JPWO2011043061A1 - 光音響イメージング用造影剤、及び、それを用いた光音響イメージング方法 - Google Patents
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Abstract
Description
MNP−((L)l−(P)m)n (化1)(式中、MNPは酸化鉄粒子を含有する粒子であり、Lはリンカー分子、Pはリガンド分子である。lは0あるいは1である。m、nは1以上の整数である。)
第一の実施形態に係る光音響イメージング用造影剤は、化1で表される、近赤外線領域の光を吸収する酸化鉄粒子を含有する粒子と、前記酸化鉄粒子を含有する粒子に固定された少なくとも1つ以上のリガンド分子とを含み、前記リガンド分子の固定化密度が標的分子の細胞表面密度以上であることを特徴とする。
本発明において「造影剤」とは、主に検体内にあって観察したい組織や分子とその周囲の組織や分子とのコントラスト差を生じさせ、当該観察したい組織や分子の形態情報あるいは位置情報の検出感度を向上させることができる化合物と定義する。ここで「光音響イメージング用造影剤」とは、光音響イメージングに用いられる造影剤を意味する。
本実施形態に用いる酸化鉄粒子としては、600nm以上1300nm以下の近赤外波長領域の光を吸収して光音響信号を発信し、人体に無害なものであれば特に制限されないが、Fe3O4(マグネタイト)、γ−Fe2O3(マグヘマイト)、またはこれらの混合物を用いることが好ましい。特に好ましくは、マグネタイトである。当該マグネタイトは、マグヘマイトより近赤外波長領域におけるモル吸光係数が高いことが知られており、従って光音響信号も強くなると考えられる。前記マグネタイトを信号発信部として用いることで、従来の光音響イメージング用造影剤よりも感度を向上させることが可能になる。また、酸化鉄粒子は、単結晶、多結晶、非晶質のいずれの結晶状態でもよい。また、酸化鉄粒子の数は、1個でも良いし、2個以上からなる2次粒子でも良い。なお、酸化鉄粒子の粒径が大きい場合、例えば50nmの場合、造影剤に含まれる酸化鉄粒子の数が多くなるほど、鉄原子1モルあたりのモル吸光係数の値、及び、鉄原子1モルあたりから測定される光音響信号の値は大きい。一方で、酸化鉄粒子の粒径が5nmの場合、造影剤に含まれる酸化鉄粒子の数が多くなっても、鉄原子1モルあたりのモル吸光係数、及び測定される光音響信号の値はあまり変わらない。
本実施形態において酸化鉄粒子を含有する粒子とは、上記酸化鉄粒子のみからなる粒子、あるいは、デキストランなどの高分子やシリカなどのマトリックスに酸化鉄粒子が含まれている粒子を意味する。本実施形態に係る酸化鉄粒子を含有する粒子の直径は流体力学的観点から1〜1000nmであることが好ましい。ここで、「マトリックス」とは、酸化鉄粒子を内包あるいは保持し、酸化鉄粒子と複合体形成可能な化合物のことをいい、前記酸化鉄粒子を安定して内包あるいは保持できる化合物であればどのようなものでもよい。水溶性や水分散性の観点から、前記マトリックスはデキストラン、ポリアミノ酸、ポリエチレングルコール、ポリ乳酸−グリコール酸共重合体、アルブミン、コラーゲンなど親水性高分子が好ましく、その中でも特にデキストランが好ましい。
「リガンド分子」とは、標的分子と特異的に結合することのできる化合物を意味する。また、ここでいう「特異的に結合」とは、標的分子との解離定数KD(値が低いほど結合親和性は高い)が1μM以下であると定義されている。前記リガンド分子としては、標的分子に対して1μM以下の解離定数を有する化合物であれば特に限定されず、酵素、抗体、受容体、サイトカイン、ホルモン、血清タンパク等が挙げられる。本実施形態のリガンド分子として、解離定数の低さ、分子の構造安定性の観点から、特に抗体が好ましい。
本実施形態の光音響イメージング用造影剤は、腫瘍のような病的組織の診断における光音響イメージングに用いられることが特に好ましい。従って、本実施形態において、「標的分子」とは、生物由来の検体分子であれば特に制限されないが、病変部位で特異的に発現している検体分子、特に腫瘍部位に特異的に発現している検体分子を意味する。例えば腫瘍抗原、受容体、細胞表面の膜タンパク質、タンパク質分解酵素、サイトカイン等が挙げられ、本実施形態にとっての標的分子は腫瘍抗原であることが好ましい。
前記酸化鉄粒子を含有する粒子とリガンド分子とは、当該酸化鉄粒子を含有する粒子の表面に存在する官能基、例えばカルボキシル基、アミノ基、マレイミド基、ヒドロキシル基などを反応基とし、リガンド分子と従来周知のカップリング反応によって直接に結合する。直接結合の具体例として、アミド化反応等が挙げられる。この反応は、例えば、カルボキシル基またはそのエステル誘導体とアミノ基の縮合により行なわれる。カルボキシル基を直接アミド化する場合には、ジシクロヘキシルカルボジイミド(N,N’−Dicyclohexylcarbodiimide)や1−エチル−3−(3−ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩(1−ethyl−3−(3−dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride)などのカルボジイミド縮合剤を用いることができるし、N−ヒドロキシスクシンイミド(NHS)などを用いてカルボキシル基を予め活性化エステルとしてアミド化反応を促進させることもできる。
また、本実施形態の光音響イメージング用造影剤において、前記酸化鉄粒子を含有する粒子と前記リガンド分子との結合は直接結合に限らず、適宜リンカー分子を介して結合していてもよい。ここで「リンカー分子」とは、前記酸化鉄粒子を含有する粒子と前記リガンド分子とを連結させる化合物と定義する。前記リンカー分子としてはアルカンジチオール、アルカンジアミンなどの二官能性短鎖アルカン、二官能性ポリエチレンオキシドなどが利用できる。例えば、前記リンカー分子の末端基を前記酸化鉄粒子を含有する粒子の有する官能基と、前記リンカー分子のもう一方の末端基を前記リガンド分子の有する官能基とそれぞれ結合させればよい。
流体力学の観点から、本実施形態の光音響イメージング用造影剤の平均粒径は1〜500nm、好ましくは10〜200nmである。前記造影剤の粒径の増大は、当該造影剤の被貪食性を高め、その血中半減期を低下させ、また、組織拡散性を低下させることが考えられる。前記標的分子の存在部位によって、最適な粒径に適宜調整して用いればよい。例えば、血管内に標的分子が存在する場合、前記造影剤の粒径は1μm程度まで大きくてもよい。一方、血管外の標的分子に対しては、前記造影剤の流体力学的平均粒径は1〜500nm、特に10〜200nmであることが好ましい。光音響信号強度の観点からは、1粒子あたりの鉄含有量は高いほうがよい。そのため、体内動態と光音響信号の両観点からは、100〜500nmが好ましい。実施例で後述するように、鉄含有量が高い、171.7nm(個数換算分布)のターゲット分子を有する酸化鉄粒子において、高い吸光係数と標的分子への高い結合能、ならびに良好な腫瘍集積性が確認されており、光音響イメージング用造影剤としての高い実用性が示されている。
本実施形態の光音響イメージング用造影剤では、前記酸化鉄粒子を含有する粒子1個あたり、少なくとも1つ以上のリガンド分子を有している。前記酸化鉄粒子を含有する粒子1個あたりに結合する前記リガンド分子の数(価数)、すなわち前記リガンド分子の固定化密度(ng/cm2)は、前記光音響イメージング用造影剤の標的分子への結合能に大きく影響すると考えられる。具体的には、前記リガンド分子の価数の増加で生じた多点結合作用は、前記光音響イメージング用造影剤の機能的親和性(「みかけの親和性」とも言うが、以下「結合能」ということがある)を増強したことになる。前記機能的親和性の増強により、前記光音響イメージング用造影剤は標的分子により強く結合することができ、高コントラストな光音響イメージングが可能になる。また、前記機能的親和性の評価は、ELISA(ENZYME−LINKED IMMUNOSORBENT ASSAY)による方法、分光学的方法、水晶発振子(QCM)を用いる方法、表面プラズモン共鳴(SPR)現象を利用した方法などで行うことが出来る。前記光音響イメージング用造影剤と標的分子との解離定数(もしくは「みかけの解離定数」)は1μM以下であるべきであるが、好ましくは10nM以下であり、さらに好ましくは1nM以下である。
