JPWO2015068744A1 - カルボキシメチルピペリジン誘導体 - Google Patents
カルボキシメチルピペリジン誘導体 Download PDFInfo
- Publication number
- JPWO2015068744A1 JPWO2015068744A1 JP2014555442A JP2014555442A JPWO2015068744A1 JP WO2015068744 A1 JPWO2015068744 A1 JP WO2015068744A1 JP 2014555442 A JP2014555442 A JP 2014555442A JP 2014555442 A JP2014555442 A JP 2014555442A JP WO2015068744 A1 JPWO2015068744 A1 JP WO2015068744A1
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- compound
- mixture
- added
- ethyl acetate
- formula
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- YXFPYOAMOMQXMI-UHFFFAOYSA-N CC(C)(C(N(C)C)=O)c1cc(C(F)(F)F)cc(C(F)(F)F)c1 Chemical compound CC(C)(C(N(C)C)=O)c1cc(C(F)(F)F)cc(C(F)(F)F)c1 YXFPYOAMOMQXMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ILHMXMXQEAIDCR-UHFFFAOYSA-N CC(C)(C(N(C)c(cnc(N1CC(C)(C)C(CC(O)O)CC1)c1)c1-c(cc1)c(C)cc1F)=O)c1cc(C(F)(F)F)cc(C(F)(F)F)c1 Chemical compound CC(C)(C(N(C)c(cnc(N1CC(C)(C)C(CC(O)O)CC1)c1)c1-c(cc1)c(C)cc1F)=O)c1cc(C(F)(F)F)cc(C(F)(F)F)c1 ILHMXMXQEAIDCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HFWXBUXIGDHRIC-UHFFFAOYSA-N CC(C)(C(N(C)c(cnc(N1CCC(CC(O)=O)CC1)c1)c1-c(cc1)c(C)cc1F)=O)c1cc(C(F)(F)F)cc(C(F)(F)F)c1 Chemical compound CC(C)(C(N(C)c(cnc(N1CCC(CC(O)=O)CC1)c1)c1-c(cc1)c(C)cc1F)=O)c1cc(C(F)(F)F)cc(C(F)(F)F)c1 HFWXBUXIGDHRIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IMOMGKUGBUZWGV-UHFFFAOYSA-N CC(C)(C(N(C)c(cnc(N1CCC(CC(O)=O)CC1)c1)c1-c1c(C)cccc1)=O)c1cc(C(F)(F)F)cc(C(F)(F)F)c1 Chemical compound CC(C)(C(N(C)c(cnc(N1CCC(CC(O)=O)CC1)c1)c1-c1c(C)cccc1)=O)c1cc(C(F)(F)F)cc(C(F)(F)F)c1 IMOMGKUGBUZWGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
- C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
- C07D401/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
- A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
- A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
- A61K31/4523—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems
- A61K31/4545—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems containing a six-membered ring with nitrogen as a ring hetero atom, e.g. pipamperone, anabasine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/08—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for nausea, cinetosis or vertigo; Antiemetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
- C07D413/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing three or more hetero rings
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Otolaryngology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
Abstract
本発明は、ＮＫ１受容体拮抗作用を有し、アプレピタントに比べＣＹＰ３Ａ４の阻害作用が減弱された、抗悪性腫瘍剤投与に伴う悪心及び嘔吐の予防又は治療に有用な新規化合物を提供する。すなわち、本発明は、下記式（Ｉ）で表される、カルボキシメチルピペリジン誘導体、又はその薬理学的に許容される塩に関する。式中、環Ａは、ベンゼン環等であり、環Ｂは、ピリジン環等であり、Ｒ１は、Ｃ１−６アルキル又はＣ１−６アルコキシであり、Ｒ２及びＲ３は、水素原子又はメチルであり、ｎは、０から５の整数を表す。式（Ｉ）：
Description
本発明は、医薬品として有用なカルボキシメチルピペリジン誘導体に関する。
さらに詳しく述べれば、本発明は、サブスタンスＰ／ニューロキニン１（ＮＫ１）受容体拮抗作用を有し、抗悪性腫瘍剤投与に伴う悪心及び嘔吐（ＣＩＮＶ）等の予防又は治療薬として有用なカルボキシメチルピペリジン誘導体又はその薬理学的に許容される塩に関する。
ＣＩＮＶは、延髄外側網様体に存在する嘔吐中枢が刺激を受けることによって発現する。延髄の最後野及び孤束核にはＮＫ１受容体が存在し、ＮＫ１受容体は、嘔吐に強く関与していると考えられている。
抗悪性腫瘍剤の投与により、消化管に存在する腸クロム親和性（ＥＣ）細胞からのセロトニン分泌が亢進し、セロトニンが消化管の５−Hydroxytryptamine３（５−ＨＴ３）受容体を介して嘔吐中枢を直接刺激する。また、セロトニンが第４脳室最後野に存在する化学受容器引金帯（ＣＴＺ）を介して嘔吐中枢を刺激することにより、悪心及び嘔吐が発現する。サブスタンスＰは、セロトニンと同様、消化管のＥＣ細胞内に存在し、抗悪性腫瘍剤投与により分泌が促進される。近年、サブスタンスＰが、ＣＴＺに存在するＮＫ１受容体を介して、又は中枢神経系のＮＫ１受容体に結合することにより嘔吐を誘発することが明らかにされ、ＮＫ１受容体が制吐剤の開発ターゲットとして注目されている（非特許文献１）。
抗悪性腫瘍剤の投与により、消化管に存在する腸クロム親和性（ＥＣ）細胞からのセロトニン分泌が亢進し、セロトニンが消化管の５−Hydroxytryptamine３（５−ＨＴ３）受容体を介して嘔吐中枢を直接刺激する。また、セロトニンが第４脳室最後野に存在する化学受容器引金帯（ＣＴＺ）を介して嘔吐中枢を刺激することにより、悪心及び嘔吐が発現する。サブスタンスＰは、セロトニンと同様、消化管のＥＣ細胞内に存在し、抗悪性腫瘍剤投与により分泌が促進される。近年、サブスタンスＰが、ＣＴＺに存在するＮＫ１受容体を介して、又は中枢神経系のＮＫ１受容体に結合することにより嘔吐を誘発することが明らかにされ、ＮＫ１受容体が制吐剤の開発ターゲットとして注目されている（非特許文献１）。
アプレピタント（Aprepitant）は、抗悪性腫瘍剤投与に伴う悪心及び嘔吐に対する予防薬として承認された、世界初の選択的ＮＫ１受容体拮抗剤である。アプレピタントの作用機序は、ＣＩＮＶの誘発経路の１つである、サブスタンスＰと中枢神経系ＮＫ１受容体の結合を選択的に阻害し、ＣＩＮＶを予防すると考えられている。アプレピタントは、ＣＩＮＶの予防薬として販売されている（非特許文献２）。
アプレピタントは、チトクロムＰ４５０（ＣＹＰ）３Ａ４により代謝されることが知られている。また、アプレピタントは、ＣＹＰ３Ａ４に対する用量依存的阻害作用、ＣＹＰ３Ａ４の誘導作用及びＣＹＰ２Ｃ９の誘導作用を有していることも知られている。そのため、アプレピタントは、ＣＹＰ３Ａ４を阻害若しくは誘導する薬剤、又はＣＹＰ３Ａ４若しくはＣＹＰ２Ｃ９により代謝される薬剤と薬物間相互作用を起こす可能性がある。例えば、アプレピタントのＣＹＰ３Ａ４阻害作用によって、デキサメタゾンの代謝が阻害される場合があり、デキサメタゾンは、アプレピタントと併用する場合に用量調整が必要になるとする報告がある（非特許文献３）。
そのため、アプレピタントの使用には、アプレピタントのＣＹＰ３Ａ４阻害作用に基づく薬物間相互作用に十分な注意が必要である。
そのため、アプレピタントの使用には、アプレピタントのＣＹＰ３Ａ４阻害作用に基づく薬物間相互作用に十分な注意が必要である。
以上のことから、ＣＩＮＶの予防又は治療において、薬物間相互作用が少ない新規なＮＫ１受容体拮抗剤が望まれている。
Casopitant、Netupitant、Ezlopitant、Rolapitant、Vestipitant及びVofopitant等のＮＫ１受容体拮抗作用を有する化合物が知られている。
しかしながら、Casopitantは、ＣＹＰ３Ａ４に対する阻害作用及びそれに起因する薬物間相互作用を有することが報告されている（非特許文献４）。Casopitantは、米国及び欧州において抗悪性腫瘍剤投与に伴う悪心及び嘔吐に対する予防薬として臨床試験が実施されていたが、申請後に開発が中止された。Netupitantは、抗悪性腫瘍剤投与に伴う悪心及び嘔吐に対する予防薬として開発中であるが、ＣＹＰ３Ａ４に対する阻害作用及びそれに起因する薬物間相互作用を有することが報告されている（非特許文献５）。Ezlopitantは、米国において抗悪性腫瘍剤投与に伴う悪心及び嘔吐に対する予防薬として臨床試験が実施されていたが、その開発は中止された。Vofopitantは、欧州において抗悪性腫瘍剤投与に伴う悪心及び嘔吐に対する予防薬として臨床試験が実施されていたが、その開発は中止された。
上記化合物には、開発中止という結果になった化合物が多い。
しかしながら、Casopitantは、ＣＹＰ３Ａ４に対する阻害作用及びそれに起因する薬物間相互作用を有することが報告されている（非特許文献４）。Casopitantは、米国及び欧州において抗悪性腫瘍剤投与に伴う悪心及び嘔吐に対する予防薬として臨床試験が実施されていたが、申請後に開発が中止された。Netupitantは、抗悪性腫瘍剤投与に伴う悪心及び嘔吐に対する予防薬として開発中であるが、ＣＹＰ３Ａ４に対する阻害作用及びそれに起因する薬物間相互作用を有することが報告されている（非特許文献５）。Ezlopitantは、米国において抗悪性腫瘍剤投与に伴う悪心及び嘔吐に対する予防薬として臨床試験が実施されていたが、その開発は中止された。Vofopitantは、欧州において抗悪性腫瘍剤投与に伴う悪心及び嘔吐に対する予防薬として臨床試験が実施されていたが、その開発は中止された。
上記化合物には、開発中止という結果になった化合物が多い。
ＮＫ１受容体拮抗作用を有すると主張されるピリジン誘導体が、特許文献１〜１６に記載されている。また、ピリジン誘導体のプロドラッグが、特許文献１７及び１８に記載されている。
しかしながら、上記文献には、本願発明のカルボキシメチルピペリジン誘導体は、記載されていない。
しかしながら、上記文献には、本願発明のカルボキシメチルピペリジン誘導体は、記載されていない。
P. J. Heskethら、「European Journal of Cancer」、２００３年、第３９巻、ｐ．１０７４−１０８０
Toni M. Dandoら、「Drugs」、２００４年、第６４巻、第７号、ｐ．７７７−７９４
Jacqueline B. McCreaら、「CLINICAL PHARMACOLOGY & THERAPEUTICS」、２００３年、第７４巻、第１号、ｐ．１７−２４
Stefano Zamunerら、「British Journal of Clinical Pharmacology」、２０１０年、第７０巻、第４号、ｐ．５３７−５４６
Corinna Lanzarottiら「Support Care Cancer」、２０１３年、第２１巻、第１０号、ｐ．２７８３−２７９１
本発明は、ＮＫ１受容体拮抗作用を有し、アプレピタントに比べＣＹＰ３Ａ４の阻害作用が減弱された、抗悪性腫瘍剤投与に伴う悪心及び嘔吐の予防又は治療に有用な新規化合物を提供することを課題とする。本発明は、好ましくは、中枢移行性及び薬効の持続性に優れた前記化合物を提供することを課題とする。
本発明は、下記式（Ｉ）で表される化合物又はその薬理学的に許容される塩に関する。
すなわち、本発明は、下記の〔１〕〜〔１２〕等に関する。
〔１〕式（Ｉ）で表される化合物：
〔式中、
環Ａは、式：
で表される基であり；
環Ｂは、式：
で表される基であり；
（ただし、（＊）を付された結合は、式：
との結合部位であり；
（＊＊）を付された結合は、環Ａとの結合部位であり；
（＊＊＊）を付された結合は、式：
との結合部位を表す。）；
Ｒ１は、Ｃ１−６アルキル又はＣ１−６アルコキシであり；
Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立して水素原子、又はメチルであり；
ｎは、０、１、２、３、４又は５；である。〕
又はその薬理学的に許容される塩。
〔２〕式（Ｉa）で表される、前記〔１〕に記載の化合物：
〔式中、
環Ａ、Ｒ１、及びｎは、前記〔１〕と同じ意味であり；
環Ｂｂは、式：
で表される基であり；
（式中、（＊）を付された結合は、式：
との結合部位であり；
（＊＊）、及び（＊＊＊）は、前記〔１〕と同じ意味である。）；である。〕
又はその薬理学的に許容される塩。
〔３〕式（Ｉｂ）で表される、前記〔２〕に記載の化合物：
〔式中、
環Ａ及び環Ｂｂは、前記〔２〕と同じ意味であり；
（ただし、（＊）を付された結合は、式：
との結合部位であり；
（＊＊）及び（＊＊＊）は、前記〔２〕と同じ意味である。）；
Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃ、Ｒ１ｄ及びＲ１ｅは、それぞれ独立して、水素原子、メチル又はメトキシ；である。〕
又はその薬理学的に許容される塩。
〔４〕環Ｂが、以下の式で表される、前記〔１〕に記載の化合物：
（式中、（＊）、（＊＊）及び（＊＊＊）は、前記〔１〕と同じ意味である。）；
又はその薬理学的に許容される塩。
〔５〕Ｒ１がメチルであり、ｎが０、又は１である、前記〔４〕に記載の化合物、又はその薬理学的に許容される塩。
〔６〕以下の式で表される、前記〔２〕に記載の化合物：
又はその薬理学的に許容される塩。
〔７〕以下の式で表される、前記〔２〕に記載の化合物：
又はその薬理学的に許容される塩。
〔８〕以下の式で表される、前記〔２〕に記載の化合物：
又はその薬理学的に許容される塩。
〔９〕以下の式で表される、前記〔２〕に記載の化合物：
又はその薬理学的に許容される塩。
〔１０〕以下の式で表される、前記〔１〕に記載の化合物：
又はその薬理学的に許容される塩。
〔１１〕前記〔１〕〜〔１０〕の何れかに記載の化合物、又はその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有する医薬組成物。
〔１２〕抗悪性腫瘍剤投与に伴う悪心及び嘔吐の予防用の医薬組成物である、前記〔１１〕に記載の医薬組成物。
〔１〕式（Ｉ）で表される化合物：
環Ａは、式：
環Ｂは、式：
（ただし、（＊）を付された結合は、式：
（＊＊）を付された結合は、環Ａとの結合部位であり；
（＊＊＊）を付された結合は、式：
Ｒ１は、Ｃ１−６アルキル又はＣ１−６アルコキシであり；
Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立して水素原子、又はメチルであり；
ｎは、０、１、２、３、４又は５；である。〕
又はその薬理学的に許容される塩。
〔２〕式（Ｉa）で表される、前記〔１〕に記載の化合物：
環Ａ、Ｒ１、及びｎは、前記〔１〕と同じ意味であり；
環Ｂｂは、式：
（式中、（＊）を付された結合は、式：
（＊＊）、及び（＊＊＊）は、前記〔１〕と同じ意味である。）；である。〕
又はその薬理学的に許容される塩。
〔３〕式（Ｉｂ）で表される、前記〔２〕に記載の化合物：
環Ａ及び環Ｂｂは、前記〔２〕と同じ意味であり；
（ただし、（＊）を付された結合は、式：
（＊＊）及び（＊＊＊）は、前記〔２〕と同じ意味である。）；
Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃ、Ｒ１ｄ及びＲ１ｅは、それぞれ独立して、水素原子、メチル又はメトキシ；である。〕
又はその薬理学的に許容される塩。
〔４〕環Ｂが、以下の式で表される、前記〔１〕に記載の化合物：
又はその薬理学的に許容される塩。
〔５〕Ｒ１がメチルであり、ｎが０、又は１である、前記〔４〕に記載の化合物、又はその薬理学的に許容される塩。
〔６〕以下の式で表される、前記〔２〕に記載の化合物：
〔７〕以下の式で表される、前記〔２〕に記載の化合物：
〔８〕以下の式で表される、前記〔２〕に記載の化合物：
〔９〕以下の式で表される、前記〔２〕に記載の化合物：
〔１０〕以下の式で表される、前記〔１〕に記載の化合物：
〔１１〕前記〔１〕〜〔１０〕の何れかに記載の化合物、又はその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有する医薬組成物。
〔１２〕抗悪性腫瘍剤投与に伴う悪心及び嘔吐の予防用の医薬組成物である、前記〔１１〕に記載の医薬組成物。
本発明の化合物は、優れたＮＫ１受容体拮抗作用を有する。また、本発明の化合物のＣＹＰ３Ａ４の阻害作用は、アプレピタントに比べ減弱されている。さらに、本発明の好ましい化合物は、中枢移行性及び薬効の持続性に優れる。
したがって、本発明の化合物又はその薬理学的に許容される塩は、抗悪性腫瘍剤投与に伴う悪心及び嘔吐の予防又は治療薬として有用である。
したがって、本発明の化合物又はその薬理学的に許容される塩は、抗悪性腫瘍剤投与に伴う悪心及び嘔吐の予防又は治療薬として有用である。
本発明において、各用語は、特に断らない限り、以下の意味を有する。
「Ｃ１−６アルキル」とは、炭素数１〜６の直鎖状又は分岐状のアルキル基をいい、例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチルが挙げられる。
「Ｃ１−６アルコキシ」とは、炭素数１〜６の直鎖状又は分岐状のアルコキシ基をいい、例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシが挙げられる。
「Ｃ１−６アルコキシ」とは、炭素数１〜６の直鎖状又は分岐状のアルコキシ基をいい、例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシが挙げられる。
本発明の式（Ｉ）で表される化合物において、Ｒ１は、ピペリジン環上の置換基を表す。
以下に、本発明をより詳細に説明する。
本発明の式（Ｉ）で表される化合物において、１つ又はそれ以上の不斉炭素原子が存在する場合、本発明は、各々の不斉炭素原子がＲ配置の化合物、Ｓ配置の化合物及びそれらの任意の組み合わせの化合物も包含する。また、それらのラセミ化合物、ラセミ混合物、単一のエナンチオマー及びジアステレオマー混合物も本発明の範囲に含まれる。本発明の式（Ｉ）で表される化合物において、シス−トランス異性体が存在する場合、本発明は、そのシス−トランス異性体のいずれも包含する。
本発明において、立体化学の決定は、当技術分野で周知の方法で行うこともできる（例えば、「特論 ＮＭＲ立体化学」（講談社）、２０１２年発行、５９ページ参照）。
本発明の式（Ｉ）で表される化合物は、必要に応じて常法に従い、その薬理学的に許容される塩にすることもできる。このような塩としては、酸付加塩又は塩基との塩を挙げることができる。
酸付加塩としては、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸等の鉱酸との酸付加塩、ギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、プロピオン酸、クエン酸、コハク酸、酒石酸、フマル酸、酪酸、シュウ酸、マロン酸、マレイン酸、乳酸、リンゴ酸、炭酸、安息香酸、グルタミン酸、アスパラギン酸等の有機酸との酸付加塩を挙げることができる。
塩基との塩としては、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩等の無機塩基との塩、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、トリエチルアミン、ピペリジン、モルホリン、ピロリジン、アルギニン、リジン、コリン等の有機塩基との塩を挙げることができる。
本発明において、薬理学的に許容される塩には、水又はエタノール等の医薬品として許容される溶媒との溶媒和物も含まれる。
本発明の式（Ｉ）で表される化合物の一つの実施態様において、ｎは、０、１又は２である。
本発明の式（Ｉ）で表される化合物は、例えば、以下の方法若しくはそれに準じた方法、又は文献記載の方法若しくはそれに準じた方法に従い、製造することができる。
スキーム１
式中のＬ１およびＬ２は、それぞれ独立して塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子、トリフルオロメタンスルホニルオキシ基等の脱離基であり、ＰＧ１は保護基であり、環Ａ、環Ｂ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびｎは前記と同じ意味を持つ。
スキーム１
式中のＬ１およびＬ２は、それぞれ独立して塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子、トリフルオロメタンスルホニルオキシ基等の脱離基であり、ＰＧ１は保護基であり、環Ａ、環Ｂ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびｎは前記と同じ意味を持つ。
工程１（Process 1）
化合物（２）と化合物（３）とを、不活性溶媒中、塩基及びパラジウム触媒存在下、カップリング反応を行い、化合物（４）を製造することもできる。
化合物（２）と化合物（３）とを、不活性溶媒中、塩基及びパラジウム触媒存在下、カップリング反応を行い、化合物（４）を製造することもできる。
工程２（Process 2）
化合物（４）と化合物（５）とを、不活性溶媒中、塩基存在下、縮合反応させることにより化合物（６）を製造することもできる。
化合物（４）と化合物（５）とを、不活性溶媒中、塩基存在下、縮合反応させることにより化合物（６）を製造することもできる。
工程３（Process 3）
化合物（６）と化合物（７）とを、不活性溶媒中、塩基存在下又は非存在下、反応させ、脱保護することにより化合物（Ｉ）を製造することもできる。
不活性溶媒としては、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチルピロリドン、ジメチルスルホキシド、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、１，２−ジメトキシエタン、ベンゼン、トルエン、キシレン、これらの混合溶媒が挙げられる。塩基としては、例えば、炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸セシウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化リチウム、フッ化カリウム、フッ化セシウム、トリエチルアミン、ピリジン、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、２，６−ルチジン、１，８−ジアザビシクロ［５，４，０］−７−ウンデセンが挙げられる。反応温度は通常０℃から還流温度である。反応時間は使用する原料物質や溶媒、反応温度などにより異なるが、通常３０分〜７日間である。上記反応は、マイクロウェーブ反応装置（Ｂｉｏｔａｇｅ）を用いて行うこともできる。マイクロウェーブ反応装置を用いて反応を行う場合、使用する原料物質、溶媒、及び機種などにより異なるが、圧力範囲：１〜３０ｂａｒ、出力領域：１〜４００Ｗ、反応温度：室温〜３００℃、反応時間：１分〜１日間の条件下で反応を行うことができる。
化合物（６）と化合物（７）とを、不活性溶媒中、塩基存在下又は非存在下、反応させ、脱保護することにより化合物（Ｉ）を製造することもできる。
