JPWO2005085811A1 - 蛍光プローブ - Google Patents
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Abstract
Description
ただし、R1、R2、及びR3の組み合わせは
(1)上記プロトン、金属イオン、又は活性酸素種の捕捉前には、式(I)で表される化合物が実質的に無蛍光性になるように、それらが結合するベンゼン環に実質的に高い電子密度を与えるものであり、かつ
(2)上記プロトン、金属イオン、又は活性酸素種の捕捉後には、式(I)で表される化合物に由来する捕捉後の化合物が実質的に高い蛍光性になるように、それらが結合するベンゼン環の電子密度を実質的に低下させるものである)
で表される蛍光プローブを提供するものである。
(1)上記プロトン、金属イオン、又は活性酸素種の捕捉前には、式(I)で表される化合物が実質的に無蛍光性になるように、それらが結合するベンゼン環に実質的に高い電子密度を与え、かつ
(2) 上記プロトン、金属イオン、又は活性酸素種の捕捉後には、式(I)で表される化合物に由来する捕捉後の化合物が実質的に高い蛍光性になるように、それらが結合するベンゼン環の電子密度を実質的に低下させる
組み合わせを選択する工程を含む方法が本発明により提供される。さらに、上記の設計方法により得られた蛍光プローブも本発明により提供される。
例1:化合物の合成
下記の化合物を合成した。これらの化合物は化合物No.が大きくなるほどキサンテン環の9−位に結合するベンゼン環の酸化電位が低くなる(すなわち電子密度が高くなる、換言すればHOMO起動エネルギーが高くなる)ように設計した。また、化合物1の合成スキームを以下に示した。
1H-NMR (300MHz, CDCl3) δppm 2.04 (3H, s)、3.39 (12H, s)、6.98 (2H, s)、7.01 (2H, d, J=2.4Hz)、7.16-7.26 (3H, m)、7.41-7.45 (2H, m)、7.49-7.52 (1H,m)
MS (FAB) 357 (M-Cl-)
1H-NMR (300MHz, CDCl3) δppm 2.04 (3H, s)、2.40 (3H, s)、3.39 (12H, s)、6.95-6.97 (3H, m)、6.99 (2H, dd, J=9.3, 2.4Hz)、7.20 (2H, d, J=9.3Hz)、7.31(2H, m)
MS (FAB) 371 (M-Cl-)
上記(a)の方法と同様にして2-ブロモトルエンに替えて2-ブロモアニソールを用いて化合物3を紫色固体として得た(収率:92.6%)。
1H-NMR (300MHz, CDCl3) δppm 3.37 (12H, s)、3.73 (3H, s)、6.88 (2H, d, J=2.6Hz)、7.00 (2H, dd, J=9.5, 2.6Hz)、7.14-7.22 (3H, m)、7.29 (2H, d, J=9.5Hz)
MS (FAB) 373 (M-Cl-)
上記(a)の方法と同様にして2-ブロモトルエンに替えて4-ブロモ-3-メチルアニソールを用いて化合物4を紫色固体として得た(収率:83.6%)。
1H-NMR (300MHz, CDCl3) δppm 2.02 (3H, s)、2.39 (12H, s)、3.92 (3H, s)、6.95-6.97 (4H, m)、6.99 (2H, dd, J=9.5, 2.4Hz)、 7.09 (1H, d, J=9.3Hz)、7.24 (2H, d, J=9.5Hz)
MS (FAB) 387 (M-Cl-)
1H-NMR (300MHz, CDCl3) δppm 2.39 (3H, s)、3.38 (12H, s)、3.68 (3H, s)、6.88 (2H, d, J=2.6Hz)、6.97 (1H, d, J=2.6Hz)、7.01 (2H, dd, J=9.5, 2.6Hz)、7.03 (1H, d, J=8.6Hz)、7.31 (2H, d, J=9.5Hz)、7.39 (1H, dd, J=8.6, 2.6Hz)
MS (FAB) 387 (M-Cl-)
上記(a)の方法と同様にして2-ブロモトルエンに替えて1-ブロモ-2,4-ジメトキシベンゼンを用いて化合物6を紫色固体として得た(収率:98.0%)。
1H-NMR (300MHz, CDCl3) δppm 3.37 (12H, s)、3.71 (3H, s)、3.95 (3H, s)、6.68 (1H, d, J=2.5Hz)、6.72 (1H, dd, J=8.3, 2.5Hz)、6.86 (2H, d, J=2.4Hz)、7.00 (2H, dd, J=9.5, 2.4Hz)、7.11 (1H, d, J=8.3Hz)、7.36 (2H, d, J=9.5Hz)
MS (FAB) 403 (M-Cl-)
1H-NMR (300MHz, CDCl3) δppm 3.67 (3H, s)、3.82 (12H, s)、3.83 (3H, s)、6.75 (1H, d, J=2.7Hz)、6.90 (2H, d, J=2.4Hz)、7.01 (2H, dd, J=9.5, 2.4Hz)、7.08-7.12 (2H, m)、7.32 (2H, d, J=9.5Hz)
MS (FAB) 403 (M-Cl-)
