JPWO2016092768A1 - 低カロリー化果汁或いは野菜汁飲料 - Google Patents
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Abstract
Description
本発明の低カロリー化果汁或いは野菜汁の製造に用いられる果汁の原料としては、蔗糖を含む果汁であればよく、オレンジ(みかんを含む)、グレープフルーツ、リンゴ、ブドウ、ピーチ、イチゴ、バナナ、パイナップル、マンゴーの果汁、その他果実飲料品質表示基準に記載されている果汁を挙げることができ、特に好ましい果汁の原料としては、オレンジ、グレープフルーツ、リンゴである。また、野菜汁の原料としては、蔗糖を含む野菜汁ならよく、ニンジン、ホウレンソウ、玉ねぎ、トマト、セロリー、パプリカ、カボチャ、コーン等の野菜汁を挙げることができ、特に好ましい野菜汁の原料としては、ニンジンである。
本発明の低カロリー化果汁或いは野菜汁飲料の製造に用いられる粗酵素剤は、蔗糖からフラクトオリゴ糖を生成させる活性を有し、且つ、ペクチナーゼ活性を実質的に有さないフラクトシルトランスフェラーゼ粗酵素剤である。ここで、「ペクチナーゼ活性を実質的に有さない」とは、果汁或いは野菜汁を処理した場合に顕著な清澄化作用または粘度低下作用を引き起こす活性を有さないことを指し、具体的には本明細書実施例中の試験1に記載のオレンジ果汁を用いた酵素処理試験を行った場合に、フラクトオリゴ糖を糖組成比10%以上生成し、且つ、処理後濁度が処理前に対して35%以上維持される場合にペクチナーゼ活性を実質的に有さないとする。また、ここで「粗酵素剤」とは、食品の工業生産用に販売される酵素剤で一般的に採用される、比較的安価且つ安全な試薬や濾過膜分離等の分離抽出手段により得られる酵素剤を意味し、液体クロマトグラフィー等による分画精製といった高度且つ高コストな分離精製手段を用いて調製された酵素剤は含まない。本発明の粗酵素剤は、本明細書実施例中の試験1に開示される製造方法に従って調製することができる。
本発明で低カロリー化果汁或いは野菜汁飲料の製造に用いられる粗酵素剤の処理は、果汁或いは野菜汁中の蔗糖1gあたり1U以上を目安に添加する。好ましくは5U/1g蔗糖、特に好ましくは10U/1g蔗糖である。粗酵素剤添加後25℃で24時間を目安に反応させるが、温度と時間は果汁或いは野菜汁の種類や酵素添加量にあわせ適宜調整が可能であり、高温での長時間反応は糖の分解を招くことに留意する。ミックスジュースなどのように2以上の果汁或いは野菜汁を用いる場合にはそれぞれを粗酵素剤処理したのちに混合する場合、それぞれを混合したのちにまとめて粗酵素剤処理する場合のいずれの方法も用いることができる。濃縮果汁或いは野菜汁に処理する場合には、濃縮前、濃縮中、濃縮後のいずれのタイミングで処理しても良い。
本発明の低カロリー化果汁或いは野菜汁は、果汁或いは野菜汁を、ペクチナーゼ活性を実質的に有さないフラクトシルトランスフェラーゼ粗酵素剤で処理することにより得られ、フラクトオリゴ糖を含有し、果汁或いは野菜汁の香味及び汁液特性を維持した低カロリー化果汁或いは野菜汁である。本発明の低カロリー化果汁或いは野菜汁中のフラクトオリゴ糖含量は、果汁或いは野菜汁の種類とその蔗糖含量、粗酵素剤の処理程度により調製できるが、フラクトオリゴ糖の有効量は3〜8g/dayと言われており、整腸作用等の健康機能性付与の観点からは、ジュースのBrixを果実飲料品質表示基準または果実飲料の日本農林規格に従って100%に調節した時に0.6g/100ml以上、好ましくは1.2g/100ml以上となるよう含有させると良い。
本発明における果汁或いは野菜汁飲料は、本発明の低カロリー化果汁或いは野菜汁を含有する飲料であり、本発明の低カロリー化果汁或いは野菜汁からなる飲料を含む。好ましくは、本発明の低カロリー化果汁或いは野菜汁を100%果汁或いは100%野菜汁相当のBrix値に調整した、100%の果汁或いは野菜汁飲料を挙げることができる。また、各種糖アルコール、スクラロース或いはアセスルファムK等の低カロリーまたはノンカロリーの高甘味度甘味料の他、酸味料、増粘剤等飲料に添加可能な食品添加物を適宜添加しても良い。PETボトルや紙容器等に充填・殺菌された容器詰飲料とすることもできる。原料果汁或いは野菜汁に酵素処理を行う以外、従来の果汁或いは野菜汁飲料と製法に違いは無いため、「ソフトドリンクス」(株式会社光琳)等関連書籍を参照して製造することができる。
