JPWO2016136624A1 - 免疫調節剤及びその用途 - Google Patents

Abstract

【課題】 本発明は、日常の食生活で継続的に経口摂取可能であり、副作用の心配のない、免疫調節剤及びその用途を提供することを課題とする。【解決手段】 下記（Ａ）乃至（Ｃ）の特徴を有する分岐α−グルカン混合物を有効成分として含有する免疫調節剤を提供することによって上記課題を解決する：（Ａ）グルコースを構成糖とし、（Ｂ）α−１，４結合を介して連結したグルコース重合度３以上の直鎖状グルカンの一端に位置する非還元末端グルコース残基にα−１，４結合以外の結合を介して連結したグルコース重合度１以上の分岐構造を有し、（Ｃ）イソマルトデキストラナーゼ消化により、イソマルトースを生成する。【選択図】 なし

Description

本発明は免疫調節剤及びその用途に関するものであり、詳細には、分岐α−グルカン混合物を有効成分として含有する免疫調節剤及びその用途に関するものである。

ヒトをはじめとする高等生物は、細菌、ウイルス、寄生虫などの病原体の感染から防護するために免疫機能を備えており、各種の抗体やサイトカインの産生が生体内において適正に調節されている。特に、抗体は、イムノグロブリンＡ（以下「ＩｇＡ」という。）、イムノグロブリンＥ（以下「ＩｇＥ」という。）、イムノグロブリンＧ（以下「ＩｇＧ」という。）などが知られ、免疫系における極めて重要な因子である。近年、生活環境が清潔になるにつれ、食中毒などの経口感染症は減少傾向にある。しかしながら、逆に清潔な生活環境は、抗原刺激の機会を少なくするため、常在的なＩｇＡのレベルを低下させ、経口感染症に対する抵抗力を弱め、また、アレルゲンや自己抗原に対して過度に反応して、抗原特異的ＩｇＥや自己抗体を産生しやすくする。よって、結果的に、現代人は、経口感染症や、花粉症や食物アレルギーなどのアレルギー症、自己免疫疾患に罹患しやすい体質になっていると考えられる。

糖類の摂取が免疫に及ぼす作用として、特許文献１には、トレハロースが小腸に点在する免疫器官であるパイエル板の細胞に作用して、ＩｇＡやインターフェロン−γの産生量を調節することが開示されている。また、特許文献２には、ニゲロオリゴ糖が栄養障害による免疫機能低下を防止することが開示されている。さらに、特許文献３には、アレルギー症の予防又は治療に、非還元末端にα−１，６結合で結合したガラクトース残基を有するオリゴ糖を利用する方法が開示されている。

また、非特許文献１には、フラクトオリゴ糖（以下、「ＦＯＳ」という。）の摂取によりＩｇＡ産生が活性化されることが開示されている。当該ＩｇＡ産生の活性化は、腸内細菌叢を構成する細菌の一つであるバクテロイデス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ）属細菌がＦＯＳを資化することで腸内で増殖するとともに、増殖したバクテロイデス属細菌がパイエル板細胞によるＩｇＡ産生を活性化するためであると報告されている。

上記のオリゴ糖は副作用の心配がなく免疫調節剤として使用可能であるものの、一般にオリゴ糖は甘みを有するため食材に多量に配合すると、味質が変わってしまうという不都合が生じる。オリゴ糖と異なり甘みを有しない素材であれば色々な食品に比較的多量に配合することができ、日常の食生活で継続的に摂取可能であることから、オリゴ糖以外の糖類からなる免疫調節剤が求められている。

国際公開ＷＯ０２／０３８１４６号パンフレット 特開２００２−３２５５５５号公報 特開２００３−４０７７９号公報

細野朗、腸内細菌学雑誌、第２７巻、第２０３頁−２０９頁（２０１３年）

斯かる状況に鑑み、本発明は、日常の食生活で継続的に摂取可能であり、副作用の心配のない免疫調節剤及びその用途を提供することを課題とする。

本発明者らは、免疫調節剤における上記課題を解決すべく鋭意研究を行う過程において、意外にも、本願と同じ出願人が国際公開第ＷＯ２００８／１３６３３１号パンフレットにおいて開示した製造方法等により得られる分岐α−グルカン混合物、具体的には、グルコースを構成糖とし、α−１，４結合を介して連結したグルコース重合度３以上の直鎖状グルカンの非還元末端グルコース残基にα−１，４結合以外の結合を介して連結したグルコース重合度１以上の分岐構造を有し、イソマルトデキストラナーゼ消化によりイソマルトースを生成する分岐α−グルカン混合物を、マウスに経口摂取させると、腸内におけるＩｇＡの分泌が促進されるという新規な知見を得た。また、当該分岐α−グルカン混合物を、アレルゲンと抗体産生を増強させる目的で用いられる補助剤であるアラムアジュバントと共に免疫することによってＩｇＥの産生を増強させたマウスに経口摂取させると、ＩｇＥの産生が抑制されることを見出した。さらに、当該分岐α−グルカン混合物をマウスに経口摂取させると、接触性皮膚炎（かぶれ）の症状が軽減されることも確認し、本発明を完成した。

すなわち、本発明は、下記（Ａ）乃至（Ｃ）の特徴を有する分岐α−グルカン混合物を有効成分として含有する免疫調節剤を提供することによって上記の課題を解決するものである。
（Ａ）グルコースを構成糖とし、
（Ｂ）α−１，４結合を介して連結したグルコース重合度３以上の直鎖状グルカンの一端に位置する非還元末端グルコース残基にα−１，４結合以外の結合を介して連結したグルコース重合度１以上の分岐構造を有し、
（Ｃ）イソマルトデキストラナーゼ消化により、イソマルトースを生成する。

本発明の免疫調節剤は、日常の食生活で継続的に摂取可能であり、かつ、副作用の心配がないものであり、経口摂取により経口感染症、アレルギー症、自己免疫疾患などの緩和に効果的である。

本発明は、下記（Ａ）乃至（Ｃ）の特徴を有する分岐α−グルカン混合物を有効成分として含有する免疫調節剤に係る発明である。
（Ａ）グルコースを構成糖とし、
（Ｂ）α−１，４結合を介して連結したグルコース重合度３以上の直鎖状グルカンの一端に位置する非還元末端グルコース残基にα−１，４結合以外の結合を介して連結したグルコース重合度１以上の分岐構造を有し、
（Ｃ）イソマルトデキストラナーゼ消化により、イソマルトースを生成する。

すなわち、本発明の免疫調節剤は、有効成分として前記分岐α−グルカン混合物（以下、「本分岐α−グルカン混合物」という。）を含有してなるものである。原料である澱粉に種々の酵素を作用させて得られる本分岐α−グルカン混合物は、通常、様々な分岐構造並びにグルコース重合度（分子量）を有する多数の分岐α−グルカンの混合物の形態にあり、現行の技術では、一つ一つの分岐α−グルカンの単離や定量を行うことは不可能である。個々の分岐α−グルカンの構造、すなわち、構成単位であるグルコース残基の結合様式及び結合順序は決定することはできないものの、本分岐α−グルカン混合物は、斯界で一般に用いられる種々の物理的手法、化学的手法又は酵素的手法により、混合物全体として特徴付けることができる。

本発明の免疫調節剤の有効成分として用いられる本分岐α−グルカン混合物は、グルコースを唯一の構成糖とするグルカン（特徴（Ａ））であり、α−１，４結合を介して連結したグルコース重合度３以上の直鎖状グルカンの一端に位置する非還元末端グルコース残基にα−１，４結合以外の結合を介して連結したグルコース重合度１以上の分岐構造を有している（特徴（Ｂ））。なお、「非還元末端グルコース残基」とは、α−１，４結合を介して連結したグルカン鎖のうち、還元性を示さない末端に位置するグルコース残基を意味し、「α−１，４結合以外の結合」とは、文字どおりα−１，４結合以外の結合であり、α−１，２結合、α−１，３結合、及びα−１，６結合が挙げられる。また、本分岐α−グルカン混合物は、イソマルトデキストラナーゼ消化により、イソマルトースを生成するという特徴を備えている（特徴（Ｃ））。

本明細書でいうイソマルトデキストラナーゼ消化とは、本分岐α−グルカン混合物にイソマルトデキストラナーゼを作用させ、加水分解することを意味する。イソマルトデキストラナーゼは、酵素番号（ＥＣ）３．２．１．９４が付与される酵素であり、α−グルカンにおけるイソマルトース構造の還元末端側に隣接するα−１，２、α−１，３、α−１，４、及びα−１，６結合のいずれの結合様式であっても加水分解する特徴を有する酵素である。好適には、アルスロバクター・グロビホルミス由来のイソマルトデキストラナーゼ（例えば、サワイ（Ｓａｗａｉ）ら、アグリカルチャラル・アンド・バイオロジカル・ケミストリー（Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）、第５２巻、第２号、第４９５頁−５０１頁（１９８８）参照）が用いられる。

