JPWO2013151066A1 - アナライトの検出または定量方法、アナライトを検出または定量するためのキット、およびアナライトを検出または定量するためのラテラルフロー型クロマト法用テストストリップ - Google Patents
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Abstract
Description
「2ステップ型」のイムノクロマトグラフ法では、まず、アナライト(たとえば抗原)に、そのアナライトと特異的に結合し、蛍光体で標識化されたリガンド(たとえば前記抗原に対する抗体)を接触させて複合体を形成する。次いで、形成された複合体を、移動相として、テストストリップに添加し、クロマトグラフィーの原理によりメンブレンに、展開させ、メンブレン上の反応部で捕捉リガンド(たとえば前記抗原に対する第二抗体)により前記複合体を捕捉した後、蛍光体の励起光を照射して、蛍光体から発せられるシグナルを検出して、試料中のアナライトを定性的ないし定量的に分析する。
一方、「1ステップ型」のイムノクロマトグラフ法では、「2ステップ型」のイムノクロマトグラフ法とは異なって、テストストリップに供する前に、予め、被検出物質に蛍光体で標識化されたリガンドを接触させる工程を必要としないために、「2ステップ型」のイムノクロマトグラフ法と比べて、より簡便にアナライトの検出や定量が可能である。
特許文献2では、検体(試料)に含まれる少なくとも2種の検出対象物(アナライト)を一度で検出又は定量できるテストストリップが開示されている。かかるテストストリップは、「試料添加用部材、第1の検出対象物に対する標識粒子が固定されたイムノクロマト法用コンジュゲートパッド、前記第1の検出対象物に対する標識粒子が流れる方向に対して、第1の検出対象物を検出するための抗体固定化部及び第1の検出対象物に対する標識粒子を捕捉するための抗体固定化部を順次設けた、メンブレン、第2の検出対象物に対する標識粒子が固定化されたイムノクロマト法用コンジュゲートパッド、第2の検出対象物を検出するための抗体固定化部を有するメンブレン、及び吸収パッドをこの順に直列連結して有する」ものである(請求項1等)。
メンブレンと当該メンブレンに、アナライトと特異的に結合する捕捉リガンドが固定されてなる検出部を含むラテラルフロー型クロマト用テストストリップを用いて、試料中に含まれるアナライトを検出または定量する方法であって、
下記工程(i)〜(iii)を含むアナライトの検出または定量方法。
工程(i):試料に含まれるアナライトを、アナライトに特異的に結合するリガンド(1)を600nm以上800nm以下の波長を有する光で励起されて蛍光を生じる蛍光体(1)で標識化してなる標識化リガンド(1)に接触させる工程
工程(ii):前記検出部にて、工程(i)において形成された、アナライトと標識化リガンドとを含む複合体(A)を、捕捉リガンドに接触させる工程
工程(iii):テストストリップに、複合体(A)に含まれる蛍光体(1)の励起光として、600nm以上800nm以下の波長を有する光を照射し、蛍光体(1)の蛍光を生じさせ、該蛍光の蛍光強度を測定する工程
ラテラルフロー型クロマト用テストストリップを用いて、試料中に含まれるアナライトを検出または定量するためのキットであって、
メンブレンと当該メンブレンに、前記アナライトと特異的に結合する捕捉リガンドが固定されてなる検出部を含むラテラルフロー型クロマト用テストストリップと、
前記アナライトに特異的に結合するリガンド(1)を600nm以上800nm以下の波長を有する光で励起されて蛍光を生じる蛍光体(1)で標識化してなる標識化リガンド(1)を含む検出試薬と、を含む。
また、上述した目的のうち少なくとも1つを実現するために、本発明の一側面を反映したラテラルフロー型クロマト用テストストリップは、以下の構成を有する。
試料中に含まれるアナライトを検出または定量するためのラテラルフロー型クロマト用テストストリップであって、
メンブレンと、前記試料が展開する方向において、当該メンブレンに、
前記アナライトと特異的に結合する捕捉リガンド(2)が固定されてなる検出部と、
当該検出部よりも上流側に、前記アナライトに特異的に結合するリガンド(1)を600nm以上800nm以下の波長を有する光で励起されて蛍光を生じる蛍光体(1)で標識化してなる標識化リガンド(1)が含まれる反応部と、
を含む。
工程(ii):前記検出部にて、工程(i)において形成された、アナライトと標識化リガンドとを含む複合体(A)を、捕捉リガンドに接触させる工程
工程(iii):テストストリップに、複合体(A)に含まれる蛍光体(1)の励起光として、600nm以上800nm以下の波長を有する光を照射し、蛍光体(1)の蛍光を生じさせ、該蛍光の蛍光強度を測定する工程