フラクトシルトランスフェラーゼ活性を有する各種粗酵素剤を調製し、果汁に処理し、その酵素活性や処理済果汁の汁液特性に与える影響を比較した。
特許文献4で望ましいFTase活性を有する粗酵素剤として記載のある市販の粗酵素剤Pectinex Urtra SP−L(ノボザイム社)を入手した(粗酵素剤SP−L)。次に、特許文献3でフラクトシルトランスフェラーゼ(FTase)生産株として記載されており、実施例に使われているAspergillus・niger IAM2020株を入手した(この株はJCMに移管されており、JCM5546として保管されている。ここでは2020株と表記する。)。この2020株を特許文献3の実施例5に記載の方法に準じて培養および抽出し、粗酵素剤2020株を得た。すなわち、ペプトン1w/v%、 肉エキス1w/v%、NaCl0.5w/v%を含む溶液をオートクレーブし培養液とした(培地(2):特許に記載の培地No.)。ここに植菌し、30℃で9日間静置培養した。菌体を回収し、湿重量の4倍のPBSを添加し、ホモジェナイザーで菌を破砕した。これを2日放置し、消化液を限外濾過フィルターで5倍に濃縮し、これを粗酵素液とした。また、フラクトオリゴ糖含有シロップの製造方法を開示した特許第3173805号公報で用いられているオウレオバシジウム属菌(FERM−P No.4257として寄託されている)から、同特許公報に記載の培養・抽出方法を用いて粗酵素剤ABを得た。
10%の蔗糖を含有するpH5.0の40mMの酢酸ナトリウム緩衝液に調製・入手した各粗酵素を添加し、40℃で反応させた。1時間後に酵素を熱失活させ、HPLCで糖組成を分析した。転移活性(Ut)はケストース及びニストースの生成量、分解活性(Uh)はフルクトースの生成量を測定して算出した。Uの定義は一般的な定義である、1分あたり1μmolの分子を生成する酵素活性とした。
濃縮オレンジ果汁(Brix33)100gに対して準備した計4種のFTase粗酵素剤SP−L、2020株、ABをそれぞれ100U添加し、25℃で24時間反応させた。反応後、酵素を熱失活させ、Brix11に調整して各種測定を行った(粗酵素剤SP−L、2020株、AB)。酵素を添加していない対象区も設けた。
各サンプル果汁或いは野菜汁中に含まれる糖の組成はHPLC(島津製作所)で以下の条件で分析した。すなわち、各サンプル汁液を水で希釈し、糖が2%程度含まれる溶液とした。遠心上清をフィルター濾過し、濾液をアセトニトリルと混合し、50%アセトニトリル溶液とした。これをHPLCで分析することにより糖濃度を算出した。HPLC分析のカラムはAsahipakNH2P−50 4E (Shodex) を使用し、カラム温度は30℃、流速は1 ml/min、移動相は70%アセトニトリル溶液とした。糖の検出には示差屈折率検出器を用いた。
酵素反応で得られた果汁を4℃で2日間放置し、外観の判定(清澄化有無)を行った。また、濁度は各サンプルを常温にて800gで10分間遠心し、上清のOD650を分光光度計(GeneQuant 1300、GE社)でODを測定した後、カオリン濁度標準液1000度(和光純薬工業)の希釈液のOD測定から得られたOD-濁度補正式に基づき濁度に変換した。
外観観察により、清澄化が明らかに認められる場合は「有」、Controlと比較して区別がつかない場合は「無」として判定した。
結果を表1に示す。また、反応後各サンプルの清澄化有無について図1に示す。
試験1において、果汁或いは野菜汁への適用が特に好適な、ペクチナーゼ活性を実質的に有さないFTase粗酵素剤が存在することが明らかとなった。そこで保有菌株から同様の粗酵素剤が得られるか検討した。
保有するアスペルギルス属菌各菌株について、試験1の粗酵素剤ABと同様に、特許第3173805号公報に記載の培養・抽出方法(菌体を培養後、細胞膜破壊し、更に、限外ろ過により濃縮・精製する)を用いてそれぞれ粗酵素剤を得た。得られた粗酵素剤を用いて、試験1と同一の方法でオレンジ果汁に反応させ、糖組成、濁度の測定および清澄化の有無を確認した。
検討の結果、Aspergullus japonicusの1菌株由来の粗酵素剤AJが、清澄化を起こさない、すなわち実質的にペクチナーゼ活性を有さず、粗酵素剤ABと同様の高いFTase活性を持つことが判明し、以後の試験には粗酵素剤ABとともに用いることとした。本試験の結果から、上記手順によるスクリーニングにより、様々な菌株から実質的にペクチナーゼ活性を有しないフラクトシルトランスフェラーゼ活性を有する粗酵素剤を選抜できることが示された。
オレンジ果汁以外の果汁について各FTase粗酵素剤を評価した。
試験1および2で用いた「SP−L」、「AJ」、「AB」の計3種粗酵素剤を、Brix33に調整された濃縮オレンジ、濃縮リンゴ、濃縮グレープフルーツ果汁にそれぞれ1U/mlとなるように添加し、25℃で24時間反応させた。90℃、10分間置き酵素を失活させたのち、それぞれの液が100%相当になるようにBrixを調整(オレンジ=Brix11、リンゴ=Brix10、グレープフルーツ=Brix9)し、試験1と同様に糖組成および濁度を測定し、清澄化の有無を確認した。
いずれの果汁でも表2の通りオリゴ糖が生成した。ただし、生成するオリゴ糖の量はそれぞれの果汁が元来含んでいる蔗糖の割合に依存し果汁間で差がみられた。また、粗酵素剤「SP−L」を用いた場合はオレンジ果汁、グレープフルーツ果汁、リンゴ果汁全てで清澄化が起こったのに対して、粗酵素剤AJおよびABを用いた場合は濁度の多少の減少は観察されたが、外観上清澄化は確認できないレベルであった。
試験1で用いた粗酵素剤「SP−L」はペクチナーゼとして市販されている。本粗酵素剤を用いてペクチナーゼ処理程度の異なる各種果汁を調製し、どの程度の濁度までであれば外観上許容されるか清澄化程度の関係について試験を実施した。
試験1で用いた粗酵素剤「SP−L」を1U/mlとなるようBrix33に調整した濃縮オレンジ果汁、濃縮グレープフルーツ果汁及び濃縮リンゴ果汁にそれぞれ添加し、25℃で24時間反応させた。90℃、10分間置き酵素を失活させたのち、それら処理済果汁と非酵素処理果汁(Control)とを、100%果汁相当Brixまで希釈し、表3にある通り7000μl:0μlから0μl:7000μlまで複数段階で混合し、高から低までの濁度段階を作成し、それぞれの濁度を測定(実測濁度)するとともに、Controlに対する濁度の比(濁度維持率:%)を算出した。また、清澄化の程度を◎:清澄化していないか目立たない、○:清澄化がよく抑えられている、△:清澄化が抑えられている、×:清澄化している、の4段階で評価した。
オレンジ果汁は他2種果汁と比較してControlの濁度が高く、Controlに対する濁度維持率の許容範囲が幾分広いものの、果汁の種類を問わず、非酵素処理果汁に対する濁度維持率が35%以上の場合に清澄化が認められるものの抑えられており、程度が、50%以上では清澄化がよく抑えられており、70%以上では清澄化していないか目立たなかった。これら試験区では非酵素処理の果汁と比較しても汁液特性が維持されていると判断できる。清澄化と濁度の関係についての外観状況についての写真を図2に示す。図2中、[2−A]はオレンジ果汁について、[2−B]はグレープフルーツ果汁について、及び、[2−C]はリンゴ果汁について、それぞれの実測濁度における清澄化の外観状況についての写真を示す。
FTase粗酵素剤により処理した果汁の外観及び官能評価について以下の通り試験を実施した。
粗酵素剤は、SP−L及び、SP−Lと同じくFTase活性とペクチナーゼ活性を併せ持つ「Viscozyme」(ノボザイム社、以下粗酵素剤Viscoとする)、及び、自家製造の粗酵素剤AJ及び粗酵素剤AB、以上計4種を使用した。各粗粗酵素剤を1U/mlとなるようにそれぞれBrix33の濃縮オレンジ果汁120mlに添加し、フルクトオリゴ糖の濃度が7〜8%程度(カテゴリーA)、12〜15%%程度(カテゴリーB)、17〜20%程度(カテゴリーC)となるように25℃で4〜24時間の間でそれぞれ3段階の反応時間で反応させた。それぞれ100%果汁相当になるよう、Brix11に水で希釈し、試飲サンプル計12サンプルとした。サンプルは瓶に入れ、ウォーターバス中で80℃到達後10分保持して酵素活性を失活させた。対象区はBrix11に調整した非酵素処理オレンジ果汁とした。
試飲サンプルの糖組成、濁度測定、外観の観察は上記試験と同様に実施した。試飲サンプルの粘度は果汁を8000rpm(Gmax:8340g、Gmin:4250g)で遠心し、上清を粘度計(Automated micro viscometer, Amton Paar社製)を用いて測定した。キャピラリーは1.6mm径、ボールは1.5mm径(7.850g/cm3)を用いた。官能評価は6名の訓練されたパネラーにより行われ、評価項目は「甘味」「酸味」「濃度感」「(オレンジジュースとしての)外観」「おいしさ」「総合評価(外観含む)」とし、10を強い(良い)、0を最も弱い(悪い)として直線状の任意の位置に印をつけ数値化した後、各パネラーの評点の平均値で評価した。数値が高いほど評価が高いことを示す。
各サンプルの糖組成、濁度、粘度について、表4に示す。また、官能評価結果を図3にまとめた。[図3−1]は、「甘味」について、[図3−2]は、「酸味」について、[図3−3]は、「濃厚感」について、[図3−4]は、「外観」について、[図3−5]は、「おいしさ」について、[図3−6]は、「総合評価」についての可能評価結果を示す。
野菜汁でのFTase粗酵素剤処理の効果を試験5と同様に評価した。
粗酵素剤は、SP−L及び、自家製造の粗酵素剤AJ及び粗酵素剤AB、以上計3種を使用した。各粗酵素剤を1U/mlとなるようにそれぞれBrix33の濃縮ニンジン汁120mlに添加し、25℃で24時間反応させた。それぞれ100%野菜汁相当になるよう、Brix6に水で希釈し計3サンプルとした。サンプルは瓶に入れ、ウォーターバス中で80℃到達後10分保持して酵素活性を失活させた。対象区はBrix6に調整した非酵素処理ニンジン汁とした。
試飲サンプルの糖組成、濁度測定、粘度測定については試験5と同様に測定し、清澄化有無については試験1と同様に判断した。ただし、ニンジンは高い濁度を示すため、濁度測定にあたってはサンプルを5倍希釈した後に遠心し、上清のODを測定後、数値を5倍して算出した。また、官能評価は濃厚感についてのみ評価を実施し、訓練されたパネラー3名が対照区との比較により、◎同等の濃厚感が維持されている、○:濃厚感低下が抑えられている、△:濃厚感が低下している、×:濃厚感が大きく低下している、の3段階で評価した。
各サンプルの糖組成、濁度、粘度、清澄化程度、濃厚感官能評価結果について、表5に示す。
本技術が特定の果汁・野菜汁に限定されず、蔗糖を含む幅広い果汁・野菜汁に応用可能であることを確認するため、マンゴー、カボチャ、コーンの搾汁液でのFTase粗酵素剤処理の効果を評価した。
それぞれの液をBrix33となるように調整し、粗酵素剤AJを1U/mlとなるように添加した。25℃で24時間反応させた後、試験6と同様の方法で酵素を失活させた。カボチャ、コーンは原液相当のBrix(それぞれ3.5、 15)に調整、マンゴーはBrix=5に調整し、試験5と同様に糖組成、濁度、粘度を測定した。また清澄化の有無を試験1と同様に判断した。
各果汁・野菜汁の糖組成、濁度、粘度、清澄化程度について表6に示す
Claims (7)
- 果汁或いは野菜汁を、ペクチナーゼ活性を実質的に有さないフラクトシルトランスフェラーゼ粗酵素剤で処理したことを特徴とする低カロリー化果汁或いは野菜汁飲料。
- 果汁或いは野菜汁飲料が、100%の果汁或いは野菜汁飲料であることを特徴とする請求項1に記載の低カロリー化果汁或いは野菜汁飲料。
- 果汁或いは野菜汁の、ペクチナーゼ活性を実質的に有さないフラトシルトランスフェラーゼ粗酵素剤による処理が、果汁或いは野菜汁に含まれる蔗糖からフラクトシルトランスフェラーゼによりフラクトオリゴ糖を生成することによる低カロリー化処理であることを特徴とする請求項1又は2に記載の低カロリー化果汁或いは野菜汁飲料。
- 果汁或いは野菜汁が、オレンジ果汁、グレープフルーツ果汁、リンゴ果汁、ニンジン汁から選択される1又は2以上の果汁或いは野菜汁を含むことを特徴とする請求項1〜3のいずれかに記載の低カロリー化果汁或いは野菜汁飲料。
- 低カロリー化果汁或いは野菜汁飲料が、容器詰果汁或いは野菜汁飲料であることを特徴とする請求項1〜4のいずれかに記載の低カロリー化果汁或いは野菜汁飲料。
- 果汁或いは野菜汁を、ペクチナーゼ活性を実質的に有さないフラクトシルトランスフェラーゼ粗酵素剤で処理することを特徴とする低カロリー化果汁或いは野菜汁飲料の製造方法。
- 果汁或いは野菜汁を、ペクチナーゼ活性を実質的に有さないフラクトシルトランスフェラーゼ粗酵素剤で処理することにより、果汁或いは野菜汁に含まれる蔗糖からフラクトオリゴ糖を生成することを特徴とする果汁或いは野菜汁の低カロリー化方法。
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