イソマルトデキストラナーゼ消化により生成するイソマルトースの、消化物の固形物当たりの割合は、本分岐α−グルカンの構造におけるイソマルトデキストラナーゼで加水分解され得るイソマルトース構造の割合を示すものであり、本分岐α−グルカン混合物を、混合物全体として、酵素的手法により構造を特徴付ける指標の一つとして用いることができる。

本発明の免疫調節剤の有効成分として用いる本分岐α−グルカン混合物は、イソマルトデキストラナーゼ消化により、イソマルトースを生成するものであり、このことは、本分岐α−グルカン混合物が通常の澱粉には存在しない分岐構造を有することを如実に表している。この分岐構造は動物の消化酵素によりほとんど分解されないことから、本分岐α−グルカン混合物は摂取した際にその大部分が腸管に達し免疫調節作用を発揮する。したがって、このような分岐構造が多い分岐α−グルカン混合物ほど免疫調節効果に優れていると考えられ、イソマルトデキストラナーゼ消化における消化物の固形物当たりのイソマルトースとして、通常、５質量％以上、好ましくは１０質量％以上、より好ましくは２０質量％以上生成するものがより好適に用いられる。なお、発明の目的からすれば上限値はないものの、反応の条件により分岐α−グルカン混合物におけるイソマルトース構造の割合が変化するため、本分岐α−グルカン混合物の生産効率の観点からは、イソマルトデキストラナーゼ消化により生成するイソマルトースの割合は、消化物の固形物当たり、通常、７０質量％以下、好ましくは６０質量％以下、より好ましくは５０質量％以下がより好適に用いられる。

また、本分岐α−グルカン混合物のより好適な一態様としては、下記の特徴（Ｄ）を有する分岐α−グルカン混合物が挙げられる。
（Ｄ）高速液体クロマトグラフ法（酵素−ＨＰＬＣ法）により求めた水溶性食物繊維含量が４０質量％以上である。

本分岐α−グルカン混合物における水溶性食物繊維含量を求める「高速液体クロマトグラフ法（酵素−ＨＰＬＣ法）」（以下、単に「酵素−ＨＰＬＣ法」という。）とは、平成８年５月厚生省告示第１４６号の栄養表示基準、「栄養成分等の分析方法等（栄養表示基準別表第１の第３欄に掲げる方法）」における第８項、「食物繊維」に記載されている方法であり、その概略を説明すると以下のとおりである。すなわち、試料を熱安定α−アミラーゼ、プロテアーゼ及びアミログルコシダーゼ（グルコアミラーゼ）による一連の酵素処理により分解処理し、イオン交換樹脂により処理液から蛋白質、有機酸、無機塩類を除去することによりゲル濾過クロマトグラフィー用の試料溶液を調製する。次いで、ゲル濾過クロマトグラフィーに供し、クロマトグラムにおける、未消化グルカンとグルコースのピーク面積を求め、それぞれのピーク面積と、別途、常法により、グルコース・オキシダーゼ法により求めておいた試料溶液中のグルコース量を用いて、試料の水溶性食物繊維含量を算出する。なお、本明細書を通じて「水溶性食物繊維含量」とは、特に説明がない限り、前記「酵素−ＨＰＬＣ法」で求めた水溶性食物繊維含量を意味する。

本発明の免疫調節剤の有効成分として用いる本分岐α−グルカン混合物は、上述したように通常の澱粉には存在しない分岐構造を有するため、動物の消化酵素ではほとんど分解されない。そのため水溶性食物繊維含量として、通常、４０質量％以上、好ましくは６０質量％以上、より好ましくは７５乃至８５質量％であるものがより好適に用いられる。

さらに、本分岐α−グルカン混合物のより好適な一態様としては、下記特徴（Ｅ）及び（Ｆ）を有する分岐α−グルカン混合物が挙げられる。
（Ｅ）α−１，４結合したグルコース残基とα−１，６結合したグルコース残基の比が１：０．６乃至１：４の範囲にあり、
（Ｆ）α−１，４結合したグルコース残基とα−１，６結合したグルコース残基との合計が全グルコース残基の５５％以上を占める。
当該特徴は分岐α−グルカン混合物をメチル化分析に供することによって確認することができる。

ここで、メチル化分析とは、周知のとおり、多糖またはオリゴ糖において、これを構成する単糖の結合様式を決定する方法として一般的に汎用されている方法である（シューカヌ（Ｃｉｕｃａｎｕ）ら、カーボハイドレート・リサーチ（Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）、第１３１巻、第２号、第２０９−２１７頁（１９８４））。メチル化分析をグルカンにおけるグルコースの結合様式の分析に適用する場合、まず、グルカンを構成するグルコース残基における全ての遊離の水酸基をメチル化し、次いで、完全メチル化したグルカンを加水分解する。次いで、加水分解により得られたメチル化グルコースを還元してアノマー型を消去したメチル化グルシトールとし、更に、このメチル化グルシトールにおける遊離の水酸基をアセチル化することにより部分メチル化グルシトールアセテート（なお、「部分メチル化グルシトールアセテート」におけるアセチル化された部位と「グルシトールアセテート」の表記を省略して、「部分メチル化物」と略称する場合がある。）を得る。得られる部分メチル化物を、ガスクロマトグラフィーで分析することにより、グルカンにおいて結合様式がそれぞれ異なるグルコース残基に由来する各種部分メチル化物は、ガスクロマトグラムにおける全ての部分メチル化物のピーク面積に占めるピーク面積の百分率（％）で表すことができる。そして、このピーク面積％から当該グルカンにおける結合様式の異なるグルコース残基の存在比、すなわち、各グルコシド結合の存在比率を決定することができる。部分メチル化物についての「比」は、メチル化分析のガスクロマトグラムにおけるピーク面積の「比」を意味し、部分メチル化物についての「％」はメチル化分析のガスクロマトグラムにおける「面積％」を意味するものとする。

メチル化分析により得られる、α−１，４結合したグルコース残基とα−１，６結合したグルコース残基の比率、及び、α−１，４結合したグルコース残基とα−１，６結合したグルコース残基の全グルコース残基に対する割合は、本分岐α−グルカン混合物を、混合物全体として、化学的手法により構造を特徴付ける指標の一つとして用いることができる。

上記（Ｅ）及び（Ｆ）における「α−１，４結合したグルコース残基」とは、１位及び４位の炭素原子に結合した水酸基のみを介して他のグルコース残基に結合したグルコース残基であり、メチル化分析において、２，３，６−トリメチル−１，４，５−トリアセチルグルシトールとして検出される。また、上記（Ｅ）及び（Ｆ）における「α−１，６結合したグルコース残基」とは、１位及び６位の炭素原子に結合した水酸基のみを介して他のグルコース残基に結合したグルコース残基であり、メチル化分析において、２，３，４−トリメチル−１，５，６−トリアセチルグルシトールとして検出される。

上記（Ｅ）が規定する「α−１，４結合したグルコース残基とα−１，６結合したグルコース残基の比が１：０．６乃至１：４の範囲にある」という要件は、本分岐α−グルカン混合物が、メチル化分析において、２，３，６−トリメチル−１，４，５−トリアセチルグルシトールと２，３，４−トリメチル−１，５，６−トリアセチルグルシトールの比が１：０．６乃至１：４の範囲にあることに基づく。また、上記（Ｆ）が規定する「α−１，４結合したグルコース残基とα−１，６結合したグルコース残基との合計が全グルコース残基の５５％以上を占める」という要件は、本分岐α−グルカン混合物が、メチル化分析において、２，３，６−トリメチル−１，４，５−トリアセチルグルシトールと２，３，４−トリメチル−１，５，６−トリアセチルグルシトールとの合計が部分メチル化グルシトールアセテートの５５％以上を占めることに基づく。通常、澱粉は１位と６位でのみ結合したグルコース残基を有しておらず、かつα−１，４結合したグルコース残基が全グルコース残基中の大半を占めていることから、上記（Ｅ）及び（Ｆ）の要件は本分岐α−グルカン混合物が澱粉とは全く異なる構造を有することを意味するものである。

