JPWO2018021543A1 - 幹細胞の製造に用いられるフィブロネクチンフラグメント - Google Patents
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Abstract
Description
[1] 幹細胞を、
(a)ヒトフィブロネクチンのIII−1〜7から成る群より選択されるリピートを含む組換えポリペプチド、もしくは前記のIII−1〜7から成る群より選択されるリピートのアミノ酸配列において1もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入もしくは付加されたアミノ酸配列を含む組換えポリペプチド、
(b)ヒトフィブロネクチンのIII−8〜10リピートを含む組換えポリペプチド、もしくは前記のIII−8〜10リピートのアミノ酸配列において1もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入もしくは付加されたアミノ酸配列を含む組換えポリペプチド、及び
(c)ヒトフィブロネクチンのIII−12〜14リピートを含む組換えポリペプチド、もしくは前記のIII−12〜14リピートのアミノ酸配列において1もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入もしくは付加されたアミノ酸配列を含む組換えポリペプチド、
の存在下で培養する工程を包含する、幹細胞の製造方法、
[2] 幹細胞を、(a)、(b)及び(c)の組換えポリペプチドを同一分子内に含む組換えポリペプチドの存在下で培養する工程を包含する、[1]に記載の製造方法、
[3] (a)の組換えポリペプチドが、ヒトフィブロネクチンのIII−1〜3リピート又はIII−4〜6リピートを含む組換えポリペプチド、もしくは前記のIII−1〜3リピート又はIII−4〜6リピートのアミノ酸配列において1もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入もしくは付加されたアミノ酸配列を含む組換えポリペプチドである、[1]又は[2]に記載の製造方法、
[4] 組換えポリペプチドが、配列番号19又は20に記載のアミノ酸配列を含む組換えポリペプチドであるか、あるいは配列番号19又は20に記載のアミノ酸配列において1もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入もしくは付加されたアミノ酸配列を含む組換えポリペプチドである、[3]に記載の製造方法、
[5] 組換えポリペプチドの存在下で幹細胞を培養する工程が、組換えポリペプチドがコートされた固相と幹細胞とが接触した状態で実施される、[1]〜[4]のいずれかに記載の製造方法、
[6] 固相が、細胞培養用器材又は細胞培養用担体である、[5]に記載の製造方法、
[7] 固相が、ディッシュ、プレート、フラスコ、バッグ、ビーズ、メンブレン又はスライドガラスである、[5]に記載の製造方法、
[8] 幹細胞が、ヒト由来の多能性幹細胞又は神経幹細胞である、[1]〜[7]のいずれかに記載の製造方法、
[9] 幹細胞が、人工多能性幹細胞である、[8]に記載の製造方法、
[10] (a)ヒトフィブロネクチンのIII−1〜7から成る群より選択されるリピートを含む組換えポリペプチド、もしくは前記のIII−1〜7から成る群より選択されるリピートのアミノ酸配列において1もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入もしくは付加されたアミノ酸配列を含む組換えポリペプチド、
(b)ヒトフィブロネクチンのIII−8〜10リピートを含む組換えポリペプチド、もしくは前記のIII−8〜10リピートのアミノ酸配列において1もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入もしくは付加されたアミノ酸配列を含む組換えポリペプチド、及び
(c)ヒトフィブロネクチンのIII−12〜14リピートを含む組換えポリペプチド、もしくは前記のIII−12〜14リピートのアミノ酸配列において1もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入もしくは付加されたアミノ酸配列を含む組換えポリペプチド、
を同一分子内に含む組換えポリペプチド、
[11] (a)の組換えポリペプチドが、ヒトフィブロネクチンのIII−1〜3リピート又はIII−4〜6リピートを含む組換えポリペプチド、もしくは前記のIII−1〜3リピート又はIII−4〜6リピートのアミノ酸配列において1もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入もしくは付加されたアミノ酸配列を含む組換えポリペプチドである、[10]に記載のポリペプチド、
[12] 配列番号19又は20に記載のアミノ酸配列を含む組換えポリペプチドであるか、あるいは配列番号19又は20に記載のアミノ酸配列において1もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入もしくは付加されたアミノ酸配列を含む組換えポリペプチドでる、[10]に記載の組換えポリペプチド、
[13] [10]〜[12]のいずれかに記載の組換えポリペプチドがコートされた固相、
[14] 組換えポリペプチドがコートされた細胞培養用器材又は細胞培養用担体である、[13]に記載の固相、
[15] 組換えポリペプチドがコートされたディッシュ、プレート、フラスコ、バッグ、ビーズ、メンブレン又はスライドガラスである、[13]に記載の固相、
に関する。
<フィブロネクチン>
ヒト由来や哺乳動物由来のフィブロネクチンがよく研究されており、以下は、主にヒト由来血漿フィブロネクチンについての知見である。
本発明の幹細胞の製造方法は、幹細胞を組換えフィブロネクチンフラグメントであるポリペプチドの存在下で培養する工程を包含することを特徴とする。
(2)多能性幹細胞(pluripotent stem cell):個体は形成しないが、三胚葉(内胚葉、中胚葉、外胚葉)に属する細胞系列すべてへ分化し得る幹細胞を指す。特に限定されないが、例えば、胚盤胞期の内部細胞隗や、そこから樹立された胚性幹細胞(ES細胞)、人工多能性幹細胞(iPS細胞)、胚性腫瘍細胞(EC細胞)、胚性生殖幹細胞(EG細胞)、核移植ES細胞(ntES細胞)などが挙げられる。多能性幹細胞は万能細胞と呼称されることがある。
(3)多分化能幹細胞(multipotent stem cell):分化可能な細胞系列が限定されているが、多様な細胞種へ分化可能な幹細胞を指す。特に限定されないが、例えば、造血幹細胞、間葉系幹細胞、肝幹細胞、膵幹細胞、皮膚幹細胞などが挙げられる。一般的に胚葉を超えた分化は行えないが、例外もある。
(4)オリゴポテント幹細胞(oligopotent stem cell):数種の細胞種にのみ分化可能な幹細胞を指す。特に限定されないが、例えば、神経幹細胞などが挙げられる。
(5)単分化能幹細胞(unipotent stem cell):分化可能な細胞種が一種類に限定されている幹細胞を指す。幹細胞として分裂増殖するか、分化して幹細胞以外の別の細胞種に変化することができる。特に限定されないが、例えば、筋幹細胞、生殖幹細胞(卵祖細胞、精原細胞)などが挙げられる。単分化能幹細胞は前駆細胞と呼ばれることもある。
本発明は、幹細胞の製造に有用な、新規な組換えポリペプチドを提供する。当該ポリペプチドは、「1.本発明の幹細胞の製造方法」に記載する(a)〜(c)のポリペプチドを同一分子内に含む組換えポリペプチドであり、当該方法に有用である。本発明のポリペプチドは、幹細胞を増殖させる機能、幹細胞の未分化状態を維持する機能、及び/又は幹細胞を誘導する機能を有する。本発明のポリペプチドは、全長フィブロネクチンと同等な機能又は既存のフィブロネクチンフラグメントより高い機能を有する。
(a)ヒトフィブロネクチンのIII−1〜7から成る群より選択されるリピートを含む組換えポリペプチド、もしくは前記のIII−1〜7から成る群より選択されるリピートのアミノ酸配列において1もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入もしくは付加されたアミノ酸配列を含む組換えポリペプチド、
(b)ヒトフィブロネクチンのIII−8〜10リピートを含む組換えポリペプチド、もしくは前記のIII−8〜10リピートのアミノ酸配列において1もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入もしくは付加されたアミノ酸配列を含む組換えポリペプチド、及び
(c)ヒトフィブロネクチンのIII−12〜14リピートを含む組換えポリペプチド、もしくは前記のIII−12〜14リピートのアミノ酸配列において1もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入もしくは付加されたアミノ酸配列を含む組換えポリペプチド。
本発明は、本発明のポリペプチドがコートされた固相を提供する。当該固相は、「1.本発明の幹細胞の製造方法」に記載される固相であり、当該方法に有用である。
N末にメチオニン残基及び6個のヒスチジン残基から成るHis−tagを有するFCH−296ポリペプチド(配列番号21)を、以下の操作により調製した。
N末にメチオニン残基及び6個のヒスチジン残基から成るHis−tagを有するDCH−296ポリペプチド(配列番号22)を、以下の操作により調製した。
