JPWO2007037486A1 - 毛包真皮毛根鞘細胞の培養法 - Google Patents
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Abstract
Description
毛包真皮毛根鞘細胞を培養した際に維持させるその「機能」とは、毛乳頭細胞供給源としての機能、発毛能を有する毛包の形成を誘導する機能、あるいは皮膚移植した際に表皮を形成する機能等を意味する。
1. 方法
1-1. 毛包真皮毛根鞘(DS)および毛乳頭(DP)の分離
1-1-1. 成体ラット頬髭
6週齢の雄Wistarラットは、ジエチルエーテル深麻酔により犠牲死せしめ、毛球部を完全に含むよう70部皮膚採取を行った。採取したラット頬部皮膚はイソジン(明治製薬)と70%エタノールで消毒および冷ダルベッコ改変リン酸緩衝生理食塩水(PBS(-))で洗浄した。洗浄後の皮膚より毛包を採取した。採取した毛包の立毛筋結合部より上方1/2で上下に切断し(図1、矢印A部位を切断)、それぞれを4.76 g/lのHEPES、0.84g NaHCO3添加しpH 7.4とした10%牛胎児血清含有ダルベッコ改変イーグル培地(DMEM10HEPES)中で次工程まで4℃にて保存した。この後、(1)下部1/2毛包より下部DSおよびDPを分離、(2) 上部1/2より上部DSを分離した。
(1)下部DSおよびDPは下部1/2毛包より毛球部を切断分離した。眼科用マイクロメスおよびマイクロ鑷子を用いて、毛球部の真皮毛根鞘(dermal sheath;DS)および毛乳頭(dermal papilla;DP)を一塊として、コラーゲン鞘および毛母等の表皮成分と分離した。DS とDPは、毛球部最下端に位置する連結部にてマイクロメスにより分離した(図1、矢印B線部位を切断)。
(2)毛包の上部1/2を1000 units/mlディスパーゼ(三協純薬工業製)を含む(DMEM10HEPES)で37℃、10分間処理しディスパーゼ処理後DMEM10HEPESにてよく洗浄した。毛包上部DSをマイクロ鑷子により分離した。
1-1-2. ヒト頭髪
健康な34歳と46歳の男性ボランティアの後頭部有毛部より皮膚の提供を受け採取した。採取したボランティア頭皮皮膚を毛包の流れに従って分割し、さらに外科用メスを用いて毛包単位(Follicular Unit)ごとに皮膚および皮下組織を含むブロックとして分離した。このFUブロックを1000 units/mlディスパーゼを含む(DMEM10HEPES)で37℃、10分間処理した。ディスパーゼ処理後DMEM10HEPESにてよく洗浄し、FUと皮膚および皮下を分離し、用時まで4℃DMEM10HEPES中で保存した。この後、1-1-1.ラット頬髭と同様に、下部1/2毛包より下部DSおよびDPを分離 、上部1/2より上部DSを分離した。
1-2. ラット頬髭およびヒト頭髪由来DS細胞とDP細胞の培養
1-2-1. 初代培養および継代培養
分離したヒトボランティア頭皮由来の毛球部DS、上部DSおよびDPはプライマリア24穴細胞培養 プレート(ペクトンディッキンソン)に1組織ずつ播種した。ヒト毛球部DS細胞とDP細胞は、DMEM10を基礎培地とする5種類の培地(表1)を用いて2週間初代培養を行い、4日に1度の培地交換を行った。FGF2(UPSTATE社)およびPDGF-AA(R&D SYSTEMS社)はhuman recombinantを用いた。初代培養後、7日ごとに継代培養を行った。
1-2-2. 細胞増殖速度の測定
初代培養開始後7日目と14日目に、各培養液で培養した細胞をPBSで洗浄後、10%ホルマリン固定した。固定後生理食塩水で洗浄し、Hoechstによる蛍光核染色を行った。核染色を行った後、細胞コロニー全体をデジタルカメラ(LEICA DC 500)で撮影し、デジタル画像情報を取得した。この蛍光画像を二階調化した後、Image J画像解析ソフトで細胞核数をカウントした。各培地での細胞増殖を比較した。初代培養後、7日ごとに継代培養を行った。細胞は4日に1度の培地交換を行った。継代時の細胞数から細胞倍加時間(PDT)を算出し、各培地で比較した。各条件の増殖細胞数はStudent T検定により統計解析を行った。
1-2-3. 培養により増殖可能な細胞総数の算出
初代培養終了時の1組織あたりの増殖細胞数(A)とする。各継代数における、継代時の回収細胞数(Harvest)と培養開始時の播種細胞数(Initial)から、何倍に増えたかを表す細胞増殖倍数(Harvest /Initial)を求める。この値を(B)とする。1継代数の時は(B1)と表記した。初代培養で得られた細胞をすべて継代培養し、増殖させたとき、継代1、3代までに得られる細胞総数の算出方法は以下の式になる。
継代1代までに得られる細胞総数 =(A)x(B1)
継代3代までに得られる細胞総数 =(A)x(B1)x(B2)x(B3)
1-3. ヒト頭髪およびラット頬髭由来DS細胞の機能アッセイ
1-3-1. 成体ラット足裏真皮由来線維芽細胞の調整
10週齢の雄Wistarラットは、ジエチルエーテル麻酔により犠牲死させ、足裏皮膚を切除した。切除足裏皮膚はイソジンと70%エタノールで滅菌した後に、PBSで洗浄した。実体顕微鏡を用いて、無菌環境下において足裏皮膚に付着している皮下組織をマイクロ剪刀により除去した。除去後、4等分し、1000 units/mlになるようにDMEM10に溶かしたディスパーゼ溶液で4℃、一晩処理した。ディスパーゼ処理した皮膚組織は生理食塩水でよく洗浄し、表皮と真皮を分離した。この真皮を1-2mm角に細切し、60 mm 培養ディッシュにエクスプラントして線維芽細胞の初代培養を行った。
1-3-2. ラット新生仔表皮細胞の調製
発毛分化能を持つ表皮細胞は、生後2日齢のWistarラット新生児の皮膚より調製した。Wistarラット新生児をジエチルエーテル麻酔により犠牲死させ、前後肢および尾部を切除し、躯幹部分のみとした。躯幹部の皮膚を剥離し、イソジンと70%エタノールで滅菌した後に、PBSで洗浄し、使用時まで4℃にて保存した。無菌環境下において実体顕微鏡を用いて、新生児皮膚に付着している皮下組織をマイクロ剪刀により除去した。なお、これ以下の全ての行程はクリーンベンチ内あるいは、無菌器具内において無菌的に行った。
1-3-3. DS細胞機能アッセイにおける移植用細胞の調整法
培養DS細胞の毛幹伸長促進能を検出するために、長期継代培養により真皮毛根鞘形成能を喪失したラット頬髭由来DP細胞(継代数39, p=39)との混合移植を行い、毛幹伸長促進を指標としたアッセイを行った。細胞の機能アッセイは、成体ラット頬髭DP細胞(継代数39)、ヒト頭髪毛包毛球部DS細胞、ラット頬髭毛包上部DS細胞、ラット新生仔表皮細胞、ラット足裏真皮由来線維芽細胞を表2の組み合わせで混合し、ヌードマウス背部に移植するチャンバーアッセイ法(非特許文献2)を用いた。移植する細胞を各組み合わせで混合し、670 g、5分間遠心し、細胞をスラリー状とした。この移植細胞ペレットより培地を除去し、スラリー状として移植まで4℃で保存した。
4週齢雄ヌードマウス(日本チャールズリバー社製)を10%ソムノペンチル(共立製薬)と8%エタノールを含むPBS(-)を腹腔内投与により麻酔し、滅菌ドレープ上にて自然側方横臥位とした。外科用イソジン液(明治製薬)および70%エタノールでマウスの実幹部全体を消毒した後、側腹部の皮膚を直径7 mmの円形に全層切除去した。この部位にドーム部直径11 mmのグラフト・チャンバーを挿入し、皮下組織内にハット部を挿入し、5-0ナイロン縫合糸によってハット部と皮膚を縫合し固定した。この移植創に、細胞ペレットをマイクロピペットにて注入した。移植までの全工程は、クリーンベンチ内にて無菌的に行った。
1-3-5. DS細胞機能アッセイの経過観察(マクロにおける発毛)と組織学的観察方法
細胞移植後3週間目に、移植部位を実体顕微鏡(ライカ社)にて観察し、発毛の様子を写真撮影した。撮影後、移植部位を摘出し、マイルドホルム10N(和光純薬)で室温一昼夜固定した。その後通法に従いパラフィン包埋し、5 μm厚の連続組織切片を作成した。組織切片はヘマトキシリン・エオジン(HE)染色および毛包真皮毛根鞘のマーカーである抗ヒト平滑筋型αアクチン抗体(SIGMA社製)を用いた免疫染色を行った。
2. 結果と考察
2-1. 毛球部より分離した下部DS細胞の初代および継代培養
2-1-1. ラット頬髭由来下部DS細胞
ラット頬髭毛包毛球部よりDSおよびDPを分離し(図1)、方法1-2の培養条件で初代培養した。初代培養開始後3-5日で組織が培養皿上に接着し、細胞コロニー形成および細胞増殖と遊走が観察された。2週間の初代培養において、各培養条件で増殖した細胞数を、画像解析により計数した。その結果、PDGF-AA/FGF2におけるラット下部DS細胞の増殖細胞数は、既存の培地であるDMEM10の約8.5倍であった(* p<0.05、図2A)。同様に、DMEM10と比較して、CM5(DMEM10比で約6.1倍)およびFGF2単独添加培地(同約4.3倍)による増殖細胞数は高い値であった。また、PDGF-AA /FGF2は、比較した培地条件のうち最高であった(* p<0.05 vs.CM5:** p<0.01 vs. FGF2)。
