JPWO2017104723A1 - 止血用組成物、および、止血用組成物を用いた止血方法 - Google Patents
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Abstract
Description
(a)極性アミノ酸残基と非極性アミノ酸残基が交互に配置された、4〜34個のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を含むペプチド、または、
(b)7位の非極性アミノ酸残基を中心として、N末端方向およびC末端方向に、非極性アミノ酸と極性アミノ酸とが交互に、且つ、対称の位置に配置される、13個のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を含むペプチド、であることを特徴とする。
ブタ肝臓を金やすりにて擦過することにより滲出性出血を作成した。その出血に対して自己組織化ペプチド溶液を通常適用又はスプレー適用し止血効果及び適用量について評価した。
Non−GLP試験として実施した。
この試験は、「動物の愛護及び管理に関する法律(昭和48年法律第105号)」、「実験動物の飼養及び保管並びに苦痛の軽減に関する基準(平成18年環境省告示第88号)」、農林水産省及び厚生労働省の「動物実験等の実施に関する基本指針」、及び「動物実験の適正な実施に向けたガイドライン(2006年6月1日 日本学術会議)」に基づき、動物実験を科学的観点及び倫理的な配慮の下に実施すべき事項を定めた株式会社NAS研究所における「動物実験に関する実施規則」に従い、動物実験委員会の承認を得て実施した。
動物種:ブタ
品種: LWD
性別:♀
導入頭数: 2頭
導入時日齢:不問
導入時体重: 50kg
導入先:株式会社NAS研究所成田試験場
動物購入元:石毛畜産
馴化期間:導入後7日間程度実施した。
検疫:導入時及び馴化期間中の臨床観察により検疫し、異常のないことを確認した。
個体識別:耳標
(1)飼育環境
供試動物は、温湿度設定がされた飼育室のステンレス製ケージ(W:690×D:960×H:740mm)で1頭ずつ単飼する。温度は25±3℃、湿度は60±10%に設定した空調機で制御した。照明は、明暗期を各12時間(明期:7:00〜19:00)とした。また、ケージ、給餌器の洗浄及び飼育室の清掃・消毒は毎日実施した。
飼料は、「ブリード74」(JA東日本くみあい飼料(株))を使用し、1回250gを午前、午後の1日2回与えた。ただし、実験日当日は、麻酔時の嘔吐による誤嚥等を避けるため、給餌を行わなかった。
給水は自動給水装置により、井水を自由摂取させた。なお、飲料水中の物質濃度及び細菌数を一年に一度分析し、分析値が水道法の水質基準に適合していることを確認した。
動物の個体識別は、耳標番号を用いて行った。飼育室入り口には試験番号及び試験期間を標識し、ケージには試験番号、試験群、動物番号を表示した。
アトロピン硫酸塩0.05mg/kg(投与容量:0.1mL/kg)を筋肉内投与した。約30分後に塩酸ケタミン20mg/kg(投与容量:0.4mL/kg)と塩酸キシラジン4mg/kg(投与容量:0.2mL/kg)を混合して、筋肉内に投与した。各々18G注射針(テルモ株式会社)を取り付けたディスポーザブル注射筒(テルモ株式会社)を用いて、耳根部筋肉内に投与し麻酔導入した。その後、気管チューブ(トップ気管内チューブ 株式会社トップ)を挿管して、吸入麻酔器 SUBARU−KJ02(株式会社ミカサ関東商会)及び人工呼吸器(コンポースβ−EV 株式会社メトラン)を用い、イソフルランで維持麻酔を行った。術中のイソフルラン濃度は1〜3%、酸素量は2L/分とした。人工呼吸器の肺内圧は15cmH2O、呼吸回数は15回/分に設定した。手術台に仰臥位で保定し、滅菌ドレープで覆った。
心電図、パルスオキシメータ―、体温計を設置し術中モニタリングを実施した。血圧測定は血圧測定用カフを設置し非観血的に血圧を測定した。血圧は平均血圧60mmHg以上で維持した。
本実験に使用したペプチド溶液(被験物質)とその貯蔵弾性率を以下の表に示した。
Peptide No.2:IEIKIEIKIEIKI (配列番号2)
Peptide No.3:RLDLRLALRLDLR (配列番号3)
1.麻酔が完了したブタをメス及び電気メスを用いて腹部正中切開にて開腹し肝臓を露出させた。
2.肝臓を金やすりにて擦過し滲出性の出血を作成した。
3.被験物質を通常適用(※1)又はスプレー適用(※2)にて出血斜面に適用した。
4.適用終了後から止血完了判定終了までの時間をストップウォッチにて測定した(※3)。各被験物質について、試験終了までの使用量を記録した。
※2:ペプチド溶液(被験物質)が充填されたシリンジ(図1と同等のもの)をスプレーガンにセットし、コンプレッサーを用いて、シリンジ先端のノズルへ圧縮空気を吹き付けることにより、ノズルから押し出されるペプチド溶液を対象へ噴霧した。噴霧圧は各被験物質の粘性や出血状況、適用部位までの距離にもよるが概ね0.5〜1.5[kgf/cm2]であった。