1.試料およびアナライト
試料は、アナライトとして、蛋白質、糖類、核酸、各種生理活性物質を含むものである限り特に限定されるものではない。たとえば、目的のアナライトを含む生体試料(すなわち、全血、血清、血漿、尿、唾液、喀痰、鼻腔又は咽頭拭い液、髄液、羊水、乳頭分泌液、涙、汗、皮膚からの浸出液、組織や細胞および便からの抽出液等)や食品の抽出液等が挙げられる。必要に応じて、標識化リガンド(1)および捕捉リガンド(2)とアナライトとの特異的な結合反応が生じやすくするために、試料に含まれるアナライトを、標識化リガンド(1)に接触させる工程(工程(i))に先立って、試料に含まれるアナライトを前処理してもよい。ここで、前処理としては、酸、塩基、界面活性剤等の各種化学薬品等を用いた化学的処理や、加熱・撹拌・超音波等を用いた物理的処理が挙げられ、またその両方を用いても良い。特に、アナライトがインフルエンザウイルスNP抗原等の、通常は表面に露出していない物質である場合、界面活性剤等による処理を行うのが好ましい。この目的に使用される界面活性剤として、特異的な結合反応、たとえば、抗原抗体反応等のリガンドとアナライトとの結合反応性を考慮して、非イオン性界面活性剤が用いられてもよい。
前記アナライトとしては、腫瘍マーカー、シグナル伝達物質、ホルモン等のタンパク質(ポリペプチド、オリゴペプチド等を含む)、核酸(一本鎖または二本鎖の、DNA、RNA、ポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、PNA(ペプチド核酸)等を含む)または核酸を有する物質、糖(オリゴ糖、多糖類、糖鎖等を含む)または糖鎖を有する物質、脂質などその他の分子が挙げられ、標識化リガンド(1)および捕捉リガンド(2)に特異的に結合するものである限り特に限定されないが、たとえば、癌胎児性抗原(CEA)、HER2タンパク、前立腺特異抗原(PSA)、CA19−9、α−フェトプロテイン(AFP)、免疫抑制酸性タンパク(IPA)、CA15−3、CA125、エストロゲンレセプター、プロゲステロンレセプター、便潜血、トロポニンI、トロポニンT、CK−MB、CRP、ヒト絨毛性ゴナドトロピン(HCG)、黄体形成ホルモン(LH)、卵胞刺激ホルモン(FSH)、梅毒抗体、インフルエンザウイルス、ヒトヘモグロビン、クラミジア抗原、A群β溶連菌抗原、HBs抗体、HBs抗原、ロタウイルス、アデノウイルス、アルブミン、糖化アルブミン等が挙げられる。これらの中でも非イオン性界面活性剤により可溶化される抗原が好ましく、ウイルス核タンパク質のように自己集合体を形成する抗原がより好ましい。
標識化リガンド(1)は、アナライトに特異的に結合するリガンド(1)を600nm以上800nm以下の波長を有する光で励起されて蛍光を生じる蛍光体(1)で標識化してなる。ここで、「リガンド(1)」とは、蛍光体(1)で標識化されていない、未標識のリガンドそのものを指す。標識化リガンド(1)は、後述する工程(i)において、試料に含まれるアナライトに接触させて、アナライトと標識化リガンド(1)とを含む複合体を形成するために使用される。
また、蛍光体(1)が蛍光発光した際に測定される蛍光強度の蛍光波長域(蛍光測定波長域)は、600nm以上で、1200nm以下であり、好ましくは650nm以上、1000nm以下である。
ラテラルフロー型クロマト用テストストリップ(単に、テストストリップと称することもある)は、少なくとも、メンブレンと、当該メンブレンに、アナライトと特異的に結合する捕捉リガンドが固定されてなる検出部を含み、必要に応じて、後述するような、反応部、試薬添加部、コントロール部、吸水パッド等の任意部材を含んでいてもよい。たとえば、図1(A)の付番10のテストストリップでは、試料の展開方向において、メンブレンに、試料添加部11、標識化リガンド(1)17を含む反応部12、捕捉リガンド(2)19が固定されてなる検出部13、捕捉リガンド(3)19´が固定されてなるコントロール部14および吸水パッド15を備えている。また、図1(B)の付番20のテストストリップでは、試料の展開方向において、メンブレンに、試料添加部21、捕捉リガンド(2)29が固定されてなる検出部23、捕捉リガンド(3)29´が固定されてなるコントロール部24およびを備え、反応部を備えていない。
テストストリップに使用されるメンブレンは、一般的なテストストリップに使用されるメンブレンと同様に、たとえば、毛管現象を示し、試料を添加すると同時に、試料が展開するような微細多孔性物質からなる不活性物質(アナライト、各種リガンド、各種蛍光体などと反応しない物質)で形成されているものである。具体的なメンブレンとしては、ポリウレタン、ポリエステル、ポリエチレン、ポリ塩化ビニル、ポリフッ化ビニリデン、ナイロン、ニトロセルロース又は酢酸セルロース等のセルロース誘導体等で構成される繊維状又は不織繊維状マトリクス、膜、濾紙、ガラス繊維濾紙、布、綿等が挙げられる。中でも、好ましくはセルロース誘導体やナイロンで構成される膜、濾紙、ガラス繊維濾紙等が用いられ、より好ましくはニトロセルロース膜、混合ニトロセルロースエステル(ニトロセルロースと酢酸セルロースの混合物)膜、ナイロン膜、濾紙が用いられる。
