JPWO2016204271A1 - 免疫機能発達促進剤及び成長促進剤 - Google Patents
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Abstract
Description
[1]CCL25を含有する免疫機能発達促進剤。
[2]乳児用である[1]の免疫機能発達促進剤。
[3]経口摂取用である[1]又は[2]の免疫機能発達促進剤。
[4]CCL25を含有する成長促進剤。
[5]乳児用である[4]の成長促進剤。
[6]経口摂取用である[4]又は[5]の成長促進剤。
さらに、本発明は、以下の[7]〜[24]も提供する。
[7]免疫機能発達促進剤の製造のためのCCL25の使用。
[8]免疫機能発達促進剤が乳児用である[7]の使用。
[9]免疫機能発達促進剤が経口摂取用である[7]又は[8]の使用。
[10]成長促進剤の製造のためのCCL25の使用。
[11]成長促進剤が乳児用である[10]の使用。
[12]成長促進剤が経口摂取用である[10]又は[11]の使用。
[13]対象の免疫機能発達促進に使用するためのCCL25。
[14]対象が乳児である[13]のCCL25。
[15]対象がCCL25を経口摂取する[13]又は[14]のCCL25。
[16]対象の成長促進に使用するためのCCL25。
[17]対象が乳児である[16]のCCL25。
[18]対象がCCL25を経口摂取する[16]又は[17]のCCL25。
[19]必要とする対象にCCL25を投与する、対象の免疫機能発達を促進する方法。
[20]対象が乳児である[19]の方法。
[21]CCL25を経口投与する[19]又は[20]の方法。
[22]必要とする対象にCCL25を投与する、対象の成長を促進する方法。
[23]対象が乳児である[22]の方法。
[24]CCL25を経口投与する[22]又は[23]の方法。
交尾が確認できた日を妊娠0日目とし、出産する前日(妊娠19日目)にメスを1匹に隔離した。そして、出産した日を0日目とし、生後0日目(親を帝王切開)、生後1日目、生後2日目、生後5日目、生後10日目、生後21日目(離乳後)の6群を作成し、各時期の新生仔から腸管(小腸及び大腸)を摘出した。
マウス新生仔を、毒物の使用基準に従ってジエチルエーテル過剰吸入によって安楽死させ、腸管(小腸及び大腸)を摘出した。大腸はRNAlater(TaKaRa社)に漬けて一晩4℃で浸透させた後、−80℃で保存した。小腸は3等分にし、それぞれを、(1)リアルタイムPCRに用いるサンプルとして、RNAlater(TaKaRa社)に漬けて一晩4℃で浸透させた後、−80℃で保存し、(2)免疫染色に用いるサンプルとして、プラスチック製のクリオモルド(角型1号;Sakura Finetek社)に封入剤であるティシューテックO.C.T.コンパウンド(Sakura Finetek社)と共に入れ、ドライアイス上で速やかに凍結させ、凍結切片用のブロックを作製し、−80℃で保存し、(3)ヘマトキシリン・エオジン(Hematoxylin and Eosin Stain;HE Stain)組織染色に用いるサンプルとして、4%パラホルムアルデヒド固定液に24〜36時間浸漬させ、固定処理を行った。組織染色用サンプルは固定処理後に1×PBSで3〜4回洗浄し、組織標本の作製のために70%エタノール溶液中で保存した。
トータルRNAは、RNeasy Mini Kit(QIAGEN社)を用いて、プロトコルに従って調製した。cDNAの合成にはSuper Script(商標)First−Strand Synthesis System(Invitrogen社)を使用した。リアルタイムPCR用チューブにFast Start Essential DNA Green Master 2xconc.(Roche社)10μl、Sense primer(10μM)1μl、Anti−sense primer(10μM)1μl、cDNA1μl、Fast Start Essential DNA Green Master H2O(Roche社)7μlを加えて全反応量を20μlとした。そして、Light Cycler(商標)Nano(Roche社)を使用してリアルタイムPCRを行った。リアルタイムPCRに用いたプライマー(Sigma−Aldrich社)は、GAPDH(PCR産物のサイズ 136bp):5’−GGGTGTGAACCATGAGAAGT−3’(配列番号1;フォワード)、5’−GACTGTGGTCATGAGTCCT−3’(配列番号2;リバース)、CCL25(PCR産物のサイズ 131bp):5’−CCATCAGCAGCAGTAAGAGG−3’(配列番号3;フォワード)、5’−CTGTAGGGCGACGGTTTTAT−3’(配列番号4;リバース)、CCR9(PCR産物のサイズ 110bp):5’−GCCTGAGCAGGGAGATTAT−3’(配列番号5;フォワード)、5’−GAGCAGACAGAGTG−3’(配列番号6;リバース)である。解析する遺伝子としては、CCL25、CCR9及び内部標準としてGAPDHを用いた。それぞれ遺伝子の反応条件は、初期変性を95℃で3分間行った後、CCL25:熱変性(95℃、60秒)、アニーリング(55℃、50秒)、伸長反応(72℃、60秒)を全40サイクル、CCR9:熱変性(95℃、60秒)、アニーリング(58℃、50秒)、伸長反応(72℃、60秒)を全45サイクル、GAPDH:熱変性(95℃、60秒)、アニーリング(55℃、50秒)、伸長反応(72℃、60秒)を全45サイクル、の各条件で増幅を行った。
−80℃で保存した腸管組織を、切片作製の前に、−20℃で約20分間平衡化(切片作製時の粗砕を防止)した後、腸管組織ブロックをクリオスタットで8μmの厚さに薄切し、シランコートした無蛍光スライドガラス(FRC−11;Matsunami社)に貼り付けた。切片がスライド上で乾いた後、冷アセトンで−20℃で10分間浸漬し、風乾した。洗浄バッファー(1XPBS)で切片を各5分間、3回洗浄した後、免疫染色を行った。免疫染色には、CCL25及びIgAそれぞれについて一次抗体及び二次抗体を用いた。1%BSA含有PBSブロッキング液で、各切片を室温で1時間ブロッキング処理した。ブロッキング液を除去し、ブロッキング液で希釈した一次抗体を各切片に添加し、4℃で一晩インキュベートした。一次抗体液を除去し、1XPBSで切片を各5分間、3回洗浄した。1%BSA含有PBSブロッキング液で希釈した二次抗体を各切片に添加し、室温で2時間インキュベートした後、二次抗体を除去し、1XPBSで切片を各5分間、3回洗浄した。その後、水溶性封入剤(Thermo Scientific社)にてスライドグラス上で封入し、実体蛍光顕微鏡(MZ10F;Leica社)にて観察を行った。免疫組織化学的染色に使用した抗体は、CCL25:Goat anti−mouse CCL25/TECK antibody(一次抗体;R&D Systems社)、Fluorescein(FITC)−conjugated AffiniPure Rabbit Anti−Goat++ IgG (H+L)(二次抗体;Jackson Immuno Research社)、IgA:Goat anti−mouse IgA affinity Purified(一次抗体;Bethyl Laboratories社)、Rhodamine(TRITC)−conjugated AffiniPure Donkey Anti−Goat++ IgG (H+L)(二次抗体;Jackson Immuno Research社)であり、それぞれ1:100の希釈倍率で用いた。
実験結果に関するすべての統計処理は、t−検定を用いて行い、統計学的有意水準は特に明示のない場合については5%(P>0.05)とした。
マウス用人工乳汁を用いた人工哺乳法に関する文献(Biosci. Biotechnol. Biochem.,2007, 71(10), 2420-2427及びExperimentalanimals, 2006, 55(4), 391-397)を参考に、脂肪の含有量を16%から18%に修正して、マウス用人工乳汁を作製した。以下に人工乳汁の作成方法を示す。初めに、Casein mixtureを作製した。
(a)セリン(0.2875g)、システイン(0.225g)及びトリプトファン(0.27g)の3種類のアミノ酸を、NaOH(0.25g)及びKOH(1.5g)を含む200mlのアルカリ水溶液に加えた(常にスターラーで撹拌、60〜70℃)。
(b)カゼイン(40.0g)をアルカリ水溶液に加え、溶解した。このCasein mixtureを、沸騰しているお湯の入ったバス中で30分間滅菌した。次に、カゼイン塩のミセルを作製した。
(c)Casein mixtureにカルシウム及びマグネシウムを加えた。CaCl2・2H2O(1.7g)、GlyCaPO4(8g)及びMgCl2・6H2O(1.9g)を50mlの蒸留水(121℃で10分間オートクレーブ)に溶かし、ポリトロン様ミキサーでホモジナイズした。これをCasein mixtureにゆっくりと加えた(ホモジナイザーで混ぜ続ける)。
(d)CaCO3・2H2O(2.5g)及びCa−citrate(1.2g)を25mlの蒸留水に溶かし、オートクレーブした後、Casein mixtureにゆっくりと加えた。
(e)Na2HPO4(0.8g)及びKH2PO4(0.08g)を12.5mlの蒸留水に溶かし、オートクレーブで滅菌した後Casein mixtureに加えた。
(f)ラクトース水溶液(ラクトース18.91gを55mlの蒸留水に溶かしたもの)をオートクレーブで滅菌した後、ゆっくりとCasein mixtureに加えた。
(g)FeSO4・7H2O(0.48g)及びCitrate−H2O(0.01g)を5mlの蒸留水に溶かした。そのうちの2.5ml、ZnSO4・7H2O(0.3g)、CuSO4・5H2O(0.075g)及びMnSO4・5H2O(0.0125g)を6.25mlの蒸留水に溶かした。そのうちの1.25ml、NaF(0.00775g)及びKI(0.0125g)を6.25mlの蒸留水に溶かした。そのうちの1.25mlをCasein mixtureに加えた。この操作は、Millipore Filtration(0.45μm)で滅菌した後に、常に撹拌しながら行った。
(h)その後、Whey Protein Isolate(40g)及びWhey Protein Hydrolysate(50g)を250mlの滅菌蒸留水に溶かした。この溶液を、撹拌しながら40℃以下に冷ましたCasein mixtureに加えた。
(i)カルニチン(0.08g)、ピコリン酸(0.04g)、エタノールアミン(0.068g)及びタウリン(0.3g)を5mlの蒸留水に溶かした。そのうちの2.5mlを Casein mixtureに加えた。
(j)クエン酸二水素コリン(1.47g)を18.375mlの蒸留水に溶かした中和溶液(5N NaOHでpH7.0に中和)に、水溶性ビタミンmixture(シアノコバラミン(0.0119mg)、ビオチン(0.18mg)、葉酸(0.78mg)、チアミン塩酸塩(8.81mg)、ピリドキシン塩酸塩(1.25mg)、リン酸リボフラビンナトリウム(12.15mg)、パントテン酸カルシウム(26.43mg)、p−アミノ安息香酸(44.04mg)、ニコチン酸(49.88mg)、アスコルビン酸ナトリウム(674mg)、及び4−イノシトール(487.25mg))を溶かした。そのうちの17.5mlをCasein mixtureに加えた。
(k)脂溶性ビタミン(ビタミンK3(19.825mg)、ビタミンE:α−トコフェロール(23.45mg)及びビタミンAとDを含む混合物)並びに6種類の食用油(パーム油(53.85g)、ココナッツ油(44.9g)、コーン油(17.955g)、中鎖脂肪酸油(26.9325g)、大豆油(35.91g)及びコレステロール(0.4g))を沸騰しているお湯の入ったバス中で30分間滅菌した。この油性溶液を40〜50℃まで冷ました後、撹拌しながらCasein mixtureに加えた。
(l)この最終混合物を、高圧条件下(180kg/cm2)で3回ホモジナイズした。
(m)ホモジナイズの後、人工乳汁は無菌的に50ml滅菌ポリプロピレンボトルに分注し、−20℃で凍結させた。
(n)冷凍した人工乳汁はガンマ線照射処理(30kGy)による滅菌をし、哺乳実験まで−20℃で保存した。
10〜12週齢のddY系マウス(JapanSLC社)及びddY系マウスの新生仔を用いた。
予備実験として、帝王切開して3時間以内に人工乳汁で人工哺育を開始した。32匹の帝王切開による新生仔に人工哺育を行ったところ、3日目には約43%(14匹)の新生仔マウスが死亡した。そして、9日目までに全数の新生仔マウスが死亡した。このことから、本実施例においては、生後2日齢まで母乳哺育させた新生仔に、生後3日齢から、3時間に1回、人工乳汁を与えることとした。
人工哺育したマウスの小腸を摘出し、小腸(十二指腸から空腸まで)をピンでとめて、10%ホルマリン液中で3時間以上浸漬固定処理を行った。固定処理後に蒸留水で数回洗浄し、Mayer’s Hematoxylin Solutionで7分間染色した。その後、蒸留水で一回洗浄した後、一時間流水洗した。
リアルタイムPCRにより、腸管組織のCCL25mRNAの発現について解析した。その結果、離乳時期である生後21日目群の発現量を1とした時、小腸でのCCL25mRNA発現量は、生後0日目群で0.12±0.07、生後1日目群で0.09±0.06、生後2日目群で0.39±0.04、生後5日目群で0.62±0.003及び生後10日目群で0.70±0.05であった。すなわち、CCL25mRNAの発現量は、生後2日目から増加し始めて、その量は経時的に増加し、生後5日目群から生後21日目群まで、その発現量は0日目群に比べて、有意に増加した。また、大腸での発現量は、生後0日目群で0.41±0.04、生後1日目群で0.33±0.01、生後2日目群で0.27±0.02、生後5日目群で0.08±0.006及び生後10日目群で0.09±0.006であり、生後21日目群が最も高かった。
新生仔マウスを、Yajima et al.の文献(Biosci. Biotechnol. Biochem., 2007, 71(10),2420-2427及びExperimental animals, 2006, 55(4),391-397)に記載の方法に準じて、生後2日齢まで母乳哺育させた後に、3日齢から各人工乳汁を用いて人工哺育を開始した。新生仔マウスを(1)人工乳汁にCCL25(Recombinant Mouse CCL25(TECK)、Bio−Legend社)を0.5μg/ml添加した群(CCL25添加群)及び(2)人工乳汁CCL25抗原の無添加群(コントロール群)の2群に分けた。
実施例2と同様に新生仔マウスをCCL25添加群及びコントロール群に分け、10日齢まで7日間人工保育した後に解剖し、腸管(小腸及び大腸)、脾臓及び胸腺を摘出し、各重量をCCL25添加群及びコントロール群で比較した。免疫系器官である脾臓、胸腺、及び腸管の体重当たりの重量で比較した結果、コントロール群の脾臓(SP)が3.95%±0.05、胸腺(Thy)が4.00%±0.06、大腸(LI)が7.02%±0.08及び小腸(SI)が5.46%±0.10であったのに対して、CCL25添加群の脾臓重量(SP)は4.99%±0.058、胸腺重量(Thy)は4.95%±0.059、大腸重量(LI)は6.99%±0.04及び小腸重量(SI)は6.44%±0.06であった。CCL25添加群では、コントロール群に対して、小腸の重量が高い傾向が見られ、さらに、脾臓及び胸腺の重さが有意に高かった(図2)。これに対して、体重あたりの大腸の重量はコントロール群とCCL25添加群でほぼ同じ値を示した。
腸管組織のCCL25mRNAの発現について調べた結果、コントロール群の小腸CCL25mRNA発現量を1とした時、CCL25添加群での発現量は0.79±0.11であった。有意差はなかったが、コントロール群で発現量がより高い傾向が見られた。また、腸管組織のCCR9mRNAの発現量について調べた結果、コントロール群の小腸CCR9mRNA発現量を1とした時、CCL25添加群での発現量は1.29±0.16であった。有意差はなかったが、CCL25添加群で発現量がより高い傾向が見られた。
IgA−RITC抗体を用いて小腸組織のIgA産生細胞の免疫組織化学染色を行った。一つの腸管(小腸)の絨毛を7本選び、その中で陽性を示したIgA産生細胞の数を数え、コントロール群及びCCL25添加群で比較した。7本の絨毛内に確認できたIgA産生細胞数は、コントロール群では1.33±0.2とほとんど見られなかったのに対し、CCL25添加群では43.75±1.24と有意に大きかった(図3)。この結果から、乳汁中のCCL25が出産後10日目までのIgAの誘引に必須であることが明らかとなった。
実験動物は、10〜20週齢のddY系マウス(JapanSLC社)及びddY系マウスの新生仔を用いた。
新生仔マウスを、Yajima et al.の文献(Biosci. Biotechnol. Biochem., 2007, 71(10), 2420-2427及びExperimental animals, 2006, 55(4), 391-397)に記載の方法に準じて、生後2日齢まで母乳哺育させた後に、2日齢から10日齢までの8日間、各人工乳汁を用いて人工哺育を行った。新生仔マウスを(1)人工乳汁にCCL25(Recombinant Mouse CCL25(TECK)、 Bio−Legend社)を0.5μg/mL添加した群(CCL25添加群)及び(2)CCL25抗原の無添加群(コントロール群)の2つの実験群に分けた。
(a)NaOH(1g)、KOH(6g)を800mlの蒸留水に溶かした(アルカリ水溶液)。セリン(1.15g)、システイン(0.9g)及びトリプトファン(1.08g)の3種類のアミノ酸をアルカリ水溶液に加えた(常にスターラーで撹拌、60〜70℃)。
(b)カゼイン(160.0g)をアルカリ水溶液に加え、溶解した。このCasein mixtureを、沸騰しているお湯の入ったバス中で30分間滅菌した。
(c)CaCl2・2H2O(6.8g)、GlyCaPO4(32g)、MgCl2・6H2O(7.6g)を200mlの蒸留水に溶かし、ポリトロン様ミキサーでホモジナイズした。これを、Casein mixtureにゆっくりと加えた(ホモジナイザーで混ぜ続ける)。
(d)CaCO3・2H2O(10g)、Ca−citrate(4.8g)を100mlの蒸留水に溶かし、オートクレーブした後、Casein mixtureにゆっくりと加えた。
(e)Na2HPO4(3.2g)、KH2PO4(0.32g)を50mlの蒸留水に溶かし、オートクレーブでした後Casein mixtureに加えた。
(f)ラクトース水溶液(ラクトース75.64gを220mlの蒸留水に溶かしたもの)をオートクレーブで滅菌した後、ゆっくりとCasein mixtureに加えた。
(g)FeSO4・7H2O(1.92g)、citrate−H2O(0.04g)を20mlの蒸留水に溶かした。そのうちの10ml、ZnSO4・7H2O(1.2g)、CuSO4・5H2O(0.3g)、MnSO4・5H2O(0.05g)を25mlの蒸留水に溶かした。そのうちの5ml、NaF(0.031g)、KI(0.05g)を25mlの蒸留水に溶かした。そのうちの5mlをCasein mixtureに加えた。この操作は、Millipore filtration(0.45μm)で滅菌した後に、常に撹拌しながら行った。
(h)ガンマ線照射による滅菌(30KGy)を行った、Whey protein isolate(160g)及びWhey protein hydrolysate(200g)を1000mlの滅菌蒸留水に溶かし、この溶液を撹拌しながら40℃以下に冷ましたCasein mixtureに加えた。
(i)カルニチン(0.32g)、ピコリン酸(0.16g)、エタノールアミン(0.272g)及びタウリン(1.2g)を20mlの蒸留水に溶かした。そのうちの10mlをCasein mixtureに加えた。
(j)クエン酸二水素コリン(5.88g)を73.5mlの蒸留水に溶かした(65℃のwater bath中で)中和溶液(1N NaOHでpH7.0に中和)に、水溶性ビタミンmixture(シアノコバラミン(0.0476mg)、ビオチン(0.72mg)、葉酸(3.16mg)、チアミン塩酸塩(35.24mg)、ピリドキシン塩酸塩(50.0mg)、リン酸リボフラビンナトリウム(56.6mg)、パントテン酸カルシウム(105.72mg)、p−アミノ安息香酸(176.16mg)、ニコチン酸(199.52mg)、アスコルビン酸ナトリウム(2.696g)、及び4−イノシトール(1.989g))を溶かした。そのうちの70mlをCasein mixtureに加えた。
(k)脂溶性ビタミン(ビタミンK3(79.3mg)、ビタミンE:α−トコフェロール(93.8mg)、ビタミンAとDを含む混合物)と6種類の食用油(パーム油(191.5g)、ココナッツ油(159.6g)、コーン油(63.84g)、中鎖脂肪酸油(95.76g)、大豆油(127.68g)、コレステロール(1.6g))を沸騰しているお湯の入ったバス中で30分間滅菌した。この油性溶液を40〜50℃まで冷ました後、撹拌しながらCasein Mixtureに加えた。
(l)ホモジナイズの後、人工ミルクは無菌的に50ml滅菌ポリプロピレンボトルに分注し、−80℃で保存した。冷凍した人工ミルクはガンマ線照射(30KGy)による滅菌をし、−80℃で保存した。
Claims (6)
- CCL25を含有する免疫機能発達促進剤。
- 乳児用である請求項1に記載の免疫機能発達促進剤。
- 経口摂取用である請求項1又は2に記載の免疫機能発達促進剤。
- CCL25を含有する成長促進剤。
- 乳児用である請求項4に記載の成長促進剤。
- 経口摂取用である請求項4又は5に記載の成長促進剤。
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WO2015079952A1 (ja) * | 2013-11-29 | 2015-06-04 | テルモ株式会社 | アジュバント組成物およびこれを含むワクチン組成物、並びにこれらの製造方法 |
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---|---|---|---|---|
JP2005508647A (ja) * | 2001-11-12 | 2005-04-07 | マーズ インコーポレイテッド | 食品 |
JP2005532296A (ja) * | 2002-04-19 | 2005-10-27 | エンドサイト,インコーポレイテッド | アジュバントにより増強される免疫療法 |
WO2014187743A1 (en) * | 2013-05-21 | 2014-11-27 | Tyg Oncology Ltd. | Gastrin peptide immunogenic composition |
WO2015079952A1 (ja) * | 2013-11-29 | 2015-06-04 | テルモ株式会社 | アジュバント組成物およびこれを含むワクチン組成物、並びにこれらの製造方法 |
Non-Patent Citations (5)
Title |
---|
KATHURIA, N. ET AL.: "Generation of antigen-specific immunity following systemic immunization with DNA vaccine encoding CC", HUMAN VACCINES & IMMUNOTHERAPEUTICS, vol. 8, no. 11, JPN6016035766, 2012, pages 1607 - 1619, XP055339057, ISSN: 0004329012, DOI: 10.4161/hv.22574 * |
LEVAST, B. ET AL.: "Ultra-early weaning in piglets results in low serum IgA concentration and IL17 mRNA expression", VETERINARY IMMUNOLOGY AND IMMUNOPATHOLOGY, vol. 137, JPN6016035764, 2010, pages 261 - 268, XP027258939, ISSN: 0004297127, DOI: 10.1016/j.vetimm.2010.06.004 * |
MEURENS, F. ET AL.: "Expression of mucosal chemokines TECK/CCL25 and MEC/CCL28 during fetal development of the ovine muco", IMMUNOLOGY, vol. 120, JPN6016035768, 2007, pages 544 - 555, XP055339058, ISSN: 0004329015, DOI: 10.1111/j.1365-2567.2006.02532.x * |
稗島 州雄: "CCL25,CCL28はIgA抗体産生細胞の腸管へのホーミングに関与する", 臨床免疫, vol. 43, no. 5, JPN6016035767, 2005, pages 584 - 588, ISSN: 0004329016 * |
竹中 正樹ら: "日本農芸化学会大会講演要旨集", 妊娠および泌乳中のマウス乳腺組織内におけるCCL25の発現, JPN6016035769, 2010, pages 227, ISSN: 0004329014 * |
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