JPWO2014192200A1 - 糖化ヘモグロビンを定量する方法 - Google Patents
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- G01N2333/95—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99)
- G01N2333/964—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue
- G01N2333/96425—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue from mammals
- G01N2333/96427—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue from mammals in general
- G01N2333/9643—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue from mammals in general with EC number
- G01N2333/96486—Metalloendopeptidases (3.4.24)
-
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Abstract
Description
(a)プロテアーゼを用いてHbA1cを分解し、フルクトシルペプチドを生成する工程、および
(b)工程(a)において生成されたフルクトシルペプチドを、フルクトシルペプチドオキシダーゼ(以下、「FPOX」という)を用いて定量する工程。
(a)カチオン性界面活性剤およびテトラゾリウム塩の組成物の存在下において、前記試料をプロテアーゼと混合し、糖化ペプチドを含有する糖化ペプチド水溶液を得る工程、
(b)前記工程(a)において得られた糖化ペプチド水溶液をFPOX(フルクトシルペプチドオキシダーゼ)と混合し、過酸化水素を得る工程、ここで、前記溶液は前記組成物を含有するものである、および
(c)工程(b)において得られた過酸化水素水の量に基づいて、前記糖化ヘモグロビン(HbA1c)の濃度を算出する工程
を具備する、方法に関する。
本発明は、試料に含有される糖化ヘモグロビン(HbA1c)を定量する方法であって、以下の工程:
(a)カチオン性界面活性剤およびテトラゾリウム塩の組成物の存在下において、前記試料をプロテアーゼおよびFPOX(フルクトシルペプチドオキシダーゼ)と混合し、過酸化水素水を得る工程、および
(b)工程(a)において得られた過酸化水素の量に基づいて、前記糖化ヘモグロビン(HbA1c)の濃度を算出する工程
を具備する、方法に関する。
本発明の趣旨は、カチオン性界面活性剤およびテトラゾリウム塩を含有する、プロテアーゼを活性化するための組成物を含む。
まず、実施形態1が説明される。
工程(a)では、HbA1cを含有する試料がカチオン性界面活性剤およびテトラゾリウム塩の組成物の存在下においてプロテアーゼと混合される。好ましくは、試料は水溶液である。
トリメチルオクチルアンモニウムクロリド
トリメチルデシルアンモニウムクロリド
トリメチルドデシルアンモニウムクロリド
トリメチルテトラデシルアンモニウムクロリド
トリメチルセチルアンモニウムクロリド
トリメチルステアリルアンモニウムクロリド
トリメチルオクチルアンモニウムブロミド
トリメチルデシルアンモニウムブロミド
トリメチルドデシルアンモニウムブロミド
トリメチルテトラデシルアンモニウムブロミド
トリメチルセチルアンモニウムブロミド
トリメチルステアリルアンモニウムブロミド
2−(4−ヨードフェニル)−3−(4−ニトロフェニル)−5−(2,4−ジスルホフェニル)−2H−テトラゾリウム,モノナトリウム塩(WST−1)
2−(4−ヨードフェニル)−3−(2,4−ジニトロフェニル)−5−(2,4−ジスルホフェニル)−2H−テトラゾリウム,モノナトリウム塩(WST−3)