不活性溶媒としては、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチルピロリドン、ジメチルスルホキシド、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、１，２−ジメトキシエタン、ベンゼン、トルエン、キシレン、これらの混合溶媒が挙げられる。塩基としては、例えば、炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸セシウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化リチウム、フッ化カリウム、フッ化セシウム、トリエチルアミン、ピリジン、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、２，６−ルチジン、１，８−ジアザビシクロ［５，４，０］−７−ウンデセンが挙げられる。反応温度は通常０℃から還流温度である。反応時間は使用する原料物質や溶媒、反応温度などにより異なるが、通常３０分〜７日間である。上記反応は、マイクロウェーブ反応装置（Ｂｉｏｔａｇｅ）を用いて行うこともできる。マイクロウェーブ反応装置を用いて反応を行う場合、使用する原料物質、溶媒、及び機種などにより異なるが、圧力範囲：１〜３０ｂａｒ、出力領域：１〜４００Ｗ、反応温度：室温〜３００℃、反応時間：１分〜１日間の条件下で反応を行うことができる。
スキーム２
式中のＰＧ１、ＰＧ２は保護基であり、Ｒ１、Ｒ２およびｎは前記と同じ意味を持つ。
式中のＰＧ１、ＰＧ２は保護基であり、Ｒ１、Ｒ２およびｎは前記と同じ意味を持つ。
工程４（Process 4）
化合物（９）を不活性溶媒中、塩基存在下、化合物（８）とオレフィン化反応を行い化合物（１０）を製造することもできる。不活性溶媒としては、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチルピロリドン、ジメチルスルホキシド、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、１，２−ジメトキシエタン、ベンゼン、トルエン、キシレン、これらの混合溶媒が挙げられる。塩基としては、例えば、水素化ナトリウム、ナトリウムメトキシド、炭酸カリウム、炭酸セシウム、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド、トリエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、１，８−ジアザビシクロ［５，４，０］−７−ウンデセンが挙げられる。反応温度は通常−７８℃から還流温度である。反応時間は使用する原料物質や溶媒、反応温度などにより異なるが、通常３０分〜７日間である。反応は、マイクロウェーブ反応装置（Ｂｉｏｔａｇｅ）を用いて行うこともできる。
化合物（９）を不活性溶媒中、塩基存在下、化合物（８）とオレフィン化反応を行い化合物（１０）を製造することもできる。不活性溶媒としては、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチルピロリドン、ジメチルスルホキシド、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、１，２−ジメトキシエタン、ベンゼン、トルエン、キシレン、これらの混合溶媒が挙げられる。塩基としては、例えば、水素化ナトリウム、ナトリウムメトキシド、炭酸カリウム、炭酸セシウム、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド、トリエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、１，８−ジアザビシクロ［５，４，０］−７−ウンデセンが挙げられる。反応温度は通常−７８℃から還流温度である。反応時間は使用する原料物質や溶媒、反応温度などにより異なるが、通常３０分〜７日間である。反応は、マイクロウェーブ反応装置（Ｂｉｏｔａｇｅ）を用いて行うこともできる。
工程５（Process 5）
化合物（１０）を接触還元法などによりオレフィンを還元し、脱保護することで化合物（７ａ）を製造することもできる。接触還元法は、例えば、化合物（１０）を水素雰囲気下、溶媒中、触媒を用いることにより行うことができる。用いられる溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール、酢酸エチル、テトラヒドロフラン、酢酸が挙げられる。触媒としては、例えば、パラジウム炭素粉末、ロジウム炭素粉末、白金炭素粉末、バナジウムでドープされた白金炭素粉末が挙げられる。反応温度は通常室温から還流温度である。反応時間は使用する原料物質や溶媒、反応温度などにより異なるが、通常３０分〜７日間である。
化合物（１０）を接触還元法などによりオレフィンを還元し、脱保護することで化合物（７ａ）を製造することもできる。接触還元法は、例えば、化合物（１０）を水素雰囲気下、溶媒中、触媒を用いることにより行うことができる。用いられる溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール、酢酸エチル、テトラヒドロフラン、酢酸が挙げられる。触媒としては、例えば、パラジウム炭素粉末、ロジウム炭素粉末、白金炭素粉末、バナジウムでドープされた白金炭素粉末が挙げられる。反応温度は通常室温から還流温度である。反応時間は使用する原料物質や溶媒、反応温度などにより異なるが、通常３０分〜７日間である。
上記に示したスキームは、本発明の式（Ｉ）で表される化合物又はその製造中間体を製造する為の方法の例示である。上記スキームは、当業者の容易に理解され得るようなスキームへの様々な改変が可能である。
上記に示したスキームにおいて、官能基の種類により保護基が必要な場合は、常法に従い適宜導入及び脱離の操作を組み合わせて実施をすることもできる。
本発明の式（Ｉ）で表される化合物及びその製造中間体は、必要に応じて、当該技術分野の当業者にとって周知の単離及び精製手段である、溶媒抽出、晶析、再結晶、クロマトグラフィー、分取高速液体クロマトグラフィー等により、単離及び精製することもできる。
本発明の化合物は、優れたＮＫ１受容体拮抗作用を有するので、ＮＫ１受容体が介在する種々の疾患の予防又は治療薬としても使用できる。例えば、本発明の化合物は、制吐剤として有用であり、特に抗悪性腫瘍剤（例えば、シスプラチン）投与に伴う消化器症状（例えば、悪心及び嘔吐）の予防薬として有用である。本発明の好ましい化合物は、抗悪性腫瘍剤投与に伴う急性期の悪心及び嘔吐のみならず、抗悪性腫瘍剤投与に伴う遅発期の悪心及び嘔吐に対しても有用である。
また、一つの実施態様として、本発明の化合物は、優れたＮＫ１受容体拮抗作用を有するので、例えば、術後の悪心及び嘔吐（ＰＯＮＶ）、放射線療法に伴う悪心及び嘔吐、モルヒネ誘発嘔吐、若しくは乗り物酔いの予防薬、又は統合失調症、社会不安障害、不安及びうつ病、アルコール依存症、過敏性腸症候群、潰瘍性大腸炎、咳嗽、喘息、アトピー性皮膚炎、乾癬、掻痒症、疼痛、偏頭痛、耳鳴、前立腺肥大症、過活動膀胱、若しくは尿失禁の治療薬としても用いることもできる。
本発明の医薬組成物は、用法に応じ種々の剤型のものが使用される。このような剤型としては、例えば、散剤、顆粒剤、細粒剤、ドライシロップ剤、錠剤、カプセル剤、注射剤、液剤、軟膏剤、坐剤、貼付剤を挙げることができ、経口又は非経口的に投与される。
本発明の医薬組成物は、式（Ｉ）で表される化合物又はその薬理学的に許容される塩、及び少なくとも１つの医薬品添加物を用いて調製される。これら医薬組成物は、その剤型に応じ製剤学的に公知の手法により、適切な賦形剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、希釈剤、緩衝剤、等張化剤、防腐剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、安定化剤、溶解補助剤等の医薬品添加物と適宜混合、希釈又は溶解することにより調製することもできる。
本発明の医薬組成物を予防又は治療に用いる場合、その有効成分である本発明の式（Ｉ）で表される化合物又はその薬理学的に許容される塩の投与量は、患者の年齢、性別、体重、疾患及び治療の程度等により適宜決定される。成人に対する投与量は、経口投与の場合、例えば、１〜１０００ｍｇ／日、０．１〜５００ｍｇ／日、０．１〜１００ｍｇ／日、又は０．１〜５０ｍｇ／日の範囲の範囲で定めることもでき、１日投与量を１回、２回、３回又は４回に分けて投与してもよい。また、非経口投与の場合、例えば、１〜１０００ｍｇ／日、０．１〜５００ｍｇ／日、０．１〜１００ｍｇ／日、又は０．１〜５０ｍｇ／日の範囲で定めることもでき、１日投与量を１回、２回、３回又は４回に分けて投与してもよい。
本発明の医薬組成物を抗悪性腫瘍剤投与に伴う悪心及び嘔吐の予防用の医薬組成物として用いる場合、抗悪性腫瘍剤の投与前に本薬を投与して用いることもできる。例えば、化学療法において、抗悪性腫瘍剤の投与直前〜１時間３０分前に本薬を投与し、２日目以降は、午前中に投与して用いることもできる。
一つの実施態様として、本発明の式（Ｉ）で表される化合物、又はその薬理学的に許容される塩は、ＮＫ１受容体拮抗薬以外の他の薬剤と組み合わせて使用することもできる。組み合わせて使用することができる他の薬剤としては、例えば、コルチコステロイド、及び５−ＨＴ３受容体拮抗型制吐剤が挙げられる。
本発明の式（Ｉ）で表される化合物、又はその薬理学的に許容される塩と他の薬剤とを組み合わせて使用する場合、これらの有効成分を一緒に含有する製剤、又はこれらの有効成分の個々を別々に製剤化した製剤として投与することができる。別々に製剤化した場合、それらの製剤を別々に、又は同時に投与することができる。
また、本発明の式（Ｉ）で表される化合物、又はその薬理学的に許容される塩の投与は、組み合わせて使用する他の薬剤の投与量に応じて、適宜減量してもよい。
また、本発明の式（Ｉ）で表される化合物、又はその薬理学的に許容される塩の投与は、組み合わせて使用する他の薬剤の投与量に応じて、適宜減量してもよい。
本発明の内容を以下の参考例、実施例及び試験例でさらに詳細に説明するが、本発明はその内容に限定されるものでない。
参考例１
(３−メチルピペリジン−４−イル)酢酸エチル
氷冷下、水素化ナトリウム（含有率６０％、０．１７ｇ）のテトラヒドロフラン(５ｍＬ)懸濁液にホスホノ酢酸トリエチル（１．０４ｇ）を加え、室温にて１時間撹拌した。反応混合物に室温にて３−メチル−４−オキソピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（０．５０ｇ）のテトラヒドロフラン(５ｍＬ)溶液を加え、５０℃にて２．５時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却後、水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン−酢酸エチル）で精製し、４−エトキシカルボニルメチレン−３−メチルピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（０．６５ｇ）を得た。得られた化合物（０．６５ｇ）のエタノール（１２ｍＬ）溶液に室温にて１０％パラジウム−炭素（２５０ｍｇ，ｗｅｔ）を加え、水素雰囲気下、室温にて１８時間撹拌した。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、室温にて１５分間撹拌した。反応混合物をセライトろ過し、ろ液を減圧濃縮し、４−エトキシカルボニルメチル−３−メチルピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（０．６４ｇ）を得た。得られた化合物（０．６４ｇ）の酢酸エチル（１０ｍＬ）溶液に室温にて４ｍｏｌ／Ｌ塩酸（酢酸エチル溶液、１０ｍＬ）を加え、室温にて３９時間撹拌した。反応混合物を減圧濃縮し、残渣に飽和重曹水を加え、ジクロロメタン−イソプロピルアルコール（ジクロロメタン：イソプロピルアルコール＝３：１）混合溶媒にて２回抽出した。有機層を集め、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下留去し、表題化合物（０．３９ｇ）を得た。
(３−メチルピペリジン−４−イル)酢酸エチル
氷冷下、水素化ナトリウム（含有率６０％、０．１７ｇ）のテトラヒドロフラン(５ｍＬ)懸濁液にホスホノ酢酸トリエチル（１．０４ｇ）を加え、室温にて１時間撹拌した。反応混合物に室温にて３−メチル−４−オキソピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（０．５０ｇ）のテトラヒドロフラン(５ｍＬ)溶液を加え、５０℃にて２．５時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却後、水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン−酢酸エチル）で精製し、４−エトキシカルボニルメチレン−３−メチルピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（０．６５ｇ）を得た。得られた化合物（０．６５ｇ）のエタノール（１２ｍＬ）溶液に室温にて１０％パラジウム−炭素（２５０ｍｇ，ｗｅｔ）を加え、水素雰囲気下、室温にて１８時間撹拌した。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、室温にて１５分間撹拌した。反応混合物をセライトろ過し、ろ液を減圧濃縮し、４−エトキシカルボニルメチル−３−メチルピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（０．６４ｇ）を得た。得られた化合物（０．６４ｇ）の酢酸エチル（１０ｍＬ）溶液に室温にて４ｍｏｌ／Ｌ塩酸（酢酸エチル溶液、１０ｍＬ）を加え、室温にて３９時間撹拌した。反応混合物を減圧濃縮し、残渣に飽和重曹水を加え、ジクロロメタン−イソプロピルアルコール（ジクロロメタン：イソプロピルアルコール＝３：１）混合溶媒にて２回抽出した。有機層を集め、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下留去し、表題化合物（０．３９ｇ）を得た。
参考例２及び３
参考例１と同様の方法により、対応する原料を用いて参考例２および３の化合物を合成した。
参考例１と同様の方法により、対応する原料を用いて参考例２および３の化合物を合成した。
参考例４
(６−クロロ−４−ヨードピリジン−３−イル)カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル
アルゴンガス雰囲気下、(６−クロロピリジン−３−イル)カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（５．０ｇ）およびＮ，Ｎ，Ｎ'，Ｎ'−テトラメチルエタン−１，２−ジアミン（７．７ｇ）のジエチルエーテル（１２０ｍＬ）溶液に−７８℃にてｎ−ブチルリチウム溶液（２．６５ｍｏｌ／Ｌ ｎ−ヘキサン溶液、２５ｍＬ）を滴下した。−１０℃にてその混合物を２時間撹拌後、−７８℃にてヨウ素（１１．４ｇ）のジエチルエーテル（４０ｍＬ）溶液を滴下した。その混合物を室温にて一日撹拌した。反応混合物に飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、ジエチルエーテルにて抽出した。有機層を１０％ピロ亜硫酸ナトリウム水溶液、飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン−酢酸エチル）で精製し、表題化合物（２．５９ｇ）を得た。
(６−クロロ−４−ヨードピリジン−３−イル)カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル
アルゴンガス雰囲気下、(６−クロロピリジン−３−イル)カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（５．０ｇ）およびＮ，Ｎ，Ｎ'，Ｎ'−テトラメチルエタン−１，２−ジアミン（７．７ｇ）のジエチルエーテル（１２０ｍＬ）溶液に−７８℃にてｎ−ブチルリチウム溶液（２．６５ｍｏｌ／Ｌ ｎ−ヘキサン溶液、２５ｍＬ）を滴下した。−１０℃にてその混合物を２時間撹拌後、−７８℃にてヨウ素（１１．４ｇ）のジエチルエーテル（４０ｍＬ）溶液を滴下した。その混合物を室温にて一日撹拌した。反応混合物に飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、ジエチルエーテルにて抽出した。有機層を１０％ピロ亜硫酸ナトリウム水溶液、飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン−酢酸エチル）で精製し、表題化合物（２．５９ｇ）を得た。
参考例５
(６−クロロ−４−ヨードピリジン−３−イル)メチルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル
(６−クロロ−４−ヨードピリジン−３−イル)カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（２．５９ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３０ｍＬ）溶液に氷冷下、水素化ナトリウム（含有率６０％、０．３２ｇ）を加え、室温で３０分間撹拌した。氷冷下、その混合物にヨウ化メチル（２．６０ｇ）を加え、室温にて終夜撹拌した。反応混合物に飽和重曹水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をアミノプロピル化シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン−酢酸エチル）で精製し、表題化合物（２．６６ｇ）を得た。
(６−クロロ−４−ヨードピリジン−３−イル)メチルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル
(６−クロロ−４−ヨードピリジン−３−イル)カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（２．５９ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３０ｍＬ）溶液に氷冷下、水素化ナトリウム（含有率６０％、０．３２ｇ）を加え、室温で３０分間撹拌した。氷冷下、その混合物にヨウ化メチル（２．６０ｇ）を加え、室温にて終夜撹拌した。反応混合物に飽和重曹水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をアミノプロピル化シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン−酢酸エチル）で精製し、表題化合物（２．６６ｇ）を得た。
参考例６
(６−クロロ−４−ヨードピリジン−３−イル)メチルアミン
(６−クロロ−４−ヨードピリジン−３−イル)メチルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（２．６６ｇ）のジクロロメタン（１０ｍＬ）溶液に氷冷下、トリフルオロ酢酸（８．２３ｇ）を加え、室温で２時間撹拌した。反応混合物を減圧下濃縮し、残渣に飽和炭酸ナトリウム水溶液を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下濃縮し、表題化合物（１．８９ｇ）を得た。
(６−クロロ−４−ヨードピリジン−３−イル)メチルアミン
(６−クロロ−４−ヨードピリジン−３−イル)メチルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（２．６６ｇ）のジクロロメタン（１０ｍＬ）溶液に氷冷下、トリフルオロ酢酸（８．２３ｇ）を加え、室温で２時間撹拌した。反応混合物を減圧下濃縮し、残渣に飽和炭酸ナトリウム水溶液を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下濃縮し、表題化合物（１．８９ｇ）を得た。
参考例７
[６−クロロ−４−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)ピリジン−３−イル]メチルアミン
(６−クロロ−４−ヨードピリジン−３−イル)メチルアミン（１．８９ｇ）および４−フルオロ−２−メチルフェニルボロン酸（１．３０ｇ）の１，２−ジメトキシエタン（２０ｍＬ）−水（２０ｍＬ）混合溶液に室温にて酢酸パラジウム（II）（０．１６ｇ）、トリフェニルホスフィン（０．３７ｇ）および炭酸ナトリウム（３．７３ｇ）を加え、９０℃にて終夜撹拌した。反応混合物を室温に冷却後、水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をアミノプロピル化シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン−酢酸エチル）で精製し、表題化合物（１．５６ｇ）を得た。
[６−クロロ−４−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)ピリジン−３−イル]メチルアミン
(６−クロロ−４−ヨードピリジン−３−イル)メチルアミン（１．８９ｇ）および４−フルオロ−２−メチルフェニルボロン酸（１．３０ｇ）の１，２−ジメトキシエタン（２０ｍＬ）−水（２０ｍＬ）混合溶液に室温にて酢酸パラジウム（II）（０．１６ｇ）、トリフェニルホスフィン（０．３７ｇ）および炭酸ナトリウム（３．７３ｇ）を加え、９０℃にて終夜撹拌した。反応混合物を室温に冷却後、水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をアミノプロピル化シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン−酢酸エチル）で精製し、表題化合物（１．５６ｇ）を得た。
参考例８
(６−クロロ−４−オルト−トリルピリジン−３−イル)メチルアミン
(６−クロロ−４−ヨードピリジン−３−イル)メチルアミン（０．７０ｇ）および２−メチルフェニルボロン酸（０．４２ｇ）の１，２−ジメトキシエタン（１０ｍＬ）−水（１０ｍＬ）混合溶液に室温にて酢酸パラジウム（II）（０．０５８ｇ）、トリフェニルホスフィン（０．１４ｇ）および炭酸ナトリウム（１．３８ｇ）を加え、９０℃にて終夜撹拌した。反応混合物を室温に冷却後、水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン−酢酸エチル）で精製し、表題化合物（０．５４ｇ）を得た。
(６−クロロ−４−オルト−トリルピリジン−３−イル)メチルアミン
(６−クロロ−４−ヨードピリジン−３−イル)メチルアミン（０．７０ｇ）および２−メチルフェニルボロン酸（０．４２ｇ）の１，２−ジメトキシエタン（１０ｍＬ）−水（１０ｍＬ）混合溶液に室温にて酢酸パラジウム（II）（０．０５８ｇ）、トリフェニルホスフィン（０．１４ｇ）および炭酸ナトリウム（１．３８ｇ）を加え、９０℃にて終夜撹拌した。反応混合物を室温に冷却後、水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン−酢酸エチル）で精製し、表題化合物（０．５４ｇ）を得た。
参考例９
２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−Ｎ−[６−クロロ−４−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)ピリジン−３−イル]−Ｎ−メチルイソブチルアミド
２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオン酸（０．６６ｇ）のジクロロメタン溶液（１０ｍＬ）に室温にて塩化オキサリル（０．５６ｇ）およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２滴）を加え、同温にて１時間撹拌した。反応混合物を減圧下濃縮し、残渣を得た。アルゴンガス雰囲気下、[６−クロロ−４−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)ピリジン−３−イル]メチルアミン（０．５０ｇ）のテトラヒドロフラン（１０ｍＬ）溶液に氷冷下、カリウムビス(トリメチルシリル)アミド（０．５００ｍｏｌ／Ｌ トルエン溶液、５．０ｍＬ）を加え、室温にて３０分間撹拌した。氷冷下、反応混合物に前記残渣のテトラヒドロフラン（５ｍＬ）溶液を滴下し、室温にて２時間撹拌した。反応混合物に１．０ｍｏｌ／Ｌ重曹水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をアミノプロピル化シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン−酢酸エチル）で精製し、表題化合物（１．０３ｇ）を得た。
２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−Ｎ−[６−クロロ−４−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)ピリジン−３−イル]−Ｎ−メチルイソブチルアミド
２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオン酸（０．６６ｇ）のジクロロメタン溶液（１０ｍＬ）に室温にて塩化オキサリル（０．５６ｇ）およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２滴）を加え、同温にて１時間撹拌した。反応混合物を減圧下濃縮し、残渣を得た。アルゴンガス雰囲気下、[６−クロロ−４−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)ピリジン−３−イル]メチルアミン（０．５０ｇ）のテトラヒドロフラン（１０ｍＬ）溶液に氷冷下、カリウムビス(トリメチルシリル)アミド（０．５００ｍｏｌ／Ｌ トルエン溶液、５．０ｍＬ）を加え、室温にて３０分間撹拌した。氷冷下、反応混合物に前記残渣のテトラヒドロフラン（５ｍＬ）溶液を滴下し、室温にて２時間撹拌した。反応混合物に１．０ｍｏｌ／Ｌ重曹水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をアミノプロピル化シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン−酢酸エチル）で精製し、表題化合物（１．０３ｇ）を得た。