本分岐α−グルカン混合物は、平均グルコース重合度、及び、重量平均分子量（Ｍｗ）を数平均分子量（Ｍｎ）で除した値（Ｍｗ／Ｍｎ）によっても特徴づけることができる。重量平均分子量（Ｍｗ）及び数平均分子量（Ｍｎ）は、例えば、サイズ排除クロマトグラフィー等を用いて求めることができ、本明細書でいう平均グルコース重合度は、重量平均分子量（Ｍｗ）から１８を減じ、１６２で除して求めることができる。なお、本分岐α−グルカン混合物は、平均グルコース重合度が大きいほど粘度が増し、平均グルコース重合度が小さいほど甘味度が増す点で、通常のグルカンと同様の性質を示す。そのため、本発明の免疫調節剤の実施態様に応じ、要求される粘度及び甘味度に適合するものを適宜選択して用いることができる。また、Ｍｗ／Ｍｎは、１に近いものほど構成する分子のグルコース重合度のばらつきが小さいことを意味し、通常、２０以下であれば実用上問題なく使用できるが、特定のグルコース重合度の分岐α−グルカン混合物の提供が求められる場合には、Ｍｗ／Ｍｎが低い値を示すものほど好ましい。本分岐α−グルカン混合物の平均グルコース重合度は、通常、１０乃至５００であり、Ｍｗ／Ｍｎは、通常、２０以下であり、粘度及び甘味度ともに低く、幅広い分野、態様で利用できる。

本分岐α−グルカン混合物は、上記（Ａ）乃至（Ｃ）の特徴を有する限り、如何なる方法で製造されたものであっても良い。例えば、α−１，４結合を介して連結したグルコース重合度３以上の直鎖状グルカンの非還元末端グルコース残基にα−１，６結合を介して連結したグルコース重合度１以上の分岐構造を導入する作用を有する酵素を澱粉質に作用させて得られる分岐α−グルカン混合物は、本発明の実施において好適に利用することができ、より好適な一例としては、国際公開第ＷＯ２００８／１３６３３１号パンフレットにおいて開示されているα−グルコシル転移酵素を澱粉質に作用させて得られる分岐α−グルカン混合物が挙げられる。また、前記α−グルコシル転移酵素に加え、マルトテトラオース生成アミラーゼ（ＥＣ ３．２．１．６０）などのアミラーゼや、イソアミラーゼ（ＥＣ ３．２．１．６８）などの澱粉枝切り酵素、さらには、シクロマルトデキストリングルカノトランスフェラーゼ（ＥＣ ２．４．１．１９）や、澱粉枝作り酵素（ＥＣ ２．４．１．１８）、特開２０１４−０５４２２１号公報に開示されているような重合度２以上のα−１，４グルカンを澱粉質の内部のグルコース残基にα−１，６転移する活性を有する酵素を併用することも随意である。かくして得られる分岐α−グルカン混合物に、さらに、グルコアミラーゼ等の糖質加水分解酵素やグリコシルトレハロース生成酵素（ＥＣ ５．４．９９．１５）を作用させてもよく、水素添加等による還元処理やサイズ排除クロマトグラフィー等による分画を行っても良い。

本発明の免疫調節剤は、有効成分として本分岐α−グルカン混合物を、ヒトを含む動物に摂取せしめて免疫調節作用が発揮される量含有しておればよく、本発明の免疫調節剤における分岐α−グルカン混合物の含量としては、通常、固形物当たり、１乃至１００質量％、好ましくは１０乃至１００質量％、さらに好ましくは２０乃至１００質量％である。なお、本分岐α−グルカン混合物は目的に応じて粉末状、粒状、顆粒状、液状、ペースト状、クリーム状、タブレット状、カプセル状、カプレット状、ソフトカプセル状、錠剤状、棒状、板状、ブロック状、丸薬状、固形状、ゲル状、ゼリー状、グミ状、ウエハース状、ビスケット状、飴状、チュアブル状、シロップ状、スティック状などの適宜の形態とすることができる。

本明細書でいう免疫調節作用とは、免疫力を上げる作用、及び、免疫バランスを整える作用を意味する。具体的には、ＩｇＡの分泌を促進することによって腸管免疫を増強する作用、抗原特異的なＩｇＥの分泌を抑制する作用、及び、特異抗原に対する過剰な免疫応答を抑制する作用などを意味するものである。

上記腸管免疫とは、大腸や小腸等の腸管の上皮細胞を通して侵入してくる細菌やウイルスを防御する免疫を意味する。当該上皮細胞の表面には粘液があり、粘液は上皮細胞に付着する抗原を常に洗い流している。粘液中にはいくつかの殺菌物質やウイルス不活化物質が含まれており体内侵入の防御に役立っている。特に重要なのは粘液中に分泌されるＩｇＡである。この分泌型抗体は、侵入しようとする細菌やウイルスに結合し、体内への侵入を阻止するため、その分泌量は多い方が好ましい。また、上記抗原特異的なＩｇＥとは、抗原に対して特異的に作用する抗体を意味し、この抗体が多量に産生されると即時型のアレルギー反応を生じて過剰な免疫応答（気道、鼻、皮膚等の炎症）を引き起こすためその産生量は少ない方が好ましい。

因みに、免疫作用には腸内細菌が関与することが種々報告されている。例えば、指原紀宏、腸内細菌学雑誌、第２７巻、第１９７頁−２０２頁、（２０１３年）には、卵白アルブミン（ＯＶＡ）感作させたアレルギーモデルマウスに腸内細菌の一種であるラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属細菌を経口投与することよりＩｇＥ産生が抑制されることが報告されている。また、前述のとおり非特許文献１には、同じく腸内細菌の一種であるバクテロイデス属細菌は、小腸パイエル板細胞に対するＩｇＡ産生を活性化させると報告されている。さらに、本田賢也、腸内細菌学雑誌、第２７巻、第１８７頁−１９６頁、（２０１３年）、及び、本田賢也、実験医学、第３２巻、第１５号、第２３６６頁−２３７１頁、（２０１４年）には、腸内細菌の一種であるクロストリジウムクラスター（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｃｌｕｓｔｅｒ）１４ａの増加が接触性皮膚炎等の炎症抑制に関わるサイトカインの産生量を亢進させることが報告されている。実験の項で後述するように、本発明の免疫調節剤は、その摂取により、ラクトバチルス属細菌、バクテロイデス属細菌及びクロストリジウムクラスター１４ａのいずれの腸内細菌も増加させる作用効果を奏する。したがって、本発明の免疫調節剤は、ラクトバチルス属細菌、バクテロイデス属細菌及び／又はクロストリジウムクラスター１４ａの増加剤としても使用できる。

本発明の免疫調節剤は目的に応じて粉末状、粒状、顆粒状、液状、ペースト状、クリーム状、タブレット状、カプセル状、カプレット状、ソフトカプセル状、錠剤状、棒状、板状、ブロック状、丸薬状、固形状、ゲル状、ゼリー状、グミ状、ウエハース状、ビスケット状、飴状、チュアブル状、シロップ状、スティック状などの適宜の形態とすることができる。また、本発明の免疫調節剤は、有効成分である分岐α−グルカン混合物単独であってもよいが、分岐α−グルカン混合物を含む、飲食物、医薬品、医薬部外品、健康食品、飼料又は餌料などの形態の組成物とすることもできる。分岐α−グルカン混合物を含む組成物には、上記それぞれの形態において許容される成分、例えば、水、アルコール、澱粉、蛋白質、食物繊維、糖質、脂質、ビタミン、ミネラル、着香料、着色料、甘味料、調味料、香辛料、安定剤、酸化防止剤、防腐剤などを配合することができる。例えば、ラクトフェリン、カゼイン、コラーゲン、大豆蛋白質などの蛋白質またはその分解物、ルチン、ヘスペリジン、ケルセチン、イソフラボンなどのフラボノイド又はそれらの配糖体、乳酸カルシウム、グリセロリン酸カルシウムなどのカルシウム塩、ビタミンＡ、ビタミンＢ_１、ビタミンＢ_２、ビタミンＢ_６、ビタミンＢ_１２、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥなどのビタミン類またはその誘導体、ショ糖（スクロース）、マルトース、トレハロース、マルトシルトレハロース、ニゲロース、イソマルトース、ニゲロオリゴ糖、イソマルトオリゴ糖、環状四糖、サイクロデキストリンなどの糖類、グルコサミン、ガラクトサミン、マンノサミンなどのアミノ糖、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、ヘパラン硫酸などのグリコサミノグリカン、ソルビトール、マルチトールなどの糖アルコール、カルシトニン、エストロゲン、蛋白質同化ホルモンなどのホルモン類、感光素１０１号、感光素２０１号、感光素３０１号、感光素４０１号などの感光色素、藍、シソ、中国パセリ、パフィア、鹿角霊芝、アガリクス、メシマコブ、コタラヒム、プロポリス、ローヤルゼリーなどの植物、菌類又はそれらの抽出物、さらには、ビフィズス菌増殖糖質、粉末ミルク、貝殻粉末、珊瑚粉末、蜂蜜、Ｌ−アスコルビン酸２−グルコシドなどを配合することができる。

