JPWO2015005299A1 - 培養装置、培養システム、及び培養方法 - Google Patents
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Abstract
Description
すなわち、本発明は以下の通りである。
本発明は、培養容器の外部に設けられた磁石を培養容器に接近させて、培養容器の内表面(所定領域)に磁性粒子及び細胞を固定(保持)させた状態で細胞培養を行ったり、培養容器に接近した磁石を振動させて培養容器の内表面に固定した磁性粒子及び細胞を揺らしたり、培養容器から磁石を離間させて培養容器内に磁性粒子及び細胞を分散させたりするなど、手作業を行わず、細胞にストレスを与えることなく、細胞の位置を自動的に制御することができる培養装置である。また、本発明は、重力落下によって前記培養装置内に溶液を移動させるか、前記培養装置から外に溶液を移動させることにより、より細胞にストレスを与えずに細胞の播種から回収までを、無菌状態で且つ自動的に行うことができる細胞培養システムである。
本発明の第1の実施形態に係る培養装置10を図1を用いて説明する。培養装置10は、培養容器3と、温度調節ユニット5と、磁力調節ユニット7とを具備している。
磁性粒子、培養細胞、及びセルロースキャリア等の担体を含む培養液が、溶液供給部9から培養容器3に供給される。その後、培養容器3には、細胞培養に必要な濃度の二酸化炭素、湿度の気体がガス供給部8から供給される。ガス供給部8は、二酸化炭素濃度5%、湿度95%、温度37%の気体条件に維持するように培養容器3に気体を供給する。培養容器3内の溶液は、培養容器3の下面に取り付けられている温度調節ユニット5によって温度が調節される。
本発明の第2の実施形態に係る培養システム200を図4〜11を用いて説明する。図4及び図5に示すように、培養システム200は、薄い内部空間を有する培養容器203と、培養容器203の上面側に設けられた温度管理ユニット205と、培養容器203の下面側に設けられた磁力調節ユニット207とを備える。培養容器203には傾動機構212が接続され、図3に角度θで示す範囲で培養容器203を周期的に傾動させる。傾動機構212は、モータを用いることができる。傾動機構212が培養容器203を傾動する角度範囲は、好ましくは10〜20°とすることができる。
磁性粒子、培養細胞、及びセルロースキャリア等の担体を含む培養液が、分注器240を用いて、溶液供給容器209に分注される。培養液は、溶液供給容器209から培養容器203に接続チューブを介して落下移送される。ガスボンベ230から二酸化炭素等が、培養容器203に供給される。培養容器203内の溶液は、温度調節ユニット205によって温度が調節される。
・培養細胞株:Jurkat細胞 (human, T-cell Leukemia, ATCC)
・培地:RPMI media 1640 (Life technologies, 11875-093)
・ウシ胎児血清(Fetal Bovine Serum):Life technologies, 10437-028
・抗生物質:Antibiotic-Antimycotic, 100X (Life technologies, 15240-062)
・リン酸緩衝生理食塩水(PBS, pH 7.4): Life technologies, 10010023
・細胞凍結保存液:セルバンカー(LSIメディエンス, BLC-1)
・担体:強塩基性陰イオン交換樹脂破砕物(アンバーライトIRA400J, 粒径45〜150 μm)
・培養容器:浮遊培養用シャーレ35φ(住友ベークライト, MS-1135R)
・ディスポーザブルピペット 50 ml, 25 ml, 5 ml
・ディスポーザブルチップ 1 ml
・CO2インキュベーターHeracell 150SS (Helaeus, 155SS)
・倒立顕微鏡(カールツァイスマイクロイメージング社, Primo Vert)
・電動ピペッター(Thermo Scientific S1 Pipet Filler)
・ピペッターP1000 (Gilson, P1000)
5 温度調節ユニット
7 磁力調節ユニット
7a 磁石
7b 磁石移動機構7b
8 ガス供給部
9 溶液供給部
10 培養装置
11 弁
15 磁性粒子分離ユニット
17 細胞分取ポート
19 廃液ボトル
100 培養システム
203 培養容器
205 温度調節ユニット
206 磁性粒子分離ユニット
207 磁力調節ユニット
207a 磁石
207c 移動機構
214 スライド機構
218 回収容器
230 ガスボンベ
240 分注器
260 廃液槽
200 培養システム
Claims (26)
- 細胞、前記細胞を直接的又は間接的に付着する磁性粒子、及び溶液を収容する培養容器と、前記培養容器の温度調節ユニットと、前記培養容器の外部に設けられる磁石と、前記磁石の磁力を調節する磁力調節ユニットとを具備する培養装置であって、