参考例１０
２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−Ｎ−(６−クロロ−４−オルト−トリルピリジン−３−イル)−Ｎ−メチルイソブチルアミド
２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオン酸（０．７７ｇ）のジクロロメタン溶液（１２ｍＬ）に室温にて塩化オキサリル（０．６５ｇ）およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２滴）を加え、同温にて１時間撹拌した。反応混合物を減圧下濃縮し、残渣を得た。アルゴンガス雰囲気下、(６−クロロ−４−オルト−トリルピリジン−３−イル)メチルアミン（０．５４ｇ）のテトラヒドロフラン（１２ｍＬ）溶液に氷冷下、カリウムビス(トリメチルシリル)アミド（０．５００ｍｏｌ／Ｌ トルエン溶液、６．０ｍＬ）を加え、室温にて３０分間撹拌した。氷冷下、反応混合物に前記残渣のテトラヒドロフラン（６ｍＬ）溶液を滴下し、室温にて１時間撹拌した。反応混合物に１．０ｍｏｌ／Ｌ重曹水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をアミノプロピル化シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン−酢酸エチル）で精製し、表題化合物（１．０ｇ）を得た。
２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−Ｎ−(６−クロロ−４−オルト−トリルピリジン−３−イル)−Ｎ−メチルイソブチルアミド
２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオン酸（０．７７ｇ）のジクロロメタン溶液（１２ｍＬ）に室温にて塩化オキサリル（０．６５ｇ）およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２滴）を加え、同温にて１時間撹拌した。反応混合物を減圧下濃縮し、残渣を得た。アルゴンガス雰囲気下、(６−クロロ−４−オルト−トリルピリジン−３−イル)メチルアミン（０．５４ｇ）のテトラヒドロフラン（１２ｍＬ）溶液に氷冷下、カリウムビス(トリメチルシリル)アミド（０．５００ｍｏｌ／Ｌ トルエン溶液、６．０ｍＬ）を加え、室温にて３０分間撹拌した。氷冷下、反応混合物に前記残渣のテトラヒドロフラン（６ｍＬ）溶液を滴下し、室温にて１時間撹拌した。反応混合物に１．０ｍｏｌ／Ｌ重曹水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をアミノプロピル化シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン−酢酸エチル）で精製し、表題化合物（１．０ｇ）を得た。
参考例１１
[５'−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−４−イル]酢酸エチル
２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−Ｎ−[６−クロロ−４−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)ピリジン−３−イル]−Ｎ−メチルイソブチルアミド（０．７９ｇ）、ピペリジン−４−イル酢酸エチル（０．３８ｇ）および炭酸カリウム（０．４１ｇ）のジメチルスルホキシド（４．５ｍＬ）懸濁液をマイクロ波照射下、１８０℃で１時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却後、水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をアミノプロピル化シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝１００／０〜６０／４０）で精製した。得られた精製物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝１００／０〜６０／４０）で精製し、表題化合物（０．３８ｇ）を得た。
[５'−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−４−イル]酢酸エチル
２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−Ｎ−[６−クロロ−４−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)ピリジン−３−イル]−Ｎ−メチルイソブチルアミド（０．７９ｇ）、ピペリジン−４−イル酢酸エチル（０．３８ｇ）および炭酸カリウム（０．４１ｇ）のジメチルスルホキシド（４．５ｍＬ）懸濁液をマイクロ波照射下、１８０℃で１時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却後、水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をアミノプロピル化シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝１００／０〜６０／４０）で精製した。得られた精製物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝１００／０〜６０／４０）で精製し、表題化合物（０．３８ｇ）を得た。
参考例１２
(５'−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−４'−オルト−トリル−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−４−イル)酢酸エチル
２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−Ｎ−(６−クロロ−４−オルト−トリルピリジン−３−イル)−Ｎ−メチルイソブチルアミド（０．５０ｇ）、ピペリジン−４−イル酢酸エチル（０．２５ｇ）および炭酸カリウム（０．２７ｇ）のジメチルスルホキシド（３．０ｍＬ）懸濁液をマイクロ波照射下、１８０℃で２時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却後、水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン−酢酸エチル＝１００／０〜５０／５０）で精製し、表題化合物（０．３５ｇ）を得た。
(５'−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−４'−オルト−トリル−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−４−イル)酢酸エチル
２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−Ｎ−(６−クロロ−４−オルト−トリルピリジン−３−イル)−Ｎ−メチルイソブチルアミド（０．５０ｇ）、ピペリジン−４−イル酢酸エチル（０．２５ｇ）および炭酸カリウム（０．２７ｇ）のジメチルスルホキシド（３．０ｍＬ）懸濁液をマイクロ波照射下、１８０℃で２時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却後、水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン−酢酸エチル＝１００／０〜５０／５０）で精製し、表題化合物（０．３５ｇ）を得た。
参考例１３
５'−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−３，３−ジメチル−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−４−イル]酢酸エチル
２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−Ｎ−[６−クロロ−４−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)ピリジン−３−イル]−Ｎ−メチルイソブチルアミド（０．０５ｇ）および(３，３−ジメチルピペリジン−４−イル)酢酸エチル（０．０９４ｇ）の１−メチル−２−ピロリドン（０．５ｍＬ）溶液をマイクロ波照射下、１８０℃で３時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却後、水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン−酢酸エチル＝１００／０〜５０／５０）で精製し、表題化合物（０．０４３ｇ）を得た。
５'−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−３，３−ジメチル−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−４−イル]酢酸エチル
２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−Ｎ−[６−クロロ−４−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)ピリジン−３−イル]−Ｎ−メチルイソブチルアミド（０．０５ｇ）および(３，３−ジメチルピペリジン−４−イル)酢酸エチル（０．０９４ｇ）の１−メチル−２−ピロリドン（０．５ｍＬ）溶液をマイクロ波照射下、１８０℃で３時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却後、水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン−酢酸エチル＝１００／０〜５０／５０）で精製し、表題化合物（０．０４３ｇ）を得た。
参考例１４
[５'−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−３−メチル−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−４−イル]酢酸エチル
２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−Ｎ−[６−クロロ−４−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)ピリジン−３−イル]−Ｎ−メチルイソブチルアミド（０．０５ｇ）および(３−メチルピペリジン−４−イル)酢酸エチル（０．０８７ｇ）の１−メチル−２−ピロリドン（０．５ｍＬ）溶液をマイクロ波照射下、１８０℃で１時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却後、水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン−酢酸エチル＝１００／０〜５０／５０）で精製し、表題化合物（０．０４０ｇ）を得た。
[５'−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−３−メチル−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−４−イル]酢酸エチル
２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−Ｎ−[６−クロロ−４−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)ピリジン−３−イル]−Ｎ−メチルイソブチルアミド（０．０５ｇ）および(３−メチルピペリジン−４−イル)酢酸エチル（０．０８７ｇ）の１−メチル−２−ピロリドン（０．５ｍＬ）溶液をマイクロ波照射下、１８０℃で１時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却後、水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン−酢酸エチル＝１００／０〜５０／５０）で精製し、表題化合物（０．０４０ｇ）を得た。
参考例１５
[５'−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−３−メトキシ−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−４−イル]酢酸エチル
２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−Ｎ−[６−クロロ−４−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)ピリジン−３−イル]−Ｎ−メチルイソブチルアミド（０．０５ｇ）および(３−メトキシピペリジン−４−イル)酢酸エチル（０．０９４ｇ）の１−メチル−２−ピロリドン（０．５ｍＬ）溶液をマイクロ波照射下、１８０℃で１時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却後、水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン−酢酸エチル＝１００／０〜６０／４０）で精製し、表題化合物（０．０２５ｇ）を得た。
[５'−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−３−メトキシ−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−４−イル]酢酸エチル
２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−Ｎ−[６−クロロ−４−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)ピリジン−３−イル]−Ｎ−メチルイソブチルアミド（０．０５ｇ）および(３−メトキシピペリジン−４−イル)酢酸エチル（０．０９４ｇ）の１−メチル−２−ピロリドン（０．５ｍＬ）溶液をマイクロ波照射下、１８０℃で１時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却後、水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン−酢酸エチル＝１００／０〜６０／４０）で精製し、表題化合物（０．０２５ｇ）を得た。
参考例１６
２−メチル−２−ピペリジン−４−イルプロピオン酸エチル
アルゴンガス雰囲気下、リチウムジイソプロピルアミド（１．０９ｍｏｌ／Ｌ テトラヒドロフラン−ｎ−ヘキサン溶液、３０．０ｍＬ）のテトラヒドロフラン（４０ｍＬ）溶液に−７８℃にてイソ酪酸エチル（３．４８ｇ）のテトラヒドロフラン（２０ｍＬ）溶液を滴下し、同温にて１時間撹拌した。反応混合物に−７８℃にて４−オキソピペリジン−１−カルボン酸ベンジル（５．８３ｇ）のテトラヒドロフラン（５０ｍＬ）溶液を加え、室温にて終夜撹拌した。反応混合物に飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン−酢酸エチル＝９０／１０〜１０／９０）で精製し、４−(１−エトキシカルボニル−１−メチルエチル)−４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボン酸ベンジル（６．１３ｇ）を得た。得られた化合物（６．１３ｇ）のトルエン（１００ｍＬ）溶液に室温にて（メトキシカルボニルスルファモイル）トリエチルアンモニウムヒドロキシド分子内塩（５．００ｇ）を加え、９０℃で２時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却後、水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を飽和重曹水、水、飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン−酢酸エチル＝１００／０〜５０／５０）で精製し、４−(１−エトキシカルボニル−１−メチルエチル)−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピリジン−１−カルボン酸ベンジル（５．８５ｇ）を得た。水素ガス雰囲気下、得られた化合物（５．８５ｇ）とパールマン触媒（０．６００ｇ）のメタノール（６５ｍＬ）−酢酸エチル（６５ｍＬ）混合物を室温にて終夜撹拌した。反応混合物をセライトろ過し、ろ液を減圧下濃縮して表題化合物（３．１８ｇ）を得た。
２−メチル−２−ピペリジン−４−イルプロピオン酸エチル
アルゴンガス雰囲気下、リチウムジイソプロピルアミド（１．０９ｍｏｌ／Ｌ テトラヒドロフラン−ｎ−ヘキサン溶液、３０．０ｍＬ）のテトラヒドロフラン（４０ｍＬ）溶液に−７８℃にてイソ酪酸エチル（３．４８ｇ）のテトラヒドロフラン（２０ｍＬ）溶液を滴下し、同温にて１時間撹拌した。反応混合物に−７８℃にて４−オキソピペリジン−１−カルボン酸ベンジル（５．８３ｇ）のテトラヒドロフラン（５０ｍＬ）溶液を加え、室温にて終夜撹拌した。反応混合物に飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン−酢酸エチル＝９０／１０〜１０／９０）で精製し、４−(１−エトキシカルボニル−１−メチルエチル)−４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボン酸ベンジル（６．１３ｇ）を得た。得られた化合物（６．１３ｇ）のトルエン（１００ｍＬ）溶液に室温にて（メトキシカルボニルスルファモイル）トリエチルアンモニウムヒドロキシド分子内塩（５．００ｇ）を加え、９０℃で２時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却後、水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を飽和重曹水、水、飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン−酢酸エチル＝１００／０〜５０／５０）で精製し、４−(１−エトキシカルボニル−１−メチルエチル)−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピリジン−１−カルボン酸ベンジル（５．８５ｇ）を得た。水素ガス雰囲気下、得られた化合物（５．８５ｇ）とパールマン触媒（０．６００ｇ）のメタノール（６５ｍＬ）−酢酸エチル（６５ｍＬ）混合物を室温にて終夜撹拌した。反応混合物をセライトろ過し、ろ液を減圧下濃縮して表題化合物（３．１８ｇ）を得た。
参考例１７
２−ピペリジン−４−イルプロピオン酸エチル
氷冷下、水素化ナトリウム（含有率６０％、０．７８ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド(２０ｍＬ)懸濁液に２−(ジエトキシホスホリル)プロピオン酸エチル（４．４４ｇ）を加え、同温にて３０分間撹拌した。反応混合物に氷冷下にて４−オキソピペリジン−１−カルボン酸ベンジル（３．５０ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド(１０ｍＬ)溶液を加え、室温にて１時間撹拌した。反応混合物に水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン−酢酸エチル＝１００／０〜５０／５０）で精製し、４−(１−エトキシカルボニルエチリデン)ピペリジン−１−カルボン酸ベンジル（４．６０ｇ）を得た。水素雰囲気下、得られた化合物（４．６０ｇ）と１０％パラジウム−炭素（５００ｍｇ，ｗｅｔ）のメタノール（５０ｍＬ）混合物を室温にて２時間撹拌した。反応混合物をセライトろ過し、ろ液を減圧濃縮して表題化合物（２．８５ｇ）を得た。
２−ピペリジン−４−イルプロピオン酸エチル
氷冷下、水素化ナトリウム（含有率６０％、０．７８ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド(２０ｍＬ)懸濁液に２−(ジエトキシホスホリル)プロピオン酸エチル（４．４４ｇ）を加え、同温にて３０分間撹拌した。反応混合物に氷冷下にて４−オキソピペリジン−１−カルボン酸ベンジル（３．５０ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド(１０ｍＬ)溶液を加え、室温にて１時間撹拌した。反応混合物に水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン−酢酸エチル＝１００／０〜５０／５０）で精製し、４−(１−エトキシカルボニルエチリデン)ピペリジン−１−カルボン酸ベンジル（４．６０ｇ）を得た。水素雰囲気下、得られた化合物（４．６０ｇ）と１０％パラジウム−炭素（５００ｍｇ，ｗｅｔ）のメタノール（５０ｍＬ）混合物を室温にて２時間撹拌した。反応混合物をセライトろ過し、ろ液を減圧濃縮して表題化合物（２．８５ｇ）を得た。
参考例１８
(４−メチルピペリジン−４−イル)酢酸エチル
４−ヒドロキシメチル−４−メチルピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（０．６７ｇ）とトリエチルアミン（０．４４ｇ）のジクロロメタン（１５ｍＬ）溶液に室温にてメタンスルホニルクロリド（０．４０ｇ）を加え、同温にて３時間撹拌した。反応混合物を水、飽和食塩水にて洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧下留去して４−メタンスルホニルオキシメチル−４−メチルピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（０．８５ｇ）を得た。得られた化合物（０．８５ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（６ｍＬ）溶液に室温にてシアン化ナトリウム（０．２７ｇ）を加え、５０℃にて５時間、８０℃にて１３時間撹拌した。反応混合物にシアン化ナトリウム（０．２２ｇ）とヨウ化ナトリウム（０．０２ｇ）を加え、１２０℃にて８時間撹拌した。反応混合物にシアン化カリウム（０．７２ｇ）を加え、１４０℃にて１７時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却後、水を加え、ｎ−ヘキサン−酢酸エチル（１／４）混合液にて抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン−酢酸エチル＝８０／２０〜５０／５０）で精製し、４−シアノメチル−４−メチルピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（０．５３ｇ）を得た。得られた化合物（０．５３ｇ）と濃塩酸（１２ｍＬ）の混合物を１１０℃にて４７時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却後、水（２４ｍＬ）、水酸化ナトリウム水溶液（２．０ｍｏｌ／Ｌ、４５ｍＬ）及び二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（０．５１ｇ）を加え、室温にて２１時間撹拌した。溶媒を減圧下濃縮し、残渣に水、塩酸（２．０ｍｏｌ／Ｌ、３ｍＬ）を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下留去して４−カルボキシメチル−４−メチルピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（０．３４ｇ）を得た。得られた化合物（０．３４ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５ｍＬ）溶液に室温にて炭酸カリウム（０．２７ｇ）及びヨウ化エチル（０．４１ｇ）を加え、同温にて２２時間撹拌した。反応混合物に水を加え、ジエチルエーテルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン−酢酸エチル＝１００／０〜６０／４０）で精製し、４−エトキシカルボニルメチル−４−メチルピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（０．２８ｇ）を得た。得られた化合物（０．２８ｇ）の１，４−ジオキサン（５ｍＬ）溶液に室温にて塩化水素（４．０ｍｏｌ／Ｌ １，４−ジオキサン溶液、５．０ｍＬ）を加え、同温にて２６時間撹拌した。溶媒を減圧下濃縮し、残渣に飽和重曹水を加え、ジクロロメタン−イソプロピルアルコール（３／１）混合液にて２回抽出した。合わせた有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下留去して表題化合物（０．１７ｇ）を得た。
(４−メチルピペリジン−４−イル)酢酸エチル