検出部は、標識化リガンド(1)とアナライトとを含む複合体(A)が、アナライトと特異的に結合する捕捉リガンド(2)に接触するような構成である限り特に限定されないが、メンブレンに、直接、捕捉リガンド(2)が固定されてなるものであってもよいし、あるいは捕捉リガンド(2)をメンブレンに、固定されたセルロース濾紙、グラスファイバー、および不織布等からなるパッドに固定してなるものであってもよい。
テストストリップは、試料が展開する方向において、図1(B)に示されるように反応部が形成されていない場合は、検出部よりも上流側に、図1(A)に示されるように反応部が形成されている場合は、反応部よりも上流側に、アナライトを含む試料を添加するための試料添加部を有していてもよい。
テストストリップには、図1(A)の付番12で示されるように、メンブレンに、試料が流れる方向において、検出部よりも上流側に、標識化リガンド(1)を含む反応部が形成されていることが好ましい。このように、テストストリップにおいて、反応部が形成されている場合、アナライトを含む試料を反応部にまたは試料添加部に供すると、反応部にて、試料に含まれるアナライトと標識化リガンド(1)とを接触させることができる。すなわち、工程(i)として、試料に含まれるアナライトを標識化リガンド(1)とを接触させる工程を実施した後に、テストストリップに提供するような操作が不要になり、試料を、単に反応部にまたは試料添加部に供することで、工程(i)を実施することができ、その結果、アナライトと標識化リガンド(1)とを含む複合体(A)を簡便に形成させることができる。
テストストリップは、図1(A)の付番14や図1(B)の付番24に示されるように、メンブレンに、試料が展開する方向において、標識化リガンド(1)と特異的に結合する第3リガンドが固定されてなるコントロール部が形成されていてもよい。後述する工程(iii)において、検出部とともに、コントロール部でも蛍光強度が測定されることにより、テストストリップに供した試料が展開して、反応部および検出部に到達し、検査が正常に行われたことを確認することができる。なお、コントロール部は、捕捉リガンド(2)の代わりに捕捉リガンド(3)を用いることを除いては、上述の検出部と同様にして作成され、同様の構成を採ることができる。
テストストリップは、メンブレンに、試料が展開する方向に向かって、コントロール部が形成されていない場合は、検出部よりも下流側に、あるいはコントロール部が形成されている場合は、図1(A)の付番15や図1(B)の付番25で示されるように、コントロール部よりも下流側に、吸水パッドが形成されていてもよい。
工程(i)は、試料に含まれるアナライトを、アナライトに特異的に結合するリガンド(1)を、600nm以上800nm以下の波長を有する光で励起されて蛍光を生じる蛍光体(1)で標識化してなる標識化リガンド(1)に接触させる工程であり、アナライトと標識化リガンド(1)とを含む複合体(A)を形成する限り、接触の態様は特に限定されるものではない。
ここで、励起光は、蛍光体(1)の励起波長に依存するが、600nm以上、800nm以下の波長を有する光である。このような励起光を照射すると、メンブレン等のテストストリップがPET等の紫外光によって自家蛍光するような材料で構成されていたとしても、自家蛍光の発生を低減乃至発生を無くすことができるため、高い検出感度で、アナライトを検出および定量できる。
本発明の別態様として、上述のような、ラテラルフロー型クロマト用テストストリップを用いて、試料中に含まれるアナライトの検出または定量方法に使用するためのキットを提供する。本発明に係るキットは、メンブレンと当該メンブレンに、前記アナライトと特異的に結合する捕捉リガンドが固定されてなる検出部を含むラテラルフロー型クロマト用テストストリップと、前記アナライトに特異的に結合するリガンド(1)を橙色可視光もしくは赤色可視光または近赤外光で励起される蛍光体(1)で標識化してなる標識化リガンド(1)を含む検出試薬とを必須構成要素として含み、必要に応じて、さらにその他の構成要素を含むものであってもよい。
[比較例1A]
[標識化抗体1Aの調製]
抗A型インフルエンザウイルスモノクローナル抗体(Millipore社製、Anti-Influenza A, nucleoprotein, clone A3)を50mM MES(2-Morpholinoethanesulfonic acid, monohydrate: 同仁化学社製)緩衝液(pH6.0)溶液で透析した後、蛍光体1A(FAM (5-FAM-X (6-(Fluorescein-5-carboxamido) hexanoic acid, succinimidyl ester)、Kirkegaard & Perry Laboratories,Inc.)を、アミノ基を介して、前記モノクローナル抗体と蛍光体1Aとを結合させて、標識抗体1Aを含む検出液1Aを調製した。
[テストストリップ1Aの作製]
抗A型インフルエンザウイルスモノクローナル抗体(Millipore社製Anti-Influenza A, nucleoprotein, clone A3)を10mM Tris−HCl(pH7.5)に透析し、透析後に孔径0.22μmのフィルターでろ過を行い、10mM Tris−HCl(pH7.5)で希釈して抗A型インフルエンザウイルスモノクローナル抗体を含む捕捉抗体(2)液を調製した。
次に、セルロース不織布を幅15mm、長さ10cmに切断し、メンブレンの上面に、メンブレンの上流端が2mm重なる様に配置して貼り付け、試料添加部を形成した。
アナライトとして、インフルエンザA型ウイルスを、280.0pfu/ml(pfu:プラーク形成単位)になるように、緩衝液(20mM MES緩衝液(pH6.0)、1(W/V)% TritonX-100、2(W/V)% アルギニン塩酸塩、1.0(W/V)%ウシ血清アルブミン)に添加し懸濁して、試料を調製した。調製さられた試料を、テストストリップ1Aの試料添加部に添加し、該試料を試料添加部から吸水パッドまでテストストリップ1A上で展開させ、洗浄後、蛍光測定装置を用いて、波長488nmの励起光をテストストリップ1Aに照射して、波長520±30nmの蛍光強度を測定した。
[実施例1B]
蛍光体1Aの代わりに、蛍光蛋白質1B(「アロフィコシアニン」同仁化学社製)のチオール基を介して、前記モノクローナル抗体と蛍光蛋白質1Bとを結合させたことを除いては、比較例1Aと同様にして、標識化抗体1Bを含む検出液1Bを調製し、テストストリップ1Bを作製した。
蛍光体1Aの代わりに、蛍光体1C(AlexaFluor680(モレキュラープローブス社製)のカルボキシル基を介して、前記モノクローナル抗体と蛍光体1Cとを結合させたことを除いては、比較例1Aと同様にして、標識化抗体1Cを含む検出液1Cを調製し、テストストリップ1Cを作製した。
蛍光体1Aの代わりに、蛍光体1D(AlexaFluor780(モレキュラープローブス社製)のカルボキシル基を介して、前記モノクローナル抗体と蛍光体1Dとを結合させたことを除いては、比較例1Aと同様にして、標識化抗体1Dを含む検出液1Dを調製し、テストストリップ1Dを作製した。
蛍光体1Aの代わりに、表2に記載の蛍光体2A(AlexaFluor 680、モレキュラープローブス社製)を用いて、前記モノクローナル抗体と蛍光体2Aを結合させたことを除いては、比較例1Aと同様にして、標識化抗体2Aを含む検出液2Aを調製し、テストストリップ2Aを作製した。
蛍光体1Aの代わりに、表2に記載の蛍光体2B(AlexaFluor 790、モレキュラープローブス社製)を用いて、前記モノクローナル抗体と蛍光体2Bを結合させたことを除いては、比較例1Aと同様にして、標識化抗体2Bを含む検出液2Bを調製し、テストストリップ2Bを作製した。
[実施例2C]
蛍光体1Aの代わりに、表2に記載の蛍光ラテックス粒子2C(FC02F8612(平均粒径0.39μm、Bangs Laboratories社製))を用い、蛍光粒子2Cのカルボキシル基を介して、前記モノクローナル抗体と蛍光ラテックス粒子2Cを結合させたことを除いては、比較例1Aと同様にして、標識化抗体2Cを含む検出液2Cを調製し、テストストリップ2Aを作製した。
蛍光体1Aの代わりに、表2に記載の蛍光ラテックス粒子2D(FC02F8782(平均粒径0.32μm、Bangs Laboratories社製))を用い、蛍光ラテックス粒子2Dのカルボキシル基を介して、前記モノクローナル抗体と蛍光ラテックス粒子2Dを結合させたことを除いては、比較例1Aと同様にして、標識化抗体2Dを含む検出液2Dを調製し、テストストリップ2Dを作製した。
蛍光体1Aの代わりに、表3に記載の蛍光ラテックス粒子3A(FC02F8655(平均粒径65nm、Bangs Laboratories社製))を用い、蛍光ラテックス粒子3Aのカルボキシル基を介して、前記モノクローナル抗体と蛍光ラテックス粒子3Aを結合させたことを除いては、比較例1Aと同様にして、標識化抗体3Aを含む検出液3Aを調製し、テストストリップ3Aを作製した。
