JPWO2010027108A1 - 蛍光性糖誘導体化合物及びそれを用いるセンサー - Google Patents

Abstract

本発明は、糖結合タンパク質を簡便、迅速、高感度に検出する方法、及び、検出に必要な蛍光性化合物を提供する。具体的には、本発明は、直接若しくは適当なリンカーを介して糖鎖を結合した共役構造を持つ分子に、糖結合タンパク質を作用させると、糖結合タンパク質の無い場合に比べて蛍光の強度が著しく強くなることを利用した糖結合タンパク質の検出方法に関する。

Description

本発明は、糖結合タンパク質を標的とし、これらを高感度、迅速かつ簡便に検出出来る標的検出方法並びに該標的検出に好適に用いられる標的検出材料に関する。

病原物質、生体物質等に含まれる糖結合タンパク質を標的とする検出方法として、標的検出用物質に糖鎖を含む構造を導入し、標的と糖鎖との間の相互作用を計測する手法が従来から知られている。しかし、糖鎖自体は通常のＵＶ−Ｖｉｓ領域に吸収や蛍光を示さず、また、導電性等の計測容易な性質も持たないため、糖鎖−タンパク質相互作用の検出には、表面プラズモン共鳴、電気化学測定法、水晶振動子マイクロバランス測定法、原子間力顕微鏡、電界効果トランジスタ等を用いた精密な測定が必要であり、そのために特殊な装置を必要とする点に問題点を有している。
このような特殊な装置の必要性に関わる問題点を回避する方法として、ＵＶ−Ｖｉｓ吸収を示す構造を糖鎖に導入し、一般的な分光光度法により検出しようとする方法が研究されている。例えば、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ、２００１年、１２３巻、ｐ．８２２６；Ｌａｎｇｍｕｉｒ、２００３年、１９巻、ｐ．７１４１；Ｂｉｏｃｈｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ、２００６年、６３６号、ｐ．１７６０では金ナノ粒子表面を糖鎖で修飾した材料、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２００７年、１８巻、ｐ．１４６ではＣｄＳ‐ＺｎＳ量子ドットを糖鎖で修飾した材料、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２０００年、１１巻、ｐ．７７７；Ｓｃｉｅｎｃｅ、１９９３年、２６１巻、ｐ．５８５；Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ、１９９３年、１１５巻、ｐ．１１４６；Ｌａｎｇｍｕｉｒ、１９９７年、１３巻、ｐ．５０４９；Ｌａｎｇｍｕｉｒ、１９９７年、１３巻、ｐ．６５２４ではパイ共役系ポリマーの側鎖基に糖鎖を導入した材料を用いて、タンパク質の検出を色（可視領域）の変化として観測する方法が報告されている。しかし、これらの方法では、現実的には、吸光度や吸収波長の変化を観測することになるため、懸濁あるいは着色したサンプル溶液をそのまま測定することが困難であり、比較的高濃度の検出標的分子が必要であり、更に、検出に数十分から数時間の時間を要するのが通常であり、検出感度や迅速性に問題がある。
ＵＶ−Ｖｉｓ吸収を利用した検出の上記のような問題点を回避する方法として、蛍光を示す構造を糖鎖に導入し、蛍光強度の変化によって検出しようとする研究も行われてきた。例えば、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ、２００４年、１２６巻、ｐ．１３３４３；Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ、２００５年、ｐ．１２７３；Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２００６年、１７巻、ｐ．５７５；Ｂｉｏｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ、２００６年、７巻、ｐ．２４７０；Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ、２００８年、１３０巻、ｐ．６９５２では発光性の共役高分子の側鎖に糖鎖を導入した材料を用いて、Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ、２００３年、ｐ．１２５０では周辺に糖鎖を導入した金属錯体を用いて、タンパク質との相互作用を蛍光強度の低下で検出する方法が報告されている。しかし、蛍光強度の低下で検出しようとするこれらの方法は、いわばタンパク質との相互作用によって蛍光のスイッチが消される、いわばターンオフ型の検出方法であると言えるが、タンパク質との相互作用によってスイッチが完全に消されるわけではなく、蛍光強度の低下の程度は相互作用の無い場合の４０〜６０％であり、この程度の蛍光強度の低下を測定するには、精密な蛍光光度計による厳密な測定を必要とし、感度面や簡便性に問題を抱えている。
検出手段として蛍光を用いる別の方法として、タンパク質を蛍光性物質で修飾するいわゆる蛍光プローブを用い、糖鎖との相互作用による蛍光の強度変化を観測して検出しようとする方法も提案されている。しかし、この場合にも、蛍光強度の変化を測定するには、先と同様、精密な蛍光光度計による厳密な測定を必要とし、迅速性や簡便性に問題を抱えている（例えば、特開２０００−３３８０４４号公報参照）。

本発明は、標的に前処理を必要とせず、迅速、高感度、高選択的に糖結合タンパク質を検出でき、裸眼でも容易に判定可能な標的検出方法並びに該標的検出に好適に用いられる標的検出材料を提供することを課題とする。
本発明者らは、リン原子を含む共役分子の吸収・発光機能について研究中に、当該共役分子に糖鎖を導入し、糖結合タンパク質であるレクチンと接触させると、先に述べたような蛍光強度の低下ではなく、蛍光強度が著しく増大するという興味ある事実、すなわち、糖結合タンパク質との相互作用によって強い蛍光のスイッチが入る、いわばターンオン型の検出方法の端緒を見いだした。そこで、この意外な結果に基づいて更に鋭意研究の結果、糖鎖を導入した各種の共役分子が同様なターンオン型挙動を示すことも見いだし、これらの知見に基づいて本発明を完成させるに至った。
本発明は、以下の［１］〜［３３］を提供する。
［１］ 一般式（１）
（Ｓ^１−Ｓ^２−Ｓ^３−Ｓ^４−Ｓ^５−Ｓ^６−Ａ_ｍ）_ｎＢ （１）
［式中、Ｓ^１は糖の構造の１個の水酸基から水素原子を除いた残基を表わし、Ｓ^２、Ｓ^３、Ｓ^４、Ｓ^５、Ｓ^６は、独立に、存在しないか、又は、糖構造から１個の水酸基を除くと共にもう１個の水酸基から水素原子を除いた残基を表わし、Ｓ^１、Ｓ^２、Ｓ^３、Ｓ^４、Ｓ^５、Ｓ^６は互いにグリコシド結合で繋がった糖鎖構造を形成しており、Ａは、存在しないか、又は、酸素原子を含んでいてもよい炭素数２以上６以下の２価の有機基を表わし、Ｂは光照射により蛍光を発する蛍光性化合物からｎ個の水素原子を除いた残基を表し、該残基は炭素数７以下の置換基で置換されていてもよく、Ａが存在する場合のｍは６以下の正の整数を表し、ｎは１２以下の正の整数を表す。Ｓ^２、Ｓ^３、Ｓ^４、Ｓ^５、Ｓ^６は互いに同じであっても異なっていてもよい。１個の水酸基から水素原子を除くことでＳ^１となる母体の糖の構造（以下、Ｓ^１の母体の糖の構造、又は、単に、母体の糖の構造という。）は、１個の水酸基を除くと共にもう１個の水酸基から水素原子を除くことでそれぞれＳ^２、Ｓ^３、Ｓ^４、Ｓ^５、Ｓ^６となる母体の糖の構造（以下、Ｓ^２〜Ｓ^６の母体の糖の構造、又は、単に、母体の糖の構造という。）と互いに同じであっても異なっていてもよい。］で表わされることを特徴とする蛍光性糖誘導体化合物。
［２］ Ｓ^１の母体の糖の構造が、グルコース、マンノース、ガラクトース、フルクトース、アロース、タロース、プシコース、グロース、イドース、ソルボース、リボース、リキソース、キシロース、アピオース、デオキシグルコース、デオキシマンノース、デオキシガラクトース、デオキシアロース、デオキシタロース、デオキシリボースである、［１］記載の蛍光性糖誘導体化合物。
［３］ Ｓ^２、Ｓ^３、Ｓ^４、Ｓ^５又はＳ^６が存在しない、［１］記載の蛍光性糖誘導体化合物。
［４］ Ｓ^２、Ｓ^３、Ｓ^４、Ｓ^５、Ｓ^６の母体の糖の構造が、それぞれ独立に、グルコース、マンノース、ガラクトース、フルクトース、アロース、タロース、プシコース、グロース、イドース、ソルボース、リボース、リキソース、キシロース、アピオース、デオキシグルコース、デオキシマンノース、デオキシガラクトース、デオキシアロース、デオキシタロース、デオキシリボースのである、［１］記載の蛍光性糖誘導体化合物。
［５］ Ａが存在しない、［１］記載の蛍光性糖誘導体化合物。
［６］ ＡがＣＨ_２ＣＨ_２Ｏである、［１］記載の蛍光性糖誘導体化合物。
［７］ ｎ個の水素原子を除くことでＢとなる母体の蛍光性化合物が、共役構造からなる蛍光性化合物である、［１］記載の蛍光性糖誘導体化合物。
［８］ ｎ個の水素原子を除くことでＢとなる母体の蛍光性化合物が、一般式（２）
（式中、Ｒ^１は炭素数６以下の飽和炭化水素基又は炭素数１２以下の不飽和炭化水素基を示し、炭素数７以下の置換基で置換されていてもよい。）である、［１］記載の蛍光性糖誘導体化合物。
［９］ ｎ個の水素原子を除くことでＢとなる母体の蛍光性化合物が、一般式（３）
（式中、Ｒ^２及びＲ^３は炭素数６以下の飽和炭化水素基又は炭素数１２以下の不飽和炭化水素基を示し、互いに同じであっても異なっていてもよく、また、炭素数７以下の置換基で置換されていてもよい。）である、［１］記載の蛍光性糖誘導体化合物。
［１０］ 一般式（１）
（Ｓ^１−Ｓ^２−Ｓ^３−Ｓ^４−Ｓ^５−Ｓ^６−Ａ_ｍ）_ｎＢ （１）
（式中、Ｓ^１、Ｓ^２、Ｓ^３、Ｓ^４、Ｓ^５、Ｓ^６、Ａ、Ｂ、ｍ及びｎは前記と同じ意味を表す。）で表わされる化合物を検出材料として用いることを特徴とする、検出標的の検出方法。
［１１］ 検出標的が糖結合タンパク質を含む物質である、［１０］記載の検出方法。
［１２］ 検出手段として蛍光の変化を利用する、［１０］又は［１１］記載の検出方法。
［１３］ 検出標的と相互作用可能な検出材料であって、検出標的と相互作用していない時には光照射によりそれ自身電子励起されても蛍光を実質的には発せず、若しくは、検出標的と相互作用していなくても光照射によりそれ自身電子励起されて蛍光を発し、検出標的と相互作用している時には光照射により電子励起されて蛍光を発し、検出標的と相互作用している時に発する蛍光の強度が検出標的と相互作用していない場合の蛍光の強度より大きくなる検出材料を用いることを特徴とする検出標的の検出方法。
［１４］ 検出材料として一般式（１）
（Ｓ^１−Ｓ^２−Ｓ^３−Ｓ^４−Ｓ^５−Ｓ^６−Ａ_ｍ）_ｎＢ （１）
（式中、Ｓ^１、Ｓ^２、Ｓ^３、Ｓ^４、Ｓ^５、Ｓ^６、Ａ、Ｂ、ｍ及びｎは前記と同じ意味を表す。）で表わされる化合物を用いる、［１３］記載の検出方法。
［１５］ 検出標的が糖結合タンパク質を含む物質である、［１３］又は［１４］記載の検出方法。
［１６］ 糖結合タンパク質を含む物質と蛍光性の検出材料の相互作用を利用した糖結合タンパク質を含む物質の検出方法であって、糖鎖で置換された蛍光性検出材料を蛍光性の検出材料として用いることを特徴とする糖結合タンパク質を含む物質の検出方法。
［１７］ 検出材料として一般式（１）
（Ｓ^１−Ｓ^２−Ｓ^３−Ｓ^４−Ｓ^５−Ｓ^６−Ａ_ｍ）_ｎＢ （１）
（式中、Ｓ^１、Ｓ^２、Ｓ^３、Ｓ^４、Ｓ^５、Ｓ^６、Ａ、Ｂ、ｍ及びｎは前記と同じ意味を表す。）で表わされる化合物を用いる、［１６］記載の検出方法。
［１８］ 含水溶液中で実施する、［１０］〜［１７］のいずれか１つに記載の検出方法。
［１９］ 含水溶液が緩衝剤を含む含水溶液である、［１８］記載の検出方法。
［２０］ 緩衝剤がリン酸緩衝剤、トリス緩衝剤、トリス塩酸緩衝剤である、［１９］記載の検出方法。
［２１］ 含水溶液中で、糖結合タンパク質を活性化する薬剤の存在下に実施する、［１１］〜［２０］のいずれか１つに記載の検出方法。
［２２］ 含水溶液が緩衝剤を含む含水溶液である、［２１］記載の検出方法。
［２３］ 緩衝剤がリン酸緩衝剤、トリス緩衝剤、トリス塩酸緩衝剤である、［２２］記載の検出方法。
［２４］ 糖結合タンパク質と［１］〜［９］のいずれか１つに記載の化合物とから構成される凝集体。
［２５］ 糖結合タンパク質と［１］〜［９］のいずれか１つに記載の化合物とを含水溶液中で反応させることにより調製された、［２４］記載の凝集体。
［２６］ 含水溶液が緩衝剤を含む含水溶液である、［２５］記載の凝集体。
［２７］ 緩衝剤がリン酸緩衝剤、トリス緩衝剤、トリス塩酸緩衝剤である、［２６］記載の凝集体。
［２８］ 含水溶液中で、糖結合タンパク質を活性化する薬剤の存在下に反応させることにより調製された、［２５］〜［２７］のいずれか１つに記載の凝集体。
［２９］ 請求項２４に記載の凝集体からの蛍光を観測することからなる糖結合タンパク質の検出方法。
［３０］ 凝集体からの蛍光が［１］〜［９］のいずれか１つに記載の化合物自身からの蛍光より強度が増大することを利用した、［２９］記載の検出方法。
［３１］ 蛍光の観測を含水溶液中で実施する、［２９］又は［３０］記載の検出方法。
［３２］ 含水溶液が緩衝剤を含む含水溶液である、［３１］記載の検出方法。
［３３］ 緩衝剤がリン酸緩衝剤、トリス緩衝剤、トリス塩酸緩衝剤である、［３２］記載の検出方法。
発明の効果
本発明の一般式（１）で示される蛍光性糖誘導体化合物は、既知の反応手法を準用して容易に合成することが出来、分離精製もクロマトグラフィーや再結晶により行うことが出来る。また、一般式（１）で示される蛍光性糖誘導体化合物自身が示す蛍光に比べ、糖結合タンパク質との選択的な相互作用や凝集体形成により飛躍的に強い蛍光を示すため、糖結合タンパク質を含む物質を迅速、高感度に検出するための材料として有用であり、かつ、オンサイトでの検出も簡便に行うことが出来るため、実用技術として極めて有用である。

図１は、式（１７）の化合物にＣｏｎＡを加えた際の蛍光強度の変化を示す（励起波長＝３７０ｎｍ）。
図２は、式（１７）又は（２１）の化合物にＣｏｎＡを加えた際の５００ｎｍにおける蛍光の強度増大へのＣｏｎＡ濃度の影響（励起波長＝３７０ｎｍ、Ｉ_０＝ＣｏｎＡを加える前の初期強度、Ｉ＝ＣｏｎＡを加えた際の強度）を示す。○は式（１７）の化合物にＣｏｎＡを加えた場合、×は式（２１）の化合物にＣｏｎＡを加えた場合の蛍光強度の初期強度に対する変化を示す。
図３は、式（１７）の化合物にＣｏｎＡを加えた際の蛍光強度変化の経時変化（励起波長：３７０ｎｍ）を示す。式（１７）の化合物の濃度１７．８μＭ、ＣｏｎＡ濃度８．０μＭで行った実験を示す。
図４は、式（２１）の化合物にＰＮＡを加えた際の蛍光強度の変化を示す（励起波長＝３７０ｎｍ）。
図５は、式（１７）又は（２１）の化合物にＰＮＡを加えた際の５００ｎｍにおける蛍光の強度増大へのＰＮＡ濃度の影響（励起波長＝３７０ｎｍ、Ｉ_０＝ＰＮＡを加える前の初期強度、Ｉ＝ＰＮＡを加えた際の強度）を示す。○は化合物２１にＰＮＡを加えた場合、×は式（１７）の化合物にＰＮＡを加えた場合の蛍光強度の初期強度に対する変化を示す。
図６は、式（２５）の化合物にＣｏｎＡを加えた際の蛍光強度の変化を示す（励起波長＝３２０ｎｍ）。
図７は、式（２５）の化合物にＣｏｎＡを加えた際の４６０ｎｍにおける蛍光の強度増大へのＣｏｎＡ濃度の影響（励起波長＝３２０ｎｍ、Ｉ_０＝ＣｏｎＡを加える前の初期強度、Ｉ＝ＣｏｎＡを加えた際の強度）を示す。
図８は、式（２９）の化合物にＣｏｎＡを加えた際の蛍光強度の変化を示す（励起波長＝３２０ｎｍ）。
図９は、式（２９）の化合物にＣｏｎＡを加えた際の４７０ｎｍにおける蛍光の強度増大へのＣｏｎＡ濃度の影響（励起波長＝３２０ｎｍ、Ｉ_０＝ＣｏｎＡを加える前の初期強度、Ｉ＝ＣｏｎＡを加えた際の強度）を示す。
図１０は、式（３６）の化合物（濃度＝７．３μＭ）にＣｏｎＡを加えた際の蛍光強度の変化（励起波長＝３００ｎｍ）を示す。
図１１は、式（３６）の化合物にＣｏｎＡを加えた際の４５０ｎｍにおける蛍光の強度増大へのＣｏｎＡ濃度の影響（励起波長＝３００ｎｍ、Ｉ_０＝ＣｏｎＡを加える前の初期強度、Ｉ＝ＣｏｎＡを加えた際の強度）を示す。
図１２は、式（４０）の化合物にＣｏｎＡを加えた際の蛍光強度の変化（励起波長＝３１２ｎｍ）を示す。
図１３は、式（１７）の化合物によるハンディＵＶランプによるＣｏｎＡの検出を示す。左は実施例６で調製した塩含有緩衝液に式（１７）の化合物のみを溶解させた試験液［式（１７）の化合物の濃度は１９μＭ］であり、右は実施例６で調製した塩含有緩衝液に式（１７）の化合物を溶解させた溶液にＣｏｎＡを加え１０分間攪拌した試験液［式（１７）の化合物の濃度は１９μＭ、ＣｏｎＡの濃度は８μＭ］であり、ハンディＵＶランプを用いて３６５ｎｍの紫外光を照射すると、右の試験液が極めて強い蛍光を発することが分かる。
図１４は、式（４３）の化合物（濃度＝６．７μＭ）にＲＣＡ１２０を加えた際の蛍光強度の変化を示す（励起波長＝３２０ｎｍ）。
図１５は、式（４３）の化合物にＲＣＡ１２０を加えた際の４００ｎｍにおける発光強度比（Ｉ／Ｉ_０＝ＲＣＡ１２０を添加後の発光強度／初期発光強度）を示す。

本明細書において示される各基は、具体的には以下の通りである。
炭素数６以下の飽和炭化水素基としては、ｎ−ヘキシル基、シクロヘキシル基、ｎ−ペンチル基、イソペンチル基、ｎ−ブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、イソブチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、エチル基、メチル基等の直鎖、分枝又は環状の脂肪族飽和炭化水素基を例示することが出来る。
炭素数１２以下の不飽和炭化水素基としては、ビニル基、イソプロペニル基、１−プロペニル基、アリル基、１−ブテン−１−イル基、２−ブテン−１−イル基、３−ブテン−１−イル基、３−ブテン−２−イル基、２，２−ジメチルビニル基、１−ペンテン−１−イル基、２−ペンテン−１−イル基、３−ペンテン−１−イル基、３−ペンテン−２−イル基、４−ペンテン−１−イル基、４−ペンテン−２−イル基、４−ペンテン−３−イル基、４−ペンテン−４−イル基、１，２−ジメチル−１−ブテン−１−イル基、１−オクテン−１−イル基、１−デセン−１−イル基、１−ドデセン−１−イル基、１−シクロヘキセン−１−イル基、１−シクロヘキセン−３−イル基、１−シクロオクテン−１−イル基、１−メチル−１−シクロヘキセン−２−イル基、フェニル基、アルファナフチル基、ベータナフチル基、ベータアントリル基、オルトビフェニル基、メタビフェニル基、パラビフェニル基、ベンジル基、１−又は２−フェニルエチル基等の、直鎖、分枝又は環状の脂肪族不飽和炭化水素基、及び、芳香族炭化水素基を例示することが出来る。
炭素数７以下の置換基としては、前記炭素数６以下の飽和炭化水素基、ｎ−ヘプチル基、前記炭素数１２以下の不飽和炭化水素基の内の炭素数が７以下のもの、ベンジル基、メトキシ基、エトキシ基、ブトキシ基、フェノキシ基、ベンジロキシ基、メチルチオ基、フェニルチオ基、メトキシメチル基、メトキシエチル基、ジメチルアミノ基、カルボメトキシ基、カルボエトキシ基、シアノ基、アセチル基、ベンゾイル基、トリメチルシリル基、フッ素原子、塩素原子、臭素原子等を例示することが出来る。
本発明の一般式（１）
（Ｓ^１−Ｓ^２−Ｓ^３−Ｓ^４−Ｓ^５−Ｓ^６−Ａ_ｍ）_ｎＢ （１）
で表される蛍光性糖誘導体化合物において、それを構成するＳ^１、Ｓ^２、Ｓ^３、Ｓ^４、Ｓ^５、Ｓ^６は母体の糖の構造が単糖類の中から選ばれるものであり、Ｓ^１−Ｓ^２−Ｓ^３−Ｓ^４−Ｓ^５−Ｓ^６はそれら単糖類が互いにグリコシド結合で繋がった糖鎖構造を形成している。このような単糖類は検出標的に応じていかなるものでも用いることが出来、好適なものとして、グルコース、マンノース、ガラクトース、フルクトース、アロース、タロース、プシコース、グロース、イドース、ソルボース等の６炭糖類、リボース、リキソース、キシロース、アピオース等の５炭糖が例示される。単糖類としては、更に、前記６炭糖や前記５炭糖の水酸基を水素に置換したいわゆるデオキシ糖であってもよく、これらデオキシ糖としては、デオキシグルコース、デオキシマンノース、デオキシガラクトース、デオキシアロース、デオキシタロース、デオキシリボース等を例示することが出来る。
本発明の一態様では、前記一般式（１）によって特定されるＳ^１、Ｓ^２、Ｓ^３、Ｓ^４、Ｓ^５、及びＳ^６は、グリコシド結合で繋がった直鎖状の構造に限定されず、非還元末端側が分岐した構造であってもよい。分岐した構造としては、例えば、
が挙げられるが、特に限定されない。なお、分岐した構造において、Ｓ^２、Ｓ^３、Ｓ^４、Ｓ^５、及びＳ^６のうち１つ以上の糖残基が非還元末端になる場合には、そのような糖残基の定義は、Ｓ^１についての前記定義に従うものとする。
前記一般式（１）で表される蛍光性糖誘導体化合物において、Ａは、存在しないか、又は、酸素原子を含んでいてもよい炭素数２以上６以下の２価の有機基として定義される。Ａの存在又は不存在は検出標的との相互作用や凝集体形成の難易に影響するものと推定される。Ａが存在する場合のＡとしては、ジメチレン基、トリメチレン基、テトラメチレン基、ペンタメチレン基、ヘキサメチレン基、１，２−プロピレン基等のアルキレン基、エチレンオキシ基、１，３−プロピレンオキシ基、１，２−プロピレンオキシ基、テトラメチレンオキシ基等の酸素原子を鎖中に含むアルキレンオキシ基等が包含されるが、検出標的との相互作用に適合できる柔軟な構造を持つアルキレンオキシ基が好ましく、溶解性や入手性の面も考慮するとエチレンオキシ基が特に好ましい。
前記一般式（１）で表される蛍光性糖誘導体化合物において、Ｂは光照射により蛍光を発する蛍光性化合物からｎ個の水素原子を除いた残基を表す。ｎ個の水素原子を除く前の母体の蛍光性化合物としては、光化学の研究において従来報告されてきた蛍光性化合物であればいかなるものでもよいが、検出の簡便さの面からは、可視光領域に蛍光を示すものが好ましく、電界発光材料として研究開発されてきた構造を含め、多様な共役分子を用いることが出来、好適なものとして、一般式（２）
（式中、Ｒ^１は炭素数６以下の飽和炭化水素基又は炭素数１２以下の不飽和炭化水素基を示し、炭素数７以下の置換基で置換されていてもよい。）で表される化合物、一般式（３）
（式中、Ｒ^２及びＲ^３は炭素数６以下の飽和炭化水素基又は炭素数１２以下の不飽和炭化水素基を示し、互いに同じであっても異なっていてもよく、また、炭素数７以下の置換基で置換されていてもよい。）で表される化合物、式（４）
で表される化合物、式（５）
で表される化合物、式（６）
で表される化合物、式（７）
で表される化合物、式（８）
で表される化合物、一般式（９）
（式中、Ｒ^４及びＲ^５は炭素数６以下の飽和炭化水素基又は炭素数１２以下の不飽和炭化水素基を示し、互いに同じであっても異なっていてもよく、また、炭素数７以下の置換基で置換されていてもよい。）で表される化合物、一般式（１０）
（式中、Ｒ^６及びＲ^７は炭素数６以下の飽和炭化水素基又は炭素数１２以下の不飽和炭化水素基を示し、互いに同じであっても異なっていてもよく、また、炭素数７以下の置換基で置換されていてもよい。）で表される化合物、式（１１）
で表される化合物等を例示することが出来る。
本発明の一般式（１）
（Ｓ^１−Ｓ^２−Ｓ^３−Ｓ^４−Ｓ^５−Ｓ^６−Ａ_ｍ）_ｎＢ （１）
で表わされる蛍光性糖誘導体化合物は、周辺に配置した糖鎖が糖結合タンパク質と相互作用若しくは凝集体形成することにより蛍光の挙動を変化させることから、糖結合タンパク質若しくは糖結合タンパク質を含む物質を検出する検出材料として用いることが出来る。本発明に係る糖結合タンパク質若しくは糖結合タンパク質を含む物質の高感度検出は、検出標的が検体に含まれる場合には、一般式（１）の化合物溶液に検体を加えて光を照射することにより発せられる蛍光の強度が変化し、好ましくは、強度が増大することを観測することにより容易に行うことが出来る。検出標的となる糖結合タンパク質若しくは糖結合タンパク質を含む物質は、糖を認識し強く相互作用、結合若しくは凝集体形成するものであれば特に制限はなく、また、タンパク質それ自身でなくとも、組織内に糖を認識できるタンパク質を有するいかなる物質であってもよく、例えば、各種の生体関連物質、細胞、微生物、ウィルス等であってもよい。
検出に用いる媒体としてはメタノール、エタノール、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、テトラヒドロフラン、アセトン等の水溶性溶剤と水とを混合した混合溶媒を用いることが出来るが、好ましくは水を用いる。糖結合タンパク質と本発明の検出材料との相互作用や凝集はｐＨに依存することが多く、検出手段として用いる蛍光もｐＨの影響を受けやすい。一方、検出の際の溶液のｐＨは、大気中の炭酸ガスのような外的要因やタンパク質の構造、微生物自身の代謝産物などのような内的要因によっても変化する可能性がある。これらを考慮すると、信頼性ある検出を行うには、緩衝液を使用して溶液のｐＨを一定に保つことが好ましい。好ましいｐＨは一般的には検体と検出材料の組み合わせに依存するものであるが、生体関連のタンパク質を扱う関係ではｐＨ７前後を保持できるものであれば問題なく用いることが出来、例えば、トリス緩衝液、トリス塩酸緩衝液、リン酸緩衝液やヘペス緩衝液等を好適に用いることが出来る。
糖結合タンパク質若しくは糖結合タンパク質を含む物質と本発明の検出材料の相互作用や凝集を促進するために、糖結合タンパク質を活性化する薬剤の存在下に検出操作を実施することも、本発明の有利な態様である。このような薬剤として、各種の無機塩類が用いられ、好適なものとしては、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、マンガン塩等を例示することが出来る。
光照射に用いる光源は蛍光性糖誘導体化合物の吸収波長近辺の波長の光を放射するものであればいかなるものを用いてもよく、蛍光性糖誘導体化合物の構造に応じて、キセノンランプ、低圧水銀灯、中圧水銀灯、高圧水銀灯等を用いることが出来るが、必要に応じて、キセノンランプからの放射光を分光して用いてもよく、簡便には、クロマトグラフィー作業において検出に用いる紫外線ランプを用いることも出来る。検出は、一般に裸眼による目視でも容易に行えるが、蛍光光度計を用いることにより定量的データを得ることも出来る。

以下、実施例により本発明を更に具体的に説明するが、本発明はこれら実施例により何ら限定されるものではない。
実施例１
以下の反応式（１２）
に従って式（１７）
の化合物を合成した。
磁気攪拌子を備えた１０ｍｌフラスコに式（１６）の化合物（０．０３ｇ、０．０１７ｍｍｏｌ）、ナトリウムメトキシド（０．００３ｇ、０．０５４ｍｍｏｌ）、メタノール（２ｍｌ）を加え、室温で３０分攪拌した。その後陽イオン交換樹脂（ＤＯＷＥＸ ５０ＷＸ８−１００）を反応溶液が酸性になるまで加え、ろ過し、溶媒留去し、式（１７）の化合物を得た（０．０１３ｇ、０．０１２ｍｍｏｌ、収率７２％）。
本化合物は文献未収載の新規化合物であり、その性状、分光学データ、分析データは以下の通りであった。黄色固体；融点２６７．３−２６８．９℃；^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）δ１．７５−１．８４（ｍ，４Ｈ），２．７５−２．８８（ｍ，４Ｈ），３．５１−３．５８（ｍ，４Ｈ），３．６９−３．７５（ｍ，１２Ｈ），３．８２−３．８６（ｍ，４Ｈ），３．９５（ｓ，４Ｈ），５．４０（ｓ，４Ｈ），６．８２（ｓ，２Ｈ），６．９２（ｓ，４Ｈ），７．４６−７．５３（ｍ，３Ｈ），７．６８−７．７５（ｍ，２Ｈ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）δ２３．４，２８．８，６２．６，６８．２，７１．８，７２．３，７５．５，１００．３，１０６．４，１１２．０，１３０．３（ｄ，^３Ｊ（Ｐ，Ｃ）１２．４Ｈｚ），１３０．５（ｄ，^１Ｊ（Ｐ，Ｃ）９８．５Ｈｚ），１３０．６（ｄ，^１Ｊ（Ｐ，Ｃ）９８．３Ｈｚ），１３１．９（ｄ，^２Ｊ（Ｐ，Ｃ）１１．０Ｈｚ），１３３．７（ｄ，^４Ｊ（Ｐ，Ｃ）２．９Ｈｚ），１３５．６（ｄ，^２Ｊ（Ｐ，Ｃ）１１．０Ｈｚ），１５１．９（ｄ，^２Ｊ（Ｐ，Ｃ）２６．１Ｈｚ），１５８．９；^３１Ｐ｛^１Ｈ｝ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）δ４６．４；ＨＲＭＳ（ＦＡＢ、グリセリンマトリックス）Ｃ_５０Ｈ_６３Ｏ_２５ＰＬｉ（［Ｍ＋Ｌｉ］^＋に相当）としての計算値；１１０１．３５５６，実測値；１１０１．３５３３．
参考例１
上記実施例１において用いた式（１６）で示される化合物の原料である式（１４）
の化合物を次のようにして合成した。
磁気攪拌子を備えた５０ｍｌフラスコに、式（１３）の化合物（０．３１ｇ，０．７３ｍｍｏｌ）、３０％過酸化水素水（０．０９ｇ，０．８０ｍｍｏｌ）、ＴＨＦ（３０ｍｌ）を加え、室温で２０分攪拌した。その後溶媒留去し、シルカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル）で単離して、式（１４）の化合物を得た（０．２２ｇ，０．５０ｍｍｏｌ、収率６９％）。
黄色固体；融点２１５．１−２１９．３℃；^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，アセトン−ｄ_６）δ１．７１（ｍ，４Ｈ），２．６１−２．８９（ｍ，４Ｈ），６．２４（ｓ，２Ｈ），６．４９（ｓ，４Ｈ），７．３７−７．４９（ｍ，３Ｈ），７．７３−７．７９（ｍ，２Ｈ），８．５９（ｍ，４Ｈ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，アセトン−ｄ_６）δ２２．６，２８．０（ｄ，^３Ｊ（Ｐ，Ｃ）１４．７Ｈｚ），１０３．０，１０７．７（ｄ，^３Ｊ（Ｐ，Ｃ）５．６Ｈｚ），１２９．３，（ｄ，^３Ｊ（Ｐ，Ｃ）１１．９Ｈｚ），１３０．２（ｄ，^１Ｊ（Ｐ，Ｃ）９３．６Ｈｚ），１３０．５（ｄ，^１Ｊ（Ｐ，Ｃ）９７．３Ｈｚ），１３１．２（ｄ，^２Ｊ（Ｐ，Ｃ）１０．３Ｈｚ），１３２．３（ｄ，^４Ｊ（Ｐ，Ｃ）２．６Ｈｚ），１３５．０（ｄ，^２Ｊ（Ｐ，Ｃ）１１．３Ｈｚ），１４９．５（ｄ，^２Ｊ（Ｐ，Ｃ）２６．６Ｈｚ），１５９．０；^３１Ｐ｛^１Ｈ｝ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，アセトン−ｄ_６）δ４４．５；ＨＲＭＳ（ＦＡＢ）Ｃ_２６Ｈ_２４Ｏ_５Ｐ（［Ｍ＋Ｈ］^＋に相当）としての計算値；４４７．１３６１，実測値；４４７．１３７１．
参考例２
上記実施例１において原料として用いた式（１６）
の化合物を以下のようにして合成した。
磁気攪拌子を備えた２５ｍｌ三口フラスコを用意し窒素置換した。これに窒素雰囲気下、塩化メチレン（５ｍｌ）、式（１４）の化合物（０．０７６ｇ、０．０１７ｍｍｏｌ）、化合物（１５）の化合物（０．４２ｇ、０．８５ｍｍｏｌ）、モレキュラーシーブス４Ａを加え、三フッ化ホウ素ジエチルエーテル錯体（０．２０ｇ、２．０３ｍｍｏｌ）を滴下し、室温で２０時間攪拌した。その後反応溶液を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液の中へ流し込み、有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、水、飽和食塩水で洗浄し、有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、溶媒留去し、シルカゲルカラムクロマトグラフィー（塩化メチレン→ヘキサン／酢酸エチル＝１／１→塩化メチレン／アセトン＝１０／１）で単離して、式（１６）の化合物を得た（０．０９４ｇ、０．０５３ｍｍｏｌ、収率３２％）。
黄色固体；融点１２３．１−１２５．９℃；^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ１．７５（ｍ，４Ｈ），１．９９−２．０１（ｍ，３６Ｈ），２．１６（ｓ，１２Ｈ），２．７２−２．７８（ｍ，４Ｈ），３．９５−３．９８（ｍ，８Ｈ），４．１８−４．２４（ｍ，４Ｈ），５．２７−５．４６（ｍ，１６Ｈ），６．６９（ｓ，２Ｈ），６．７６（ｓ，２Ｈ），６．８５（ｓ，２Ｈ），７．３６−７．４５（ｍ，３Ｈ），７．６１−７．６７（ｍ，２Ｈ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ２０．６，２０．８，２２．１，２７．４，６０．３，６１．８，６５．５，６８．７，６９．０，９５．５，１０４．４，１１１．２，１２８．６（ｄ，^１Ｊ（Ｐ，Ｃ）９３．７Ｈｚ），１２９．０（ｄ，^３Ｊ（Ｐ，Ｃ）１１．９Ｈｚ），１３０．３（ｄ，^１Ｊ（Ｐ，Ｃ）９７．３Ｈｚ），１３０．５（ｄ，^２Ｊ（Ｐ，Ｃ）１０．４Ｈｚ），１３２．１，１３５．１（ｄ，^２Ｊ（Ｐ，Ｃ）１１．５Ｈｚ），１４９．３（ｄ，^２Ｊ（Ｐ，Ｃ）２６．２Ｈｚ），１５６．３；^３１Ｐ｛^１Ｈ｝ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ４２．８；元素分析Ｃ_８２Ｈ_９５Ｏ_４１Ｐとしての計算値：Ｃ，５５．７２；Ｈ，５．４２．実測値：Ｃ，５５．６３；Ｈ，５．７５．
実施例２
以下の反応式（１８）
に従って式（２１）
の化合物を以下のようにして合成した。
磁気攪拌子を備えた１０ｍｌフラスコに式（２０）の化合物（０．０１１ｇ、０．００６ｍｍｏｌ）、ナトリウムメトキシド（０．００１ｇ、０．０１９ｍｍｏｌ）、メタノール（２ｍｌ）を加え、室温で４０分攪拌した。その後陽イオン交換樹脂（ＤＯＷＥＸ ５０ＷＸ８−１００）を反応溶液が酸性になるまで加え、ろ過し、溶媒留去し、式（２１）の化合物を得た（０．０００６ｇ、０．００５ｍｍｏｌ、収率８８％）。
本化合物は文献未収載の新規化合物であり、その性状、分光学データ、分析データは以下の通りであった。黄色固体；融点２３０．０−２３３．５℃；^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）δ１．７５−１．８３（ｍ，４Ｈ），２．８９−３．０７（ｍ，４Ｈ），３．５３−３．５６（ｍ，４Ｈ），３．６９−３．７７（ｍ，１６Ｈ），３．８７−３．８８（ｍ，４Ｈ），４．８０−４．８１（ｍ，４Ｈ），６．７９−６．８２（ｍ，４Ｈ），６．８７（ｓ，２Ｈ），７．４３−７．５４（ｍ，３Ｈ），７．６６−７．７２（ｍ，２Ｈ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）δ２３．５，２８．９，６２．５，７０．３，７２．１，７４．８，７７．１，｛１０２．２，１０２．４｝，１０５．６，｛１１１．５，１１１．９｝，１３０．３（ｄ，^３Ｊ（Ｐ，Ｃ）１１．７Ｈｚ），１３０．３（ｄ，^１Ｊ（Ｐ，Ｃ）９８．８Ｈｚ），１３１．３（ｄ，^１Ｊ（Ｐ，Ｃ）９８．８Ｈｚ），１３１．９（ｄ，^２Ｊ（Ｐ，Ｃ）１０．３Ｈｚ），１３３．６，１３５．３（ｄ，^２Ｊ（Ｐ，Ｃ）１１．６Ｈｚ），１５１．４，１６０．０；^３１Ｐ｛^１Ｈ｝ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）δ４７．２；ＨＲＭＳ（ＦＡＢ，ｍａｔｒｉｘ；ｇｌｙｃｅｒｏｌ）Ｃ_５０Ｈ_６４Ｏ_２５Ｐ（［Ｍ＋Ｈ］^＋に相当）としての計算値；１０９５．３４７４，実測値；１０９５．３４６８．
参考例３
上記実施例２において原料として用いた式（２０）
の化合物を以下のようにして合成した。
磁気攪拌子を備えた３０ｍｌ二口フラスコを用意し窒素置換した。これに窒素雰囲気下、塩化メチレン（５ｍｌ）、式（１４）の化合物（０．１５ｇ、０．３４ｍｍｏｌ）、式（１９）の化合物（０．５２ｇ、１．３４ｍｍｏｌ）を加え、ＳｎＣｌ_４（０．７１ｇ、２．７２ｍｍｏｌ）を滴下し、室温で５日間攪拌した。その後反応溶液を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液の中へ流し込み、塩化メチレンで抽出した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、水、飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、セライト吸引ろ過し、溶媒留去し、シルカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル＝１／３→アセトン／塩化メチレン＝１／５）で単離して、式（２０）の化合物を得た（０．０６５ｇ、０．０３７ｍｍｏｌ、収率１１％）。
黄色固体；融点１４６．８−１４９．７℃；^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ１．８４（ｍ，４Ｈ），２．００−２．０１（ｍ，１８Ｈ），２．０６（ｍ，１８Ｈ），２．１５−２．１６（ｍ，１２Ｈ），２．７７（ｍ，４Ｈ），３．９１−３．９３（ｍ，２Ｈ），４．０１−４．１６（ｍ，１０Ｈ），４．９１−４．９４（ｍ，２Ｈ），５．０２−５．１３（ｍ，６Ｈ），５．３６−５．４４（ｍ，８Ｈ），６．５１（ｓ，２Ｈ），６．６３（ｓ，２Ｈ），６．７５（ｓ．２Ｈ），７．４４−７．４９（ｍ，３Ｈ），７．６８−７．７５（ｍ，２Ｈ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ２０．５，２０．６，２０．７２，２０．７４，２２．３，２７．５（ｄ，^３Ｊ（Ｐ，Ｃ）１３．９Ｈｚ），６０．８，６６．６，６８．４，７０．７，７０．８，９８．５，１０５．２，１１０．９，１２９．１５，１２９．２（ｄ，^１Ｊ（Ｐ，Ｃ）９３．０Ｈｚ），１３０．２（ｄ，^１Ｊ（Ｐ，Ｃ）９６．６Ｈｚ），１３０．７（ｄ，^２Ｊ（Ｐ，Ｃ）１０．４Ｈｚ），１３２．２，１３４．７（ｄ，^２Ｊ（Ｐ，Ｃ）１１．４Ｈｚ），１４９．５（ｄ，^２Ｊ（Ｐ，Ｃ）２３．５Ｈｚ），１５７．４，１６９．３，１７０．０，１７０．１，１７０．４；^３１Ｐ｛^１Ｈ｝ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ４２．８；元素分析Ｃ_８２Ｈ_９７Ｏ_４２Ｐ・Ｈ_２Ｏとしての計算値：Ｃ，５５．１６；Ｈ，５．４８．実測値：Ｃ，５４．９２；Ｈ，５．４３．
実施例３
以下の反応式（２２）
に従って式（２５）
の化合物を以下のようにして合成した。
磁気攪拌子を備えた１０ｍｌフラスコに式（２４）の化合物（０．０２５ｇ、０．０１５ｍｍｏｌ）、ナトリウムメトキシド（０．００３ｇ、０．０５ｍｍｏｌ）、メタノール（２ｍｌ）、ＴＨＦ（２ｍｌ）を加え、室温で６０分攪拌した。その後陽イオン交換樹脂（ＤＯＷＥＸ ５０ＷＸ８−１００）を反応溶液が酸性になるまで加え、ろ過し、溶媒留去し、式（２５）の化合物を得た（０．０１３ｇ、０．０１２ｍｍｏｌ、収率８７％）。
本化合物は文献未収載の新規化合物であり、その性状、分光学データ、分析データは以下の通りであった。淡黄色固体；融点２５５．２−２５８．９℃；^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）δ３．５２−３．５８（ｍ，８Ｈ），３．６７−３．７０（ｍ，４Ｈ），３．７７−３．８３（ｍ，４Ｈ），３．９３−４．００（ｍ，８Ｈ），５．３４（ｓ，４Ｈ），６．６１−６．６７（ｍ，８Ｈ），６．７１−６．７５（ｍ，８Ｈ）．；^１３Ｃ ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）δ６１．３，６７．１，７１．１，７１．６，７４．２，９９．２，１１７．０，１３３．５，１３９．０，１３９．７，１５５．３；ＨＲＭＳ（ＦＡＢ，グリセリンマトリックス）Ｃ_５０Ｈ_６１Ｏ_２４（［Ｍ＋Ｈ］^＋に相当）としての計算値；１０４５．３５５３，実測値；１０４５．３５３３．
参考例４
上記実施例３において原料として用いた式（２４）
の化合物を以下のようにして合成した。
磁気攪拌子を備えた５０ｍｌ二口フラスコを用意し窒素置換した。これに窒素雰囲気下、蒸留した塩化メチレン（１５ｍｌ）、式（２３）の化合物（０．２０ｇ、０．５０ｍｍｏｌ）、式（１５）の化合物（１．２１ｇ、２．４６ｍｍｏｌ）、モレキュラーシーブス４Ａを加え、三フッ化ホウ素ジエチルエーテル錯体（０．７６ｍｌ、６．０ｍｍｏｌ）を滴下し、室温で１６時間攪拌した。その後反応溶液を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液の中へ流し込み、有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、水、飽和食塩水で洗浄し、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒留去し、シルカゲルカラムクロマトグラフィー（塩化メチレン／アセトン＝２０／１）及び分取ＨＰＬＣで単離して、式（２４）の化合物を得た（０．０２８ｇ、０．０１６ｍｍｏｌ、収率３％）。
白色固体；融点１１４．１−１１８．４℃；^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ２．０２（ｍ，２４Ｈ），２．０４（ｓ，１２Ｈ），２．１７（ｓ，１２Ｈ），４．０４−４．１２（ｍ，８Ｈ），４．２５−４．３１（ｍ，４Ｈ），５．３１−５．５４（ｍ，１６Ｈ），６．８２（ｄ，８Ｈ，Ｊ＝８．７Ｈｚ），６．９１（ｄ，８Ｈ，Ｊ＝８．７Ｈｚ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ２０．６，２０．８，６２．０，６５．９，６８．８，６９．１，６９．４，９５．９，１１５．９，１３２．５，１３８．５，１３８．８，１５４．２，１６９．７，１６９．８６，１６９．９３，１７０．４；ＲＭＳ（ＦＡＢ，２−ニトロベンジルアルコールマトリックス）Ｃ_８２Ｈ_９２Ｏ_４０（［Ｍ］^＋）としての計算値；１７１６．５１６５，実測値；１７１６．５１７１．
実施例４
以下の反応式（２６）
に従って式（２９）
の化合物を以下のようにして合成した。
磁気攪拌子を備えた１０ｍｌフラスコに式（２８）の化合物（０．０２４ｇ、０．０１１ｍｍｏｌ）、ナトリウムメトキシド（０．００２ｇ、０．０４ｍｍｏｌ）、メタノール（２ｍｌ）を加え、室温で８０分攪拌した。その後陽イオン交換樹脂（ＤＯＷＥＸ ５０ＷＸ８−１００）を反応溶液が酸性になるまで加え、ろ過し、溶媒留去し、式（２９）の化合物を得た（０．０１４ｇ、０．００９ｍｍｏｌ、収率８８％）。
本化合物は文献未収載の新規化合物であり、その性状、分光学データ、分析データは以下の通りであった。淡黄色固体；融点８６．６−８９．３℃；^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）δ３．５９−３．７３（ｍ，２８Ｈ），３．８１−３．８７（ｍ，２０Ｈ），４．０２−４．０５（ｍ，８Ｈ），４．８１（ｓ，４Ｈ），６．６８（ｄ，８Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），６．８９（ｄ，８Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）δ６２．９，６７．８，６８．５，６８．６，７０．８，７１．５，７２．１，７２．５，７４．６，１０１．８，１１４．８，１３３．７，１３８．３，１４０．０，１５８．７；ＨＲＭＳ（ＦＡＢ，グリセリンマトリックス）Ｃ_６６Ｈ_９２Ｏ_３２（［Ｍ］^＋）としての計算値；１３９６．５５７２，実測値；１３９６．５６０５．
参考例５
上記実施例４において用いた式（２８）の化合物の原料として用いた式（２７）
の化合物を以下のようにして合成した。
磁気攪拌装置を備えた３００ｍｌ三口フラスコを用意し窒素置換した。これに窒素雰囲気下、ＤＭＦ（１００ｍｌ）、式（２３）の化合物（０．４０ｇ、１．００ｍｍｏｌ）、２−クロロエトキシエタノール（１．２５ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（４．１６ｇ、３０．１ｍｍｏｌ）、ヨウ化カリウム（０．２１ｇ、１．２７ｍｍｏｌ）を加え、１００°Ｃで８時間攪拌した。その後、溶媒留去し、酢酸エチル（１００ｍｌ）を加え、飽和塩化アンモニウム水溶液、飽和食塩水で洗浄し、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒留去し、シルカゲルカラムクロマトグラフィー（塩化メチレン／アセトン＝１／３）で単離して、式（２７）の化合物を得た（０．３５ｇ、０．４７ｍｍｏｌ，収率４７％）。
白色固体；融点１３８．６−１４０．０℃；^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ２．２５−２．２９（ｍ，４Ｈ），３．６３−３．６６（ｍ，８Ｈ），３．７２−３．７５（ｍ，８Ｈ），３．８１−３．８４（ｍ，８Ｈ），４．０６−４．８７（ｍ，８Ｈ），６．６５（ｄ，８Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），６．９１（ｄ，８Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ６１．８，６７．２，６９．７，７２．６，１１３．７，１３２．５，１３７．１，１３８．５，１５６．９；元素分析Ｃ_４２Ｈ_５２Ｏ_１２としての計算値：Ｃ，６７．３６；Ｈ，７．００．実測値：Ｃ，６７．３０；Ｈ，６．９７．
参考例６
上記実施例４において原料として用いた式（２８）
の化合物を以下のようにして合成した。
磁気攪拌子を備えた５０ｍｌ二口フラスコを用意し窒素置換した。これに窒素雰囲気下、蒸留した塩化メチレン（１５ｍｌ）、式（２７）の化合物（０．２３ｇ、０．３０ｍｍｏｌ）、式（１５）の化合物（０．７３ｇ、１．４８ｍｍｏｌ）、モレキュラーシーブス４Ａを加え、三フッ化ホウ素ジエチルエーテル錯体（０．４５ｍｌ、３．６ｍｍｏｌ）を滴下し、室温で２０時間攪拌した。その後反応溶液を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液の中へ流し込み、有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、水、飽和食塩水で洗浄し、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒留去し、シルカゲルカラムクロマトグラフィー（塩化メチレン／アセトン＝１０／１）で単離して、式（２８）の化合物を得た（０．３１ｇ、０．１５ｍｍｏｌ、収率５０％）。
淡黄色固体；融点５７．３−６２．０℃；^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ１．９５−１．９６（ｍ，２４Ｈ），２．０５（ｓ，１２Ｈ），２．１０（ｓ，１２Ｈ），３．６８−３．７８（ｍ，２４Ｈ），４．０２−４．０７（ｍ，１６Ｈ），４．２１−４．２５（ｍ，４Ｈ），４．８５（ｓ，４Ｈ），５．２４−５．３１（ｍ，１２Ｈ），６．６０（ｄ，８Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），６．８５（ｄ，８Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ２０．５，２０．６，２０．７，６２．３，６６．０，６７．０，６７．２，６８．３，６８．９，６９．４，６９．７，７０．０，９７．６，１１３．５，１３２．４，１３６．９，１３８．２，１５６．８，１６９．６，１６９．７，１６９．８，１７０．４；元素分析Ｃ_９８Ｈ_１２４Ｏ_４８としての計算値：Ｃ，５６．８６；Ｈ，６．０４．実測値：Ｃ，５７．１５；Ｈ，５．９６．
実施例５
以下の反応式（３０）
に従って式（３６）
の化合物を以下のようにして合成した。
磁気攪拌子を備えた１０ｍｌフラスコに式（３５）の化合物（０．０４１ｇ、０．０１１ｍｍｏｌ）、ナトリウムメトキシド（０．００４ｇ、０．０７ｍｍｏｌ）、メタノール（３ｍｌ）を加え、室温で２時間攪拌した。その後陽イオン交換樹脂（ＤＯＷＥＸ ５０ＷＸ８−１００）を反応溶液が酸性になるまで加え、ろ過し、溶媒留去し、式（３６）の化合物を得た（０．０２４ｇ、０．００９２ｍｍｏｌ、収率８３％）。
本化合物は文献未収載の新規化合物であり、その性状、分光学データ、分析データは以下の通りであった。淡黄色固体；融点８３．７−８７．６℃；^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）δ３．５９−３．７２（ｍ，７２Ｈ），３．８１−３．９３（ｍ，４０Ｈ），４．８２（ｓ，８Ｈ），６．２８（ｓ，８Ｈ），６．３７（ｓ，４Ｈ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）δ６２．９，６７．８，６８．６，６８．７，７０．６，７１．５，７２．１，７２．５，７４．６，１０１．８，１０２．１，１１１．０，１４２．３，１４６．５，１６０．８．
参考例７
上記実施例５において原料として用いた式（３５）
の化合物を以下のようにして合成した。
磁気攪拌子を備えた５０ｍｌ二口フラスコを用意し窒素置換した。これに窒素雰囲気下、蒸留した塩化メチレン（１５ｍｌ）、式（３４）の化合物（０．３３ｇ、０．２８ｍｍｏｌ）、式（１５）の化合物（１．４３ｇ、２．９０ｍｍｏｌ）、モレキュラーシーブス４Ａを加え、三フッ化ホウ素ジエチルエーテル錯体（０．８５ｍｌ、６．７ｍｍｏｌ）を滴下し、室温で４１時間攪拌した。その後反応溶液を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液の中へ流し込み、有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、水、飽和食塩水で洗浄し、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒留去し、シルカゲルカラムクロマトグラフィー（塩化メチレン／アセトン＝５／１）で単離して、式（３５）の化合物を得た（０．１６ｇ、０．０４２ｍｍｏｌ、収率１５％）。
淡黄色固体；融点５９．２−６２．９℃；^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ１．９６（ｓ，２４Ｈ），２．０１（ｓ，２４Ｈ），２．０６（ｓ，２４Ｈ），２．１２（ｓ，２４Ｈ），３．６４−３．７３（ｍ，４０Ｈ），３．７８−３．８５（ｍ，２４Ｈ），４．０５−４．０８（ｍ，１６Ｈ），４．２４−４．２９（ｍ，８Ｈ），４．８５（ｓ，８Ｈ），５．２５−５．３３（ｍ，２４Ｈ），６．１７（ｓ，８Ｈ），６．２４（ｓ，４Ｈ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ２０．６１，２０．６４，２０．７，２０．８，６２．３，６６．０，６７．２，６７．２，６８．３，６９．０，６９．４，６９．６，７０．０，９７．７，１００．６，１０９．８，１４０．６，１４４．８，１５９．０，１６９．７，１６９．８，１６９．９，１７０．６；元素分析Ｃ_１７０Ｈ_２２８Ｏ_９６としての計算値：Ｃ，５３．６３；Ｈ，６．０４．実測値：Ｃ，５３．８４；Ｈ，５．９２．
参考例８
式（３５）の化合物の原料として用いた式（３４）
の化合物を以下のようにして合成した。
磁気攪拌装置を備えた２００ｍｌ三口フラスコを用意し窒素置換した。これに窒素雰囲気下、ＤＭＦ（１００ｍｌ）、式（３３）の化合物（０．３８ｇ、０．８２ｍｍｏｌ）、２−クロロエトキシエタノール（２．０４ｇ、１６．４ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（６．８３ｇ、４９．４ｍｍｏｌ）、ヨウ化カリウム（０．３３ｇ、２．０２ｍｍｏｌ）を加え、１００℃で１３時間攪拌した。その後、溶媒留去し、塩化メチレン（２００ｍｌ）を加え、飽和塩化アンモニウム水溶液、飽和食塩水で洗浄し、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒留去し、シルカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム／メタノール＝５／１）で単離して、式（３４）の化合物を得た（０．４２ｇ、０．３６ｍｍｏｌ、収率４４％）。
淡黄色油状；^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ３．１７−３．２０（ｍ，８Ｈ），３．５４−３．５５（ｍ，１６Ｈ），３．６２−３．７１（ｍ，１６Ｈ），３．８４−３．９１（ｍ，１６Ｈ），６．２１（ｓ，８Ｈ），６．２６（ｓ，４Ｈ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ６１．５，６７．２，６９．２，７２．６，１００．９，１１０．０，１４０．７，１４４．８，１５９．０；ＨＲＭＳ（ＦＡＢ，２−ニトロベンジルアルコールマトリックス）Ｃ_５８Ｈ_８５Ｏ_２４（［Ｍ＋Ｈ］^＋に相当）としての計算値；１１６５．５４３１，実測値；１１６５．５４１３．
参考例９
式（３４）の化合物の原料として用いた式（３３）
の化合物を以下のようにして合成した。
磁気攪拌装置を備えた２００ｍｌ三口フラスコを用意し窒素置換した。これに窒素雰囲気下、蒸留した塩化メチレン（５０ｍｌ）、式（３２）の化合物（１．２５ｇ、２．１８ｍｍｏｌ）を加え、−５０℃で１Ｍ三臭化ホウ素ジクロロメタン溶液（３４．９ｍｌ、３４．９ｍｍｏｌ）を滴下し、室温で１８時間攪拌した。その後反応溶液を氷水（２００ｍｌ）に流し込み、酢酸エチル（３００ｍｌ）で抽出し、有機層を飽和塩化アンモニウム水溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、溶媒留去し、シルカゲルカラムクロマトグラフィー（塩化メチレン／アセトン＝１／１）で単離して、式（３３）の化合物を得た（０．７９２ｇ、１．７２ｍｍｏｌ、収率７９％）。
白色固体；融点＜３００℃；^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，アセトン−ｄ_６）δ６．０７（ｓ ８Ｈ），６．１２（ｓ，４Ｈ），８．０４（ｓ，８Ｈ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，アセトン−ｄ_６）δ１０１．７，１１０．０，１４０．５，１４６．６，１５８．３．；ＨＲＭＳ（ＦＡＢ、２−ニトロベンジルアルコールマトリックス）Ｃ_２６Ｈ_２１Ｏ_８（Ｍ＋Ｈ］^＋に相当）としての計算値；４６１．１２３６，実測値；４６１．１２３０．
参考例１０
式（３３）の化合物の原料として用いた式（３２）
の化合物を以下のようにして合成した。
磁気攪拌子を備えた３００ｍｌ三口フラスコを用意し窒素置換した。これに窒素雰囲気下、亜鉛粉末（４．４７ｇ、６８．３ｍｍｏｌ）、脱水ＴＨＦ（１００ｍｌ）を加え、−１０℃で塩化チタン（ＩＶ）（６．４８ｇ、３４．２ｍｍｏｌ）を滴下し、ゆっくり室温に戻した後、７０℃で２時間攪拌した。その後０℃で、脱水ＴＨＦ（５０ｍｌ）に溶解させた式（３１）の化合物（３．５７ｇ、１１．８ｍｍｏｌ）を加え、７０℃で５時間攪拌した。その後室温に戻し、１０％Ｋ_２ＣＯ_３水溶液（１００ｍｌ）を加え、塩化メチレン（２００ｍｌ）で抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒留去し、シルカゲルカラムクロマトグラフィー（塩化メチレン／ヘキサン＝２／１）で単離して、式（３２）の化合物を得た（１．４５ｇ、２．５３ｍｍｏｌ、収率４３％）。
白色固体；融点２１０．０−２１０．８℃；^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ３．６５（ｓ，２４Ｈ），６．２１−６．２５（ｍ，１２Ｈ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ５５．３，９９．４，１０９．０，１４０．９，１４５．０，１６０．０；ＨＲＭＳ（ＦＡＢ，２−ニトロベンジルアルコールマトリックス）Ｃ_３４Ｈ_３６Ｏ_８（［Ｍ］^＋）；５７２．２４１０，実測値；５７２．２４０７；元素分析Ｃ_３４Ｈ_３６Ｏ_８としての計算値：Ｃ，７１．３１；Ｈ，６．３４．実測値：Ｃ，７１．２０；Ｈ，６．０４．
実施例６
前記実施例１で合成したマンノースで修飾した式（１７）の化合物を検出剤として用いて、糖結合タンパク質の検出を行った。１０ｍＭのトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．６）に１ｍｇ／１ｍｌの濃度になるようにＣａＣｌ_２を加え、さらに、１ｍｇ／１ｍｌの濃度になるようにＭｎＣｌ_２を加えた溶液（以下、この溶液を塩含有緩衝液という。）を予め調製し、この溶液を式（１７）の化合物（１．０５ｍｇ）に体積が１０ｍｌになるように加えたストックソリューションを用意した。このストックソリューション１ｍｌに、コンカナバリンＡ（以下ＣｏｎＡと略記する。）を、０ｍｇ、０．１ｍｇ、０．３ｍｇ、０．５ｍｇ、１．０ｍｇ、２．１ｍｇ、４．２ｍｇ、８．３ｍｇ加え、塩含有緩衝液を足して計５ｍｌとした試験液を調製した。これらの試験液を調製後１０分間攪拌した後、それぞれ蛍光スペクトルを測定した。なお、試験液中の化合物（１７）の濃度は１９μＭ、ＣｏｎＡの濃度はそれぞれ、０μＭ、０．２μＭ、０．６μＭ、１．０μＭ、２．０μＭ、４．０μＭ、８．０μＭ、１６．０μＭとなる。測定は日立製作所製蛍光光度計を用い、キセノンランプを用いて波長３７０ｎｍの光で励起し、蛍光スペクトルを室温で測定した。図１、及び図２の○印のデータが示すように、蛍光性糖誘導体化合物が式（１７）の化合物の場合には、５００ｎｍ付近の蛍光がＣｏｎＡの濃度増加と共に著しく強くなることが分かった。
実施例７
式（１７）の化合物に代えてガラクトースで修飾した式（２１）の化合物を検出剤として用い、その試験液中の濃度を１９μＭではなく２２μＭとした以外は実施例６と同様の操作を行い、糖結合タンパク質の検出実験を行った。図２の×印が示すように、ＣｏｎＡの濃度によらず５００ｎｍ付近に蛍光を示さなかった。実施例６の結果と合わせ考えると、ＣｏｎＡは式（１７）の化合物では検出されるが、式（２１）の化合物では検出されず、蛍光性糖誘導体化合物の構造によって選択性が異なることが分かった。
実施例８
式（１７）の化合物を検出剤として用い、実施例６と同様の操作を行い、検出剤溶液を調製した。ただし、ＣｏｎＡも加えた後の試験液中の式（１７）の化合物の濃度が１９μＭではなく１７．８μＭとなるように調整した。この溶液を蛍光光度計に装着し、添加後のＣｏｎＡ濃度が８μＭとなるようにＣｏｎＡを添加し、直ちに蛍光の測定を行った。図３のデータが示すように、添加後の５００ｎｍの蛍光の強度は急速に増大し、数秒以内に飽和の値に達した。操作に必要なタイムラグを考慮すると、強度の増大は実質的には瞬間的とも考えられ、ＣｏｎＡを極めて迅速に検出できることを示している。
実施例９
ガラクトースで修飾した式（２１）の化合物を検出剤として用い、糖結合タンパク質の検出を行った。１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）中に化合物（２１）を加え検出剤溶液として調製した。ここに、室温で、ピーナツ凝集素（以下ＰＮＡと略記する）を加え試験液を調製した。その際、該試験液中の化合物（２１）の濃度が２０μＭとなるように調製した。さらに、加えるＰＮＡの量を変えてＰＮＡ濃度の異なる試験液も調製した。これらについても該試験液中の式（２１）の化合物の濃度が２０μＭとなるように調製した。各試験液について、ＰＮＡ溶液を添加後１０分間攪拌した後、実施例６と同様に蛍光スペクトルを室温で測定した。図４、及び図５の○印のデータが示すように、蛍光性糖誘導体化合物が式（２１）の化合物の場合には、５００ｎｍ付近の蛍光がＰＮＡの濃度増加と共に強くなることが分かった。
実施例１０
式（２１）の化合物に代えて式（１７）の化合物を検出剤として用い、実施例６と同様の操作で試験液を調製し蛍光を測定した。図５の×印のデータが示すように、ＰＮＡの濃度を増しても５００ｎｍ付近の蛍光の強度は殆ど増大しなかった。実施例９の結果と合わせ考えると、ＰＮＡは化合物（２１）では検出されるが、式（１７）の化合物では実質的には検出されないことが分かった。
実施例１１
式（２５）の化合物を検出剤として用い、実施例６と同様の方法でＣｏｎＡの検出実験を行った。但し、実施例６の場合とは異なり、試験液中の検出剤の濃度は７．２μＭとなるように調整し、励起波長は３２０ｎｍとした。図６及び図７が示すように、検出剤が式（２５）の化合物の場合にも、４６０ｎｍ付近の蛍光がＣｏｎＡの濃度増加と共に著しく強くなることが分かった。
実施例１２
式（２５）の化合物に代えて式（２９）の化合物を検出剤として用い、実施例６と同様の方法でＣｏｎＡの検出実験を行った。但し、実施例１１の場合とは異なり、試験液中の検出剤の濃度は７．１μＭとなるように調整した。図８及び図９が示すように、検出剤が２ユニットのエチレンオキシ基をリンカーとして含む化合物（２９）の場合にも、４７０ｎｍ付近の蛍光がＣｏｎＡの濃度増加と共に著しく強くなることが分かった。
実施例１３
式（２９）の化合物に代えて式（３６）の化合物を検出剤として用い、実施例１２と同様の方法でＣｏｎＡの検出実験を行った。但し、実施例１１の場合とは異なり、試験液中の検出剤の濃度は７．３μＭとなるように調整し、励起波長は３００ｎｍとした。図１０及び図１１が示すように、２ユニットのエチレンオキシ基をリンカーとして介し８個の糖残基を含む式（３６）の化合物の場合にも、４５０ｎｍ付近の蛍光がＣｏｎＡの濃度増加と共に著しく強くなることが分かった。実施例１２の結果と合わせ考えると、ＣｏｎＡの濃度増加に対する蛍光強度の増大は式（２９）の化合物の場合より急峻であり、より高感度であることが分かった。
実施例１４
以下の反応式（３７）
に従って式（４０）
の化合物を以下のようにして合成した。
磁気攪拌子を備えた１０ｍｌフラスコに式（３９）の化合物（０．０３３ｇ、０．０２７ｍｍｏｌ）、ナトリウムメトキシド（０．００２ｇ、０．０４４ｍｍｏｌ）、メタノール（２ｍｌ）を加え、室温で４０分攪拌した。その後陽イオン交換樹脂（ＤＯＷＥＸ ５０ＷＸ８−１００）を反応溶液が酸性になるまで加え、ろ過し、溶媒留去し、式（４０）の化合物を得た（０．０１９ｇ、０．０２２ｍｍｏｌ、収率８３％）。
本化合物は文献未収載の新規化合物であり、その性状、分光学データ、分析データは以下の通りであった。白色固体；融点１１１．２−１１５．９℃；^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）δ３．６０−３．８１（ｍ，２４Ｈ），３．９６−４．０６（ｍ，４Ｈ），４．７７−４．８３（ｍ，２Ｈ），６．６４−６．７１（ｍ，４Ｈ），６．８６−７．０８（ｍ，１４Ｈ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）δ６２．９，６７．８，６８．４，６８．５，７０．８，７１．５，７２．１，７２．５，７４．６，１０１．８，１１４．８，｛１２７．３，１２７．４｝，｛１２８．６，１２８．７｝，１３２．４，１３３．６，｛１３７．８，１３７．９｝，１４１．２，｛１４５．５，１４５．６｝，１５８．７；ＨＲＭＳ（ＦＡＢ，グリセリンマトリックス）Ｃ_４６Ｈ_５６Ｏ_１６Ｎａ（［Ｍ＋Ｎａ］^＋に相当）としての計算値；８８７．３４６６，実測値；８８７．３４７０．
参考例１１
上記実施例１４において原料として用いた式（３９）
の化合物を以下のようにして合成した。
磁気攪拌装置を備えた５０ｍｌ二口フラスコを用意し窒素置換した。これに窒素雰囲気下、ＤＭＦ（１０ｍｌ）、式（３８）の化合物（０．１９ｇ、０．５１ｍｍｏｌ）、式（３８）の化合物（０．５６ｇ、１．１２ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（０．１８ｇ、１．３１ｍｍｏｌ）、１８−クラウン−６（０．００７ｇ、０．０２５ｍｍｏｌ）を加え、８０℃で１７時間攪拌した。その後、塩化メチレン（１００ｍｌ）を加え、水、飽和食塩水で洗浄し、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒留去し、シルカゲルカラムクロマトグラフィー（塩化メチレン／アセトン＝２０／１）及び分取ＨＰＬＣで単離して、式（３９）の化合物を得た（０．０５０ｇ、０．０４２ｍｍｏｌ、収率８％）。
白色固体；融点６４．２−６８．７℃；^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ１．９６−２．００（ｍ，１２Ｈ），２．０６−２．０９（ｍ，６Ｈ），２．１１−２．１４（ｍ，６Ｈ），３．６８−３．７４（ｍ，６Ｈ），３．７７−３．８３（ｍ，６Ｈ），４．００−４．１０（ｍ，８Ｈ），４．２３−４．３０（ｍ，２Ｈ），４．８７−４．９０（ｍ，２Ｈ），５．２４−５．３８（ｍ，６Ｈ），６．６１−６．６７（ｍ，４Ｈ），６．８７−６．９３（ｍ，４Ｈ），６．９７−７．１０（ｍ，１０Ｈ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ２０．６，２０．６，２０．７，２０．８，６２．３，６６．０，６７．１，６７．３，６８．３，６９．０，６９．５，６９．８，７０．１，９７．７，｛１１３．５，１１３．６｝，１２６．１，｛１２７．５，１２７．６｝，１３１．３，１３２．４，１３６．５，１３９．５，１４４．１，１５７．０，１６９．７，１６９．８，１６９．９，１７０．５；ＨＲＭＳ（ＦＡＢ，２−ニトロベンジルアルコールマトリックス）Ｃ_６２Ｈ_７２Ｏ_２４（［Ｍ］^＋）としての計算値；１２００．４４１４，実測値；１２００．４４４３．
実施例１５
式（４０）の化合物は導入した糖の数が少ないため、水溶性が低い。このため、式（４０）の化合物（０．４４４ｍｇ）にメタノール（１ｍｌ）を加えて溶解し、実施例６で調製した塩含有緩衝液を加えて合計５ｍｌとしたストックソリューションを用意した。該ストックソリューション１ｍｌを取り、塩含有緩衝液を加えて合計５ｍｌとした試験液［（式（４０）の化合物の濃度＝２０．６μＭ］と、ストックソリューション１ｍｌにＣｏｎＡ（３．９４ｍｇ）及び塩含有緩衝液を加えて合計５ｍｌとし１０分間攪拌した試験液［式（４０）の化合物の濃度＝２０．６μＭ、ＣｏｎＡの濃度＝７．９μＭ］を調整し、それぞれ蛍光スペクトルを測定した。図１２が示すように、糖の導入量が低い式（４０）の化合物であっても、ＣｏｎＡを加えた試験液は、式（４０）の化合物のみを含む試験液と比較すると２．８倍ほどの蛍光強度の増加を示した。
実施例１６
実施例６で調製した塩含有緩衝液に式（１７）の化合物のみを溶解した試験液を、式（１７）の化合物の濃度が１９μＭになるように調製した。別に、実施例６で調製した塩含有緩衝液に式（１７）の化合物を溶解し、更にＣｏｎＡを加えて、式（１７）の化合物の濃度が１９μＭ、ＣｏｎＡの濃度が８μＭになるようにし、１０分間攪拌した試験液を調製した。暗室にて、それぞれの試料をハンディＵＶランプ（アズワン株式会社製、９．０Ｗ、１５Ａ、ＦＬ：８Ｗ×１）に乗せ、３６５ｎｍの紫外光を照射した。その状態で撮影した写真を図１３に示した。図１３の左のセルには式（１７）の化合物のみを含む試験液が、右のセルには式（１７）の化合物とＣｏｎＡの両者を含む試験液が入れてある。対照実験であるＣｏｎＡを含まない左のセルの試験液からの蛍光は弱く実質的には観察されないが、ＣｏｎＡを加えた右のセルの試験液は裸眼での目視で明確に確認できる強い蛍光を発しており、ＣｏｎＡを極めて簡便かつ高感度に検出出来ることが分かった。
実施例１７
以下の合成経路
に従って式（４３）
の化合物を以下のようにして合成した。
磁気攪拌子を備えた１０ｍＬフラスコに式（４２）の化合物（１４ｍｇ、４．３μｍｏｌ）、ナトリウムメトキシド（１．４ｍｇ、２６μｍｏｌ）、メタノール（２ｍＬ）、テトラヒドロフラン（１ｍＬ）を加え、室温で２時間攪拌した。その後陽イオン交換樹脂（ＤＯＷＥＸ ５０ＷＸ８−１００）を反応溶液が酸性になるまで加え、ろ過し、溶媒留去し、式（４３）の化合物を得た（７．１ｍｇ、３．５μｍｏｌ、収率８１％）。
式（４３）の化合物：淡黄色固体；融点１７０．１−１７３．５℃；^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）δ３．２６−３．３６（ｍ，８Ｈ），３．４９−３．８６（ｍ，７６Ｈ），４．３６−４．３９（ｍ，４Ｈ），６．４３−６．５１（ｍ，８Ｈ），６．７２−６．８１（ｍ，８Ｈ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）δ６１．５，６２．０，６７．９，６９．６，７０．０，７０．８，７２．０，７２．９，７３．６，７３．９，７５．４，７５．８，７６．４，７９．５，１０３．３，１０４．０，１１４．９，１３３．４，１３８．０，１３９．６，１５７．６；ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭＳ（マトリックス：２−ニトロベンジルアルコールマトリックス）Ｃ_９０Ｈ_１３２Ｏ_５２Ｎａ（［Ｍ＋Ｎａ］^＋に相当）としての計算値；２０６７．７６；実測値；２０６７．７１．
参考例１２
上記実施例１７において原料として用いた式（４２）
の化合物を以下のようにして合成した。
磁気攪拌子を備えた５０ｍＬ二口フラスコを用意し窒素置換した。窒素雰囲気下これに、乾燥塩化メチレン（１５ｍＬ）、参考例５で合成された式（２７）の化合物（５５ｍｇ、７４μｍｏｌ）、式（４１）の化合物（０．４６ｇ、０．５９ｍｍｏｌ）、及びモレキュラーシーブス（４Ａ）を加え、０℃で三フッ化ホウ素ジエチルエーテル錯体（０．４７ｍＬ、３．７ｍｍｏｌ）を滴下し、室温で４日間攪拌した。その後反応溶液を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液の中へ流し込み、有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、水、飽和食塩水で洗浄し、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒留去した。その後シルカゲルカラムクロマトグラフィー（塩化メチレン／アセトン＝５／１）及び分取ＨＰＬＣで単離して、式（４２）の化合物を得た（１４ｍｇ、４．３μｍｏｌ、収率６％）。
式（４２）の化合物：淡黄色固体；融点９６．５−９９．７℃；^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ１．９６（ｓ，１２Ｈ），２．００（ｓ，１２Ｈ），２．０４（ｓ，２４Ｈ），２．１１（ｓ，１２Ｈ），２．１４（ｓ，１２Ｈ），３．５８−４．１６（ｍ，５６Ｈ），４．４６−４．５６（ｍ，１２Ｈ），４．８７−４．９７（ｍ，８Ｈ），５．０７−５．２２（ｍ，８Ｈ），５．３４−５．３６（ｍ，４Ｈ），６．６２（ｄ，８Ｈ，Ｊ＝８．２Ｈｚ），６．８９（ｄ，８Ｈ，Ｊ＝８．２Ｈｚ）；^１３Ｃ ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ２０．５，２０．６，２０．７，２０．８，２０．９，６０．８，６２．０，６６．６，６７．１，６９．１，６９．２，６９．９，７０．３，７０．６，７１．０，７１．６，７２．６，７２．８，７６．２，１００．６，１０１．１，１１３．６，１３２．５，１３７．０，１３８．４，１５６．９，１６９．１，１６９．７，１６９．８，１７０．０，１７０．１，１７０．３４，１７０．３５；ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭＳ（マトリックス：２−ニトロペンジルアルコールマトリックス）Ｃ_１４６Ｈ_１８９Ｏ_８０（［Ｍ＋Ｈ］^＋に相当）としての計算値；３２２２．０７；実測値；３２２２．４３．
実施例１８
式（４３）の化合物を用い、レクチンとしてＲＣＡ１２０の検出実験を行った。
緩衝液（１０ｍＭリン酸緩衝液、ｐＨ７．４）中、６．７μＭの式（４３）の化合物に、０．０μＭ，０．５μＭ，１．０μＭ、２．０μＭ、３．０μＭ及び５．０μＭのＲＣＡ１２０を加え、１０分間攪拌しサンプル調製を行った。図１４が示すように蛍光スペクトルでは、ＲＣＡ１２０の濃度増加に伴い式（４３）の化合物の４００ｎｍ付近の発光強度が増加した。図１５に示すように、ＲＣＡ１２０の濃度が１．０μＭ、２．０μＭ及び３．０μＭで発光強度がそれぞれ１．５、１．８及び２．７倍に増加し、数μＭレベルでＲＣＡ１２０の検出が可能であった。

本発明は、標的に前処理を必要とせず、迅速、高感度、高選択的に糖結合タンパク質を検出でき、裸眼でも容易に判定可能な標的検出方法並びに該標的検出に好適に用いられる標的検出材料を提供することができる。
本明細書に引用するすべての刊行物及び特許文献は、参照により全体として本明細書中に援用される。なお、例示を目的として、本発明の特定の実施形態を本明細書において説明したが、本発明の精神及び範囲から逸脱することなく、種々の改変が行われる場合があることは、当業者に容易に理解されるであろう。

Claims (23)

1. 一般式（１）
   （Ｓ^１−Ｓ^２−Ｓ^３−Ｓ^４−Ｓ^５−Ｓ^６−Ａ_ｍ）_ｎＢ （１）
   ［式中、Ｓ^１は糖の構造の１個の水酸基から水素原子を除いた残基を表わし、Ｓ^２、Ｓ^３、Ｓ^４、Ｓ^５、Ｓ^６は、独立に、存在しないか、又は、糖構造から１個の水酸基を除くと共にもう１個の水酸基から水素原子を除いた残基を表わし、Ｓ^１、Ｓ^２、Ｓ^３、Ｓ^４、Ｓ^５、Ｓ^６は互いにグリコシド結合で繋がった糖鎖構造を形成しており、Ａは、存在しないか、又は、酸素原子を含んでいてもよい炭素数２以上６以下の２価の有機基を表わし、Ｂは光照射により蛍光を発する蛍光性化合物からｎ個の水素原子を除いた残基を表し、該残基は炭素数７以下の置換基で置換されていてもよく、Ａが存在する場合のｍは６以下の正の整数を表し、ｎは１２以下の正の整数を表す。Ｓ^２、Ｓ^３、Ｓ^４、Ｓ^５、Ｓ^６は互いに同じであっても異なっていてもよい。１個の水酸基から水素原子を除くことでＳ^１となる母体の糖の構造（以下、Ｓ^１の母体の糖の構造、又は、単に、母体の糖の構造という。）は、１個の水酸基を除くと共にもう１個の水酸基から水素原子を除くことでそれぞれＳ^２、Ｓ^３、Ｓ^４、Ｓ^５、Ｓ^６となる母体の糖の構造（以下、Ｓ^２〜Ｓ^６の母体の糖の構造、又は、単に、母体の糖の構造という。）と互いに同じであっても異なっていてもよい。］で表わされることを特徴とする蛍光性糖誘導体化合物。
2. Ｓ^１の母体の糖の構造が、グルコース、マンノース、ガラクトース、フルクトース、アロース、タロース、プシコース、グロース、イドース、ソルボース、リボース、リキソース、キシロース、アピオース、デオキシグルコース、デオキシマンノース、デオキシガラクトース、デオキシアロース、デオキシタロース、デオキシリボースである、請求項１の蛍光性糖誘導体化合物。
3. Ｓ^２、Ｓ^３、Ｓ^４、Ｓ^５又はＳ^６が存在しない、請求項１の蛍光性糖誘導体化合物。
4. Ｓ^２、Ｓ^３、Ｓ^４、Ｓ^５、Ｓ^６の母体の糖の構造が、それぞれ独立に、グルコース、マンノース、ガラクトース、フルクトース、アロース、タロース、プシコース、グロース、イドース、ソルボース、リボース、リキソース、キシロース、アピオース、デオキシグルコース、デオキシマンノース、デオキシガラクトース、デオキシアロース、デオキシタロース、デオキシリボースである、請求項１の蛍光性糖誘導体化合物。
5. Ａが存在しない、請求項１の蛍光性糖誘導体化合物。
6. ＡがＣＨ_２ＣＨ_２Ｏである、請求項１の蛍光性糖誘導体化合物。
7. ｎ個の水素原子を除くことでＢとなる母体の蛍光性化合物が、共役構造からなる蛍光性化合物である、請求項１の蛍光性糖誘導体化合物。
8. ｎ個の水素原子を除くことでＢとなる母体の蛍光性化合物が、一般式（２）
   （式中、Ｒ^１は炭素数６以下の飽和炭化水素基又は炭素数１２以下の不飽和炭化水素基を示し、炭素数７以下の置換基で置換されていてもよい。）である、請求項１の蛍光性糖誘導体化合物。
9. ｎ個の水素原子を除くことでＢとなる母体の蛍光性化合物が、一般式（３）
   （式中、Ｒ^２及びＲ^３は炭素数６以下の飽和炭化水素基又は炭素数１２以下の不飽和炭化水素基を示し、互いに同じであっても異なっていてもよく、また、炭素数７以下の置換基で置換されていてもよい。）である、請求項１の蛍光性糖誘導体化合物。
10. 一般式（１）
    （Ｓ^１−Ｓ^２−Ｓ^３−Ｓ^４−Ｓ^５−Ｓ^６−Ａ_ｍ）_ｎＢ （１）
    （式中、Ｓ^１、Ｓ^２、Ｓ^３、Ｓ^４、Ｓ^５、Ｓ^６、Ａ、Ｂ、ｍ及びｎは前記と同じ意味を表す。）で表わされる化合物を検出材料として用いることを特徴とする、検出標的の検出方法。
11. 検出標的が糖結合タンパク質を含む物質である、請求項１０の検出方法。
12. 検出手段として蛍光の変化を利用する、請求項１０又は１１の検出方法。
13. 検出標的と相互作用可能な検出材料であって、検出標的と相互作用していない時には光照射によりそれ自身電子励起されても蛍光を実質的には発せず、若しくは、検出標的と相互作用していなくても光照射によりそれ自身電子励起されて蛍光を発し、検出標的と相互作用している時には光照射により電子励起されて蛍光を発し、検出標的と相互作用している時に発する蛍光の強度が検出標的と相互作用していない場合の蛍光の強度より大きくなる検出材料を用いることを特徴とする検出標的の検出方法。
14. 検出材料として一般式（１）
    （Ｓ^１−Ｓ^２−Ｓ^３−Ｓ^４−Ｓ^５−Ｓ^６−Ａ_ｍ）_ｎＢ （１）
    （式中、Ｓ^１、Ｓ^２、Ｓ^３、Ｓ^４、Ｓ^５、Ｓ^６、Ａ、Ｂ、ｍ及びｎは前記と同じ意味を表す。）で表わされる化合物を用いる請求項１３の検出方法。
15. 検出標的が糖結合タンパク質を含む物質である、請求項１３又は１４の検出方法。
16. 糖結合タンパク質を含む物質と蛍光性の検出材料の相互作用を利用した糖結合タンパク質を含む物質の検出方法であって、糖鎖で置換された蛍光性検出材料を蛍光性の検出材料として用いることを特徴とする糖結合タンパク質を含む物質の検出方法。
17. 検出材料として一般式（１）
    （Ｓ^１−Ｓ^２−Ｓ^３−Ｓ^４−Ｓ^５−Ｓ^６−Ａ_ｍ）_ｎＢ （１）
    （式中、Ｓ^１、Ｓ^２、Ｓ^３、Ｓ^４、Ｓ^５、Ｓ^６、Ａ、Ｂ、ｍ及びｎは前記と同じ意味を表す。）で表わされる化合物を用いる、請求項１６の検出方法。
18. 含水溶液中で、糖結合タンパク質を活性化する薬剤の存在下に実施する、請求項１１〜１７の検出方法。
19. 糖結合タンパク質と請求項１〜９のいずれか１項に記載の化合物とから構成される凝集体。
20. 糖結合タンパク質と請求項１〜９のいずれか１項に記載の化合物とを含水溶液中で反応させることにより調製される、請求項１９の凝集体。
21. 含水溶液中で、糖結合タンパク質を活性化する薬剤の存在下に反応させることにより調製された、請求項２０に記載の凝集体。
22. 請求項１９に記載の凝集体からの蛍光を観測することからなる糖結合タンパク質の検出方法。
23. 凝集体からの蛍光が請求項１〜９のいずれか１項に記載の化合物自身からの蛍光より強度が増大することを利用した、請求項２２の検出方法。