前記リガンド分子の固定化密度が、前記標的分子が細胞表面に存在する密度(細胞表面密度)以上である場合に、高い結合状態を実現できると考えられる。従って、効果的に多点結合作用を生じさせることができるように、前記標的分子の細胞表面密度がわかれば、それに対応した所望のリガンド分子の固定化密度を有する光音響イメージング用造影剤を設計可能になる。ここで重要なことは、前記リガンド分子が固定化された状態でどれだけ結合活性を保っているかという問題があり、これにより固定化密度と結合能との関係は変化しうる。また、前記酸化鉄粒子を含有する粒子の表面に固定化できる前記ターゲット分子数は前記酸化鉄粒子を含有する粒子の表面積と活性基との数により上限があり、さらに前記リガンド分子のサイズにも依存する。従って、前記光音響イメージング用造影剤の結合能向上のためには、前記標的分子密度や前記リガンド分子のサイズ、前記リガンド分子の固定化後の結合活性維持率などに基づいた合理的なリガンド分子を固定することが重要である。
本実施形態の光音響イメージングにおいて、投与された検体内の光音響イメージング用造影剤からの光音響信号、すなわち音響波の音圧は、前記光音響イメージング用造影剤の吸光係数ならびにその濃度に比例する。従って、前記光音響イメージング用造影剤に求められる性質は、高い吸光係数と前記標的分子への高い結合能である。
本実施形態の光音響イメージング用造影剤は、前記標的分子の光音響イメージングに用いることができる。すなわち、本実施形態の標的分子の光音響イメージング方法は、前記本実施形態の光音響イメージング用造影剤を検体もしくは前記検体から得られる試料に投与するステップと、前記検体もしくは前記検体から得られる試料にパルス光を照射するステップと、前記検体内もしくは前記検体から得られる試料内に存在する前記標的分子に結合した前記光音響イメージング用造影剤由来の光音響信号を測定するステップと、を少なくとも含むことを特徴とする。
本実施形態の光音響イメージング用造影剤は、上記の原理に基づいて、前記標的分子、例えば腫瘍に特異的に発現している腫瘍抗原の光音響イメージングに用いられることができる。例えば、前記光音響イメージング用造影剤は抗原量との相関を有する腫瘍の診断に用いられることができ、好ましくは、乳癌に関連した腫瘍抗原の光音響イメージング方法に用いられることもできる。前記光音響イメージング用造影剤の使用は、培養された細胞や組織を測定試料として疾病の研究を目的として使用することもできる。また、本実施形態の光音響イメージング用造影剤は、前記標的分子のスクリーニングに用いられうる。
(HER2に結合する一本鎖抗体を有する酸化鉄粒子を含有する粒子)
本発明の第二の実施形態は、化2で表される、酸化鉄粒子を含有する粒子と、少なくとも1つ以上の上皮成長因子受容体2(HER2)に結合する一本鎖抗体(scFv)を有する化合物を含む。
本実施形態に係る光音響イメージング用造影剤は、酸化鉄を含む粒子を有する光音響イメージング用造影剤において、一本鎖抗体が前記粒子に結合していることを特徴とする。
本発明者は、酸化鉄を含む粒子と結合した一本鎖抗体は、酸化鉄を含む粒子と結合した全抗体に比べて結合性能が高いことを見出した。これは、一本鎖抗体の場合は、抗原認識部位以外の部位を酸化鉄を含む粒子に結合させることができるが、全抗体の場合は、抗原認識部位が酸化鉄を含む粒子に結合してしまうと考えられるからである。
本実施形態に係る光音響イメージング用造影剤は、酸化鉄粒子を有し、酸化鉄粒子の粒径が15nm以上500nm以下であることを特徴としている。酸化鉄粒子の粒径が15nm以上の場合、15nm未満の場合に比べて、鉄原子1モルあたりのモル吸光係数の値、及び、鉄原子1モルあたりから測定される光音響信号の値が大きい。そのため、光音響イメージング方法において、本実施形態に係る光音響イメージング用造影剤を用いることで、大きな光音響信号を得ることができる。また、酸化鉄粒子の粒径が20nm以上であることがより好ましい。
本実施形態に用いる酸化鉄粒子としては、600nm以上1300nm以下の近赤外波長領域の光を吸収して光音響信号を発信し、人体に無害なものであれば特に制限されないが、Fe3O4(マグネタイト)、γ−Fe2O3(マグヘマイト)、またはこれらの混合物を用いることが好ましい。特に好ましくは、マグネタイトである。当該マグネタイトは、マグヘマイトより近赤外波長領域におけるモル吸光係数が高いことが知られており、従って光音響信号も強くなると考えられる。前記マグネタイトを信号発信部として用いることで、従来の光音響イメージング用造影剤よりも感度を向上させることが可能になる。また、酸化鉄粒子は、単結晶、多結晶、非晶質のいずれの結晶状態でもよい。また、酸化鉄粒子の数は、1個でも良いし、2個以上でもよい。2個以上からなる場合、2次粒子となる。なお、酸化鉄粒子の粒径が大きい場合、例えば50nmの場合、造影剤に含まれる酸化鉄粒子の数が多くなるほど、鉄原子1モルあたりのモル吸光係数の値、及び、鉄原子1モルあたりから測定される光音響信号の値は大きい。一方で、酸化鉄粒子の粒径が5nmの場合、造影剤に含まれる酸化鉄粒子の数が多くなっても、鉄原子1モルあたりのモル吸光係数、及び測定される光音響信号の値はあまり変わらない。
本実施形態の光音響イメージング用造影剤の一例の概略図を図13A−Jに示す。光音響イメージング用造影剤1は、図13Aのように、酸化鉄粒子2と、両親媒性化合物3からなる。両親媒性化合物3は、光音響イメージング用造影剤1の表面に存在する。
本実施形態における光音響イメージング用造影剤1の製造方法について説明する。
本実施形態の光音響イメージング用造影剤1を得る方法として、下記のドライアップ法や、ナノエマルジョン法を挙げることができるが、これらに限定されるものではない。
(1)有機溶媒に酸化鉄粒子2と、リン脂質4又は両親媒性ポリマー6を加えた第一液体10から、有機溶媒を留去させる工程。
(2)水13を加えた後、乳化させる工程。
(1)有機溶媒に酸化鉄粒子2と疎水性ポリマー7を加えた第一液体10を、水にリン脂質4とポリオキシエチレンソルビタン系脂肪酸エステル5又は両親媒性ポリマー6を加えた第二液体11に加えて混合液を得る工程。
(2)前記混合液を乳化することによりO/W型のエマルジョン12を得る工程。
(3)前記エマルジョン12の分散質から有機溶媒を留去する工程。
リン脂質4としては、少なくとも一部に、アミノ基、カルボキシル基、NHS(N−ヒドロキシスクシンイミド)基、マレイミド基、メトキシ基、又は水酸基のいずれかの官能基とPEG鎖を有するホスファチジル系リン脂質が含まれていることが好ましい。官能基がアミノ基、カルボキシル基、NHS基、又はマレイミド基の場合、捕捉分子8を固定化することができる。
本実施形態におけるポリオキシエチレンソルビタン系脂肪酸エステル5として、例えば、Tween20(ポリオキシエチレンソルビタンモノラウラート)、Tween40、Tween60、Tween80等を挙げることができる。
本実施形態における両親媒性ポリマー6として、PEG鎖を導入したオクタデセン−無水マレイン酸交互共重合体、PEG鎖を導入したスチレン−無水マレイン酸共重合体、PEG鎖を導入したポリ乳酸、PEG鎖を導入した乳酸−グリコール酸共重合体、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール、ポリビニルアルコール等を挙げることができる。
本実施形態における疎水性ポリマー7は、炭素数6以下のヒドロキシカルボン酸を有するモノマーからなるホモポリマー、又は前記ヒドロキシカルボン酸を有する2種類のモノマーからなるコポリマー、ポリスチレン、又はポリメタクリル酸メチルのいずれかである。これらのポリマーの重量平均分子量は2000〜1000000であり、好ましくは10000〜600000のものを好適に利用できる。
ドライアップ法における第一液体10とは、有機溶媒に、酸化鉄粒子2、及びリン脂質4又は両親媒性ポリマー6を分散、及び溶解させた液のことである。ナノエマルジョン法における第一液体10とは、有機溶媒に、酸化鉄粒子2、及び疎水性ポリマー7を分散、及び溶解させた液のことである。
ナノエマルジョン法における第二液体11とは、第一液体10と混合した際にエマルジョンを安定化させることを目的として、水にリン脂質4とポリオキシエチレンソルビタン系脂肪酸エステル5のうち、各々単独の化合物、あるいは各々複数の化合物、又は両親媒性ポリマー6をあらかじめ加えた水溶液である。但し、第一液体10と水を混合した分散液にリン脂質4、ポリオキシエチレンソルビタン系脂肪酸エステル5、あるいは両親媒性ポリマー6を含ませることができれば、上記の方法に限定されるものではない。
ドライアップ法では、酸化鉄粒子2と、リン脂質4又は両親媒性ポリマー6の混合溶液を乾燥させた後に、水を加えた溶液を乳化させて、ミセルを得る。ナノエマルジョン法では、第一液体10と第二液体11との混合液を乳化させて、水中油(O/W)型のエマルジョンを得る。
留去とは、第一液体10に含まれる有機溶媒を除去する操作である。
本実施形態において、捕捉分子8とは、癌などの標的部位に特異的に結合する物質、標的部位の周辺に存在する物質に特異的に結合する物質など、生体分子や医薬品等の化学物質などから任意に選択される物質である。具体的には、抗体、抗体フラグメント、酵素、生物活性ペプチド、グリコペプチド、糖鎖、脂質、分子認識化合物などが挙げられる。
リン脂質4をもつ光音響イメージング用造影剤1に捕捉分子8を固定化することにより、本実施形態の光音響イメージング用造影剤9を得ることができる。
本実施形態に係る光音響イメージング用造影剤1及び9は、生体透過性に優れた光を用いた光音響イメージング用の造影剤として用いることができる。
本実施形態に係る光音響イメージング方法は、以下の各工程を有する。
(i)上記の光音響イメージング用造影剤が投与された検体に600nm乃至1300nmの波長領域の光を照射する工程
(ii)前記検体内に存在する前記造影剤から発生する音響波を検出する工程と、
ここで、音響波を検出する装置としては特に限定されないが、超音波探触子などを用いることができる。
酸化鉄粒子を含有する粒子は多数市販されており、当業者が適宜のものを容易に入手し利用できる。なお、酸化鉄粒子を含有する粒子の製造方法についても多数の文献があり、それらを参照することで、容易に合成することが可能である。例えば、FeCl3・6H2O(25.5g)とFeCl2・4H2O(10.2g)を混合、溶解した水溶液(600ml)と、粉末状デキストラン(分子量10000ダルトン、360g)と30%NH4OH溶液(30ml)を用いて、米国特許第5262176号の方法に準じて、酸化鉄粒子を含むデキストラン粒子のコロイド溶液を調製できる。また、酸化鉄粒子を含有する粒子の表面に各種リンカー分子を結合させることも可能である。例えば、カルボジイミド縮合剤である1−エチル−3−(3−ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩(3.6mg)と3,6−ジオキサオクタン二酸(3.6mg)を、0.5M β−モルホリノエタンスルホン酸緩衝液(1.25ml、pH=6.3)で溶解し、50℃で10分間インキュベートして、前記デキストラン粒子懸濁液に加え、室温で2時間反応させ、磁石を用いて酸化鉄粒子を含有する粒子を精製することで、オリゴエチレンオキシドをリンカー分子とし、その末端にカルボキシル基を持つ酸化鉄粒子を含有する粒子が得られる。
HER2へ結合するIgGの可変領域の遺伝子配列(hu4D5−8)を基に、一本鎖抗体(scFv)をコードする遺伝子hu4D5−8scFvを作製した。まずhu4D5−8のVL、VH遺伝子をペプチド(GGGGS)3をコードするcDNAで連結したcDNAを作製した。5’末端には制限酵素NcoI− を、3’末端には制限酵素NotIの認識サイトを導入した。以下に塩基配列を示す。
(制限酵素の認識サイトを下線で示す。)
上記で調製したscFvを5 mM EDTAを含むリン酸バッファー(2.68 mMKCl/137 mM NaCl/1.47 mM KH2PO4/ 1m M Na2HPO4/5 mM EDTA、pH7.4)にバッファー置換後、10倍モル量のトリ(2−カルボキシエチル)ホスフィン塩酸塩(tris(2−carboxyethyl)phosphine、以下TCEPと略すことがある)によって、25℃で約2時間、還元処理した。この還元処理したscFvを、25℃で約2時間、マレイミド表面修飾された酸化鉄粒子を含有する粒子、nanomag(登録商標)−D−spio(Micromod社製、平均粒径20nm)(以後、NP−Maleimideと略す)と反応させた。仕込みの反応モル比(scFv/酸化鉄粒子を含有する粒子)は、1、4、10、15で行った。ここで「仕込み」とは反応系に加えられた、という意味であり、「仕込みの反応モル比」とは、反応系に加えられたscFvと酸化鉄粒子を含有する粒子のモル濃度の比のことをいう。反応後、100kDaのポアサイズのアミコンウルトラ−4(日本ミリポア社)を用いた限外ろ過により酸化鉄粒子を含有する粒子へ結合しなかったscFvを除去して、scFvと酸化鉄粒子を含有する粒子との複合体を得た。なお、限外ろ過後、ろ液中に含まれる未反応scFvを定量することで、酸化鉄粒子を含有する粒子へのscFvの固定化量を算出した。また、粒子収率は、濃度既知の酸化鉄粒子を含有する粒子溶液の標準曲線を用いて、サンプルの490nmにおける吸光度から求めた。以後、得られた粒子をscFv−NPと略す。scFv−NPの平均流体力学的直径を動的光散乱法で決定したところ、30〜40nm(個数換算分布)であった。
カルボジイミド法により酸化鉄粒子を含有する粒子への抗体(IgGと略すことがある)の結合を行った。20mgの1−エチル−3−(3−ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩、及び24mgのN−ヒドロキシスクシンイミドを、1mlの0.5Mβ−モルホリノエタンスルホン酸緩衝液(pH=6.3)に溶解した。次に、nanomag(登録商標)−D−spioCOOH(Micromod社製、平均粒径20nm)(以後、NP−COOHと略す)を含む粒子濃度5mg/mlの粒子懸濁液7mlに加えた。この粒子懸濁液を室温で1時間撹拌した後、PD−10脱塩カラム(GEヘルスケアバイオサイエンス社製)を用いて、カルボキシル基を活性化させた酸化鉄粒子を含有する粒子と低分子試薬を分離した。展開溶媒は炭酸ナトリウムバッファー(pH8.0)を用い、同時にバッファー交換を行った。次に、この粒子懸濁液に、抗HER2抗体としてハーセプチン(登録商標)(中外製薬製)(trastuzumab)を加えた。仕込みの反応モル比(IgG/酸化鉄粒子を含有する粒子)は、1、4、10、20で行った。この粒子懸濁液を室温で4時間撹拌した後、グリシンの1Mの水溶液をグリシン終濃度1mMとなるように加え、室温で30分間撹拌し、前記酸化鉄粒子を含有する粒子の表面の残存活性部位をブロックした。得られたハーセプチン(登録商標)を固定化した、酸化鉄粒子を含有する粒子は、ゲルろ過クロマトグラフィー(Superdexの200GL10/300カラム、GEヘルスケアバイオサイエンス社製)により精製した。展開溶媒はリン酸緩衝生理食塩水(PBS、pH=7.4)を用いた。ボイドボリューム画分にハーセプチン(登録商標)固定化した、酸化鉄粒子を含有する粒子が溶出し、これを回収した。なお、未反応抗体由来のピーク面積からその濃度を定量することで、酸化鉄粒子を含有する粒子へのIgGの固定化量を算出した。また、粒子収率は、濃度既知の酸化鉄粒子を含有する粒子の溶液の標準曲線を用いて、サンプルの490nmにおける吸光度から求めた。粒子収率(仕込み粒子量に対する回収粒子量)は20〜40%であった。以下、ハーセプチン(登録商標)を固定化した、酸化鉄粒子を含有する粒子をIgG−NPと示す。IgG−NPの平均流体力学的直径を動的光散乱法で決定したところ、50〜60nm(個数換算分布)であった。
前記「抗体と酸化鉄粒子との結合」に従い、エチレンオキシドリンカーを有する酸化鉄粒子を含有する粒子に抗体を結合させた。酸化鉄粒子を含有する粒子としてnanomag(登録商標)−D−spioCOOH−PEG(Micromod社製、平均粒径20nm、PEGリンカーの分子量300)(以後、NP−EO−COOHと略す)を用いる以外は、前記「抗体と酸化鉄粒子との結合」と同様にして行った。粒子収率(仕込み粒子量に対する回収粒子量)は70〜80%であった。以下、該ハーセプチン(登録商標)を固定化した、酸化鉄粒子を含有する粒子をIgG−EO−NPと示す。IgG−EO−NPの平均流体力学的直径を動的光散乱法で決定したところ、30〜60nm(個数換算分布)であった。また、PBS中における粒子のゼータ電位は、−4.5mVであった。
前記「抗体とエチレンオキシドリンカーを有する酸化鉄粒子との結合」に従って、酸化鉄粒子を含有する粒子へのコントロール抗体の結合を行った。ここで、コントロール抗体は、精製ヒトIgG(ポリクローナル、大日本住友製薬)を用いた。仕込みの反応モル比(IgG/酸化鉄粒子を含有する粒子)は、10で行った。酸化鉄粒子を含有する粒子へのIgGの固定化量は、4(IgG/酸化鉄粒子を含有する粒子)であった。以下、コントロール抗体を固定化した、酸化鉄粒子を含有する粒子をcIgG−NPと示す。
前記通りに作製した抗体固定化酸化鉄粒子の抗体固定化量、結合効率、抗体固定化密度、及び粒子収率を表1にまとめた。
作製した抗体固定化酸化鉄粒子のHER2への結合活性ならびに結合特異性を評価するため、蛍光免疫染色を行った。用いた細胞は、HER2陽性細胞(HER2+)として、N87を用いた。HER2陰性細胞(HER2−)として、MDA−MB−231を用いた。被検粒子としては、IgG−NP(6.7)、IgG−EO−NP(5.3)、scFv−NP(12.9)、cIgG−NPを用いた。ポジティブコントロールとして、ハーセプチン(登録商標)を用いた。検出抗体(蛍光標識抗体)は、AlexaFluor(登録商標)488標識抗humanIgG抗体(ハーセプチン(登録商標)、IgG−NP、IgG−EO−NP、cIgG−NP検出用)と、抗Histag抗体(マウス)、AlexaFluor(登録商標)488標識抗mouseIgG抗体(scFv−NP検出用)を用いた。各細胞を24ウェルプレートで一晩培養した後、細胞を5%パラホルムアルデヒド(PFA)で固定化した。細胞をPBSで洗浄後、増殖培地中で、ハーセプチン(登録商標)ならびに各抗体固定化酸化鉄粒子を添加し、1時間、37℃でインキュベートした。その後、増殖培地で洗浄後、検出抗体でインキュベート(1時間、37℃)し、洗浄後、蛍光顕微鏡で観察を行った。
作製した抗体固定化酸化鉄粒子の光音響信号発信能を評価するための被検粒子として、IgG−NP(6.7)、IgG−EO−NP(5.3)、scFv−NP(12.9)、cIgG−NPを用いた。また、抗体を固定化していない酸化鉄粒子(NP−Maleimide、NP−COOH、NP−EO−COOH)の光音響信号発信能も測定した。各粒子は、少なくとも3つの濃度で光音響信号の測定を行った。溶媒はPBSを用いた。光音響信号の測定前後で、710nmの吸光度を測定した結果、その変動は5%以内であった。なお、すべての粒子のマグネタイト含有量ならびに酸化鉄粒子の粒径(すなわちコア粒子の粒径)は同じである。
前記「抗体とエチレンオキシドリンカーを有する酸化鉄粒子との結合」に従い、20nm酸化鉄粒子に抗体(ハーセプチン(登録商標))を結合させた。仕込みの反応モル比(抗体/酸化鉄粒子を含有する粒子)は、20で行った。酸化鉄粒子を含有する粒子への抗体の固定化量は、5.4(抗体/酸化鉄粒子を含有する粒子)であった。以下、該ハーセプチン(登録商標)を固定化した、酸化鉄粒子を含有する粒子をIgG−EO−NP(5.4)と示す。IgG−EO−NP(5.4)の平均流体力学的直径を動的光散乱法で決定したところ、39.4nm(個数換算分布)であった。また、PBS中における粒子のゼータ電位は、−4.5mVであった。
前記「一本鎖抗体hu4D5−8scFvと酸化鉄粒子との結合」に従い、エチレンオキシドリンカーを有する酸化鉄粒子を含有する粒子に人工抗体scFvを結合させた。酸化鉄粒子を含有する粒子としてマレイミド表面修飾されたnanomag(登録商標)−D−spio(Micromod社製、平均粒径20nm、PEGリンカーの分子量300)(以後、NP−EO−Maleimide―20と略す)を用いた。NP−EO−Maleimide―20を用いた以外は、前記「一本鎖抗体hu4D5−8scFvと酸化鉄粒子との結合」と同様にして行った。仕込みの反応モル比(scFv/酸化鉄粒子を含有する粒子)は、20で行った。粒子収率は、エチレンオキシドリンカーを持たないNP−Maleimideを用いた場合の粒子収率(最大57%)よりも高く、74%であった。これは、IgG−EO−NPの結果と同様に、エチレンオキシドリンカーにより、粒子の分散安定性が向上したと考えられる。以下、ここで得られたscFvを固定化した、酸化鉄粒子を含有する粒子をscFv−EO−NP―20と示す。scFv−EO−NP―20の平均流体力学的直径を動的光散乱法で決定したところ、22.3nm(個数換算分布)であった。酸化鉄粒子を含有する粒子へのscFvの固定化量は、12.2(scFv/粒子)であった。また、PBS中における粒子のゼータ電位は、−4.6mVであった。
(HER2結合性ペプチドと酸化鉄粒子との結合)
HER2結合性ペプチド(アミノ酸配列MARSGLGGKGSC、以後HBPと略す)をリン酸バッファー(2.68mM KCl/137mM NaCl/1.47mM KH2PO4/1mM Na2HPO4/5mM EDTA、pH7.4)に溶解させ、4℃で約16時間、NP−EO−Maleimide―20と反応させた。仕込みの反応モル比(HBP/酸化鉄粒子を含有する粒子)は、71で行った。反応後、10kDaのポアサイズのアミコンウルトラ−4(日本ミリポア社)を用いた限外ろ過により酸化鉄粒子を含有する粒子へ結合しなかったHBPを除去して、HBPと酸化鉄粒子を含有する粒子との複合体を得た。なお、限外ろ過後、ろ液中に含まれる未反応HBPを定量することで、酸化鉄粒子を含有する粒子へのHBPの固定化量を算出した。酸化鉄粒子を含有する粒子へのHBPの固定化量は、47(HBP/酸化鉄粒子を含有する粒子)であった。以下、ここで得られたHBPを固定化した、酸化鉄粒子を含有する粒子をHBP−EO−NP―20と示す。HBP−EO−NP―20の平均流体力学的直径を動的光散乱法で決定したところ、28.1nm(個数換算分布)であった。また、PBS中における粒子のゼータ電位は、−0.6mVであった。ここで用いたHER2結合性ペプチドは、Int.J.Cancer,92,748−755(2001)に報告されたHER2結合ペプチドMARSGLを元に設計された。このペプチドに、リンカー配列としてGGKGSCを連結させており、C末端のシステインの側鎖チオールを用いて、粒子に結合させている。
HER2発現細胞に対する粒子の結合能評価を行った。前日にHER2陽性細胞(N87細胞)を24ウェルプレートに播種した(5x105 cells/well)。翌日、培地を除去し、増殖培地200uLを入れた後、粒子サンプルを添加した。37℃で4時間、CO2インキュベータ内で静置した。その後、粒子を含む培地を除去し、PBS 1mLで2回、しっかり洗った。PBSを除去した後、細胞を溶かすため、1% Triton−X100/PBS溶液を150uL/well加えた。室温で2時間以上インキュベートした。次いで、濃塩酸(12N)を150uL/well加え、室温で2時間以上インキュベートした。このサンプル酸溶解液(6N HCl溶液、300uL)中の鉄量を測定することで、細胞に結合した粒子濃度が求められた。粒子のN87に対する飽和結合カーブから、スキャッチャードプロットを作成し、細胞に対する粒子の見かけの平衡解離定数(Kd)を求めた。その結果、IgG−EO−NP(5.4)、scFv−EO−NP―20、ならびにHBP−EO−NP―20のN87細胞への平衡解離定数(Kd)は、それぞれ、10nM、5.8nM、ならびに78nMであった。scFvを固定化した粒子において、最も強い結合能が得られた。
前記通りに作製したリガンド分子固定化酸化鉄粒子の担癌マウスにおける体内動態を評価した。被検粒子として、IgG−EO−NP(5.4)、cIgG−NP、scFv−EO−NP―20、ならびにHBP−EO−NP―20を用いた。まず、公知の方法に従い、各粒子を放射性同位体(以後、RIと略す)で標識した。RI核種としては、エネルギー・半減期・放射標識の容易性の観点から最も体内動態検討に適している111−インジウム(111Inと略す事がある)を用いた。111Inを粒子に標識するために、二官能性キレートのジエチレントリアミン5酢酸(DTPA、diethylene−triamine−pentaacetic acid)無水物(DTPA anhydride)を用いた。まず、抗体のリジン残基あるいは粒子のアミノ基にDTPA無水物を反応させ、Sephadex G−50(GEヘルスケア・ジャパン株式会社製)で精製した。その後、111−インジウムを標識してPD−10(GEヘルスケア・ジャパン株式会社製)で精製することで、RI標識粒子を得た。
実施例5に従い、エチレンオキシドリンカーを有する50nm酸化鉄粒子を含有する粒子に人工抗体scFvを結合させた。酸化鉄粒子を含有する粒子としてマレイミド表面修飾された50nmの酸化鉄粒子を含有する粒子、nanomag(登録商標)−D−spio(Micromod社製、平均粒径50nm、PEGリンカーの分子量300)(以後、NP−EO−Maleimide―50と略す)を用いた。NP−EO−Maleimide―50を用い、仕込みの反応モル比(scFv/酸化鉄粒子を含有する粒子)を125で行った以外は、実施例4と同様にして行った。粒子収率は、76%であった。以下、ここで得られたscFvを固定化した、酸化鉄粒子を含有する粒子をscFv−EO−NP―50と示す。scFv−EO−NP―50の平均流体力学的直径を動的光散乱法で決定したところ、54.5nm(個数換算分布)であった。酸化鉄粒子を含有する粒子へのscFvの固定化量は、91(scFv/粒子)であった。また、PBS中における粒子のゼータ電位は、−0.5mVであった。
実施例5に従い、エチレンオキシドリンカーを有する100nm酸化鉄粒子を含有する粒子に人工抗体scFvを結合させた。酸化鉄粒子を含有する粒子としてマレイミド表面修飾された100nmの酸化鉄粒子を含有する粒子、nanomag(登録商標)−D−spio(Micromod社製、平均粒径100nm、PEGリンカーの分子量300)(以後、NP−EO−Maleimide―100と略す)を用いた。NP−EO−Maleimide―100を用い、仕込みの反応モル比(scFv/酸化鉄粒子を含有する粒子)を500で行った以外は、実施例4と同様にして行った。粒子収率は、62%であった。以下、ここで得られたscFvを固定化した、酸化鉄粒子を含有する粒子をscFv−EO−NP―100と示す。scFv−EO−NP―100の平均流体力学的直径を動的光散乱法で決定したところ、114.2nm(個数換算分布)であった。酸化鉄粒子を含有する粒子へのscFvの固定化量は、375(scFv/粒子)であった。また、PBS中における粒子のゼータ電位は、−3.1mVであった。
実施例5に従い、エチレンオキシドリンカーを有する200nm酸化鉄粒子を含有する粒子に人工抗体scFvを結合させた。酸化鉄粒子を含有する粒子としてマレイミド表面修飾された200nmの酸化鉄粒子を含有する粒子、nanomag(登録商標)−D(Micromod社製、平均粒径200nm、PEGリンカーの分子量300)(以後、NP−EO−Maleimide―200と略す)を用いた。NP−EO−Maleimide―200を用い、仕込みの反応モル比(scFv/酸化鉄粒子を含有する粒子)を2000で行った以外は、実施例4と同様にして行った。粒子収率は、80%であった。以下、ここで得られたscFvを固定化した、鉄粒子を含有する粒子をscFv−EO−NP―200と示す。scFv−EO−NP―200の平均流体力学的直径を動的光散乱法で決定したところ、171.7nm(個数換算分布)であった。酸化鉄粒子を含有する粒子へのscFvの固定化量は、1460(scFv/粒子)であった。また、PBS中における粒子のゼータ電位は、−1.8mVであった。
実施例7に記載の方法に従い、粒子サイズの異なるscFv−NPのHER2への結合能評価を行った。その結果、scFv−EO−NP―20、scFv−EO−NP―50、scFv−EO−NP―100、scFv−EO−NP―200のHER2への平衡解離定数(Kd)は、それぞれ0.01nM、0.69nM、0.36nM、0.05nMであった。また、実施例8に記載の方法に従い、粒子サイズの異なるscFv−NPのHER2発現細胞に対する結合能評価を行った。その結果、scFv−EO−NP―20、scFv−EO−NP―50、scFv−EO−NP―100、scFv−EO−NP―200のHER2発現細胞に対する平衡解離定数(Kd)は、それぞれ5.8nM、7.87nM、1.63nM、0.09nMであった。これらの結果より、scFv−EO−NP―200において、最も強い結合能が得られた。
前記通りに作製した粒子サイズの異なるscFv−NPの担癌マウスにおける体内動態を評価した。被検粒子として、scFv−EO−NP―20、scFv−EO−NP―50、scFv−EO−NP―100、ならびにscFv−EO−NP―200を用いた。実施例9に従い、RI標識粒子を調製し、担癌モデルマウスに静脈内投与し、粒子の体内動態を臓器摘出法により調べた。マウスへの粒子の投与量は、鉄量として0.22mg/匹とした。投与粒子数は、粒子サイズで異なり、次のとおりであった。scFv−EO−NP―20、scFv−EO−NP―50、scFv−EO−NP―100、scFv−EO−NP―200のそれぞれで7.4x1013個/匹、5.1x1012個/匹、7.0x1011個/匹、3.2x1010個/匹であった。
作製したリガンド分子を固定化した、酸化鉄粒子を含有する粒子のモル吸光係数(ε)ならびに光音響信号(PA信号と略す事がある)を評価した。モル吸光係数の測定は、粒子をPBS中に分散させ、波長710nmの吸光度を計測する事で求めた。また、PA信号評価は、実施例3の方法に従った。なお、PA信号は、得られた信号強度値(電圧値:V)をレーザー入射強度(J)ならびに粒子濃度(nM)で規格化した値(V/J/nM)で示した。結果を以下の表2、表3にまとめた。これらの結果より、図4Cにも示されているように、粒子のモル吸光係数ならびにPA信号は粒子サイズに依存しており(表3)、固定化されたリガンド分子には依存しない事が示された(表2)。粒子のモル吸光係数ならびにPA信号は粒子サイズが大きくなるにつれて増大した。このことは、PA信号とモル吸光係数は比例関係にあることを示すものである。
図8に、担癌マウスに投与された粒子サイズの異なるscFv固定化酸化鉄粒子の腫瘍集積性(投与後24時間目、%ID/g表記)を示した。scFv−EO−NP―20、scFv−EO−NP―50、scFv−EO−NP―100、scFv−EO−NP―200、それぞれの、腫瘍(N87細胞)への%ID/g(実施例14の結果)、ならびにscFv−EO−NP―200について、HER2陰性腫瘍(SUIT2細胞)への%ID/gを示した(N87細胞の代わりにSUIT2細胞を使う以外は、実施例9ならびに実施例14に従って試験した)。各%ID/gの統計的な有意差について、検定結果を示してある(図中、*、#で有意差を示す)。その結果、腫瘍集積性(HER2陽性腫瘍)は、scFv−EO−NP―200が最も高く、次いでscFv−EO−NP―20、次に、scFv−EO−NP―50ならびにscFv−EO−NP―100であった(scFv−EO−NP―50とscFv−EO−NP―100の間には有意差はない)。また、scFv−EO−NP―200について、HER2陰性腫瘍(SUIT2細胞)への集積性は、HER2陽性腫瘍(N87細胞)に比べて、有意に低い事が確認された。これは、本実施例のscFv−EO−NP―200の腫瘍集積は、HER2特異性を有していることを意味し、光音響イメージング用造影剤、例えば、HER2分子を特異的に検出できる光音響イメージング用造影剤として十分に機能しうることが実証された。なお、scFv−EO−NP―200の試験の際、N87腫瘍ならびにSUIT2腫瘍の大きさが1〜3mm程度であった。本系における、腫瘍集積性に対する腫瘍サイズの影響については不明であるが、影響している可能性がある。
酸化鉄粒子を含有する粒子としてマレイミド表面修飾された200nmの酸化鉄粒子を含有する粒子、nanomag(登録商標)−D(Micromod社製、平均粒径200nm、PEGリンカーの分子量300)(以後、NP−EO−Maleimide―200と略す)を用いた。HER2結合性ペプチド(アミノ酸配列MARSGLGGKGSC 配列番号3 、以後HBPと略す)をリン酸バッファー(2.68mM KCl/137mM NaCl/1.47mM KH2PO4/1mM Na2HPO4/5mM EDTA、pH7.4)に溶解させ、25℃で約2時間、NP−EO−Maleimide―200と反応させた。仕込みの反応モル比(HBP/酸化鉄粒子を含有する粒子)は、1X106で行った。反応後、100kDaのポアサイズのアミコンウルトラ−4(日本ミリポア社)を用いた限外ろ過により酸化鉄粒子を含有する粒子へ結合しなかったHBPを除去して、HBPと酸化鉄粒子を含有する粒子との複合体を得た。なお、限外ろ過後、ろ液中に含まれる未反応HBPを定量することで、酸化鉄粒子を含有する粒子へのHBPの固定化量を算出した。酸化鉄粒子を含有する粒子へのHBPの固定化量は、1.8×105(HBP/酸化鉄粒子を含有する粒子)であった。以下、ここで得られたHBPを固定化した、酸化鉄粒子を含有する粒子をHBP1−EO−NP―200と示す。HBP−EO−NP―200の平均流体力学的直径を動的光散乱法で決定したところ、161.1nm(個数換算分布)であった。また、PBS中における粒子のゼータ電位は、−6.5mVであった。HBP1−EO−NP―200の710nmにおけるモル吸光係数(ε)は、1.1×1010(M−1×cm−1)であった。710nmにおける光音響信号(V/J/nM)は、219.1であった。
実施例17に従い、HER2結合性ペプチドの固定化数が異なる200nm酸化鉄粒子を調製した。仕込みの反応モル比(HBP/酸化鉄粒子を含有する粒子)をそれぞれ、1X105、2X104、2X103で行った以外は実施例17と同様にして行った。得られたHER2結合性ペプチドを固定化した、酸化鉄粒子を含有する粒子を、それぞれ、HBP2−EO−NP―200、HBP3−EO−NP―200、HBP4−EO−NP―200と略す。それぞれの酸化鉄粒子を含有する粒子へのHBPの固定化量(HBP/酸化鉄粒子を含有する粒子)は、4.4×104、1.4×104、2.0×103であった(2.0×103については、ペプチドの仕込みモル量の値を記す)。それぞれの平均流体力学的直径ならびにゼータ電位は、実施例17で調製されたHBP1−EO−NP―200とほとんど変わらなかった。
実施例8に従い、粒子のN87細胞に対する飽和結合カーブから、スキャッチャードプロットを作成し、細胞に対する粒子の見かけの平衡解離定数(Kd)を求めた。その結果、HBP1−EO−NP―200、HBP2−EO−NP―200、ならびにHBP3−EO−NP―200のN87細胞への平衡解離定数(Kd)は、それぞれ、0.67nM、0.43nM、ならびに0.49nMであった。HER2結合性ペプチドの固定化数の最も少ないHBP4−EO−NP―200では、結合が弱く、スキャッチャードプロットから平衡解離定数(Kd)が求められなかった。HER2に対するHER2結合性ペプチド固有の平衡解離定数(Kd)は、μM以下であると考えられ、非常に弱い。本実施例で示すように、HER2結合性ペプチドを粒子に大量に固定化することで、HER2への強い結合能を有する酸化鉄粒子を含有する粒子が得られた。
実施例17、18に従い、エチレンオキシドリンカーの分子量が2000であるHBP−EO−NP―200を調製した。酸化鉄粒子を含有する粒子としてマレイミド表面修飾された200nmの酸化鉄粒子を含有する粒子、nanomag(登録商標)−D(Micromod社製、平均粒径200nm、PEGリンカーの分子量2000)(以後、NP−EO2k−Maleimide―200と略す)を用いた以外は実施例17、18と同様にして行った。得られたHER2結合性ペプチドを固定化した、酸化鉄粒子を含有する粒子を、それぞれ、HBP1−EO2k−NP―200、HBP2−EO2k−NP―200、HBP3−EO2k−NP―200、HBP4−EO2k−NP―200と略す。それぞれの酸化鉄粒子を含有する粒子へのHBPの固定化量(HBP/酸化鉄粒子を含有する粒子)は、2.5×105、4.9×104、1.2×104、2.0×103であった(2.0×103については、ペプチドの仕込みモル量の値を記す)。それぞれの平均流体力学的直径(キュムラント値)は、248nm、207nm、250nm、ならびに211nmであった。それぞれのPBS中におけるゼータ電位は、−2.6mV、−2.8mV、−2.8mV、ならびに−3.1mVであった。
HBP−EO−NP―200の担癌マウスにおける体内動態を評価した。実施例9に従い、RI標識粒子を調製し、担癌モデルマウスに静脈内投与し、粒子の体内動態を臓器摘出法により調べた。マウスへの粒子の投与量は、鉄量として0.22mg/匹とした。投与粒子数は、3.2x1010個/匹であった。
実施例12に従い、分子量2000あるいは分子量5000のエチレンオキシドリンカーを有する200nm酸化鉄粒子を含有する粒子それぞれに人工抗体scFvを結合させた。酸化鉄粒子を含有する粒子としてマレイミド表面修飾された200nmの酸化鉄粒子を含有する粒子、nanomag(登録商標)−D(Micromod社製、平均粒径200nm、PEGリンカーの分子量2000)(以後、NP−EO2k−Maleimide―200と略す)ならびに、マレイミド表面修飾された200nmの酸化鉄粒子を含有する粒子、nanomag(登録商標)−D(Micromod社製、平均粒径200nm、PEGリンカーの分子量5000)(以後、NP−EO5k−Maleimide―200と略す)を用いた以外は、実施例12と同様にして行った。ここで得られたscFvを固定化した、酸化鉄粒子を含有する粒子をscFv−EO2k−NP―200、scFv−EO5k−NP―200と示す。scFv−EO2k−NP―200とscFv−EO5k−NP―200の平均流体力学的直径(個数換算分布)を動的光散乱法で決定したところ、それぞれ、175.6nm、180.9nmであった。酸化鉄粒子を含有する粒子へのscFvの固定化量(scFv/粒子)は、それぞれ、1490、1380であった。また、PBS中における粒子のゼータ電位は、それぞれ、−3.9mV、−4.0mVであった。
scFv−EO2k−NP―200とscFv−EO5k−NP―200の担癌マウスにおける体内動態を評価した。実施例9に従い、RI標識粒子を調製し、担癌モデルマウスに静脈内投与し、粒子の体内動態を臓器摘出法により調べた。マウスへの粒子の投与量は、鉄量として0.22mg/匹とした。投与粒子数は、3.2x1010個/匹であった。
図11に、自作した小動物用光音響イメージング装置の略図を示す。TI:SAレーザ光源からのレーザー(波長:710nm、パルス幅 約10ナノ秒、繰返し10HZ、ビーム径:約2ミリメーター))を適度に減衰させ、小動物に照射し、発生した光音響信号を超音波トランスデューサー(BD=1.5ミリメーター, FC=3.5MHZ)で検出し、アンプで信号増幅後、オシロスコープ(50Ω INPUT IMPEDANCE、2.5GS/S、RECORD LENGTH 10K)に取り込んだ。走査範囲は3.5センチ四方とした。
粒径の異なる酸化鉄粒子のモル吸光係数と光音響信号は、以下の方法で求めた。
ポリオキシエチレンソルビタン系脂肪酸エステル、疎水性ポリマー、及び酸化鉄粒子からなる光音響イメージング用造影剤は、以下の方法で作製した。
リン脂質、ポリオキシエチレンソルビタン系脂肪酸エステル、疎水性ポリマー、及び酸化鉄粒子からなる光音響イメージング用造影剤は、以下の方法で作製した。
DLSを用いて、NP1及びNP2の粒径を求めた。NP1及びNP2は水に分散させ、動的光散乱解析装置(DLS、大塚電子製、ELS−Z)を用いて、平均粒径を測定した。その結果を図17A及び図18Aに示す。NP1及びNP2の平均粒径(重量換算)は、各々205及び176nmであった。
表2.各波長における光音響イメージング用造影剤の粒子数1モルあたりの規格化光音響信号
NP2の表面に導入されたリン脂質の量は、末端のマレイミド基の活性を利用して定量した。NP2とL−システインを混合し、1晩インキュベートすることにより、NP2上のマレイミド基と、L−システイン上のチオール基との共有結合反応をさせた。遠心分離でNP2を沈殿させ、上澄みを回収することで、未反応のL−システインを回収した。未反応のL−システインは、5,5’−Dithiobis(2−nitrobenzoic acid)と混合し、420nmの吸光度を測定することにより定量した。1粒のNP2上にあるリン脂質の量は、5.6×105個/個であった。
HER2へ結合するIgGの可変領域の遺伝子配列(hu4D5−8)を基に、一本鎖抗体(scFv)をコードする遺伝子hu4D5−8scFvを作製した。まずhu4D5−8のVL、VH遺伝子をペプチド(GGGGS)3をコードするcDNAで連結したcDNAを作製した。5’末端には制限酵素NcoI− を、3’末端には制限酵素NotIの認識サイトを導入した。以下に塩基配列を示す。
5’−CCATGGATATCCAGATGACCCAGTCCCCGAGCTCCCTGTCCGCCTCTGTGGGCGATAGGGTCACCATCACCTGCCGTGCCAGTCAGGATGTGAATACTGCTGTAGCCTGGTATCAACAGAAACCAGGAAAAGCTCCGAAACTACTGATTTACTCGGCATCCTTCCTCTACTCTGGAGTCCCTTCTCGCTTCTCTGGATCCAGATCTGGGACGGATTTCACTCTGACCATCAGCAGTCTGCAGCCGGAAGACTTCGCAACTTATTACTGTCAGCAACATTATACTACTCCTCCCACGTTCGGACAGGGTACCAAGGTGGAGATCAAAGGCGGTGGTGGCAGCGGTGGCGGTGGCAGCGGCGGTGGCGGTAGCGAGGTTCAGCTGGTGGAGTCTGGCGGTGGCCTGGTGCAGCCAGGGGGCTCACTCCGTTTGTCCTGTGCAGCTTCTGGCTTCAACATTAAAGACACCTATATACACTGGGTGCGTCAGGCCCCGGGTAAGGGCCTGGAATGGGTTGCAAGGATTTATCCTACGAATGGTTATACTAGATATGCCGATAGCGTCAAGGGCCGTTTCACTATAAGCGCAGACACATCCAAAAACACAGCCTACCTGCAGATGAACAGCCTGCGTGCTGAGGACACTGCCGTCTATTATTGTTCTAGATGGGGAGGGGACGGCTTCTATGCTATGGACTACTGGGGTCAAGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCGGCGGCCGC−3’(配列番号1)
(制限酵素の認識サイトを下線で示す。)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIKGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSSAAALEHHHHHHGGC(配列番号2)
上記で調製したscFvを5 mM EDTAを含むリン酸バッファー(2.68 mM KCl/137 mM NaCl/1.47 mM KH2PO4/ 1m M Na2HPO4/5 mM EDTA、pH7.4)にバッファー置換後、scFvのモル量に対して20倍のトリ(2−カルボキシエチル)ホスフィン塩酸塩(TCEP)によって、25℃で約2時間、還元処理した。この還元処理したscFvを、25℃で3時間、上記で作製したNP2と反応させた。NP2の粒子モル量に対して2000倍のscFvを反応に用いた。遠心分離により、scFvを固定化したNP2の沈殿物と、未反応のscFvの上澄みを得た。未反応のscFvを液体クロマトグラフィーで定量した。1粒のNP2上に固定化されたscFvは、1.4×103個/個であった。
両親媒性ポリマー、及び酸化鉄粒子からなる光音響イメージング用造影剤は、以下の方法で作製した。
粒径の異なる光音響イメージング用造影剤は、以下の方法で作製した。酸化鉄粒子として、オレイン酸に被覆された50nmの酸化鉄粒子(SOR−50、Ocean NanoTech製)と、オレイン酸に被覆された5nmの酸化鉄粒子(SOR−05、Ocean NanoTech製)を用いた。
2 酸化鉄粒子
3 両親媒性化合物
4 リン脂質
5 ポリオキシエチレンソルビタン系脂肪酸エステル
6 両親媒性ポリマー
7 疎水性ポリマー
8 捕捉分子
9 光音響イメージング用造影剤
10 第一液体
11 第二液体
12 エマルジョン
13 水
Claims (22)
- 近赤外線領域の光を吸収する酸化鉄粒子を含有する粒子と、前記酸化鉄粒子を含有する粒子に固定された少なくとも1つ以上のリガンド分子とを含み、前記リガンド分子の固定化密度が標的分子の細胞表面密度以上であることを特徴とし、化1で表される光音響イメージング用造影剤。
MNP−((L)l−(P)m)n (化1)(式中、MNPは酸化鉄粒子を含有する粒子であり、Lはリンカー分子、Pはリガンド分子である。lは0あるいは1である。m、nは1以上の整数である。) - 前記リガンド分子は、前記酸化鉄粒子を含有する粒子1個に対して、3個以上、固定されていることを特徴とする請求項1に記載の光音響イメージング用造影剤。
- 前記リガンド分子が、少なくともモノクローナル抗体、Fab、Fab’、F(ab’)、一本鎖抗体(scFv)、もしくは抗体の相補性決定領域(CDR)を含むペプチド、または上皮成長因子受容体2(HER2)に結合する抗体またはペプチドの何れかであることを特徴とする請求項1または2のいずれか1項に記載の光音響イメージング用造影剤。
- 前記リンカー分子がポリエチレンオキシドであることを特徴とする請求項1乃至3のいずれか1項に記載の光音響イメージング用造影剤。
- 前記ポリエチレンオキシドの分子量が100から10000であることを特徴とする請求項4に記載の光音響イメージング用造影剤。
- 前記酸化鉄粒子を含有する粒子がデキストランをマトリックスとする粒子であることを特徴とする請求項1乃至5のいずれか1項に記載の光音響イメージング用造影剤。
- 前記酸化鉄粒子を含有する粒子がマグネタイト(Fe3O4)であることを特徴とする請求項1乃至6のいずれか1項に記載の光音響イメージング用造影剤。
- 請求項1乃至7のいずれか1項に記載の光音響イメージング用造影剤を用いた標的分子を検出するためのイメージング方法であって、該光音響イメージング用造影剤を細胞、組織、動物、あるいはヒトの検体に投与するステップと、パルス光を該検体に照射するステップと、該検体内に存在する該標的分子に結合した該光音響イメージング用造影剤由来の光音響信号を測定するステップと、を少なくとも有することを特徴とする標的分子の光音響イメージング方法。
- 前記酸化鉄粒子を含有する粒子の粒子モル吸光係数が109(M−1・cm−1)以上であることを特徴とする請求項1乃至7のいずれか1項に記載の光音響イメージング用造影剤。
- 前記酸化鉄粒子を含有する粒子中に含まれる鉄原子量が107個以上であることを特徴とする請求項1乃至7のいずれか1項に記載の光音響イメージング用造影剤。
- 酸化鉄粒子を有する光音響イメージング用造影剤において、一本鎖抗体が前記粒子に結合していることを特徴とする光音響イメージング用造影剤。
- 請求項11に記載の光音響イメージング用造影剤が投与された検体に600nm乃至1300nmの波長領域の光を照射する工程と、
前記検体内に存在する前記造影剤から発生する音響波を検出する工程と、
を有することを特徴とする光音響イメージング方法。 - 酸化鉄粒子を有する光音響イメージング用造影剤において、前記酸化鉄粒子の粒径が15nm以上500nm以下であることを特徴とする光音響イメージング用造影剤。
- 酸化鉄粒子を有する光音響イメージング用造影剤において、前記酸化鉄粒子の粒径が20nm以上500nm以下であることを特徴とする光音響イメージング用造影剤。
- 前記酸化鉄粒子が、炭素数6以下のヒドロキシカルボン酸を有するモノマーからなるホモポリマー、又は前記ヒドロキシカルボン酸を有する2種類のモノマーからなるコポリマー、ポリスチレン、ポリメタクリル酸メチルのいずれかの疎水性ポリマーで被覆されていることを特徴とする請求項13または14に記載の光音響イメージング用造影剤。
- 請求項13乃至15のいずれか1項に記載の光音響イメージング用造影剤はさらに両親媒性化合物を有し、前記両親媒性化合物が、リン脂質、ポリオキシエチレンソルビタン系脂肪酸エステル、両親媒性ポリマーのうちの、各々単独の両親媒性化合物、又は各々複数の両親媒性化合物であることを特徴とする請求項1及び2の光音響イメージング用造影剤。
- 前記ポリオキシエチレンソルビタン系脂肪酸エステルが、Tween20、Tween40、Tween60、及びTween80のいずれかであることを特徴とする請求項16に記載の光音響イメージング用造影剤。
- 前記リン脂質が、アミノ基、カルボキシル基、NHS(N−ヒドロキシスクシニミド)基、マレイミド基、メトキシ基、及び水酸基より選ばれた1つ以上の官能基と、PEG(polyethylene glycol)鎖を有するホスファチジル系リン脂質であることを特徴とする請求項16に記載の光音響イメージング用造影剤。
- 前記両親媒性ポリマーがPEG鎖を導入したオクタデセン−無水マレイン酸交互共重合体、PEG鎖を導入したスチレン−無水マレイン酸共重合体、PEG鎖を導入したポリ乳酸、PEG鎖を導入した乳酸−グリコール酸共重合体、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール、ポリビニルアルコールのいずれかであることを特徴とする請求項16に記載の光音響イメージング用造影剤。
- 前記両親媒性化合物の少なくとも一部に捕捉分子が結合した請求項13乃至19のいずれか1項に記載の光音響イメージング用造影剤。
- 前記捕捉分子が、抗体、抗体フラグメント、酵素、生物活性ペプチド、グリコペプチド、糖鎖、脂質、分子認識化合物より選ばれた請求項20に記載の光音響イメージング用造影剤。
- 請求項13乃至20のいずれかに記載の光音響イメージング用造影剤が投与された検体に600nm乃至1300nmの波長領域の光を照射する工程と、
前記検体内に存在する前記造影剤から発生する音響波を検出する工程と、
を有することを特徴とする光音響イメージング方法。
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US20100291113A1 (en) * | 2007-10-03 | 2010-11-18 | Cornell University | Treatment of Proliferative Disorders Using Antibodies to PSMA |
ES2712732T3 (es) | 2009-02-17 | 2019-05-14 | Cornell Res Foundation Inc | Métodos y kits para el diagnóstico de cáncer y la predicción de valor terapéutico |
CN102753194B (zh) | 2009-12-02 | 2015-07-08 | 伊麦吉纳博公司 | 靶向人前列腺特异性膜抗原的j591微抗体和双抗体 |
JP6234064B2 (ja) * | 2012-05-23 | 2017-11-22 | キヤノン株式会社 | 重合体、前記重合体を用いた核磁気共鳴分析用または磁気共鳴イメージング用の造影剤、化合物、前記重合体を用いた核磁気共鳴分析方法および磁気共鳴イメージング方法 |
JP6195339B2 (ja) * | 2012-07-10 | 2017-09-13 | キヤノン株式会社 | 粒子及び前記粒子を有する光音響用造影剤 |
EP2896398A4 (en) * | 2012-09-12 | 2016-05-04 | Univ Tsukuba | SURFACE MODIFIED IRON OXIDE PARTICLES FOR CANCER CREATION |
US9155804B2 (en) | 2012-09-26 | 2015-10-13 | General Electric Company | Contrast enhancement agents and method of use thereof |