４−ヒドロキシメチル−４−メチルピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（０．６７ｇ）とトリエチルアミン（０．４４ｇ）のジクロロメタン（１５ｍＬ）溶液に室温にてメタンスルホニルクロリド（０．４０ｇ）を加え、同温にて３時間撹拌した。反応混合物を水、飽和食塩水にて洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧下留去して４−メタンスルホニルオキシメチル−４−メチルピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（０．８５ｇ）を得た。得られた化合物（０．８５ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（６ｍＬ）溶液に室温にてシアン化ナトリウム（０．２７ｇ）を加え、５０℃にて５時間、８０℃にて１３時間撹拌した。反応混合物にシアン化ナトリウム（０．２２ｇ）とヨウ化ナトリウム（０．０２ｇ）を加え、１２０℃にて８時間撹拌した。反応混合物にシアン化カリウム（０．７２ｇ）を加え、１４０℃にて１７時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却後、水を加え、ｎ−ヘキサン−酢酸エチル（１／４）混合液にて抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン−酢酸エチル＝８０／２０〜５０／５０）で精製し、４−シアノメチル−４−メチルピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（０．５３ｇ）を得た。得られた化合物（０．５３ｇ）と濃塩酸（１２ｍＬ）の混合物を１１０℃にて４７時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却後、水（２４ｍＬ）、水酸化ナトリウム水溶液（２．０ｍｏｌ／Ｌ、４５ｍＬ）及び二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（０．５１ｇ）を加え、室温にて２１時間撹拌した。溶媒を減圧下濃縮し、残渣に水、塩酸（２．０ｍｏｌ／Ｌ、３ｍＬ）を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下留去して４−カルボキシメチル−４−メチルピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（０．３４ｇ）を得た。得られた化合物（０．３４ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５ｍＬ）溶液に室温にて炭酸カリウム（０．２７ｇ）及びヨウ化エチル（０．４１ｇ）を加え、同温にて２２時間撹拌した。反応混合物に水を加え、ジエチルエーテルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン−酢酸エチル＝１００／０〜６０／４０）で精製し、４−エトキシカルボニルメチル−４−メチルピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（０．２８ｇ）を得た。得られた化合物（０．２８ｇ）の１，４−ジオキサン（５ｍＬ）溶液に室温にて塩化水素（４．０ｍｏｌ／Ｌ １，４−ジオキサン溶液、５．０ｍＬ）を加え、同温にて２６時間撹拌した。溶媒を減圧下濃縮し、残渣に飽和重曹水を加え、ジクロロメタン−イソプロピルアルコール（３／１）混合液にて２回抽出した。合わせた有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下留去して表題化合物（０．１７ｇ）を得た。
参考例１９
６−クロロ−３−ニトロピリジン−２−カルボニトリル
２，６−ジクロロ−３−ニトロピリジン（２．５０ｇ）のＮ−メチルピロリドン（２５ｍＬ）溶液に室温にてシアン化銅（Ｉ）（２．３２ｇ）を加え、１８０℃にて１時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却後、酢酸エチル及び水を加え、混合物をセライトろ過した。ろ液を飽和食塩水にて洗浄し、水層を酢酸エチルにて再抽出した。合わせた有機層を水、飽和食塩水にて洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝９０／１０〜７０／３０）で精製し、表題化合物（０．９０ｇ）を得た。
６−クロロ−３−ニトロピリジン−２−カルボニトリル
２，６−ジクロロ−３−ニトロピリジン（２．５０ｇ）のＮ−メチルピロリドン（２５ｍＬ）溶液に室温にてシアン化銅（Ｉ）（２．３２ｇ）を加え、１８０℃にて１時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却後、酢酸エチル及び水を加え、混合物をセライトろ過した。ろ液を飽和食塩水にて洗浄し、水層を酢酸エチルにて再抽出した。合わせた有機層を水、飽和食塩水にて洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝９０／１０〜７０／３０）で精製し、表題化合物（０．９０ｇ）を得た。
参考例２０
３−アミノ−６−クロロピリジン−２−カルボニトリル
６−クロロ−３−ニトロピリジン−２−カルボニトリル（０．３２ｇ）及び濃塩酸（１．２ｍＬ）のエタノール（３．６ｍＬ）溶液に室温にて鉄粉（０．３４ｇ）を加え、３０分間加熱還流した。反応混合物を室温に冷却後、飽和重曹水を加えて塩基性にした。酢酸エチルを加えた後、混合物をセライトろ過し、ろ液を酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧下濃縮し、表題化合物（０．２４ｇ）を得た。
３−アミノ−６−クロロピリジン−２−カルボニトリル
６−クロロ−３−ニトロピリジン−２−カルボニトリル（０．３２ｇ）及び濃塩酸（１．２ｍＬ）のエタノール（３．６ｍＬ）溶液に室温にて鉄粉（０．３４ｇ）を加え、３０分間加熱還流した。反応混合物を室温に冷却後、飽和重曹水を加えて塩基性にした。酢酸エチルを加えた後、混合物をセライトろ過し、ろ液を酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧下濃縮し、表題化合物（０．２４ｇ）を得た。
参考例２１
３−アミノ−４−ブロモ−６−クロロピリジン−２−カルボニトリル
３−アミノ−６−クロロピリジン−２−カルボニトリル（０．２４ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（８ｍＬ）溶液に室温にてＮ−ブロモスクシンイミド（０．３７ｇ）を加え、同温にて終夜撹拌した。反応混合物に飽和チオ硫酸ナトリウム水溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をアミノプロピルシリル化シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝７５／２５〜５０／５０）にて精製し、表題化合物（０．３０ｇ）を得た。
３−アミノ−４−ブロモ−６−クロロピリジン−２−カルボニトリル
３−アミノ−６−クロロピリジン−２−カルボニトリル（０．２４ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（８ｍＬ）溶液に室温にてＮ−ブロモスクシンイミド（０．３７ｇ）を加え、同温にて終夜撹拌した。反応混合物に飽和チオ硫酸ナトリウム水溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をアミノプロピルシリル化シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝７５／２５〜５０／５０）にて精製し、表題化合物（０．３０ｇ）を得た。
参考例２２
３−アミノ−６−クロロ−４−（４−フルオロ−２−メチルフェニル）ピリジン−２−カルボニトリル
３−アミノ−４−ブロモ−６−クロロピリジン−２−カルボニトリル（０．１５ｇ）、４−フルオロ−２−メチルフェニルボロン酸（０．０８ｇ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（０．０７ｇ）、炭酸ナトリウム（０．２０ｇ）、１，２−ジメトキシエタン（３．２ｍＬ）及び水（０．８ｍＬ）の混合物を、マイクロ波照射下、１００℃で１時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却後、水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和重曹水、飽和食塩水にて洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をアミノプロピルシリル化シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝５０／５０〜０／１００）にて精製し、表題化合物（０．１４ｇ）を得た。
３−アミノ−６−クロロ−４−（４−フルオロ−２−メチルフェニル）ピリジン−２−カルボニトリル
３−アミノ−４−ブロモ−６−クロロピリジン−２−カルボニトリル（０．１５ｇ）、４−フルオロ−２−メチルフェニルボロン酸（０．０８ｇ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（０．０７ｇ）、炭酸ナトリウム（０．２０ｇ）、１，２−ジメトキシエタン（３．２ｍＬ）及び水（０．８ｍＬ）の混合物を、マイクロ波照射下、１００℃で１時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却後、水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和重曹水、飽和食塩水にて洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をアミノプロピルシリル化シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝５０／５０〜０／１００）にて精製し、表題化合物（０．１４ｇ）を得た。
参考例２３
２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−Ｎ−[６−クロロ−２−シアノ−４−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)ピリジン−３−イル]イソブチルアミド
２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオン酸（０．３１ｇ）のジクロロメタン溶液（２．６ｍＬ）に室温にて塩化オキサリル（０．２６ｇ）及びＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２滴）を加え、同温にて１時間撹拌した。反応混合物を減圧下濃縮し、残渣を得た。３−アミノ−６−クロロ−４−（４−フルオロ−２−メチルフェニル）ピリジン−２−カルボニトリル（０．１４ｇ）のテトラヒドロフラン（５ｍＬ）溶液に氷冷下、ナトリウムビス（トリメチルシリル）アミド溶液（１．０ｍｏｌ／Ｌテトラヒドロフラン溶液、１．１ｍＬ）を滴下し、同温にて３０分間撹拌した。氷冷下、反応混合物に上記残渣のテトラヒドロフラン（２．０ｍＬ）溶液を滴下し、室温にて３０分間撹拌した。反応混合物に飽和重曹水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をアミノプロピルシリル化シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝８５／１５〜４０／６０）にて精製し、表題化合物（０．２１ｇ）を得た。
２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−Ｎ−[６−クロロ−２−シアノ−４−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)ピリジン−３−イル]イソブチルアミド
２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオン酸（０．３１ｇ）のジクロロメタン溶液（２．６ｍＬ）に室温にて塩化オキサリル（０．２６ｇ）及びＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２滴）を加え、同温にて１時間撹拌した。反応混合物を減圧下濃縮し、残渣を得た。３−アミノ−６−クロロ−４−（４−フルオロ−２−メチルフェニル）ピリジン−２−カルボニトリル（０．１４ｇ）のテトラヒドロフラン（５ｍＬ）溶液に氷冷下、ナトリウムビス（トリメチルシリル）アミド溶液（１．０ｍｏｌ／Ｌテトラヒドロフラン溶液、１．１ｍＬ）を滴下し、同温にて３０分間撹拌した。氷冷下、反応混合物に上記残渣のテトラヒドロフラン（２．０ｍＬ）溶液を滴下し、室温にて３０分間撹拌した。反応混合物に飽和重曹水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をアミノプロピルシリル化シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝８５／１５〜４０／６０）にて精製し、表題化合物（０．２１ｇ）を得た。
参考例２４
２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−Ｎ−[６−クロロ−２−シアノ−４−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)ピリジン−３−イル]−Ｎ−メチルイソブチルアミド
２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−Ｎ−[６−クロロ−２−シアノ−４−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)ピリジン−３−イル]イソブチルアミド（０．２１ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２．４ｍＬ）溶液に氷冷下、水素化ナトリウム（含有率６０％、０．０１８ｇ）を加え、同温で５分間撹拌した。氷冷下、反応混合物にヨウ化メチル（０．１１ｇ）を加え、室温にて終夜撹拌した。反応混合物に水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝９０／１０〜５０／５０）にて精製し、表題化合物（０．０９ｇ）を得た。
２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−Ｎ−[６−クロロ−２−シアノ−４−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)ピリジン−３−イル]−Ｎ−メチルイソブチルアミド
２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−Ｎ−[６−クロロ−２−シアノ−４−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)ピリジン−３−イル]イソブチルアミド（０．２１ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２．４ｍＬ）溶液に氷冷下、水素化ナトリウム（含有率６０％、０．０１８ｇ）を加え、同温で５分間撹拌した。氷冷下、反応混合物にヨウ化メチル（０．１１ｇ）を加え、室温にて終夜撹拌した。反応混合物に水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝９０／１０〜５０／５０）にて精製し、表題化合物（０．０９ｇ）を得た。
参考例２５
[５'−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−６'−シアノ−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−４−イル]酢酸エチル
２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−Ｎ−[６−クロロ−２−シアノ−４−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)ピリジン−３−イル]−Ｎ−メチルイソブチルアミド（０．０３ｇ）、ピペリジン−４−イル酢酸エチル（０．０５ｇ）及び炭酸カリウム（０．０２ｇ）のジメチルスルホキシド（１．０ｍＬ）懸濁液をマイクロ波照射下、１００℃で１時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却後、水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をアミノプロピルシリル化シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝８０／２０〜２０／８０）で精製し、表題化合物（０．０２ｇ）を得た。
[５'−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−６'−シアノ−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−４−イル]酢酸エチル
２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−Ｎ−[６−クロロ−２−シアノ−４−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)ピリジン−３−イル]−Ｎ−メチルイソブチルアミド（０．０３ｇ）、ピペリジン−４−イル酢酸エチル（０．０５ｇ）及び炭酸カリウム（０．０２ｇ）のジメチルスルホキシド（１．０ｍＬ）懸濁液をマイクロ波照射下、１００℃で１時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却後、水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をアミノプロピルシリル化シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝８０／２０〜２０／８０）で精製し、表題化合物（０．０２ｇ）を得た。
参考例２６
２−[５'−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−４−イル]−２−メチルプロピオン酸エチル
２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−Ｎ−[６−クロロ−４−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)ピリジン−３−イル]−Ｎ−メチルイソブチルアミド（０．１５ｇ）、２−メチル−２−ピペリジン−４−イルプロピオン酸エチル（０．２８ｇ）及びＮ−メチルピロリドン（１．５ｍＬ）の混合物をマイクロ波照射下、１９０℃で１時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却後、水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝１００／０〜６０／４０）で精製し、表題化合物（０．１４ｇ）を得た。
２−[５'−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−４−イル]−２−メチルプロピオン酸エチル
２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−Ｎ−[６−クロロ−４−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)ピリジン−３−イル]−Ｎ−メチルイソブチルアミド（０．１５ｇ）、２−メチル−２−ピペリジン−４−イルプロピオン酸エチル（０．２８ｇ）及びＮ−メチルピロリドン（１．５ｍＬ）の混合物をマイクロ波照射下、１９０℃で１時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却後、水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝１００／０〜６０／４０）で精製し、表題化合物（０．１４ｇ）を得た。
参考例２７
２−[５'−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−４−イル]プロピオン酸エチル
２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−Ｎ−[６−クロロ−４−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)ピリジン−３−イル]−Ｎ−メチルイソブチルアミド（０．４８ｇ）、２−ピペリジン−４−イルプロピオン酸エチル（０．８３ｇ）及び炭酸カリウム（０．２５ｇ）のＮ−メチルピロリドン（３．６ｍＬ）懸濁液をマイクロ波照射下、１９０℃で１時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却後、水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝１００／０〜５０／５０）で精製し、表題化合物（０．５１ｇ）を得た。
２−[５'−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−４−イル]プロピオン酸エチル
２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−Ｎ−[６−クロロ−４−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)ピリジン−３−イル]−Ｎ−メチルイソブチルアミド（０．４８ｇ）、２−ピペリジン−４−イルプロピオン酸エチル（０．８３ｇ）及び炭酸カリウム（０．２５ｇ）のＮ−メチルピロリドン（３．６ｍＬ）懸濁液をマイクロ波照射下、１９０℃で１時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却後、水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝１００／０〜５０／５０）で精製し、表題化合物（０．５１ｇ）を得た。
参考例２８及び参考例２９
Ｎ−[４−[(Ｓ)−２−((Ｓ)−４−ベンジル−２−オキソオキサゾリジン−３−イル)−１−メチル−２−オキソエチル]−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−５'−イル]−２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−Ｎ−メチルイソブチルアミド（参考例２８）、及びＮ−[４−[(Ｒ)−２−((Ｓ)−４−ベンジル−２−オキソオキサゾリジン−３−イル)−１−メチル−２−オキソエチル]−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−５'−イル]−２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−Ｎ−メチルイソブチルアミド（参考例２９）
２−[５'−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−４−イル]プロピオン酸エチル（０．５０ｇ）、水酸化ナトリウム水溶液（１．０ｍｏｌ／Ｌ、２．０ｍＬ）、テトラヒドロフラン（２ｍＬ）及びメタノール（６ｍＬ）の混合物をマイクロ波照射下、１４０℃で２時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却後、塩酸（１．０ｍｏｌ／Ｌ、３．０ｍＬ）を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝５０／５０〜０／１００）で精製し、２−[５'−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−４−イル]プロピオン酸（０．４２ｇ）を得た。アルゴン雰囲気下、(Ｓ)−４−ベンジルオキサゾリジン−２−オン（０．０６ｇ）のテトラヒドロフラン（４ｍＬ）溶液に−７８℃にてｎ−ブチルリチウム（２．６５ｍｏｌ／Ｌ ｎ−ヘキサン溶液、０．１２ｍＬ）を滴下し、同温にて３０分間撹拌して(Ｓ)−４−ベンジルオキサゾリジン−２−オンのリチウム溶液を得た。アルゴン雰囲気下、２−[５'−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−４−イル]プロピオン酸（０．２０ｇ）及びトリエチルアミン（０．０４ｇ）のジエチルエーテル（４ｍＬ）溶液に氷冷下にてピバロイルクロリド（０．０４ｇ）を加え、同温にて１時間撹拌した。反応混合物に−７８℃にて上記リチウム溶液を滴下し、氷冷下にて１時間撹拌した。反応混合物に飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝９０／１０〜１０／９０）で精製した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝１００／０〜５０／５０）で精製した。得られた粗生成物を分取薄層クロマトグラフィー（シリカゲル厚０．５ｍｍ、溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝２／１）で精製し、参考例２８の化合物（０．０９ｇ）及び参考例２９の化合物（０．０９ｇ）を得た。上記クロマトグラフィーにおいて、高極性側の化合物が参考例２８の化合物であり、低極性側の化合物が参考例２９の化合物であった。
