JPWO2005002590A1 - 骨量増加誘導剤 - Google Patents

Abstract

骨粗鬆症等の代謝性骨疾患では、骨量の減少から骨強度が低下し、腰痛等の疼痛及び骨折を生じる頻度が高い。そのため、骨代謝全体をコントロールして骨量及び骨強度を増加させることができる薬剤の創製が強く求められている。 本発明の非生体由来の非ペプチド性骨芽細胞分化促進化合物と骨吸収抑制作用を有するビスホスホネートを含有する医薬組成物もしくは組合せ物は、骨代謝をコントロールして骨量及び／又は骨強度を増加させることができる骨量増加誘導剤として有用である。

Description

本発明は、非生体由来の非ペプチド性骨芽細胞分化促進化合物、殊に後記一般式（Ｉ）で示される含窒素複素環化合物又はその塩と、ビスホスホネートとを組合せてなる、骨代謝性疾患等の骨疾患の予防並びに治療に有用な医薬組成物若しくは組合せ物に関する。

正常な骨代謝は、破骨細胞による骨吸収量と骨芽細胞による骨形成量が平衡状態にあり、恒常性が維持されている。この骨吸収と骨形成のバランスに破綻が生じた場合代謝性骨疾患になると考えられている。この疾患には、骨粗鬆症、線維性骨炎（副甲状腺機能亢進症）、骨軟化症、更に全身性の骨代謝パラメーターに影響を与えるページェット病などが含まれる。腰痛等の疼痛及び骨折などの原因になる骨粗鬆症としては、閉経後の女性に多い骨代謝回転亢進型（Ｉ型）及び老人性の骨代謝回転低下型（ＩＩ型）の原発性骨粗鬆症と、ステロイド投与等によって誘発される続発性（二次性）骨粗鬆症が知られている。中でも、老人性の骨粗鬆症においては、骨形成能が低下し、海綿骨に加えて皮質骨の骨量も減少するため、椎体の変形や大腿骨頸部の骨折が多いことが報告されている（Ｒｉｇｇｓ ＢＬ ｓｔ．ａｌ．，Ｎｅｗ Ｅｎｇ．Ｊ．Ｍｅｄ．，３１４，１６７６，（１９８６））。老人における骨折は全身の衰弱や痴呆につながるため重篤である。
この骨吸収と骨形成からなる骨リモデリングには、様々な生体由来生理活性物質が関与していることが分かっており、例えば、骨吸収促進あるいは破骨細胞分化促進に関与する因子として、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ：ｐａｒａｔｈｙｒｏｉｄ ｈｏｒｍｏｎｅ）、ＰＴＨｒＰ（ＰＴＨ−ｒｅｌａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ）、ＴＮＦα、Ｍ−ＣＳＦ、活性型ビタミンＤ３（１α，２５（ＯＨ）_２Ｄ_３）、プロスタグランジン（ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ）、ＲＡＮＫＬ（ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｏｆ ＮＦ−κＢ ｌｉｇａｎｄ）等が、骨吸収抑制に関与する因子として、カルシトニン（ｃａｌｃｉｔｏｎｉｎ）、エストロゲン（ｅｓｔｒｏｇｅｎ）、ＯＰＧ（ｏｓｔｅｏｐｒｏｔｅｇｅｒｉｎ）等が、骨形成に関与する因子として、ＰＴＨ、ＢＭＰ（ｂｏｎｅ ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ）、ＴＧＦβ（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ β）、プロスタグランジン等が、また全身のカルシウム代謝に関与する因子として、活性型ビタミンＤ３（１α，２５（ＯＨ）_２Ｄ_３）、ＰＴＨ等が知られる。中でも、エストロゲン、カルシトニン、活性型ビタミンＤ３等は、骨粗鬆症をはじめとする代謝性骨疾患の治療及び予防剤として臨床に用いられている。しかしながら、これらの薬剤は、主として骨吸収あるいはカルシウム代謝をコントロールして骨密度を増加させるメカニズムを有するため、骨形成能が低下した老人性骨粗鬆症等ではその効果が十分なものではないと言われている。最近になって、骨形成促進作用を有するＰＴＨの良好な骨密度改善作用が報告され（Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．８２，６２−６２８，（１９９７））、新しい骨粗鬆症薬として期待されている。
一方、ビスホスホネートは石灰化抑制物質であるピロリン酸と類似の構造を有する化合物であって、破骨細胞の機能を抑制し骨吸収抑制作用を有することから、骨粗鬆症等の代謝性骨疾患の治療に用いられている薬剤である。例えば、代表的なビスホスホネートであるアレンドロネート或いはリセドロネートが閉経後の女性骨粗鬆症患者を対象とした大規模臨床試験において大腿骨頸部骨折の発生頻度を減少させた報告がある（非特許文献１：Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．３３３（２２），ｐ．１４３７−１４４３，（１９９５）及び非特許文献２：Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．３４４（５），ｐ．３３３−３４０，（２００１））。しかしながら、８０歳以上の高齢患者ではその効果は有意ではなかったとの結果が開示されており（非特許文献２）、老人性骨粗鬆症では十分な効果が期待できないことが示唆されている。
従来、骨形成促進作用を有する生体由来生理活性物質と骨吸収抑制作用を有するビスホスホネートを併用する試みがいくつかなされている。例えば、ビスホスホネートの長期投与後にＰＴＨを長期投与する骨代謝障害の治療方法が開示される（特許文献１：国際公開第９６／０７４１７号パンフレット）。しかしながら、両剤の同時併用投与による効果は必ずしも明確ではないとの報告（非特許文献３：Ｒ．Ｎｅｅｒら、Ｂｏｎｅ，３２（５），Ｓ６９，（２００３））がある。また、血管拡張剤や分娩誘発剤として臨床的に実用化されている生理活性物質、プロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）は、その多くの活性のひとつとして骨形成作用と骨吸収作用を併せ持つことが知られており、このＰＧＥ２とビスホスホネートであるアレンドロネートを併用すると骨量が増加したとの報告がある（非特許文献４：Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｏｎｅ ａｎｄ Ｍｉｎｅｒａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，８（７），（１９９３））。
しかし、既知の生体由来生理活性物質は、効果が十分でない、ペプチドであることからその投与方法が限定される、或いは生体内で多様な活性を有するため好ましくない作用を伴う等の理由から、生体由来生理活性物質ではなく、非ペプチド性の、そして骨形成能が低下した老人性骨粗鬆症にも優れた骨折抑制活性が期待される、新しいタイプの骨量増加誘導剤の創製が望まれている。
最近になって、アルカリフォスファターゼ（ＡＬＰ）誘導活性を示し骨芽細胞分化促進作用を有する非ペプチド性化合物が報告されている。例えば、ベンゾチエピン誘導体（特許文献２〜４：特開平８−２３１５６９号公報、特開２０００−１０９４８０号公報及び特開平９−２６３５４５号公報＝ＷＯ９６３９１３４）、クロモン誘導体（特許文献５：特開２００１−１３９５７１号公報＝ＷＯ０１１６１２７）、チオフェン誘導体（特許文献６〜１１：特開２００２−４７１８４号公報、特開２００２−２５５９７１号公報＝ＷＯ０１１７４８２３、特開２０００−３０９５９１号公報、特開平１０−１３０２７１号公報＝ＷＯ９８０９９５８、特開２００１−１５１７７５号公報及び特開２００１−１５１７７４号公報）、プリン誘導体（非特許文献５：Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，２００２，１２４，１４５２０−１４５２１）、Ｎ−キノリルアントラニル酸誘導体（特許文献１２：特開平９−１８８６２２号公報）等の報告がある。これらの骨芽細胞分化促進作用を示す化合物は骨形成促進作用を呈し、代謝性骨疾患や骨折等の治療に有用であると開示されるが、その臨床上の有用性については未だ不明である。また、これらの化合物を開示する特許公報の中には、これらの骨芽細胞分化促進化合物を他の骨量増加誘導剤又は骨吸収抑制剤と併用することができる旨記載され、併用剤の例示にビスホスホネートが包含される（例えば、前記特許文献２，３，５及び７）。しかしながら、具体的に骨芽細胞分化促進化合物とビスホスホネートを併用した例、若しくは併用の効果についての開示は全くない。
なお、本願の後記一般式（Ｉ）で示される含窒素複素環化合物に構造の類似する化合物として、トリアゾロピリダジン誘導体に関する以下の報告がある（文中の記号は、後記一般式（Ｉ）における記号を示す）。しかしながら、これらの文献並びに特許には、骨芽細胞分化促進作用若しくは骨形成促進作用の開示も示唆も無い。
（１）ＲａとＲｂが隣接するＮ原子と一体となってピペリジノを形成し、Ｅが単結合である化合物であって、Ｒがピペリジノである抗菌化合物（特許文献１３：米国特許３，９５７，７６６号公報）；Ｒが未置換フェニルである化合物の合成（非特許文献６：Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，２２（７），２０７３−９（１９６６））；Ｒがｐ−（トリフルオロメチル）フェニル又はｐ−クロロフェニルである化合物の構造（非特許文献７：ＣＡＳ Ｒｅｇｉｓｔｒｙ Ｆｉｌｅ、ＲＮ＝２８９６５１−６７−８又は２０２８２０−２６−６）；並びにＲがｏ−ニトロフェニルである化合物（非特許文献８：オランダのＳＰＥＣＳ社のカタログ（Ｒｅｆｃｏｄｅ：ＡＧ−６９０／３０７３０５１））がそれぞれ開示される。
（２）ＲａとＲｂが隣接するＮ原子と一体となって、４−メチル−１−ピペラジニルを形成し、Ｅが単結合、かつＲが未置換フェニル、ｐ−メチルフェニル、ｍ−メチルフェニル、ｐ−メトキシフェニル、ｍ−クロロフェニル、ｐ−クロロフェニル又はｍ−ニトロフェニルである気管支拡張作用を有するトリアゾロピリダジン誘導体（特許文献１４：ドイツ特許２，４４４，３２２号公報並びに特許文献１５：特開昭５０−５８０９２号公報）が開示される。
（３）Ｒが置換基を有していてもよいイミダゾリルである抗菌化合物（特許文献１６、１７並びに１８：ドイツ公開特許２，２６１，６９３号、２，２５４，８７３号及び２，２１５，９９９号公報）；並びに、Ｒが５−ニトロ−２−フリル又は５−ニトロ−２−チエニルである抗菌化合物（特許文献１９、２０並びに２１：ドイツ公開特許２，１６１，５８６号、２，１６１，５８７号及び２，１１３，４３８号公報）が開示される。
（４）ＲａがＨ、Ｒｂがシクロプロピル、Ｅが単結合、かつＲがｐ−（トリフルオロメチル）フェニルである化合物の構造（非特許文献９：ＣＡＳ Ｒｅｇｉｓｔｒｙ Ｆｉｌｅ、ＲＮ＝２８９６５１−６８−９）が開示される。
（５）Ｒａがメチル、Ｒｂが２−ヒドロキシ−プロピル、Ｅが単結合、かつＲが３−ピリジルである高血圧作用を有する化合物（非特許文献１０：Ｆａｒｍａｃｏ．Ｅｄ．Ｓｃｉ．，３４（４），２９９−３１０，（１９７９））が開示される。
骨粗鬆症等の代謝性骨疾患では、骨量の減少から骨強度が低下し、腰痛等の疼痛及び骨折を生じる頻度が高く、特に骨形成能の低下した老齢患者においては、大腿骨頸部骨折を起こしてしまうと予後は極めて不良である。そのため、骨代謝全体をコントロールして骨量及び／又は骨強度を増加させることができる薬剤の創製が強く求められている。殊に、非生体由来且つ非ペプチド性であり、骨代謝回転低下型（ＩＩ型）の老人性骨粗鬆症においても優れた骨折抑制活性が期待される、新しいタイプの骨量増加誘導剤の創製が望まれている。

本発明者等は、骨芽細胞の機能を促進させることによる骨形成促進作用を有する治療薬の開発を目的に鋭意研究した結果、後記一般式（Ｉ）に示す新規含窒素複素環化合物が優れた骨芽細胞分化促進活性を示し、既知の非生体由来の非ペプチド性骨芽細胞分化促進化合物と同様に、骨形成促進剤として代謝性骨疾患の予防若しくは治療薬になり得ることを見出し、先に特許出願を行った（国際公開第０３／０７４５２５号パンフレット）。
更に、骨代謝をコントロールして骨量及び／又は骨強度を増加させることができる薬剤を鋭意研究した結果、上記良好な骨芽細胞分化促進化合物である含窒素複素環化合物（Ｉ）と骨吸収抑制作用を有するビスホスホネートを併用することにより、大腿骨の皮質骨の骨量及び／又は骨強度が相乗的あるいは相加的作用以上に増強され、例えば後記骨粗鬆症モデル（ラットＯＶＸ）を用いた試験において、偽手術（ｓｈａｍ）群を凌ぐ優れた骨量増加誘導作用が達成されることを見出し本発明を完成した。
即ち、本発明は、
（１）ａ）第一成分として非生体由来の非ペプチド性骨芽細胞分化促進化合物、ｂ）第二成分としてビスホスホネートを含有して成る骨量増加誘導剤である医薬組成物、
（２）ａ）第一成分として新規な非生体由来の非ペプチド性骨芽細胞分化促進化合物である下記一般式（Ｉ）で示される含窒素複素環化合物又はその塩、ｂ）第二成分としてビスホスホネートを含有して成る骨量増加誘導剤である医薬組成物、
（３）骨量増加誘導剤が代謝性骨疾患の予防若しくは治療剤である前記医薬組成物、
（４）骨量増加誘導剤が骨代謝回転低下型（ＩＩ型）骨粗鬆症の予防若しくは治療剤である前記医薬組成物、
（５）第一製剤として非生体由来の非ペプチド性骨芽細胞分化促進化合物を含有する製剤、及び第二製剤としてビスホスホネートを含有する製剤の２種の製剤からなる骨量増加誘導剤である組み合わせ物であって、該第一及び第二製剤は同時にもしくは別々に投与されるものである組み合わせ物、
（６）第一製剤が下記一般式（Ｉ）で示される含窒素複素環化合物又はその塩を含有する製剤である前記組み合わせ物、
（７）第一製剤として非生体由来の非ペプチド性骨芽細胞分化促進化合物を含有する製剤、及び第二製剤としてビスホスホネートを含有する製剤の少なくとも２種の製剤を含むキットである前記組み合わせ物、
（８）ビスホスホネートを有効成分とする、非生体由来の非ペプチド性骨芽細胞分化促進化合物の骨量増加作用増強剤、
（９）非生体由来の非ペプチド性骨芽細胞分化促進化合物を有効成分とする、ビスホスホネートの骨量増加作用増強剤、
（１０）非生体由来の非ペプチド性骨芽細胞分化促進化合物及びビスホスホネートの、骨量増加誘導剤である医薬を製造するための使用、
（１１）非生体由来の非ペプチド性骨芽細胞分化促進化合物の、ビスホスホネートの骨量増加作用を増強する医薬を製造するための使用、
（１２）ビスホスホネートの、非生体由来の非ペプチド性骨芽細胞分化促進化合物の骨量増加作用を増強する医薬を製造するための使用、
（１３）患者の骨量及び／又は骨強度の減少を伴う代謝性骨疾患の予防若しくは治療方法であって、有効量の非生体由来の非ペプチド性骨芽細胞分化促進化合物と、有効量のビスホスホネートを、同時に若しくは別々に投与することからなる方法、
（１４）患者の骨量及び／又は骨強度の減少を伴う代謝性骨疾患が骨代謝回転低下型（ＩＩ型）骨粗鬆症である前記方法、並びに
（１５）骨量及び／又は骨強度の増加を必要とする患者に、有効量の非生体由来の非ペプチド性骨芽細胞分化促進化合物及び有効量のビスホスホネートを、同時に若しくは別々に投与することからなる、患者の骨量増加誘導方法。

（式中の記号は以下の意味を有する。
Ｒａ及びＲｂ：同一又は異なって、Ｈ；ＣＯ−低級アルキル；ＳＯ_２−低級アルキル；置換基を有していてもよいシクロアルキル；置換基を有していてもよいアリール；又は、置換基を有していてもよいシクロアルキル、置換基を有していてもよいアリール、置換基を有していてもよい４乃至８員の単環飽和若しくは一部不飽和ヘテロ環、ＣＯ−低級アルキル、ＳＯ_２−低級アルキル、ＯＲ^１、ＳＲ^１、ＮＲ^１Ｒ^２、ハロゲン、ＮＯ_２、ＣＮ、及びＣＯＯＲ^１からなる群から選択される１〜３個の置換基を有していてもよい低級アルキル；但し、Ｒａ及びＲｂの少なくとも一方はＨ以外の基を示す、
又は、ＲａとＲｂは隣接するＮ原子と一体となって、ヘテロ原子としてＮ原子を１〜２個含有する４乃至８員飽和若しくは一部不飽和ヘテロ環を形成し、該ヘテロ環は、ベンゼン環若しくはシクロアルキル環と縮合していてもよく、架橋を有していてもよく又はスピロ環を形成してもよい、更に、該ヘテロ環は１〜５個の置換基を有していてもよい、
Ｅ：単結合、Ｃ_１−３アルキレン、ビニレン（−ＣＨ＝ＣＨ−）、エチニレン（−Ｃ≡Ｃ−）、ＣＯ、ＮＲ^３、ＣＨ_２−Ｊ、ＣＯＮＲ^４又はＮＲ^５ＣＯ、
Ｊ：Ｏ、Ｓ、ＮＲ^６、ＣＯ、ＳＯ又はＳＯ_２、
Ｒ：置換基を有していてもよいアリール、置換基を有していてもよいヘテロアリール、置換基を有していてもよいシクロアルキル、置換基を有していてもよいシクロアルケニル又は置換基を有していてもよい４乃至８員の単環飽和若しくは一部不飽和ヘテロ環、
Ｒ^１〜Ｒ^６：同一又は異なって、Ｈ又は低級アルキル、
但し、以下の化合物を除く。
（１）ＲａとＲｂが隣接するＮ原子と一体となってピペリジノを形成し、Ｅが単結合、且つ、Ｒがピペリジノ、未置換フェニル、ｐ−（トリフルオロメチル）フェニル、ｐ−クロロフェニル又はｏ−ニトロフェニルである化合物、
（２）ＲａとＲｂが隣接するＮ原子と一体となって、４−メチル−１−ピペラジニルを形成し、Ｅが単結合、且つ、Ｒが未置換フェニル、ｐ−メチルフェニル、ｍ−メチルフェニル、ｐ−メトキシフェニル、ｍ−クロロフェニル、ｐ−クロロフェニル又はｍ−ニトロフェニルである化合物、
（３）Ｒが置換基を有していてもよいイミダゾリル、５−ニトロ−２−フリル又は５−ニトロ−２−チエニルである化合物、
（４）ＲａがＨ、Ｒｂがシクロプロピル、Ｅが単結合、且つ、Ｒがｐ−（トリフルオロメチル）フェニルである化合物、及び
（５）Ｒａがメチル、Ｒｂが２−ヒドロキシ−プロピル、Ｅが単結合、且つ、Ｒが３−ピリジルである化合物）。

図１は、実施例２の試験１における大腿骨骨強度（３点曲げ試験）の結果を示すグラフである。なお、＊＊＊，＊＊及び＊は、対照群１に対するＳｔｕｄｅｎｔ’ｓ ｔ−ｔｅｓｔの結果がそれぞれＰ＜０．００５，Ｐ＜０．０１及びＰ＜０．０５であることを示す。
図２は、実施例２の試験１における大腿骨皮質骨密度（ｐＱＣＴ）の結果を示すグラフである。なお、＊＊＊，＊＊及び＊は、対照群１に対するＳｔｕｄｅｎｔ’ｓ ｔ−ｔｅｓｔの結果がそれぞれＰ＜０．００５，Ｐ＜０．０１及びＰ＜０．０５であることを示す。
図３は、実施例２の試験１における大腿骨皮質骨幅（ｐＱＣＴ）の結果を示すグラフである。なお、＊＊＊，＊＊及び＊は、対照群１に対するＳｔｕｄｅｎｔ’ｓ ｔ−ｔｅｓｔの結果がそれぞれＰ＜０．００５，Ｐ＜０．０１及びＰ＜０．０５であることを示す。
図４は、実施例２の試験１における尿中のデオキシピリジノリン値（尿量補正）を示すグラフである。
図５は、実施例２の試験２における脛骨皮質骨幅（ｐＱＣＴ）の結果を示すグラフである。なお、＊は、対照群１に対するＳｔｕｄｅｎｔ’ｓ ｔ−ｔｅｓｔの結果がＰ＜０．０５であることを示す。
図６は、実施例２の試験２における脛骨皮質骨密度（ｐＱＣＴ）の結果を示すグラフである。
図７は、実施例２の試験２における尿中のデオキシピリジノリン値（尿量補正）を示すグラフである。なお、＊＊＊，＊＊及び＊は、対照群１に対するＳｔｕｄｅｎｔ’ｓ ｔ−ｔｅｓｔの結果がそれぞれＰ＜０．００５，Ｐ＜０．０１及びＰ＜０．０５であることを示す。

以下、本発明を詳細に説明する。
本発明において、「非生体由来の非ペプチド性骨芽細胞分化促進化合物」とは、骨芽細胞への或いは骨芽細胞自体の分化誘導を促進して骨芽細胞の機能を促進し、その指標である骨芽細胞のＡＬＰ活性促進作用を明確に示す低分子有機化合物を意味し、生体由来の既存の生理活性物質あるいはそのアナログを含まず、且つペプチド化合物をも含まない。ここに、ＡＬＰは骨芽細胞の機能発現初期より上昇し（ジャーナル・オブ・セルラー・フィジオロジー、１４３巻、４２０（１９９０））、骨芽細胞による骨形成に関与することが報告される（細胞工学、１３巻、１２号、１０６２（１９９４）、及びＪ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，８９，１９７４（１９９２））ことから、ＡＬＰ活性上昇は骨芽細胞分化誘導促進による骨形成促進の指標として評価されるものである。
具体的には、本発明の「骨芽細胞分化促進化合物」は、骨芽細胞を用いたＬｏｗｒｙらの方法（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２０７巻、１９頁（１９５４年））と同様の測定法を用いたＡＬＰ活性測定試験において、ＡＬＰ促進活性を有することが確認された化合物である。少なくとも１つの骨芽細胞あるいは骨芽細胞への分化能を持つ細胞に対するＡＬＰ活性測定試験において、１０μＭ以下の濃度でコントロール比１５０％以上の促進作用を呈するものが好ましく、より好ましくは２００％以上の促進作用を呈するものである。特に好ましくは、３００ｎＭの濃度で３００％以上の促進作用を呈する化合物である。ここにＡＬＰ活性測定試験に用いることのできる細胞としては、マウス頭蓋骨由来骨芽細胞株ＭＣ３Ｔ３−Ｅ１、ラット新生頭蓋骨由来細胞株ＲＯＢ−Ｃ２６、Ｃ８ａ、Ｃ１１、Ｃ２０、Ｃ２３、ラット骨肉腫細胞株ＲＯＳ１７／２．８、ヒト骨芽細胞ＮＨＯｓｔ、マウス未分化間葉系細胞株Ｃ３Ｈ１０Ｔ１／２、ヒト間葉系幹細胞ｈＭＳＣ，その他各種（マウス、ラット、ヒト等）の骨芽細胞、骨細胞、未分化間葉系幹細胞、骨髄細胞等が挙げられ、これらの細胞において上記ＡＬＰ促進活性が確認される。
現在までいくつかの非生体由来の非ペプチド性骨芽細胞分化促進化合物が報告されており、例えば、ベンゾチエピン誘導体（特許文献２〜４）、クロモン誘導体（特許文献５）、チオフェン誘導体（特許文献６〜１１）、プリン誘導体（非特許文献５）、Ｎ−キノリルアントラニル酸誘導体（特許文献１２）等が本発明の非ペプチド性骨芽細胞分化促進化合物として好適である。これらの化合物は、当該特許文献若しくは非特許文献に記載の方法により容易に入手できる。なお、これらの化合物のＡＬＰ促進活性については、当該特許文献若しくは非特許文献に記載される通りである。
又、新規合成化合物、市販品又はケミカルファイルに登録されている種々の化合物、或いはコンビナトリアル・ケミストリー技術によって得られた化合物群を、後記実施例１に記載されたＡＬＰ活性測定試験に付して、本発明の非ペプチド性骨芽細胞分化促進化合物として用いることができるＡＬＰ促進活性を示す化合物を見出すことができる。さらに、前記見出された化合物を化学的に修飾し、より活性の良好な非ペプチド性骨芽細胞分化促進化合物を得ることもできる。
更に、本発明者等が見出した前記一般式（Ｉ）で示される含窒素複素環化合物（以下化合物（Ｉ）と略記する）又はその塩は良好な骨芽細胞分化促進作用を有することから、本発明の非ペプチド性骨芽細胞分化促進化合物として特に好ましい。
以下化合物（Ｉ）について詳述する。
本明細書中「低級」とは、特に断らない限り、炭素数１乃至６個を有する直鎖又は分岐状の炭素鎖を意味する。「低級アルキル」としては特にメチル、エチル及びプロピル基が好ましい。なお、本願明細書中において、「低級アルキル」を「Ａｌｋ」と略記する。
「アリール」は、好ましくはＣ_６−１４単環乃至３環式アリール基である。より好ましくは、フェニル及びナフチル基であり、更に好ましくは、フェニル基である。また、フェニル基にＣ_５−８シクロアルキル環が縮環し、例えば、インダニル又はテトラヒドロナフチル基等を形成していてもよい。
「シクロアルキル」は、好ましくはＣ_３−１４シクロアルキル基であり、架橋を有していてもよい。より好ましくはＣ_３−１０シクロアルキル基であり、更に好ましくはシクロペンチル、シクロヘキシル及びシクロヘプチル基である。「シクロアルケニル」は、上記「シクロアルキル」の環に、１又は２個の二重結合を有する基である。
「４乃至８員の単環飽和若しくは一部不飽和ヘテロ環」は、Ｎ，Ｓ，Ｏから選択されるヘテロ原子を１乃至４個含有する４乃至８員単環飽和複素環であり、架橋を有していてもよく、一部不飽和結合を有していてもよい。好ましくは、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロフラニル、ピロリジニル、ピペリジル、１，２，３，６−テトラヒドロピリジル、ホモピペリジニル、ピペラジニル、ホモピペラジニル、キヌクリジニル及びモルホリニル基である。
「ヘテロアリール」としては、Ｎ，Ｓ，Ｏから選択されるヘテロ原子を１乃至４個含有する５乃至６員単環ヘテロアリール基、並びにこれらがベンゼン環若しくは５乃至６員単環ヘテロアリールと縮合した２乃至３環式ヘテロアリール基であり、部分的に飽和されていてもよい。ここに、５乃至６員単環ヘテロアリールとしては、フリル、チエニル、ピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、ピリジル、ピリミジニル、ピリダジニル、ピラジニル及びトリアジニル基が好ましく、２乃至３環式ヘテロアリールとしては、ベンゾフラニル、ベンゾチエニル、ベンゾチアジアゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾオキサジアゾリル、ベンゾイミダゾリル、インドリル、イソインドリル、インダゾリル、キノリル、イソキノリル、シンノリニル、キナゾリニル、キノキサリニル、ベンゾジオキソリル、ピラジノピリジル、トリアゾロピリジル、ナフチリジニル及びイミダゾピリジル基が好ましい。部分飽和ヘテロアリールとしては、１，２，３，４−テトラヒドロキノリル基等が挙げられる。ヘテロアリールとして、更に好ましくは、ピリジル、ピリミジニル、フリル、チエニル、チアゾリル、キノリル、ベンゾフラニル、ベンゾチエニル、インドリル、イミダゾピリジル及びナフチリジニル基であり、特に好ましくは、ピリジル基である。
「置換基を有していてもよいアリール」及び「置換基を有していてもよいヘテロアリール」、「置換基を有していてもよいシクロアルキル」、「置換基を有していてもよいシクロアルケニル」、「置換基を有していてもよい４乃至８員の単環飽和若しくは一部不飽和ヘテロ環」における置換基としては、好ましくは、下記Ｂ群から選択される同一又は異なる１〜５個の置換基であり、更に好ましくはＢ１群から選択される基であり、特に好ましくは、ハロゲン、ＯＡｌｋ及びＳＡｌｋである。
Ｂ群：Ｇ群から選択される置換基を１〜４個有していてもよいＡｌｋ、ハロゲン、ＮＲ^１Ｒ^２、ＮＲ^１ＣＯ−Ａｌｋ、ＮＯ_２、ＣＮ、ＯＲ^１、−Ｏ−（Ｇ群から選択される置換基を１〜４個有するＡｌｋ）、ＳＲ^１、−Ｓ−ハロゲノＡｌｋ、−Ｏ−ＣＯＡｌｋ、ＣＯＯＲ^１、ＣＯＲ^１、ＣＯＮＲ^１Ｒ^２、ＳＯＡｌｋ、ＳＯ_２Ａｌｋ、ＳＯ_２ＮＲ^１Ｒ^２、Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ^１）_２、−Ｏ−ＣＨ_２−Ｏ−、−Ｏ−（ＣＨ_２）_２−Ｏ−、Ｄ群から選択される置換基を１〜４個有していてもよいアリール、Ｄ群から選択される置換基を１〜４個有していてもよいヘテロアリール、−Ｏ−（Ｄ群から選択される置換基を１〜４個有していてもよいアリール）、Ｄ群から選択される置換基を１〜４個有していてもよい４乃至８員の単環飽和若しくは一部不飽和ヘテロ環、シクロアルキル及び−Ｏ−シクロアルキル。ここに、Ｒ^１及びＲ^２は前記の通り；「Ｄ群」は、Ａｌｋ、ハロゲン、ハロゲノＡｌｋ、ＮＲ^１Ｒ^２、ＮＯ_２、ＣＮ、ＯＲ^１及びＳＲ^１；「Ｇ群」は、ハロゲン、ＮＲ^１Ｒ^２、ＣＮ、ＣＯＯＲ^１、ＯＲ^１、ＳＲ^１、Ｄ群から選択される置換基を１〜４個有していてもよい４乃至８員の単環飽和若しくは一部不飽和ヘテロ環、Ｄ群から選択される置換基を１〜４個有していてもよいアリール及びＤ群から選択される置換基を１〜４個有していてもよいヘテロアリール；「ハロゲン」は、Ｉ、Ｂｒ、Ｆ及びＣｌ；及び、「ハロゲノＡｌｋ」は、１以上のハロゲン原子で置換された低級アルキル（特に好ましくはＣＦ_３）を、それぞれ示す。以下同様。
Ｂ１群：Ａｌｋ、ハロゲン、ハロゲノＡｌｋ、ＮＲ^１Ｒ^２、ＮＯ_２、ＣＮ、ＯＲ^１、−Ｏ−ハロゲノＡｌｋ、ＳＲ^１、ＣＯＯＲ^１、ＣＯＮＲ^１Ｒ^２、ＳＯ_２Ａｌｋ、４乃至８員の単環飽和若しくは一部不飽和ヘテロ環、フェニル及びフェノキシ基。
ＲａとＲｂが隣接するＮ原子と一体となって形成する、「ヘテロ原子としてＮ原子を１〜２個含有する４乃至８員飽和若しくは一部不飽和ヘテロ環」としては、環原子としてＮ原子を１〜２個有し、残る環原子はＣ原子である４乃至８員の単環飽和若しくは一部不飽和ヘテロ環基である。該ヘテロ環は、ベンゼン環若しくはＣ_５−８シクロアルキル環と縮合環を形成してもよく、架橋を有していてもよく、スピロ環を形成していてもよい。好ましくは、ピロリジニル、ピペリジル、ホモピペリジニル、ピペラジニル、ピラゾリジニル、イミダゾリジニル、ホモピペラジニル、ペルヒドロアゾシニル、ピロリニル、イミダゾリニル、ピラゾリニル、１，２，３，６−テトラヒドロピリジル、１，２−ジヒドロピリジル、テトラヒドロピリダジニル、テトラヒドロピラジニル、１，４，５，６−テトラヒドロピリミジニル、インドリニル、イソインドリニル、１，２，３，４−テトラヒドロキノリル、１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリル、３−アザビシクロ［３．２．１］オクチル、８−アザビシクロ［３．２．１］オクチル、３−アザビシクロ［３．２．２］ノニル、３−アザビシクロ［３．３．１］ノニル、７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプチル、イソキヌクリジニル、３−アザビシクロ［３．３．２］デカニル、３−アザスピロ［５．５］ウンデカニル、２−アザスピロ［４．５］デカニル、２−アザスピロ［４．４］ノニル及び８−アザスピロ［４．５］デカニル基等が挙げられる。更に好ましくは、架橋を有していてもよい４乃至８員の単環飽和若しくは一部不飽和ヘテロ環であり、中でも、ピロリジニル、ピペリジル、ホモピペリジニル、ペルヒドロアゾシニル、１，２，３，６−テトラヒドロピリジル、３−アザビシクロ［３．２．１］オクチル、８−アザビシクロ［３．２．１］オクチル、３−アザビシクロ［３．２．２］ノニル及び３−アザビシクロ［３．３．１］ノニル基である。ピペリジル基が特に好ましい。
また、該ヘテロ環は、置換基を有していてもよく、この置換基としては前記Ｂ群から選択される１〜５個の置換基が好ましい。更に好ましくは、（ＣＯＯＲ^１、ＯＲ^１及びフェニルから選択される置換基を有していてもよいＡｌｋ）、ハロゲン、ＮＲ^１Ｒ^２、ＣＮ、ＯＲ^１、−Ｏ−（ＣＯＯＲ^１、ＯＲ^１及びフェニルから選択される置換基を有するＡｌｋ）、ＳＲ^１、ＣＯＯＲ^１、ＣＯＮＲ^１Ｒ^２及びフェニルから選択される１〜５個の置換基であり、特に好ましくはＡｌｋ、ハロゲン、ＯＲ^１及びＣＯＯＲ^１から選択される１〜２個の置換基である。
化合物（Ｉ）中、好ましい化合物を以下に示す。
（１） −ＮＲａＲｂが、ベンゼン環若しくはシクロアルキル環と縮合していてもよく、架橋を有していてもよく又はスピロ環を形成してもよく、Ｂ群から選択される１〜５個の置換基を有していてもよい、ヘテロ原子としてＮ原子を１〜２個含有する４乃至８員飽和若しくは一部不飽和ヘテロ環を形成し；Ｅが、単結合、Ｃ_１−３アルキレン、ビニレン、エチニレン、ＣＯＮＨ、ＣＨ_２ＮＨ、ＣＨ_２Ｏ又はＣＨ_２Ｓであり；Ｒが、Ｂ群から選択される１〜５個の置換基を有していてもよいアリール又はＢ群から選択される１〜５個の置換基を有していてもよいヘテロアリールである化合物。
（２） Ｅが単結合、Ｃ_１−３アルキレン、ビニレン又はエチニレンであり；Ｒが、Ｂ１群から選択される１〜５個の置換基を有するアリール又はＢ１群から選択される群１〜５個の置換基を有するヘテロアリールである化合物。
（３） −ＮＲａＲｂが、環ヘテロ原子としてＮ原子を１個有し架橋を有していてもよく、Ａｌｋ、ハロゲン、ＯＲ^１及びＣＯＯＲ^１から選択される１〜２個の置換基を有していてもよい４乃至８員の単環飽和若しくは一部不飽和ヘテロ環であり；Ｅが単結合であり；Ｒが、ｍ位にハロゲン、ＯＡｌｋ及びＳＡｌｋから選択される置換基を有するフェニル、又は６位にハロゲン、ＯＡｌｋ及びＳＡｌｋから選択される置換基を有するピリジルである化合物。
特に好ましい化合物は、以下に列記する含窒素複素環化合物又はその塩である。
６−アゾカン−１−イル−３−（６−メトキシピリジン−２−イル）−１，２，４−トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン、６−アゼパン−１−イル−３−（６−ブロモピリジン−２−イル）−１，２，４−トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン、３−（３−メトキシフェニル）−６−（ピペリジン−１−イル）−１，２，４−トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン、３−（３−ブロモフェニル）−６−（ピペリジン−１−イル）−１，２，４−トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン、６−アゼパン−１−イル−３−（６−メトキシピリジン−２−イル）−１，２，４−トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン、６−（４−フルオロピペリジン−１−イル）−３−（６−メトキシピリジン−２−イル）−１，２，４−トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン、６−（３−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−３−イル）−３−（６−メトキシピリジン−２−イル）−１，２，４−トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン、６−（４，４−ジフルオロピペリジン−１−イル）−３−（６−メトキシピリジン−２−イル）−１，２，４−トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン、６−（３，３−ジフルオロピペリジン−１−イル）−３−（６−メトキシピリジン−２−イル）−１，２，４−トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン、６−アゾカン−１−イル−３−（６−ブロモピリジン−２−イル）−１，２，４−トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン、及び６−（８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−８−イル）−３−（６−ブロモピリジン−２−イル）−１，２，４−トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン。
化合物（Ｉ）の置換基の種類によっては、幾何異性体や互変異性体が存在する場合があるが、本発明にはこれらの異性体の分離したもの、あるいは混合物が包含される。また、化合物（Ｉ）は、不斉炭素原子を有する場合があり、これに基づく光学異性体が存在しうる。本発明はこれらの光学異性体の混合物や単離されたものを全て包含する。
化合物（Ｉ）は、酸付加塩又は置換基の種類によっては塩基との塩を形成する場合もある。かかる塩としては、製薬学的に許容される塩であり、好ましくは、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸等の無機酸、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、フマール酸、マレイン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、アスパラギン酸、グルタミン酸等の有機酸との酸付加塩、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム、アルミニウム等の金属を含む無機塩基、メチルアミン、エチルアミン、エタノールアミン、リジン、オルニチン等の有機塩基との塩やアンモニウム塩等が挙げられる。
さらに、本発明の化合物（Ｉ）は、その塩の各種の水和物や溶媒和物及び結晶多形の物質をも包含する。
本発明の化合物（Ｉ）は後記実施例１に示すように良好なＡＬＰ促進活性を有し、それ自体で骨芽細胞分化誘導促進による骨形成促進作用を有する。
本発明において、「ビスホスホネート」とは、骨吸収抑制作用を有するビスホスホン酸若しくはその製薬学的に許容される塩又はエステルであって、好ましくは、エチドロネート（ｅｔｉｄｒｏｎａｔｅ）、アレンドロネート（ａｌｅｎｄｒｏｎａｔｅ；特公平２−１３６４５号公報、特公平６−６２６５１号公報、米国特許４７０５６５１号公報）、リセドロネート（ｒｉｓｅｄｒｏｎａｔｅ；日本特許第２７０２４１９号公報、日本特許第２５６８９９９号公報、ヨーロッパ特許１８６４０５号公報）、パミドロネート（ｐａｍｉｄｒｏｎａｔｅ；特公平５−８７１７号公報、米国特許４３２７０３９号公報）、インカドロネート（ｉｎｃａｄｒｏｎａｔｅ；特公平７−６２９号公報）、クロドロネート（ｃｌｏｄｒｏｎａｔｅ）、ミノドロネート（ｍｉｎｏｄｒｏｎａｔｅ；特公平６−９９４５７号公報）、イバンドロネート（ｉｂａｎｄｒｏｎａｔｅ；特公平８−２９１３号公報、ヨーロッパ特許２５２５０４号公報）、ゾレドロネート（ｚｏｌｅｄｒｏｎａｔｅ；日本特許第２７４４２３８号公報、ヨーロッパ特許２７５８２１号公報）、チルドロネート（ｔｉｌｕｄｒｏｎａｔｅ；特公平４−２９６７６号公報、日本特許第２７３５４６２号公報、米国特許５７３９３８１号公報）、ネリドロネート（ｎｅｒｉｄｒｏｎａｔｅ；特公昭６３−７５２６号公報、米国特許４５７８３７６号公報）等である。更に好ましくは、アレンドロネート、リセドロネート、パミドロネート、インカドロネート、ミノドロネート、イバンドロネート及びゾレドロネート、特に好ましくは、アレンドロネート、リセドロネート、インカドロネート、ミノドロネート及びゾレドロネートである。
ビスホスホン酸の製薬学的に許容される塩としては、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム、アルミニウム等の金属を含む無機塩基、メチルアミン、エチルアミン、エタノールアミン、リジン、オルニチン等の有機塩基との塩が挙げられる。エステルとしては、好ましくはメチルエステル、エチルエステル等の低級アルキルエステルである。
これらのビスホスホネートは市販されているものを用いてもよく、上記文献記載の方法で製造してもよい。
また、本発明において、「骨量増加誘導剤」とは、骨量及び／又は骨強度を増加させる薬剤を意味し、好ましくは骨量と骨強度の両者を増加させる薬剤である。従って、本発明の「骨量増加誘導剤」には、骨量及び／又は骨強度の減少を伴う、骨粗鬆症、線維性骨炎（副甲状腺機能亢進症）、骨軟化症、ページェット病等の代謝性骨疾患の予防若しくは治療剤；骨折、再骨折、骨欠損、変形性骨関節症、多発性骨髄腫、癌の骨転移等の骨組織損傷における骨組織修復剤；更に、歯科領域における歯周病治療剤、歯周組織欠損の修復剤、人工歯根の安定化剤、顎堤形成促進剤等が包含される。本発明の「骨量増加誘導剤」としては、好ましくは、骨粗鬆症等の代謝性骨疾患の予防若しくは治療剤であり、特に好ましくは骨形成能が低下した、骨代謝回転低下型（ＩＩ型）骨粗鬆症、殊に老人性骨粗鬆症の予防若しくは治療剤である。
本発明の「骨量増加誘導剤である組合せ物」において、「組合せ物」とは、それぞれの成分が独立した製剤であって、併用療法に用いることができるものを意味し、それぞれを組合せて包装したもの（例えばキット等の形態）、又は併用投与用にそれぞれが独立して販売されるものであってもよい。ここに、「同時に」とは、第一製剤と第二製剤を一緒に投与することを意味し、「別々に」とは、第一製剤と第二製剤を同一若しくは異なる投与経路で、同一若しくは異なる投与頻度若しくは投与間隔で、別々に投与することを意味する。好ましくは、各製剤のバイオアベイラビリティー、安定性等を考慮し、それぞれの製剤に適した製剤処方、投与経路、投与頻度等の投与条件下にて、同時に若しくは別々に投与される。
キットとしては、非ペプチド性骨芽細胞分化促進化合物を含有する第一製剤とビスホスホネートを含有する第二製剤を含み、所望によりプラセボ剤等のそれぞれの投与時期に合わせた投与を容易にする追加的な製剤や表示部材を含んでいてもよい包装品が挙げられる。
本発明において、「骨量増加作用増強剤」とは、他の薬剤が結果として骨量増加を誘導する作用を有するとき、その作用と協調して、より骨量を増加させる薬剤を意味し、具体的には、
（ａ）ビスホスホネートに関しては、骨芽細胞分化促進化合物の骨量増加作用がビスホスホネートの併用によって増強されることから、骨芽細胞分化促進化合物の骨量増加作用を増強する薬剤を意味し、一方
（ｂ）骨芽細胞分化促進化合物に関しては、ビスホスホネートの骨量増加作用が骨芽細胞分化促進化合物の併用によって増強されることから、ビスホスホネートの骨量増加作用を増強する薬剤を意味する。
本発明の非生体由来の非ペプチド性骨芽細胞分化促進化合物とビスホスホネートを含有する医薬組成物、並びに、本発明の組合せ物を構成する前記第一製剤若しくは第二製剤は、それぞれ当業者に周知の技術を用いて製剤化することができる。即ち、通常製剤化に用いられる、薬剤用担体、賦形剤、その他添加剤を用いて、通常使用されている方法によって調製することができる。投与は錠剤、丸剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、液剤、吸入剤等による経口投与、又は、静注、筋注等の注射剤、坐剤経皮用液剤、軟膏剤、経皮用貼付剤等による非経口投与のいずれの形態であってもよい。
本発明による経口投与のための固体組成物としては、錠剤、散剤、顆粒剤等が用いられる。このような固体組成物においては、ひとつ又はそれ以上の活性物質が、少なくともひとつの不活性な希釈剤、例えば乳糖、マンニトール、ブドウ糖、ヒドロキシプロピルセルロース、微結晶セルロース、デンプン、ポリビニルピロリドン、メタケイ酸アルミン酸マグネシウムと混合される。組成物は、常法に従って、不活性な希釈剤以外の添加剤、例えばステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤や繊維素グリコール酸カルシウムのような崩壊剤、安定化剤、グルタミン酸又はアスパラギン酸のような溶解補助剤を含有していてもよい。錠剤又は丸剤は必要によりショ糖、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレートなどの糖衣又は胃溶性若しくは腸溶性物質のフィルムで被膜してもよい。
経口投与のための液体組成物は、薬剤的に許容される乳濁剤、溶液剤、懸濁剤、シロップ剤、エリキシル剤等であって、一般的に用いられる不活性な希釈剤、例えば精製水、エタノールを含む。この組成物は不活性な希釈剤以外に湿潤剤、懸濁剤のような補助剤、甘味剤、風味剤、芳香剤、防腐剤を含有していてもよい。
非経口投与のための注射剤としては、無菌の水性又は非水性の溶液剤、懸濁剤、乳濁剤を含有する。水性の溶液剤、懸濁剤としては、例えば注射用蒸留水及び生理食塩液が含まれる。非水溶性の溶液剤、懸濁剤としては、例えばプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油のような植物油、エタノールのようなアルコール類、ポリソルベート８０（商品名）等がある。このような組成物は、さらに防腐剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、安定化剤、溶解補助剤（例えば、グルタミン酸、アスパラギン酸）のような補助剤を含んでもよい。これらは例えばバクテリア保留フィルターを通す濾過、殺菌剤の配合又は照射によって無菌化される。これらはまた無菌の固体組成物を製造し、使用前に無菌水又は無菌の注射用溶媒に溶解して使用することもできる。
また、国際公開第９４／０５２９７号パンフレット、国際公開第９９／０４７７３号パンフレット、米国特許５３５８９４１号公報、国際公開第９９／１８９７２号パンフレット、国際公開第９７／４４０１７号パンフレット、国際公開第２０００／２１５４１号パンフレット、国際公開第２００１／８２９０３号パンフレット、国際公開第２００１／７６５７７号パンフレット等には、ビスホスホネート含有製剤に関する各種技術が開示されており、これらの既知技術を適宜応用して所望のビスホスホネート含有製剤を製造することもできる。
本発明の医薬組成物若しくは組合せ物における、非生体由来の非ペプチド性骨芽細胞分化促進化合物は骨芽細胞分化促進活性を呈する投与量で経口若しくは非経口的に投与される。前記文献で既知の非生体由来の非ペプチド性骨芽細胞分化促進化合物を用いる場合は、当該文献記載の好適な投与量・投与形態を採用できる。例えば、本発明の化合物（Ｉ）を用いる場合、その１日当たりの投与量は、経口投与の場合、体重当たり約０．００１から１００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは０．０１〜６０ｍｇ／ｋｇが適当であり、これを１回であるいは２乃至４回に分けて投与する。或いは、数日〜数ヶ月分を併せて、例えば週１回、週２回、月２回、月１回等の頻度で投与してもよい。静脈投与される場合は、体重当たり約０．０００１から２０ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約０．００１から５ｍｇ／ｋｇが適当で、１日１回乃至複数に分けて投与する。或いは、数日〜数ヶ月分を併せて、例えば週１回、週２回、月２回、月１回等の頻度で投与してもよい。本発明の非生体由来の非ペプチド性骨芽細胞分化促進化合物は、骨形成の所望される部位に局所注射剤やデポ剤として局所投与されてもよい。
一方、本発明の医薬組成物若しくは組合せ物における、ビスホスホネートはその骨吸収抑制活性を呈する投与量で経口若しくは非経口的に投与される。ビスホスホネートの１日当たりの投与量は、用いるビスホスホネートの活性に応じて決定される。臨床に適した投与量・投与頻度が既知のビスホスホネートにおいては、当該臨床投与量・投与頻度で投与することが好ましい。或いは、骨芽細胞分化促進化合物との相乗効果を考慮してそれより少ない量が投与されてもよい。例えば、アレンドロネート、リセドロネート、パミドロネート、インカドロネート、ミノドロネート、イバンドロネート及びゾレドロネートにおける経口投与の場合、１日当たり約０．００１から３０ｍｇ、好ましくは０．０１〜１０ｍｇが適当であり、これを１日１回、若しくは数日〜数ヶ月分を併せて、例えば週１回、週２回、月２回、月１回等の頻度で投与する。静脈投与される場合は、体重当たり約０．０００１から１ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約０．００１から０．５ｍｇ／ｋｇが適当で、これを１日１回、若しくは数日〜数ヶ月分を併せて、週１回、２週に１回、月１回、３ヶ月に１回、６ヶ月に１回、年１回等の頻度で投与する。
本発明の非生体由来の非ペプチド性骨芽細胞分化促進化合物とビスホスホネートを含有する医薬組成物において、両成分は各々上記投与量に相当する量を包含するように調製され製造される。
本発明に用いられる化合物（Ｉ）は新規物であるから、以下にその代表的な製造方法を説明する。
化合物（Ｉ）及びその塩は、その基本骨格あるいは置換基の種類に基づく特徴を利用し、種々の公知の合成法を適用して製造することができる。その際、官能基の種類によっては、当該官能基を原料ないし中間体の段階で適当な保護基、すなわち容易に当該官能基に転化可能な基に置き換えておくことが製造技術上効果的な場合がある。しかるのち、必要に応じて保護基を除去し、所望の化合物を得ることができる。このような官能基としては例えば水酸基やカルボキシル基等を挙げることができ、それらの保護基としては例えばグリーン（Ｇｒｅｅｎｅ）及びウッツ（Ｗｕｔｓ）著、「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」、第２版に記載の保護基を挙げることができ、これらを反応条件に応じて適宜用いればよい。
以下に代表的な製造法について説明する。
第１製法

（式中、Ｌはハロゲン原子又は有機スルホネート等の常用の脱離基を示す。以下同様。）
化合物（Ｉ）は、常法のＮ−アルキル化、例えば、アミン誘導体（ＩＩＩ）と、ハロゲン原子又は有機スルホネート等の常用の脱離基を有する化合物（ＩＩ）とを、炭酸カリウム、トリエチルアミン、水素化ナトリウム等の塩基の存在下、又は非存在下で、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、トルエン、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、アセトニトリル等の不活性溶媒中、又は無溶媒で、冷却下乃至還流下で反応させることによって行うことができる。
その他の製法
前記第１製法で得られた化合物を、更に、常法の置換基の修飾反応、例えばニトロ基のアミノ基への還元反応、アミド化、スルホンアミド化、Ｎ−アルキル化、エステル化、エステルの加水分解、水酸基のエーテル化、チオエーテルのスルホン化、ハロゲン化、オレフィン化等に付して、所望の置換基を有する本発明化合物を得ることができる。これらの反応は例えば、ＯＲＧＡＮＩＣ ＦＵＮＣＴＩＯＮＡＬ ＧＲＯＵＰ ＰＲＥＰＡＲＡＴＩＯＮＳ Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｓａｎｄｌｅｒ，Ｋａｒｏ著）等に記載の方法に準じて容易に行うことができる。
（化合物（Ｉ）の原料化合物の製法）
製法ａ

原料化合物（ＩＩ）は、ヒドラジン化合物（ＩＶ）とカルボン酸化合物（Ｖ）とを脱水縮合反応に付しヒドラジド化合物（ＶＩ）とした後、環化することによって製造することができる。
第一工程の脱水縮合反応は常法により行うことができ、例えば、遊離カルボン酸と、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド（ＷＳＣＤ）等の縮合剤あるいは１，１′−カルボニルジイミダゾール等のカルボン酸の活性化剤を用いて、又は、カルボン酸の反応性誘導体（例えば、酸クロリド、酸ブロミド等の酸ハライド；酸アジド；メタノール、エタノール、ベンジルアルコール、置換していてもよいフェノール、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド等を用いて調製できる活性エステル；対称酸無水物；アルキル炭酸、ｐ−トルエンスルホン酸等との混合酸無水物等）を用いて容易に行うことができる。
反応は等モルあるいは一方を過剰量用いて、反応に不活性な有機溶媒、例えばピリジン、ＴＨＦ、塩化メチレン、ＤＭＦ、アセトニトリル等の溶媒中にて行われる。反応温度は反応性誘導体の種類によって適宜選択される。反応性誘導体の種類によっては、４−ジメチルアミノピリジン等の塩基を添加することが、反応を促進させる上で有利な場合がある。
第２工程の環化反応は、酢酸、ｐ−トルエンスルホン酸、塩酸等の酸の存在下、又は非存在下で、キシレン、エチレングリコール等の溶媒中、或いは無溶媒で反応させることにより行うことができる。この反応は室温乃至加熱還流下で行うことができる。
製法ｂ

原料化合物（ＩＸ）は、化合物（ＩＶ）とイソシアネート化合物（ＶＩＩ）とをアセトニトリル等の反応に不活性な溶媒中で縮合させ化合物（ＶＩＩＩ）を得た後、トリエチルアミン等の塩基の存在下、１，２−ジブロモ−１，１，２，２−テトラクロロエタン及びトリフェニルフォスフィンを加えて環化することにより製造することができる。反応は、常法により、室温乃至加熱還流下で適宜実施できる。
上記各製法により得られた反応生成物は、遊離化合物、その塩、水和物あるいは各種の溶媒和物として単離され精製される。塩は通常の造塩反応に付すことにより製造できる。単離、精製は、抽出、濃縮、留去、結晶化、濾過、再結晶、各種クロマトグラフィー等通常の化学操作を適用して行われる。各種異性体は異性体間の物理化学的な差を利用して常法により単離できる。例えば、光学異性体は一般的な光学分割法、例えば分別結晶化又はクロマトグラフィー等により分離できる。また、光学異性体は、適当な光学活性な原料化合物より合成することもできる。
次に、実施例により本発明を更に詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
実施例１：化合物（Ｉ）のアルカリフォスファターゼ（ＡＬＰ）活性
マウス由来骨芽細胞株ＭＣ３Ｔ３−Ｅ１を５％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ：ｆｅｔａｌ ｂｏｖｉｎｅ ｓｅｒｕｍ）含有α−最小必須培地（ＭＥＭ：ｍｉｎｉｍｕｍ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｍｅｄｉｕｍ）中で９６穴プレートに３０００ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌの濃度で播種し、４〜６時間培養した。接着した細胞に、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解した試験化合物を添加し（ＤＭＳＯ終濃度０．５％）、さらに３日間培養した。細胞をリン酸緩衝生理食塩水で洗浄後、基質を添加し、３７℃で１０−１５分間インキュベートした。０．５Ｍの水酸化ナトリウムを加えて反応を停止させ、４０５ｎｍ（参照波長４９２ｎｍ）の吸光度を測定し、対照群を１００％として、これに対する％値として、ＡＬＰ活性を算出した。なお、上記測定法はＬｏｗｒｙらの方法（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２０７巻、１９頁（１９５４年））を参考にして行った。
（結果）後記製造例２，６，１０，１９，２１，２２，２５，２６，３１，３２，３３，３６，３７，４０，４３，５２，６３，６５，７０，７３，７４，７９，８２，８３，８４，８５，９０，９１，９２，９３，９４，９８，１０１，１０５，１１２，１１４，１１５，及び１１６に示す、化合物（Ｉ）に包含される多くの化合物が、３００ｎＭの濃度において対照群に対して３００％以上のＡＬＰ活性を有していた。よって、本発明の化合物（Ｉ）はＡＬＰ活性を促進し良好な骨芽細胞分化促進活性を有することが確認された。
実施例２：骨粗鬆症モデル（ラットＯＶＸ）を用いた試験
＜骨粗鬆症モデルの作製＞
実験には１６週令の雌性ＳＤ系ラット（日本チャールスリバー）を用いた。麻酔下で両側の卵巣を露出し、偽手術（ｓｈａｍ）群を除く全ての群の卵巣を、結紮し摘出した。偽手術（ｓｈａｍ）群は卵巣を腹腔外へ露出する操作のみ行った。
上記モデルの作製はＫａｌｕらの方法（Ｂｏｎｅ Ｍｉｎｅｒ．，１５巻，１７５頁（１９９１年）），Ｆｒｏｓｔらの方法（Ｂｏｎｅ Ｍｉｎｅｒ．，１８巻，２２７頁（１９９２年））を参考にした。
＜試験１＞
１）試験方法
卵巣摘除術（ＯＶＸ）前に、ｐＱＣＴにて脛骨近位端より５ｍｍの骨密度を測定した。ＯＶＸ後８週間放置し、骨密度が有意に減少したことを確認した。各群の骨密度に有意差がないように群分け後、被験化合物を１２週間反復投与した。投与４週毎に骨密度を測定し、観察期間終了前日より２４時間尿を採取した。採尿終了後、エーテル麻酔下で失血死させ、検体を採取した。
（ａ） 大腿骨骨強度（３点曲げ試験）測定方法
骨幹部の骨強度を３点曲げ試験により測定した（ＴＫ−２５２ｃ，室町機械）。支点間距離２０ｍｍの支持台に大腿骨を静置し、骨幹中央部に１０ｍｍ／ｍｉｎの速度で曲げ負荷を加え、破断に至るまでの荷重−変位曲線を記録した。荷重歪み曲線の最大値を最大破断強度（ｆａｉｌｕｒｅ ｌｏａｄ）、その曲線の降伏点前の最大傾斜区間の傾きを曲げ剛性（ｓｔｉｆｆｎｅｓｓ）とした。
（ｂ）骨密度等，各種パラメーターの非侵襲的測定方法（ｐＱＣＴ）
末梢骨用定量的Ｘ線ＣＴ（ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｃｏｍｐｕｔｅｄ ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ，ｐＱＣＴ）装置（ＸＣＴ９６０Ａ，Ｎｏｒｌａｎｄ−Ｓｔｒａｔｅｃ）を用いて骨の断面形状を測定し、画像を解析することにより、骨密度等、各種パラメーターを算出した。
（ｃ）尿中デオキシピリジノリン値測定方法
骨代謝マーカーとしてリジルピリジノリン（以下デオキシピリジノリン）値の測定をＨＰＬＣ法（Ｕｅｂｅｌｈａｒｔ，Ｄら、Ｂｏｎｅ Ｍｉｎｅｒ．８巻，８７頁（１９９０年））により、エスアールエル・メディサーチで測定した。尿量による影響を排除するため、得られた尿中デオキシピリジノリン値を尿中クレアチニン濃度で除すか、２４時間尿量を乗ずることにより補正した。
２）被験化合物
本発明の非生体由来の非ペプチド性骨芽細胞分化促進剤として、化合物（Ｉ）の代表的化合物である製造例９３の化合物（６−（４−フルオロピペリジン−１−イル）−３−（６−メトキシピリジン−２−イル）−１，２，４−トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン：以下化合物Ａと略記する）を、ビスホスホネートとしてインカドロネート（ビスフォナール（登録商標）、山之内製薬製）をそれぞれ用いた。化合物Ａ若しくはインカドロネートの単独並びに副甲状腺ホルモンｈＰＴＨ（１−３４）を投与する群を比較群とした。また、薬剤非投与のＯＶＸ群と偽手術群（ｓｈａｍ）を対照群とした。化合物Ａは３０ｍｇ／５ｍｌ／ｋｇの０．５％メチルセルロース懸濁液として１日２回経口投与し、インカドロネートは１ｍｇ／２．５ｍｌ／ｋｇの水溶液として１日１回経口投与した。ｈＰＴＨ（１−３４）は３μｇ／１ｍｌ／ｋｇの生理食塩水溶液として１日１回皮下投与した。対照群は０．５％メチルセルロースを１日２回経口投与した。
各投与群の詳細を下表に示す。

３）結果
大腿骨骨強度（３点曲げ試験）の結果を図１，大腿骨皮質骨密度（ｐＱＣＴ）の結果を図２，大腿骨皮質骨幅（ｐＱＣＴ）の結果を図３に示す。更に，尿中のデオキシピリジノリン値（尿量補正）を図４に示す。
４）考察
骨芽細胞分化促進化合物である化合物Ａ、又はビスホスホネートであるインカドロネートの単独投与群（比較群１及び比較群２）の大腿骨の皮質骨密度・幅・強度に対する効果は、対照群１に比して骨密度・幅・強度を増加する傾向が見られるものの、その程度は十分なものでは無かった。一方、本発明の併用群は、大腿骨の皮質骨密度・幅・強度を、顕著に増加させ、その作用はＰＴＨ（比較群３）や偽手術（対照群２）に優るものであった（後記図１、図２及び図３参照）。
＜試験２＞
１）試験方法
卵巣摘除術（ＯＶＸ）前に、ｐＱＣＴにて脛骨近位端５ｍｍの骨幹端部の骨密度を測定した。ＯＶＸ８週間放置後、再測定により，骨密度が有意に減少したことを確認した。さらにｐＱＣＴにて脛骨近位端１５ｍｍの骨幹部の皮質骨幅を測定し，各群の骨密度・皮質骨幅に有意差がないように群分け後、被験化合物を４週間反復投与した。４週間投与後、前記と同様にして、脛骨骨幹部の皮質骨幅と密度を測定した。また、投与５週間後に，２４時間尿を採取し、ＥＩＡ法（オステオリンクス「ＤＰＤ」，住友製薬バイオメディカル（株））にて尿中デオキシピリジノリン値を測定した。
２）被験化合物
化合物Ａは３０ｍｇ／５ｍｌ／ｋｇの０．５％メチルセルロース懸濁液として１日２回経口投与し、アレンドロネートは３ｍｇ／２．５ｍｌ／ｋｇの水溶液として１日１回経口投与した。対照群は０．５％メチルセルロースを１日２回，水を１日１回経口投与した。
各投与群の詳細を下表に示す。

３）結果
脛骨皮質骨幅（ｐＱＣＴ）を図５に，脛骨皮質骨密度（ｐＱＣＴ）を図６に，及び尿中のデオキシピリジノリン値（尿量補正）を図７に示す。
４）考察
本発明の併用群は、わずか４週間の投与において、脛骨の皮質骨幅を有意に増加させ、比較群１及び２に比して良好に骨量を増大させることが示された。
本発明の併用投与群における、大腿骨若しくは脛骨の皮質骨密度・幅・強度に対する顕著な効果は、各単独投与群（比較群１及び比較群２）の相加的効果をはるかに超えたものであった。これは、非生体由来の非ペプチド性骨芽細胞分化促進化合物の骨代謝回転亢進作用と、ビスホスホネートの骨吸収抑制作用が相乗的に働くことによって、骨代謝全体が良好にコントロールされ、骨量及び骨強度が相乗的あるいは相加以上に増大したものと推察された。ビスホスホネートやＰＴＨを用いた現行治療法では、臨床上重篤な大腿骨頸部（皮質骨）骨折に対する予防効果は十分ではないと言われており、特に皮質骨の強度を顕著に増加できる本発明併用剤は臨床上非常に有用と考えられる。
ｉｎ ｖｉｔｒｏで良好な骨芽細胞分化促進作用を有する化合物Ａは，その単独投与において、骨吸収の指標である尿中デオキシピリジノリン値を上昇させたこと（図４並びに図７参照）から、骨吸収活性をも増加させたと推察される。即ち、骨芽細胞分化促進化合物は骨形成を亢進させると同時に、骨吸収も亢進させ、骨代謝回転全体を亢進させるため、結果として骨量及び／又は骨強度の増強作用は十分ではなかったと推察された。一方、本発明の併用投与群では、その尿中デオキシピリジノリン値の低下（図４並びに図７参照）より骨吸収の亢進が抑えられていると推察され、ビスホスホネートが骨芽細胞分化促進化合物の骨形成亢進作用を阻害することなく、その骨吸収亢進のみ抑制した結果、上記の顕著な相乗効果がもたらされたものと考えられた。
実施例３：化合物（Ｉ）の製造例
以下、化合物（Ｉ）の具体的な製造例と原料化合物の製造例である参考例を以下に示す。なお、文中の略号は、Ｄａｔ：物理化学的性状、Ｆ：ＦＡＢ−ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）^＋を示し、その他の略号は前記の通りである。
参考例１：（６−クロロピリダジン−３−イル）ヒドラジン、４−ニトロ安息香酸、ＷＳＣＤ塩酸塩及びＴＨＦの混合物を室温で２時間攪拌した。反応液に水を加え、析出した沈殿物を濾取し、水及びジエチルエーテルで洗浄し、Ｎ’−（６−クロロピリダジン−３−イル）−４−ニトロベンゾヒドラジドを得た。これに酢酸を加え、１１０℃で２時間攪拌した後、反応液を減圧下で濃縮し、得られた粗結晶をエタノールで洗浄し、６−クロロ−３−（４−ニトロフェニル）−１，２，４−トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジンを得た。Ｄａｔ（Ｆ：２７６）
参考例２：（６−クロロピリダジン−３−イル）ヒドラジンとトリエチルアミンのＴＨＦ溶液に、氷冷下で３−シアノベンゾイルクロリドを加え、室温で１時間攪拌した。反応液に水を加え、析出した沈殿物を濾取し、水及びジエチルエーテルで洗浄し、Ｎ’−（６−クロロピリダジン−３−イル）−３−シアノベンゾヒドラジドを得た。これに酢酸を加え、１１０℃で２時間攪拌した後、反応液を減圧下濃縮し、得られた粗結晶をエタノールで洗浄し、３−（６−クロロ−１，２，４−トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン−３−イル）ベンゾニトリルを得た。Ｄａｔ（Ｆ：２５６）
参考例３：（６−クロロピリダジン−３−イル）ヒドラジン、３−ジメチルアミノ安息香酸、ＷＳＣＤ塩酸塩及びＴＨＦの混合物を室温で２時間攪拌した。反応液に水を加え、析出した沈殿物を濾取し、水及びジイソプロピルエーテルで洗浄し、Ｎ’−（６−クロロピリダジン−３−イル）−３−ジメチルアミノベンゾヒドラジドを得た。これにエチレングリコールを加え、１６０℃で４時間攪拌した。室温にまで放冷した後、常法により精製して、６−クロロ−３−（３−ジメチルアミノフェニル）−１，２，４−トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジンを得た。Ｄａｔ（Ｆ：２７４）
参考例４：３−メトキシフェニルイソシアネートと３−クロロ−６−ヒドラジノピリダジンのアセトニトリル溶液を室温で３０分間攪拌した後、１，２−ジブロモ−１，１，２，２−テトラクロロエタンを加え、更に室温で２時間攪拌した。この反応溶液に氷冷下トリエチルアミンとトリフェニルホスフィンを加え、室温で３日間攪拌した後、反応溶液を減圧下濃縮し、常法により精製して、６−クロロ−Ｎ−（３−メトキシフェニル）−１，２，４−トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン−３−アミンを得た。Ｄａｔ（Ｆ：２７６）
参考例１と同様にして、後記表３〜４に示される参考例５〜５０の化合物を得た。
製造例１：３−（６−クロロ−１，２，４−トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン−３−イル）ベンゾニトリル（４５０ｍｇ）及びピペリジン（５ｍｌ）の混合物を、加熱還流下２時間攪拌した。反応液を減圧下で濃縮し、得られた残渣をクロロホルムで抽出した。抽出液を飽和塩化アンモニウム水溶液と飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下濃縮した。得られた粗結晶をエタノールから再結晶し、３−［６−（ピペリジン−１−イル）−１，２，４−トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン−３−イル］ベンゾニトリル（４３５ｍｇ）を微黄色結晶として得た。
製造例２：Ｎ−シクロペンチル−３−（３−メトキシフェニル）−１，２，４−トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン−６−アミン（３００ｍｇ）のＤＭＦ（５ｍｌ）溶液に氷冷下６０％水素化ナトリウム（４４ｍｇ）を加え、氷冷から室温で１時間攪拌した後、ヨウ化メチル（６８μｌ）を加え、さらに２時間攪拌した。反応混合物に水を加えた後、酢酸エチルで抽出した。抽出液を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下で濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出液；クロロホルム：メタノール＝２０：１）で精製した後、酢酸エチルから再結晶し、Ｎ−シクロペンチル−３−（３−メトキシフェニル）−Ｎ−メチル−１，２，４−トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン−６−イルアミン（１４５ｍｇ）を淡黄色結晶として得た。
製造例３：水酸化カリウム（９８ｍｇ）とＤＭＳＯ（５ｍｌ）の混合物に６−アゼパン−１−イル−３−（１Ｈ−インドール−２−イル）−１，２，４−トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン（５０１ｍｇ）を加え、室温にて３０分攪拌した後、ヨウ化メチル（０．１５ｍｌ）を加え、さらに２時間室温にて攪拌した。反応液に水を加え、析出した固体を濾取し、水−メタノール混合溶媒で洗浄後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出液；クロロホルム：メタノール＝９９：１）で精製した。得られた粗結晶をエタノールから再結晶し、６−アゼパン−１−イル−３−（１−メチルインドール−２−イル）−１，２，４−トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン（４０ｍｇ）を無色結晶として得た。
製造例４：３−［６−（ピペリジン−１−イル）−１，２，４−トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン−３−イル］アニリン（１８０ｍｇ）と無水酢酸（３ｍｌ）の混合物を室温で６時間攪拌した。反応液を減圧下で濃縮し、得られた粗結晶をジエチルエーテルで洗浄することにより、３’−［６−（ピペリジン−１−イル）−１，２，４−トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン−３−イル］アセトアニリド（１９０ｍｇ）を無色結晶として得た。
製造例５：６−ピペリジン−１−イル−３−ピペリジン−３−イル−１，２，４−トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン（６７０ｍｇ）、トリエチルアミン（３６０ｍｇ）及び塩化メチレン（１５ｍｌ）の混合溶液にメタンスルホニルクロリド（３２０ｍｇ）を加え、室温で８時間攪拌した。反応液を減圧下で濃縮し、得られた残渣を酢酸エチルで抽出した。抽出液を水と飽和食塩水で順次洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下濃縮した。得られた粗結晶をエタノールから再結晶し、３−（１−メタンスルホニルピペリジン−３−イル）−６−ピペリジン−１−イル−１，２，４−トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン（２３０ｍｇ）を無色結晶として得た。
製造例６：６−アゾカン−１−イル−３−（６−クロロピリジン−２−イル）−１，２，４−トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン（３６０ｍｇ）、ナトリウムメトキシド（５７０ｍｇ）及びトルエン（２０ｍｌ）の混合物を加熱還流下３時間攪拌した。室温にまで放冷後、反応液を減圧下で濃縮し、得られた残渣を酢酸エチルで抽出した。抽出液を水及び飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下濃縮した。得られた粗結晶をジエチルエーテルで洗浄し、６−アゾカン−１−イル−３−（６−メトキシピリジン−２−イル）−１，２，４−トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン（２９０ｍｇ）を淡黄色結晶として得た。
製造例７：３−［６−（ピペリジン−１−イル）−１，２，４−トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン−３−イル］安息香酸（４３０ｍｇ）、触媒量のＤＭＦ及びＴＨＦ（１０ｍｌ）の混合溶液に、氷冷下で塩化オキザリル（０．４４ｍｌ）を加え、室温で２時間攪拌した後、氷冷下でアンモニアガスを１５分間通じた。反応液を減圧下濃縮し、得られた残渣にクロロホルム−メタノール（１０：１）を加え、不溶物を濾去した。濾液を減圧下濃縮し、得られた粗結晶をエタノールから再結晶し、３−［６−（ピペリジン−１−イル）−１，２，４−トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン−３−イル］ベンズアミド（２４２ｍｇ）を微褐色結晶として得た。
製造例８：３−［３−（メチルスルファニル）フェニル］−６−ピペリジン−１−イル−１，２，４−トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン（５５０ｍｇ）の塩化メチレン（３０ｍｌ）溶液に、室温で３−クロロ過安息香酸（１．２５ｇ）を加えて１３時間攪拌した。反応液に水を加え、塩化メチレンで希釈した。有機層を水、１Ｍ水酸化ナトリウム水溶液及び飽和食塩水で順次洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出液；クロロホルム：メタノール＝９８：２）で精製した後、エタノールで洗浄し、３−［３−（メチルスルホニル）フェニル］−６−ピペリジン−１−イル−１，２，４−トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン（２５０ｍｇ）を無色結晶として得た。
製造例９：濃硫酸（１．５ｍｌ）及び水（３ｍｌ）の混合液を−５℃に冷却し、４−（６−ピペリジン−１−イル−１，２，４−トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン−３−イル）−１，３−チアゾール−２−アミン（０．９０ｇ）、硫酸銅（ＩＩ）（１．５０ｇ）臭化ナトリウム（０．６２ｇ）を順次加え０℃にて５分間攪拌した後、亜硝酸ナトリウム（０．２５ｇ）の水溶液（１．６ｍｌ）を滴下し、室温にて終夜攪拌した。反応液に水、クロロホルム及び２−プロパノールを加え、不溶物を濾去した。得られた有機層を水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出液；クロロホルム：メタノール＝２０：１）で精製し、得られた粗結晶をエタノール−ジエチルエーテルから再結晶することにより、３−（２−ブロモ−１，３−チアゾール−４−イル）−６−ピペリジン−１−イル−１，２，４−トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン（７５ｍｇ）を淡黄色結晶として得た。
製造例１０：６−（６−アゼパン−１−イル−１，２，４−トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン−３−イル）ピリジン−２−オール（７００ｍｇ）及び三臭化リン（７ｍｌ）の混合物を１３０℃で６時間攪拌した。室温にまで放冷し、氷水を加え、飽和炭酸カリウム水溶液で中和した後、クロロホルムで抽出した。抽出液を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液及び飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出液；クロロホルム：メタノール＝９８：２）で精製した後、エタノールから再結晶し、６−アゼパン−１−イル−３−（６−ブロモピリジン−２−イル）−１，２，４−トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン（２４０ｍｇ）を無色結晶として得た。
製造例１１：ジエチル［（６−アゼパン−１−イル−１，２，４−トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン−３−イル）メチル］ホスホネート（３６７ｍｇ）のＴＨＦ（１０ｍｌ）溶液に、氷冷下カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（１２７ｍｇ）を加え、室温にて４０分間攪拌した。得られた赤色溶液に２−ブロモベンズアルデヒド（０．１２８ｍｌ）を加え、室温にて更に１時間攪拌した。反応液に水を加え、酢酸エチルで抽出した。抽出液を水及び飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下濃縮した。得られた白色固体をメタノールから再結晶し、６−アゼパン−１−イル−３−［（Ｅ）−２−（２−ブロモフェニル）ビニル］−１，２，４−トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン（１５２ｍｇ）を無色結晶として得た。
製造例１２：エチル ６−クロロ−１，２，４−トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン−３−カルボキシレート（３．００ｇ）及びヘキサメチレンイミン（１０ｍｌ）の混合物を１００℃にて２時間攪拌した。反応液を減圧下濃縮した後、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出液；クロロホルム：メタノール＝３０：１）で精製し、得られた粗結晶をエタノール及びジエチルエーテルから再結晶することにより、３−（アゼパン−１−イルカルボニル）−６−アゼパン−１−イル−１，２，４−トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン（０．２３ｇ）を無色結晶として得た。
製造例１３：１−［（ベンジルオキシ）カルボニル］ピペリジン−３−カルボン酸（２．４４ｇ）、３−クロロ−６−ヒドラジノピリダジン（１．３４ｇ）、ＷＳＣＤ塩酸塩（２．１３ｇ）及び塩化メチレン（６０ｍｌ）の混合物を室温で１６時間攪拌した。反応溶液を減圧下濃縮し、酢酸エチルで抽出した。抽出液を水と飽和食塩水で順次洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下濃縮した。得られた残渣に酢酸（８０ｍｌ）を加え、１１０℃で２日間攪拌後、溶媒を減圧下留去した。得られた粗結晶をエタノールで洗浄し、ピペリジン（１０ｍｌ）中、加熱還流下で３時間攪拌した。反応溶液を減圧下濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出液：クロロホルム：メタノール＝９７：３）で精製した。得られた無色固体にエタノール（４０ｍｌ）と１０％パラジウム−炭素（１５０ｍｇ）を加え、水素雰囲気下室温で６時間攪拌した後、触媒を濾去した。得られた濾液を減圧下濃縮することにより、６−ピペリジン−１−イル−３−ピペリジン−３−イル−１，２，４−トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン（１．１８ｇ）を無色非晶性物質として得た。
製造例１４：エチル ２−アミノチアゾール−４−カルボキシレート（４．５６ｇ）のＴＨＦ溶液（２００ｍｌ）に１Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（３０ｍｌ）を加え、室温で３時間攪拌した。反応液に１Ｍ塩酸（３０ｍｌ）を加え、濃縮した後、得られた残渣をＤＭＦ（５０ｍｌ）に溶解し、これに６−クロロピリダジン−３−イルヒドラジン（３．８３ｇ）及びＷＳＣＤ塩酸塩（６．０９ｇ）を加え、室温にて攪拌した。反応液に水を加え、析出した沈殿物を濾取し、水及びジエチルエーテルで洗浄し、これに酢酸（３０ｍｌ）を加え、加熱還流した後、反応液を減圧下濃縮した。残さに飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を水、及び飽和食塩水で洗浄し、次いで無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下濃縮した。これにピペリジン（１０ｍｌ）を加え、１００℃で加熱し、反応液を減圧下濃縮した後、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出液；クロロホルム：メタノール＝３０：１）により精製し、３−（２−アミノチアゾール−４−イル）−６−（ピペリジン−１−イル）−１，２，４−トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン（０．９２ｇ）を黄色固体として得た。
製造例１５：６−ヒドラジノ−Ｎ−メチル−Ｎ−フェニルピリダジン−３−アミン（１．１４ｇ）の塩化メチレン溶液（１０ｍｌ）に６−クロロピコリン酸（０．８３ｇ）及びＷＳＣＤ塩酸塩（１．２２ｇ）を加え、室温にて終夜攪拌した。反応液をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出液；クロロホルム）により精製し、６−クロロ−Ｎ’−｛６−［メチル（フェニル）アミノ］ピリダジン−３−イル｝ピリジン−２−カルボヒドラジド（０．５７ｇ）を得た。本化合物（０．５６ｇ）をキシレン（２０ｍｌ）中、１５０℃で終夜攪拌し、反応液を濃縮し、３−（６−クロロピリジン−２−イル）−Ｎ−メチル−Ｎ−フェニル−１，２，４−トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン−６−アミン（０．５４ｇ）を無色固体として得た。
製造例１６：６−クロロ−３−（６−クロロピリジン−２−イル）−１，２，４−トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン（６２０ｍｇ）、ヘプタメチレンイミン（１．３２ｇ）及び１，４−ジオキサン（２０ｍｌ）の混合物を１００℃で９時間攪拌した。室温にまで放冷後、反応溶液を減圧下濃縮し、得られた残渣を酢酸エチルで抽出した。抽出液を５％クエン酸水溶液、水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液及び飽和食塩水で順次洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下濃縮した。得られた粗結晶をエタノールから再結晶し、６−アゾカン−１−イル−３−（６−クロロピリジン−２−イル）−１，２，４−トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン（３７０ｍｇ）を灰白色結晶として得た。
製造例１７：６−（６−クロロ−１，２，４−トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン−３−イル）ピリジン−２−オール（９６０ｍｇ）とピペリジン（１０ｍｌ）の混合物を１００℃で３時間攪拌した。室温にまで放冷後、反応溶液を減圧下濃縮し、得られた結晶性残渣をエタノールで再結晶することにより、６−（６−ピペリジン−１−イル−１，２，４−トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン−３−イル）ピリジン−２−オール（８２０ｍｇ）を灰白色結晶として得た。
製造例１と同様に処理し、所望により４Ｍ塩化水素−酢酸エチルを用いた常法の造塩反応に付して、後記表６〜１２に示される製造例１８〜１０５の化合物を得た。また、製造例２と同様にして後記表１２の製造例１０６の化合物を、製造例３と同様にして１０７の化合物を、製造例４と同様にして製造例１０８及び１０９の化合物を、製造例６と同様にして後記表１２〜１３の製造例１１０〜１１２の化合物を、製造例８と同様にして製造例１１３の化合物を、製造例１０と同様にして製造例１１４〜１１６の化合物を、製造例１１と同様にして製造例１１７及び１１８の化合物を、製造例１６と同様にして製造例１１９の化合物を、及び製造例１７と同様にして製造例１２０〜１２１の化合物を、それぞれ得た。
後記表３〜４に参考例化合物の構造式と物理化学的性状を、表５〜１３に製造例化合物の構造式と物理化学的性状をそれぞれ示す。また、表１４に示される化合物は、適当な原料化合物を用いて、前記製造例若しくは製造法に記載の方法とほぼ同様にして、又は、それらに当業者に自明の若干の変法を適用して、容易に製造される化合物（Ｉ）の例である。
表中の略号は、Ｒｅｘ：参考例番号； Ｅｘ：製造例番号； Ｄａｔ：物理化学的性状（Ｆ：ＦＡＢ−ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）^＋； Ｍ：融点［℃］； （ｄ）：分解； Ｎ１：ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６，ＴＭＳ内部標準）の特徴的ピークδｐｐｍ）；Ｓａｌ：塩（空欄：フリー体； ＨＣｌ：塩酸塩； ２ＨＣｌ：二塩酸塩）； Ