JPWO2009057293A1 - ヘモグロビン及びヘモグロビン誘導体の測定方法、測定キット - Google Patents
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Abstract
Description
本発明の実施の形態1では、血液成分を含む試料を非イオン性界面活性剤と酸化剤と金属塩とで処理し、前記試料中のヘモグロビンを変性させる工程を含む、ヘモグロビンの測定方法とヘモグロビン誘導体の測定方法について説明する。
本実施の形態2は、少なくとも非イオン性界面活性剤と酸化剤と金属塩とを含む、ヘモグロビンあるいはヘモグロビン誘導体を測定するための試薬組成物についてのものである。ここで、ヘモグロビン誘導体の一例として、実施の形態1で説明したように、ヘモグロビンA1cについて測定をするものとする。
(実施の形態3)
本実施の形態3は、少なくとも非イオン性界面活性剤及び酸化剤と金属塩とを含む試薬組成物を保持し、該試薬組成物によりヘモグロビンとヘモグロビン誘導体を測定するための測定キットについてのものである。ここで、ヘモグロビン誘導体の一例として、実施の形態1で説明したように、ヘモグロビンA1cについて測定をするものとする。
本実施の形態4は、少なくとも試料を添加する試料添加部と、非イオン性界面活性剤と酸化剤と金属塩とによって前記試料中のヘモグロビンを変性させる変性部と、該変性されたヘモグロビンを検出する検出部と、変性されたヘモグロビン誘導体の変性部位に対して特異的に結合する抗体を担持し、ヘモグロビン誘導体を検出する検出部を有する、ヘモグロビン及びヘモグロビン誘導体を測定するための分析デバイスについてのものである。ここで、ヘモグロビン誘導体の一例として、実施の形態1で説明したように、ヘモグロビンA1cについて測定をするものとする。
以下に、ヘモグロビン誘導体の代表的検査項目であるヘモグロビンA1cを測定する場合の実施例の詳細を記す。
次に、金属塩がラテックス凝集反応に与える影響を確認した。
以下、図3に示す分析システムを用いた、ヘモグロビン及びヘモグロビン誘導体の測定について説明する。
(a)分析デバイスの作製
まず、図4(a)に示すような底面が開放された、縦0.5cm×横0.5cm×高さ2cmのプラスチック製の上部ケース302aの上端に、図4(b)に示すように、ヘモグロビンA1cに特異的に結合可能なラテックス試薬と5%スクロースとを含む溶液からなるラテックス試薬303を真空凍結乾燥により担持させる。
まず、溶液試薬用シール305を剥がし、分析デバイス301の注入口306より0.5μLの血液検体を注入し、図4(c)に示すように、該注入口306にケース用シール307を貼ることによって、分析デバイス301を密閉する。
(実施の形態5)
本発明の実施の形態5では、凝集試薬製造方法及び凝集試薬を用いたヘモグロビンA1c測定方法について説明する。
本発明のリガンドは、特異的なタンパク質を認識し、それを結合相手とする物質であれば、いかなるものであってもよい。この代表的な例として、ハプテンが挙げられる。本実施の形態5では、ヘモグロビンA1c中のペプチド配列に対応する糖化ペプチドとして、バリン−ヒスチジン−ロイシン−トレオニン−システインの配列でアミノ酸を結合させたペプチド(以下、VHLTCという)を、凝集試薬のリガンドとして用いる。このリガンドを用いることによって、ヘモグロビンA1c認識抗体に特異的に結合することができる。また、このリガンドを変えることによって、様々な抗体を特異的に認識するリガンドを作製することができる。
本発明の凝集試薬は、制御された数のリガンドを、分子量6万以上の高次構造を持つタンパク質に、官能基を有するリンカーを介して化学的に結合させたものである。また、この凝集試薬は、タンパク質1個当たり、10個以上のリガンドが結合した複合体である。
ポリスチレンラテックス粒子に、抗human HbA1c抗体を過剰量加えて結合させ、さらに、ウシ血清アルブミン(以下BSAという)でブロッキングすることにより、ラテックス標識抗体を作製する。この抗human HbA1c抗体が、試験試料中のヘモグロビンA1c及び凝集試薬のリガンド(VHLTC)3を認識し、結合する。また、この抗体を変えることによって、様々な試験試料中の成分及び凝集試薬を認識するラテックス標識抗体を作製することができる。