全長フィブロネクチン(ヒト血漿由来;SIGMA社製、F0895、終濃度50μg/ml)、120k−fr(Millipore社製、F1904、終濃度40μg/ml)、CH−271(J. Biochem., Vol. 110, p284−291 (1991)、終濃度25μg/ml)及びCH−296(レトロネクチン:タカラバイオ社製、終濃度20μg/ml)をそれぞれD−PBS(Promocell社製、C−40232)に溶解し、コーティング溶液を調製した。12 well Tissue culture treated plate(Corning社製、3513)にコーティング溶液を0.4mL/wellで加えた後、プレートに蓋をし、4℃で一晩放置した。翌日、コーティング溶液を除去したプレートを1mL/wellのD−PBSで2回洗浄し、各ポリペプチドでコートされたプレートを得た。2種のフィブロネクチンフラグメントでコーティングを行う場合には、1回目のコーティングを終えたプレートに第2のコーティング溶液を0.4mL/wellで加え、1回目のコーティングと同様に4℃での一晩放置と洗浄を行った。調製したプレートに蓋をし、使用時まで4℃で保存した。
全長フィブロネクチン、120k−fr、CH−271、CH−296、FCH−296又はDCH−296をそれぞれD−PBSに溶解し、コーティング溶液を調製した。また、CH−296については高濃度のコーティング溶液、FCH−296とDCH−296については低濃度のコーティング溶液も調製した。これらのコーティング溶液を使用し、実施例3と同様の操作で12 well Tissue culture treated plateのコーティングを実施した。
全長フィブロネクチン又はFCH−296をそれぞれD−PBSに溶解し、各濃度のコーティング溶液を調製した。これらのコーティング溶液を使用し、実施例3と同様の操作で24 well Tissue culture treated plate(Corning社製)のコーティングを実施した。
動物やヒト由来の成分を含まない培地、すなわちゼノフリー培地中でも、FCH−296でコートされたプレート上でヒトiPS細胞を長期培養できるかどうかを調べた。
TeSR−E8培地は、ヒトiPS/ES細胞の維持に必要な最低限の8要素だけを含むゼノフリー培地である。TeSR−E8培地中でも、FCH−296でコートされたプレート上でヒトiPS細胞を長期培養できるかどうかを調べた。
FCH−296でコートされたプレート上でヒト神経幹細胞を長期培養できるかどうかを調べた。
全長フィブロネクチン又はFCH−296をそれぞれD−PBSに溶解し、各濃度のコーティング溶液を調製した。これらのコーティング溶液を使用し、実施例3と同様の操作で96 well Half area Tissue culture treated plate(Corning社製)のコーティングを実施した。
III−1、III−2、III−3のうち、どのリピートが重要であるかを調べるために、図6に示すような、3種のポリペプチド(F1CH−296、F2CH−296、及びF3CH−296)を調製した。すなわち、実施例1と同様の操作で、N末にメチオニン残基及び6個のヒスチジン残基から成るHis−tagを有する、F1CH−296(配列番号26)、F2CH−296(配列番号27)、及びF3CH−296(配列番号28)を調製した。
様々なN末配列をもつFCH−296を調製した。すなわち、N末9アミノ酸欠損のFCH−296(配列番号29)、N末6アミノ酸欠損のFCH−296(配列番号30)、N末5アミノ酸欠損のFCH−296(配列番号31)、N末3アミノ酸欠損のFCH−296(配列番号32)、FCH−296(配列番号19)、N末3アミノ酸挿入のFCH−296(配列番号33)、N末6アミノ酸挿入のFCH−296(配列番号34)、N末9アミノ酸挿入のFCH−296(配列番号35)、N末11アミノ酸挿入のFCH−296(配列番号36)、N末12アミノ酸挿入のFCH−296(配列番号37)、N末14アミノ酸挿入のFCH−296(配列番号38)、N末15アミノ酸挿入のFCH−296(配列番号39)、N末HKRHEEGH挿入のFCH−296(配列番号40)、N末HKRH挿入のFCH−296(配列番号41)、N末HH挿入のFCH−296(配列番号42)、及びN末HHH挿入のFCH−296(配列番号43)を調製した。
SEQ ID NO:2 ; Partial region of fibronectin named III-2
SEQ ID NO:3 ; Partial region of fibronectin named III-3
SEQ ID NO:4 ; Partial region of fibronectin named III-4
SEQ ID NO:5 ; Partial region of fibronectin named III-5
SEQ ID NO:6 ; Partial region of fibronectin named III-6
SEQ ID NO:7 ; Partial region of fibronectin named III-7
SEQ ID NO:8 ; Partial region of fibronectin named III-8
