JPWO2014013897A1 - 核酸クロマトグラフィー検査具及びその製造方法 - Google Patents
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Abstract
Description
図1〜図3に示されるように、本発明の核酸クロマトグラフィー検査具の一実施形態(核酸クロマトグラフィー検査具1)は、「標的核酸を含む試料」を展開することができる、一方向に長い多孔性シート10を備えるものである。多孔性シート10は、一方の面を表示部形成面12とするシート状の多孔性基材11を有するものである。多孔性基材11は、標的核酸を捕獲するための核酸プローブが表示部形成面12から浸透して「表示部形成面12に一部が露出する」ように形成された、捕捉核酸固相16(16a,16b)を有するものである。捕捉核酸固相16(16a,16b)の、多孔性基材11の表示部形成面12に露出した部分が表示部15(15a,15b)である。そして、表示部15(15a,15b)は、多孔性シート10の長手方向に交わる角度に延びる帯状である。更に、捕捉核酸固相16(16a,16b)の厚さは、不均一である。更に、捕捉核酸固相16(16a,16b)の厚さは、多孔性シート10の厚さの1倍未満である。更に、捕捉核酸固相16(16a,16b)は、厚さ方向において、表示部15(15a,15b)に近いほど核酸プローブの濃度が高くなっている。標的核酸を含む試料は、液体試料である。また、多孔性基材11の表示部形成面12を、多孔性シート10における検出面13とする。
本発明の核酸クロマトグラフィー検査具の製造方法の一の実施形態は、塗布工程と、乾燥工程とを有するものである。塗布工程は、一方向に長いシート状の多孔性基材の表示部形成面である一方の面に、捕捉核酸溶液を帯状に塗布し多孔性基材内に浸透させる工程である。そして、乾燥工程は、捕捉核酸溶液を、20〜50℃で、0.5〜5時間乾燥させて、捕捉核酸固相を形成する工程である。捕捉核酸固相は、表示部形成面に「一部が露出するように」形成される。そして、本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査具の製造方法によって、上述した本発明の核酸クロマトグラフィー検査具を製造することができる。尚、シート状の多孔性基材に表示部を配設したもの(位置マーカーを有さない場合)、又は多孔性基材に表示部及び位置マーカーを配設したものが、多孔性シートである。従って、多孔性シートが位置マーカーを有さない場合には、乾燥工程において表示部を形成することによって多孔性シートを得ることができる。また、多孔性シートが位置マーカーを有する場合には、乾燥工程の前に多孔性基材に「乾燥前位置マーカー」を形成し、乾燥工程において表示部及び位置マーカーを形成することによって多孔性シートを得ることができる。尚、多孔性基材に「乾燥前位置マーカー」を形成する際には、多孔性基材に、顔料系インクを含んだ液体等を塗布することが好ましい。また、捕捉核酸溶液の塗布と、顔料系インクを含んだ液体等の塗布とは、どちらが先でもよい。
本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査具の製造方法において、塗布工程は、シート状の多孔性基材の表示部形成面に捕捉核酸溶液を帯状に塗布し、核酸プローブを含有する捕捉核酸溶液を表示部形成面から多孔性基材内に浸透させる工程である。尚、多孔性基材の表示部形成面は、多孔性シートの検出面になる。また、多孔性基材の条件としては、上述した本発明の核酸クロマトグラフィー検査具において好ましいとされた多孔性基材の条件と同様であることが好ましい。
位置マーカーを有する核酸クロマトグラフィー検査具を作製する際には、乾燥前に、シート状の多孔性基材の表示部形成面に「乾燥前位置マーカー」を形成することが好ましい。尚、「乾燥前位置マーカー」は、乾燥工程において乾燥した後に「位置マーカー」になるものである。
本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査具の製造方法において、乾燥工程は、捕捉核酸溶液を、20〜50℃で、0.5〜5時間乾燥させて、「表示部形成面に一部が露出するように」捕捉核酸固相を形成する工程である。位置マーカーを形成しない場合には、これによって多孔性シートが形成される。また、バッキング部材及び吸収パッドを形成しない場合には、これにより、核酸クロマトグラフィー検査具が得られる。
多孔性シートの「検出面13に対して反対側の面」に、シート状のバッキング部材を貼り付けることが好ましい。バッキング部材についての各条件は、上記本発明の核酸クロマトグラフィー検査具に備えられるバッキング部材の好ましいとされる条件と、同様の条件が好ましい。吸収パッドを形成しない場合には、これにより、核酸クロマトグラフィー検査具が得られる。
試料採取部(一方の端部)に対して反対側の端部(他方の端部)における、多孔性シートの表面に、吸収パッドを貼り付けて、核酸クロマトグラフィー検査具を得ることが好ましい。吸収パッドについての各条件は、上記本発明の核酸クロマトグラフィー検査具に備えられる吸収パッドの好ましいとされる条件と、同様の条件が好ましい。
一方向に長いシート状の多孔性基材の表示部形成面である一方の面に、捕捉核酸溶液を帯状に塗布した。
「捕捉核酸溶液Aの塩基配列に相補的な塩基配列を有するサンプルDNA(なお、アミノ基で修飾)」を、カルボキシル化ラテックス粒子に固定する。このサンプルDNAを固定したカルボキシル化ラテックス粒子を滅菌水で分散し、試料(試料A)とする。試料Aをテストチューブに入れ、核酸クロマトグラフィー検査具の試料採取部を、テストチューブ中の試料Aに浸漬する。5分後に、核酸クロマトグラフィー検査具の検出面を観察する。評価結果としては、発色が確認された場合を「C」、明確な発色が確認された場合を「B」、「B」よりも濃い発色が確認された場合を「A」とする。評価結果「A」を合格とする。
「捕捉核酸溶液Aの塩基配列に相補的な塩基配列を有するサンプルDNA(なお、アミノ基で修飾)」と「捕捉核酸溶液Bの塩基配列に相補的な塩基配列を有するサンプルDNA(なお、アミノ基で修飾)」を、カルボキシル化ラテックス粒子に固定する。このサンプルDNAを固定したカルボキシル化ラテックス粒子を滅菌水で分散し、試料(試料B)とする。試料Bをテストチューブに入れ、核酸クロマトグラフィー検査具の試料採取部を、テストチューブ中の試料Bに浸漬する。捕捉核酸固相Aが発色されてから捕捉核酸固相Bが発色されるまでの時間(発色時間間隔)が、1分未満を「A」、1分〜3分以内を「B」、3分以上を「C」とする。また、5分後に核酸クロマトグラフィー検査具の捕捉核酸固相Bの検出面を観察する。評価結果(捕捉核酸固相Bの発色評価)としては、発色が確認された場合を「C」、明確な発色が確認された場合を「B」、「B」よりも濃い発色が確認された場合を「A」とする。評価結果「A」を合格とする。
各条件を表1に示すものとした以外は実施例1と同様にして核酸クロマトグラフィー検査具を作製した。実施例1の場合と同様にして、標的核酸検出試験1及び標的核酸検出試験2を行った。結果を表1に示す。また、「捕捉核酸固相の厚さ」及び「核酸プローブの濃度」について、表1に示す。また、実施例1,2及び比較例1の核酸クロマトグラフィー検査具において、捕捉核酸溶液A,Bのそれぞれについてのトータルの塗布量は、同じ量であった。また、比較例2の核酸クロマトグラフィー検査具においては、捕捉核酸溶液A,Bのそれぞれについてのトータルの塗布量を、実施例1,2及び比較例1における塗布量と、同じとした。
Claims (6)
- 標的核酸を含む試料を展開することができる一方向に長い多孔性シートを備え、
前記多孔性シートは、一方の面を表示部形成面とするシート状の多孔性基材を有し、
前記多孔性基材は、標的核酸を捕獲するための核酸プローブが前記表示部形成面から浸透して前記表示部形成面に一部が露出するように形成された捕捉核酸固相を有し、
前記捕捉核酸固相の、前記多孔性基材の前記表示部形成面に露出した部分が表示部であり、
前記表示部は、前記多孔性シートの長手方向に交わる角度に延びる帯状であり、
前記捕捉核酸固相は、厚さ方向において、前記表示部に近いほど核酸プローブの濃度が高くなっている核酸クロマトグラフィー検査具。 - 前記捕捉核酸固相の厚さは、不均一で、前記多孔性シートの厚さの1倍未満である請求項1に記載の核酸クロマトグラフィー検査具。
- 前記多孔性基材の他方の面に配設されたシート状のバッキング部材を更に備える請求項1又は2に記載の核酸クロマトグラフィー検査具。
- 前記多孔性シートが、複数層のシートである請求項1〜3のいずれかに記載の核酸クロマトグラフィー検査具。
- 一方向に長いシート状の多孔性基材の表示部形成面である一方の面に、捕捉核酸溶液を帯状に塗布して前記多孔性基材内に浸透させる塗布工程と、
前記捕捉核酸溶液を、20〜50℃で、0.5〜5時間乾燥させて、捕捉核酸固相を形成する乾燥工程を有する核酸クロマトグラフィー検査具の製造方法。 - 前記塗布工程が、前記捕捉核酸溶液が充填されるキャビティが形成された1個以上の基体と、前記キャビティを形成する前記基体の少なくとも一の壁面に配設された圧電/電歪素子とを備え、前記圧電/電歪素子の動作によって前記キャビティ内の前記捕捉核酸溶液が吐出されるように構成されたマイクロピペットによって、前記多孔性基材の前記検出面に前記捕捉核酸溶液を帯状に塗布し前記多孔性基材内に浸透させる工程である、請求項5に記載の核酸クロマトグラフィー検査具の製造方法。
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