JPWO2013191244A1

JPWO2013191244A1 - ピリドピリミジン−４−オン誘導体

Info

Publication number: JPWO2013191244A1
Application number: JP2014521503A
Authority: JP
Inventors: 光周吉永; 直樹宮腰; 一実古閑
Original assignee: Taisho Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Taisho Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2012-06-21
Filing date: 2013-06-20
Publication date: 2016-05-26
Anticipated expiration: 2033-06-20
Also published as: JP6187460B2; WO2013191244A1

Abstract

式（Ｉ）（式中、Ｘは、窒素原子、又は式ＣＨを示し、Ｒ1は、Ｃ1-5アルキル（該Ｃ1-5アルキルはヒドロキシ、ハロゲン原子、シアノ、Ｃ3-7シクロアルキル、及びＣ1-5アルコキシから選ばれる同一又は異なった１〜３個の置換基で置換されても良い）、Ｒ2は、水素原子、又はＣ1-5アルキル（該Ｃ1-5アルキルは少なくとも１個の水素原子が3Ｈである）を示す。）で表わされる化合物又はその医薬上許容される塩は、アルギニン−バソプレッシンのＶ１ｂ受容体に特異的に結合する新規な[3Ｈ]標識リガンド、または、効率的な[3Ｈ]標識リガンド合成の前駆体として有用である。

Description

本発明は、アルギニン−バソプレッシン（ＡＶＰ）のＶ１ｂ受容体に特異的に結合するピリドピリミジン−４−オン誘導体に関する。更に、Ｖ１ｂ受容体に特異的に結合するピリドピリミジン−４−オン誘導体の新規な[³Ｈ]標識リガンドに関する。また、効率的な[³Ｈ]標識リガンド合成のための製造方法、及び当該方法に有用な前駆体に関する。

ＡＶＰは９個のアミノ酸よりなるペプチドである。ＡＶＰは、脳内の神経細胞で生合成され、下垂体後葉から血液中へと分泌され、血圧及び体液量の調節を行う。また、ＡＶＰは下垂体前葉へと分泌され、副腎皮質刺激ホルモン（ＡＣＴＨ）の分泌を刺激する。

ＡＶＰ受容体は、これまでＶ１ａ、Ｖ１ｂ及びＶ２受容体の３つのサブタイプがクローニングされており、いずれもＧタンパク質共役型受容体である。Ｖ１ａ及びＶ１ｂ受容体はＧｑタンパク質と共役し、受容体の活性化は、イノシトールリン脂質の代謝を亢進させまた、細胞内Ｃａ²⁺濃度を上昇させる（非特許文献１及び非特許文献２参照）。また、Ｖ２受容体は、Ｇｓタンパク質と共役し、受容体の活性化は、細胞内サイクリックＡＭＰ量を増加させる。Ｖ１ａ受容体は、脳、肝臓、副腎、血管平滑筋などに発現している。Ｖ２受容体は腎臓などに発現している。Ｖ１ｂ受容体は、脳、下垂体などに発現し、脳内では、視床下部、嗅球、海馬、大脳皮質、線条体、小脳などに発現している（非特許文献３及び非特許文献４参照）。Ｖ１ｂ受容体ノックアウトマウスでは、ＡＶＰ誘発によるＡＣＴＨ分泌が減少している（非特許文献５参照）。そのため、Ｖ１ｂ受容体はＡＶＰによる下垂体前葉からのＡＣＴＨ分泌に関わることが示唆される。

ＡＶＰ及びＡＶＰ受容体と、精神疾患との関係を示唆する報告がある。例えば、うつ病患者では血漿ＡＶＰ濃度が上昇している（非特許文献６参照）。また、Ｖ１ｂ受容体遺伝子の一遺伝子多型と、うつ病の感受性増加との関係が示唆されている（非特許文献７参照）。一方、動物モデルでのＡＶＰ受容体拮抗物質の効果を検討した報告がある。これまでに経口投与可能な１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オン化合物が創出され（特許文献１〜３参照）、この化合物は、抗うつ作用を評価する動物モデル（強制水泳試験など）及び、抗不安作用を評価する動物モデル（高架式十字迷路試験など）において、抗うつ及び抗不安作用を示している（非特許文献８及び非特許文献９参照）。さらに、この化合物は、ＡＶＰ誘発による血中ＡＣＴＨ上昇、及び拘束ストレス誘発による血中ＡＣＴＨ上昇を抑制する（非特許文献８参照）。特許文献１で開示された化合物は、Ｖ１ｂ受容体に高親和性（１×10^-9ｍｏｌ／Ｌ〜４×10^-9ｍｏｌ／Ｌ）かつ、他のＡＶＰ受容体と比較してＶ１ｂ受容体へより選択的に作用する化合物である。以上の知見より、Ｖ１ｂ受容体拮抗物質が精神疾患の治療薬として有用である可能性が高い。

Ｖ１ｂ受容体に選択的に作用する化合物は、Ｖ１ｂ受容体を標的とした新規治療薬の開発に応用するだけでなく、[³Ｈ]などの放射性標識体として用いることで、生理条件下でのＶ１ｂ受容体の発現分布、もしくは病態モデル動物でのＶ１ｂ受容体の発現変化を調べることが可能であり、Ｖ１ｂ受容体の生理機能を明らかにする上で有力なツールとなる。In vitro結合試験での応用例として、１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オン化合物の[³Ｈ]標識体を使用し、下垂体切片でのオートラジオグラフィー法によるＶ１ｂ受容体の発現分布の報告がある（非特許文献１０）。また、キナゾリン−４−オン骨格での[³Ｈ]標識体でも同様に下垂体切片でのオートラジオグラフィー法の報告がある（非特許文献１１）。

しかし、本発明に開示するピリドピリミジン−４−オン誘導体の[³Ｈ]標識体のように、in vivoにてラットに静脈内投与し、Ｖ１ｂ受容体特異的結合による下垂体への[³Ｈ]標識体の取り込みを示した報告はこれまでにない。

また、Ｖ１ｂ受容体に特異的に結合するピリドピリミジン−４−オン誘導体は、特許文献４及び特許文献５に開示されているが、本発明のピリドピリミジン−４−オン誘導体、ピリドピリミジン−４−オン誘導体の[³Ｈ]標識体及びそれらの製造方法及び前駆体の開示はない。

ＷＯ２００１／０５５１３０号公報ＷＯ２００５／０２１５３４号公報ＷＯ２００５／０３０７５５号公報ＷＯ２００９／０１７２３６号公報特開２０１０−１７３９７８号公報

Sugimoto T, Kawashima H, J. Biol. Chem., 269, 27088-27092, 1994. Lolait S, Brownstein M, Proc. Natl. Acad. Sci. U S A, 92, 6783-6787, 1995. Vaccari C, Ostrowski N, Endocrinology, 139, 5015-5033, 1998. Hernando F, Burbach J, Endocrinology, 142, 1659-1668, 2001. Tanoue A, Tsujimoto G, J. Clin. Invest., 113, 302-309, 2004. van Londen L, Wied D, Neuropsychopharmacol., 17, 284-292, 1997. van West D, Claes S, Mol. Psychiatry, 9, 287-292, 2004. Gal CS, Fur GL, J. Pharmacol. Exp. Ther., 300, 1122-1130, 2002. Griebel G, Soubrie P, Proc. Natl. Acad. Sci. U S A, 99, 6370-6375, 2002. Gal CS, Ventura MA, Am J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 293, R938-R949, 2007. L.V. Unger, S.X. Vaidyanathan, 第３８回米国神経科学会, 2008, Program#/Poster# 845.21/Z16

本発明の目的は、Ｖ１ｂ受容体に特異的に結合する非標識体ならびに[³Ｈ]標識体を提供することにある。また、効率的な[³Ｈ]標識リガンド合成のための製造方法、及びその方法に有用な前駆体を提供することにある。

本発明者らは、Ｖ１ｂ受容体に特異的に結合する化合物につき誠意検討した結果、ある種のピリドピリミジン−４−オン誘導体に強力な結合作用を見出し、さらに優れた[³H]標識リガンド及び効率的な[³Ｈ]標識リガンド合成のための製造方法、及びその方法に有用な前駆体を見出し、本発明を完成した。

以下、本発明を詳細に説明する。本発明の態様は以下に示すものである。（１）から（６）及び（１０）の化合物は、以下、「本発明化合物」ともいう。（１１）〜（１４）の製造方法は、以下、「本発明の製造方法」ともいい、（９）の化合物及び式（ＩＩＩ）の化合物は、以下、「前駆体」ともいう。
（１）式（Ｉ）

（式中、
Ｘは、窒素原子、又は式ＣＨを示し、
Ｒ¹は、Ｃ_1-5アルキル（該Ｃ_1-5アルキルはヒドロキシ、ハロゲン原子、シアノ、Ｃ_3-7シクロアルキル、及びＣ_1-5アルコキシから選ばれる同一又は異なった１〜３個の置換基で置換されても良い）、
Ｒ²は、水素原子、又はＣ_1-5アルキル（該Ｃ_1-5アルキルは少なくとも１個の水素原子が³Ｈである）を示す。）
で表わされる化合物又はその医薬上許容される塩、
（２）上記式（Ｉ）において、
Ｒ²が、Ｃ_1-5アルキル（該Ｃ_1-5アルキルは少なくとも１個の水素原子が³Ｈである）である（１）に記載の化合物又はその医薬上許容される塩、
（３）上記式（Ｉ）において、
Ｒ¹が、Ｃ_1-5アルキルであり、
Ｒ²が、Ｃ_1-5アルキル（該Ｃ_1-5アルキルは、少なくとも１個の水素原子が³Ｈである）である（２）に記載の化合物又はその医薬上許容される塩、
（４）上記式（Ｉ）において、
Ｒ²が、メチル（該メチルは、少なくとも１個の水素原子が³Ｈである）である（２）又は（３）いずれかに記載の化合物又はその医薬上許容される塩、
（５）上記式（Ｉ）において、
Ｒ¹が、ｔｅｒｔ−ブチルである（２）〜（４）いずれか１つに記載の化合物又はその医薬上許容される塩、
（６）上記式（Ｉ）において、
Ｘが、式ＣＨであり、
Ｒ¹が、ｔｅｒｔ−ブチルである（２）〜（５）いずれか１つに記載の化合物又はその医薬上許容される塩、
（７）上記（２）〜（６）いずれか１つに記載の化合物又はその医薬上許容される塩を含有する、Ｖ１ｂ受容体標識剤、
（８）上記（２）〜（６）いずれか１つに記載の化合物又はその医薬上許容される塩を含有する、医薬組成物、
（９）上記式（Ｉ）において、
Ｒ¹が、Ｃ_1-5アルキルであり、
Ｒ²が、水素原子である（１）に記載の化合物又はその医薬上許容される塩、
（１０）式（ＩＩ）

で表わされる化合物又はその医薬上許容される塩、
（１１）上記（２）〜（６）のいずれか１つに記載の化合物又はその医薬上許容される塩の製造方法であって、式（ＩＩＩ）：

（式中、Ｒ¹、Ｘは上記で定義した通りである）で表される化合物と、式Ｒ^２−Ｌ^１（Ｒ²は上記で定義した通りであり、Ｌ¹は脱離基である）で表される化合物とを、塩基及び溶媒の存在下で反応させることを含む方法、
（１２）Ｌ^１が４−ニトロベンゼンスルホニルオキシ基、ｐ−トルエンスルホニルオキシ基、メタンスルホニルオキシ基、又はハロゲン原子である、（１１）に記載の方法。
（１３）塩基が、炭酸カリウム、炭酸セシウム、トリエチルアミン、又はジイソプロピルエチルアミンである、（１１）又は（１２）に記載の方法。
（１４）溶媒が、テトラヒドロフラン、アセトニトリル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、又はジメチルスルホキシドである、（１１）〜（１３）のいずれか１つに記載の方法。

本発明の非標識体はＶ１ｂ受容体に特異的な結合阻害活性を示した。また、その[³Ｈ]標識体は、生体内に投与した後に代謝を受けずに安定であり、標的臓器である下垂体への十分な量の移行が認められた。

さらに、本発明の製造方法は、当該[³Ｈ]標識体の効率的な供給を可能とする。先ず、放射標識化合物を用いる工程は、放射性物質を扱うための特殊な施設で行わなければならない。この点、本発明の製造方法では、そのような工程を最終段階で行うため、特殊な施設での作業量を最小限に抑えることができ、結果として作業の煩雑性を緩和すると共に作業に伴うコストを抑えることができる。また、当該工程を最終段階で行うことは、その後の追加工程があれば生ずるであろう標識化合物のロスを防止することにつながる。そのようなロスを防止することは極めて重要である。なぜなら、[³Ｈ]標識された原料は高価であるからである。本発明の[³Ｈ]標識リガンド合成のための前駆体は、そのような効率的な本発明[³Ｈ]標識リガンドの製造を可能とした。

ラット下垂体前葉膜を用いた結合試験にて、本発明化合物Ａ−３の混合反応液中の濃度とラット下垂体前葉膜への総結合、非特異結合及び特異結合との関係を示す。 in vivoラット下垂体前葉結合試験にて、本発明化合物Ａ−３投与３０分後の下垂体前葉および眼球での放射能濃度（ブロッキングなし）、及びWO２００９/０１７２３６記載の実施例Ａ−２５０の化合物を前処置した際の下垂体前葉および眼球での放射能濃度（ブロッキングあり）を示す。

本明細書において用いる用語は、以下の意味である。
「ハロゲン原子」とは、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子である。
「Ｃ_1-5アルキル基」とは、直鎖状又は分岐鎖状の炭素数１〜５個のアルキル基を意味し、例えばメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ｔｅｒｔ−ペンチル、１−エチルプロピル基等を挙げることができる。
「Ｃ_3-7シクロアルキル基」とは、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル基である。
「Ｃ_1-5アルコキシ基」とは、直鎖状又は分岐鎖状の炭素数１〜５個のアルコキシ基を意味し、例えばメトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ−ブトキシ、イソブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、ｎ−ペンチルオキシ、イソペンチルオキシ、ネオペンチルオキシ、ｔｅｒｔ−ペンチルオキシ基等を挙げることができる。
「脱離基」としては、アリールスルホニルオキシ基（該アリールスルホニルオキシ基のアリールは、Ｃ_１−５アルキル基、ニトロ基又はハロゲン原子等で置換されても良い）、Ｃ_１−５アルキルスルホニルオキシ基（該Ｃ_１−５アルキルスルホニルオキシ基のＣ_１−５アルキル基は、ハロゲン原子で置換されても良い）、ハロゲン原子等を挙げることができる。当該アリールは、単環から２環式の芳香族炭素環であり、フェニル、１−ナフチル、２−ナフチル等の基を挙げることができる。
当該アリールスルホニルオキシ基（該アリールスルホニルオキシ基のアリールは、Ｃ_１−５アルキル基、ニトロ基又はハロゲン原子等で置換されても良い）としては、４−ニトロベンゼンスルホニルオキシ基、ｐ−トルエンスルホニルオキシ基等を挙げることができる。
当該Ｃ_１−５アルキルスルホニルオキシ基（該Ｃ_１−５アルキルスルホニルオキシ基のＣ_１−５アルキル基は、ハロゲン原子で置換されても良い）としては、メタンスルホニルオキシ基、トリフルオロメタンスルホニルオキシ基等を挙げることができる。
「塩基」としては、炭酸カリウム、炭酸セシウム等の無機塩基や、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン等の有機塩基を挙げることができる。
「³Ｈ」は、水素原子の放射性同位体であり、三重水素のことである。また、トリチウムとも表記し、Ｔと略すこともある。

本明細書中における「医薬上許容される塩」とは、薬剤的に許容することのできる酸付加塩を意味し、用いられる酸としては、硫酸、塩酸、臭化水素酸、リン酸、硝酸等の無機酸との塩、或いは、酢酸、安息香酸、シュウ酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、フマル酸、マレイン酸、クエン酸、マロン酸、マンデル酸、グルコン酸、ガラクタル酸、グルコヘプトン酸、グリコール酸、グルタミン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、カンファースルホン酸、ナフタレン−２−スルホン酸等の有機酸との塩が含まれる。遊離体から当該塩への変換は従来の方法で行うことができる。

本発明化合物において、好ましい態様を以下にあげる。

Ｘは、式ＣＨである化合物が好ましい。

Ｒ¹は、Ｃ_1-5アルキルである化合物が好ましく、イソプロピル又はｔｅｒｔ−ブチルである化合物がより好ましく、ｔｅｒｔ−ブチルである化合物がさらに好ましい。

Ｒ²は、１〜３個の³Ｈで標識されたＣ_1-5アルキルである化合物が好ましく、１〜３個の³Ｈで標識されたメチルである化合物がより好ましく、３個の³Ｈで標識されたメチルである化合物がさらに好ましい。

他のＲ²の好ましい態様として、Ｒ²が、水素原子である化合物が好ましい。

Ｖ１ｂ受容体に作用する化合物及びその[³Ｈ]標識体の好ましいプロファイルは、Ｖ１ｂ受容体に対して強力かつ特異的な結合阻害活性を示し、他の受容体（例えば、Ｖ１ａ受容体、Ｖ２受容体等）に対しては結合阻害活性を示さない化合物が好ましい。

なお、本発明化合物が水和物又は溶媒和物を形成する場合、それらも本発明の範囲内に含まれる。同様に、本発明化合物の水和物又は溶媒和物の医薬上許容される塩も本発明の範囲内に含まれる。また、本発明化合物は、エナンチオマー、ジアステレオマー、平衡化合物、これらの任意の割合の混合物、ラセミ体等を全て含む。

本発明の化合物は、例えば下記に示す方法に従って製造することができる。

本発明化合物（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）及びそれらの医薬上許容される塩は、当業者に公知である種々の有機合成手法を用いて合成することができる。例えば、以下に製造法を示すが本合成法に限られたものではない。なお、以下の製造法の例示において、化合物は反応に支障にならない塩を形成していてもよい。

式（Ｉ）で表される化合物は、スキーム１に示す合成法で製造することができる。

（式中、Ｒ¹、Ｘは前記と同義である。Ｒ²は、Ｃ_1-5アルキル（該Ｃ_1-5アルキルは少なくとも１個の水素原子が³Ｈである）である。Ｌ¹は脱離基を示す。脱離基とは、４−ニトロベンゼンスルホニルオキシ基、ｐ−トルエンスルホニルオキシ基、メタンスルホニルオキシ基、ハロゲン原子等を意味する。）

式（Ｉ）で表される化合物は、式（ＩＩＩ）で表される化合物と、式（１−ａ）で表される化合物とを反応させることにより得ることができる（工程１−１）。工程１−１における反応は、テトラヒドロフラン、アセトニトリル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）等の溶媒中、又はそれらの混合溶媒中、室温から溶媒の沸点付近の温度条件下、炭酸カリウム、炭酸セシウム等の無機塩基や、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン等の有機塩基の存在により、反応が進行する。特に好ましい反応条件では、塩基は炭酸セシウムであり、溶媒はＤＭＦ中である。

Ｒ²が水素原子である本発明化合物（ＩＩＩ）は、スキーム２に示す合成法で製造することができる。

（式中、Ｒ¹、Ｘは前記と同義である。Ｈａｌはハロゲン原子を示す。Ｌ²はフェノール性水酸基の保護基を示す［プロテクティブグループスインオーガニックシンセシス（Protective Groups in Organic Synthesis）第４版、ジョンウィリーアンドサンズ（John Wiley & Sons, INC.）参照］。Ｌ³は脱離基を示す。脱離基とは、ｐ−トルエンスルホニルオキシ基、メタンスルホニルオキシ基、ハロゲン原子等を意味する。）

式（２−ｂ）で表される化合物は式（２−ａ）で表される化合物をボロン酸誘導体とした後、過酸を用いてヒドロキシ化することにより得ることができる（工程２−１）。本工程は、ＷＯ２００６／０２１８８６号公報記載の方法に従って実施することができる。式（２−ｄ）で表される化合物は、工程２−２、工程２−３及び工程２−４の３つの異なる工程により、それぞれ製造することができる。すなわち、工程２−２は、式（２−ｂ）で表される化合物と式（２−ｃ）で表される化合物を反応させることにより得ることができる。式（２−ｃ）で表される化合物は塩を形成しても良い。工程２−２における反応は、工程１−１と同様の方法で行うことができる。また、式（２−ｄ）で表される化合物は、式（２−ｂ）で表される化合物と式（２−ｅ）で表される化合物を光延反応の条件下反応させて得ることができる（工程２−３）。光延反応に関する包括的概観はSynthesis. 1981, 1-28; Chem. Asian J. 2007, 2, 1340-1355.; Chem. Pharm. Bull. 2003, 51(4), 474-476に見出される。さらに、式（２−ｄ）で表される化合物は、式（２−ａ）で表される化合物と式（２−ｅ）で表される化合物をパラジウム触媒を用いたエーテル化反応の条件下反応させることにより得ることができる（工程２−４）。パラジウム触媒を用いたエーテル化反応に関する包括的概観は、M. Paulucki, J. P. Wolfe, S. L. Buchwald, J. Am. Chem. Soc., 1996, 118, 10333.; G. Mann, J. F. Hartwig, J. Am. Chem. Soc. 1996, 118, 13109.; M. Watanabe, M. Nishiyama, Y. Koie, Tetrahedron Lett. 1999, 40, 8837.; Q. Shelby, N. Kataoka, G. Mann, J. F. Hartwig, J. Am. Chem. Soc. 2000, 122, 10718.; K. E. Torraca, S. Kuwabe, S. L. Buchwald, J. Am. Chem. Soc. 2000, 122, 12907.; C. A. Parrish, S. L. Buchwald, J. Org. Chem. 2001, 66, 2498.; P. M. Karen, E. Torraca, X. Huang, C. A. Parrish, and S. L. Buchwald, J. Am. Chem. Soc, 2001, 10770-10771.; Andrei V. Vorogushin, Xiaohua Huang, and Stephen L. Buchwald J. Am. Chem. Soc., 2005, 8146 -8149.に見出される。式（ＩＩＩ）で表される化合物は式（２−ｄ）で表される化合物のＬ²基を、一般的手法にて脱保護する［プロテクティブグループスインオーガニックシンセシス（Protective Groups in Organic Synthesis）第４版、ジョンウィリーアンドサンズ（John Wiley & Sons, INC.）参照］ことにより得ることができる（工程２−５）。

式（２−ａ）で表される化合物のうち、式（３−ｄ）で表される化合物はスキーム３に示す合成法で製造することができる。

（式中、Ｒ¹、Ｌ²、Ｘ、Ｈａｌは上記と同じである。Ｌ⁴はＣ_1-5アルキルを示す。）

式（３−ｄ）で表される化合物は式（３−ａ）で表される化合物と、式（３−ｂ）で表されるアルデヒドを、脱水縮合させることにより１，２−ジヒドロピリドピリミジン−４−オン誘導体（３−ｃ）を得た後に（工程３−１）、引き続き酸化反応に付すことにより、得ることができる（工程３−２）。工程３−１における縮合反応は、酢酸等の有機酸存在下、エタノール、２−プロパノール等の溶媒中、反応溶媒の沸点付近の温度条件下進行し、モレキュラーシーブス等の脱水剤を用いて副生する水を除くことにより、より円滑に縮合反応は進行する。工程３−２における酸化反応は、活性二酸化マンガン等の酸化剤を用い、クロロホルム、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、テトラヒドロフラン等の溶媒中、又はそれらの混合溶媒中、室温から反応溶媒の沸点付近の温度条件下進行する。また、式（３−ｄ）で表される化合物は式（３−ａ）で表される化合物と式（３−ｅ）で表される化合物を、エタノール、２−プロパノール、テトラヒドロフラン等の溶媒中、反応溶媒の沸点付近の温度条件下縮合させ得ることができる（工程３−３）。

式（ＩＩ）で表される化合物はスキーム４に示す合成法で製造することができる。

（式中、Ｌ³は上記と同じである。）

式（ＩＩ）で表される化合物は式（４−ａ）で表される化合物と式（２−ｃ）で表される化合物を反応させることにより得ることができる（工程４−１）。式（２−ｃ）で表される化合物は塩を形成しても良い。工程４−１における反応は、工程１−１と同様の方法で行うことができる。

以下、参考例、実施例及び試験例を挙げて本発明を更に詳細に説明するが、これらは本発明を限定するものではなく、また本発明の範囲を逸脱しない範囲で変化させてもよい。

以下の参考例、実施例において、後処理の際の「ＰｈａｓｅＳｅｐａｒａｔｏｒ」とはＢｉｏｔａｇｅ社のＩＳＯＬＵＴＥ（商標登録）ＰｈａｓｅＳｅｐａｒａｔｏｒである。カラムクロマトグラフィーを使用して精製した際の「ＳＮＡＰＣａｒｔｒｉｄｇｅＫＰ−ＮＨ」にはＢｉｏｔａｇｅ社ＳＮＡＰＣａｒｔｒｉｄｇｅＫＰ−ＮＨ、「ＳＮＡＰＣａｒｔｒｉｄｇｅＫＰ−Ｓｉｌ」にはＢｉｏｔａｇｅ社ＳＮＡＰＣａｒｔｒｉｄｇｅＫＰ−Ｓｉｌ、「ＳＮＡＰＣａｒｔｒｉｄｇｅＨＰ−Ｓｉｌ」にはＢｉｏｔａｇｅ社ＳＮＡＰＣａｒｔｒｉｄｇｅＨＰ−Ｓｉｌ、「ＳＮＡＰＣａｒｔｒｉｄｇｅＨＰ−Ｓｐｈｅｒｅ」にはＢｉｏｔａｇｅ社ＳＮＡＰＣａｒｔｒｉｄｇｅＵｌｔｒａ、「ＣｈｒｏｍａｔｏｒｅｘＮＨ」には富士シリシア化学社製クロマトレックス（登録商標）ＮＨ、ＴＬＣプレートＮＨ（富士シリシア社製）を用いた薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）、また、シリカゲル６０、シリカゲル６０Ｎとは、関東化学（株）から市販されているシリカゲルを使用した。分取薄層クロマトグラフィー（ＰＴＬＣ）を使用して精製した際にはメルク社シリカゲル６０Ｆ₂₅₄、２０ｃｍ×２０ｃｍを使用した。精製の際の「逆相カラムクロマトグラフィー」にはＷａｔｅｒｓＳｕｎｆｉｒｅｐｒｅｐＣ１８ＯＢＤ，５．０μｍ，φ３０×５０ｍｍまたはＹＭＣ−ＡｃｔｕｓＴｒｉａｒｔＣ１８，５．０μｍ，φ３０×５０ｍｍを用いた。

以下の参考例、実施例中記載の各機器データは以下の測定機器で測定した。
ＮＭＲスペクトル：日本電子ＪＮＭ−ＥＣＡ６００（６００ＭＨｚ）、日本電子ＮＭ−ＥＣＡ５００（５００ＭＨｚ）、ＶａｒｉａｎＵＮＩＴＹＮＯＶＡ３００（３００ＭＨｚ）、Ｖａｒｉａｎ社ＧＥＭＩＮＩ２０００／２００（２００ＭＨｚ）
ＭＳスペクトル：島津製作所ＬＣＭＳ−２０１０ＥＶあるいはｍｉｃｒｏｍａｓｓＰｌａｔｆｏｒｍＬＣ

以下の参考例、実施例において、高速液体クロマトグラフィーマススペクトル（ＬＣＭＳ）は以下の条件により測定した。
条件１
測定機器：ｍｉｃｒｏｍａｓｓＰｌａｔｆｏｒｍＬＣおよびＡｇｉｌｅｎｔＡｇｉｌｅｎｔ１１００
カラム：ＷａｔｅｒｓＳｕｎＦｉｒｅＣ１８，２．５μｍ，φ４．６ｘ５０ｍｍ
溶媒：Ａ液；０．１％トリフルオロ酢酸含有水、Ｂ液；０．１％トリフルオロ酢酸含有アセトニトリル
グラジエント：０分（Ａ液／Ｂ液＝９０／１０）、０．５分（Ａ液／Ｂ液＝９０／１０）、５．５分（Ａ液／Ｂ液＝２０／８０）、６．０分（Ａ液／Ｂ液＝１／９９）、６．３分（Ａ液／Ｂ液＝１／９９）
流速：１ｍＬ／ｍｉｎ、検出法：２５４ｎｍ
イオン化法：電子衝撃イオン化法ＥｌｅｃｔｒｏｎＳｐｒａｙＩｏｎｉｚａｔｉｏｎ：ＥＳＩ）
条件２−１
測定機械：Ａｇｉｌｅｎｔ２９００およびＡｇｉｌｅｎｔ６１５０
カラム：ＷａｔｅｒｓＡｃｑｕｉｔｙＣＳＨＣ１８，１．７μｍ，φ２．１ｘ５０ｍｍ
溶媒：Ａ液；０．１％ギ酸含有水、Ｂ液；０．１％ギ酸含有アセトニトリル
グラジエント：０分（Ａ液／Ｂ液＝８０／２０）、１．２−１．４分（Ａ液／Ｂ液＝１／９９）
流速：０．８ｍＬ／ｍｉｎ、検出法：２５４ｎｍ
条件２−２
測定機器、カラム、溶媒は条件２−１と同じ。
グラジエント、流速：０．８ｍＬ／ｍｉｎ、０ｍｉｎ（Ａ液／Ｂ液＝９５／５）、１．２０ｍｉｎ（Ａ液／Ｂ液＝５０／５０）、１．０ｍＬ／ｍｉｎ、１．３８ｍｉｎ（Ａ液／Ｂ液＝３／９７）
検出法：２５４ｎｍ

以下の実施例において、ラジオＨＰＬＣは以下の条件により測定した。
測定機械：ＬＣ−２０ＡＤ（島津製作所）、ＳＣＬ−１０Ａｖｐ（島津製作所）、ＳＰＤ−２０Ａ（島津製作所）、５２５ＴＲ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）
カラム：ＡｔｌａｎｔｉｓＴ３，３μｍ，φ４．６ｘ１５０ｍｍ（Ｗａｔｅｒｓ）

移動相は実施例ごとに溶媒の組成を変えて測定した。
実施例Ａ−３の化合物を分析した際の移動相：１０ｍｍｏｌ／Ｌ酢酸アンモニウム（ｐＨ７．０）／アセトニトリル（６５／３５、ｖ／ｖ）
実施例Ｂ−２の化合物を分析した際の移動相：１０ｍｍｏｌ／Ｌ酢酸アンモニウム（ｐＨ７．０）／アセトニトリル（７０／３０、ｖ／ｖ）
実施例Ｃ−２の化合物を分析した際の移動相：１０ｍｍｏｌ／Ｌ酢酸アンモニウム（ｐＨ７．０）／アセトニトリル（７５／２５、ｖ／ｖ）
流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ
検出波長：２５４ｎｍ

以下の実施例において[³Ｈ]標識体の質量分析は以下の条件により測定した。
測定機械：ＬＴＱＸＬ（サーモフィッシャーサイエンティフィック）
モード：ＥＳＩ（＋）
以下の参考例、実施例において、化合物名はＡＣＤ／Ｎａｍｅ（ＡＣＤ／Ｌａｂｓ１２．０１，ＡｄｖａｎｃｅｄＣｈｅｍｉｓｔｒｙＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔＩｎｃ．）により命名した。

本実施例中、以下の用語及び試薬は下記のように表記した。
ＡｃＯＫ（酢酸カリウム）、ＢＢｒ₃（三臭化ホウ素）、ＣＨＣｌ₃（クロロホルム）、ＤＭＦ（Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド）、ＥｔＯＡｃ（酢酸エチル）、ＥｔＯＨ（エタノール）、ＭｅＯＨ（メタノール）、Ｎａ₂ＳＯ₄（無水硫酸ナトリウム）、ＮａＨＣＯ₃（炭酸水素ナトリウム）、ＰｄＣｌ₂（ｄｐｐｆ）・ＣＨ₂Ｃｌ₂｛［１，１´−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウム（ＩＩ）ジクロリドジクロロメタン錯体（１：１）｝、ＴＦＡ（トリフルオロ酢酸）、ＴＨＦ（テトラヒドロフラン）。

・実施例Ａ−１：Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−［２−（３−メトキシフェニル）−６−［３−（モルホリン−４−イル）プロポキシ］−４−オキソピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−３（４Ｈ）−イル］アセトアミド（Ａ−１）の合成

（１）２−［６−ブロモ−２−（３−メトキシフェニル）−４−オキソ−１，４−ジヒドロピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−３（２Ｈ）−イル］−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルアセトアミド（Ａ−１−１）の合成

窒素気流下、２−アミノ−５−ブロモ−Ｎ−［２−（ｔｅｒｔ−ブチルアミノ）−２−オキソエチル］ニコチンアミド（２５．０ｇ）、３−メトキシベンズアルデヒド（３１．０ｇ）、酢酸（２２．８ｇ）のＥｔＯＨ（５００ｍＬ）懸濁液をディーン・スターク装置で脱水しながら５時間加熱還流した。放冷後、減圧下で反応溶媒を留去し、得られた残渣にＥｔＯＡｃを加え、生じた固体をろ取、乾燥し表題化合物（３３．４ｇ、無色固体）を得た。
MS (ESI neg.) m/z : 445([M-H]^-).

（２）２−［６−ブロモ−２−（３−メトキシフェニル）−４−オキソピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−３（４Ｈ）−イル］−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルアセトアミド（Ａ−１−２）の合成

窒素気流下、実施例Ａ−１（１）で得られた化合物Ａ−１−１（３３．０ｇ）、ＭｎＯ₂（３２．１ｇ）のＴＨＦ（５１２ｍＬ）、ＣＨＣｌ₃（１３０ｍＬ）懸濁液を５時間加熱還流した。熱時セライト（登録商標）を用いてろ過後、ＴＨＦ（６００ｍＬ）にて洗浄し、ろ液を減圧下で濃縮した。得られた残渣にＥｔＯＡｃを加え、生じた固体をろ取、乾燥し表題化合物（２８．７ｇ、無色固体）を得た。
MS (ESI pos.) m/z : 445([M+H]⁺).

（３）Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−［６−ヒドロキシ−２−（３−メトキシフェニル）−４−オキソピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−３（４Ｈ）−イル］アセトアミド（Ａ−１−３）の合成

窒素気流下、実施例Ａ−１（２）で得られた化合物Ａ−１−２（４．４５ｇ）、４，４，４’，４’，５，５，５’，５’−オクタメチル−２，２’−ビ−１，３，２−ジオキサボロラン（５．０８ｇ）、ＰｄＣｌ₂（ｄｐｐｆ）・ＣＨ₂Ｃｌ₂（４０８ｍｇ）及びＡｃＯＫ（２．９４ｇ）のＤＭＳＯ（４５ｍＬ）溶液を１００℃にて２時間加熱攪拌した。放冷後、水（２００ｍＬ）を加え、生じた固体をろ取、乾燥し固体（９．９１ｇ、茶褐色固体）を得た。得られた固体（９．９１ｇ）のＴＨＦ（２５ｍＬ）及びＥｔＯＨ（２５ｍＬ）溶液にＮａＨＣＯ₃水溶液（１．６８ｇ／水１５ｍＬ）を加えた後に氷冷し、反応液温度８℃以下を保ちながら、３０％過酸化水素水（３．４０ｍＬ）を加えた後、２時間攪拌した。反応液に亜硫酸ナトリウム水溶液（３．７８ｇ／水５０ｍＬ）を加えた後、１５分間攪拌した。ＣＨＣｌ₃（１００ｍＬ）、飽和食塩水（１００ｍＬ）を加え分液後、水層をＣＨＣｌ₃（５０ｍＬ）で２回抽出した。有機層をＮａ₂ＳＯ₄で乾燥後に乾燥剤をろ別し、ろ液を減圧下で濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＳＮＡＰＣａｒｔｒｉｄｇｅＨＰ−Ｓｐｈｅｒｅ、移動相：ＣＨＣｌ₃／ＭｅＯＨ＝１００／０〜９０／１０；ｖ／ｖ）にて精製し表題化合物（３．６９ｇ、灰色固体）を得た。
MS (ESI pos.) m/z : 383([M+H]⁺).

（４）Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−［２−（３−メトキシフェニル）−６−［３−（モルホリン−４−イル）プロポキシ］−４−オキソピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−３（４Ｈ）−イル］アセトアミド（Ａ−１）の合成

実施例Ａ−１（３）で得られた化合物Ａ−１−３（３．６５ｇ）、４−（３−クロロプロピル）モルホリン塩酸塩（２．２９ｇ）、炭酸セシウム（１５．６ｇ）及びヨウ化カリウム（０．７９２ｇ）のＤＭＦ（３６ｍＬ）懸濁液を外温８５℃で４時間攪拌した。反応液を放冷後、飽和ＮａＨＣＯ₃水溶液（１２０ｍＬ）、ＥｔＯＡｃ（１２０ｍＬ）及びトルエン（２０ｍＬ）を加え分液後、有機層を飽和食塩水（１２０ｍＬ）で洗浄した。水層をＥｔＯＡｃ（１２０ｍＬ）及びトルエン（２０ｍＬ）で２回抽出し、有機層を合わせてＮａ₂ＳＯ₄で乾燥した。乾燥剤をろ別後、ろ液を減圧下で濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＳＮＡＰＣａｒｔｒｉｄｇｅＨＰ−Ｓｐｈｅｒｅ、移動相：ＣＨＣｌ₃／ＭｅＯＨ＝９９／１〜９０／１０；ｖ／ｖ）にて精製し表題化合物（４．５５ｇ、褐色アモルファス）を得た。
MS (ESI pos.) m/z : 510([M+H]⁺).
¹H-NMR (600 MHz, CDCl₃) δ (ppm) ; 1.35 (9 H, s), 2.01 - 2.08 (2 H, m), 2.48 (4 H, br. s.), 2.55 (2 H, t, J=7.0 Hz), 3.73 (4 H, t, J=4.5 Hz), 3.83 (3 H, s), 4.19 (2 H, t, J=6.4 Hz), 4.52 (2 H, s), 5.45 (1 H, s), 7.02 - 7.05 (1 H, m), 7.23 (1 H, d, J=7.4 Hz), 7.25 - 7.26 (1 H, m), 7.37 (1 H, t, J=7.8 Hz), 7.95 (1 H, d, J=3.3 Hz), 8.72 (1 H, d, J=3.3 Hz).

・実施例Ａ−２：Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−［２−（３−ヒドロキシフェニル）−６−［３−（モルホリン−４−イル）プロポキシ］−４−オキソピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−３（４Ｈ）−イル］アセトアミドの合成

実施例Ａ−１（４）で得られた化合物Ａ−１（１．００ｇ）をＣＨＣｌ₃（２０ｍＬ）に溶解し、氷冷下でＢＢｒ₃（１ｍｍｏｌ／Ｌジクロロメタン溶液、９．８１ｍＬ）を滴下し室温で２４時間攪拌した。反応液に氷冷下でＭｅＯＨを加えた後に、ＣＨＣｌ₃（８０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ₃水溶液（１００ｍＬ）を加え分液後、飽和食塩水（１００ｍＬ）で洗浄した。水層をＣＨＣｌ₃（１００ｍＬ）で２回抽出し有機層を合わせてＮａ₂ＳＯ₄で乾燥した。乾燥剤をろ別後、ろ液を減圧下で濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＳＮＡＰＣａｒｔｒｉｄｇｅＫＰ-ＮＨ、移動相：ＣＨＣｌ₃／ＭｅＯＨ＝１００／０〜９０／１０；ｖ／ｖ）にて精製した。得られた粗精製物にＥｔＯＡｃ（１．５ｍＬ）及びｎ−ヘキサン（１．５ｍＬ）を加え、１０分間加熱還流後に、室温まで冷却し、１２時間攪拌した。固体をろ取、乾燥し、表題化合物（４００ｍｇ、淡褐色固体）を得た。
MS (ESI pos.) m/z : 496([M+H]⁺).
¹H-NMR (600 MHz, CDCl₃) δ (ppm) ; 1.32 (9 H, s), 2.01 - 2.07 (2 H, m), 2.42 - 2.51 (4 H, m), 2.54 (2 H, t, J=6.8 Hz), 3.73 (4 H, t, J=4.3 Hz), 4.15 - 4.20 (2 H, m), 4.51 (2 H, s), 5.48 (1 H, s), 6.89 - 6.93 (1 H, m), 7.06 (1 H, d, J=7.4 Hz), 7.12 - 7.15 (1 H, m), 7.24 (1 H, t, J=7.8 Hz), 7.93 - 7.97 (1 H, m), 8.39 (1 H, br. s.), 8.66 (1 H, d, J=3.3 Hz).

・実施例Ａａ−１：Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−［２−（３−メトキシフェニル）−６−［３−（モルホリン−４−イル）プロポキシ］−４−オキソピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−３（４Ｈ）−イル］アセトアミド（Ａ−１）の合成

実施例Ａ−２で得られた化合物Ａ−２（３０ｍｇ）、４−ニトロベンゼンスルホン酸メチル（１３．１ｍｇ）及び炭酸セシウム（３０ｍｇ）のＤＭＦ（６００μＬ）懸濁液を室温で１６時間攪拌した。不溶物をろ別後、逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィー（移動相：０．１％ＴＦＡＭｅＣＮ／Ｈ₂Ｏ＝１０／９０〜９０／１０；ｖ／ｖ）にて精製した。フラクションを飽和ＮａＨＣＯ₃水溶液にて中和し、ＣＨＣｌ₃にて抽出し、Ｎａ₂ＳＯ₄乾燥後、乾燥剤を濾別し、溶媒を減圧下留去し、表題化合物（６．４ｍｇ、淡褐色アモルファス）を得た。
MS (ESI pos.) m/z : 510([M+H]⁺).
¹H-NMR (600 MHz, CDCl₃) δ (ppm) ; 1.35 (9 H, s), 2.02 - 2.08 (2 H, m), 2.48 (4 H, br. s.), 2.53 - 2.58 (2 H, m), 3.72 - 3.76 (4 H, m), 3.83 (3 H, s), 4.19 (2 H, t, J=6.4 Hz), 4.52 (2 H, s), 5.43 (1 H, s), 7.03 - 7.06 (1 H, m), 7.22 - 7.24 (1 H, m), 7.25 - 7.26 (1 H, m), 7.37 (1 H, t, J=8.1 Hz), 7.95 (1 H, d, J=3.3 Hz), 8.72 (1 H, d, J=3.3 Hz).

・実施例Ａ−３：Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−［２−｛３−［（³Ｈ₃）メチルオキシ］フェニル｝−６−［３−（モルホリン−４−イル）プロポキシ］−４−オキソピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−３（４Ｈ）−イル］アセトアミド（Ａ−３）の合成

実施例Ａａ−１と同様の手法にて、４−ニトロベンゼンスルホン酸（³Ｈ₃）メチルを用いて、化合物Ａ−２から表題化合物を合成し（合成数量３４７ＭＢｑ、比放射能３．１７ＴＢｑ／ｍｍｏｌ）、３７ＭＢｑ／ｍＬのエタノール溶液を調製した。
Radio-HPLC 保持時間：9.36min
MS (ESI pos.) m/z : 516([M+H]⁺).

・実施例Ｂ−１：Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−［２−（６−ヒドロキシピリジン−２−イル）−６−［３−（モルホリン−４−イル）プロポキシ］−４−オキソピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−３（４Ｈ）−イル］アセトアミド（Ｂ−１）の合成

（１）２−［６−ブロモ−２−（６−メトキシピリジン−２−イル）−４−オキソ−１，４−ジヒドロピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−３（２Ｈ）−イル］−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルアセトアミド（Ｂ−１−１）の合成

実施例Ａ−１（１）と同様の手法にて、６−メトキシピリジン−２−カルバルデヒド（５．０ｇ）から表題化合物（８．２８ｇ）を得た。

（２）２−［６−ブロモ−２−（６−メトキシピリジン−２−イル）−４−オキソピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−３（４Ｈ）−イル］−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルアセトアミド（Ｂ−１−２）の合成

実施例Ａ−１（２）と同様の手法にて、実施例Ｂ−１（１）で得られた化合物Ｂ−１−１（８．２８ｇ）から表題化合物（６．８６ｇ、無色固体）を得た。
MS (ESI pos.) m/z : 446([M+H]⁺).

（３）Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−［６−ヒドロキシ−２−（６−メトキシピリジン−２−イル）−４−オキソピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−３（４Ｈ）−イル］アセトアミド（Ｂ−１−３）の合成

実施例Ａ−１（３）と同様の手法にて、実施例Ｂ−１（２）で得られた化合物Ｂ−１−２（６．２２ｇ）から表題化合物（３．８５ｇ、灰色固体）を得た。
MS (ESI pos.) m/z : 384([M+H]⁺).

（４）Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−［２−（６−メトキシピリジン−２−イル）−６−［３−（モルホリン−４−イル）プロポキシ］−４−オキソピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−３（４Ｈ）−イル］アセトアミド（Ｂ−１−４）の合成

実施例Ａ−１（４）と同様の手法にて、実施例Ｂ−１（３）で得られた化合物Ｂ−１−３（１．８０ｇ）から表題化合物（１．３１ｇ、黄色アモルファス）を得た。
MS (ESI pos.) m/z : 511([M+H]⁺).
¹H-NMR (600 MHz, CDCl₃) δ (ppm) ; 1.24 (9 H, s), 2.01 - 2.09 (2 H, m), 2.48 (4 H, br. s.), 2.55 (2 H, t, J=7.0 Hz), 3.70 - 3.77 (4 H, m), 3.94 (3 H, s), 4.20 (2 H, t, J=6.2 Hz), 5.08 (2 H, s), 5.39 (1 H, s), 6.87 (1 H, d, J=8.3 Hz), 7.67 - 7.71 (1 H, m), 7.72 - 7.77 (1 H, m), 7.96 (1 H, d, J=3.3 Hz), 8.73 (1 H, d, J=3.3 Hz).

（５）Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−［２−（６−ヒドロキシピリジン−２−イル）−６−［３−（モルホリン−４−イル）プロポキシ］−４−オキソピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−３（４Ｈ）−イル］アセトアミド（Ｂ−１）の合成

実施例Ｂ−１（４）で得られた化合物Ｂ−１−４（７００ｍｇ）、ヨウ化ナトリウム（１．４４ｇ）をアセトニトリル（２０ｍＬ）に懸濁し、クロロトリメチルシラン（１．２１ｍＬ）を加えた。１５分間室温で攪拌後、外温８５℃で１時間攪拌した。反応液を放冷後、氷冷下で水（２０ｍＬ）を加えた後、飽和ＮａＨＣＯ₃水溶液（１００ｍＬ）及びＣＨＣｌ₃（１００ｍＬ）を加え分液後、飽和食塩水（１００ｍＬ）で洗浄した。水層をＣＨＣｌ₃（１００ｍＬ）で３回抽出し、有機層を合わせてＮａ₂ＳＯ₄乾燥後、乾燥剤を濾別し、溶媒を減圧下留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＳＮＡＰＣａｒｔｒｉｄｇｅＨＰ-Ｓｐｈｅｒｅ、移動相：ＣＨＣｌ₃／ＭｅＯＨ＝９８／２〜８５／１５；ｖ／ｖ）にて精製した。得られた粗精製物にＥｔＯＡｃ（６ｍＬ）及びｎ−ヘキサン（３ｍＬ）を加え、析出物をろ取、乾燥し、表題化合物（２９０ｍｇ、淡褐色アモルファス）を得た。
MS (ESI pos.) m/z : 497([M+H]⁺).
¹H-NMR (600 MHz, CDCl₃) δ (ppm) ; 1.41 (9 H, s), 1.99 - 2.09 (2 H, m), 2.48 (4 H, br. s.), 2.55 (2 H, t, J=6.8 Hz), 3.69 - 3.76 (4 H, m), 4.20 (2 H, t, J=6.2 Hz), 4.61 (2 H, s), 6.09 (1 H, s), 6.73 (1 H, d, J=8.3 Hz), 6.96 (1 H, d, J=6.6 Hz), 7.48 - 7.54 (1 H, m), 7.87 - 7.93 (1 H, m), 8.74 (1 H, d, J=3.3 Hz), 10.54 - 11.09 (1 H, m).

・参考例Ｂａ−１：Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−［２−（６−メトキシピリジン−２−イル）−６−［３−（モルホリン−４−イル）プロポキシ］−４−オキソピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−３（４Ｈ）−イル］アセトアミド（Ｂ−１−４）の合成

実施例Ｂ−１で得られた化合物Ｂ−１（３０ｍｇ）、４−ニトロベンゼンスルホン酸メチル（１３．１ｍｇ）及び炭酸セシウム（３０ｍｇ）のＤＭＦ（６００μＬ）懸濁液を室温で１６時間攪拌した。不溶物をろ別後、逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィー（移動相：０．１％ＴＦＡＭｅＣＮ／Ｈ₂Ｏ＝１０／９０〜９０／１０；ｖ／ｖ）にて精製した。フラクションを飽和ＮａＨＣＯ₃水溶液にて中和し、ＣＨＣｌ₃にて抽出し、Ｎａ₂ＳＯ₄乾燥後、乾燥剤を濾別し、溶媒を減圧下留去し、表題化合物（１１ｍｇ、淡褐色アモルファス）を得た。
MS (ESI pos.) m/z : 511([M+H]⁺).
¹H-NMR (600 MHz, CDCl₃) δ (ppm) ; 1.24 (9 H, s), 2.02 - 2.09 (2 H, m), 2.48 (4 H, br. s.), 2.53 - 2.58 (2 H, m), 3.71 - 3.76 (4 H, m), 3.94 (3 H, s), 4.20 (2 H, t, J=6.4 Hz), 5.08 (2 H, s), 5.39 (1 H, s), 6.88 (1 H, dd, J=8.3, 0.8 Hz), 7.69 (1 H, dd, J=7.4, 0.8 Hz), 7.75 (1 H, dd, J=8.3, 7.4 Hz), 7.96 (1 H, d, J=2.9 Hz), 8.73 (1 H, d, J=3.3 Hz).

・実施例Ｂ−２：Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−［２−｛６−［（³Ｈ₃）メチルオキシ］ピリジン−２−イル｝−６−［３−（モルホリン−４−イル）プロポキシ］−４−オキソピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−３（４Ｈ）−イル］アセトアミド（Ｂ−２）の合成

参考例Ｂａ−１と同様の手法にて、４−ニトロベンゼンスルホン酸（³Ｈ₃）メチルを用いて、化合物Ｂ−１から表題化合物を合成し（合成数量２３５ＭＢｑ、比放射能３．１５ＴＢｑ／ｍｍｏｌ）、１１．５ＭＢｑ／ｍＬのエタノール溶液を調製した。
Radio-HPLC 保持時間：15.81min
MS (ESI pos.) m/z : 517([M+H]⁺).

・実施例Ｃ−１：２−［２−（６−ヒドロキシピリジン−２−イル）−６−［３−（モルホリン−４−イル）プロポキシ］−４−オキソピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−３（４Ｈ）−イル］−Ｎ−イソプロピルアセトアミド（Ｃ−１）の合成

（１）２−［６−ブロモ−２−（６−メトキシピリジン−２−イル）−４−オキソ−１，４−ジヒドロピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−３（２Ｈ）−イル］−Ｎ−イソプロピルアセトアミド（Ｃ−１−１）の合成

実施例Ａ−１（１）と同様の手法にて、２−アミノ−５−ブロモ−Ｎ−｛２−［（１−メチルエチル）アミノ］−２−オキソエチル｝ピリジン−３−カルボキサミド（３１．０ｇ）及び６−メトキシピリジン−２−カルバルデヒド（４０．５ｇ）から表題化合物（３９．４ｇ、淡褐色固体）を得た。

（２）２−［６−ブロモ−２−（６−メトキシピリジン−２−イル）−４−オキソピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−３（４Ｈ）−イル］−Ｎ−イソプロピルアセトアミド（Ｃ−１−２）の合成

実施例Ａ−１（２）と同様の手法にて、実施例Ｃ−１（１）で得られた化合物Ｃ−１−１（３９．０ｇ）から表題化合物（３１．４ｇ、無色固体）を得た。
MS (ESI pos.) m/z : 432([M+H]⁺).

（３）２−［６−ヒドロキシ−２−（６−メトキシピリジン−２−イル）−４−オキソピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−３（４Ｈ）−イル］−Ｎ−イソプロピルアセトアミド（Ｃ−１−３）の合成

実施例Ａ−１（３）と同様の手法にて、実施例Ｃ−１（２）で得られた化合物Ｃ−１−２（３０．０ｇ）から表題化合物（３１．３ｇ、褐色固体）を得た。
MS (ESI pos.) m/z : 370([M+H]⁺).

（４）Ｎ−イソプロピル−２−［２−（６−メトキシピリジン−２−イル）−６−［３−（モルホリン−４−イル）プロポキシ］−４−オキソピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−３（４Ｈ）−イル］アセトアミド（Ｃ−１−４）の合成

実施例Ａ−１（４）と同様の手法にて、実施例Ｃ−１（３）で得られた化合物Ｃ−１−３（３．７０ｇ）から表題化合物（１．７３ｇ、淡褐色固体）を得た。
MS (ESI pos.) m/z : 497([M+H]⁺).
¹H-NMR (600 MHz, CDCl₃) δ (ppm) ; 1.09 (6 H, d, J=6.6 Hz), 2.00 - 2.10 (2 H, m), 2.43 - 2.51 (4 H, m), 2.55 (2 H, t, J=7.2 Hz), 3.70 - 3.77 (4 H, m), 3.93 (3 H, s), 3.95 - 4.04 (1 H, m), 4.20 (2 H, t, J=6.4 Hz), 5.06 (2 H, s), 5.45 (1 H, d, J=7.8 Hz), 6.88 (1 H, d, J=8.3 Hz), 7.70 (1 H, d, J=7.4 Hz), 7.73 - 7.77 (1 H, m), 7.97 (1 H, d, J=3.3 Hz), 8.74 (1 H, d, J=2.9 Hz).

（４）２−［２−（６−ヒドロキシピリジン−２−イル）−６−［３−（モルホリン−４−イル）プロポキシ］−４−オキソピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−３（４Ｈ）−イル］−Ｎ−イソプロピルアセトアミド（Ｃ−１）の合成

実施例Ｂ−１（５）と同様の手法にて、実施例Ｃ−１（４）で得られた化合物Ｃ−１−４（７００ｍｇ）を用いて表題化合物（６００ｍｇ、淡黄色固体）を得た。
MS (ESI pos.) m/z : 483([M+H]⁺).
¹H-NMR (600 MHz, CDCl₃) δ (ppm) ; 1.23 (6 H, d, J=6.2 Hz), 2.03 - 2.11 (2 H, m), 2.44 - 2.61 (6 H, m), 3.74 (4 H, br. s.), 4.16 - 4.23 (3 H, m), 4.63 (2 H, s), 6.08 - 6.13 (1 H, m), 6.74 (1 H, d, J=8.7 Hz), 6.99 (1 H, d, J=6.6 Hz), 7.52 (1 H, dd, J=9.1, 7.0 Hz), 7.86 - 7.94 (1 H, m), 8.72 - 8.81 (1 H, m), 10.69 - 11.12 (1 H, m).

・参考例Ｃａ−１：Ｎ−イソプロピル−２−［２−（６−メトキシピリジン−２−イル）−６−［３−（モルホリン−４−イル）プロポキシ］−４−オキソピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−３（４Ｈ）−イル］アセトアミド（Ｃ−１−４）の合成

実施例Ｃ−１で得られた化合物Ｃ−１（３０ｍｇ）、４−ニトロベンゼンスルホン酸メチル（１３．５ｍｇ）及び炭酸セシウム（３０ｍｇ）のＤＭＦ（６００μＬ）懸濁液を室温で１６時間攪拌した。不溶物をろ別後、逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィー（移動相：０．１％ＴＦＡＭｅＣＮ／Ｈ₂Ｏ＝１０／９０〜９０／１０；ｖ／ｖ）にて精製した。フラクションを飽和ＮａＨＣＯ₃水溶液にて中和し、ＣＨＣｌ₃にて抽出し、Ｎａ₂ＳＯ₄乾燥後、乾燥剤を濾別し、溶媒を減圧下留去し、表題化合物（１１ｍｇ、淡褐色固体）を得た。
MS (ESI pos.) m/z : 497([M+H]⁺).
¹H-NMR (600 MHz, CDCl₃) δ (ppm) ; 1.09 (6 H, d, J=6.6 Hz), 2.00 - 2.11 (2 H, m), 2.48 (4 H, br. s.), 2.55 (2 H, t, J=7.0 Hz), 3.71 - 3.76 (4 H, m), 3.93 (3 H, s), 3.94 - 4.04 (1 H, m), 4.20 (2 H, t, J=6.2 Hz), 5.06 (2 H, s), 5.49 (1 H, d, J=7.4 Hz), 6.88 (1 H, dd, J=8.3, 0.8 Hz), 7.70 (1 H, d, J=7.0 Hz), 7.73 - 7.78 (1 H, m), 7.93 - 7.99 (1 H, m), 8.74 (1 H, d, J=2.9 Hz).

・実施例Ｃ−２：Ｎ−イソプロピル−２−［２−｛６−［（³Ｈ₃）メチルオキシ］ピリジン−２−イル｝−６−［３−（モルホリン−４−イル）プロポキシ］−４−オキソピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−３（４Ｈ）−イル］アセトアミド（Ｃ−２）の合成

参考例Ｃａ−１と同様の手法にて、４−ニトロベンゼンスルホン酸（³Ｈ₃）メチルを用いて、化合物Ｃ−１から表題化合物を合成し（合成数量３５７ＭＢｑ、比放射能３．１６ＴＢｑ／ｍｍｏｌ）、３７．０ＭＢｑ／ｍＬのエタノール溶液を調製した。
Radio-HPLC 保持時間：15.07min
MS (ESI pos.) m/z : 503([M+H]⁺).

試験例１
・Ｖ１ｂ受容体結合試験
ヒトＶ１ｂ受容体を一過性に発現させた２９３ＦＴ細胞を回収し、１５ｍｍｏｌ／Ｌトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．４、２ｍｍｏｌ／Ｌ塩化マグネシウム、０．３ｍｍｏｌ／Ｌエチレンジアミン四酢酸、１ｍｍｏｌ／Ｌグリコールエーテルジアミン四酢酸を含む）中でホモジナイズした。得られたホモジネートを５０，０００×ｇ、４℃で２０分間遠心分離し、沈殿物を７５ｍｍｏｌ／Ｌトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．４、１２．５ｍｍｏｌ／Ｌ塩化マグネシウム、０．３ｍｍｏｌ／Ｌエチレンジアミン四酢酸、１ｍｍｏｌ／Ｌグリコールエーテルジアミン四酢酸、２５０ｍｍｏｌ／Ｌショ糖を含む）に再懸濁して粗膜標品とし、結合試験実施前まで−８０℃にて保存した。結合試験の際は、この粗膜標品を５０ｍｍｏｌ／Ｌトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．４、１０ｍｍｏｌ／Ｌ塩化マグネシウム、０．１％ウシ血清アルブミンを含む）にて希釈し、各被検化合物、及び［³Ｈ］ＡＶＰ（最終濃度０．４〜１ｎｍｏｌ／Ｌ）と混合し、室温で６０分間インキュベーションした。被検化合物はＤＭＳＯにて段階的に希釈し、混合時の被検化合物の最終濃度は、０．０１ｎｍｏｌ／Ｌ〜１μｍｏｌ／Ｌである。インキュベーション後、混合溶液を０．３％ポリエチレンイミンを浸透させたＧＦ／Ｃフィルターへと吸引濾過した。このＧＦ／Ｃフィルターを乾燥させてシンチレーターを加えた後、トップカウント（パーキンエルマー社）を用いてフィルター上に残存する放射能を測定した。１０μｍｏｌ／Ｌの未標識ＡＶＰ存在下での放射能を０％とし、未標識ＡＶＰ非存在下での放射能を１００％とした。各濃度の被検化合物存在下での放射能より用量反応曲線を作成し、被検化合物の５０％阻害濃度（ＩＣ₅₀値）を算出した。化合物Ａ−１、Ｂ−１−４及びＣ−１−４のＩＣ₅₀値を表１に示す。

試験例２
・ラット下垂体前葉膜結合試験（化合物Ａ−３結合試験）
ラット下垂体前葉を摘出し、湿重量に対して１０倍量の１０ｍｍｏｌ／ＬＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．４、１ｍｍｏｌ／Ｌエチレンジアミン四酢酸、２５０ｍｍｏｌ／Ｌショ糖、０．１ｍｍｏｌ／Ｌフッ化フェニルメタンスルホニル、プロテアーゼインヒビターを含む）中でホモジナイズした。得られたホモジネートを１，０００×ｇ、４℃で１０分間遠心分離し、得られた上清をさらに５０，０００×ｇ、４℃で２０分間遠心分離した。得られた沈殿物を１０ｍｍｏｌ／ＬＨＥＰＥＳ緩衝液に懸濁し、粗膜標品として結合試験実施前まで−８０℃にて保存した。結合試験の際は、この粗膜標品を５０ｍｍｏｌ／Ｌトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．４、１０ｍｍｏｌ／Ｌ塩化マグネシウム、０．１％ウシ血清アルブミンを含む）にて希釈し、化合物Ａ-３（最終濃度０．１７〜９．６ｎｍｏｌ／Ｌ）と混合し、室温で６０分間インキュベーションした。インキュベーション後、混合溶液を０．３％ポリエチレンイミンを浸透させたＧＦ／Ｃフィルターへと吸引濾過し、冷蔵した５０ｍｍｏｌ／Ｌトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．４、１０ｍｍｏｌ／Ｌ塩化マグネシウムを含む）で洗浄した。このＧＦ／Ｃフィルターを乾燥させてシンチレーターを加えた後、トップカウントを用いてフィルター上に残存する放射能を測定した。１０μｍｏｌ／ＬのＡＶＰ存在下での放射能を非特異結合とし、ＡＶＰ非存在下での放射能（総結合）との差分を特異結合とした。化合物Ａ−３の結合試験時の最終放射能濃度と特異結合の関係をプロットした結合飽和曲線より、結合解離定数を算出した。結果を図１に示す。

図１に示した通り、化合物Ａ−３の低濃度側では濃度依存的に特異結合が増加し、高濃度側では特異結合が飽和した。結合解離定数は０．４１ｎｍｏｌ／Ｌであった。

試験例３
・in vivoラット下垂体前葉結合試験（化合物Ａ−３結合試験）
ラットに化合物Ａ-３（０．９ｎｍｏｌ／ｋｇ、３．０ＭＢｑ／ｋｇ）を尾静脈内投与し、投与３０分後に下垂体前葉および眼球を摘出した。摘出した組織を１ｍＬの氷冷したトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．４、１０ｍｍｏｌ／Ｌ塩化マグネシウムを含む）中でホモジナイズし、０．３％ポリエチレンイミンを浸透させたＧＦ／Ｂフィルターへと速やかに吸引濾過し、氷冷したトリス塩酸緩衝液で洗浄した。このＧＦ／Ｂフィルターを乾燥させてシンチレーターを加えた後、液体シンチレーションカウンターを用いて放射能を測定した。放射能濃度はフィルトレーションした組織ホモジネート中のタンパク質濃度により補正した。結果を図２に示す。

ブロッキング試験として、Ｖ１ｂ受容体に結合親和性を有する２−［２−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−６−［３−（モルホリン−４−イル）プロポキシ］−４−オキソピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−３（４Ｈ）−イル］−Ｎ−イソプロピルアセトアミド（ＷＯ２００９/０１７２３６記載の実施例Ａ−２５０）を１ｍｇ／ｋｇにて尾静脈内投与し、５分後に化合物Ａ−３を尾静脈内投与し、上記と同様の操作を行った。結果を図２に示す。

図２に示した通り、Ｖ１ｂ受容体が高発現している下垂体前葉では放射能濃度の上昇が認められ、Ｖ１ｂ受容体の発現のない眼球では放射能濃度が認められなかった（ブロッキングなし）。また、ブロッキング試験では、下垂体前葉での放射能濃度の上昇が完全に抑制された。

本発明の非標識体はＶ１ｂ受容体に特異的な結合阻害活性を有し、薬理、薬物動態及び安全性の研究のためのツールとして有用である。また、その[³Ｈ]標識体は、生体内に投与した後に代謝を受けずに安定であり、標的臓器である下垂体への十分な量の移行が認められ、薬理、薬物動態及び安全性の研究のためのトレーサーとして有用である。さらに、本発明の製造方法は、当該[³Ｈ]標識体の効率的な供給を可能とし、当該[³Ｈ]標識体合成のための前駆体は、そのような効率的製造方法を可能とし、有用である。

Claims

式（Ｉ）
（式中、
Ｘは、窒素原子、又は式ＣＨを示し、
Ｒ¹は、Ｃ_1-5アルキル（該Ｃ_1-5アルキルはヒドロキシ、ハロゲン原子、シアノ、Ｃ_3-7シクロアルキル、及びＣ_1-5アルコキシから選ばれる同一又は異なった１〜３個の置換基で置換されても良い）、
Ｒ²は、水素原子、又はＣ_1-5アルキル（該Ｃ_1-5アルキルは少なくとも１個の水素原子が³Ｈである）を示す。）
で表わされる化合物又はその医薬上許容される塩。
上記式（Ｉ）において、
Ｒ²が、Ｃ_1-5アルキル（該Ｃ_1-5アルキルは少なくとも１個の水素原子が³Ｈである）である請求項１に記載の化合物又はその医薬上許容される塩。
上記式（Ｉ）において、
Ｒ¹が、Ｃ_1-5アルキルであり、
Ｒ²が、Ｃ_1-5アルキル（該Ｃ_1-5アルキルは、少なくとも１個の水素原子が³Ｈである）である請求項２に記載の化合物又はその医薬上許容される塩。
上記式（Ｉ）において、
Ｒ²が、メチル（該メチルは、少なくとも１個の水素原子が³Ｈである）である請求項２又は３いずれかに記載の化合物又はその医薬上許容される塩。
上記式（Ｉ）において、
Ｒ¹が、ｔｅｒｔ−ブチルである請求項２〜４いずれか１項に記載の化合物又はその医薬上許容される塩。
上記式（Ｉ）において、
Ｘが、式ＣＨであり、
Ｒ¹が、ｔｅｒｔ−ブチルである請求項２〜５いずれか１項に記載の化合物又はその医薬上許容される塩。
請求項２〜６いずれか１項に記載の化合物又はその医薬上許容される塩を含有する、Ｖ１ｂ受容体標識剤。
請求項２〜６いずれか１項に記載の化合物又はその医薬上許容される塩を含有する、医薬組成物。
上記式（Ｉ）において、
Ｒ¹が、Ｃ_1-5アルキルであり、
Ｒ²が、水素原子である請求項１に記載の化合物又はその医薬上許容される塩。
式（ＩＩ）
で表わされる化合物又はその医薬上許容される塩。
請求項２〜６のいずれか１項に記載の化合物又はその医薬上許容される塩の製造方法であって、式（ＩＩＩ）：
（式中、Ｒ¹、Ｘは上記で定義した通りである）で表される化合物と、式Ｒ^２−Ｌ^１（Ｒ²は上記で定義した通りであり、Ｌ¹は脱離基である）で表される化合物とを、塩基及び溶媒の存在下で反応させることを含む方法。
Ｌ^１が４−ニトロベンゼンスルホニルオキシ基、ｐ−トルエンスルホニルオキシ基、メタンスルホニルオキシ基、又はハロゲン原子である、請求項１１に記載の方法。
塩基が、炭酸カリウム、炭酸セシウム、トリエチルアミン、又はジイソプロピルエチルアミンである、請求項１１又は１２に記載の方法。
溶媒が、テトラヒドロフラン、アセトニトリル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、又はジメチルスルホキシドである、請求項１１〜１３のいずれか１項に記載の方法。