蛍光体1Aの代わりに、表3に記載の蛍光ラテックス粒子3B(FC02F9770(平均粒径190nm、Bangs Laboratories社製))を用い、蛍光ラテックス粒子3Bのカルボキシル基を介して、前記モノクローナル抗体と蛍光ラテックス粒子3Bを結合させたことを除いては、実施例3Aと同様にして、標識化抗体3Bを含む検出液3Bを調製し、テストストリップ3Bを作製した。
蛍光体1Aの代わりに、表3に記載の蛍光ラテックス粒子3C(Lx(平均粒径300nm、藤倉化成社製))を用い、蛍光ラテックス粒子3Cのカルボキシル基を介して、前記モノクローナル抗体と蛍光ラテックス粒子3Cを結合させたことを除いては、実施例3Aと同様にして、標識化抗体3Cを含む検出液3Cを調製し、テストストリップ3Cを作製した。
蛍光体1Aの代わりに、表3に記載の蛍光ラテックス粒子3D(FC02F9990(平均粒径400nm、Bangs Laboratories社製))を用い、蛍光ラテックス粒子3Dのカルボキシル基を介して、前記モノクローナル抗体と蛍光ラテックス粒子3Dを結合させたことを除いては、実施例3Aと同様にして、標識化抗体3Dを含む検出液3Dを調製し、テストストリップ3Dを作製した。
蛍光体1Aの代わりに、表3に記載の蛍光ラテックス粒子3E(FC02F8632(平均粒径510nm、Bangs Laboratories社製))を用い、蛍光ラテックス粒子3Eのカルボキシル基を介して、前記モノクローナル抗体と蛍光ラテックス粒子3Eを結合させたことを除いては、実施例3Aと同様にして、標識化抗体3Eを含む検出液3Eを調製し、テストストリップ3Eを作製した。
蛍光体1Aの代わりに、表3に記載の蛍光ラテックス粒子3F(FC02F4194(平均粒径890nm、Bangs Laboratories社製))を用い、蛍光ラテックス粒子3Fのカルボキシル基を介して、前記モノクローナル抗体と蛍光ラテックス粒子3Fを結合させたことを除いては、実施例3Aと同様にして、標識化抗体3Fを含む検出液3Fを調製し、テストストリップ3Fを作製した。
蛍光体1Aの代わりに、表4に記載の蛍光ラテックス粒子4A(FS02F9862(平均粒径190nm、Bangs Laboratories社製))を用い、前記モノクローナル抗体と蛍光ラテックス粒子4Aを結合させたことを除いては、比較例1Aと同様にして、標識化抗体4Aを含む検出液4Aを調製し、テストストリップ4Aを作製した。
次いで、アナライトとして、インフルエンザA型ウイルスを、280.0pfu/ml(pfu:プラーク形成単位)になるように、緩衝液(20mM MES緩衝液(pH6.0)、1(W/V)% TritonX-100、2(W/V)% アルギニン塩酸塩、1.0(W/V)%ウシ血清アルブミン)に添加して懸濁させて、試料を調製した。得られた試料を、テストストリップ4Aの試料添加部に添加し、該試料を試料添加部から吸水パッドまで展開させ、洗浄した後、蛍光測定装置を用いて、波長680nmの励起光をテストストリップ1Aに照射して、波長700±10nmの蛍光の蛍光画像を得た。
[評価基準]
良:検出部よりも上流側の部位において、ほとんど蛍光が観察されなかった。
やや良:検出部よりも上流側の部位において、若干蛍光が観察された。
不良;検出部よりも上流側の部位において、著しく蛍光が観察された。
蛍光ラテックス粒子4Aの代わりに、表4に記載の蛍光ラテックス粒子4B(FC02F9770(平均粒径190nm、Bangs Laboratories社製))を用い、前記モノクローナル抗体と蛍光ラテックス粒子4Bを結合させたことを除いては、実施例4Aと同様にして、標識化抗体4Bを含む検出液4Bを調製し、テストストリップ4Bを作製し、標識化抗体4Bの展開性を評価した。
蛍光ラテックス粒子4Aの代わりに、表4に記載の蛍光ラテックス粒子4C(FC02F8612(平均粒径390nm、Bangs Laboratories社製))を用い、前記モノクローナル抗体と蛍光ラテックス粒子4Cを結合させたことを除いては、実施例4Aと同様にして、標識化抗体4Cを含む検出液4Cを調製して、テストストリップ4Cを作製した。また、実施例4Aと同様にして、標識化抗体4Cのゼータ電位を測定し、標識化抗体4Cの展開性を評価した。
蛍光ラテックス粒子4Aの代わりに、表4に記載の蛍光ラテックス粒子4D(FC02F9990(平均粒径400nm、Bangs Laboratories社製))を用い、前記モノクローナル抗体と蛍光ラテックス粒子4Dを結合させたことを除いては、実施例4Aと同様にして、標識化抗体4Dを含む検出液4Dを調製して、テストストリップ4Dを作製した。また、実施例4Aと同様にして、標識化抗体4Dのゼータ電位を測定し、標識化抗体4Dの展開性を評価した。