SEQ ID NO:9 ; Partial region of fibronectin named III-9
SEQ ID NO:10 ; Partial region of fibronectin named III-10
SEQ ID NO:11 ; Partial region of fibronectin named III-11
SEQ ID NO:12 ; Partial region of fibronectin named III-12
SEQ ID NO:13 ; Partial region of fibronectin named III-13
SEQ ID NO:14 ; Partial region of fibronectin named III-14
SEQ ID NO:15 ; Partial region of fibronectin named CS-1
SEQ ID NO:16 ; Fibronectin fragment named 120k-fr
SEQ ID NO:17 ; Fibronectin fragment named CH-271
SEQ ID NO:18 ; Fibronectin fragment named CH-296 (RetroNectin)
SEQ ID NO:19 ; Fibronectin fragment named FCH-296
SEQ ID NO:20 ; Fibronectin fragment named DCH-296
SEQ ID NO:21 ; His-tag FCH-296
SEQ ID NO:22 ; His-tag DCH-296
SEQ ID NO:23 ; N-terminal 9a.a. deletion of III-1
SEQ ID NO:24 ; N-terminal 5a.a. deletion of III-1
SEQ ID NO:25 ; N-terminal 3a.a. deletion of III-1
SEQ ID NO:26 ; His-tag F1CH-296
SEQ ID NO:27 ; His-tag F2CH-296
SEQ ID NO:28 ; His-tag F3CH-296
SEQ ID NO:29 ; N-terminal 9a.a. deletion of FCH-296
SEQ ID NO:30 ; N-terminal 6a.a. deletion of FCH-296
SEQ ID NO:31 ; N-terminal 5a.a. deletion of FCH-296
SEQ ID NO:32 ; N-terminal 3a.a. deletion of FCH-296
SEQ ID NO:33 ; N-terminal 3a.a. insertion of FCH-296
SEQ ID NO:34 ; N-terminal 6a.a. insertion of FCH-296
SEQ ID NO:35 ; N-terminal 9a.a. insertion of FCH-296
SEQ ID NO:36 ; N-terminal 11a.a. insertion of FCH-296
SEQ ID NO:37 ; N-terminal 12a.a. insertion of FCH-296
SEQ ID NO:38 ; N-terminal 14a.a. insertion of FCH-296
SEQ ID NO:39 ; N-terminal 15a.a. insertion of FCH-296
SEQ ID NO:40 ; N-terminal HKRHEEGH insertion of FCH-296
SEQ ID NO:41 ; N-terminal HKRH insertion of FCH-296
SEQ ID NO:42 ; N-terminal HH insertion of FCH-296
SEQ ID NO:43 ; N-terminal HHH insertion of FCH-296
Claims (15)
- 幹細胞を、
(a)ヒトフィブロネクチンのIII−1〜7から成る群より選択されるリピートを含む組換えポリペプチド、もしくは前記のIII−1〜7から成る群より選択されるリピートのアミノ酸配列において1もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入もしくは付加されたアミノ酸配列を含む組換えポリペプチド、
(b)ヒトフィブロネクチンのIII−8〜10リピートを含む組換えポリペプチド、もしくは前記のIII−8〜10リピートのアミノ酸配列において1もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入もしくは付加されたアミノ酸配列を含む組換えポリペプチド、及び
