow |
WO2008071074A1 (fr) * | 2006-12-13 | 2008-06-19 | Songling Wang | Utilisation de cellules souches mésenchymateuses, et procédé pour isoler des cellules couches dans des tissus humains et les conserver |
US9301975B2 (en) * | 2009-05-01 | 2016-04-05 | Biocardia, Inc. | Method of preparing autologous cells and method of use for therapy |
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JP2006522597A (ja) * | 2003-04-14 | 2006-10-05 | アヴェンティス ファーマ エス.エー. | ブタ組織から肥満細胞系統を得る方法およびヘパリンタイプの分子を製造する方法 |
JP2006230316A (ja) * | 2005-02-25 | 2006-09-07 | Japan Health Science Foundation | 瘢痕のない創傷治癒能を有する細胞およびその調製方法 |
WO2007091409A1 (ja) * | 2006-02-08 | 2007-08-16 | Keio University | 組織幹細胞由来フィーダー細胞 |
JP2016537414A (ja) * | 2013-10-29 | 2016-12-01 | ベスティオン、インク. | 心臓神経堤細胞、及びその使用方法 |
WO2017040548A1 (en) * | 2015-08-31 | 2017-03-09 | I Peace, Inc. | Pluripotent stem cell manufacturing system and method for producing induced pluripotent stem cells |
WO2017061392A1 (ja) * | 2015-10-05 | 2017-04-13 | メビオール株式会社 | 細胞の保存方法 |
Non-Patent Citations (4)
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---|
BOSCH P. ET AL.: "Isolation, Characterization, Gene Modification, and Nuclear Reprogramming of Porcine Mesenchymal Ste", BIOLOGY OF REPRODUCTION, vol. 74(2006), JPN6018046164, pages 46 - 57, ISSN: 0004995092 * |
CAO H. ET AL.: "Characterizaton of immortalized mesenchymal stem cells derived from foetal porcine pancreas.", CELL PROLIF., vol. 44, JPN6018046159, 2011, pages 19 - 32, XP055582268, ISSN: 0005080497, DOI: 10.1111/j.1365-2184.2010.00714.x * |
CHU Y. ET AL.: "Construction of porcine insulin promoter reporter system and its application in detecting the induce", HEILONGJIANG ANIMAL SCIENCE AND VETERINARY MEDICINE, JPN6018046161, 2015, pages 1 - 4, ISSN: 0005080498 * |
LIU L. ET AL.: "Porcine fetal bone marrow mesenchymal stem cells in cartilage tissue engineering.", ZUZHI GONGCHENG YU CHONGJIAN WAIKE ZAZHI, vol. 9(4), JPN6018046157, 2013, pages 181 - 185, ISSN: 0005080496 * |
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