JPWO2015020122A1 - 尿路上皮癌の診断または治療剤 - Google Patents
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Abstract
Description
従って、新たな尿路上皮癌特異的miRNAの発見は尿路上皮癌の新規診断方法の確立に繋がると考えられる。また、尿路上皮癌に特徴的発現を示すmiRNAの癌発生、悪性化における機能を明らかにし、さらにそのmiRNAの機能を効果的かつ特異的に阻害できる核酸は革新的癌治療薬となることが期待されている。
本発明者らは、これらの知見に基づいてさらに検討を重ねた結果、本発明を完成するに至った。
[1]尿路上皮癌が表在性尿路上皮癌または浸潤性尿路上皮癌のいずれであるかを判定するための被験者由来試料の検査方法であって、
(1)被験者由来試料中のmiR-130b、miR-301a、miR-301bおよびmiR-210からなる群から選択される少なくとも1つのmiRNAの発現レベルを測定する工程;並びに
(2)測定した該miRNA発現レベルと表在性尿路上皮癌または浸潤性尿路上皮癌の該miRNA発現レベルを比較する工程を含む、方法;
[2]工程(1)において、被験者由来試料中のmiR-130b、miR-301aおよびmiR-301bからなる群から選択される少なくとも1つのmiRNAの発現レベルを測定する、[1]に記載の方法;
[3]尿路上皮癌が、腎盂尿管癌または膀胱癌である、[1]または[2]に記載の方法;
[4]表在性尿路上皮癌の予後の良否を判定するための被験者由来試料の検査方法であって、
(1)表在性尿路上皮癌である被験者由来試料中のmiR-130b、miR-301aおよびmiR-301bからなる群から選択される少なくとも1つのmiRNAの発現レベルを測定する工程;並びに
(2)測定した該miRNA発現レベルと正常尿路上皮の該miRNA発現レベルを比較する工程を含む、方法;
[5]尿路上皮癌が、腎盂尿管癌または膀胱癌である、[4]に記載の方法;
[6]miR-130b、miR-301a、miR-301bおよびmiR-210からなる群から選択される少なくとも1つのmiRNAを特異的に検出し得る核酸プローブ又は核酸プライマーを含む、尿路上皮癌が表在性尿路上皮癌または浸潤性尿路上皮癌のいずれであるかを判定するための検査試薬;
[7]miR-130b、miR-301aおよびmiR-301bからなる群から選択される少なくとも1つのmiRNAを特異的に検出し得る核酸プローブ又は核酸プライマーを含む、[6]に記載の検査試薬;
[8]尿路上皮癌が、腎盂尿管癌または膀胱癌である、[6]または[7]に記載の検査試薬;
[9]miR-130b、miR-301aおよびmiR-301bからなる群から選択される少なくとも1つのmiRNAに対するアンチセンス核酸またはアンチセンス核酸アナログを含む、尿路上皮癌の治療剤;
[10]miR-130b、miR-301aおよびmiR-301bからなる群から選択される少なくとも1つのmiRNAに対するアンチセンス核酸またはアンチセンス核酸アナログが、ATTGCACTで表される塩基配列を含む、[9]に記載の治療剤;
[11]miR-130b、miR-301aおよびmiR-301bからなる群から選択される少なくとも1つのmiRNAに対するアンチセンス核酸アナログが、架橋構造型人工核酸である、[9]または[10]に記載の治療剤;
[12]尿路上皮癌が、腎盂尿管癌または膀胱癌である、[9]〜[11]のいずれか1つに記載の治療剤;
[13]尿路上皮癌の被験者から治療の前に採取された試料における、miR-130b、miR-301aおよびmiR-301bからなる群から選択される少なくとも1つのmiRNAの発現レベルを測定する工程を含む、該被験者における尿路上皮癌の治療方針の決定のための検査方法;
[14]尿路上皮癌が、腎盂尿管癌または膀胱癌である、[13]に記載の方法;
[15]以下の(1)および/または(2)SARAまたはSARAをコードする核酸をさらに含む、[9]〜[12]のいずれか1つに記載の治療剤:
(1)SARAまたはSARAをコードする核酸、
(2)PTENまたはPTENをコードする核酸;
を提供する。
本発明は、尿路上皮癌が表在性または浸潤性尿路上皮癌のいずれであるかを判定するための被験者由来試料の検査方法であって、
(1)被験者由来試料中のmiR-130b、miR-301a、miR-301bおよびmiR-210からなる群から選択される少なくとも1つのmiRNAの発現レベルを測定する工程;並びに
(2)測定した発現レベルと表在性または浸潤性尿路上皮癌の発現レベルを比較する工程を含む、方法(以下、本発明の検査方法Iともいう)を提供するものである。
核酸プローブ及び核酸プライマーは、人工的な修飾を有する核酸の誘導体であってもよい。人工的な修飾を有する核酸の誘導体としては、例えば、ホスホロチオエート型、ボラノフォスフェート型DNA/RNA等のリン酸骨格を修飾したもの;2'-OMe修飾RNA、2'-F修飾RNA等の2'修飾ヌクレオチド;LNA(Locked Nucleic Acid)やENA(2'-O,4'-C-Ethylene-bridged nucleic acids)等のヌクレオチドの糖分子を架橋した修飾ヌクレオチド;PNA(ペプチド核酸)、モルフォリノヌクレオチド等の基本骨格が異なる修飾ヌクレオチド;5-フルオロウリジン、5-プロピルウリジン等の塩基修飾型ヌクレオチド等が挙げられるがこれらに限定されない。
被験者由来の試料中のmiRNAの発現レベルと表在性尿路上皮癌または浸潤性尿路上皮癌の前記miRNA発現レベルの比較は、通常、工程(1)において測定した被験者由来の試料中の前記miRNAの発現レベルと表在性尿路上皮癌患者から得られた前記miRNAの発現レベルとの比較、または該被験者由来の試料中の前記miRNAの発現レベルと浸潤性尿路上皮癌患者から得られた前記miRNAの発現レベルとの比較により行なう。
即ち、被験者由来の試料中の、miR-130b、miR-301a、miR-301bおよびmiR-210からなる群から選択される少なくとも1つのmiRNAの発現レベル(好ましくは、miR-130b、miR-301aおよびmiR-301bからなる群から選択される少なくとも1つのmiRNAの発現レベル)が、表在性尿路上皮癌または浸潤性尿路上皮癌の前記miRNA発現レベルと比較して統計学上の有意差(通常、p<0.05、好ましくは、p<0.01)の有無に基づいて、被験者が表在性尿路上皮癌であるか浸潤性尿路上皮癌であるかを判定することができる。