上記(a)の方法と同様にして2-ブロモトルエンに替えて4-ブロモ-3-メチルアニリンを用いて化合物8を紫色固体として得た(収率:58.8 %)。
1H-NMR (300MHz, CDCl3) δppm 3.09 (3H, s)、3.37 (12H, s)、6.76 (2H, m)、6.88 (2H, d, J=2.4)、6.90 (1H, m)、6.97 (2H, dd, J=9.5, 2.4Hz)、7.36 (2H, d, J=9.5Hz)
MS (FAB) 372 (M-Cl-)
上記で合成した各化合物の蛍光量子収率とベンゼン環部の酸化電位との関係を調べた。結果を図1に示す。図に示した結果から明らかなように、各化合物の蛍光量子収率はベンゼン環部の酸化電位に依存して変化した。この結果から、酸化電位が1.00V以下ではほぼ無蛍光であり、1.40V以上では量子収率がほぼ0.6の蛍光を発することが明らかである。この酸化電位依存的な蛍光量子収率の変化は、従来知られているフルオレセイン誘導体の場合とほぼ同様であるが(PCT/JP03/08585号明細書)、蛍光ON/OFFの境界は0.1 V程度負の方向に移動していると考えられる。すなわち、例えば同じ2,5-ジメトキシ誘導体を比較した場合、フルオレセイン誘導体では量子収率は0.01以下となるのに対して、上記のローダミン誘導体の量子収率は0.086程度である。よって、同じ電子密度のベンゼン環からのPETは、塩基性条件下におけるフルオレセイン類の方がローダミン類よりも起きやすいことが示された。この知見を基にして、フルオレセイン骨格を有するプローブをローダミン骨格を有するプローブに変換する際に、該ベンゼン環上の置換基を適宜選択することにより、同等の性能を有するプローブを製造することが可能になった。
ローダミン類は、フルオレセイン類と比較して、幅広いpH領域で安定した蛍光を発することが知られている。本発明の蛍光プローブの母核となる上記の化合物1ないし8についてこの性質が保たれているかどうかを検討した。様々なpHの水溶液中で一定濃度の化合物1の蛍光強度を計測してプロットした結果を図2に示す。その結果、pH 3〜12の幅広い領域でほぼ一定の蛍光強度を示すことが明らかとなった。
Claims (6)
- 蛍光プローブであって、下記の式(I):
ただし、R1、R2、及びR3の組み合わせは
(1)上記プロトン、金属イオン、又は活性酸素種の捕捉前には、式(I)で表される化合物が実質的に無蛍光性になるように、それらが結合するベンゼン環に実質的に高い電子密度を与えるものであり、かつ
(2)上記プロトン、金属イオン、又は活性酸素種の捕捉後には、式(I)で表される化合物に由来する捕捉後の化合物が実質的に高い蛍光性になるように、それらが結合するベンゼン環の電子密度を実質的に低下させるものである)
で表される蛍光プローブ。 - R1、R2、及びR3が置換するベンゼン環において、上記プロトン、金属イオン、又は活性酸素種の捕捉前の該ベンゼン環の酸化電位が1.20V未満であり、及び上記プロトン、金属イオン、又は活性酸素種の捕捉後の該ベンゼン環の酸化電位が1.40V以上である請求の範囲第1項に記載の蛍光プローブ。
- R3が低級アルキル基又は低級アルコキシ基である請求の範囲第1項又は第2項に記載の蛍光プローブ。
- 金属イオンがアルカリ金属イオン、カルシウムイオン、マグネシウムイオン、又は亜鉛イオンである請求の範囲第1項ないし第3項のいずれか1項に記載の蛍光プローブ。
- 活性酸素種が一酸化窒素、ヒドロキシラジカル、一重項酸素、及びスーパーオキシドからなる群から選ばれる請求の範囲第1項ないし第3項のいずれか1項に記載の蛍光プローブ。
- 下記の一般式(II):
で表される化合物。
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CN101302220B (zh) * | 2007-05-08 | 2010-09-29 | 中国科学院化学研究所 | N-苯甲酰基罗丹明b肼及其制备方法与应用 |
WO2011133366A1 (en) * | 2010-04-22 | 2011-10-27 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Fluorescent nitric oxide probes and associated methods |
US20140120574A1 (en) * | 2012-06-06 | 2014-05-01 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Fluorescent nitric oxide probes and associated methods |
JPWO2014057999A1 (ja) * | 2012-10-11 | 2016-09-05 | 国立研究開発法人科学技術振興機構 | 細胞内アセチル化のイメージング試薬 |
US9360474B2 (en) * | 2012-11-29 | 2016-06-07 | Opti Medical Systems, Inc. | Multi-layer device for selectively determining magnesium ion |