CN106456111B (zh) | 2014-03-12 | 2020-02-11 | 富士胶片索诺声公司 | 具有具有集成中心匹配层的超声透镜的高频超声换能器 |
JP6590503B2 (ja) | 2015-04-01 | 2019-10-16 | キヤノン株式会社 | 光音響装置および情報取得装置 |
US10743770B2 (en) | 2015-05-26 | 2020-08-18 | Canon Kabushiki Kaisha | Photoacoustic device |
US11254744B2 (en) | 2015-08-07 | 2022-02-22 | Imaginab, Inc. | Antigen binding constructs to target molecules |
US11266745B2 (en) | 2017-02-08 | 2022-03-08 | Imaginab, Inc. | Extension sequences for diabodies |
CN108395480A (zh) * | 2017-02-08 | 2018-08-14 | 广州百尼夫生物科技有限公司 | 嵌合抗原受体及其基因和重组表达载体、carher2-nkt细胞及其制备方法和应用 |
JP2018134073A (ja) * | 2017-02-21 | 2018-08-30 | 東ソー株式会社 | 未分化細胞吸着剤、および細胞の分離方法 |
CN106955362B (zh) * | 2017-03-08 | 2020-08-07 | 上海师范大学 | 纳米探针在制备肿瘤靶向光声成像信号药物中的应用 |
CN110354281B (zh) * | 2019-06-20 | 2021-09-24 | 中南大学湘雅医院 | 一种双靶向多模态分子影像探针及其制备方法和应用 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2007503514A (ja) * | 2003-08-26 | 2007-02-22 | スミスクライン・ビーチャム・コーポレイション | グリセロールおよびポリエチレングリコールのヘテロ官能性コポリマー、そのコンジュゲートおよび組成物 |
WO2009049083A1 (en) * | 2007-10-09 | 2009-04-16 | Washington University In St. Louis | Particles for imaging |
JP2009137950A (ja) * | 2007-11-16 | 2009-06-25 | Canon Inc | 光音響造影剤 |
Family Cites Families (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5262176A (en) | 1986-07-03 | 1993-11-16 | Advanced Magnetics, Inc. | Synthesis of polysaccharide covered superparamagnetic oxide colloids |
US6217848B1 (en) * | 1999-05-20 | 2001-04-17 | Mallinckrodt Inc. | Cyanine and indocyanine dye bioconjugates for biomedical applications |
CN100452254C (zh) * | 2004-12-02 | 2009-01-14 | 北京大学 | 四氧化三铁磁流体及其制备方法和应用 |
US20100179303A1 (en) * | 2007-04-27 | 2010-07-15 | The Regents Of The University Of California | Site-specific conjugation of ligands to nanoparticles |
KR20080104928A (ko) * | 2007-05-29 | 2008-12-03 | 율촌화학 주식회사 | 암의 진단과 치료를 동시에 수행하는 항암제 |
US20100292427A1 (en) * | 2007-08-06 | 2010-11-18 | Canon Kabushiki Kaisha | Structural member and method of producing the structural member |
WO2009031716A1 (en) * | 2007-09-07 | 2009-03-12 | Kyoto University | Nuclear magnetic resonance measuring method |
JP2009231994A (ja) | 2008-03-20 | 2009-10-08 | Brother Ind Ltd | ファクシミリ通信システムおよびファクシミリ装置 |
US8652441B2 (en) * | 2009-10-05 | 2014-02-18 | Canon Kabushiki Kaisha | Contrast agent for photoacoustic imaging and photoacoustic imaging method |
JP4837107B2 (ja) | 2010-02-04 | 2011-12-14 | 旭化成せんい株式会社 | エアバッグ用基布およびエアバッグ |
-
2010
- 2010-10-05 WO PCT/JP2010/005958 patent/WO2011043061A1/ja active Application Filing
- 2010-10-05 JP JP2011535281A patent/JPWO2011043061A1/ja active Pending
- 2010-10-05 EP EP10821738.1A patent/EP2471556A4/en not_active Withdrawn
- 2010-10-05 CN CN201080043737.1A patent/CN102573925B/zh active Active
-
2011
- 2011-01-26 US US13/014,345 patent/US20110117023A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2007503514A (ja) * | 2003-08-26 | 2007-02-22 | スミスクライン・ビーチャム・コーポレイション | グリセロールおよびポリエチレングリコールのヘテロ官能性コポリマー、そのコンジュゲートおよび組成物 |
WO2009049083A1 (en) * | 2007-10-09 | 2009-04-16 | Washington University In St. Louis | Particles for imaging |
JP2009137950A (ja) * | 2007-11-16 | 2009-06-25 | Canon Inc | 光音響造影剤 |
Non-Patent Citations (4)
Title |
---|
JPN6014040334; Martin P. Mienkina, et al.: 'Experimental Characterization ofFerucarbotran (Resovist R) as aPhotoacoustic Nanoparticle Contrast A' IEEE Ultrasonics Symposium , 2006, 393-6 * |
JPN6014040335; Bhattacharyya S., et al.: 'Synthesis and evaluation of near-infrared (NIR) dye-herceptin conjugates as photoacoustic computed t' Bioconjug Chem 19(6), 2008, 1186-93 * |
JPN6015019651; IEEE International Ultrasonics Symposium Proceedings ULTSYM.2009., 2009, 27-36 * |
JPN6015019652; Conf Proc IEEE Eng Med Biol Soc. 2009 , 2009, 6338-40 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
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WO2011043061A1 (ja) | 2011-04-14 |
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