本発明の免疫調節剤を配合できる飲食物の具体例としては、炭酸飲料、乳飲料、ゼリー飲料、スポーツドリンク、酢飲料、豆乳飲料、鉄含有飲料、乳酸菌飲料、緑茶、紅茶、ココア、コーヒーなどの飲料、米飯、粥、パン、麺類、スープ、味噌汁、ヨーグルトなどの食品、せんべい、あられ、おこし、求肥、餅類、わらび餅、まんじゅう、ういろう、餡類、羊羹、水羊羹、錦玉、ゼリー、ペクチンゼリー、カステラ、ビスケット、クラッカー、パイ、更には、醤油、粉末醤油、味噌、粉末味噌、もろみ、ひしお、ふりかけ、マヨネーズ、ドレッシング、食酢、三杯酢、粉末すし酢、中華の素、天つゆ、麺つゆ、ソース、トマトソース、ケチャップ、焼き肉のタレ、焼き鳥のタレ、から揚げ粉、天ぷら粉、カレールウ、シチューの素、スープの素、ダシの素、複合調味料、みりん、新みりん、テーブルシュガー、コーヒーシュガーなどの各種調味料や調理加工品があげられる。

本発明の免疫調節剤を配合できる医薬品、医薬部外品及び健康食品の具体例としては、インターフェロン−α、−β、−γ、ツモア・ネクロシス・ファクター−α、−β、マクロファージ遊走阻止因子、コロニー刺激因子、トランスファーファクター、インターロイキンＩＩなどのリンホカイン含有液、インシュリン、成長ホルモン、プロラクチン、エリトロポエチン、卵細胞刺激ホルモンなどのホルモン含有液、ＢＣＧワクチン、日本脳炎ワクチン、はしかワクチン、ポリオ生ワクチン、痘苗、破傷風トキソイド、ハブ抗毒素、ヒト免疫グロブリンなどの生物製剤含有液、ペニシリン、エリスロマイシン、クロラムフェニコール、テトラサイクリン、ストレプトマイシン、硫酸カナマイシンなどの抗生物質含有液、チアミン、リボフラビン、Ｌ−アスコルビン酸、肝油、カロチノイド、エルゴステロール、トコフェロールなどのビタミン含有液、ＥＰＡ、ＤＨＡ、アラキドン酸、などの高度不飽和脂肪酸又はそのエステル誘導体、リパーゼ、エステラーゼ、ウロキナーゼ、プロテアーゼ、β−アミラーゼ、イソアミラーゼ、グルカナーゼ、ラクターゼなどの酵素含有液、薬用人参エキス、スッポンエキス、クロレラエキス、アロエエキス、プロポリスエキスなどのエキス類、ウイルス、乳酸菌、酵母などの生菌ペースト、ローヤルゼリーなどの各種生理活性物質含有液があげられる。

本発明の免疫調節剤を配合できる飼料又は餌料の具体例としては、肉牛用飼料、乳牛用飼料、子豚用人工乳、肥育豚用飼料、育雛用飼料、産卵鶏用飼料、ブロイラー用飼料などがあげられる。

本発明の免疫調節剤は、上記のとおりＩｇＡの分泌を促進して腸管免疫を強化することから、経口感染性の疾患の緩和作用を発揮するので、例えばウイルス性や細菌性の下痢症状の緩和に有利に用いられる。さらには、Ａ型肝炎ウイルス、ポリオウイルス、ロタウイルスなどのウイルス、コレラ菌、赤痢菌、腸チフス菌、サルモネラ菌、キャンピロバクター、類鼻疽菌、腸炎ビブリオ菌、ブルセラ菌、大腸菌Ｏ−１５７などの細菌、広節裂頭条虫、横川吸虫、肝吸虫、棘口吸虫、肺吸虫、アニサキス、顎口虫、広東住血線虫、赤痢アメーバ、クリプトスポリジウム、マラリア、ミクロフィラリアなどの寄生虫などが原因となる疾患の緩和にも有利に用いられる。また、本発明の免疫調節剤は、抗原特異的なＩｇＥの分泌を抑制したり、特異抗原に対する過剰な免疫応答を抑制することから、アレルギー性の疾患の緩和作用を発揮するので、例えば、卵、乳、小麦、そば、落花生、あわび、いか、いくら、えび、オレンジ、かに、キウイフルーツ、牛肉、くるみ、さけ、さば、大豆、鶏肉、バナナ、まつたけ、もも、やまいも、りんご、ゼラチンなどによる食物アレルギー、例えば、スギ花粉、ヒノキ花粉、カモガヤ花粉、オオアワガエリ花粉、ハンノキ花粉、ホソムギ花粉、シラカバ花粉、ブタクサ花粉、オオブタクサ花粉、ヨモギ花粉、カナムグラ花粉、セイダカアワダチソウ花粉、前記以外のイネ科植物の花粉などによる花粉症、例えば、ハウスダスト、金属、化学物質などによるアレルギー、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、アレルギー性胃腸炎、喘息、蕁麻疹などのアレルギー症の緩和、さらには、これらの疾患に伴う臨床症状やそれに伴う日常生活の支障の緩和などにも有利に用いられる。

本発明の免疫調節剤の投与又は摂取方法としては、腸内に有効成分である分岐α−グルカン混合物を到達させることができるのならばいかなる方法でもよく、通常、経口又は経管経路が選択される。投与又は摂取量としては、投与方法又は摂取方法、適用する動物の種類などを考慮して適宜決定すればよく、有効成分としての分岐α−グルカン混合物を、１日当たり通常０．００１乃至２０ｇ／ｋｇ体重、好ましくは０．０１乃至１５ｇ／ｋｇ体重、さらに好ましくは０．０２乃至１０ｇ／ｋｇ体重の範囲内で投与又は摂取すればよい。０．００１ｇ／ｋｇ体重未満だと、所期の効果が十分に発揮されず、２０ｇ／ｋｇ体重を超えても量の割に効果が十分に発揮されない可能性がある。

本発明の免疫調節剤は、通常、ヒトに適用されるものであるが、ヒトと同様の免疫系を有する脊椎動物全般に適用することができる。例えば、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジなどの家畜、イヌ、ネコ、サルなどのペット、ニワトリ、アヒル、七面鳥などの家禽、タイ、ブリなどの魚類があげられ、それらの飼育用の飼料や餌料に配合することができる。分岐α−グルカン混合物を含有する飼料や餌料は、高温、低温などの環境ストレスにより免疫力が低下した家畜や家禽がウイルスや細菌等の感染症に罹患しにくくすることができるし、アレルギー症状を緩和することができるので、家畜や家禽の体力消耗を防止し、効率よく生育させることができる。また、例えば、乳牛に対しては搾乳量の低下を防止し、ニワトリに対しては産卵率の低下を防止するという効果も発揮する。

なお、本発明の免疫調節剤は、腸内細菌叢の構成比率を変える効果をも奏する。ヒトの主要な腸内細菌はファーミキューテス門（Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ）細菌とバクテロイデス門（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ）細菌の二つに大別される。これまでの研究により、ヒトにおいて肥満時にはバクテロイデス門細菌の構成比率が低く、ファーミキューテス門細菌の構成比率が高い状態になっており、体重減少に伴い、バクテロイデス門細菌の構成比率が高まり、逆にファーミキューテス門細菌の構成比率が低下することが明らかにされている。加えて、痩せているヒトは太っているヒトと比較して、バクテロイデス門細菌の構成比率が高く、ファーミキューテス門細菌の構成比率が低いことが報告されている（例えば、リー（Ｌｅｙ）ら、ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）、第４４４巻、第１０２２頁−１０２３頁、（２００６年）参照）。さらに、腸内細菌のいない２群のマウスに肥満マウスの腸内細菌叢と通常マウスの腸内細菌叢をそれぞれ移植したところ、肥満マウスの腸内細菌叢を移植された群の体重が通常マウスの腸内細菌叢を移植された群の体重を有意に上回っていたことも報告されている（例えば、ターンバウ（Ｔｕｒｎｂａｕｇｈ）ら、ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）、第４４４巻、第１０２７頁−１０３１頁、（２００６年）参照）。そして、バクテロイデス門細菌に対するファーミキューテス門細菌の比（以下、「Ｆ／Ｂ」という。）を低下させることで、肥満を抑制できる可能性があることから、Ｆ／Ｂを指標に肥満を抑制する物質を探索する研究も行われている（例えば、国際公開ＷＯ２０１０／１２３０３７号パンフレット参照）。実験の項で後述するように、本発明の免疫調節剤は、腸内細菌叢のファーミキューテス門細菌を減少させ、バクテロイデス門細菌を増加させることにより、Ｆ／Ｂを低下させることから、腸内細菌叢の改善剤として、より具体的にはＦ／Ｂ低下剤としても使用することができる。