血液検体中のヘモグロビン及びヘモグロビンA1cを測定する為に、まず血液検体を希釈し、非イオン性界面活性剤と酸化剤とを含む変性試薬を用いて、希釈された血液検体と混合させ、血液検体中のヘモグロビンをメト化及び変性させる。このようにヘモグロビンをメト化することによって、ヘモグロビンを540nm付近の吸光度で測定することが可能となる。その後、前記希釈及び変性させた検体について、540nm近傍の波長で吸光度を測定し、全ヘモグロビン量をメトヘモグロビン法を用いて算出する。ただし、SLSヘモグロビン法などの、その他のヘモグロビン測定法を用いてもよい。
この吸光度変化より、血液検体中のヘモグロビンA1c量を算出する。
本発明の実施の形態6では、少なくとも凝集試薬及びラテックス標識抗体及び変性試薬を保持し、これらの試薬によりヘモグロビンとヘモグロビンA1cを測定するための試験キットについて説明する。
本発明の実施の形態7では、少なくとも、分析試料を注入する注入口と、希釈液を保持する希釈液収容室と、注入された分析試料を希釈・変性させる希釈・変性室と、該希釈・変性されたヘモグロビンを検出するヘモグロビン測定室と、該希釈・変性された分析試料をラテックス標識抗体と反応させるラテックス反応室と、前記ラテックス標識抗体と反応した分析試料を凝集試薬と反応させる凝集室及び分析試料中の分析対象物を測定する測定室とから構成されるヘモグロビン及びヘモグロビンA1cを測定するための分析デバイスについて説明する。
以下に、凝集試薬の製造方法及びラテックス標識抗体の製造方法についての実施例の詳細を記す。
以下に、第2の凝集試薬の製造方法についての実施例の詳細を記す。
以下に、ラテックス免疫凝集阻止法を用いた被検試料中の分析対象物の測定方法についての実施例の詳細を記す。
担体としてCGG、リンカーとしてEMCS、リガンドとしてVHLTCとで構成された本発明の凝集試薬と、担体としてポリリジン、リンカーとしてEMCS、リガンドとしてVHLTCとで構成された従来の凝集試薬とを用い、それぞれ比較実験を行った。
図11は、ラテックス標識抗体と凝集試薬とのラテックス凝集反応において、測定された吸光度変化と添加した凝集試薬の濃度との関係を示している。横軸は凝集試薬の濃度、縦軸は凝集試薬を加えてから1分後の吸光度変化である。図11によれば、従来の凝集試薬と本発明の凝集試薬とも、凝集試薬の濃度が高くなるにしたがって、凝集物が増加していき、吸光度の測定値が高くなっていくが、凝集試薬の濃度があるレベルを超えた場合、つまり吸光度変化の最大値を越えると、反応液中の抗原が過多の状態になるため、凝集形成が抑制され、見かけ上の吸光度の測定値が逆に低くなる。例えば、従来の凝集試薬では、1μg/mL以上の濃度範囲、また、本発明の凝集試薬では、5μg/mL以上の濃度範囲が、吸光度の測定値が低くなる領域となり、一般に、この領域をプロゾーン領域と呼び、また、この現象はプロゾーン現象と称される。この濃度域の凝集試薬を用いることによって、凝集試薬の濃度変動の反応性への影響を小さくすることができる。また、凝集試薬が過多となるため、凝集反応速度を速くすることができる。この結果より、本発明の凝集試薬のほうが、ダイナミックレンジが大きいことが判明した。ダイナミックレンジが大きいことによって、検量線の傾きが大きくなり、測定精度がよくなる。
(b)各プロゾーン領域の凝集試薬濃度における、凝集反応完了率と経時変化との関係
図12は、各プロゾーン領域の濃度の凝集試薬を用いたラテックス凝集阻止反応において、凝集反応完了率の経時変化を示している。横軸は凝集試薬を加えてからの時間、縦軸は凝集試薬を加えて170秒後を100%凝集したと仮定した場合の凝集反応完了率である。図12に示すように、本発明の凝集試薬を用いた場合では、170秒後において吸光度が安定してきているが、従来の凝集試薬を用いた場合では、グラフの傾きからわかるように、170秒後においてもまだ反応が進み、吸光度が上昇している。170秒後を100%凝集したと仮定しても、明らかに、本発明の凝集試薬の方が、凝集速度が速く、凝集反応完了率が高いことがわかる。これは、例えば、凝集開始から60秒後において比較すると、従来の凝集試薬では、60%凝集反応が完了しているのに対し、本発明の凝集試薬では75%凝集反応が完了している。