2−(2−ベンゾチアゾリル)−3−(4−カルボキシ−2−メトキシフェニル)−5−[4−[(2−ソジオスルホエチル)カルバモイル]フェニル]−2H−テトラゾール−3−イウム(WST−4)
2,2’−(3,3’−ジメトキシ−4,4’−ビフェニリレン)ビス[3−(2−ベンゾチアゾリル)−5−[4−[N−[2−(ソジオオキシスルホニル)エチル]−N−(2−スルホエチル)カルバモイル]フェニル]−2H−テトラゾール−3−イウム](WST−5)
5−[2,4−ビス(ソジオオキシスルホニル)フェニル]−3−(2−メトキシ−4−ニトロフェニル)−2−(4−ニトロフェニル)−2H−テトラゾール−3−イウム(WST−8)
2−(4−ニトロフェニル)−5−フェニル−3−[4−(4−スルホフェニルアゾ)−2−スルホフェニル]−2H−テトラゾリウム,モノナトリウム塩(WST−9)
2,5−ジ(4−ニトロフェニル)−3−[4−(4−スルホフェニルアゾ)−2−スルホフェニル]−2H−テトラゾリウム,モノナトリウム塩(WST−10)
2−(4−ニトロフェニル)−5−(2−スルホフェニル)−3−[4−(4−スルホフェニルアゾ)−2−スルホフェニル]−2H−テトラゾリウム,ジナトリウム塩(WST−11)
工程(b)は、工程(a)の後に行われる。
工程(c)は、工程(b)の後に行われる。
http://www.sekisuimedical.jp/english/business/diagnostics/biochemistry/hba1c/index.html
次に、実施形態2が説明される。
工程(d)では、HbA1cを含有する試料がカチオン性界面活性剤およびテトラゾリウム塩の組成物の存在下においてプロテアーゼおよびFPOXと混合され、過酸化水素を得る。好ましくは、試料は水溶液である。
工程(e)は、工程(d)の後に行われる。工程(e)では、工程(d)において得られた過酸化水素の量に基づいて、Hb1Acが定量される。
(試料溶液の調製)
ヒト全血(BIOPREDIC International社製)を希釈して、10倍希釈液を作成した。このようにして、ヘモグロビンを含む試料溶液を調製した。以下、この試料溶液は「試料溶液P」と呼ばれる。
(試料溶液の調製)
以下の試料溶液A1〜A16を調製した。比較用試料溶液a1も調製した。
用いられた試薬の入手先は以下の通りである。
サーモリシン:和光純薬工業株式会社
SDS:和光純薬工業株式会社
TTAB(テトラデシルトリメチルアンモニウムブロミド):和光純薬工業株式会社
TritonX−100:和光純薬工業株式会社
Tween20:和光純薬工業株式会社
WST−3:同仁化学研究所
WST−4:同仁化学研究所
WST−5:同仁化学研究所
(試料溶液A1)
試料溶液P
サーモリシン PBS溶液:150,000U/mL
SDS PBS溶液:10重量%
(試料溶液A2)
試料溶液P
サーモリシン PBS溶液:150,000U/mL
TTAB:10重量%
(試料溶液A3)
試料溶液P
サーモリシン PBS溶液:150,000U/mL
TritonX−100 PBS溶液:10重量%
(試料溶液A4)
試料溶液P
サーモリシン PBS溶液:150,000U/mL
Tween20 PBS溶液:10重量%
(試料溶液A5)
試料溶液P
サーモリシン PBS溶液:150,000U/mL
WST−3 水溶液:2重量%
(試料溶液A6)
試料溶液P
サーモリシン PBS溶液:150,000U/mL
WST−4 PBS溶液:0.5重量%
(試料溶液A7)
試料溶液P
サーモリシン PBS溶液:150,000U/mL
WST−5 PBS溶液:2重量%
(試料溶液A8)
試料溶液P
サーモリシン PBS溶液:150,000U/mL
TTAB:10重量%
WST−3 PBS溶液:2重量%
(試料溶液A9)
試料溶液P
サーモリシン PBS溶液:150,000U/mL
TTAB:10重量%
WST−4 PBS溶液:0.5重量%
(試料溶液A10)
試料溶液P
サーモリシン PBS溶液:150,000U/mL
TTAB:10重量%
WST−5 PBS溶液:2重量%
(試料溶液A11)
試料溶液P
サーモリシン PBS溶液:150,000U/mL
TritonX−100 PBS溶液:10重量%
WST−3 PBS溶液:2重量%
(試料溶液A12)
試料溶液P
サーモリシン PBS溶液:150,000U/mL
TritonX−100 PBS溶液:10重量%
WST−4 PBS溶液:0.5重量%
(試料溶液A13)
試料溶液P
サーモリシン PBS溶液:150,000U/mL
TritonX−100 PBS溶液:10重量%
WST−5 PBS溶液:2重量%
(試料溶液A14)
試料溶液P
サーモリシン PBS溶液:150,000U/mL
Tween20 PBS溶液:10重量%
WST−3 PBS溶液:2重量%
(試料溶液A15)
試料溶液P
サーモリシン PBS溶液:150,000U/mL
Tween20 PBS溶液:10重量%
WST−4 PBS溶液:0.5重量%
(試料溶液A16)
試料溶液P
サーモリシン PBS溶液:150,000U/mL
Tween20 PBS溶液:10重量%
WST−5 PBS溶液:2重量%
(比較用試料溶液a1)
試料溶液P
サーモリシン PBS溶液:150,000U/mL
試料溶液A1〜A16および比較用試料溶液a1の温度は、37℃に10分間維持され、反応を生じさせた。
反応後、試料溶液A1〜A16および比較用試料溶液a1は、ポリアクリルアミドゲル電気泳動(PAGE)供された。図1Aおよび図1Bは、電気泳動パターンを示す。図1Aおよび図1B中の「M」は、タンパク質マーカーを指し示す。
(試料溶液の調製)
試料溶液B1〜B16が調製された。比較用試料溶液b1も調製された。
用いられた試薬の入手先は以下の通りである。
パパイン:ロシュ・ダイアグノスティックス株式会社
SDS:和光純薬工業株式会社
TTAB(テトラデシルトリメチルアンモニウムブロミド):和光純薬工業株式会社
TritonX−100:和光純薬工業株式会社
Tween20:和光純薬工業株式会社
WST−3:同仁化学研究所
WST−4:同仁化学研究所
WST−5:同仁化学研究所
(試料溶液B1)
試料溶液P
パパイン PBS溶液:300U/mL
SDS PBS溶液:10重量%
(試料溶液B2)
試料溶液P
パパイン PBS溶液:300U/mL
TTAB:10重量%
(試料溶液B3)
試料溶液P
パパイン PBS溶液:300U/mL
TritonX−100 PBS溶液:10重量%
(試料溶液B4)
試料溶液P
パパイン PBS溶液:300U/mL
Tween20 PBS溶液:10重量%
(試料溶液B5)
試料溶液P
パパイン PBS溶液:300U/mL
WST−3 水溶液:2重量%
(試料溶液B6)
試料溶液P
パパイン PBS溶液:300U/mL
WST−4 PBS溶液:0.5重量%
(試料溶液B7)
試料溶液P
パパイン PBS溶液:300U/mL
WST−5 PBS溶液:2重量%
(試料溶液B8)
試料溶液P
パパイン PBS溶液:300U/mL
TTAB:10重量%
WST−3 PBS溶液:2重量%
(試料溶液B9)
試料溶液P
パパイン PBS溶液:300U/mL
TTAB:10重量%
WST−4 PBS溶液:0.5重量%
(試料溶液B10)
試料溶液P
パパイン PBS溶液:300U/mL
TTAB:10重量%
WST−5 PBS溶液:2重量%
(試料溶液B11)
試料溶液P
パパイン PBS溶液:300U/mL
TritonX−100 PBS溶液:10重量%
WST−3 PBS溶液:2重量%
(試料溶液B12)
試料溶液P
パパイン PBS溶液:300U/mL
TritonX−100 PBS溶液:10重量%
WST−4 PBS溶液:0.5重量%
(試料溶液B13)
試料溶液P
パパイン PBS溶液:300U/mL
TritonX−100 PBS溶液:10重量%
WST−5 PBS溶液:2重量%
(試料溶液B14)
試料溶液P
パパイン PBS溶液:300U/mL
Tween20 PBS溶液:10重量%
WST−3 PBS溶液:2重量%
(試料溶液B15)
試料溶液P
パパイン PBS溶液:300U/mL
Tween20 PBS溶液:10重量%
WST−4 PBS溶液:0.5重量%
(試料溶液B16)
試料溶液P
パパイン PBS溶液:300U/mL
Tween20 PBS溶液:10重量%
WST−5 PBS溶液:2重量%
(比較用試料溶液b1)
試料溶液P
パパイン PBS溶液:300U/mL
試料溶液B1〜B16および比較用試料溶液b1の温度は、37℃に10分間維持され、反応を生じさせた。
反応後、試料溶液B1〜B16および比較用試料溶液b1は、ポリアクリルアミドゲル電気泳動(PAGE)に供された。図2Aおよび図2Bは、電気泳動パターンを示す。図2Aおよび図2B中の「M」は、タンパク質マーカーを指し示す。
(試料溶液の調製)
試料溶液C1〜C12が調製された。比較用試料溶液c1も調製された。
用いられた試薬の入手先は以下の通りである。
FPOX−CE:キッコーマン株式会社
SDS:和光純薬工業株式会社
ペルオキシダーゼ:和光純薬工業株式会社
KN−111(発色色素):同仁化学研究所
TTAB(テトラデシルトリメチルアンモニウムブロミド):和光純薬工業株式会社
TritonX−100:和光純薬工業株式会社
Tween20:和光純薬工業株式会社
WST−3:同仁化学研究所
WST−4:同仁化学研究所
WST−5:同仁化学研究所
(試料溶液C1)
SDS PBS溶液:10重量%
FPOX−CE PBS溶液:28U/mL
ペルオキシダーゼ:20U/mL
KN−111:2mM
(試料溶液C2)
TTAB:10重量%
FPOX−CE PBS溶液:28U/mL
ペルオキシダーゼ:20U/mL
KN−111:2mM
(試料溶液C3)
TritonX−100 PBS溶液:10重量%
FPOX−CE PBS溶液:28U/mL
ペルオキシダーゼ:20U/mL
KN−111:2mM
(試料溶液C4)
Tween20 PBS溶液:10重量%
FPOX−CE PBS溶液:28U/mL
ペルオキシダーゼ:20U/mL
KN−111:2mM
(試料溶液C5)
WST−3 PBS溶液:2重量%
FPOX−CE PBS溶液:28U/mL
ペルオキシダーゼ:20U/mL
KN−111:2mM
(試料溶液C6)
WST−4 PBS溶液:0.5重量%
FPOX−CE PBS溶液:28U/mL
ペルオキシダーゼ:20U/mL
KN−111:2mM
(試料溶液C7)
WST−5 PBS溶液:2重量%
FPOX−CE PBS溶液:28U/mL
ペルオキシダーゼ:20U/mL
KN−111:2mM
(試料溶液C8)
TTAB:10重量%
WST−3 PBS溶液:2重量%
FPOX−CE PBS溶液:28U/mL
ペルオキシダーゼ:20U/mL
KN−111:2mM
(試料溶液C9)
TTAB:10重量%
WST−4 PBS溶液:0.5重量%
FPOX−CE PBS溶液:28U/mL
ペルオキシダーゼ:20U/mL
KN−111:2mM
(試料溶液C10)
TTAB:10重量%
WST−5 PBS溶液:2重量%
FPOX−CE PBS溶液:28U/mL
ペルオキシダーゼ:20U/mL
KN−111:2mM
(試料溶液C11)
TritonX−100 PBS溶液:10重量%
WST−3 PBS溶液:2重量%
FPOX−CE PBS溶液:28U/mL
ペルオキシダーゼ:20U/mL
KN−111:2mM
(試料溶液C12)
Tween20 PBS溶液:10重量%
WST−3 PBS溶液:2重量%
FPOX−CE PBS溶液:28U/mL
ペルオキシダーゼ:20U/mL
KN−111:2mM
(比較用試料溶液c1)
FPOX−CE PBS溶液:28U/mL
ペルオキシダーゼ:20U/mL
KN−111:2mM
試料溶液C1〜C12および比較用試料溶液c1の温度が37℃で10分間維持され、反応を生じさせた。