※3:初回塗布後に出血が弱まらなかった場合(このまま放置しても止血されないと判断した場合)に適宜追加塗布を行った。初回塗布完了時を測定開始とし、止血判定完了時を測定終了とした。
上記の試験において、ペプチド溶液を肝臓の出血部位に適用した様子を、図2〜図5に示した。図に見られるように、通常投与では、ペプチド溶液が出血部位上に不均一に広がっているのに対し、スプレー適用では、ペプチド溶液が出血部位上により均一に広がっている。
Claims (15)
- スプレー剤として対象に適用される組成物であって、
前記スプレー剤は、止血用であり、
前記組成物は、自己集合性ペプチドを含み、
前記自己集合性ペプチドは、前記組成物が前記対象の出血部位に適用された際に、自己集合することによりゲル化するものであり、
前記自己集合性ペプチドは、直接塗布される場合と比べ向上した止血能を有する濃度において、前記組成物に含まれる、
ことを特徴とする、
組成物。 - 請求項1に記載の組成物であって、
前記組成物中の前記自己集合性ペプチドの濃度が、少なくとも1.5重量%以上であることを特徴とする、
組成物。 - 請求項1または2に記載の組成物であって、
前記自己集合性ペプチドは、
(a)極性アミノ酸残基と非極性アミノ酸残基が交互に配置された、4〜34個のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を含むペプチド、または、
(b)7位の非極性アミノ酸残基を中心として、N末端方向およびC末端方向に、非極性アミノ酸と極性アミノ酸とが交互に、且つ、対称の位置に配置される、13個のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列を含むペプチド、であることを特徴とする、
組成物。 - 請求項3に記載の組成物であって、
前記極性アミノ酸残基が、アスパラギン酸残基、グルタミン酸残基、アルギニン残基、リジン残基、ヒスチジン残基、チロシン残基、セリン残基、トレオニン残基、アスパラギン残基、グルタミン残基、および、システイン残基からなる群から選択されるアミノ酸残基であることを特徴とする、
組成物。 - 請求項3に記載の組成物であって、
前記非極性アミノ酸残基が、アラニン残基、バリン残基、ロイシン残基、イソロイシン残基、メチオニン残基、フェニルアラニン残基、トリプトファン残基、プロリン残基、および、グリシン残基からなる群から選択されるアミノ酸残基であることを特徴とする、
組成物。 - 請求項3に記載の組成物であって、
前記極性アミノ酸残基が、アスパラギン酸残基、グルタミン酸残基、アルギニン残基、リジン残基、ヒスチジン残基、チロシン残基、セリン残基、トレオニン残基、アスパラギン残基、グルタミン残基、および、システイン残基からなる群から選択されるアミノ酸残基であり、かつ、
前記非極性アミノ酸残基が、アラニン残基、バリン残基、ロイシン残基、イソロイシン残基、メチオニン残基、フェニルアラニン残基、トリプトファン残基、プロリン残基、および、グリシン残基からなる群から選択されるアミノ酸残基であることを特徴とする、
組成物。 - 請求項6に記載の組成物であって、
前記自己集合性ペプチドが、RADARADARADARADA(配列番号1)を含むペプチド、IEIKIEIKIEIKI(配列番号2)を含むペプチド、または、RLDLRLALRLDLR(配列番号3)を含むペプチドであることを特徴とする、
組成物。 - 請求項7に記載の組成物であって、
前記自己集合性ペプチドが、RADARADARADARADA(配列番号1)からなるペプチド、IEIKIEIKIEIKI(配列番号2)からなるペプチド、または、RLDLRLALRLDLR(配列番号3)からなるペプチドであることを特徴とする、
組成物。 - 請求項1〜8のいずれか1項に記載の組成物であって、
前記対象の出血部位が、非外科的に形成された創傷部位、または、外科的に形成された切開部位または切除部位であることを特徴とする、
組成物。 - 止血用スプレー剤の製造のための、請求項1〜9のいずれか1項に記載の組成物の使用。
- 請求項1〜9のいずれか1項に記載の組成物を含むスプレー剤。
- 対象における止血方法であって、
対象の出血部位に、自己集合性ペプチドを含む組成物を噴霧することにより適用する工程を含み、
前記自己集合性ペプチドは、前記組成物が前記対象の出血部位に適用された際に、自己集合することによりゲル化するものであり、
前記自己集合性ペプチドは、直接塗布される場合と比べ向上した止血能を有する濃度において、前記組成物に含まれる、
ことを特徴とする、
方法。 - 請求項12に記載の組成物であって、
前記組成物中の前記自己集合性ペプチドの濃度が、少なくとも1.5重量%以上であることを特徴とする、
方法。 - 請求項12または13に記載の方法であって、
前記対象の出血部位が、非外科的に形成された創傷部位、または、外科的に形成された切開部位または切除部位であることを特徴とする
方法。 - 請求項12〜14のいずれか1項に記載の方法であって、
前記対象がヒト以外の動物であることを特徴とする、
方法。
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