2-1-2. ヒト頭髪毛包下部DS細胞
PDGF-AA/FGF2含有培地により、ラット下部DS細胞を効果的に増殖させることが確認されたことから、次により利用価値の高いヒト細胞へ応用可能性について検証した。ヒト細胞は医療応用や薬剤開発において非常に利用価値が高い。しかし、由来する個体ごとに十分な細胞数まで増殖できなければ、その利用価値は減少する。さらに、由来組織の提供頻度と量も最小限であることから、カビやバクテリア等のコンタミネーションのリスクを最小限とすることが重要である。初代培養では細胞が同じ培養皿内で数週間に渡り馴化することから、コンタミネーションのリスクが非常に高い工程である。従って、初代培養において細胞増殖速度が高い培地条件であることが望まれる。そこで、ヒト毛包毛球部より下部DSおよびDPを分離し(図1)、方法1-2の培養条件で初代培養し、各培地条件による初代培養における細胞増殖速度および継代培養において得られる細胞数を比較した。
特許文献2に記載された方法で長期継代培養により増殖させたラット頬髭由来DP細胞は毛包形成誘導能を保持しているが、形成誘導した毛包から発毛能が減弱し失われる(特許文献1)。この問題点を解決する方法として、本発明者らは、長期継代培養により発毛能が減弱したDP細胞にDS細胞を一定量添加することで、減弱した発毛誘導能を回復させ、毛包から発生した毛の成長が顕著に促進されることを見いだしている(特許文献1)。本発明のPDGF-AA/FGF2によって培養した下部DS細胞が、この機能を保持していることを確認するために以下の実験を行った。
2-3. PDGF-AA/FGF2によるDP細胞の初代および継代培養
DS細胞はDP細胞の前駆細胞を含み、DS細胞から分化増殖したDP細胞は、毛球部最下端より毛乳頭柄を経て毛乳頭に供給される。組織学的にも毛球部最下端において毛乳頭柄で連結しており、DSとDPを組織より分離する際には一繋がりとして分離される。本発明者らは、長期継代培養により発毛能が減弱した毛乳頭細胞に毛包真皮毛根鞘細胞細胞を一定量添加することで、減弱した発毛誘導能を回復させ、毛包から発生した毛の成長が顕著に促進されることを可能とし、既に特許出願している(特許文献1)。従って、細胞分化的観点および構造的に近いDS細胞とDP細胞が同一条件で培養可能であれば、その方法は非常に高い利用価値を有するといえる。
一般的にDSは毛包の外側を包み、かつ抗α-SMA抗体陽性の真皮性細胞よりなる組織と定義されている。しかし、抗α-SMA抗体抗体陽性のDS細胞は毛周期の休止期において消失することから、DS細胞の前駆細胞が存在することが仮定されている。本発明者らは成長期毛包のバルジ領域を取り囲む抗α-SMA抗体陰性かつ抗ビメンチン抗体陽性であり、バルジ領域より下方に分布する抗α-SMA抗体陽性のDS(便宜的に下部DSと呼称)と構造的に連続している真皮性細胞よりなる構造(上部DSと呼称)に注目した(図1)。この上部DS細胞が下部DSおよびDP細胞の前駆細胞であると仮定すると、下部DS細胞の機能アッセイと同様に細胞移植を行うと上部DS細胞由来の下部DSとDPが形成されると考えられる。そこで、この仮説に基づいて、上部DSに下部DS細胞およびDP細胞の前駆細胞が含まれることを検証することとした。しかし、この検証実験には多量の上部DS細胞が必要であることから、まず下部DS細胞と同様にラット頬髭およびヒト頭髪由来上部DS細胞が培養可能であることを確認した。
2-4-1. ラット頬髭由来上部DS細胞
ラット頬髭毛包から1-1に記載の方法で上部DSを分離し、DS細胞の培養に有効であったPDGF-AA/FGF2培地で培養した。毛球部DS細胞に比べ増殖が遅く、初代培養に21日要したが、増殖細胞数はDMEM10と比較して2倍であった。さらに継代培養を行ったところ、4継代数まで40時間前後の早い増殖速度を維持していたが、それ以降はPDT値が増大した(図9)。
2-4-2. ヒト頭髪由来上部DS細胞
ヒト頭髪毛包から、1-1に記載の方法で上部DSを分離し、PDGF-AA/FGF2により初代培養および継代培養を行った。初代培養においてPDGF-AA/FGF2は、ラットの結果と同様にDMEM10に比べ2.2倍の増殖活性を示した。また、初代培養から第3継代までに得られる細胞総数を方法1-4の計算方法で算出したところ、PDGF-AA/FGF2はDMEM10の約2.2倍であった(表5)。なお、表5において継代1代以降の継代培養は、6.6x104 cells/φ6 cm dish となるように播種した。4日目に培地の全量交換を行い、7日目に継代を行った。各継代時に回収した細胞数から、1-2の方法を用いて継代1代までに得られる細胞総数を求めた。DMEM10を1とし比較すると、継代1代までに得られる細胞総数は2.2倍になった。
2-5. PDGF-AA/FGF2培地により培養した上部DS細胞の機能解析
上部DS細胞が下部DSおよびDP細胞の前駆細胞であると仮定すると、方法1-3により細胞移植すると上部DS細胞は下部DSとDP細胞に分化できるはずである。そこで、上部DSに下部DS細胞およびDP細胞の前駆細胞が含まれることを検証することとした。PDGF-AA/FGF2で培養したEGFPトランスジェニック(EGFP-Tg.)ラット頬髭由来上部DS細胞を、高継代ラットDP細胞と混合移植し(表2、移植例3)、発毛能の回復と組織学的分析を行った。その結果、高継代DP細胞(p=39)移植群では発毛が観察されないのに対し(図5-A)、ラット頬髭由来上部DS細胞(p=1)添加群では明らかに発毛の回復が認められた(図10-A)。組織学的観察においてもラット頬髭毛包上部DS細胞添加群では数多くの毛幹を形成した毛包が観察された。また、連続組織切片をDSのマーカーである抗α-SMA抗体を用いて免疫染色を行ったところ、ラット頬髭毛包上部DS細胞添加群では毛包の最外層に抗α-SMA抗体陽性の細胞層が観察された(図10-C)。それに対して、高継代DP細胞のみでは、毛包最外層に抗α-SMA抗体陽性細胞は認められなかった(図5-B)。また、移植したDS細胞はEGFP-Tg.ラット由来であることから、抗α-SMA抗体陽性毛包の連続切片をGFP蛍光幹津および抗EGFP抗体免疫染色し、移植上部DS細胞由来であることを検証した。その結果、上部DS細胞添加により発毛能を回復した毛包の下部DSはEGFPを発現していることが明らかとなった(図10-D)。さらに同一実験群のDPの一部にEGFP発現細胞が観察された(図10-E, F, G)。
Claims (8)
- 毛包真皮毛根鞘細胞を、機能を維持した状態で増殖させる培養方法であって、血小板由来増殖因子AA(PDGF-AA)および線維芽細胞増殖因子2(FGF2)を添加した動物細胞用培地で毛包真皮毛根鞘細胞を培養することを特徴とする培養方法。
- 毛包真皮毛根鞘細胞が毛包下部真皮毛根鞘由来の細胞である請求項1の培養方法。
- 動物細胞用培地が、1%〜30%血清を含むダルベッコ改変イーグル培地(DMEM10)である請求項1の培養方法。
- 毛包真皮毛根鞘細胞を、他の毛包形成細胞とともに培養する請求項1の培養方法。
- 毛包真皮毛根鞘前駆細胞を、真皮毛根鞘細胞へと分化、増殖させる方法であって、血小板由来増殖因子AA(PDGF-AA)および線維芽細胞増殖因子2(FGF2)を添加した動物細胞用培地で毛包真皮毛根鞘前駆細胞を培養することを特徴とする培養方法。
- 毛包真皮毛根鞘前駆細胞が毛包下部真皮毛根鞘由来の細胞である請求項5の培養方法。
- 動物細胞用培地が、1%〜30%血清を含むダルベッコ改変イーグル培地(DMEM10)である請求項5の培養方法。
- 血小板由来増殖因子AA(PDGF-AA)および線維芽細胞増殖因子2(FGF2)を添加した動物細胞用培地で培養することによって真皮毛根鞘細胞へと分化することができる毛包真皮毛根鞘前駆細胞。
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US9173921B1 (en) * | 2015-03-23 | 2015-11-03 | Jaehyun Lim | Method of promoting hair growth by administration of bFGF |
DE102015119880B4 (de) * | 2015-11-17 | 2018-05-24 | Technische Universität Berlin | Verfahren zur Herstellung von Haarfollikeln und de novo Papillen sowie deren Verwendung für in vitro Tests und in vivo Implantate |
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Family Cites Families (4)
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---|---|---|---|---|
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