波長660ナノメートルでの混合溶液C1〜C12および比較用混合溶液c1の吸光度が、吸光度計(TECAN Group社より入手可能、商品名Infinite 200 Pro)を用いて、1分毎に測定した。図3は、結果を示す。
[試料溶液の調製]
試料溶液D1〜D16が調製された。比較用試料溶液d1もまた、調製された。
用いられた試薬の入手先は以下の通りである。
FPOX−CE:キッコーマン株式会社
サーモリシン:和光純薬工業株式会社
SDS:和光純薬工業株式会社
ペルオキシダーゼ:和光純薬工業株式会社
KN−111(発色色素):同仁化学研究所
TTAB(テトラデシルトリメチルアンモニウムブロミド):和光純薬工業株式会社
TritonX−100:和光純薬工業株式会社
Tween20:和光純薬工業株式会社
WST−3:同仁化学研究所
WST−4:同仁化学研究所
WST−5:同仁化学研究所
(試料溶液D1)
サーモリシン PBS溶液:150,000U/mL
SDS PBS溶液:10重量%
FPOX−CE PBS溶液:28U/mL
ペルオキシダーゼ:20U/mL
KN−111:2mM
(試料溶液D2)
サーモリシン PBS溶液:150,000U/mL
TTAB:10重量%
FPOX−CE PBS溶液:28U/mL
ペルオキシダーゼ:20U/mL
KN−111:2mM
(試料溶液D3)
サーモリシン PBS溶液:150,000U/mL
TritonX−100 PBS溶液:10重量%
FPOX−CE PBS溶液:28U/mL
ペルオキシダーゼ:20U/mL
KN−111:2mM
(試料溶液D4)
サーモリシン PBS溶液:150,000U/mL
Tween20 PBS溶液:10重量%
FPOX−CE PBS溶液:28U/mL
ペルオキシダーゼ:20U/mL
KN−111:2mM
(試料溶液D5)
サーモリシン PBS溶液:150,000U/mL
WST−3 PBS溶液:2重量%
FPOX−CE PBS溶液:28U/mL
ペルオキシダーゼ:20U/mL
KN−111:2mM
(試料溶液D6)
サーモリシン PBS溶液:150,000U/mL
WST−4 PBS溶液:0.5重量%
FPOX−CE PBS溶液:28U/mL
ペルオキシダーゼ:20U/mL
KN−111:2mM
(試料溶液D7)
サーモリシン PBS溶液:150,000U/mL
WST−5 PBS溶液:2重量%
FPOX−CE PBS溶液:28U/mL
ペルオキシダーゼ:20U/mL
KN−111:2mM
(試料溶液D8)
サーモリシン PBS溶液:150,000U/mL
TTAB:10重量%
WST−3 PBS溶液:2重量%
FPOX−CE PBS溶液:28U/mL
ペルオキシダーゼ:20U/mL
KN−111:2mM
(試料溶液D9)
サーモリシン PBS溶液:150,000U/mL
TTAB:10重量%
WST−4 PBS溶液:0.5重量%
FPOX−CE PBS溶液:28U/mL
ペルオキシダーゼ:20U/mL
KN−111:2mM
(試料溶液D10)
サーモリシン PBS溶液:150,000U/mL
TTAB:10重量%
WST−5 PBS溶液:2重量%
FPOX−CE PBS溶液:28U/mL
ペルオキシダーゼ:20U/mL
KN−111:2mM
(試料溶液D11)
サーモリシン PBS溶液:150,000U/mL
TritonX−100 PBS溶液:10重量%
WST−3 PBS溶液:2重量%
FPOX−CE PBS溶液:28U/mL
ペルオキシダーゼ:20U/mL
KN−111:2mM
(試料溶液D12)
サーモリシン PBS溶液:150,000U/mL
Tween20 PBS溶液:10重量%
WST−3 PBS溶液:2重量%
FPOX−CE PBS溶液:28U/mL
ペルオキシダーゼ:20U/mL
KN−111:2mM
(比較用試料溶液d1)
サーモリシン PBS溶液:150,000U/mL
FPOX−CE PBS溶液:28U/mL
ペルオキシダーゼ:20U/mL
KN−111:2mM