以下、この発明の実施の形態につき、実験に基づいて説明する。

以下の実験では、国際公開第ＷＯ２００８／１３６３３１号パンフレットの実施例５に開示された方法に従い製造した分岐α−グルカン混合物を使用した。すなわち、前記実施例５に開示された方法に順じて、２７．１質量％トウモロコシ澱粉液化液（加水分解率３．６％）に、最終濃度０．３質量％となるように亜硫酸水素ナトリウムを、また最終濃度１ｍＭとなるように塩化カルシウムを加えた後、５０℃に冷却し、これに、国際公開第ＷＯ２００８／１３６３３１号パンフレットの実施例１に開示された方法で調製したバチルス・サーキュランス ＰＰ７１０（ＦＥＲＭ ＢＰ−１０７７１）由来のα−グルコシル転移酵素の濃縮粗酵素液を固形物１グラム当たり１１．１単位加え、さらに、５０℃、ｐＨ６．０で６８時間作用させた。その反応液を８０℃で６０分間保った後、冷却し、濾過して得られる濾液を常法に従って、活性炭で脱色し、Ｈ型及びＯＨ型イオン樹脂により脱塩して精製し、更に濃縮、噴霧乾燥して分岐α−グルカン混合物粉末を製造し以下の実験に使用した。なお、得られた分岐α−グルカン混合物粉末を、国際公開第ＷＯ２００８／１３６３３１号パンフレットの段落００７９、００８０に記載されたイソマルトデキストラナーゼ消化試験法、α−グルコシダーゼ及びグルコアミラーゼ消化試験法、段落００７６乃至００７８に記載されたメチル化分析法により分析したところ、以下の（ａ）乃至（ｃ）の特徴を有していた。
（ａ）グルコースを構成糖とし、
（ｂ）α−１，４結合を介して連結したグルコース重合度３以上の直鎖状グルカンの一端に位置する非還元末端グルコース残基にα−１，４結合以外の結合を介して連結したグルコース重合度１以上の分岐構造を有し、
（ｃ）イソマルトデキストラナーゼ消化により、イソマルトースを消化物の固形物当たり３５質量％生成した。

また、得られた分岐α−グルカン混合物粉末を国際公開第ＷＯ２００８／１３６３３１号パンフレットの段落００６９乃至００７５に記載された水溶性食物繊維含量を求める高速液体クロマトグラフ法（酵素−ＨＰＬＣ法）により分析したところ、前記分岐α−グルカン混合物粉末は、上記特徴に加えて、下記（ｄ）の特徴を有しており、さらには、上記メチル化分析法による分析結果から、下記（ｅ）及び（ｆ）の特徴を有することが判明した。（ｄ）水溶性食物繊維含量が８３．２質量％であり、
（ｅ）α−１，４結合したグルコース残基とα−１，６結合したグルコース残基の比が１：２．２であり、
（ｆ）α−１，４結合したグルコース残基とα−１，６結合したグルコース残基との合計が全グルコース残基の７２．９％であった。

上記のとおり、前記分岐α−グルカン混合物は、グルコースを構成糖とし、α−１，４結合を介して連結したグルコース重合度３以上の直鎖状グルカンの非還元末端グルコース残基にα−１，４結合以外の結合を介して連結したグルコース重合度１以上の分岐構造を有し、イソマルトデキストラナーゼ消化によりイソマルトースを生成するという特徴を有するものであって、イソマルトデキストラナーゼ消化により、イソマルトースを消化物の固形物当たり５質量％以上７０質量％以下生成し、水溶性食物繊維含量が４０質量％以上であり、及び、α−１，４結合したグルコース残基とα−１，６結合したグルコース残基の比が１：０．６乃至１：４の範囲にあり、α−１，４結合したグルコース残基とα−１，６結合したグルコース残基との合計が全グルコース残基の５５％以上を占めるという本分岐α−グルカン混合物として好適な数値範囲を満たすものであった。

＜実験１：分岐α−グルカン混合物摂取によるＩｇＡ産生増強作用＞
分岐α−グルカン混合物の摂取により腸管免疫が増強されるか否かを、マウスに分岐α−グルカン混合物を摂取させ、糞中のＩｇＡ量を測定することにより調べた。飼料には、米国国立栄養研究所から１９９３年に発表されたマウス・ラットを用いた栄養研究のための標準精製飼料（繁殖用）であるＡＩＮ−９３Ｇ（コーンスターチ４０質量％、カゼイン２０質量％、αコーンスターチ１３．２質量％、スクロース１０質量％、大豆油７質量％、セルロース５質量％、ミネラル混合物３．５質量％、ビタミン混合物１質量％、Ｌ−シスチン０．３質量％、ヒドロキノン０．００１４質量％）を使用した。６週齢雌性ＢＡＬＢ／ｃマウスにＡＩＮ−９３Ｇ飼料を２週間与えて予備飼育した後、新鮮な糞を採取し、採取した糞便５０ｍｇをエッペンドルフチューブに入れ、抽出バッファー（ＰＢＳ＋５０ｍＭ−ＥＤＴＡ＋０．１ｍｇ／ｍｌ−トリプシンインヒビター）を０．８ｍｌ加えて撹拌して糞便中のＩｇＡを抽出し、遠心分離（１０，０００ｒｐｍ、４℃、１０分）して上清を得た。この上清中のＩｇＡ量を、抗ＩｇＡ抗体を用いるＥＬＩＳＡ法（マウスＩｇＡ ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔ、ＢＤ−ＢＩＯＳＣＩＥＮＣＥＳ社製）で測定した。そして各個体の糞中のＩｇＡ量の測定値に基づき、各試験群の糞中のＩｇＡ量が群間で差がないように、マウスを５匹ずつ３群に群分けした。

次いで、各試験群に飲料として水（以下、「対照群」という。）、分岐α−グルカン混合物２％（ｗ／ｖ）水溶液（以下、「分岐α−グルカン混合物２％群」という。）、又は分岐α−グルカン混合物５％（ｗ／ｖ）水溶液（以下、「分岐α−グルカン混合物５％群」という。）を給水瓶を用いて摂取させるとともに、飼料としてＡＩＮ−９３Ｇを自由摂食させた。分岐α−グルカン混合物液の投与の開始時、１週間後、２週間後、３週間後及び４週間後に、マウスをそれぞれ代謝ケージに１６時間入れて糞を採取した。糞５０ｍｇをエッペンドルフチューブに入れて前記と同様に抽出処理し、前記した方法によりＩｇＡ量を測定した。ＩｇＡ量は糞の湿質量１グラム当たりのミリグラムで表し、同一群に属する５匹のマウスの平均値を求めた。その結果を表１に示す。なお、表中の括弧内のパーセント数値はそれぞれの週における対照群に対する相対値を示す。

表１に見られるとおり、対照群では、飼育期間中に糞中のＩｇＡ量はあまり変動しなかった。一方、分岐α−グルカン混合物５％群では、その糞中のＩｇＡ量が、摂取３及び４週間後で対照群との対比においてそれぞれ１４７％及び１９４％と有意に増加した。また、分岐α−グルカン混合物２％群も同様の傾向を示した。このことから、分岐α−グルカン混合物がＩｇＡの分泌を増強する作用を有していることが判明した。マウスを用いた上記結果から、分岐α−グルカン混合物の摂取によりヒトにおいても同様な作用を発揮するものと考えられる。

＜実験２：腸管粘膜におけるＩｇＡ量及び盲腸内容物＞
さらに、腸管粘膜におけるＩｇＡ量を測定することにより腸管免疫の増強作用を調べた。実験１において、水あるいは分岐α−グルカン混合物水溶液を４週間飲水摂取したマウスから小腸、盲腸及び結腸を摘出した。小腸については中心部分の約１０ｃｍを、結腸についてはその全部を用い、生理食塩液で内部を洗浄した後、腸管内部の粘膜組織をカバーガラスで採取し、重量測定した。また盲腸については盲腸内容物を取り出し、その重量を測定した。ＩｇＡ量については、抗ＩｇＡ抗体を用いるＥＩＡ法（マウスＩｇＡ ＥＩＡ Ｋｉｔ、ＢＤ−ＢＩＯＳＣＩＥＮＣＥＳ社製）にて測定し、粘膜重量１グラム当たりの量に換算した。結果を表２に示した。なお、表中の括弧内のパーセント数値は対照群に対する相対値を示す。

表２に示すとおり、対照群の小腸粘膜及び結腸粘膜におけるＩｇＡ量は粘膜重量１グラム当たりそれぞれ０．４７２±０．１２８（ｍｇ/ｇ）及び０．１６３±０．０３５（ｍｇ/ｇ）であった。一方、分岐α−グルカン混合物の摂取により、小腸粘膜及び結腸粘膜におけるＩｇＡ量がいずれも増加し、分岐α−グルカン混合物５％群では、対照群との対比においてそれぞれ１４７％（０．６９４±０．１６８（ｍｇ/ｇ））及び１８３％（０．２９８±０．１１７（ｍｇ/ｇ））といずれも対照群に比べ有意に高かった。また、分岐α−グルカン混合物２％群も同様の傾向を示した。さらに、分岐α−グルカン混合物５％群の盲腸内容物の重量は分岐α−グルカン混合物の摂取により有意に増加したことから、盲腸で腸内細菌数が増加していると推測された。マウスを用いた上記結果から、分岐α−グルカン混合物の摂取によりヒトにおいても同様な作用を発揮するものと考えられる。