Ｎ−[４−[(Ｓ)−２−((Ｓ)−４−ベンジル−２−オキソオキサゾリジン−３−イル)−１−メチル−２−オキソエチル]−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−５'−イル]−２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−Ｎ−メチルイソブチルアミド（参考例２８）、及びＮ−[４−[(Ｒ)−２−((Ｓ)−４−ベンジル−２−オキソオキサゾリジン−３−イル)−１−メチル−２−オキソエチル]−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−５'−イル]−２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−Ｎ−メチルイソブチルアミド（参考例２９）
２−[５'−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−４−イル]プロピオン酸エチル（０．５０ｇ）、水酸化ナトリウム水溶液（１．０ｍｏｌ／Ｌ、２．０ｍＬ）、テトラヒドロフラン（２ｍＬ）及びメタノール（６ｍＬ）の混合物をマイクロ波照射下、１４０℃で２時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却後、塩酸（１．０ｍｏｌ／Ｌ、３．０ｍＬ）を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝５０／５０〜０／１００）で精製し、２−[５'−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−４−イル]プロピオン酸（０．４２ｇ）を得た。アルゴン雰囲気下、(Ｓ)−４−ベンジルオキサゾリジン−２−オン（０．０６ｇ）のテトラヒドロフラン（４ｍＬ）溶液に−７８℃にてｎ−ブチルリチウム（２．６５ｍｏｌ／Ｌ ｎ−ヘキサン溶液、０．１２ｍＬ）を滴下し、同温にて３０分間撹拌して(Ｓ)−４−ベンジルオキサゾリジン−２−オンのリチウム溶液を得た。アルゴン雰囲気下、２−[５'−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−４−イル]プロピオン酸（０．２０ｇ）及びトリエチルアミン（０．０４ｇ）のジエチルエーテル（４ｍＬ）溶液に氷冷下にてピバロイルクロリド（０．０４ｇ）を加え、同温にて１時間撹拌した。反応混合物に−７８℃にて上記リチウム溶液を滴下し、氷冷下にて１時間撹拌した。反応混合物に飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝９０／１０〜１０／９０）で精製した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝１００／０〜５０／５０）で精製した。得られた粗生成物を分取薄層クロマトグラフィー（シリカゲル厚０．５ｍｍ、溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝２／１）で精製し、参考例２８の化合物（０．０９ｇ）及び参考例２９の化合物（０．０９ｇ）を得た。上記クロマトグラフィーにおいて、高極性側の化合物が参考例２８の化合物であり、低極性側の化合物が参考例２９の化合物であった。
参考例３０
２−[５'−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−６'−シアノ−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−４−イル]プロピオン酸エチル
２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−Ｎ−[６−クロロ−２−シアノ−４−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)ピリジン−３−イル]−Ｎ−メチルイソブチルアミド（０．０６ｇ）、２−ピペリジン−４−イルプロピオン酸エチル（０．１０ｇ）及び炭酸カリウム（０．０３ｇ）のジメチルスルホキシド（１．０ｍＬ）懸濁液をマイクロ波照射下、１８０℃で２時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却後、水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をアミノプロピルシリル化シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝９０／１０〜６５／３５）で精製し、表題化合物（０．０５ｇ）を得た。
２−[５'−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−６'−シアノ−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−４−イル]プロピオン酸エチル
２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−Ｎ−[６−クロロ−２−シアノ−４−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)ピリジン−３−イル]−Ｎ−メチルイソブチルアミド（０．０６ｇ）、２−ピペリジン−４−イルプロピオン酸エチル（０．１０ｇ）及び炭酸カリウム（０．０３ｇ）のジメチルスルホキシド（１．０ｍＬ）懸濁液をマイクロ波照射下、１８０℃で２時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却後、水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をアミノプロピルシリル化シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝９０／１０〜６５／３５）で精製し、表題化合物（０．０５ｇ）を得た。
参考例３１
[５'−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−４−メチル−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−４−イル]酢酸エチル
２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−Ｎ−[６−クロロ−４−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)ピリジン−３−イル]−Ｎ−メチルイソブチルアミド（０．０５ｇ）、(４−メチルピペリジン−４−イル)酢酸エチル（０．０９ｇ）及びＮ−メチルピロリドン（０．５ｍＬ）の混合物をマイクロ波照射下、１９０℃で３０分間撹拌した。反応混合物を室温に冷却後、水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝９０／１０〜６０／４０）で精製し、表題化合物（０．０３ｇ）を得た。
[５'−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−４−メチル−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−４−イル]酢酸エチル
２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−Ｎ−[６−クロロ−４−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)ピリジン−３−イル]−Ｎ−メチルイソブチルアミド（０．０５ｇ）、(４−メチルピペリジン−４−イル)酢酸エチル（０．０９ｇ）及びＮ−メチルピロリドン（０．５ｍＬ）の混合物をマイクロ波照射下、１９０℃で３０分間撹拌した。反応混合物を室温に冷却後、水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝９０／１０〜６０／４０）で精製し、表題化合物（０．０３ｇ）を得た。
参考例３２
[５'−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−６'−シアノ−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−４−メチル−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−４−イル]酢酸エチル
２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−Ｎ−[６−クロロ−２−シアノ−４−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)ピリジン−３−イル]−Ｎ−メチルイソブチルアミド（０．０６ｇ）、(４−メチルピペリジン−４−イル)酢酸エチル（０．０９ｇ）及び炭酸カリウム（０．０３ｇ）のジメチルスルホキシド（１．０ｍＬ）懸濁液をマイクロ波照射下、１８０℃で１時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却後、水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をアミノプロピルシリル化シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝９０／１０〜６５／３５）で精製し、表題化合物（０．０６ｇ）を得た。
[５'−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−６'−シアノ−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−４−メチル−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−４−イル]酢酸エチル
２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−Ｎ−[６−クロロ−２−シアノ−４−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)ピリジン−３−イル]−Ｎ−メチルイソブチルアミド（０．０６ｇ）、(４−メチルピペリジン−４−イル)酢酸エチル（０．０９ｇ）及び炭酸カリウム（０．０３ｇ）のジメチルスルホキシド（１．０ｍＬ）懸濁液をマイクロ波照射下、１８０℃で１時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却後、水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去した。得られた粗生成物をアミノプロピルシリル化シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝９０／１０〜６５／３５）で精製し、表題化合物（０．０６ｇ）を得た。
実施例１
[５'−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−４−イル]酢酸
[５'−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−４−イル]酢酸エチル（０．３８ｇ）のテトラヒドロフラン（６ｍＬ）−メタノール（６ｍＬ）−水（２ｍＬ）混合液に室温にて水酸化リチウム一水和物（０．１２ｇ）を加え、室温にて終夜撹拌した。反応混合物に２ｍｏｌ／Ｌ塩酸（１．５ｍＬ）を加え、中和し、その混合物を減圧下濃縮した。残渣に水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下留去し、表題化合物（０．３７ｇ）を得た。
[５'−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−４−イル]酢酸
[５'−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−４−イル]酢酸エチル（０．３８ｇ）のテトラヒドロフラン（６ｍＬ）−メタノール（６ｍＬ）−水（２ｍＬ）混合液に室温にて水酸化リチウム一水和物（０．１２ｇ）を加え、室温にて終夜撹拌した。反応混合物に２ｍｏｌ／Ｌ塩酸（１．５ｍＬ）を加え、中和し、その混合物を減圧下濃縮した。残渣に水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下留去し、表題化合物（０．３７ｇ）を得た。
実施例２
(５'−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−４'−オルト−トリル−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−４−イル)酢酸
(５'−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−４'−オルト−トリル−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−４−イル)酢酸エチル（０．３０ｇ）のテトラヒドロフラン（４ｍＬ）−メタノール（２ｍＬ）−水（２ｍＬ）混合液に室温にて水酸化リチウム一水和物（０．０８４ｇ）を加え、室温にて３時間撹拌した。反応混合物に２ｍｏｌ／Ｌ塩酸（１．１ｍＬ）を加え、中和し、その混合物を減圧下濃縮した。残渣に水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下留去し、表題化合物（０．２９ｇ）を得た。
(５'−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−４'−オルト−トリル−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−４−イル)酢酸
(５'−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−４'−オルト−トリル−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−４−イル)酢酸エチル（０．３０ｇ）のテトラヒドロフラン（４ｍＬ）−メタノール（２ｍＬ）−水（２ｍＬ）混合液に室温にて水酸化リチウム一水和物（０．０８４ｇ）を加え、室温にて３時間撹拌した。反応混合物に２ｍｏｌ／Ｌ塩酸（１．１ｍＬ）を加え、中和し、その混合物を減圧下濃縮した。残渣に水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下留去し、表題化合物（０．２９ｇ）を得た。
実施例３
[５'−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−３，３−ジメチル−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−４−イル]酢酸
５'−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−３，３−ジメチル−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−４−イル]酢酸エチル（０．０４３ｇ）のテトラヒドロフラン（１ｍＬ）−エタノール（０．５ｍＬ）−水（０．５ｍＬ）混合液に室温にて水酸化リチウム一水和物（０．０１２ｇ）を加え、室温にて３時間撹拌した。反応混合物に２ｍｏｌ／Ｌ塩酸（０．１４ｍＬ）を加え、中和し、その混合物に水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を飽和食塩水にて洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下留去し、表題化合物（０．０３３ｇ）を得た。
[５'−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−３，３−ジメチル−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−４−イル]酢酸
５'−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−３，３−ジメチル−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−４−イル]酢酸エチル（０．０４３ｇ）のテトラヒドロフラン（１ｍＬ）−エタノール（０．５ｍＬ）−水（０．５ｍＬ）混合液に室温にて水酸化リチウム一水和物（０．０１２ｇ）を加え、室温にて３時間撹拌した。反応混合物に２ｍｏｌ／Ｌ塩酸（０．１４ｍＬ）を加え、中和し、その混合物に水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を飽和食塩水にて洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下留去し、表題化合物（０．０３３ｇ）を得た。
実施例４
[５'−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−３−メチル−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−４−イル]酢酸
[５'−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−３−メチル−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−４−イル]酢酸エチル（０．０４０ｇ）のテトラヒドロフラン（１ｍＬ）−エタノール（０．５ｍＬ）−水（０．５ｍＬ）混合液に室温にて水酸化リチウム一水和物（０．０１１ｇ）を加え、室温にて３時間撹拌した。反応混合物に２ｍｏｌ／Ｌ塩酸（０．１３ｍＬ）を加え、中和し、その混合物に水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を飽和食塩水にて洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下留去し、表題化合物（０．０３５ｇ）を得た。
[５'−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−３−メチル−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−４−イル]酢酸
[５'−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−３−メチル−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−４−イル]酢酸エチル（０．０４０ｇ）のテトラヒドロフラン（１ｍＬ）−エタノール（０．５ｍＬ）−水（０．５ｍＬ）混合液に室温にて水酸化リチウム一水和物（０．０１１ｇ）を加え、室温にて３時間撹拌した。反応混合物に２ｍｏｌ／Ｌ塩酸（０．１３ｍＬ）を加え、中和し、その混合物に水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を飽和食塩水にて洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下留去し、表題化合物（０．０３５ｇ）を得た。
実施例５
[５'−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−３−メトキシ−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−４−イル]酢酸
[５'−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−３−メトキシ−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−４−イル]酢酸エチル（０．０２５ｇ）のテトラヒドロフラン（１ｍＬ）−エタノール（０．５ｍＬ）−水（０．５ｍＬ）混合液に室温にて水酸化リチウム一水和物（０．００６ｇ）を加え、室温にて３時間撹拌した。反応混合物に２ｍｏｌ／Ｌ塩酸（０．０７５ｍＬ）を加え、中和し、その混合物に水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を飽和食塩水にて洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下留去し、表題化合物（０．０２１ｇ）を得た。
[５'−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−３−メトキシ−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−４−イル]酢酸
[５'−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−３−メトキシ−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−４−イル]酢酸エチル（０．０２５ｇ）のテトラヒドロフラン（１ｍＬ）−エタノール（０．５ｍＬ）−水（０．５ｍＬ）混合液に室温にて水酸化リチウム一水和物（０．００６ｇ）を加え、室温にて３時間撹拌した。反応混合物に２ｍｏｌ／Ｌ塩酸（０．０７５ｍＬ）を加え、中和し、その混合物に水を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を飽和食塩水にて洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下留去し、表題化合物（０．０２１ｇ）を得た。
実施例６
[５'−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−６'−シアノ−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−４−イル]酢酸
[５'−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−６'−シアノ−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−４−イル]酢酸エチル（０．０２ｇ）のテトラヒドロフラン（０．３０ｍＬ）−メタノール（０．１５ｍＬ）−水（０．１５ｍＬ）混合液に室温にて水酸化リチウム一水和物（０．００７ｇ）を加え、室温にて２時間撹拌した。反応混合物に酢酸を加えて中和し、酢酸エチルにて抽出した。有機層を飽和食塩水にて洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下留去し、表題化合物（０．０２ｇ）を得た。
[５'−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−６'−シアノ−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−４−イル]酢酸
[５'−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−６'−シアノ−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−４−イル]酢酸エチル（０．０２ｇ）のテトラヒドロフラン（０．３０ｍＬ）−メタノール（０．１５ｍＬ）−水（０．１５ｍＬ）混合液に室温にて水酸化リチウム一水和物（０．００７ｇ）を加え、室温にて２時間撹拌した。反応混合物に酢酸を加えて中和し、酢酸エチルにて抽出した。有機層を飽和食塩水にて洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下留去し、表題化合物（０．０２ｇ）を得た。
実施例７
２−[５'−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−４−イル]−２−メチルプロピオン酸
２−[５'−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−４−イル]−２−メチルプロピオン酸エチル（０．１４ｇ）、水酸化ナトリウム水溶液（１．０ｍｏｌ／Ｌ、０．６０ｍＬ）、テトラヒドロフラン（０．６ｍＬ）及びメタノール（１．８ｍＬ）の混合物をマイクロ波照射下、１４０℃で４．５時間撹拌した。反応混合物に水酸化ナトリウム水溶液（２．０ｍｏｌ／Ｌ、０．５０ｍＬ）を加え、マイクロ波照射下、１４０℃で２時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却後、塩酸（１．０ｍｏｌ／Ｌ、２．０ｍＬ）を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去して表題化合物（０．１１ｇ）を得た。
２−[５'−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−４−イル]−２−メチルプロピオン酸
２−[５'−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−４−イル]−２−メチルプロピオン酸エチル（０．１４ｇ）、水酸化ナトリウム水溶液（１．０ｍｏｌ／Ｌ、０．６０ｍＬ）、テトラヒドロフラン（０．６ｍＬ）及びメタノール（１．８ｍＬ）の混合物をマイクロ波照射下、１４０℃で４．５時間撹拌した。反応混合物に水酸化ナトリウム水溶液（２．０ｍｏｌ／Ｌ、０．５０ｍＬ）を加え、マイクロ波照射下、１４０℃で２時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却後、塩酸（１．０ｍｏｌ／Ｌ、２．０ｍＬ）を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下留去して表題化合物（０．１１ｇ）を得た。
実施例８
２−[５'−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−６'−シアノ−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−４−イル]プロピオン酸
２−[５'−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−６'−シアノ−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−４−イル]プロピオン酸エチル（０．０３ｇ）のテトラヒドロフラン（０．４ｍＬ）−メタノール（０．２ｍＬ）−水（０．２ｍＬ）混合液に室温にて水酸化リチウム一水和物（０．００８ｇ）を加え、室温にて終夜撹拌した。反応混合物に酢酸を加えて中和し、酢酸エチルにて抽出した。有機層を飽和食塩水にて洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル／メタノール＝５０／５０／０〜０／１００／０〜０／９０／１０）で精製し、表題化合物（０．０２ｇ）を得た。
２−[５'−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−６'−シアノ−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−４−イル]プロピオン酸
２−[５'−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−６'−シアノ−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−４−イル]プロピオン酸エチル（０．０３ｇ）のテトラヒドロフラン（０．４ｍＬ）−メタノール（０．２ｍＬ）−水（０．２ｍＬ）混合液に室温にて水酸化リチウム一水和物（０．００８ｇ）を加え、室温にて終夜撹拌した。反応混合物に酢酸を加えて中和し、酢酸エチルにて抽出した。有機層を飽和食塩水にて洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル／メタノール＝５０／５０／０〜０／１００／０〜０／９０／１０）で精製し、表題化合物（０．０２ｇ）を得た。
実施例９
[５'−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−４−メチル−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−４−イル]酢酸
[５'−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−４−メチル−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−４−イル]酢酸エチル（０．０３ｇ）、テトラヒドロフラン（０．３７５ｍＬ）、メタノール（０．３７５ｍＬ）及び水（０．１５ｍＬ）の混合物に室温にて水酸化リチウム一水和物（０．０２ｇ）を加え、室温にて３時間、５０℃にて４時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却後、塩酸（２．０ｍｏｌ／Ｌ、０．２ｍＬ）を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下留去して表題化合物（０．０２５ｇ）を得た。
[５'−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−４−メチル−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−４−イル]酢酸
[５'−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−４−メチル−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−４−イル]酢酸エチル（０．０３ｇ）、テトラヒドロフラン（０．３７５ｍＬ）、メタノール（０．３７５ｍＬ）及び水（０．１５ｍＬ）の混合物に室温にて水酸化リチウム一水和物（０．０２ｇ）を加え、室温にて３時間、５０℃にて４時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却後、塩酸（２．０ｍｏｌ／Ｌ、０．２ｍＬ）を加え、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水にて洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下留去して表題化合物（０．０２５ｇ）を得た。
実施例１０
[５'−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−６'−シアノ−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−４−メチル−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−４−イル]酢酸
[５'−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−６'−シアノ−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−４−メチル−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−４−イル]酢酸エチル（０．０６ｇ）、テトラヒドロフラン（０．５０ｍＬ）、メタノール（０．２５ｍＬ）及び水（０．２５ｍＬ）の混合物に室温にて水酸化リチウム一水和物（０．０２ｇ）を加え、室温にて１時間、５０℃にて３時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却後、酢酸を加えて中和し、酢酸エチルにて抽出した。有機層を飽和食塩水にて洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル／メタノール＝２０／８０／０〜０／１００／０〜０／９０／１０）で精製し、表題化合物（０．０３ｇ）を得た。
[５'−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−６'−シアノ−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−４−メチル−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−４−イル]酢酸
[５'−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−６'−シアノ−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−４−メチル−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−４−イル]酢酸エチル（０．０６ｇ）、テトラヒドロフラン（０．５０ｍＬ）、メタノール（０．２５ｍＬ）及び水（０．２５ｍＬ）の混合物に室温にて水酸化リチウム一水和物（０．０２ｇ）を加え、室温にて１時間、５０℃にて３時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却後、酢酸を加えて中和し、酢酸エチルにて抽出した。有機層を飽和食塩水にて洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル／メタノール＝２０／８０／０〜０／１００／０〜０／９０／１０）で精製し、表題化合物（０．０３ｇ）を得た。
実施例１１
(Ｓ)−２−[５'−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−４−イル]プロピオン酸
Ｎ−[４−[(Ｓ)−２−((Ｓ)−４−ベンジル−２−オキソオキサゾリジン−３−イル)−１−メチル−２−オキソエチル]−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−５'−イル]−２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−Ｎ−メチルイソブチルアミド（０．０８ｇ）のテトラヒドロフラン（１．５ｍＬ）−水（０．５ｍＬ）混合液に氷冷下にて水酸化リチウム一水和物（０．００８ｇ）及び過酸化水素水（３０％、０．０６ｍＬ）を加え、同温にて終夜撹拌した。反応混合物に亜硫酸ナトリウム水溶液（１０％、０．７５ｍＬ）を加え、３０分間撹拌した。溶媒を減圧下濃縮し、残渣に塩酸（１．０ｍｏｌ／Ｌ）を加えて酸性とし、酢酸エチルにて抽出した。水層を酢酸エチルにて再抽出し、合わせた有機層を飽和食塩水にて洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝９０／１０〜１０／９０）で精製し、表題化合物（０．０１４ｇ）を得た。
(Ｓ)−２−[５'−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−４−イル]プロピオン酸
Ｎ−[４−[(Ｓ)−２−((Ｓ)−４−ベンジル−２−オキソオキサゾリジン−３−イル)−１−メチル−２−オキソエチル]−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−５'−イル]−２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−Ｎ−メチルイソブチルアミド（０．０８ｇ）のテトラヒドロフラン（１．５ｍＬ）−水（０．５ｍＬ）混合液に氷冷下にて水酸化リチウム一水和物（０．００８ｇ）及び過酸化水素水（３０％、０．０６ｍＬ）を加え、同温にて終夜撹拌した。反応混合物に亜硫酸ナトリウム水溶液（１０％、０．７５ｍＬ）を加え、３０分間撹拌した。溶媒を減圧下濃縮し、残渣に塩酸（１．０ｍｏｌ／Ｌ）を加えて酸性とし、酢酸エチルにて抽出した。水層を酢酸エチルにて再抽出し、合わせた有機層を飽和食塩水にて洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝９０／１０〜１０／９０）で精製し、表題化合物（０．０１４ｇ）を得た。
実施例１２
(Ｒ)−２−[５'−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−４−イル]プロピオン酸
Ｎ−[４−[(Ｒ)−２−((Ｓ)−４−ベンジル−２−オキソオキサゾリジン−３−イル)−１−メチル−２−オキソエチル]−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−５'−イル]−２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−Ｎ−メチルイソブチルアミド（０．０４ｇ）のテトラヒドロフラン（０．７５ｍＬ）−水（０．２５ｍＬ）混合液に氷冷下にて水酸化リチウム一水和物（０．００４ｇ）及び過酸化水素水（３０％、０．０３ｍＬ）を加え、同温にて７時間撹拌した。反応混合物に亜硫酸ナトリウム水溶液（１０％、０．３７５ｍＬ）を加え、３０分間撹拌した。溶媒を減圧下濃縮し、残渣に塩酸（１．０ｍｏｌ／Ｌ）を加えて酸性とし、酢酸エチルにて抽出した。水層を酢酸エチルにて再抽出し、合わせた有機層を飽和食塩水にて洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝９０／１０〜１０／９０）で精製し、表題化合物（０．００４ｇ）を得た。
(Ｒ)−２−[５'−{[２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−２−メチルプロピオニル]メチルアミノ}−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−４−イル]プロピオン酸
Ｎ−[４−[(Ｒ)−２−((Ｓ)−４−ベンジル−２−オキソオキサゾリジン−３−イル)−１−メチル−２−オキソエチル]−４'−(４−フルオロ−２−メチルフェニル)−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−[１，２']ビピリジニル−５'−イル]−２−(３，５−ビストリフルオロメチルフェニル)−Ｎ−メチルイソブチルアミド（０．０４ｇ）のテトラヒドロフラン（０．７５ｍＬ）−水（０．２５ｍＬ）混合液に氷冷下にて水酸化リチウム一水和物（０．００４ｇ）及び過酸化水素水（３０％、０．０３ｍＬ）を加え、同温にて７時間撹拌した。反応混合物に亜硫酸ナトリウム水溶液（１０％、０．３７５ｍＬ）を加え、３０分間撹拌した。溶媒を減圧下濃縮し、残渣に塩酸（１．０ｍｏｌ／Ｌ）を加えて酸性とし、酢酸エチルにて抽出した。水層を酢酸エチルにて再抽出し、合わせた有機層を飽和食塩水にて洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝９０／１０〜１０／９０）で精製し、表題化合物（０．００４ｇ）を得た。
上記参考例１〜３２の化学構造式、並びに実施例１〜１２の化学構造式、及び物性値を表１〜７に示す。表中の略号は、Ｒｅｆ．Ｎｏ．は参考例番号、Ｅｘ．Ｎｏ．は実施例番号、Ｓｔｒ．は化学構造式、Ｐｈｙｓｉｃａｌ ｄａｔａは物性値、１Ｈ−ＮＭＲは水素核核磁気共鳴スペクトル、ＤＭＳＯ−ｄ６はジメチルスルホキシド−ｄ６、ＣＤＣｌ３はクロロホルム−ｄ１をそれぞれ示す。また、ＭＳは質量分析を示し、ＥＳＩ_ＡＰＣＩはエレクトロスプレーイオン化法−大気圧化学イオン化法のマルチイオン化法により測定したことを示す。
試験例１
ヒトＮＫ１受容体に対する親和性
（１）ヒトＮＫ１受容体発現ベクターの調製
ヒト成人正常組織由来脳ｃＤＮＡ（バイオチェイン）を鋳型として、配列番号１に示したフォワードプライマー、配列番号２に示したリバースプライマーを用いて、ＰＣＲ酵素ＰｒｉｍｅＳＴＡＲ Ｍａｘ ＤＮＡ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ又はＰｒｉｍｅＳＴＡＲ ＧＸＬ ＤＮＡ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ（登録商標、タカラバイオ）によりＰＣＲを実施した。増幅産物をＺｅｒｏ Ｂｌｕｎｔ ＰＣＲ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｋｉｔ（登録商標、ライフテクノロジーズ）を用いてプラスミド（ｐＣＲ−ＢｌｕｎｔＩＩ−ＴＯＰＯ （登録商標）、ライフテクノロジーズ）に組み込んだ。常法により、増幅産物が組み込まれたプラスミドを用いて大腸菌（ワンショットＴＯＰ１０コンピテントセル、ライフテクノロジーズ）を形質転換した。この大腸菌を５０μｇ／ｍＬのカナマイシンを含むＬＢ寒天培地にて１日培養した。培養後、コロニーを選択し、５０μｇ／ｍＬのカナマイシンを含むＬＢ培地にて培養した。培養後、Ｑｕａｎｔｕｍ Ｐｒｅｐ Ｐｌａｓｍｉｄ Ｍｉｎｉｐｒｅｐ Ｋｉｔ（バイオラッド）を用いてプラスミドを精製した。このプラスミドを制限酵素ＸｈｏＩ及びＨｉｎｄＩＩＩ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ）で約２時間二重消化した後、１％アガロース電気泳動を行い、切断された断片をＴａＫａＲａ ＲＩＣＯＣＨＩＰ（タカラバイオ）を用いて回収・精製した。別にベクター（ｐｃＤＮＡ３．１（−）（登録商標）、ライフテクノロジーズ）により形質転換された大腸菌からもプラスミドを精製し、制限酵素ＸｈｏＩ及びＨｉｎｄＩＩＩ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ）で約２時間二重消化した後、１％アガロース電気泳動を行い、切断されたベクターをＴａＫａＲａ ＲＩＣＯＣＨＩＰ（タカラバイオ）を用いて回収・精製した。ｐＣＲ−Ｂｌｕｎｔ−ＩＩから切断された断片と制限酵素処理されたｐｃＤＮＡ３．１（−）ベクターをＤＮＡ Ｌｉｇａｔｉｏｎ Ｋｉｔ＜Ｍｉｇｈｔｙ Ｍｉｘ＞（タカラバイオ）を用いてライゲーション反応を行った。ライゲーション後のプラスミドを用いて常法により、大腸菌（ワンショットＴＯＰ１０コンピテントセル、ライフテクノロジーズ）を形質転換した。この大腸菌を５０μｇ／ｍＬのアンピシリンを含むＬＢ寒天培地にて１日培養した。培養後、コロニーを選択し、５０μｇ／ｍＬのアンピシリンを含むＬＢ培地にて培養した後、Ｑｕａｎｔｕｍ Ｐｒｅｐ Ｐｌａｓｍｉｄ Ｍｉｎｉｐｒｅｐ Ｋｉｔ（バイオラッド）を用いてプラスミドを精製した。得られたプラスミドのタンパク質をコードする塩基配列（配列番号３）は、公知のデータベース（ＮＣＢＩ）に登録されているヒトタキキニン受容体１（ＴＡＣＲ１、ＮＫ１R）の塩基配列（ＮＭ＿００１０５８．３）と完全一致した。したがって、クローニングした遺伝子配列はヒトＮＫ１受容体の塩基配列であり、翻訳されるアミノ酸配列はヒトＮＫ１受容体であることが確認された。配列番号３に示した塩基配列が挿入されたｐｃＤＮＡ３．１（−）（登録商標）を、ヒトＮＫ１受容体発現プラスミドとした。
ヒトＮＫ１受容体に対する親和性
（１）ヒトＮＫ１受容体発現ベクターの調製
ヒト成人正常組織由来脳ｃＤＮＡ（バイオチェイン）を鋳型として、配列番号１に示したフォワードプライマー、配列番号２に示したリバースプライマーを用いて、ＰＣＲ酵素ＰｒｉｍｅＳＴＡＲ Ｍａｘ ＤＮＡ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ又はＰｒｉｍｅＳＴＡＲ ＧＸＬ ＤＮＡ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ（登録商標、タカラバイオ）によりＰＣＲを実施した。増幅産物をＺｅｒｏ Ｂｌｕｎｔ ＰＣＲ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｋｉｔ（登録商標、ライフテクノロジーズ）を用いてプラスミド（ｐＣＲ−ＢｌｕｎｔＩＩ−ＴＯＰＯ （登録商標）、ライフテクノロジーズ）に組み込んだ。常法により、増幅産物が組み込まれたプラスミドを用いて大腸菌（ワンショットＴＯＰ１０コンピテントセル、ライフテクノロジーズ）を形質転換した。この大腸菌を５０μｇ／ｍＬのカナマイシンを含むＬＢ寒天培地にて１日培養した。培養後、コロニーを選択し、５０μｇ／ｍＬのカナマイシンを含むＬＢ培地にて培養した。培養後、Ｑｕａｎｔｕｍ Ｐｒｅｐ Ｐｌａｓｍｉｄ Ｍｉｎｉｐｒｅｐ Ｋｉｔ（バイオラッド）を用いてプラスミドを精製した。このプラスミドを制限酵素ＸｈｏＩ及びＨｉｎｄＩＩＩ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ）で約２時間二重消化した後、１％アガロース電気泳動を行い、切断された断片をＴａＫａＲａ ＲＩＣＯＣＨＩＰ（タカラバイオ）を用いて回収・精製した。別にベクター（ｐｃＤＮＡ３．１（−）（登録商標）、ライフテクノロジーズ）により形質転換された大腸菌からもプラスミドを精製し、制限酵素ＸｈｏＩ及びＨｉｎｄＩＩＩ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ）で約２時間二重消化した後、１％アガロース電気泳動を行い、切断されたベクターをＴａＫａＲａ ＲＩＣＯＣＨＩＰ（タカラバイオ）を用いて回収・精製した。ｐＣＲ−Ｂｌｕｎｔ−ＩＩから切断された断片と制限酵素処理されたｐｃＤＮＡ３．１（−）ベクターをＤＮＡ Ｌｉｇａｔｉｏｎ Ｋｉｔ＜Ｍｉｇｈｔｙ Ｍｉｘ＞（タカラバイオ）を用いてライゲーション反応を行った。ライゲーション後のプラスミドを用いて常法により、大腸菌（ワンショットＴＯＰ１０コンピテントセル、ライフテクノロジーズ）を形質転換した。この大腸菌を５０μｇ／ｍＬのアンピシリンを含むＬＢ寒天培地にて１日培養した。培養後、コロニーを選択し、５０μｇ／ｍＬのアンピシリンを含むＬＢ培地にて培養した後、Ｑｕａｎｔｕｍ Ｐｒｅｐ Ｐｌａｓｍｉｄ Ｍｉｎｉｐｒｅｐ Ｋｉｔ（バイオラッド）を用いてプラスミドを精製した。得られたプラスミドのタンパク質をコードする塩基配列（配列番号３）は、公知のデータベース（ＮＣＢＩ）に登録されているヒトタキキニン受容体１（ＴＡＣＲ１、ＮＫ１R）の塩基配列（ＮＭ＿００１０５８．３）と完全一致した。したがって、クローニングした遺伝子配列はヒトＮＫ１受容体の塩基配列であり、翻訳されるアミノ酸配列はヒトＮＫ１受容体であることが確認された。配列番号３に示した塩基配列が挿入されたｐｃＤＮＡ３．１（−）（登録商標）を、ヒトＮＫ１受容体発現プラスミドとした。
（２）ヒトＮＫ１受容体発現細胞の調製
（２−１）２９３Ｔ細胞の培養
２９３Ｔ細胞（理化学研究所）は抗生物質ペニシリン−ストレプトマイシン溶液（ライステクノロジーズ、最終濃度：ペニシリンとして１００Ｕ／ｍＬ、ストレプトマイシン１００μｇ／ｍＬ）およびウシ胎児血清（最終濃度：１０％）を添加したＤ−ＭＥＭ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ Ｍｅｄｉｕｍ）液体培地（低グルコース、Ｌ−グルタミン含有、和光純薬工業）を用いて、５％ＣＯ２ガス条件のインキュベーター内で３７℃にて培養した。
（２−２）２９３Ｔ細胞の継代
ほぼコンフルエントに達した細胞をＰＢＳ（Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ Ｂｕｆｆｅｒｅｄ Ｓａｌｉｎｅ、和光純薬工業）にて洗浄し、０．０５％トリプシン−ＥＤＴＡ（ライステクノロジーズ）にて剥がし、上記液体培地にて懸濁した。懸濁した細胞をスプレットレシオが１：１０になるように上記液体培地で希釈し、培養した。
（２−３）ヒトＮＫ１受容体発現細胞の準備
コンフルエントに達した細胞をＰＢＳにて洗浄し、０．０５％トリプシン−ＥＤＴＡ（ライステクノロジーズ）にて剥がし、ウシ胎児血清（最終濃度：１０％）を添加したＤ−ＭＥＭ液体培地（低グルコース、Ｌ−グルタミン含有、和光純薬工業）に懸濁した。懸濁した細胞を上記液体培地で希釈し、ポリＤ−リジンコートした９６ウェルマイクロプレート（ＢＤ Ｂｉｏｃｏａｔ（登録商標）、日本ベクトン・ディッキンソン）の各ウェルに細胞数５ｘ１０４個／ウェル、液体培地量が１００μＬ／ウェルになるように調製し、播種した。播種後、その細胞を５％ＣＯ２ガス条件のインキュベーター内で３７℃にて約４〜５時間培養し、ヒトＮＫ１受容体発現プラスミド導入用細胞とした。
（２−４）ヒトＮＫ１受容体発現プラスミドの２９３Ｔ細胞への導入
ヒトＮＫ１受容体発現プラスミド導入のために、リポフェクタミン２０００（登録商標、ライフテクノロジーズ）を使用した。ヒトＮＫ１受容体発現プラスミドを０．２μｇ／２５μＬ／ウェルになるようにＯｐｔｉ−ＭＥＭ（登録商標）Ｉ Ｒｅｄｕｃｅｄ−Ｓｅｒｕｍ Ｍｅｄｉｕｍ（ライフテクノロジーズ）にて希釈した。同時に、リポフェクタミン２０００（登録商標、ライフテクノロジーズ）を０．４μＬ／２５μＬ／ウェルになるようにＯｐｔｉ−ＭＥＭ（登録商標）Ｉ Ｒｅｄｕｃｅｄ−Ｓｅｒｕｍ Ｍｅｄｉｕｍ（ライフテクノロジーズ）にて希釈し、室温で５分間インキュベートした。５分後、ヒトＮＫ１受容体発現プラスミド／リポフェクタミン２０００の複合体形成のために、希釈したヒトＮＫ１受容体発現プラスミドと希釈したリポフェクタミン２０００とを混合し、室温で２０〜２５分間インキュベートした。インキュベーション後、複合体液を上記ヒトＮＫ１受容体発現プラスミド導入用細胞に５０μＬ／ウェルずつ添加し、５％ＣＯ２ガス条件のインキュベーター内で３７℃にて約４８時間培養した。この４８時間培養後の細胞をヒトＮＫ１受容体発現細胞として各種アッセイに使用した。
（２−１）２９３Ｔ細胞の培養
２９３Ｔ細胞（理化学研究所）は抗生物質ペニシリン−ストレプトマイシン溶液（ライステクノロジーズ、最終濃度：ペニシリンとして１００Ｕ／ｍＬ、ストレプトマイシン１００μｇ／ｍＬ）およびウシ胎児血清（最終濃度：１０％）を添加したＤ−ＭＥＭ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ Ｍｅｄｉｕｍ）液体培地（低グルコース、Ｌ−グルタミン含有、和光純薬工業）を用いて、５％ＣＯ２ガス条件のインキュベーター内で３７℃にて培養した。
（２−２）２９３Ｔ細胞の継代
ほぼコンフルエントに達した細胞をＰＢＳ（Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ Ｂｕｆｆｅｒｅｄ Ｓａｌｉｎｅ、和光純薬工業）にて洗浄し、０．０５％トリプシン−ＥＤＴＡ（ライステクノロジーズ）にて剥がし、上記液体培地にて懸濁した。懸濁した細胞をスプレットレシオが１：１０になるように上記液体培地で希釈し、培養した。
（２−３）ヒトＮＫ１受容体発現細胞の準備
コンフルエントに達した細胞をＰＢＳにて洗浄し、０．０５％トリプシン−ＥＤＴＡ（ライステクノロジーズ）にて剥がし、ウシ胎児血清（最終濃度：１０％）を添加したＤ−ＭＥＭ液体培地（低グルコース、Ｌ−グルタミン含有、和光純薬工業）に懸濁した。懸濁した細胞を上記液体培地で希釈し、ポリＤ−リジンコートした９６ウェルマイクロプレート（ＢＤ Ｂｉｏｃｏａｔ（登録商標）、日本ベクトン・ディッキンソン）の各ウェルに細胞数５ｘ１０４個／ウェル、液体培地量が１００μＬ／ウェルになるように調製し、播種した。播種後、その細胞を５％ＣＯ２ガス条件のインキュベーター内で３７℃にて約４〜５時間培養し、ヒトＮＫ１受容体発現プラスミド導入用細胞とした。
（２−４）ヒトＮＫ１受容体発現プラスミドの２９３Ｔ細胞への導入