WO2014106957A1 (ja) | 2013-01-07 | 2014-07-10 | 国立大学法人 東京大学 | 非対称Siローダミン及びロドールの合成 |
WO2015129705A1 (ja) * | 2014-02-28 | 2015-09-03 | 国立大学法人 東京大学 | グルタチオン検出用蛍光プローブ |
JP6352653B2 (ja) * | 2014-03-06 | 2018-07-04 | 株式会社Adeka | 新規化合物及び着色感光性組成物 |
CN106867511B (zh) * | 2015-12-11 | 2019-01-22 | 中国科学院大连化学物理研究所 | 一种开关型锌离子荧光探针及其制备方法和应用 |
CN105400233B (zh) * | 2015-12-31 | 2017-10-24 | 东华大学 | 一种锌离子探针的功能性活性染料及其制备方法和应用 |
CN106366064B (zh) * | 2016-08-11 | 2018-06-26 | 武汉大学苏州研究院 | 一种细胞膜靶向型Mg2+荧光探针及其制备方法和应用 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS6025195A (ja) * | 1983-07-21 | 1985-02-07 | ソニー株式会社 | El素子 |
WO1999001447A1 (fr) * | 1997-07-02 | 1999-01-14 | Tetsuo Nagano | Derives de diaminorhodamine |
JP2003277385A (ja) * | 2002-03-22 | 2003-10-02 | Tetsuo Nagano | 蛍光プローブ |
Family Cites Families (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5405975A (en) * | 1993-03-29 | 1995-04-11 | Molecular Probes, Inc. | Fluorescent ion-selective diaryldiaza crown ether conjugates |
JP3200024B2 (ja) * | 1997-02-19 | 2001-08-20 | 哲雄 長野 | ジアミノフルオレセイン誘導体 |
JP4373608B2 (ja) * | 1998-03-31 | 2009-11-25 | 哲雄 長野 | 一重項酸素測定用試薬 |
EP1260510B1 (en) * | 2000-02-28 | 2006-10-18 | Daiichi Pure Chemicals Co., Ltd. | Fluorescent probes for the quantitation of zinc |
KR20030031468A (ko) * | 2000-02-29 | 2003-04-21 | 다이이치 가가쿠 야쿠힝 가부시키가이샤 | 활성산소 측정용 시약 |
US6756231B1 (en) * | 2000-08-18 | 2004-06-29 | Daiichi Pure Chemicals Co., Ltd. | Diaminorhodamine derivative |
US6962992B2 (en) * | 2000-12-20 | 2005-11-08 | Molecullar Probes, Inc. | Crown ether derivatives |
US7102005B2 (en) * | 2002-05-03 | 2006-09-05 | Molecular Probes, Inc. | Compositions and methods for detection and isolation of phosphorylated molecules |
WO2004005917A1 (ja) * | 2002-07-08 | 2004-01-15 | Daiichi Pure Chemicals Co., Ltd. | 蛍光プローブ |
US7696245B2 (en) * | 2003-03-28 | 2010-04-13 | Sekisui Medical Co., Ltd. | Fluorescent probe for zinc |
US7491830B2 (en) * | 2003-05-09 | 2009-02-17 | Applied Biosystems Inc. | Phenyl xanthene dyes |
US7868147B2 (en) * | 2003-09-05 | 2011-01-11 | Tetsuo Nagano | Fluorescent probe |
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---|---|---|---|---|
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WO1999001447A1 (fr) * | 1997-07-02 | 1999-01-14 | Tetsuo Nagano | Derives de diaminorhodamine |
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