蛍光ラテックス粒子4Aの代わりに、表4に記載の蛍光ラテックス粒子4E(FC02F9889(平均粒径490nm、Bangs Laboratories社製))を用い、前記モノクローナル抗体と蛍光ラテックス粒子4Eを結合させたことを除いては、実施例4Aと同様にして、標識化抗体4Eを含む検出液4Eを調製して、テストストリップ4Eを作製した。また、実施例4Aと同様にして、標識化抗体4Eのゼータ電位を測定し、標識化抗体4Eの展開性を評価した。
蛍光ラテックス粒子4Aの代わりに、表4に記載の蛍光ラテックス粒子4F(FKFL1171(平均粒径220nm、藤倉化成社製))を用い、前記モノクローナル抗体と蛍光ラテックス粒子4Fを結合させたことを除いては、実施例4Aと同様にして、標識化抗体4Fを含む検出液4Fを調製して、テストストリップ4Fを作製した。また、実施例4Aと同様にして、標識化抗体4Fのゼータ電位を測定し、標識化抗体4Fの展開性を評価した。
蛍光ラテックス粒子4Aの代わりに、表4に記載の蛍光ラテックス粒子4G(FKFL1175(平均粒径310nm、藤倉化成社製))を用い、前記モノクローナル抗体と蛍光ラテックス粒子4Gを結合させたことを除いては、実施例4Aと同様にして、標識化抗体4Gを含む検出液4Gを調製して、テストストリップ4Gを作製した。また、実施例4Aと同様にして、標識化抗体4Gのゼータ電位を測定し、標識化抗体4Gの展開性を評価した。
蛍光ラテックス粒子4Aの代わりに、表4に記載の蛍光ラテックス粒子4H(Lx(平均粒径200nm、藤倉化成社製))を用い、前記モノクローナル抗体と蛍光ラテックス粒子4Hを結合させたことを除いては、実施例4Aと同様にして、標識化抗体4Hを含む検出液4Hを調製し、テストストリップ4Hを作製し、標識化抗体4Hの展開性を評価した。
蛍光ラテックス粒子4Aの代わりに、表4に記載の蛍光ラテックス粒子4I(Lx(平均粒径300nm、藤倉化成社製))を用い、前記モノクローナル抗体と蛍光ラテックス粒子4Iを結合させたことを除いては、実施例4Aと同様にして、標識化抗体4Iを含む検出液4Iを調製し、テストストリップ4Iを作製し、標識化抗体4Iの展開性を評価した。
11,21:試料添加部
12:反応部
13,23:検出部
14,24:コントロール部
15,25:吸水パッド
16,26:複合体(A)
17,27:標識化リガンド(1)
18,28:アナライト
19,29:捕捉リガンド(2)
19´,29´:捕捉リガンド(3)
Claims (9)
- メンブレンと当該メンブレンに、アナライトと特異的に結合する捕捉リガンドが固定されてなる検出部を含むラテラルフロー型クロマト用テストストリップを用いて、試料中に含まれるアナライトを検出または定量するアナライトの検出または定量方法であって、
下記工程(i)〜(iii)を含むアナライトの検出または定量方法。
工程(i):試料に含まれるアナライトを、アナライトに特異的に結合するリガンド(1)を600nm以上800nm以下の波長を有する光で励起されて蛍光を生じる蛍光体(1)で標識化してなる標識化リガンド(1)に接触させる工程
工程(ii):前記検出部にて、工程(i)において形成された、アナライトと標識化リガンドとを含む複合体(A)を、捕捉リガンドに接触させる工程
工程(iii):テストストリップに、複合体(A)に含まれる蛍光体(1)の励起光として、600nm以上800nm以下の波長を有する光を照射し、蛍光体(1)の蛍光を生じさせ、該蛍光の蛍光強度を測定する工程 - 工程(iii)の蛍光強度の測定波長が、600nm以上である、請求項1に記載のアナライトの検出または定量方法。
- 前記前記蛍光体(1)が、蛍光色素および/または蛍光蛋白質である、請求項1または2に記載のアナライトの検出または定量方法。
- 標識化リガンド(1)が、前記リガンド(1)と前記蛍光体(1)とが、不溶性粒子に担持されてなる、請求項1〜3の何れか一項に記載のアナライトの検出または定量方法。
- 前記不溶性粒子は、合成高分子粒子、無機化合物粒子および多糖類粒子からなる群から選択される少なくとも1種類である、請求項1〜4の何れか一項に記載のアナライトの検出または定量方法。
- 前記不溶性粒子は、100nm以上、600nm以下の平均粒子径を有する、請求項1〜4の何れか一項に記載のアナライトの検出または定量方法。
- −30mV以下のゼータ電位を有する、請求項1〜6の何れか一項に記載のアナライトの検出または定量方法。
- ラテラルフロー型クロマト用テストストリップを用いて、試料中に含まれるアナライトを検出または定量するためのキットであって、
メンブレンと当該メンブレンに、前記アナライトと特異的に結合する捕捉リガンドが固定されてなる検出部を含むラテラルフロー型クロマト用テストストリップと、
前記アナライトに特異的に結合するリガンド(1)を600nm以上800nm以下の波長を有する光で励起されて蛍光を生じる蛍光体(1)で標識化してなる標識化リガンド(1)を含む検出試薬と、
を含むアナライトを検出または定量するためのキット。 - 試料中に含まれるアナライトを検出または定量するためのラテラルフロー型クロマト用テストストリップであって、
メンブレンと、前記試料が展開する方向において、当該メンブレンに、
前記アナライトと特異的に結合する捕捉リガンド(2)が固定されてなる検出部と、
当該検出部よりも上流側に、前記アナライトに特異的に結合するリガンド(1)を600nm以上800nm以下の波長を有する光で励起されて蛍光を生じる蛍光体(1)で標識化してなる標識化リガンド(1)が含まれる反応部と、
を含むラテラルフロー型クロマト用テストストリップ。
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US20190056390A1 (en) * | 2016-02-24 | 2019-02-21 | Sekisui Medical Co., Ltd. | Method for detecting oncofetal fibronectin using immunochromatography |
CN109642901A (zh) * | 2016-08-31 | 2019-04-16 | 积水化学工业株式会社 | 诊断试剂用荧光粒子及使用其的免疫测定试剂 |
EP3724642A1 (en) * | 2017-12-13 | 2020-10-21 | Bloom Diagnostics AG | Preparation device, diagnostic apparatus, diagnostic kit and diagnostic system |
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Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20070031283A1 (en) * | 2005-06-23 | 2007-02-08 | Davis Charles Q | Assay cartridges and methods for point of care instruments |
JP2011027693A (ja) * | 2009-07-29 | 2011-02-10 | Furukawa Electric Co Ltd:The | イムノクロマト法用テストストリップ |
JP2012505402A (ja) * | 2008-10-07 | 2012-03-01 | ユィロス・パテント・アクチボラグ | 試料中のアナライトの検出のための半逐次アッセイ |
Family Cites Families (20)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS5719662A (en) * | 1980-07-09 | 1982-02-01 | Fuji Photo Film Co Ltd | Preparation of microcapsule reagent for immune reaction |
US4988568A (en) * | 1988-03-30 | 1991-01-29 | Nippon Zeon Co., Ltd. | Hydrophilic fine gel particles and process for production thereof |
US5266497A (en) * | 1990-08-31 | 1993-11-30 | Japan Synthetic Rubber Co., Ltd. | Immunochromatographic assay with improved colored latex |
US5750409A (en) * | 1991-11-18 | 1998-05-12 | Boehringer Mannheim Gmbh | Pentacyclic compounds and their use as absorption or fluorescent dyes |
US5714386A (en) * | 1996-01-11 | 1998-02-03 | Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Cy7-allophycocyanin conjugates for use in multiplex fluorescence detection assays |
US6027890A (en) * | 1996-01-23 | 2000-02-22 | Rapigene, Inc. | Methods and compositions for enhancing sensitivity in the analysis of biological-based assays |
US6528325B1 (en) * | 2000-10-13 | 2003-03-04 | Dexall Biomedical Labs, Inc. | Method for the visual detection of specific antibodies in human serum by the use of lateral flow assays |
WO2003087822A2 (en) | 2002-04-10 | 2003-10-23 | Response Biomedical Corporation | Sensitive immunochromatographic assay |
US20050112703A1 (en) * | 2003-11-21 | 2005-05-26 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Membrane-based lateral flow assay devices that utilize phosphorescent detection |
US20060024651A1 (en) * | 2004-08-02 | 2006-02-02 | Davis Antonio M | Sneeks |
US20060246513A1 (en) * | 2005-05-02 | 2006-11-02 | Bohannon Robert C | Method and device to detect the presence of analytes in a sample |
EP2125659B1 (en) * | 2007-02-01 | 2016-01-13 | Siemens Healthcare Diagnostics Inc. | Silica magnetic particles with a high nucleic acid binding capability |
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JP2010168369A (ja) * | 2008-12-25 | 2010-08-05 | Canon Inc | 眼内組織用標識組成物、眼内組織の標識方法及びスクリーニング方法 |
WO2010074326A1 (en) * | 2008-12-25 | 2010-07-01 | Canon Kabushiki Kaisha | Probe for a biological specimen and labelling method and screening method using the probe |
EP2380019A4 (en) * | 2009-01-21 | 2017-10-25 | California Institute of Technology | Multipurpose analysis using second harmonic generating nanoprobes |
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TWI395613B (zh) * | 2009-03-31 | 2013-05-11 | Yeu Kuang Hwu | 微粒及其形成方法 |
WO2011063990A2 (en) * | 2009-11-30 | 2011-06-03 | Ludwig-Maximilians-Universität München | Silk particles for controlled and sustained delivery of compounds |
AU2012305327B2 (en) * | 2011-09-05 | 2016-07-14 | Hiroshi Maeda | Polymer-type fluorescent molecule probe |
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Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20070031283A1 (en) * | 2005-06-23 | 2007-02-08 | Davis Charles Q | Assay cartridges and methods for point of care instruments |
JP2012505402A (ja) * | 2008-10-07 | 2012-03-01 | ユィロス・パテント・アクチボラグ | 試料中のアナライトの検出のための半逐次アッセイ |
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