＜実験３：血清中の抗体産生＞
分岐α−グルカン混合物の摂取が、アレルギー反応に影響を与えるか否かを、抗体の血清レベルを測定することにより調べた。６週齢雌性ＢＡＬＢ／ｃマウスに通常飼料のＣＥ−２（日本クレア）を与えて１週間予備飼育した後、試験群間で体重に差がないように1群５匹ずつ３群に群分けし、実験１で用いた標準精製飼料（ＡＩＮ−９３Ｇ）を与えた。また飲料は実験１と同様に水、分岐α−グルカン混合物２％（ｗ／ｖ）水溶液、又は分岐α−グルカン混合物５％（ｗ／ｖ）水溶液を給水瓶を用いて与えた。試験飲料を与え始めてから７日後に抗原として２０μｇの卵白アルブミン（ＯＶＡ）（シグマ社販売、グレードＶ）を、免疫アジュバントとして４．５ｍｇのアラム（登録商標『Ｉｍｊｅｃｔ』、ピアス社製）を腹腔内投与することで抗原感作し、その１４日後に再度同様に抗原感作した。２回目の感作から２週間後に、麻酔下でマウスの腹部大静脈より全採血し、遠心分離により血清を分離して分析まで冷凍保存（−８０℃）し、ＯＶＡに対するＩｇＥ量（以下、「抗ＯＶＡ−ＩｇＥ量」という。）、ＯＶＡに対するＩｇＧ１抗体量（以下、「抗ＯＶＡ−ＩｇＧ１量」という。）及び総ＩｇＥ抗体量をＥＩＡ法で測定した。なお、ＩｇＥ抗体量はキャプチャーＥＩＡ法により、ＩｇＧ１抗体量はインダイレクトＥＩＡ法により測定した。標準血清には、抗ＯＶＡマウス血清（ＩｇＥ：１,７６０Ｕ／ｍｌ、ＩｇＧ１：３,０７１,０００Ｕ／ｍｌ）を使用し、作成した検量線により検体の各抗体量を算出した。また、総ＩｇＥ量はサンドイッチＥＩＡ法により測定した。２回目の抗原感作から２週後の血清中の抗ＯＶＡ−ＩｇＥ量、抗ＯＶＡ−ＩｇＧ１量、及び総ＩｇＥ抗体量を表３に示す。なお、表中の括弧内のパーセント数値は対照群に対する相対値を示す。

表３に見られるとおり、２回目の感作から２週間後の血清における抗ＯＶＡ−ＩｇＥ量は、対照群が１５３．１±４７．５（Ｕ/ｍｌ）であったのに対し分岐α−グルカン混合物５％群は、対照群との対比において４７％（７１．８±２８．０（Ｕ/ｍｌ））であったことから、分岐α−グルカン混合物の摂取により、血清における抗ＯＶＡ−ＩｇＥ量は有意に低下することが判明した。また、分岐α−グルカン混合物２％群も同様の傾向を示した。さらに、抗ＯＶＡ−ＩｇＧ１量、総ＩｇＥ量についても対照群と比べ分岐α−グルカン混合物２％及び５％群の方が低下傾向を示したことから、分岐α−グルカン混合物はアラムアジュバントで免疫した抗原（ＯＶＡ）に対する宿主の免疫応答を抑制する作用を有しており、血清における抗ＯＶＡ−ＩｇＥ量を低下させたものと推測される。したがって、分岐α−グルカン混合物は、その摂取により、ＩｇＥ抗体が関与する花粉症や食物アレルギーなどの過剰な免疫応答を緩和する作用を発揮するものと考えられる。マウスを用いた上記結果から、分岐α−グルカン混合物の摂取によりヒトにおいても同様な作用を発揮するものと考えられる。

＜実験４：接触性皮膚炎の抑制＞
分岐α−グルカン混合物の摂取がアレルギー性皮膚炎にどのような影響を及ぼすかを、接触性皮膚炎モデルマウスを用いて調べた。

６週齢雌性ＢＡＬＢ／ｃマウスに通常飼料のＣＥ−２（日本クレア）を与えて１週間予備飼育した後、試験群間で体重に差がないように1群５匹ずつ３群に群分けし、実験１で用いた標準精製飼料（ＡＩＮ−９３Ｇ）を与えた。また飲料は実験１と同様に水、分岐α−グルカン混合物２％（ｗ／ｖ）水溶液、又は分岐α−グルカン混合物５％（ｗ／ｖ）水溶液を給水瓶を用いて与えた。試験飲料を与え始めてから１４日後にバリカンを使用して麻酔下で、マウスの腹部を剃毛し、０．５％ジニトロフルオロベンゼン（ＤＮＦＢ、東京化成製）溶液を２５μｌ腹部に塗布して感作した。なおＤＮＦＢはアセトンとオリーブ油（４：１，ｖ／ｖ）の混合液に溶解して用いた。腹部感作５日後に耳介厚を測定（０時間）し、そして無麻酔下で０．２５％ＤＮＦＢ溶液８μｌを右耳に塗布して皮膚炎を惹起した。塗布後、２４，４８，７２，９６時間後に皮膚炎による耳の腫れの程度をダイアルシックネスゲージ、Ｇ−1Ａ型（尾崎製作所製）を用いて測定することにより評価し、アレルギー性皮膚炎の指標とした。測定した耳介厚より次式により耳介肥厚を計算し、表４に示した。なお、表中の括弧内のパーセント数値はそれぞれの時間における対照群に対する相対値を示す。

表４に見られるとおり、各試験群とも耳介肥厚は、ＤＮＦＢ塗布４８時間後に最も高い値を示しその後減少した。対照群のＤＮＦＢ塗布２４時間後、及び４８時間後の耳介肥厚がそれぞれ１１１±３４（μｍ）及び２２５±１４（μｍ）であったのに対し、分岐α−グルカン混合物２％群の耳介肥厚は、ＤＮＦＢ塗布２４時間後、及び４８時間後で対照群との対比においてそれぞれ５３％（５９±３６（μｍ））及び４０％（９１±２６（μｍ））、分岐α−グルカン混合物５％群の耳介肥厚は、それぞれ５５％（６１±３１（μｍ））及び４９％（１１０±３３（μｍ））と有意に低い値を示した。この耳介肥厚は接触性皮膚炎反応の指標として用いたものであり、皮膚アレルギー反応モデルであるため、分岐α−グルカン混合物は、その摂取により、接触性皮膚炎やアトピー性皮膚炎などの皮膚アレルギー反応を緩和する作用を発揮するものと考えられる。マウスを用いた上記結果から、分岐α−グルカン混合物の摂取によりヒトにおいても同様な作用を発揮するものと考えられる。

＜実験５：分岐α−グルカン混合物の摂取が腸内細菌叢に及ぼす影響＞
本実験では、文献により免疫への関与が示唆されている、ラクトバチルス属細菌、バクテロイデス属細菌、及びクロストリジウムクラスター１４ａの３種類の菌群をターゲットとして、分岐α−グルカン混合物の摂取が、腸内におけるこれら菌種・菌群の菌数に及ぼす影響をマウスを用いて調べた。また、分岐α−グルカン混合物の摂取が、ファーミキューテス門細菌及びバクテロイデス門細菌の２種類の菌数、並びに、バクテロイデス門細菌に対するファーミキューテス門細菌の比（Ｆ／Ｂ）に及ぼす影響についても調べた。

実験１において、水あるいは分岐α−グルカン混合物水溶液を４週間飲水摂取させたマウスから採取した盲腸内容物よりＤＮＡ抽出を行った。抽出したＤＮＡを鋳型として、菌種・菌群のｒＲＮＡ遺伝子に含まれる特異的な配列部分を標的とするプライマーを用いてＰＣＲを行った後、その増幅産物を検出する定量的ＰＣＲ法（例えば、マツイ（Ｍａｔｓｕｉ）ら、アプライド・アンド・エンバイロメンタル・マイクロバイオロジー（Ａｐｐｌｉｅｄ ａｎｄ Ｅｎｖｉｒｏｍｅｎｔａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ）、第６８巻、第１１号、第５４４５頁−５４５１頁（２００２年）参照）によりそれぞれの細菌数を測定した。飲料として水を摂取させた対照群における上記５種類のそれぞれについての菌数を１００％とした時の、分岐α−グルカン混合物２％群及び分岐α−グルカン混合物５％群におけるそれぞれの相対菌数（％）を算出し、表５及び６に示した。また、表６には、各群のそれぞれについてファーミキューテス門細菌（Ｆ）の細菌数をバクテロイデス門細菌（Ｂ）の細菌数で除することにより算出したＦ／Ｂの値も併せて示した。

表５に見られるとおり、分岐α−グルカン混合物２％群では、対照群と比較して、ラクトバチルス属細菌が２．７倍、バクテロイデス属細菌が９．９倍、及びクロストリジウムクラスター１４ａが１８．１倍菌数が増加していた。また、分岐α−グルカン混合物５％群では、対照群と比較して、ラクトバチルス属細菌が２．６倍、バクテロイデス属細菌が１４．４倍、及びクロストリジウムクラスター１４ａが２８．５倍菌数が増加していた。

表５において分岐α−グルカン混合物を摂取したマウスの腸内のラクトバチルス属細菌、バクテロイデス属細菌、及びクロストリジウムクラスター１４ａの菌数が増加していたことから、実験１及び２の分岐−グルカン混合物の摂取によるＩｇＡ産生量の増加効果、実験３における分岐α−グルカン混合物の摂取によるＩｇＥ産生量の抑制効果、並びに、実験４における接触性皮膚炎の抑制効果は、分岐α−グルカン混合物の摂取によるマウスの腸内でのラクトバチルス属細菌、バクテロイデス属細菌、及びクロストリジウムクラスター１４ａの菌数の増加に起因する可能性があることが示唆された。マウスを用いた上記結果から、分岐α−グルカン混合物の摂取によりヒトにおいても同様な作用を発揮するものと考えられる。

また、表６に見られるとおり、分岐α−グルカン混合物２％群では、対照群と比較して、ファーミキューテス門細菌が５分の２に減少し、バクテロイデス門細菌が１．７倍に増加した。分岐α−グルカン混合物５％群では、対照群と比較して、ファーミキューテス門細菌が２分の１に減少し、バクテロイデス門細菌が２．４倍に増加した。一方、Ｆ／Ｂは、対照群が２．０２±０．４６であったのに対し、分岐α−グルカン混合物２％群、及び分岐α−グルカン混合物５％群はそれぞれ０．４２±０．１４、及び０．４０±０．１０であった。

この結果は、分岐α−グルカン混合物を摂取すると、腸内細菌叢のファーミキューテス門細菌が減少し、バクテロイデス門細菌が増加することにより、Ｆ／Ｂが低下することを示すものであり、分岐α−グルカン混合物が、腸内細菌叢の改善剤として使用できることを物語っている。また、前記のとおり、Ｆ／Ｂを低下させることで、肥満を抑制できる可能性があるという報告があることから、分岐α−グルカン混合物は、肥満を抑制する目的で使用できる蓋然性が高い。マウスを用いた上記結果から、分岐α−グルカン混合物の摂取によりヒトにおいても同様な作用を発揮するものと考えられる。

以下、実施例により本発明を具体的に説明するが、本発明は何ら実施例の記載により限定されるものではない。

＜免疫調節剤＞
国際公開第ＷＯ２００８／１３６３３１号パンフレットの実施例５に開示された方法に従い、分岐α−グルカン混合物粉末を調製した。なお、得られた分岐α−グルカン混合物粉末は、以下の（ａ）乃至（ｇ）の特徴を有していた。
（ａ）グルコースを構成糖とし、
（ｂ）α−１，４結合を介して連結したグルコース重合度３以上の直鎖状グルカンの一端に位置する非還元末端グルコース残基にα−１，４結合以外の結合を介して連結したグルコース重合度１以上の分岐構造を有し、
（ｃ）イソマルトデキストラナーゼ消化により、イソマルトースを消化物の固形物当たり３５質量％生成し、
（ｄ）水溶性食物繊維含量が８３．２質量％であり、
（ｅ）α−１，４結合したグルコース残基とα−１，６結合したグルコース残基の比が１：２．２であり、
（ｆ）α−１，４結合したグルコース残基とα−１，６結合したグルコース残基との合計が全グルコース残基の７２．９％であり、
（ｇ）平均グルコース重合度が３１であり、Ｍｗ／Ｍｎが２．０である。

本品は、免疫調節剤として利用できる。また、本品は、室温下でも吸湿、変色することなく、１年以上に亘って安定である。

＜免疫調節剤＞
国際公開第ＷＯ２００８／１３６３３１号パンフレットの実験２−２に開示された方法に従い、固形分濃度３０質量％の分岐α−グルカン混合物を調製し、その後、常法に従って噴霧乾燥して分岐α−グルカン混合物粉末を得た。なお、得られた分岐α−グルカン混合物粉末は、以下の（ａ）乃至（ｇ）の特徴を有していた。
（ａ）グルコースを構成糖とし、
（ｂ）α−１，４結合を介して連結したグルコース重合度３以上の直鎖状グルカンの一端に位置する非還元末端グルコース残基にα−１，４結合以外の結合を介して連結したグルコース重合度１以上の分岐構造を有し、
（ｃ）イソマルトデキストラナーゼ消化により、イソマルトースを消化物の固形物当たり２７．２質量％生成し、
（ｄ）水溶性食物繊維含量が４１．８質量％であり、
（ｅ）α−１，４結合したグルコース残基とα−１，６結合したグルコース残基の比が１：０．６であり、
（ｆ）α−１，４結合したグルコース残基とα−１，６結合したグルコース残基との合計が全グルコース残基の８３．０％であり、
（ｇ）平均グルコース重合度が４０５であり、Ｍｗ／Ｍｎが１６．２である。

本品は免疫調節剤として利用できる。また、本品は、室温下でも吸湿、変色することなく、１年以上に亘って安定である。

＜免疫調節剤＞
国際公開第ＷＯ２００８／１３６３３１号パンフレットの実施例６に開示された方法に従い、分岐α−グルカン混合物粉末を調製した。なお、得られた分岐α−グルカン混合物粉末は、以下の（ａ）乃至（ｇ）の特徴を有していた。
（ａ）グルコースを構成糖とし、
（ｂ）α−１，４結合を介して連結したグルコース重合度３以上の直鎖状グルカンの一端に位置する非還元末端グルコース残基にα−１，４結合以外の結合を介して連結したグルコース重合度１以上の分岐構造を有し、
（ｃ）イソマルトデキストラナーゼ消化により、イソマルトースを消化物の固形物当たり４０．６質量％生成し、
（ｄ）水溶性食物繊維含量が７７．０質量％であり、
（ｅ）α−１，４結合したグルコース残基とα−１，６結合したグルコース残基の比が１：４であり、
（ｆ）α−１，４結合したグルコース残基とα−１，６結合したグルコース残基との合計が全グルコース残基の６７．９％であり、
（ｇ）平均グルコース重合度が１８であり、Ｍｗ／Ｍｎが２．０である。

本品は、免疫調節剤として利用できる。また、本品は、室温下でも吸湿、変色することなく、１年以上に亘って安定である。

＜免疫調節剤＞
トウモロコシ澱粉液化液に、さらにマルトテトラオース生成アミラーゼを固形物１グラム当たり２単位添加した以外は、国際公開第ＷＯ２００８／１３６３３１号パンフレットの実施例５に開示された方法に従い、分岐α−グルカン混合物粉末を調製した。なお、得られた分岐α−グルカン混合物粉末は、以下の（ａ）乃至（ｇ）の特徴を有していた。
（ａ）グルコースを構成糖とし、
（ｂ）α−１，４結合を介して連結したグルコース重合度３以上の直鎖状グルカンの一端に位置する非還元末端グルコース残基にα−１，４結合以外の結合を介して連結したグルコース重合度１以上の分岐構造を有し、
（ｃ）イソマルトデキストラナーゼ消化により、イソマルトースを消化物の固形物当たり４１．９質量％生成し、
（ｄ）水溶性食物繊維含量が６９．１質量％であり、
（ｅ）α−１，４結合したグルコース残基とα−１，６結合したグルコース残基の比が１：２．４であり、
（ｆ）α−１，４結合したグルコース残基とα−１，６結合したグルコース残基との合計が全グルコース残基の６４．２％であり、
（ｇ）平均グルコース重合度が１３であり、Ｍｗ／Ｍｎが２．０である。