より具体的には、被験者由来の試料中の、miR-130b、miR-301a、miR-301bおよびmiR-210からなる群から選択される少なくとも1つのmiRNAの発現レベル(好ましくは、miR-130b、miR-301aおよびmiR-301bからなる群から選択される少なくとも1つのmiRNAの発現レベル)が、表在性尿路上皮癌または浸潤性尿路上皮癌の前記miRNA発現レベルと比較して統計学上の有意差(通常、p<0.05、好ましくは、p<0.01)の有無に基づいて、被験者が表在性腎盂尿管癌であるか浸潤性腎盂尿管癌であるかを判定することができる。また、被験者由来の試料中の、miR-130b、miR-301a、miR-301bからなる群から選択される少なくとも1つのmiRNAの発現レベル(好ましくは、miR-130bおよびmiR-301bからなる群から選択される少なくとも1つのmiRNAの発現レベル)が、表在性膀胱癌または浸潤性膀胱癌の前記miRNA発現レベルと比較して統計学上の有意差(通常、p<0.05、好ましくは、p<0.01)の有無に基づいて、被験者が表在性膀胱癌であるか浸潤性膀胱癌であるかを判定することができる。
また、本発明は表在性尿路上皮癌の予後の良否を判定するための被験者由来試料の検査方法であって、
(1)表在性尿路上皮癌である被験者由来試料中のmiR-130b、miR-301aおよびmiR-301bからなる群から選択される少なくとも1つのmiRNAの発現レベルを測定する工程;並びに
(2)測定した該miRNA発現レベルと正常尿路上皮の該miRNA発現レベルを比較する工程を含む、方法(以下、本発明の検査方法IIともいう)を提供するものである。
また、本発明の検査方法を、尿路上皮癌の被験者から治療の前に採取された試料において実施し、該被験者における尿路上皮癌の治療方針の決定に用いることができる。即ち、当該試料におけるmiR-130b、miR-301aおよびmiR-301bからなる群から選択される少なくとも1つのmiRNAの発現レベルを測定し、得られた発現レベルと正常尿路上皮における該miRNAの発現レベルとを比較し、いずれかのmiRNAの発現レベルが正常尿路上皮での発現レベルに比べて有意に高い場合に、後述する尿路上皮癌の治療剤IまたはIIによる治療が有効であると判断することができる。
あるいは、本発明の検査方法を、尿路上皮癌を発症し、1回以上の治療を受けた被験者から治療前と治療後にそれぞれ採取された試料において実施し、それらの試料におけるmiR-130b、miR-301aおよびmiR-301bからなる群から選択される少なくとも1つのmiRNAの発現レベルを比較することで、該被験者における尿路上皮癌の治療効果を評価することができる。すなわち、治療前と比較して治療後の該miRNAの発現レベルの増加が抑制される傾向(あるいは発現低下)を示せば、治療効果が認められると判定することができる。
本発明は、miR-130b、miR-301a、miR-301bおよびmiR-210からなる群から選択される少なくとも1つのmiRNAを特異的に検出し得る核酸プローブ又は核酸プライマー含む、尿路上皮癌が表在性尿路上皮癌または浸潤性尿路上皮癌のいずれであるかを判定するための検査試薬を提供するものである。本発明の検査試薬を用いれば、上記本発明の検査方法を容易に実施することができ、迅速且つ高精度で表在性尿路上皮癌または浸潤性尿路上皮癌を判定することが可能となる。
後述する実施例の通り、miR-130b、miR-301aまたはmiR-301bに対する阻害分子が、尿路上皮癌細胞の遊走・浸潤を抑制する効果があることが確認された。従って、本発明はまた、miR-130b、miR-301aおよびmiR-301bからなる群から選択される少なくとも1つのmiRNAに対するアンチセンス核酸またはアンチセンス核酸アナログを含む、尿路上皮癌の治療剤(以下、本発明の治療剤I)を提供する。
nは0〜1の整数であり;
Xは、酸素原子、硫黄原子、アミノ基、またはメチレン基を表し;
Rは水素原子、分岐または環を形成していてもよい炭素数1から7のアルキル基、分岐または環を形成していてもよい炭素数2から7のアルケニル基、α群から選択される任意の置換基を1以上有していてもよくそしてヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数3から12のアリール基、α群から選択される任意の置換基を1以上有していてもよくそしてヘテロ原子を含んでいてもよい炭素数3から12のアリール部分を有するアラルキル基、または核酸合成のアミノ基の保護基を表し、ここで、該α群は、水酸基、核酸合成の保護基で保護された水酸基、炭素数1から6の直鎖アルキル基、炭素数1から6の直鎖アルコキシ基、メルカプト基、核酸合成の保護基で保護されたメルカプト基、炭素数1から6の直鎖アルキルチオ基、アミノ基、炭素数1から6の直鎖アルキルアミノ基、核酸合成の保護基で保護されたアミノ基、およびハロゲン原子からなる]で表される誘導体である。そのようなLNAやENAの誘導体は、国際公開公報WO2011/052436A1に詳細に開示されている。あるいは、糖部修飾ヌクレオチド類似体としては、ペプチド核酸(PNA)[Acc. Chem. Res., 32, 624 (1999)]、オキシペプチド核酸(OPNA)[J. Am. Chem. Soc., 123, 4653 (2001)]、およびペプチドリボ核酸(PRNA)[J. Am. Chem. Soc., 122, 6900 (2000)]等もあげることができる。本発明のmiR-130b、miR-301aおよびmiR-301bからなる群から選択される少なくとも1つのmiRNAに対するアンチセンス核酸アナログとしては、好ましくは架橋構造型人工核酸、より好ましくはLNAまたはENAやその誘導体が挙げられる。
核酸に別の化学物質を付加した分子としては、例えば、5’−ポリアミン付加誘導体、コレステロール付加誘導体、ステロイド付加誘導体、胆汁酸付加誘導体、ビタミン付加誘導体、Cy5付加誘導体、Cy3付加誘導体、6−FAM付加誘導体、およびビオチン付加誘導体等をあげることができる。