試料溶液D1〜D12および比較用試料溶液d1の温度が37℃で10分間維持され、反応を生じさせた。
波長660ナノメートルでの混合溶液D1〜D12および比較用混合溶液d1の吸光度が、吸光度計(TECAN Group社より入手可能、商品名Infinite 200 Pro)を用いて、1分毎に測定した。図4は、結果を示す。
(試料溶液の調製)
試料溶液E1〜E12が調製された。比較用試料溶液e1もまた、調製された。
用いられた試薬の入手先は以下の通りである。
FPOX−CE:キッコーマン株式会社
パパイン:ロシュ・ダイアグノスティックス株式会社
SDS:和光純薬工業株式会社
ペルオキシダーゼ:和光純薬工業株式会社
KN−111(発色色素):同仁化学研究所
TTAB(テトラデシルトリメチルアンモニウムブロミド):和光純薬工業株式会社
TritonX−100:和光純薬工業株式会社
Tween20:和光純薬工業株式会社
WST−3:同仁化学研究所
WST−4:同仁化学研究所
WST−5:同仁化学研究所
(試料溶液E1)
パパイン:300U/mL
SDS PBS溶液:10重量%
FPOX−CE PBS溶液:28U/mL
ペルオキシダーゼ:20U/mL
KN−111:2mM
(試料溶液E2)
パパイン:300U/mL
TTAB:10重量%
FPOX−CE PBS溶液:28U/mL
ペルオキシダーゼ:20U/mL
KN−111:2mM
(試料溶液E3)
パパイン:300U/mL
TritonX−100 PBS溶液:10重量%
FPOX−CE PBS溶液:28U/mL
ペルオキシダーゼ:20U/mL
KN−111:2mM
(試料溶液E4)
パパイン:300U/mL
Tween20 PBS溶液:10重量%
FPOX−CE PBS溶液:28U/mL
ペルオキシダーゼ:20U/mL
KN−111:2mM
(試料溶液E5)
パパイン:300U/mL
WST−3 PBS溶液:2重量%
FPOX−CE PBS溶液:28U/mL
ペルオキシダーゼ:20U/mL
KN−111:2mM
(試料溶液E6)
パパイン:300U/mL
WST−4 PBS溶液:0.5重量%
FPOX−CE PBS溶液:28U/mL
ペルオキシダーゼ:20U/mL
KN−111:2mM
(試料溶液E7)
パパイン:300U/mL
WST−5 PBS溶液:2重量%
FPOX−CE PBS溶液:28U/mL
ペルオキシダーゼ:20U/mL
KN−111:2mM
(試料溶液E8)
パパイン:300U/mL
TTAB:10重量%
WST−3 PBS溶液:2重量%
FPOX−CE PBS溶液:28U/mL
ペルオキシダーゼ:20U/mL
KN−111:2mM
(試料溶液E9)
パパイン:300U/mL
TTAB:10重量%
WST−4 PBS溶液:0.5重量%
FPOX−CE PBS溶液:28U/mL
ペルオキシダーゼ:20U/mL
KN−111:2mM
(試料溶液E10)
パパイン:300U/mL
TTAB:10重量%
WST−5 PBS溶液:2重量%
FPOX−CE PBS溶液:28U/mL
ペルオキシダーゼ:20U/mL
KN−111:2mM
(試料溶液E11)
パパイン:300U/mL
TritonX−100 PBS溶液:10重量%
WST−3 PBS溶液:2重量%
FPOX−CE PBS溶液:28U/mL
ペルオキシダーゼ:20U/mL
KN−111:2mM
(試料溶液E12)
パパイン:300U/mL
Tween20 PBS溶液:10重量%
WST−3 PBS溶液:2重量%
FPOX−CE PBS溶液:28U/mL
ペルオキシダーゼ:20U/mL
KN−111:2mM
(比較用試料溶液e1)
パパイン:300U/mL
FPOX−CE PBS溶液:28U/mL
ペルオキシダーゼ:20U/mL
KN−111:2mM
試料溶液E1〜E12および比較用試料溶液e1の温度が37℃で10分間維持され、反応を生じさせた。
波長660ナノメートルでの混合溶液E1〜E12および比較用混合溶液d1の吸光度が、吸光度計(TECAN Group社より入手可能、商品名Infinite 200 Pro)を用いて、1分毎に測定した。図5は、結果を示す。
Claims (14)
- 試料に含有される糖化ヘモグロビン(HbA1c)を定量する方法であって、以下の工程:
(a)カチオン性界面活性剤およびテトラゾリウム塩の組成物の存在下において、前記試料をプロテアーゼと混合し、糖化ペプチドを含有する糖化ペプチド水溶液を得る工程、
(b)前記工程(a)において得られた糖化ペプチド水溶液をフルクトシルペプチドオキシダーゼと混合し、過酸化水素を得る工程、ここで、前記糖化ペプチド水溶液は前記組成物を含有するものである、および
(c)工程(b)において得られた過酸化水素水の量に基づいて、前記糖化ヘモグロビン(HbA1c)の濃度を算出する工程
を具備する、方法。 - 請求項1に記載の方法であって、前記プロテアーゼが、サーモリシンおよびパパインからなる群から選択される、方法。
- 請求項1に記載の方法であって、前記カチオン性界面活性剤が、第4級アンモニウム塩である、方法。
- 請求項1に記載の方法であって、前記テトラゾリウム塩が、
2−(4−ヨードフェニル)−3−(2,4−ジニトロフェニル)−5−(2,4−ジスルホフェニル)−2H−テトラゾリウム,モノナトリウム塩、
2−(2−ベンゾチアゾリル)−3−(4−カルボキシ−2−メトキシフェニル)−5−[4−[(2−ソジオスルホエチル)カルバモイル]フェニル]−2H−テトラゾール−3−イウム、および
2,2’−(3,3’−ジメトキシ−4,4’−ビフェニリレン)ビス[3−(2−ベンゾチアゾリル)−5−[4−[N−[2−(ソジオオキシスルホニル)エチル]−N−(2−スルホエチル)カルバモイル]フェニル]−2H−テトラゾール−3−イウム]からなる群から選択される、方法。 - 請求項1に記載の方法であって、前記糖化ペプチドがフルクトシルペプチドである、方法。
- 請求項5に記載の方法であって、前記フルクトシルペプチドが、フルクトシル−バリン−ヒスチジンである、方法。
- 試料に含有される糖化ヘモグロビン(HbA1c)を定量する方法であって、以下の工程:
(a)カチオン性界面活性剤およびテトラゾリウム塩の組成物の存在下において、前記試料をプロテアーゼおよびフルクトシルペプチドオキシダーゼと混合し、過酸化水素水を得る工程、および
(b)工程(a)において得られた過酸化水素の量に基づいて、前記糖化ヘモグロビン(HbA1c)の濃度を算出する工程
を具備する、方法。 - 請求項7に記載の方法であって、前記プロテアーゼが、サーモリシンおよびパパインからなる群から選択される、方法。
- 請求項7に記載の方法であって、前記界面活性剤が、第4級アンモニウム塩である、方法。
- 請求項7に記載の方法であって、前記テトラゾリウム塩が、
2−(4−ヨードフェニル)−3−(2,4−diニトロフェニル)−5−(2,4−ジスルホフェニル)−2H−テトラゾリウム,モノナトリウム塩、
2−(2−ベンゾチアゾリル)−3−(4−カルボキシ−2−メトキシフェニル)−5−[4−[(2−ソジオスルホエチル)カルバモイル]フェニル]−2H−テトラゾール−3−イウム、および
2,2’−(3,3’−ジメトキシ−4,4’−ビフェニリレン)ビス[3−(2−ベンゾチアゾリル)−5−[4−[N−[2−(ソジオオキシスルホニル)エチル]−N−(2−スルホエチル)カルバモイル]フェニル]−2H−テトラゾール−3−イウム]からなる群から選択される、方法。 - 請求項7に記載の方法であって、前記糖化ペプチドがフルクトシルペプチドである、方法。
- 請求項11に記載の方法であって、前記フルクトシルペプチドが、フルクトシル−バリン−ヒスチジンである、方法。
- カチオン性界面活性剤およびテトラゾリウム塩を含有する、プロテアーゼを活性化するための組成物。
- 請求項13に記載の組成物であって、前記プロテアーゼが、サーモリシンおよびパパインからなる群から選択される、組成物。
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