本品は、免疫調節剤として利用できる。また、本品は、室温下でも吸湿、変色することなく、１年以上に亘って安定である。

＜免疫調節剤＞
実施例１に開示された方法で得られた分岐α−グルカン混合物粉末にアミログルコシダーゼ（グルコアミラーゼ）を作用させ、分解されなかった成分をゲル濾過クロマトグラフィーを用いて分取した。その後、常法に従って精製及び噴霧乾燥して分岐α−グルカン混合物粉末を調製した。なお、得られた分岐α−グルカン混合物粉末は、以下の（ａ）乃至（ｇ）の特徴を有していた。
（ａ）グルコースを構成糖とし、
（ｂ）α−１，４結合を介して連結したグルコース重合度３以上の直鎖状グルカンの一端に位置する非還元末端グルコース残基にα−１，４結合以外の結合を介して連結したグルコース重合度１以上の分岐構造を有し、
（ｃ）イソマルトデキストラナーゼ消化により、イソマルトースを消化物の固形物当たり２１質量％生成し、
（ｄ）水溶性食物繊維含量が９４．４質量％であり、
（ｅ）α−１，４結合したグルコース残基とα−１，６結合したグルコース残基の比が１：１．９であり、
（ｆ）α−１，４結合したグルコース残基とα−１，６結合したグルコース残基との合計が全グルコース残基の６４％であり、
（ｇ）平均グルコース重合度が２２であり、Ｍｗ／Ｍｎが１．７である。

本品は、免疫調節剤として利用できる。また、本品は、室温下でも吸湿、変色することなく、１年以上に亘って安定である。

＜経口流動食＞
下記の成分を配合し、経口流動食を得た。
（配合）
実施例１の方法で得た ２質量部
分岐α−グルカン混合物粉末
脱脂粉乳 ４３質量部
全粉乳 １２質量部
水飴 ４１質量部
グルコース ３質量部
ビタミンＡ 適量
ビタミンＤ 適量
塩酸チアミン 適量
リボフラビン 適量
塩酸ピリドキシン 適量
シアノコバラミン 適量
酒石酸水素コリン 適量
ニコチン酸アミド 適量
パントテン酸カルシウム 適量
Ｌ−アスコルビン酸 適量
酢酸トコフェロール 適量
硫酸鉄 適量
リン酸水素カルシウム 適量
アラビアゴム 適量
本品を適量の水に溶解し、経口摂取すれば、通常の食事の摂取ができない患者の栄養補給が可能な上に、免疫機能が調節され、患者の良好な回復が期待できる。

＜健康食品＞
下記の成分を均一に混合した後、直径６ｍｍの杵を装着した打錠機により打錠して、１錠が約２００ｍｇの錠剤を得た。本品は風味良好であり、摂取すれば免疫機能を調節するので、健康を維持、増進する健康食品として有用である。
（配合）
実施例２の方法で得た ４０質量部
分岐α−グルカン混合物粉末
天然珊瑚粉末 ２０質量部
乳酸カルシウム １０質量部
粉末ヨーグルト １０質量部
グアーガム １２質量部
アスコルビン酸２−グルコシド ３質量部
（商品名『アスコフレッシュ』、株式会社林原）
糖転移ヘスペリジン ０．５質量部
(商品名『林原ヘスペリジンＳ』、株式会社林原）

＜健康食品＞
下記の材料を配合し、常法にしたがってチーズクラッカーを製造した。
（配合）
小麦粉 １００質量部
油脂 ９質量部
麦芽エキス １．３質量部
重曹 ０．６質量部
チーズパウダー １３質量部
実施例３の方法で得た ２質量部
分岐α−グルカン混合物粉末
砂糖 ２質量部
食塩 １質量部
炭酸アンモニウム ０．６質量部
スパイス 適量
水 ３３質量部
本品は、風味良好であり、経口摂取すれば免疫機能を調節するので、健康を維持、増進する健康食品として有用である。

＜健康食品＞
ヨーグルト１００質量部、実施例４の方法で得た分岐α−グルカン混合物粉末５０質量部、トレハロース１０質量部、ヨーグルトフレーバー０．２５質量部及びレモンエッセンス０．１質量部に水を加えて全体を１，０００質量部とする配合で、常法に従って、ヨーグルト飲料を製造した。本品は、風味が豊かで、かつ、腸内の菌叢を整える整腸機能に優れたヨーグルトであり、免疫機能を調節できるので、健康を維持・増進する健康食品として有用である。

＜産卵鶏用飼料＞
下記成分の市販の産卵鶏用飼料に、実施例５の方法で得た分岐α−グルカン混合物粉末を、飼料中のα−グルカン混合物含量が０．５％（ｗ／ｗ）になるように混合して、α−グルカン混合物含有鶏用飼料を製造した。
（配合）
トウモロコシ ５４．８質量部
大豆粕 １２．６質量部
菜種粕 ３．２質量部
マイロ ７．０質量部
炭酸カルシウム ８．５質量部
グルテンミール ３．５質量部
グルテンフィード ２．０質量部
魚粕 ２．５質量部
動物性油脂、食塩、ビタミン、ミネラル類など ５．９質量部
本品は、ニワトリ用の飼料として有用であり、特に、高温、低温などの環境ストレスにより免疫力の低下したニワトリに対して腸管免疫を増強させるので、夏期、冬期を問わず、ウイルスや細菌等の感染症を予防し、ニワトリの健康を維持・増進することができる。したがって、ニワトリの体力消耗を防止し、産卵率の低下を防止することができる。

＜求肥＞
もち粉３６重量部、実施例１の方法で得た分岐α−グルカン混合物粉末４重量部を水６０重量部で溶いて木枠に濡れ布巾を敷いたものに流し込み、これを１００℃で２０分間蒸した後、これに水飴６０重量部及び砂糖２０重量部を加えて充分に捏ねた後に成形し、求肥を得た。本品は、風味良好であり、α−グルカン混合物を含んでいるため免疫機能を調節できるので、健康を維持・増進する食品として有用である。

＜米飯＞
市販の無洗米（きらら３９７）２合（３００ｇ）を手早く洗米し、十分量の水で室温にて３０分浸漬した。得られた米の水分をザルで切り、実施例２の方法で得た分岐α−グルカン混合物粉末を１５ｇ添加混合して加水し、総重量を８１０ｇとして、家庭用の電気炊飯器を用いて炊飯米を得た。本品は、風味良好であり、α−グルカン混合物を含んでいるため免疫機能を調節できるので、健康を維持・増進する食品として有用である。

上述のとおり、本発明の免疫調節剤は、副作用がなく、日常的に経口摂取することによって、免疫機能を調節するので、食中毒などの感染症、アレルギー症、自己免疫疾患などの緩和に効果的である。また、ラクトバチルス属細菌、バクテロイデス属細菌、及びクロストリジウムクラスター１４ａなどの有用な腸内細菌を増加させ、腸内環境を改善するので、健康の維持、増進に適している。

Claims (10)

1. 下記（Ａ）乃至（Ｃ）の特徴を有する分岐α−グルカン混合物を有効成分として含有する免疫調節剤：
   （Ａ）グルコースを構成糖とし、
   （Ｂ）α−１，４結合を介して連結したグルコース重合度３以上の直鎖状グルカンの一端に位置する非還元末端グルコース残基にα−１，４結合以外の結合を介して連結したグルコース重合度１以上の分岐構造を有し、
   （Ｃ）イソマルトデキストラナーゼ消化により、イソマルトースを生成する。
2. 前記分岐α−グルカン混合物が、イソマルトデキストラナーゼ消化により、イソマルトースを消化物の固形物当たり５質量％以上７０質量％以下生成する分岐α−グルカン混合物であることを特徴とする請求項１記載の免疫調節剤。
3. 前記分岐α−グルカン混合物が、下記（Ｄ）の特徴を有する分岐α−グルカン混合物である請求項１又は２記載の免疫調節剤：
   （Ｄ）高速液体クロマトグラフ法（酵素−ＨＰＬＣ法）により求めた水溶性食物繊維含量が４０質量％以上である。
4. 前記分岐α−グルカン混合物が、下記（Ｅ）及び（Ｆ）の特徴を有する分岐α−グルカン混合物である請求項１乃至３のいずれかに記載の免疫調節剤：
   （Ｅ）α−１，４結合したグルコース残基とα−１，６結合したグルコース残基の比が１：０．６乃至１：４の範囲にある；及び
   （Ｆ）α−１，４結合したグルコース残基とα−１，６結合したグルコース残基との合計が全グルコース残基の５５％以上を占める。
5. 腸管免疫を増強することを特徴とする請求項１乃至４のいずれかに記載の免疫調節剤。
6. 腸管免疫の増強が、腸管内におけるイムノグロブリンＡの分泌量の増加に起因することを特徴とする請求項５記載の免疫調節剤。
7. アレルギー症を緩和することを特徴とする請求項１乃至４のいずれかに記載の免疫調節剤。
8. アレルギー症が花粉症、食物アレルギー、接触皮膚炎又はアトピー性皮膚炎であることを特徴とする請求項７記載の免疫調節剤。
9. アレルギー症の緩和が、イムノグロブリンＥの産生量の抑制に起因することを特徴とする請求項７記載の免疫調節剤。
10. 請求項１乃至９のいずれかに記載の免疫調節剤を含有せしめた飲食品、医薬品、飼料又は餌料。