当該発現ベクターにおいては、上述のポリヌクレオチド又はそれをコードする核酸(好ましくはDNA)が、投与対象である個体(好ましくはヒト)の細胞(例えば、尿路上皮癌細胞)内でプロモーター活性を発揮し得るプロモーターに機能的に連結されている。
さらに、体内動態の改良、半減期の長期化、細胞内取り込み効率の改善を目的に、前記核酸を単独またはリポソームなどの担体とともに製剤(注射剤)化し、静脈、皮下等に投与してもよい。
後述する実施例の通り、miR-130b、miR-301aまたはmiR-301bに対する阻害分子が、miR-130b、miR-301aまたはmiR-301bのSARA(Smad Anchor for Receptor Activation)の3’非翻訳領域への結合を阻害したことから、SARAが尿路上皮癌の治療標的であることが示唆された。従って、本発明はまた、SARAまたはSARAをコードする核酸を含む、尿路上皮癌の治療剤(以下、本発明の治療剤II)を提供する。本発明の治療剤IIにおいて治療することができる尿路上皮癌とは、本発明の治療剤Iに記載されたものと同様である。
配列番号:14で表されるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列としては、配列番号:14で表されるアミノ酸配列と約60%以上、好ましくは約70%以上、さらに好ましくは約80%以上、特に好ましくは約90%以上、最も好ましくは約95%以上の相同性を有するアミノ酸配列などが挙げられる。本明細書におけるアミノ酸配列の相同性は、相同性計算アルゴリズムNCBI BLAST(National Center for Biotechnology Information Basic Local Alignment Search Tool)を用い、以下の条件(期待値=10;ギャップを許す;マトリクス=BLOSUM62;フィルタリング=OFF)にて計算することができる。より好ましくは、配列番号:14で表されるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列とは、配列番号:14で表されるアミノ酸配列と約60%以上、好ましくは約70%以上、さらに好ましくは約80%以上、特に好ましくは約90%以上、最も好ましくは約95%以上の同一性を有するアミノ酸配列である。
前記活性の測定は、自体公知の方法に準じて行なうことができる。
上記のようにアミノ酸配列が挿入、欠失または置換されている場合、その挿入、欠失または置換の位置は、蛋白質の活性が保持される限り特に限定されない。
ペプチド合成法は、例えば、固相合成法、液相合成法のいずれであってもよい。SARAを構成し得る部分ペプチドもしくはアミノ酸と残余部分とを縮合し、生成物が保護基を有する場合は保護基を脱離することにより目的とする蛋白質を製造することができる。
ここで、縮合や保護基の脱離は、自体公知の方法、例えば、以下の(1)および(2)に記載された方法に従って行われる。
(1)M.BodanszkyおよびM.A.Ondetti,Peptide Synthesis,Interscience Publishers,New York (1966年)
(2)SchroederおよびLuebke,The Peptide,Academic Press,New York(1965年)
上記方法で得られるSARAが遊離体である場合には、該遊離体を公知の方法あるいはそれに準じる方法によって適当な塩に変換することができるし、逆にSARAが塩として得られた場合には、該塩を公知の方法あるいはそれに準じる方法によって遊離体または他の塩に変換することができる。
例えば、SARAを培養菌体あるいは細胞の細胞質から抽出する場合、培養物から公知の方法で集めた菌体あるいは細胞を適当な緩衝液に懸濁し、超音波、リゾチームおよび/または凍結融解などによって菌体あるいは細胞を破壊した後、遠心分離やろ過により可溶性蛋白質の粗抽出液を得る方法などが適宜用いられる。該緩衝液は、尿素や塩酸グアニジンなどの蛋白質変性剤や、トリトンX-100TMなどの界面活性剤を含んでいてもよい。また、SARAが菌体(細胞)外に分泌される場合には、培養物から遠心分離またはろ過等により培養上清を分取するなどの方法が用いられる。
このようにして得られた可溶性画分、培養上清中に含まれるSARAの単離精製は、自体公知の方法に従って行うことができる。このような方法としては、塩析や溶媒沈澱法などの溶解度を利用する方法;透析法、限外ろ過法、ゲルろ過法、およびSDS−ポリアクリルアミドゲル電気泳動法などの主として分子量の差を利用する方法;イオン交換クロマトグラフィーなどの荷電の差を利用する方法;アフィニティークロマトグラフィーなどの特異的親和性を利用する方法;逆相高速液体クロマトグラフィーなどの疎水性の差を利用する方法;等電点電気泳動法などの等電点の差を利用する方法;などが用いられる。これらの方法は、適宜組み合わせることもできる。
配列番号:13で表される塩基配列と実質的に同一な塩基配列を含む核酸としては、例えば、配列番号:13で表される塩基配列と約60%以上、好ましくは約70%以上、さらに好ましくは約80%以上、特に好ましくは約90%以上の相同性を有する塩基配列を含有し、前記したSARAと実質的に同質の活性を有する蛋白質をコードする核酸などが用いられる。
本明細書における塩基配列の相同性は、相同性計算アルゴリズムNCBI BLAST(National Center for Biotechnology Information Basic Local Alignment Search Tool)を用い、以下の条件(期待値=10;ギャップを許す;フィルタリング=ON;マッチスコア=1;ミスマッチスコア=−3)にて計算することができる。塩基配列の相同性を決定するための他のアルゴリズムとしては、上記したアミノ酸配列の相同性計算アルゴリズムが同様に好ましく例示される。
ハイストリンジェントな条件としては、例えば、6×SSC(sodium chloride/sodium citrate)中45℃でのハイブリダイゼーション反応の後、0.2×SSC/0.1%SDS中65℃での一回以上の洗浄などが挙げられる。当業者は、ハイブリダイゼーション溶液の塩濃度、ハイブリダゼーション反応の温度、プローブ濃度、プローブの長さ、ミスマッチの数、ハイブリダイゼーション反応の時間、洗浄液の塩濃度、洗浄の温度等を適宜変更することにより、所望のストリンジェンシーに容易に調節することができる。また、市販のライブラリーを使用する場合、ハイブリダイゼーションは、該ライブラリーに添付された使用説明書に記載の方法に従って行なうことができる。