ヒトＮＫ１受容体発現プラスミド導入のために、リポフェクタミン２０００（登録商標、ライフテクノロジーズ）を使用した。ヒトＮＫ１受容体発現プラスミドを０．２μｇ／２５μＬ／ウェルになるようにＯｐｔｉ−ＭＥＭ（登録商標）Ｉ Ｒｅｄｕｃｅｄ−Ｓｅｒｕｍ Ｍｅｄｉｕｍ（ライフテクノロジーズ）にて希釈した。同時に、リポフェクタミン２０００（登録商標、ライフテクノロジーズ）を０．４μＬ／２５μＬ／ウェルになるようにＯｐｔｉ−ＭＥＭ（登録商標）Ｉ Ｒｅｄｕｃｅｄ−Ｓｅｒｕｍ Ｍｅｄｉｕｍ（ライフテクノロジーズ）にて希釈し、室温で５分間インキュベートした。５分後、ヒトＮＫ１受容体発現プラスミド／リポフェクタミン２０００の複合体形成のために、希釈したヒトＮＫ１受容体発現プラスミドと希釈したリポフェクタミン２０００とを混合し、室温で２０〜２５分間インキュベートした。インキュベーション後、複合体液を上記ヒトＮＫ１受容体発現プラスミド導入用細胞に５０μＬ／ウェルずつ添加し、５％ＣＯ２ガス条件のインキュベーター内で３７℃にて約４８時間培養した。この４８時間培養後の細胞をヒトＮＫ１受容体発現細胞として各種アッセイに使用した。
（３）ヒトＮＫ１受容体結合親和性の測定
（３−１）ヒトＮＫ１受容体発現細胞からの膜画分の調製
ヒトＮＫ１受容体発現細胞を１７５ｃｍ２ 培養フラスコ（日本ベクトン・ディッキンソン）内で作製した。ヒトＮＫ１受容体発現プラスミドとリポフェクタミン２０００の複合体形成反応は上記２−４に記載の方法から培養面積の比率計算にてスケールアップして実施した。ヒトＮＫ１受容体発現細胞を膜画分調製用緩衝液（５０ｍＭトリス（和光純薬工業）、１２０ｍＭ塩化ナトリウム（和光純薬工業）、５ｍＭ塩化カリウム（和光純薬工業）、１ｍＭエチレンジアミン四酢酸（シグマ）、０．００２ｍｇ／ｍＬキモスタチン（ペプチド研究所）、０．０４ｍｇ／バシドラシン（和光純薬工業）、０．００５ｍｇ／ｍＬホスホラミドン（ペプチド研究所）、０．５ｍＭフェニルメチルスルフォニルフルオライド（和光純薬工業）、ｐＨ７．４）にて回収し、１，８８０ｇで１０分間遠心分離し、細胞沈査を膜画分調製用緩衝液に懸濁した。１回の凍結融解をした後、細胞をＤｏｕｎｃｅ型ホモジナイザー（氷冷下、１０００ｒｐｍ、２０回）を用いて破砕した。破砕した細胞懸濁液を２０，０００ｒｐｍ、１０分間遠心分離し、上清を捨て細胞沈査を得た。細胞沈査を膜画分調製用緩衝液に再懸濁後、Ｄｏｕｎｃｅ型ホモジナイザー（氷冷下、１０００ｒｐｍ、３０回）を用いて破砕し、細胞懸濁液を２０，０００ｒｐｍ、１０分間遠心分離し、上清を捨て細胞沈査を得た。同様の破砕と遠心分離操作を再度繰り返し、最終細胞沈査を得た。最終細胞沈査を受容体結合試験用緩衝液（５０ｍＭトリス（和光純薬工業）、３ｍＭ塩化マンガン（和光純薬工業）、０．００２ｍｇ／ｍＬキモスタチン（ペプチド研究所）、０．０４ｍｇ／バシドラシン（和光純薬工業）、０．０２％ウシ血清アルブミン（シグマ）、ｐＨ７．４）に懸濁し、ＢＣＡ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ（ピアス）を用いてタンパク濃度を測定した。
（３−２）受容体結合試験
９６ウェルアッセイプレート（グライナー）に上記受容体結合試験用緩衝液２２．５μＬ／ウェルを分注し、８０倍濃度に１００％ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）で調製した試験化合物ＤＭＳＯ溶液を２．５μＬ／ウェル（最終濃度：１ｎＭ〜１００ｎＭ）ずつ添加し、混合した。放射性標識リガンドは１２５Ｉ−サブスタンスＰ（Ｓｕｂｓｔａｎｃｅ Ｐ，［１２５Ｉ］Ｔｙｒ８−、パーキンエルマー）を使用した。１２５Ｉ−サブスタンスＰを１２５ｐｍｏｌ／２５μＬ／ウェルになるように受容体結合試験用緩衝液で希釈し、９６ウェルアッセイプレートに添加し、混合した。ヒトＮＫ１受容体発現細胞から調製した膜画分は８〜１０μｇ／ウェルになるように受容体結合試験用緩衝液で希釈し、２７Ｇの注射針をスムーズに通過できるまで均一に懸濁し、１５０μＬ／ウェルで９６ウェルアッセイプレートに添加し、室温で６０分間振盪しながらインキュベートした。０．３％ポリエチレンイミンで前処理したマルチスクリーン９６ウェルフィルタープレート（ミリポア）にて反応液を吸引濾過し、洗浄液（５０ｍＭトリス、０．０２％ウシ血清アルブミン、ｐＨ７．４）で４回洗浄することにより反応を終結させた。マイクロプレート底部を６０℃で乾燥させた後、マイクロシンチ２０（パーキンエルマー）を１００μＬ／ウェルで分注し、プレート上部をトップシールＡ（パーキンエルマー）にて密栓し、５〜１０分間振盪した後、トップカウントＮＸＴ（登録商標）（パーキンエルマー）にて放射活性を測定した。各ウェルの放射活性は、アプレピタント１０μＭ添加時の放射活性（非特異的結合）を差し引くことで算出した。１２５Ｉ−サブスタンスＰの結合率％ ＝ （試験化合物添加群の放射活性）／（媒体添加群の放射活性）ｘ １００を算出し、解析ソフトＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ）を用いて結合率％を試験化合物濃度に対してのプロットを直線近似し、５０％阻害濃度ＩＣ５０を算出した。これらの結果を表８に示した。表中、Ｅｘ．Ｎｏ．は実施例番号を、ＩＣ５０（ｎＭ）は５０％阻害濃度をそれぞれ示す。
（３−１）ヒトＮＫ１受容体発現細胞からの膜画分の調製
ヒトＮＫ１受容体発現細胞を１７５ｃｍ２ 培養フラスコ（日本ベクトン・ディッキンソン）内で作製した。ヒトＮＫ１受容体発現プラスミドとリポフェクタミン２０００の複合体形成反応は上記２−４に記載の方法から培養面積の比率計算にてスケールアップして実施した。ヒトＮＫ１受容体発現細胞を膜画分調製用緩衝液（５０ｍＭトリス（和光純薬工業）、１２０ｍＭ塩化ナトリウム（和光純薬工業）、５ｍＭ塩化カリウム（和光純薬工業）、１ｍＭエチレンジアミン四酢酸（シグマ）、０．００２ｍｇ／ｍＬキモスタチン（ペプチド研究所）、０．０４ｍｇ／バシドラシン（和光純薬工業）、０．００５ｍｇ／ｍＬホスホラミドン（ペプチド研究所）、０．５ｍＭフェニルメチルスルフォニルフルオライド（和光純薬工業）、ｐＨ７．４）にて回収し、１，８８０ｇで１０分間遠心分離し、細胞沈査を膜画分調製用緩衝液に懸濁した。１回の凍結融解をした後、細胞をＤｏｕｎｃｅ型ホモジナイザー（氷冷下、１０００ｒｐｍ、２０回）を用いて破砕した。破砕した細胞懸濁液を２０，０００ｒｐｍ、１０分間遠心分離し、上清を捨て細胞沈査を得た。細胞沈査を膜画分調製用緩衝液に再懸濁後、Ｄｏｕｎｃｅ型ホモジナイザー（氷冷下、１０００ｒｐｍ、３０回）を用いて破砕し、細胞懸濁液を２０，０００ｒｐｍ、１０分間遠心分離し、上清を捨て細胞沈査を得た。同様の破砕と遠心分離操作を再度繰り返し、最終細胞沈査を得た。最終細胞沈査を受容体結合試験用緩衝液（５０ｍＭトリス（和光純薬工業）、３ｍＭ塩化マンガン（和光純薬工業）、０．００２ｍｇ／ｍＬキモスタチン（ペプチド研究所）、０．０４ｍｇ／バシドラシン（和光純薬工業）、０．０２％ウシ血清アルブミン（シグマ）、ｐＨ７．４）に懸濁し、ＢＣＡ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ（ピアス）を用いてタンパク濃度を測定した。
（３−２）受容体結合試験
９６ウェルアッセイプレート（グライナー）に上記受容体結合試験用緩衝液２２．５μＬ／ウェルを分注し、８０倍濃度に１００％ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）で調製した試験化合物ＤＭＳＯ溶液を２．５μＬ／ウェル（最終濃度：１ｎＭ〜１００ｎＭ）ずつ添加し、混合した。放射性標識リガンドは１２５Ｉ−サブスタンスＰ（Ｓｕｂｓｔａｎｃｅ Ｐ，［１２５Ｉ］Ｔｙｒ８−、パーキンエルマー）を使用した。１２５Ｉ−サブスタンスＰを１２５ｐｍｏｌ／２５μＬ／ウェルになるように受容体結合試験用緩衝液で希釈し、９６ウェルアッセイプレートに添加し、混合した。ヒトＮＫ１受容体発現細胞から調製した膜画分は８〜１０μｇ／ウェルになるように受容体結合試験用緩衝液で希釈し、２７Ｇの注射針をスムーズに通過できるまで均一に懸濁し、１５０μＬ／ウェルで９６ウェルアッセイプレートに添加し、室温で６０分間振盪しながらインキュベートした。０．３％ポリエチレンイミンで前処理したマルチスクリーン９６ウェルフィルタープレート（ミリポア）にて反応液を吸引濾過し、洗浄液（５０ｍＭトリス、０．０２％ウシ血清アルブミン、ｐＨ７．４）で４回洗浄することにより反応を終結させた。マイクロプレート底部を６０℃で乾燥させた後、マイクロシンチ２０（パーキンエルマー）を１００μＬ／ウェルで分注し、プレート上部をトップシールＡ（パーキンエルマー）にて密栓し、５〜１０分間振盪した後、トップカウントＮＸＴ（登録商標）（パーキンエルマー）にて放射活性を測定した。各ウェルの放射活性は、アプレピタント１０μＭ添加時の放射活性（非特異的結合）を差し引くことで算出した。１２５Ｉ−サブスタンスＰの結合率％ ＝ （試験化合物添加群の放射活性）／（媒体添加群の放射活性）ｘ １００を算出し、解析ソフトＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ）を用いて結合率％を試験化合物濃度に対してのプロットを直線近似し、５０％阻害濃度ＩＣ５０を算出した。これらの結果を表８に示した。表中、Ｅｘ．Ｎｏ．は実施例番号を、ＩＣ５０（ｎＭ）は５０％阻害濃度をそれぞれ示す。
（４）結果
表８に示したように、本発明の化合物は、ヒトＮＫ１受容体に高い結合親和性を示すことが明らかとなった。
試験例２
ヒトＮＫ１受容体に対する阻害作用
（１）ヒトＮＫ１受容体発現細胞の調製
試験例１の２−３及び２−４と同様な方法にて作製した。
ヒトＮＫ１受容体に対する阻害作用
（１）ヒトＮＫ１受容体発現細胞の調製
試験例１の２−３及び２−４と同様な方法にて作製した。
（２）細胞内カルシウム濃度上昇抑制作用の検討
ヒトＮＫ１受容体発現細胞を洗浄液（２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ／Ｈａｎｋ’ｓ Ｂａｌａｎｃｅｄ Ｓａｌｔ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ （ＨＢＳＳ） ｐＨ７．３）３００μL／ウェルで洗浄した。蛍光カルシウム指示薬（Ｆｌｕｏ−４ Ｄｉｒｅｃｔ Ｃａｌｃｉｕｍ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ、ライフテクノロジーズ、０．４２ｍＭプロベネシド含有および０．１％ウシ血清アルブミン含有：同製品プロトコールにて調製）１５０μL／ウェルで各ウェルに添加し、３７℃にて３０分間インキュベーター内でインキュベーションした。その後、８０倍濃度に１００％ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）で調製した試験化合物ＤＭＳＯ溶液を２．５μＬ／ウェル（最終濃度：０．１、１、１０μＭ）ずつ添加し、混合後、さらに３７℃にて３０分間インキュベーター内でインキュベーションした。３０分後速やかに細胞内カルシウム濃度を測定した。
細胞内カルシウム濃度は、ＦＤＳＳ（登録商標）７０００（浜松ホトニクス）を用いて蛍光シグナルとして測定した。蛍光シグナルは読み込み開始から１０秒後にアッセイバッファー（２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ／Ｈａｎｋ’ｓ Ｂａｌａｎｃｅｄ Ｓａｌｔ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ （ＨＢＳＳ） ｐＨ７．３、０．１％ウシ血清アルブミン含有）にて０．４μＭまたは４μＭに調製したサブスタンスＰ（ペプチド研究所）溶液を５０μＬ／ウェル（最終濃度：０．１または１μＭ）で自動添加し、１２０秒まで測定した。
媒体（ＤＭＳＯ）を添加した群の蛍光シグナルを１００％、サブスタンスＰ添加前の蛍光シグナルを０％とし、各試験化合物添加時の細胞内カルシウム濃度％を次式により算出した。
細胞内カルシウム濃度％ ＝ （試験化合物添加群の蛍光シグナル）／（媒体添加群の蛍光シグナル）ｘ １００
この細胞内カルシウム濃度％をサブスタンスＰのアゴニスト活性の残存活性（Ｓｕｂｓｔａｎｃｅ Ｐ−Ｒｅｓｐｏｎｓｅ Ｒｅｍａｉｎｉｎｇ： ＳＰＲＲ）とした。これらの結果を表９に示した。表中、Ｅｘ．Ｎｏ．は実施例番号を示し、ＳＰＲＲ（％）はサブスタンスＰ濃度１μＭ、化合物濃度０．１μＭにおける結果を示す。
ヒトＮＫ１受容体発現細胞を洗浄液（２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ／Ｈａｎｋ’ｓ Ｂａｌａｎｃｅｄ Ｓａｌｔ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ （ＨＢＳＳ） ｐＨ７．３）３００μL／ウェルで洗浄した。蛍光カルシウム指示薬（Ｆｌｕｏ−４ Ｄｉｒｅｃｔ Ｃａｌｃｉｕｍ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ、ライフテクノロジーズ、０．４２ｍＭプロベネシド含有および０．１％ウシ血清アルブミン含有：同製品プロトコールにて調製）１５０μL／ウェルで各ウェルに添加し、３７℃にて３０分間インキュベーター内でインキュベーションした。その後、８０倍濃度に１００％ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）で調製した試験化合物ＤＭＳＯ溶液を２．５μＬ／ウェル（最終濃度：０．１、１、１０μＭ）ずつ添加し、混合後、さらに３７℃にて３０分間インキュベーター内でインキュベーションした。３０分後速やかに細胞内カルシウム濃度を測定した。
細胞内カルシウム濃度は、ＦＤＳＳ（登録商標）７０００（浜松ホトニクス）を用いて蛍光シグナルとして測定した。蛍光シグナルは読み込み開始から１０秒後にアッセイバッファー（２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ／Ｈａｎｋ’ｓ Ｂａｌａｎｃｅｄ Ｓａｌｔ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ （ＨＢＳＳ） ｐＨ７．３、０．１％ウシ血清アルブミン含有）にて０．４μＭまたは４μＭに調製したサブスタンスＰ（ペプチド研究所）溶液を５０μＬ／ウェル（最終濃度：０．１または１μＭ）で自動添加し、１２０秒まで測定した。
媒体（ＤＭＳＯ）を添加した群の蛍光シグナルを１００％、サブスタンスＰ添加前の蛍光シグナルを０％とし、各試験化合物添加時の細胞内カルシウム濃度％を次式により算出した。
細胞内カルシウム濃度％ ＝ （試験化合物添加群の蛍光シグナル）／（媒体添加群の蛍光シグナル）ｘ １００
この細胞内カルシウム濃度％をサブスタンスＰのアゴニスト活性の残存活性（Ｓｕｂｓｔａｎｃｅ Ｐ−Ｒｅｓｐｏｎｓｅ Ｒｅｍａｉｎｉｎｇ： ＳＰＲＲ）とした。これらの結果を表９に示した。表中、Ｅｘ．Ｎｏ．は実施例番号を示し、ＳＰＲＲ（％）はサブスタンスＰ濃度１μＭ、化合物濃度０．１μＭにおける結果を示す。
（３）結果
表９に示したように、本発明の化合物は、ヒトＮＫ１受容体拮抗作用を示すことが明らかとなった。
試験例３
ＣＹＰ３Ａ４に対する阻害作用
評価濃度の１０００倍濃度の試験化合物のジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）溶液を調製し、それを希釈して反応溶液を調製した。１ｎＭ〜２０μＭ 試験化合物、３．２ｍＭ塩化マグネシウム、０．２ｐｍｏｌ Ｈｕｍａｎ ＣＹＰ３Ａ４（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、０．５ｍＭ還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰＨ）、及び３μＭ Ｌｕｃｉｆｅｒｉｎ−ＩＰＡ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を含むリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．４）中で３７℃１０分間インキュベーションさせることで酵素反応を行った。反応液量は５０μＬ／ウェルで行った。３０分プレインキュベーション群は、基質であるＬｕｃｉｆｅｒｉｎ−ＩＰＡ溶液（１２．５μＬ／ウェル）を添加する前に、３７℃で３０分間インキュベーションを行った。酵素反応終了時に５０μＬ／ウェルのＬｕｃｉｆｅｒｉｎ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｒｅａｇｅｎｔ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を添加して室温で２０分置いた後、ｉｎｆｉｎｉｔｅ Ｍ１０００（ＴＥＣＡＮ）で発光強度を測定した。試験化合物非添加群に対する酵素活性（％）を算出し、解析ソフトＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ）を用いて用量反応曲線を作成し、５０％の阻害を示す化合物濃度ＩＣ５０を算出した。比較例として、ＮＫ１受容体拮抗剤であるアプレピタントを同様に試験した。
ＣＹＰ３Ａ４に対する阻害作用
評価濃度の１０００倍濃度の試験化合物のジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）溶液を調製し、それを希釈して反応溶液を調製した。１ｎＭ〜２０μＭ 試験化合物、３．２ｍＭ塩化マグネシウム、０．２ｐｍｏｌ Ｈｕｍａｎ ＣＹＰ３Ａ４（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、０．５ｍＭ還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰＨ）、及び３μＭ Ｌｕｃｉｆｅｒｉｎ−ＩＰＡ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を含むリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．４）中で３７℃１０分間インキュベーションさせることで酵素反応を行った。反応液量は５０μＬ／ウェルで行った。３０分プレインキュベーション群は、基質であるＬｕｃｉｆｅｒｉｎ−ＩＰＡ溶液（１２．５μＬ／ウェル）を添加する前に、３７℃で３０分間インキュベーションを行った。酵素反応終了時に５０μＬ／ウェルのＬｕｃｉｆｅｒｉｎ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｒｅａｇｅｎｔ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を添加して室温で２０分置いた後、ｉｎｆｉｎｉｔｅ Ｍ１０００（ＴＥＣＡＮ）で発光強度を測定した。試験化合物非添加群に対する酵素活性（％）を算出し、解析ソフトＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ）を用いて用量反応曲線を作成し、５０％の阻害を示す化合物濃度ＩＣ５０を算出した。比較例として、ＮＫ１受容体拮抗剤であるアプレピタントを同様に試験した。
上記の測定方法で、試験化合物の３０分プレインキュベーション群におけるＩＣ５０値を測定した結果を表１０に示す。表中、Ｅｘ．Ｎｏ．は実施例番号を示し、ＩＣ５０（μＭ）は５０％阻害濃度をそれぞれ示す。
本発明の化合物のＣＹＰ３Ａ４の阻害活性は、アプレピタントに比べ減弱されていることが明らかとなった。そのため、本発明の化合物は、アプレピタントに比べＣＹＰ３Ａ４阻害作用に基づく薬物間相互作用が少ないことが期待される。
試験例４
フットタッピングに対する作用
（１）フットタッピングに対する作用
雄性スナネズミ（日本エスエルシー）をイソフルランで麻酔後、試験化合物０．３ｍｇ／ｋｇを頸静脈より投与した。４時間後、イソフルラン麻酔下にて、頭部ブレグマの側方１ｍｍ、４．５ｍｍ深部にＮＫ１受容体アゴニストであるＧＲ７３６３２（５ｐｍｏｌ／５μｌ）を脳室内へ投与した。投与後、観察ケージにスナネズミを移動し、正向反射回復後５分間のフットタッピングを起こしている時間を測定した。試験化合物のフットタッピングの抑制率（％）は次式により算出した。
フットタッピングの抑制率（％）＝｛１−（試験化合物投与のフットタッピング時間）／（溶媒投与のフットタッピング時間）｝×１００
フットタッピングに対する作用
（１）フットタッピングに対する作用
雄性スナネズミ（日本エスエルシー）をイソフルランで麻酔後、試験化合物０．３ｍｇ／ｋｇを頸静脈より投与した。４時間後、イソフルラン麻酔下にて、頭部ブレグマの側方１ｍｍ、４．５ｍｍ深部にＮＫ１受容体アゴニストであるＧＲ７３６３２（５ｐｍｏｌ／５μｌ）を脳室内へ投与した。投与後、観察ケージにスナネズミを移動し、正向反射回復後５分間のフットタッピングを起こしている時間を測定した。試験化合物のフットタッピングの抑制率（％）は次式により算出した。
フットタッピングの抑制率（％）＝｛１−（試験化合物投与のフットタッピング時間）／（溶媒投与のフットタッピング時間）｝×１００
（２）薬物濃度の測定
フットタッピング終了後、速やかにエーテル麻酔下開腹し、腹部大静脈より採血し、同時に脳を摘出した。液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ／ＭＳ）を用いた定量分析により、血漿中及び脳内の試験化合物濃度を測定した。
フットタッピング終了後、速やかにエーテル麻酔下開腹し、腹部大静脈より採血し、同時に脳を摘出した。液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ／ＭＳ）を用いた定量分析により、血漿中及び脳内の試験化合物濃度を測定した。
（３）結果
上記の試験方法でフットタッピングに対する作用を測定した結果を表１１に示す。表中、Ｅｘ．Ｎｏ．は実施例番号を示し、Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ（％）はフットタッピングの抑制率、Ｃｏｎｃ．（ｎＭ）は脳内薬物濃度を示す。
本発明の化合物は、中枢移行性を示し、ｉｎ ｖｉｖｏにおいても優れたＮＫ１受容体拮抗作用を発現した。
上記の試験方法でフットタッピングに対する作用を測定した結果を表１１に示す。表中、Ｅｘ．Ｎｏ．は実施例番号を示し、Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ（％）はフットタッピングの抑制率、Ｃｏｎｃ．（ｎＭ）は脳内薬物濃度を示す。
試験例５
フェレット薬物動態試験
（１）試験方法
試験化合物溶液は、媒体（５０％Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（和光純薬工業）、３０％プロピレングリコール（和光純薬工業）、４％２-ヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリン（和光純薬工業））に溶解して調製した。イソフルラン麻酔下で雄性フェレット（マーシャル・バイオリソーシス・ジャパン）に試験化合物０．３ｍｇ／ｋｇを頸静脈より静脈内投与した。経口投与の場合は、覚醒下にて試験化合物１ｍｇ／ｋｇを経口投与した。試験化合物投与後、前腕橈側皮静脈より経時的に採血を行い、血漿中の試験化合物濃度を液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ／ＭＳ）を用いた定量分析により測定した。
フェレット薬物動態試験
（１）試験方法
試験化合物溶液は、媒体（５０％Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（和光純薬工業）、３０％プロピレングリコール（和光純薬工業）、４％２-ヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリン（和光純薬工業））に溶解して調製した。イソフルラン麻酔下で雄性フェレット（マーシャル・バイオリソーシス・ジャパン）に試験化合物０．３ｍｇ／ｋｇを頸静脈より静脈内投与した。経口投与の場合は、覚醒下にて試験化合物１ｍｇ／ｋｇを経口投与した。試験化合物投与後、前腕橈側皮静脈より経時的に採血を行い、血漿中の試験化合物濃度を液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ／ＭＳ）を用いた定量分析により測定した。
（２）結果
上記の試験方法でフェレット薬物動態試験を実施した結果を表１２および表１３に示す。表中、Ｅｘ．Ｎｏ．は実施例番号を示し、ＣＬｔｏｔおよびＶｓｓはそれぞれ静脈内投与における血漿中濃度に基づく全身クリアランスおよび定常状態分布容積を示し、Ｃｍａｘ、ＡＵＣおよびＢＡはそれぞれ経口投与における最高血漿中試験化合物濃度、血漿中試験化合物濃度−時間曲線下面積およびバイオアベイラビリティーを示す。
表１２および表１３に示したように、本発明の化合物は、優れた薬物動態を示した。
上記の試験方法でフェレット薬物動態試験を実施した結果を表１２および表１３に示す。表中、Ｅｘ．Ｎｏ．は実施例番号を示し、ＣＬｔｏｔおよびＶｓｓはそれぞれ静脈内投与における血漿中濃度に基づく全身クリアランスおよび定常状態分布容積を示し、Ｃｍａｘ、ＡＵＣおよびＢＡはそれぞれ経口投与における最高血漿中試験化合物濃度、血漿中試験化合物濃度−時間曲線下面積およびバイオアベイラビリティーを示す。
試験例６
シスプラチン誘発急性及び遅発性嘔吐反応に対する作用
（１）試験方法
（１−１）静脈投与試験
試験化合物溶液は、媒体（５０％Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（和光純薬工業）、３０％プロピレングリコール（和光純薬工業）、及び４％２-ヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリン（和光純薬工業）の混合物）に溶解して調製した。対照群には、媒体のみを投与した。
イソフルラン麻酔下で雄性フェレット（マーシャル・バイオリソーシス・ジャパン）に試験化合物３ｍｇ／ｋｇを頸静脈より静脈内投与した。投薬から１時間後に４０−５０℃に加温したシスプラチン５ｍｇ／ｋｇを腹腔内へ投与した。シスプラチン投与直後から７２時間後までフェレットを観察し、レッチング（胃内容物の排出のない腹部の周期的収縮）及び嘔吐の発現回数を計測した。
（１−２）経口投与試験