前記磁力調節ユニットが前記磁石の磁力を調節して、前記磁性粒子及び前記細胞を前記培養容器内の所定領域に保持した状態で、細胞培養を行うことを特徴とする、培養装置。 - 前記磁力調節ユニットが前記磁石の磁力を調節して、前記磁性粒子及び前記細胞を前記培養容器内に分散することを特徴とする、請求項1に記載の培養装置。
- 前記磁石が、間隔をあけて配置された複数の磁石であることを特徴とする、請求項1又は2項に記載の培養装置。
- 前記複数の磁石のそれぞれが、前記培養容器の一面に対向するように配置されることを特徴とする、請求項3に記載の培養装置。
- 前記複数の磁石のそれぞれが、隣接する磁石と極性が異なるように配置されることを特徴とする、請求項3又は4に記載の培養装置。
- 前記複数の磁石が、マトリックス状に配置されることを特徴とする請求項3〜5のいずれか1項に記載の培養装置。
- 前記磁性粒子及び前記細胞は、前記培養容器内の前記所定領域に保持された状態で濃縮又は凝集されている、請求項1〜6のいずれか1項に記載の培養装置。
- 前記磁力調節ユニットが、前記磁石と前記培養容器との距離及び/又は位置を変動させることを特徴とする、請求項1〜7のいずれか1項に記載の培養装置。
- 前記磁力調節ユニットが前記磁石を前記培養容器に接近させることにより、前記磁性粒子及び前記細胞を前記所定領域に保持した状態で、前記細胞培養を行うことを特徴とする、請求項1〜8のいずれか1項に記載の培養装置。
- 前記磁石及び前記培養容器の一方に対して他方を相対的にスライドするスライド機構を備えることを特徴とする、請求項1〜9のいずれか1項に記載の培養装置。
- 前記スライド機構により前記細胞培養の振盪培養を行うことを特徴とする、請求項10に記載の培養装置。
- 前記培養容器を揺動する揺動機構を備えることを特徴とする、請求項1〜11のいずれか1項に記載の培養装置。
- 前記磁力調節ユニットが前記培養容器内で前記磁性粒子及び前記細胞を前記所定領域に保持した状態で、前記培養容器に溶液を注入するか、又は前記培養容器から溶液を排出することを特徴とする、請求項1〜12のいずれか1項に記載の培養装置。
- 前記磁力調節ユニットが、前記磁石の接近、振動、及び離間から選択される複数の動作を組み合わせて、前記細胞培養を行うことを特徴とする、請求項1〜13のいずれか1項に記載の培養装置。
- 前記磁力調節ユニットが、前記培養容器内で前記磁性粒子及び前記細胞を分散可能とした状態で、前記培養容器から培養細胞を含む溶液を回収することを特徴とする、請求項1〜14のいずれか1項に記載の培養装置。
- 前記培養容器に対して、前記温度調節ユニット、及び前記磁力調節ユニットの少なくとも一つが脱着可能であることを特徴とする、請求項1〜15のいずれか1項に記載の培養装置。
- 請求項1〜16のいずれか1項に記載の培養装置を具備する培養システムであって、細胞培養に用いる材料及び溶液を前記培養容器に供給する供給部と、前記培養容器で培養された細胞を含む溶液から前記磁性粒子を分離する磁性粒子分離ユニットとを具備したことを特徴とする、培養システム。
- 前記溶液が重力落下によって移送されることを特徴とする、請求項17に記載の培養システム。
- 前記供給部、前記培養容器、前記磁性体分離ユニットが、順に上方から下方に配置されることを特徴とする、請求項17又は18に記載の培養システム。
- 前記供給部と前記培養容器との間、前記培養容器と前記磁性体分離ユニットとの間を、それぞれ管路で接続することを特徴とする、請求項17〜19のいずれか1項に記載の培養システム。
- 前記管路のそれぞれを開閉する弁を備えることを特徴とする、請求項20に記載の培養システム。
- 前記細胞培養に用いる前記材料及び溶液を前記供給部に分注する分注機構を備えることを特徴とする、請求項17〜21のいずれか1項に記載の培養システム。
- 請求項1〜16のいずれか1項に記載の培養装置を用いて細胞の培養を行うことを特徴とする細胞の培養方法。
- 請求項17〜22のいずれか1項に記載の培養システムを用いて、細胞を培養する方法であって、
前記供給部から前記培養容器へ、細胞培養に用いる前記材料及び溶液を供給する工程と、
前記培養装置を用いて細胞を培養する工程と、
前記磁性粒子分離ユニットで細胞を含む溶液から磁性粒子を分離する工程と、
前記磁性粒子が分離された溶液から細胞を分取する工程と、
を具備することを特徴とする、方法。 - 分注機構を用いて前記細胞培養に用いる前記材料又は溶液を前記供給部に分注する工程を備える、請求項24に記載の方法。
- 制御部が前記各工程を自動的に実行することを特徴とする、請求項24又は25に記載の方法。
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