後述する実施例の通り、miR-130b、miR-301aまたはmiR-301bに対する阻害分子が、miR-130b、miR-301aまたはmiR-301bのPTEN(Phosphatase and Tensin Homolog Deleted from Chromosome 10)の3’非翻訳領域への結合を阻害したことから、PTENが尿路上皮癌の治療標的であることが示唆された。従って、本発明はまた、PTENまたはPTENをコードする核酸を含む、尿路上皮癌の治療剤(以下、本発明の治療剤III)を提供する。本発明の治療剤IIIにおいて治療することができる尿路上皮癌とは、本発明の治療剤IまたはIIに記載されたものと同様である。
配列番号:16で表されるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列としては、配列番号:16で表されるアミノ酸配列と約60%以上、好ましくは約70%以上、さらに好ましくは約80%以上、特に好ましくは約90%以上、最も好ましくは約95%以上の相同性を有するアミノ酸配列などが挙げられる。本明細書におけるアミノ酸配列の相同性は、相同性計算アルゴリズムNCBI BLAST(National Center for Biotechnology Information Basic Local Alignment Search Tool)を用い、以下の条件(期待値=10;ギャップを許す;マトリクス=BLOSUM62;フィルタリング=OFF)にて計算することができる。より好ましくは、配列番号:16で表されるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列とは、配列番号:16で表されるアミノ酸配列と約60%以上、好ましくは約70%以上、さらに好ましくは約80%以上、特に好ましくは約90%以上、最も好ましくは約95%以上の同一性を有するアミノ酸配列である。
前記活性の測定は、自体公知の方法に準じて行なうことができる。
上記のようにアミノ酸配列が挿入、欠失または置換されている場合、その挿入、欠失または置換の位置は、蛋白質の活性が保持される限り特に限定されない。
配列番号:15で表される塩基配列と実質的に同一な塩基配列を含む核酸としては、例えば、配列番号:15で表される塩基配列と約60%以上、好ましくは約70%以上、さらに好ましくは約80%以上、特に好ましくは約90%以上の相同性を有する塩基配列を含有し、前記したPTENと実質的に同質の活性を有する蛋白質をコードする核酸などが用いられる。
本明細書における塩基配列の相同性は、相同性計算アルゴリズムNCBI BLAST(National Center for Biotechnology Information Basic Local Alignment Search Tool)を用い、以下の条件(期待値=10;ギャップを許す;フィルタリング=ON;マッチスコア=1;ミスマッチスコア=−3)にて計算することができる。塩基配列の相同性を決定するための他のアルゴリズムとしては、上記したアミノ酸配列の相同性計算アルゴリズムが同様に好ましく例示される。
(方法)
1.手術検体からのRNA抽出
腎盂尿管癌の凍結手術組織をRNA later ICE Frozen Tissue Transition Solution (Ambion) 内で-20℃、16時間以上保存してRNAを安定化させた。その後、組織片をQIAZOL (QIAGEN) 700 μLと破砕用φ5mmジルコニアビーズ1個が入ったサンプルチューブに入れ、 Micro smash MS-100 (TOMY) にて4800 rpm、30秒を2回、途中1分間氷上放置を入れて破砕した。組織ホモジネートに、クロロホルム140 μLを添加し、混和した後12000 gで15分間遠心し、得られた水層をRNA抽出に用いた。miRNeasy Mini Kit (QIAGEN)およびRNeasy MinElute Cleanup Kit (QIAGEN)を用いて添付のプロトコールに従い、200 nt以上、200 nt以下の分画に分けてRNA抽出を行った。抽出RNAの濃度は極微量分光光度計Nano Drop1000(NanoDrop Technologies)を用いて測定した。RNA純度の確認には、Experion RNA StdSens Analysis Kit (BIO-RAD)を用いた。抽出したRNA 1 μLをRNA StdSens chip(Bio-Rad)にアプライし、全自動チップ電気泳動システムExperion Automated Electrophoresis station(Bio-Rad)にて解析した。なおRNA純度は、RQI(RNA Quality Indicator)を指標とし、完全性を1(分解度が極めて高い)から10(分解していない)の間の数値で評価した。アレイ解析にはRQI7以上を検体として用いた。
2.miRNAアレイ方法
miRNAを含む200 nt以下のRNA 200 ngを用いて、FlashTag Biotin HSR (Genisphere) を用いてビオチンラベルを行った。ビオチン化されたRNAをもとにGeneChip Eukaryotic Hybridization Control Kit (Affymetrix) を用いてHybridization Cocktail を作成後、GeneChip miRNA 2.0 Array (Affymetrix)に注入し、48℃、60 rpm、16時間hybridizationを行った。Hybridization終了後、GeneChip(登録商標) Fluidics Station 450 (Affymetrix)を使用してGeneChip Hybridization Wash and Stain Kit (Affymetrix)によりarrayの自動洗浄・染色を行い、GeneChip Scanner 3000 (Affymetrix)によりスキャンした。データ解析は、Partek Genomics SuiteTM (Partek)とGeneSpring GX(Agilent Technologies)を用いた。
(結果)
腎盂尿管癌(21例)を表在型(7例)と浸潤型(14例)で比較解析したところ、p<0.05かつfold changeの絶対値で2倍以上の条件を満たすmiRNAは次の71種であった。
let-7c-star、miR-1、miR-93、miR-934、miR-93-star、miR-96、miR-99a、miR-99a-star、miR-100、miR-106a、miR-106b、miR-106b-star、miR-10b、miR-10b-star、miR-25、miR-27b-star、miR-28-3p、miR-125b、miR-125b-1-star、miR-125b-2-star、miR-127-3p、miR-133a、miR-133b、miR-139-3p、miR-139-5p、miR-140-3p、miR-141、miR-141-star、miR-143、miR-143-star、miR-145、miR-152、miR-15a、miR-17、miR-182、miR-183、miR-183-star、miR-18a、miR-18b、miR-1912、miR-195、miR-199a-5p、miR-200a、miR-200a-star、miR-200b、miR-200b-star、miR-200c、miR-200c-star、miR-205、miR-20a、miR-20b、miR-210、miR-214、miR-214-star、miR-3065-5p、miR-342-3p、miR-381、miR-425、miR-425-star、miR-4269、miR-429、miR-4306、miR-4324、miR-4329、miR-486-5p、miR-497、miR-504、miR-574-3p、miR-584、miR-629、miR-671-5p
一方、表在性癌と浸潤癌の間でp<0.05かつfold changeの絶対値で2倍以上の条件を満たすmiRNAは次の13種であった。この内、表在性癌で高発現が見られたものはmiR-100、miR-383、miR-379、miR-150、miR-10b、miR-199-5p、一方浸潤癌の方で高発現が見られたものはmiR-301a、miR-301b、miR-130b、miR-210、miR-224、miR-203、miR-3187であった。
(方法)
miR-130b、miR-301a、miR-301b、miR-210のreal-time PCR解析
尿路上皮癌手術検体よりmiRNeasy Mini Kit(QIAGEN)を用いてRNAを抽出精製し、Experion RNA StdSens Analysis Kit (BIO-RAD)を用いて純度確認を行ったtotal RNA各500 ngよりMir-X miRNA First-Strand Synthesis Kit(Clontech)を用いてcDNA合成を行った。20倍希釈cDNAを鋳型としてSsoAdvanced SYBR Green Supermix(BIO-RAD)を用いてCFX96 Real-Time System(BIO-RAD)にてmiR-130ファミリー(miR-130b、miR-301a、miR-301b)とmiR-210及びリファレンスとしてU6 snRNAのreal-time PCR解析を行った。Real-time PCR条件としては、denaturation 98℃30秒、その後95℃2秒→63℃5秒を40サイクル、dissociation curve作成に対し55℃から5秒間で0.5℃ずつ95℃まで上昇させた。各miRNAの発現定量にはcDNA混合溶液の2倍段階希釈検量線を用いた相対定量法を採用した。miR-130ファミリー、miR-210に対する特異的プライマーの配列を表1に示す。なおU6 snRNAに対する特異的プライマーはkit付属のものを使用した。
腎盂尿管癌手術検体21検体に関してmiR-130ファミリー、miR-210に着目したreal-time PCR解析を行い、表在性癌及び浸潤性癌における発現を比較した。その結果、表在性腎盂尿管癌に対し浸潤性腎盂尿管癌においてmiR-130b、miR-301a、miR-301b、miR-210が高発現していることが確認でき、またmiR-130b、miR-301a、miR-301bに関しては有意差も認められた(図1)。
またこれら4種のmiRNAの発現結果を用いてROC解析を行った。その結果AUCが0.888であった。さらにPCA-ロジスティック回帰を用いた解析により、82%以上の正答率で腎盂尿管癌の表在性癌と浸潤癌を判別できることも示された。
上記結果を受け、腎盂尿管癌と同様に尿路上皮癌に含まれる膀胱癌臨床検体におけるmiR-130b,miR-301a,miR-301bの発現をreal-time PCR解析した。解析検体は正常膀胱2例、正常尿管16例、表在性癌(pTa:9例)、浸潤癌(pT1〜pT3:5例)である。その結果、miR-301b及びmiR-130bの発現は正常膀胱や正常尿管より発現上昇が見られ、さらに浸潤性膀胱癌では表在性膀胱癌に対し有意に高いことが判明した(図2)。
さらに、表在性膀胱癌(pTa)検体を、細胞異型と構造異型を含めた異型度(grade)が低度な表在性膀胱癌検体(pTa low検体)と高度な表在性膀胱癌検体(pTa high検体)に分類し、両検体と尿路上皮細胞からなる膀胱と尿管の正常部(正常尿路上皮)検体におけるmiR-130b,miR-301a,miR-301bの発現をreal-time PCR解析した。解析検体は正常尿路上皮:21例、pTa low grade:9例、pTa high grade:4例である。その結果、正常尿路上皮やpTa low gradeに比べ、pTa high gradeでは、miR-130b,miR-301a,miR-301bの有意な上昇が認められた(図3)。
(方法)
1.miR-130 family-targeted LNAの合成
miR-130b、miR-301a、miR-301bの配列を表2に示す。この配列内においてagugcaauの8塩基は共通している。そこでこの配列に着目し、その相補的な配列をlocked nucleic acid(LNA)を用いて合成し(GeneDesign)、miR-130 family-targeted LNAとして使用した。
96-well plateに膀胱癌細胞株5637を1.2×104個/ well (miR-130 family inhibitor,Thermo)、あるいは0.6×104個/ well(miR-130 family-targeted LNA)播種し、24時間後にmiR inhibitorとレポーターとしてpmirGLO miRNA Target Expression Vector (Promega)を導入した。導入終濃度はレポーター遺伝子が50 ng / well、miR inhibitorあるいはLNAは50 nM / well、Lipofectamin 2000 (Life Technologies)は0.4 μL / wellとした。この混合液を15分静置した後、96-well plateに50 μLずつ添加した。その4時間後に培地をウシ胎児血清(FCS)入りのRPMI-1640培地に変更した。
3.Dual-Luciferase Reporter Assay
Dual-Luciferase AssayはDual-Luciferase Reporter Assay System (Promega)を用いて添付のプロトコールに従った。ホタルルシフェラーゼ、ウミシイタケルシフェラーゼの発光をGloMax 20/20n Luminometer (Promega)を用いてそれぞれ10秒間の積算値として測定した。内在性microRNA活性はホタルルシフェラーゼの測定値をウミシイタケルシフェラーゼの測定値で割った値とした。
(結果)
miR-130b、miR-301a、miR-301bに対する各hairpin inhibitorは内在性のmiR-130 familyを阻害できることを確認した(図4左)。同様にmiR-130 family-targeted LNAも内在性のmiR-130 familyを阻害できていることが明らかとなった(図4右)。
(方法)
Wound healing assay
24-well plateに膀胱癌細胞株5637を3.5×104個/ well (miR-130 family inhibitor)、あるいは1.6×104個 / well(miR-130 family-targeted LNA)播種した。miR-130 family inhibitorに関してはリバース法で播種と同時にトランスフェクトし、miR-130 family-targeted LNAは播種後24時間目にトランスフェクションした。72時間後に1 mLチップの先端で培養中の細胞に傷を付け、12時間後にhealedしてきた面積をImage Jを用いて定量して細胞遊走能を算出した。
(結果)
miR-130 family inhibitor、miR-130 family-targeted LNA共に傷を付けた領域に遊走してくる細胞数が顕著に低下しており、遊走能が有意に抑制された(図5〜8)。
(方法)
xCELLigenceシステムを用いた細胞浸潤能評価
miR-130 family inhibitor及びmiR-130 family-targeted LNAを膀胱癌細胞株5637にトランスフェクションし、24時間後に細胞を回収した。xCELLigence リアルタイムセルアナライザーDPシステム (Roche)の浸潤能評価用プレートCIM-Plate16のアッパーチャンバーをマトリゲル (Becton, Dickinson and Company)で処理後、200 μLの10%FCS含有RPMI-1640を添加したローアーチャンバーに装着した。気泡がないことを確認した後アッパーチャンバーに30 μLのRPMI-1640を加え、xCELLigenceにセットした。インキュベーター内で1時間インキュベートした後バックグラウンドを測定した。この後に細胞懸濁液を100 μL添加し測定を開始した。アッパーチャンバーのマトリゲルを分解し、ローアーチャンバーへと到達した細胞を電気抵抗に基づき検出して浸潤能として評価した。
(結果)
miR-130 family inhibitorによるmiR-130b、miR-301a、miR-301bそれぞれ単独での阻害では浸潤能が抑制される傾向はあるものの有意差は認められなかった(図9左)。しかしmiR-130 family-targeted LNAを用いた実験では、強力に浸潤能を阻害するという結果が得られた(図9右)。
(方法)
miR-130 family inhibitor によるSARAの発現抑制
miR-130 familyの標的配列を持つ遺伝子のうち細胞遊走と浸潤に関与しうる因子としてSARA (Smad Anchor for Receptor Activation)に着目した。そこでSARAの3’非翻訳領域(UTR)をpmirGLOベクターにクローニングし、luciferase assayによりmiR-130 family がSARAの制御分子であるかを評価した。
(結果)
pmirGLO SARA 3’UTRベクターを5637細胞内にトランスフェクションするとluciferase活性は抑制され、その抑制作用はmiR-130 family inhibitorの存在により解除された(図10)。つまり5637細胞においてSARAはmiR-130 familyの標的であることが明らかになった。
(方法)
健常人ならびに腎盂尿管癌患者の尿を凍結融解後、2000gで遠心分離後、その上清をさらに17000gで30 分間遠心し沈殿物を得た。得られた沈殿からmiRNeasy Mini Kit(QIAGEN)を用いてRNAを抽出精製した。Total RNA 10 ngよりUniversal cDNA synthesis kit(EXIQON)を用いてcDNA合成を行い、SYBR Green master mix, Universal RT(EXIQON)及びMicroRNA LNA PCR primer set(EXIQON)を用いCFX96 Real-Time System(BIO-RAD)にてmiR-130ファミリー(miR-130b、miR-301a、miR-301b)とmiR-210及びリファレンスとしてU6 snRNAのreal-time PCR解析を行った。
一方、膀胱癌患者の手術前後の血清0.2 mLからはmiRNeasy Serum/Plasma Kit(QIAGEN)を用いてRNAを抽出精製した。これらのRNAよりMir-X miRNA First-Strand Synthesis Kit(Clontech)を用いてcDNA合成を行い、SsoAdvanced SYBR Green Supermix(BIO-RAD)を用いCFX96 Real-Time System(BIO-RAD)にてmiR-130ファミリー(miR-130b、miR-301a、miR-301b、miR-210)及びリファレンスとしてmiR-92a、miR-24のreal-time PCR解析を同様に行った。データは各miRNAの手術後(after)の相対発現率から手術前(before)の相対発現率を引いた差を取り示した。
(結果)
腎盂尿管癌患者尿中の沈殿画分において、健常人あるいは表在性癌患者(Sup.)と比べ、浸潤癌患者(Inv.)において、miR-130b、miR-301a、miR-210レベルの高値が認められた(図11)。一方、膀胱癌浸潤癌患者の術前、術後血清の比較において、miR-130b、miR-210レベルが術後に顕著に低下していた(図12)。
(方法)
8週齢雌性BALB/c nu/nuマウスの左腹部皮下にヒト膀胱癌細胞5637(1x107 cells)をマトリゲル(Becton Dickinson and Company)と1:1混合物として200 μl移植した。移植1か月後にアテロコラーゲン(Koken)を用いてコントロールLNA(NC)とmiR-130 family-targeted LNA(LNA)を2 nmol / 匹で週1回4週間投与した。腫瘍径の計測は週2回実施し、腫瘍体積は(長径)×(短径)2×0.5の式を用いて計算した。
(結果)
NC投与群では、腫瘍体積の増加が認められた。一方、LNA投与群では、1回目投与から顕著な抗腫瘍作用が認められ、その作用は27日目においても有意であった(図13)。
(方法)
1.Dual-Luciferase Reporter Assay
実施例3と同様にしてDual-Luciferase Reporter Assayを行った。なおluciferase vector(pmir-GLO, Promega)にHomo sapiens chromosome 10, alternate assembly CHM1_1.1, whole genome shotgun sequenceの情報を用いてPTENの3’-非翻訳領域(図14A)の90007894 bp - 90009905 bpの2012 bpを挿入したものを使用した。
2.Western blot解析
miR-130 family阻害剤あるいはmiR-130 family-targeted LNAを5637細胞にトランスフェクションし、3日後にSDS sample bufferを用いて細胞を回収し、95 ℃ で 10 分加温して細胞ライセートとして使用した。SDSポリアクリルアミドゲル電気泳動を行った後、Trans-Blot SD Semi-Dry Transfer Cell (BIO-RAD) もしくは Trans-Blot Turbo Transfer System (BIO-RAD) を用いてPVDFメンブラン(GE Healthcare)にトランスファーした。その後5%スキムミルク溶液を用いてブロッキングを行い、抗PTEN抗体(Sigma)を用いてwestern blotを行った。検出ではImageQuant LAS 4000mini (GE Healthcare) を用いた。
3.免疫組織化学染色
パラフィン包埋された膀胱癌臨床検体から回転式ミクロトーム用いて5 μm薄層切片を切り出し、スライドガラスにマウントした。スライドガラスを68℃オーブンで10 min処理した後、キシレンに5分間 2回浸し、エタノール(100%、2回→95%→80%→70%→50%)、蒸留水、蒸留水+Tween 20の順に浸して脱パラフィン処理を行った。次に抗原賦活液を入れたウォーターバスを用いて10分間オートクレーブ処理を行い、抗原の賦活化を行った。このスライドガラスに5分間3%過酸化水素水を処理することでブロッキングを行った。1次抗体(抗PTEN抗体、Cell Signaling Technology)は4℃一晩処理し、Tris Buffered Saline-Tween 20(TBS-T)で洗浄後に2次抗体を室温45分間処理した。これを3,3'-ジアミノベンジジンテトラヒドロクロライド試薬で処理した後、Gill Hematoxilinを用いてカウンターステインを4分間行った。その後、蒸留水、エタノール(70%→80%→95%→100%、2回)、キシレン(2回)の順番に浸し、封入剤を滴下してカバーガラスを載せてプレパラートを作製した。
(結果)
腫瘍抑制遺伝子PTENの3’-非翻訳領域にはmiR-130ファミリー分子の標的配列が存在する。よってLNAがPTENの発現を抑制することにより抗腫瘍作用を発現することが推測された。そこで実際にPTENの発現がmiR-130ファミリー分子を高発現する膀胱癌細胞5637において抑制されるかをPTEN 3’-非翻訳領域を有するluciferase vectorを構築して検討した。その結果、mockトランスフェクションと比べ、PTEN 3’-非翻訳領域含有ベクターにおいて有意なluciferase発現レベルの低下が認められた(図14B)。この結果は、膀胱癌細胞においてPTENがmiR-130ファミリー分子によって発現制御されていることを示唆した。そこでmiR-130ファミリー分子阻害剤あるいはLNAのトランスフェクションによりPTENの発現が回復するかをwestern blotにより解析した。その結果、miR-130ファミリー分子の阻害剤とともにLNAは顕著なPTEN発現上昇をもたらした。これらの結果よりmiR-130ファミリー分子がPTENの翻訳を抑制していることが示された(図14C)。さらに膀胱癌臨床検体を用いたPTENの免疫組織化学的解析により、miR-130ファミリー分子の発現が低い検体ではPTENの強い染色が認められ、一方、miR-130ファミリー分子の発現が高い検体ではPTEN発現が弱いことが示された(図15)。これらの結果より、miR-130ファミリー分子はPTENの発現制御により抗腫瘍作用を示したことが示唆される。
本出願は、日本で出願された特願2013−165600(出願日:平成25年8月8日)を基礎としており、その内容はすべて本明細書に包含されるものとする。
Claims (15)
- 尿路上皮癌が表在性尿路上皮癌または浸潤性尿路上皮癌のいずれであるかを判定するための被験者由来試料の検査方法であって、
(1)被験者由来試料中のmiR-130b、miR-301a、miR-301bおよびmiR-210からなる群から選択される少なくとも1つのmiRNAの発現レベルを測定する工程;並びに
(2)測定した該miRNA発現レベルと表在性尿路上皮癌または浸潤性尿路上皮癌の該miRNA発現レベルを比較する工程を含む、方法。 - 工程(1)において、被験者由来試料中のmiR-130b、miR-301aおよびmiR-301bからなる群から選択される少なくとも1つのmiRNAの発現レベルを測定する、請求項1に記載の方法。
- 尿路上皮癌が、腎盂尿管癌または膀胱癌である、請求項1または2に記載の方法。
- 表在性尿路上皮癌の予後の良否を判定するための被験者由来試料の検査方法であって、
(1)表在性尿路上皮癌である被験者由来試料中のmiR-130b、miR-301aおよびmiR-301bからなる群から選択される少なくとも1つのmiRNAの発現レベルを測定する工程;並びに
(2)測定した該miRNA発現レベルと正常尿路上皮の該miRNA発現レベルを比較する工程を含む、方法。 - 尿路上皮癌が、腎盂尿管癌または膀胱癌である、請求項4に記載の方法。
- miR-130b、miR-301a、miR-301bおよびmiR-210からなる群から選択される少なくとも1つのmiRNAを特異的に検出し得る核酸プローブ又は核酸プライマーを含む、尿路上皮癌が表在性尿路上皮癌または浸潤性尿路上皮癌のいずれであるかを判定するため、または表在性尿路上皮癌が浸潤性尿路上皮癌に移行するか否かを判定するための検査試薬。
- miR-130b、miR-301aおよびmiR-301bからなる群から選択される少なくとも1つのmiRNAを特異的に検出し得る核酸プローブ又は核酸プライマーを含む、請求項6に記載の検査試薬。
- 尿路上皮癌が、腎盂尿管癌または膀胱癌である、請求項6または7に記載の検査試薬。
- miR-130b、miR-301aおよびmiR-301bからなる群から選択される少なくとも1つのmiRNAに対するアンチセンス核酸またはアンチセンス核酸アナログを含む、尿路上皮癌の治療剤。
- miR-130b、miR-301aおよびmiR-301bからなる群から選択される少なくとも1つのmiRNAに対するアンチセンス核酸またはアンチセンス核酸アナログが、ATTGCACTで表される塩基配列を含む、請求項9に記載の治療剤。
- miR-130b、miR-301aおよびmiR-301bからなる群から選択される少なくとも1つのmiRNAに対するアンチセンス核酸アナログが、架橋構造型人工核酸である、請求項9または10に記載の治療剤。
- 尿路上皮癌が、腎盂尿管癌または膀胱癌である、請求項9〜11のいずれか1項に記載の治療剤。
- 尿路上皮癌の被験者から治療の前に採取された試料における、miR-130b、miR-301aおよびmiR-301bからなる群から選択される少なくとも1つのmiRNAの発現レベルを測定する工程を含む、該被験者における尿路上皮癌の治療方針の決定のための検査方法。
- 尿路上皮癌が、腎盂尿管癌または膀胱癌である、請求項13に記載の方法。
- 以下の(1)および/または(2)をさらに含む、請求項9〜12のいずれか1項に記載の治療剤:
(1)SARAまたはSARAをコードする核酸、
(2)PTENまたはPTENをコードする核酸。
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Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2008519606A (ja) * | 2004-11-12 | 2008-06-12 | アンビオン インコーポレーティッド | miRNAおよびmiRNA阻害分子に関する方法および組成物 |
JP2009100687A (ja) * | 2007-10-24 | 2009-05-14 | Chiba Univ | microRNA発現プロファイリングに基づく膀胱癌の検出方法 |
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---|---|---|---|---|
JP2008519606A (ja) * | 2004-11-12 | 2008-06-12 | アンビオン インコーポレーティッド | miRNAおよびmiRNA阻害分子に関する方法および組成物 |
JP2009100687A (ja) * | 2007-10-24 | 2009-05-14 | Chiba Univ | microRNA発現プロファイリングに基づく膀胱癌の検出方法 |
WO2012174282A2 (en) * | 2011-06-16 | 2012-12-20 | Caris Life Sciences Luxembourg Holdings, S.A.R.L. | Biomarker compositions and methods |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
HWANG T. I-S. ET AL.: "Dysregulated microRNA expression in bladder cancer by microRNA microarray", INT. J. UROL., vol. vol.17, Suppl 1., JPN6014048237, 2010, pages 164, ISSN: 0003912214 * |
LIU Y. ET AL.: "Synthetic miRNA-Mowers Targeting miR-183-96-182 Cluster or miR-210 Inhibit Growth and Migration and", PLOS ONE, vol. 7, no. 12, JPN6014048238, 2012, pages 52280, ISSN: 0003912215 * |
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