(c)ヒトフィブロネクチンのIII−12〜14リピートを含む組換えポリペプチド、もしくは前記のIII−12〜14リピートのアミノ酸配列において1もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入もしくは付加されたアミノ酸配列を含む組換えポリペプチド、
の存在下で培養する工程を包含する、幹細胞の製造方法。 - 幹細胞を、(a)、(b)及び(c)の組換えポリペプチドを同一分子内に含む組換えポリペプチドの存在下で培養する工程を包含する、請求項1に記載の製造方法。
- (a)の組換えポリペプチドが、ヒトフィブロネクチンのIII−1〜3リピート又はIII−4〜6リピートを含む組換えポリペプチド、もしくは前記のIII−1〜3リピート又はIII−4〜6リピートのアミノ酸配列において1もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入もしくは付加されたアミノ酸配列を含む組換えポリペプチドである、請求項1または2に記載の製造方法。
- 組換えポリペプチドが、配列番号19又は20に記載のアミノ酸配列を含む組換えポリペプチドであるか、あるいは配列番号19又は20に記載のアミノ酸配列において1もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入もしくは付加されたアミノ酸配列を含む組換えポリペプチドである、請求項3に記載の製造方法。
- 組換えポリペプチドの存在下で幹細胞を培養する工程が、組換えポリペプチドがコートされた固相と幹細胞とが接触した状態で実施される、請求項1〜4のいずれか1項に記載の製造方法。
- 固相が、細胞培養用器材又は細胞培養用担体である、請求項5に記載の製造方法。
- 固相が、ディッシュ、プレート、フラスコ、バッグ、ビーズ、メンブレン又はスライドガラスである、請求項5に記載の製造方法。
- 幹細胞が、ヒト由来の多能性幹細胞又は神経幹細胞である、請求項1〜7のいずれか1項に記載の製造方法。
- 多能性幹細胞が、人工多能性幹細胞である、請求項8に記載の製造方法。
- (a)ヒトフィブロネクチンのIII−1〜7から成る群より選択されるリピートを含む組換えポリペプチド、もしくは前記のIII−1〜7から成る群より選択されるリピートのアミノ酸配列において1もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入もしくは付加されたアミノ酸配列を含む組換えポリペプチド、
(b)ヒトフィブロネクチンのIII−8〜10リピートを含む組換えポリペプチド、もしくは前記のIII−8〜10リピートのアミノ酸配列において1もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入もしくは付加されたアミノ酸配列を含む組換えポリペプチド、及び
(c)ヒトフィブロネクチンのIII−12〜14リピートを含む組換えポリペプチド、もしくは前記のIII−12〜14リピートのアミノ酸配列において1もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入もしくは付加されたアミノ酸配列を含む組換えポリペプチド、
を同一分子内に含む組換えポリペプチド。 - (a)の組換えポリペプチドが、ヒトフィブロネクチンのIII−1〜3リピート又はIII−4〜6リピートを含む組換えポリペプチド、もしくは前記のIII−1〜3リピート又はIII−4〜6リピートのアミノ酸配列において1もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入もしくは付加されたアミノ酸配列を含む組換えポリペプチドである、請求項10に記載のポリペプチド。
- 配列番号19又は20に記載のアミノ酸配列を含む組換えポリペプチドであるか、あるいは配列番号19又は20に記載のアミノ酸配列において1もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入もしくは付加されたアミノ酸配列を含む組換えポリペプチドである、請求項10に記載の組換えポリペプチド。
- 請求項10〜12のいずれか1項に記載の組換えポリペプチドがコートされた固相。
- 組換えポリペプチドがコートされた細胞培養用器材又は細胞培養用担体である、請求項13に記載の固相。
- 組換えポリペプチドがコートされたディッシュ、プレート、フラスコ、バッグ、ビーズ、メンブレン又はスライドガラスである、請求項13に記載の固相。
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Citations (1)
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---|---|---|---|---|
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