試験化合物溶液は、媒体（１％Ｎ−メチル−２−ピロリドン、０．５％ツイーン８０、２０％ポリエチレングリコール４００、７８．５％生理食塩水）に溶解して調製した。対照群には、溶媒のみを投与した。
雄性フェレット（マーシャル・バイオリソーシス・ジャパン）に試験化合物を経口投与した。経口投与は２４時間ごとに１ｍｇ／ｋｇを計３回行った。最初の試験化合物経口投与から１時間後に４０−５０℃に加温したシスプラチン５ｍｇ／ｋｇ腹腔内へ投与した。シスプラチン投与直後から７２時間後までフェレットを観察し、レッチング（胃内容物の排出のない腹部の周期的収縮）及び嘔吐の発現回数を計測した。
シスプラチン誘発急性及び遅発性嘔吐反応に対する作用
（１）試験方法
（１−１）静脈投与試験
試験化合物溶液は、媒体（５０％Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（和光純薬工業）、３０％プロピレングリコール（和光純薬工業）、及び４％２-ヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリン（和光純薬工業）の混合物）に溶解して調製した。対照群には、媒体のみを投与した。
イソフルラン麻酔下で雄性フェレット（マーシャル・バイオリソーシス・ジャパン）に試験化合物３ｍｇ／ｋｇを頸静脈より静脈内投与した。投薬から１時間後に４０−５０℃に加温したシスプラチン５ｍｇ／ｋｇを腹腔内へ投与した。シスプラチン投与直後から７２時間後までフェレットを観察し、レッチング（胃内容物の排出のない腹部の周期的収縮）及び嘔吐の発現回数を計測した。
（１−２）経口投与試験
試験化合物溶液は、媒体（１％Ｎ−メチル−２−ピロリドン、０．５％ツイーン８０、２０％ポリエチレングリコール４００、７８．５％生理食塩水）に溶解して調製した。対照群には、溶媒のみを投与した。
雄性フェレット（マーシャル・バイオリソーシス・ジャパン）に試験化合物を経口投与した。経口投与は２４時間ごとに１ｍｇ／ｋｇを計３回行った。最初の試験化合物経口投与から１時間後に４０−５０℃に加温したシスプラチン５ｍｇ／ｋｇ腹腔内へ投与した。シスプラチン投与直後から７２時間後までフェレットを観察し、レッチング（胃内容物の排出のない腹部の周期的収縮）及び嘔吐の発現回数を計測した。
（２）結果
結果を図１に示す。対照群では、急性期（シスプラチン投与後２４時間まで）及び遅発期（シスプラチン投与後２４時間以後７２時間まで）においてレッチング及び嘔吐の発現回数の増加が認められた。実施例１の化合物静脈内投与群及び経口投与群では、急性期及び遅発期においてレッチング及び嘔吐の発現回数の抑制が認められた。
本発明の化合物は、優れた薬効持続性、並びにシスプラチン誘発急性及び遅発性嘔吐反応に対する抑制作用を示すことが明らかとなった。
結果を図１に示す。対照群では、急性期（シスプラチン投与後２４時間まで）及び遅発期（シスプラチン投与後２４時間以後７２時間まで）においてレッチング及び嘔吐の発現回数の増加が認められた。実施例１の化合物静脈内投与群及び経口投与群では、急性期及び遅発期においてレッチング及び嘔吐の発現回数の抑制が認められた。
本発明の化合物は、優れた薬効持続性、並びにシスプラチン誘発急性及び遅発性嘔吐反応に対する抑制作用を示すことが明らかとなった。
試験例７
ｈＥＲＧ電流に対する評価
（１）試験方法
評価濃度（１０μＭ）の１０００倍濃度の試験化合物のジメチルスルホキシド （ＤＭＳＯ）溶液を調製し、それを希釈して最終適用濃度の溶液を調製した。ｈＥＲＧ電流の測定は、ｈＥＲＧチャネルを発現させたhuman embryonic kidney（ＨＥＫ）２９３細胞を播種したカバーガラスを灌流槽上に置いて灌流液を流し、パッチクランプシステムを用いたホールセル法にて行った。データ取得解析ソフトｐＣＬＡＭＰ９（Ａｘｏｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ， Ｉｎｃ．）のパルスプロトコル（保持電位：−８０ｍＶ、脱分極パルス：＋２０ｍＶ：１．９秒、再分極パルス：−５０ｍＶ：２秒、１５秒間隔で刺激）により生じるｈＥＲＧチャネル由来の電流変化を測定した。測定条件は、流速：約１．５ｍＬ／ｍｉｎ、温度：約３３℃とした。試験化合物適用直前及び適用１０分直後のそれぞれ２波形を解析し、統計解析した。試験化合物適用前の値を１００％として、その値からの変化率を求めた。
（２）結果
上記の方法で、試験化合物のｈＥＲＧ電流に対する評価を行った（結果を表１４に示す）。表中、Ex.No.は実施例番号を示し、結果は平均値±標準誤差で示した。
表１４に示したように、本発明の化合物はｈＥＲＧ電流に対して、媒体対照（０．１％ＤＭＳＯ）と比べて統計学的に有意な変動を示さなかった。
ｈＥＲＧ電流に対する評価
（１）試験方法
評価濃度（１０μＭ）の１０００倍濃度の試験化合物のジメチルスルホキシド （ＤＭＳＯ）溶液を調製し、それを希釈して最終適用濃度の溶液を調製した。ｈＥＲＧ電流の測定は、ｈＥＲＧチャネルを発現させたhuman embryonic kidney（ＨＥＫ）２９３細胞を播種したカバーガラスを灌流槽上に置いて灌流液を流し、パッチクランプシステムを用いたホールセル法にて行った。データ取得解析ソフトｐＣＬＡＭＰ９（Ａｘｏｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ， Ｉｎｃ．）のパルスプロトコル（保持電位：−８０ｍＶ、脱分極パルス：＋２０ｍＶ：１．９秒、再分極パルス：−５０ｍＶ：２秒、１５秒間隔で刺激）により生じるｈＥＲＧチャネル由来の電流変化を測定した。測定条件は、流速：約１．５ｍＬ／ｍｉｎ、温度：約３３℃とした。試験化合物適用直前及び適用１０分直後のそれぞれ２波形を解析し、統計解析した。試験化合物適用前の値を１００％として、その値からの変化率を求めた。
（２）結果
上記の方法で、試験化合物のｈＥＲＧ電流に対する評価を行った（結果を表１４に示す）。表中、Ex.No.は実施例番号を示し、結果は平均値±標準誤差で示した。
本発明の化合物又はその薬理学的に許容される塩は、優れたＮＫ１受容体拮抗作用を有するので、抗悪性腫瘍剤投与に伴う悪心及び嘔吐の予防又は治療薬として有用である。
＜配列表１＞
配列番号１は、配列番号３のＤＮＡを増幅するために使用されたフォワードプライマーの配列である。
＜配列表２＞
配列番号２は、配列番号３のＤＮＡを増幅するために使用されたリバースプライマーの配列である。
＜配列表３＞
配列番号３は、ヒトタキキニン受容体１を発現するように配列番号１及び２のプライマーを用いて増幅されたタンパク発現部位のＤＮＡ配列である。
配列番号１は、配列番号３のＤＮＡを増幅するために使用されたフォワードプライマーの配列である。
＜配列表２＞
配列番号２は、配列番号３のＤＮＡを増幅するために使用されたリバースプライマーの配列である。
＜配列表３＞
配列番号３は、ヒトタキキニン受容体１を発現するように配列番号１及び２のプライマーを用いて増幅されたタンパク発現部位のＤＮＡ配列である。
Claims (12)
- 式（Ｉ）で表される化合物：
環Ａは、式：
環Ｂは、式：
（ただし、（＊）を付された結合は、式：
（＊＊）を付された結合は、環Ａとの結合部位であり；
（＊＊＊）を付された結合は、式：
Ｒ１は、Ｃ１−６アルキル又はＣ１−６アルコキシであり；
Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立して水素原子、又はメチルであり；
ｎは、０、１、２、３、４又は５；である。〕
又はその薬理学的に許容される塩。 - 式（Ｉa）で表される、請求項１に記載の化合物：
環Ａ、Ｒ１、及びｎは、請求項１と同じ意味であり；
環Ｂｂは、式：
（式中、（＊）を付された結合は、式：
（＊＊）、及び（＊＊＊）は、請求項１と同じ意味である。）；である。〕
又はその薬理学的に許容される塩。 - 式（Ｉｂ）で表される、請求項２に記載の化合物：
環Ａ及び環Ｂｂは、請求項２と同じ意味であり；
（ただし、（＊）を付された結合は、式：
（＊＊）及び（＊＊＊）は、請求項２と同じ意味である。）；
Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃ、Ｒ１ｄ及びＲ１ｅは、それぞれ独立して、水素原子、メチル又はメトキシ；である。〕
又はその薬理学的に許容される塩。 - 環Ｂが、以下の式で表される、請求項１に記載の化合物：
又はその薬理学的に許容される塩。 - Ｒ１がメチルであり、ｎが０、又は１である、請求項４に記載の化合物、又はその薬理学的に許容される塩。
- 以下の式で表される化合物：
- 以下の式で表される化合物：
- 以下の式で表される化合物：
- 以下の式で表される化合物：
- 以下の式で表される化合物：
- 請求項１〜１０の何れかに記載の化合物、又はその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有する医薬組成物。
- 抗悪性腫瘍剤投与に伴う悪心及び嘔吐の予防用の医薬組成物である、請求項１１に記載の医薬組成物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2014555442A JP5806420B1 (ja) | 2013-11-08 | 2014-11-06 | カルボキシメチルピペリジン誘導体 |
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2013231773 | 2013-11-08 | ||
| JP2013231773 | 2013-11-08 | ||
| JP2014555442A JP5806420B1 (ja) | 2013-11-08 | 2014-11-06 | カルボキシメチルピペリジン誘導体 |
| PCT/JP2014/079384 WO2015068744A1 (ja) | 2013-11-08 | 2014-11-06 | カルボキシメチルピペリジン誘導体 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP5806420B1 JP5806420B1 (ja) | 2015-11-10 |
| JPWO2015068744A1 true JPWO2015068744A1 (ja) | 2017-03-09 |
Family
ID=53041521
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2014555442A Expired - Fee Related JP5806420B1 (ja) | 2013-11-08 | 2014-11-06 | カルボキシメチルピペリジン誘導体 |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US10100030B2 (ja) |
| EP (1) | EP3067349B1 (ja) |
| JP (1) | JP5806420B1 (ja) |
| KR (1) | KR20160078997A (ja) |
| CN (1) | CN105745198B (ja) |
| AU (1) | AU2014347644B2 (ja) |
| BR (1) | BR112016009811A2 (ja) |
| CA (1) | CA2930008A1 (ja) |
| ES (1) | ES2671418T3 (ja) |
| IL (1) | IL245286B (ja) |
| MX (1) | MX368070B (ja) |
| PL (1) | PL3067349T3 (ja) |
| RU (1) | RU2673084C2 (ja) |
| TW (1) | TWI657082B (ja) |
| WO (1) | WO2015068744A1 (ja) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| TWI649307B (zh) | 2014-05-07 | 2019-02-01 | 日商橘生藥品工業股份有限公司 | Cyclohexylpyridine derivative |
| WO2016021562A1 (ja) * | 2014-08-06 | 2016-02-11 | キッセイ薬品工業株式会社 | シアノチオフェン誘導体 |
| EP3388423B1 (en) | 2015-12-07 | 2020-05-27 | Kissei Pharmaceutical Co., Ltd. | Nk1 receptor antagonist |
| KR102351942B1 (ko) | 2016-06-21 | 2022-01-18 | 디아이씨 가부시끼가이샤 | 알코올 변성 폴리아미드이미드 수지 및 그 제조 방법 |
| KR20220101090A (ko) | 2019-11-15 | 2022-07-19 | 칸디 테라퓨틱스 리미티드 | Nt-814의 핵심 중간체인 6-클로로-4-(4-플루오로-2-메틸페닐)피리딘-3-아민의 새로운 화학적 제조 방법 |
Family Cites Families (19)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1035115B1 (en) * | 1999-02-24 | 2004-09-29 | F. Hoffmann-La Roche Ag | 4-Phenylpyridine derivatives and their use as NK-1 receptor antagonists |
| AU772446B2 (en) | 1999-02-24 | 2004-04-29 | F. Hoffmann-La Roche Ag | 3-phenylpyridine derivatives and their use as NK-1 receptor antagonists |
| DE60006340T2 (de) | 1999-11-29 | 2004-09-09 | F. Hoffmann-La Roche Ag | 2-(3,5-Bis-trifluoromethyl-phenyl)-N-methyl-N-(6-morpholin-4-yl-4-o-tolyl-pyridin-3-yl)-isobutyramid |
| WO2002006236A1 (en) | 2000-07-14 | 2002-01-24 | F. Hoffmann-La Roche Ag | N-oxides as nk1 receptor antagonist prodrugs of 4-phenyl-pyridine derivatives |
| TWI287003B (en) | 2000-07-24 | 2007-09-21 | Hoffmann La Roche | 4-phenyl-pyridine derivatives |
| TWI259180B (en) | 2000-08-08 | 2006-08-01 | Hoffmann La Roche | 4-Phenyl-pyridine derivatives |
| CA2444395C (en) | 2001-04-23 | 2010-12-21 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Use of nk-1 receptor antagonists against benign prostatic hyperplasia |
| US20030083345A1 (en) | 2001-07-10 | 2003-05-01 | Torsten Hoffmann | Method of treatment and/or prevention of brain, spinal or nerve injury |
| US6849624B2 (en) | 2001-07-31 | 2005-02-01 | Hoffmann-La Roche Inc. | Aromatic and heteroaromatic substituted amides |
| JP4490421B2 (ja) | 2003-07-03 | 2010-06-23 | エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー | 統合失調症を処置するデュアルｎｋ１／ｎｋ３アンタゴニスト |
| US20060030600A1 (en) | 2004-08-06 | 2006-02-09 | Patrick Schnider | Dual NK1/NK3 receptor antagonists for the treatment of schizophrenia |
| RU2404969C2 (ru) | 2005-03-23 | 2010-11-27 | Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг | Метаболиты антагонистов nk-1 против рвоты |
| AR058805A1 (es) | 2005-09-09 | 2008-02-27 | Smithkline Beecham Corp | Derivados biciclicos de piridina utiles como agentes antipsicoticos |
| CN101267808A (zh) | 2005-09-23 | 2008-09-17 | 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 | 新型制剂 |
| DOP2007000068A (es) * | 2006-04-12 | 2007-10-31 | Sanofi Aventis Us Llc | Compuestos de amino-pirimidina 2,6-sustituidos-4-monosustituidos como antagonistas del receptor de prostaglandina d2 |
| MX2009001494A (es) * | 2006-08-07 | 2009-04-23 | Albany Molecular Res Inc | 2-aminobenzoxazol carboxamidas como moduladores 5ht3. |
| GB0808747D0 (en) | 2008-05-14 | 2008-06-18 | Glaxo Wellcome Mfg Pte Ltd | Novel compounds |
| WO2011054773A1 (en) | 2009-11-03 | 2011-05-12 | Glaxosmithkline Llc | Novel lactam compounds |
| US8426450B1 (en) | 2011-11-29 | 2013-04-23 | Helsinn Healthcare Sa | Substituted 4-phenyl pyridines having anti-emetic effect |
-
2014
- 2014-11-06 EP EP14860761.7A patent/EP3067349B1/en not_active Not-in-force
- 2014-11-06 US US15/034,808 patent/US10100030B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2014-11-06 CA CA2930008A patent/CA2930008A1/en not_active Abandoned
- 2014-11-06 MX MX2016006004A patent/MX368070B/es active IP Right Grant
- 2014-11-06 AU AU2014347644A patent/AU2014347644B2/en not_active Ceased
- 2014-11-06 ES ES14860761.7T patent/ES2671418T3/es active Active
- 2014-11-06 RU RU2016122464A patent/RU2673084C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2014-11-06 KR KR1020167013135A patent/KR20160078997A/ko active IP Right Grant
- 2014-11-06 TW TW103138516A patent/TWI657082B/zh not_active IP Right Cessation
- 2014-11-06 JP JP2014555442A patent/JP5806420B1/ja not_active Expired - Fee Related
- 2014-11-06 CN CN201480060999.7A patent/CN105745198B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2014-11-06 WO PCT/JP2014/079384 patent/WO2015068744A1/ja active Application Filing
- 2014-11-06 PL PL14860761T patent/PL3067349T3/pl unknown
- 2014-11-06 BR BR112016009811A patent/BR112016009811A2/pt not_active IP Right Cessation
-
2016
- 2016-04-21 IL IL245286A patent/IL245286B/en not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA2930008A1 (en) | 2015-05-14 |
| WO2015068744A1 (ja) | 2015-05-14 |
| RU2673084C2 (ru) | 2018-11-22 |
| MX2016006004A (es) | 2016-08-12 |
| RU2016122464A3 (ja) | 2018-06-25 |
| ES2671418T3 (es) | 2018-06-06 |
| TW201605823A (zh) | 2016-02-16 |
| KR20160078997A (ko) | 2016-07-05 |
| EP3067349A4 (en) | 2016-12-28 |
| MX368070B (es) | 2019-09-18 |
| PL3067349T3 (pl) | 2018-06-29 |
| AU2014347644A1 (en) | 2016-05-19 |
| IL245286B (en) | 2019-09-26 |
| RU2016122464A (ru) | 2017-12-11 |
| CN105745198A (zh) | 2016-07-06 |
| CN105745198B (zh) | 2018-09-21 |
| EP3067349B1 (en) | 2018-02-28 |
| TWI657082B (zh) | 2019-04-21 |
| US20160289206A1 (en) | 2016-10-06 |
| BR112016009811A2 (pt) | 2017-12-05 |
| EP3067349A1 (en) | 2016-09-14 |
| US10100030B2 (en) | 2018-10-16 |
| AU2014347644B2 (en) | 2018-06-14 |
| JP5806420B1 (ja) | 2015-11-10 |
| IL245286A0 (en) | 2016-06-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP5806420B1 (ja) | カルボキシメチルピペリジン誘導体 | |
| US20210284624A1 (en) | Immunomodulatory compounds | |
| WO2019151274A1 (ja) | 含窒素複素環アミド化合物及びその医薬用途 | |
| US10011568B2 (en) | Cyclohexyl pyridine derivative | |
| JP2021525247A (ja) | 複素縮合ピリドン化合物及びｉｄｈ阻害剤としてのこれらの使用 | |
| JP2024517772A (ja) | 置換された２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－５－（１－ピペリジン－４－イル）イソインドリン－１，３－ジオン誘導体及びその使用 | |
| US20220008386A1 (en) | Tosylacetate based compounds and derivatives thereof as phgdh inhibitors | |
| JP6609253B2 (ja) | シアノチオフェン誘導体 | |
| US10399949B2 (en) | NK1 receptor antagonist | |
| NZ726027B2 (en) | Cyclohexyl pyridine derivative |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20150901 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20150903 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5806420 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |