JPWO2016182053A1 - 運動時の心拍数上昇抑制方法及び心拍数上昇抑制組成物 - Google Patents
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Abstract
Description
本明細書において以降、アスリートではない前者のような目的で、あるいは趣味的に運動に取り組む人を一般運動者、後者のアスリートを競技運動者と称することとする。
また競技運動者のオーバーワーク等においては、練習メニューの消化に対する義務感から、現状の自身の循環機能を超えた運動強度への常態的な取り組みが考えられる。この運動強度の詳細については後述するが、運動時の心拍数も影響しており、運動時の心拍数上昇を抑制できれば、同じ練習メニューであっても相対的に運動強度を低下させることが期待できる。
特許文献1は、哺乳動物の心拍数低下特性を有する乳酸菌発酵させた発酵食品原料、及び当該発酵食品原料含有組成物の使用が開示されている。しかしながら、特許文献1の発酵食品原料は、狭心症、高血圧、及び動脈硬化等の病態を有する哺乳動物に対し、これらの病態治療を目的として、「安静時の心拍数」を低下させるためのものである。
好ましくは、前記カゼイン加水分解物は、獣乳カゼインを麹菌由来の酵素により酵素分解して得られる分解物である。
さらに、該心拍数上昇抑制組成物は、Xaa Pro配列を有するジペプチド及びXaa Pro Pro配列を有するトリペプチドからなる生体内難分解性ペプチドを特定割合で含むことが好ましい。
本発明の運動時の心拍数上昇抑制方法は、獣乳カゼインを加水分解して得られる、遊離アミノ酸及びペプチドを含む平均鎖長がアミノ酸残基数として2.1以下のカゼイン加水分解物、又は該加水分解物に含まれる遊離アミノ酸及びペプチド混合物を含有する組成物を、運動開始前、運動中、又はその両時に経口投与する方法である。また、本発明の心拍数上昇抑制組成物は、上記カゼイン加水分解物、又は該加水分解物に含まれる遊離アミノ酸及びペプチド混合物を含有する組成物である。
該平均鎖長は、例えば、アミノ基に反応して発色するOPA(o−フタルアルデヒド)試薬を用いたOPA法により、加水分解物中のモル濃度を評価し、平均鎖長=(カゼイン酸加水分解物中のモル数)/(カゼイン加水分解物中のモル数)として求めることができる。
また、前記生体内難分解性ペプチドとは、生体の腸管から吸収された際に、生体内ペプチダーゼ群に対して分解抵抗性が高い、カルボキシ末端にProを有するジペプチドXaa Pro及びトリペプチドXaa Pro Proを意味する。
前記カゼイン加水分解物には、前記遊離アミノ酸及びペプチドの他に、例えば市販の獣乳カゼイン等に通常含まれる、脂質、灰分、炭水化物、食物繊維、水分等が10〜20重量%程度含まれていても良く、また、必要に応じてこれらのうちの適当な成分の一部若しくは全部を除去しても良い。
獣乳カゼインを加水分解する際のカゼイン濃度は、特に限定されないが、前記加水分解物を効率良く生産するために、3〜19重量%が好ましい。
酵素群(X)は、活性中心にセリンを持つ、セリンタイプのプロテアーゼ、もしくは活性中心に金属を持つ金属プロテアーゼを含むことが好ましい。金属プロテアーゼとしては、中性プロテアーゼI、中性プロテアーゼII及びロイシンアミノペプチダーゼ等が挙げられ、これらの少なくとも1種を含むことが、所望の加水分解物を効率良く、且つ短時間で、さらには1段階反応で得ることができる点で好ましい。また前記Pro Xaa配列が切断可能なペプチダーゼとしては、等電点が酸性域を示す酵素であることが好ましい。
アスペルギルス・オリゼー由来の酵素群としては、市販品を利用することができ、例えば、スミチームFP、LP又はMP(以上、登録商標、新日本化学(株)製)、ウマミザイム(登録商標、天野エンザイム(株)製)、Sternzyme B11024、PROHIDROXY AMPL(以上、商品名、株式会社樋口商会製)、オリエンターゼONS(登録商標、阪急バイオインダストリー(株)製)、デナチームAP(登録商標、ナガセ生化学社製)が挙げられ、特に、スミチームFP(登録商標、新日本化学(株)製)の使用が好ましい。
これら市販の酵素群を用いる場合には、通常、至適条件が設定されているが、前記カゼイン加水分解物が得られるように条件、例えば、使用酵素量や反応時間等を、用いる酵素群に応じて適宜変更して行なうことができる。
反応条件は、酵素群に応じて目的のカゼイン加水分解物が得られるように適宜選択できる。例えば、反応温度は、25〜60℃、好ましくは45〜55℃であり、pHは、3〜10、好ましくは5〜9、特に好ましくは5〜8とすることができる。また、酵素反応時間は、2〜48時間、好ましくは7〜15時間とすることができる。
酵素反応停止後、必要に応じて沈澱物を、遠心分離除去や各種フィルター処理により除去することが好ましい。さらに、酵素反応停止後に5℃〜10℃に冷却することで、より多くの沈殿物を生じさせることができる。
このような粉末には、栄養的バランスや風味等を改善するために、各種補助添加剤を含有させることもできる。例えば、各種炭水化物、脂質、ビタミン類、ミネラル類、甘味料、香料、色素、テクスチュア改善剤が挙げられる。
さらに、機能性食品、機能性飲料及びサプリメントとして投与する場合の形態としては、例えば、錠剤、丸剤、硬カプセル剤、軟カプセル剤、マイクロカプセル、散剤、顆粒剤、液剤等が挙げられる。
製剤化は、例えば、適宜必要に応じて、使用が許容される担体、アジュバント、賦形剤、補形剤、防腐剤、安定化剤、結合剤、pH調節剤、緩衝剤、増粘剤、ゲル化剤、保存剤、滑沢剤、抗酸化剤等を用い、一般に認められた製剤実施に要求される単位用量形態で製造することができる。
なお、運動開始前に投与する場合、運動開始前3時間以内に投与することが好ましく、1時間前から直前、特に45分前から15分前に投与することがより好ましい。また、前記投与に加えて、運動終了後に継続して投与してもよい。
運動強度(%)=[(運動時心拍数−安静時心拍数)÷(最大心拍数−安静時心拍数)]×100 (1)
なお、式(1)の最大心拍数は、個々人によって異なり、またその測定は困難で実用的ではないため、次の式(2)で示す推定最大心拍数で代用することとする。すなわち、式(1)の最大心拍数は、式(2)の推定最大心拍数を指すものとする。ただし、各個人の最大心拍数を正確に測定し、当該最大心拍数を用いて運動強度を求めてもよい。
推定最大心拍数=220−年齢 (2)
また、運動強度が0%を超えるものであれば、その運動時間は特に制限が無い。例えば、50m走のような短距離走の場合は運動時間が数秒であり、一般市民ランナーがフルマラソンを行う場合は、運動時間が5〜8時間に及ぶこともあり得る。このような短距離走や長距離走も本発明の対象とする運動であるので、上記したように、運動時間は特に関係なく、運動強度が0%を超えるものに対して本発明の抑制方法及び組成物を適用できる。
なお、運動時間が30分を超える場合には、運動開始前に本発明の組成物を投与した場合であっても、運動中にも投与することができる。
また、一般運動者において、各種の公的スポーツクラブ、又は一般スポーツクラブ若しくはスポーツジム等に所属している場合は、当該クラブやジムの、コーチ、トレーナーあるいはインストラクター等の指導や指示によって投与することが好ましい。やはり、一般運動者の状況を冷静に観察して判断できるからである。
まず、実施例に使用する、獣乳カゼインを加水分解して得られる、遊離アミノ酸及びペプチドを含む平均鎖長がアミノ酸残基数として2.1以下のカゼイン加水分解物の製造例を説明する。なお、以後特に断らない限り、カゼイン加水分解物と称した場合は、以下に説明する製造例で製造したカゼイン加水分解物を指すものとする。
図1にカゼイン加水分解物の概略製造フローを示す。
牛乳由来カゼイン(カゼインナトリウム、日本NZMP社製)4.5gを約80℃に調整した蒸留水100gに加えて充分に撹拌した後、1N水酸化ナトリウム(和光純薬社製)溶液を添加してpH7.0とし、また温度を20℃に調整して基質溶液を調製した。該基質溶液を95℃で10分間加熱することにより殺菌した。
殺菌後の基質溶液に、アスペルギルス・オリゼー由来であり、少なくとも金属プロテアーゼ、セリンプロテアーゼ、中性プロテアーゼI、中性プロテアーゼII及びロイシンアミノペプチダーゼを含む市販の酵素(登録商標「スミチームFP」、新日本化学工業社製)を、酵素/カゼインの重量比が1/25となるように添加して、50℃で11時間反応させた。続いて、95℃で10分間加熱することにより酵素を失活させ、カゼイン加水分解物溶液を得た。カゼイン加水分解物溶液を5℃まで冷却した後、析出物と上澄み液を遠心分離(遠心分離条件;3000rpm、20分間)により分離し、該析出物を除去した上澄み液を95℃で10分間加熱することにより殺菌した。殺菌後の上澄み液を、スプレードライ又は凍結乾燥にて乾燥することにより、カゼイン加水分解物の粉末を得た。
上記1で得られたカゼイン加水分解物に含まれる遊離アミノ酸及びペプチドの平均鎖長は、それに含まれる遊離アミノ酸及びペプチドのアミノ基に反応するOPA試薬でモル数を測定し、同様に測定したカゼイン酸加水分解物のモル数との比で評価した。
メタノール1mLにo−フタルアルデヒド(蛍光分析用特級試薬、ナカライテスク社製)40mgを溶解させ、β−メルカプトエタノール100μLを加えた。予め調製しておいた100mMの四ホウ酸ナトリウム溶液25mLに、20%ドデシル硫酸ナトリウム2.5mLを加えたものを用いて、上記溶解したo−フタルアルデヒドを25mLに希釈し、更に蒸留水で50mLとすることでOPA試薬を調製した。
上記1で得たカゼイン加水分解物粉末を、適当な溶媒に適当な濃度で溶解し、15000rpmで10分間遠心分離を行い、上清50μLを分取した。続いて、上記OPA試薬を1mL加え、よく撹拌し、室温で5分間放置した後、吸光光度計(商品名Ubest−35、日本分光(株)製)で340nmの吸収を測定した。
検量線は1%のカゼイン酸加水分解物を調製し、適切に希釈したものを用いて同様に測定した結果から、吸光度とモル濃度の関係を求めた。そして、平均鎖長は以下の式に従って計算した。その結果、平均鎖長は2.1であった。
平均鎖長=(1%カゼイン酸加水分解物のモル濃度)/(1%カゼイン加水分解物のモル濃度)
上記1で得られたカゼイン加水分解物中のジペプチド及びトリペプチドの量を、各種の化学合成標準ペプチドを用いて常法に従って求めた。結果を表1に示す。なお、各ペプチドの量はカゼイン加水分解物1g中のmg数で表した。
以下に示す条件にて、プラセボ対照二重盲検クロスオーバー試験による運動試験を実施し、運動時の心拍数上昇抑制効果を測定した。
[1]被験者
運動習慣のない40歳から74歳の健常男性14名(平均年齢53.1歳)。
[2]運動種及び運動量
トレッドミルを用いた下り勾配(−5°)での時速5kmの歩行運動を30分間。
[3]心拍数上昇抑制組成物
上記「1.カゼイン加水分解物の製造例」に準じる方法により製造したカゼイン加水分解物粉末を、賦形剤、滑沢剤と共に打錠し、タブレット(錠剤)を調製した。該タブレット1錠の重量は0.35gであり、タブレット中のカゼイン加水分解物含有量は、25〜30重量%である。
[4]試験方法
1)運動開始30分前に、タブレット4錠(1.4g)を被験者に投与し、心電図測定により心拍数の測定を開始。タブレット投与から運動開始までの間は安静を維持。
2)タブレット投与から30分後に上記[2]の運動を実施。運動中、心電図測定により心拍数の測定を継続。
3)運動後30分間安静にし、試験を終了。
4)心拍数の測定結果から、各被験者の運動強度を上記式(1)及び(2)から算出。
表2中の運動時平均心拍数において、平均値は被験者14名の運動時30分間の心拍数の平均値を、標準偏差は被験者14名の運動時平均心拍数の標準偏差を示す。
表2中の運動強度において、平均値は上記の安静時及び運動時の平均心拍数より求めた被験者14名の運動強度の平均値を、標準偏差は被験者14名の運動強度の標準偏差を示す。
カゼイン加水分解物粉末を含む実施例1のタブレットの代わりに、プラセボとしてカゼインナトリウムを25〜30重量%含み、実施例1と同様の方法で調製したタブレットを投与すること以外は、実施例1と同様にして試験を実施した。また、被験者14名は全て同一人とした。なお、比較例1の試験は、実施例1の試験とは別の日に実施した。
結果を表2及び図2に示す。表2中の各平均値、及び各標準偏差は実施例1と同様にして求めた。また、図2中の各経過時間における心拍数は、実施例1と同様、被験者14名の5分間ごとの平均値を示す。
一方、タブレット投与から運動開始までの30分間の安静時平均心拍数は、実施例1と比較例1で差が認められず、本願の効果は安静時の効果とは異なることが示された。
Claims (6)
- 獣乳カゼインを加水分解して得られる、遊離アミノ酸及びペプチドを含む平均鎖長がアミノ酸残基数として2.1以下のカゼイン加水分解物、又は該加水分解物に含まれる遊離アミノ酸及びペプチド混合物を含有する組成物を、運動開始前、運動中、又はその両時に経口投与する、運動時の心拍数上昇抑制方法。
- 前記カゼイン加水分解物が、獣乳カゼインを麹菌由来の酵素により酵素分解して得られる、
請求項1に記載の運動時の心拍数上昇抑制方法。 - 前記カゼイン加水分解物、又は前記遊離アミノ酸及びペプチド混合物の経口投与量が、1回当たり0.8〜2000mg/kg体重である、
請求項1又は2に記載の運動時の心拍数上昇抑制方法。 - 前記組成物の経口投与が、単位運動時当たり少なくとも1回である、
請求項1〜3のいずれか一項に記載の運動時の心拍数上昇抑制方法。 - 獣乳カゼインを加水分解して得られる、遊離アミノ酸及びペプチドを含む平均鎖長がアミノ酸残基数として2.1以下のカゼイン加水分解物、又は該加水分解物に含まれる遊離アミノ酸及びペプチド混合物を有効成分として含有する、請求項1〜4のいずれかに記載の運動時の心拍数上昇抑制方法に使用する、
経口投与用の運動時の心拍数上昇抑制組成物。 - 獣乳カゼインを加水分解して得られる、遊離アミノ酸及びペプチドを含む平均鎖長がアミノ酸残基数として2.1以下のカゼイン加水分解物、又は該加水分解物に含まれる遊離アミノ酸及びペプチド混合物を有効成分として含有する経口投与用組成物の、運動時の心拍数上昇抑制への使用。
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