図13は、凝集試薬の保存安定性を示している。凝集試薬を真空凍結乾燥し、40℃環境下で保存した。この凝集試薬を用いて、ラテックス凝集阻止反応を行い、分光器を用いて吸光度を測定し、反応前との吸光度の差より、凝集試薬の反応性を確認した。横軸は保存日数、縦軸は凝集反応測定時のレファレンスとの吸光度変化比である。なお、レファレンスとして、−80℃に凍結保存した凝集試薬を用いた。図13に示すように、従来凝集試薬では、3ヶ月保存後の吸光度変化がレファレンスの半分程度の吸光度変化しか示さないが、本発明の凝集試薬では、3ヶ月保存後もレファレンスと同程度の吸光度変化を示し、反応性が安定している傾向があることがわかる。
本発明の実施の形態1では、血液成分を含む試料を非イオン性界面活性剤と酸化剤と金属塩とで処理し、前記試料中のヘモグロビンを変性させる工程を含む、ヘモグロビンの測定方法とヘモグロビン誘導体の測定方法について説明する。
本実施の形態2は、少なくとも非イオン性界面活性剤と酸化剤と金属塩とを含む、ヘモグロビンあるいはヘモグロビン誘導体を測定するための試薬組成物についてのものである。ここで、ヘモグロビン誘導体の一例として、実施の形態1で説明したように、ヘモグロビンA1cについて測定をするものとする。
(実施の形態3)
本実施の形態3は、少なくとも非イオン性界面活性剤及び酸化剤と金属塩とを含む試薬組成物を保持し、該試薬組成物によりヘモグロビンとヘモグロビン誘導体を測定するための測定キットについてのものである。ここで、ヘモグロビン誘導体の一例として、実施の形態1で説明したように、ヘモグロビンA1cについて測定をするものとする。
本実施の形態4は、少なくとも試料を添加する試料添加部と、非イオン性界面活性剤と酸化剤と金属塩とによって前記試料中のヘモグロビンを変性させる変性部と、該変性されたヘモグロビンを検出する検出部と、変性されたヘモグロビン誘導体の変性部位に対して特異的に結合する抗体を担持し、ヘモグロビン誘導体を検出する検出部を有する、ヘモグロビン及びヘモグロビン誘導体を測定するための分析デバイスについてのものである。ここで、ヘモグロビン誘導体の一例として、実施の形態1で説明したように、ヘモグロビンA1cについて測定をするものとする。
以下に、ヘモグロビン誘導体の代表的検査項目であるヘモグロビンA1cを測定する場合の実施例の詳細を記す。
次に、金属塩がラテックス凝集反応に与える影響を確認した。
以下、図3に示す分析システムを用いた、ヘモグロビン及びヘモグロビン誘導体の測定について説明する。
(a)分析デバイスの作製
まず、図4(a)に示すような底面が開放された、縦0.5cm×横0.5cm×高さ2cmのプラスチック製の上部ケース302aの上端に、図4(b)に示すように、ヘモグロビンA1cに特異的に結合可能なラテックス試薬と5%スクロースとを含む溶液からなるラテックス試薬303を真空凍結乾燥により担持させる。
まず、溶液試薬用シール305を剥がし、分析デバイス301の注入口306より0.5μLの血液検体を注入し、図4(c)に示すように、該注入口306にケース用シール307を貼ることによって、分析デバイス301を密閉する。
(実施の形態5)
本発明の実施の形態5では、凝集試薬製造方法及び凝集試薬を用いたヘモグロビンA1c測定方法について説明する。
本発明のリガンドは、特異的なタンパク質を認識し、それを結合相手とする物質であれば、いかなるものであってもよい。この代表的な例として、ハプテンが挙げられる。本実施の形態5では、ヘモグロビンA1c中のペプチド配列に対応する糖化ペプチドとして、バリン−ヒスチジン−ロイシン−トレオニン−システインの配列でアミノ酸を結合させたペプチド(以下、VHLTCという)を、凝集試薬のリガンドとして用いる。このリガンドを用いることによって、ヘモグロビンA1c認識抗体に特異的に結合することができる。また、このリガンドを変えることによって、様々な抗体を特異的に認識するリガンドを作製することができる。
本発明の凝集試薬は、制御された数のリガンドを、分子量6万以上の高次構造を持つタンパク質に、官能基を有するリンカーを介して化学的に結合させたものである。また、この凝集試薬は、タンパク質1個当たり、10個以上のリガンドが結合した複合体である。
ポリスチレンラテックス粒子に、抗human HbA1c抗体を過剰量加えて結合させ、さらに、ウシ血清アルブミン(以下BSAという)でブロッキングすることにより、ラテックス標識抗体を作製する。この抗human HbA1c抗体が、試験試料中のヘモグロビンA1c及び凝集試薬のリガンド(VHLTC)3を認識し、結合する。また、この抗体を変えることによって、様々な試験試料中の成分及び凝集試薬を認識するラテックス標識抗体を作製することができる。
血液検体中のヘモグロビン及びヘモグロビンA1cを測定する為に、まず血液検体を希釈し、非イオン性界面活性剤と酸化剤とを含む変性試薬を用いて、希釈された血液検体と混合させ、血液検体中のヘモグロビンをメト化及び変性させる。このようにヘモグロビンをメト化することによって、ヘモグロビンを540nm付近の吸光度で測定することが可能となる。その後、前記希釈及び変性させた検体について、540nm近傍の波長で吸光度を測定し、全ヘモグロビン量をメトヘモグロビン法を用いて算出する。ただし、SLSヘモグロビン法などの、その他のヘモグロビン測定法を用いてもよい。
この吸光度変化より、血液検体中のヘモグロビンA1c量を算出する。
本発明の実施の形態6では、少なくとも凝集試薬及びラテックス標識抗体及び変性試薬を保持し、これらの試薬によりヘモグロビンとヘモグロビンA1cを測定するための試験キットについて説明する。
本発明の実施の形態7では、少なくとも、分析試料を注入する注入口と、希釈液を保持する希釈液収容室と、注入された分析試料を希釈・変性させる希釈・変性室と、該希釈・変性されたヘモグロビンを検出するヘモグロビン測定室と、該希釈・変性された分析試料をラテックス標識抗体と反応させるラテックス反応室と、前記ラテックス標識抗体と反応した分析試料を凝集試薬と反応させる凝集室及び分析試料中の分析対象物を測定する測定室とから構成されるヘモグロビン及びヘモグロビンA1cを測定するための分析デバイスについて説明する。
以下に、凝集試薬の製造方法及びラテックス標識抗体の製造方法についての実施例の詳細を記す。
以下に、第2の凝集試薬の製造方法についての実施例の詳細を記す。
以下に、ラテックス免疫凝集阻止法を用いた被検試料中の分析対象物の測定方法についての実施例の詳細を記す。
担体としてCGG、リンカーとしてEMCS、リガンドとしてVHLTCとで構成された本発明の凝集試薬と、担体としてポリリジン、リンカーとしてEMCS、リガンドとしてVHLTCとで構成された従来の凝集試薬とを用い、それぞれ比較実験を行った。
図11は、ラテックス標識抗体と凝集試薬とのラテックス凝集反応において、測定された吸光度変化と添加した凝集試薬の濃度との関係を示している。横軸は凝集試薬の濃度、縦軸は凝集試薬を加えてから1分後の吸光度変化である。図11によれば、従来の凝集試薬と本発明の凝集試薬とも、凝集試薬の濃度が高くなるにしたがって、凝集物が増加していき、吸光度の測定値が高くなっていくが、凝集試薬の濃度があるレベルを超えた場合、つまり吸光度変化の最大値を越えると、反応液中の抗原が過多の状態になるため、凝集形成が抑制され、見かけ上の吸光度の測定値が逆に低くなる。例えば、従来の凝集試薬では、1μg/mL以上の濃度範囲、また、本発明の凝集試薬では、5μg/mL以上の濃度範囲が、吸光度の測定値が低くなる領域となり、一般に、この領域をプロゾーン領域と呼び、また、この現象はプロゾーン現象と称される。この濃度域の凝集試薬を用いることによって、凝集試薬の濃度変動の反応性への影響を小さくすることができる。また、凝集試薬が過多となるため、凝集反応速度を速くすることができる。この結果より、本発明の凝集試薬のほうが、ダイナミックレンジが大きいことが判明した。ダイナミックレンジが大きいことによって、検量線の傾きが大きくなり、測定精度がよくなる。
(b)各プロゾーン領域の凝集試薬濃度における、凝集反応完了率と経時変化との関係
図12は、各プロゾーン領域の濃度の凝集試薬を用いたラテックス凝集阻止反応において、凝集反応完了率の経時変化を示している。横軸は凝集試薬を加えてからの時間、縦軸は凝集試薬を加えて170秒後を100%凝集したと仮定した場合の凝集反応完了率である。図12に示すように、本発明の凝集試薬を用いた場合では、170秒後において吸光度が安定してきているが、従来の凝集試薬を用いた場合では、グラフの傾きからわかるように、170秒後においてもまだ反応が進み、吸光度が上昇している。170秒後を100%凝集したと仮定しても、明らかに、本発明の凝集試薬の方が、凝集速度が速く、凝集反応完了率が高いことがわかる。これは、例えば、凝集開始から60秒後において比較すると、従来の凝集試薬では、60%凝集反応が完了しているのに対し、本発明の凝集試薬では75%凝集反応が完了している。
図13は、凝集試薬の保存安定性を示している。凝集試薬を真空凍結乾燥し、40℃環境下で保存した。この凝集試薬を用いて、ラテックス凝集阻止反応を行い、分光器を用いて吸光度を測定し、反応前との吸光度の差より、凝集試薬の反応性を確認した。横軸は保存日数、縦軸は凝集反応測定時のレファレンスとの吸光度変化比である。なお、レファレンスとして、−80℃に凍結保存した凝集試薬を用いた。図13に示すように、従来凝集試薬では、3ヶ月保存後の吸光度変化がレファレンスの半分程度の吸光度変化しか示さないが、本発明の凝集試薬では、3ヶ月保存後もレファレンスと同程度の吸光度変化を示し、反応性が安定している傾向があることがわかる。
Claims (50)
- 血液成分を含む試料を、非イオン性界面活性剤と酸化剤と金属塩とで処理し、前記試料中のヘモグロビンを変性させる工程を含む、
ことを特徴とするヘモグロビンの測定方法。 - 前記金属塩は、アルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩である、
ことを特徴とする請求項1に記載のヘモグロビンの測定方法。 - 血液成分を含む試料を、非イオン性界面活性剤と酸化剤と金属塩とで処理した後に、前記試料中のヘモグロビン測定を行い、
さらに変性されたヘモグロビン誘導体の変性部位に対して特異的に結合する抗体を用いてヘモグロビン誘導体の免疫測定を行う、
ことを特徴とするヘモグロビン誘導体の測定方法。 - 前記金属塩は、アルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩である、
ことを特徴とする請求項3に記載のヘモグロビン誘導体の測定方法。 - 前記金属塩の濃度は、ヘモグロビン誘導体の免疫測定を有意に妨害しない濃度である、
ことを特徴とする請求項3に記載のヘモグロビン誘導体の測定方法。 - 前記試料に含まれるヘモグロビンを測定する工程と、
前記試料に含まれるヘモグロビン誘導体の免疫測定を行う工程と、
前記ヘモグロビン中のヘモグロビン誘導体が存在する比率を算出する工程とを含む、
ことを特徴とする請求項3に記載のヘモグロビン誘導体の測定方法。 - 前記ヘモグロビン誘導体がヘモグロビンA1cである、
ことを特徴とする請求項6に記載のヘモグロビン誘導体の測定方法。 - 血液成分を含む試料中のヘモグロビンを測定するときに試料を処理する試薬組成物であって、
少なくとも、ヘモグロビンを変性させる非イオン性界面活性剤と酸化剤と金属塩とを含む、
ことを特徴とする試薬組成物。 - 前記金属塩は、アルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩である、
ことを特徴とする請求項8に記載の試薬組成物。 - 血液成分を含む試料中のヘモグロビンとヘモグロビン誘導体とを測定するときに試料を処理する試薬組成物であって、
少なくとも、ヘモグロビンとヘモグロビン誘導体を変性させる非イオン性界面活性剤と酸化剤と金属塩とを含み、さらに変性されたヘモグロビン誘導体の変性部位に対して特異的に結合する抗体を含む、
ことを特徴とする試薬組成物。 - 前記金属塩は、アルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩である、
ことを特徴とする請求項10に記載の試薬組成物。 - 前記金属塩の濃度は、ヘモグロビン誘導体の免疫測定を有意に妨害しない濃度である、
ことを特徴とする請求項10に記載の試薬組成物。 - 前記ヘモグロビン誘導体がヘモグロビンA1cである、
ことを特徴とする請求項10に記載の試薬組成物。 - 血液成分を含む試料中のヘモグロビンを測定するときに用いる測定キットであって、
少なくとも、ヘモグロビンを変性させる非イオン性界面活性剤と酸化剤と金属塩とを含む試薬組成物を保持してなる、
ことを特徴とする測定キット。 - 前記金属塩は、アルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩である、
ことを特徴とする請求項14に記載の測定キット。 - 血液成分を含む試料中のヘモグロビンとヘモグロビン誘導体とを測定するときに用いる測定キットであって、
少なくとも、ヘモグロビンとヘモグロビン誘導体を変性させる非イオン性界面活性剤と酸化剤と金属塩とを含む試薬組成物と、前記試薬組成物により変性されたヘモグロビン誘導体の変性部位に対して特異的に結合する抗体とを保持してなる、
ことを特徴とする測定キット。 - 前記金属塩は、アルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩である、
ことを特徴とする請求項16に記載の測定キット。 - 前記金属塩の濃度は、ヘモグロビン誘導体の免疫測定を有意に妨害しない濃度である、
ことを特徴とする請求項16に記載の測定キット。 - 前記ヘモグロビン誘導体がヘモグロビンA1cである、
ことを特徴とする請求項16に記載の測定キット。 - 血液成分を含む試料中のヘモグロビンを測定するときに用いる分析デバイスであって、
少なくとも、前記試料を添加する試料添加部位と、
前記試料添加部位に連結され、前記添加された試料中のヘモグロビンを、非イオン性界面活性剤と酸化剤と金属塩とを含む試薬組成物により変性させる変性部と、
前記変性部に連結され、前記変性されたヘモグロビンを検出する検出部と、を備えた、
ことを特徴とする分析デバイス。 - 前記金属塩は、アルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩である、
ことを特徴とする請求項20に記載の分析デバイス。 - 血液成分を含む試料中のヘモグロビンとヘモグロビン誘導体とを測定するときに用いる分析デバイスであって、
少なくとも、前記試料を添加する試料添加部位と、
前記試料添加部位に連結され、前記添加された試料中のヘモグロビンを、少なくとも非イオン性界面活性剤と酸化剤と金属塩とを含む試薬組成物により変性させる変性部と、
前記変性部に連結され、前記変性されたヘモグロビンを検出する検出部と、
変性されたヘモグロビン誘導体の変性部位に対して特異的に結合する抗体を担持する免疫アッセイ部を有し、
前記試料中のヘモグロビン誘導体を前記試薬組成物により変性した後、前記変性されたヘモグロビン誘導体を、前記抗体を用いて免疫測定を行い検出する、
ことを特徴とする分析デバイス。 - 前記金属塩は、アルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩である、
ことを特徴とする請求項22に記載の分析デバイス。 - 前記金属塩の濃度は、ヘモグロビン誘導体の免疫測定を有意に妨害しない濃度である、
ことを特徴とする請求項22に記載の分析デバイス。 - 前記ヘモグロビン誘導体がヘモグロビンA1cである、
ことを特徴とする請求項22に記載の分析デバイス。 - 前記ヘモグロビン中のヘモグロビン誘導体が存在する比率を算出する、
ことを特徴とする請求項22に記載の分析デバイス。 - 前記分析デバイスの検出部において検出された、前記ヘモグロビン誘導体の量を測定する測定部とから構成される、
ことを特徴とする請求項22に記載の分析デバイス。 - 制御された数のリガンドを、分子量6万以上の高次構造を持つタンパク質に、化学的に結合させる凝集試薬の製造方法であって、
前記リガンドを、官能基を有するリンカーを介して、前記タンパク質に結合させる、
ことを特徴とする凝集試薬の製造方法。 - 前記タンパク質が、グロブリン様タンパクである、
ことを特徴とする請求項28に記載の凝集試薬の製造方法。 - 前記官能基を有するリンカーの長さが、15Å以下である、
ことを特徴とする請求項28に記載の凝集試薬の製造方法。 - 前記リンカーが、直鎖構造を有する、
ことを特徴とする請求項28に記載の凝集試薬の製造方法。 - 前記リンカーが、平面構造を有する、
ことを特徴とする請求項28に記載の凝集試薬の製造方法。 - 前記リガンドが、特異的なタンパクを認識し、結合相手とする物質である、
ことを特徴とする請求項28に記載の凝集試薬の製造方法。 - 前記リガンドが、ハプテンである、
ことを特徴とする請求項28に記載の凝集試薬の製造方法。 - 前記凝集試薬が、タンパク質1個当たり、10個以上のリガンドが結合した複合体である、
ことを特徴とする請求項28に記載の凝集試薬の製造方法。 - 請求項28〜35のいずれかに記載の凝集試薬の製造方法によって生成される、
ことを特徴とする凝集試薬または生成物。 - 粒子凝集制御イムノアッセイを行って試験試料中の分析対象物を測定する測定方法において、
水懸濁性粒子に結合している抗分析対象物抗体と試験試料とを混合し、該試験試料中に含まれる分析対象物に前記抗分析対象物抗体を結合させる工程と、
前記水懸濁性粒子に結合している抗分析対象物抗体と試験試料とが混合された溶液と、前記抗分析対象物抗体に対する特異的な結合部位を有するリガンドを、官能基を有するリンカーを介して分子量6万以上の高次構造を持つタンパク質に化学的に結合させてなる凝集試薬とを混合し、前記試験試料中に含まれる分析対象物と結合していない抗分析対象物抗体を前記凝集試薬により凝集させる工程と、
前記抗分析対象物抗体と凝集試薬との反応により生じる凝集塊を検出し、前記試験試料中の分析対象物を定量する工程とを含む、
ことを特徴とする分析対象物測定方法。 - 前記分析対象物がヘモグロビンA1cであり、前記リガンドが、ヘモグロビンA1c中のペプチド配列に対応する糖化ペプチドである、
ことを特徴とする請求項37に記載の分析対象物測定方法。 - 前記凝集試薬を、抗原過多となる量のプロゾーン領域で使う、
ことを特徴とする請求項37に記載の分析対象物測定方法。 - 前記凝集塊の濁度を光学的測定によって検出する、
ことを特徴とする請求項37に記載の分析対象物測定方法。 - 前記凝集塊を計数することによって検出する、
ことを特徴とする請求項37に記載の分析対象物測定方法。 - 粒子凝集制御イムノアッセイを行って試験試料中の分析対象物を測定する試験キットにおいて、
水懸濁性粒子に結合している抗分析対象物抗体と、
抗分析対象物抗体に対する特異的な結合部位を有するリガンドを、官能基を有するリンカーを介して分子量6万以上の高次構造を持つタンパク質に化学的に結合させてなる凝集試薬と、を保持する、
ことを特徴とする試験キット。 - 前記水懸濁性粒子に結合している抗分析対象物抗体及び前記凝集試薬が、乾燥状態で担持されている、
ことを特徴とする請求項42に記載の試験キット。 - 粒子凝集制御イムノアッセイによって試験試料中の分析対象物を測定する分析デバイスにおいて、
前記試験試料を注入する試料注入部と、
前記試料注入部に連結され、前記注入された試料に、水懸濁性粒子に結合している抗分析対象物抗体と、前記抗分析対象物抗体に対する特異的な結合部位を有するリガンドを、官能基を有するリンカーを介して分子量6万以上の高次構造を持つタンパク質に化学的に結合させてなる凝集試薬とを混合し、前記試料中に含まれる分析対象物と結合していない抗分析対象物抗体を前記凝集試薬により凝集させる凝集部と、
前記凝集部に連結され、前記抗分析対象物抗体と前記凝集試薬との反応により生じる凝集塊を検出し、前記試験試料中の分析対象物を定量する測定部と、を備えた、
ことを特徴とする分析デバイス。 - 前記分析対象物が、ヘモグロビンA1cであり、前記リガンドが、ヘモグロビンA1c中のペプチド配列に対応する糖化ペプチドである、
ことを特徴とする請求項44に記載の分析デバイス。 - 前記凝集試薬を、抗原過多となる量のプロゾーン領域で担持した、
ことを特徴とする請求項44に記載の分析デバイス。 - 前記水懸濁性粒子に結合している抗分析対象物抗体または、前記凝集試薬が、乾燥状態で担持されている、
ことを特徴とする請求項44に記載の分析デバイス。 - 前記測定部で、前記凝集塊の濁度を光学的測定によって検出する、
ことを特徴とする請求項44に記載の分析デバイス。 - 前記測定部で、前記凝集塊を計数することによって検出する、
ことを特徴とする請求項44に記載の分析デバイス。 - 前記測定部と前記凝集部とが一体に形成された、
ことを特徴とする請求項44に記載の分析デバイス。
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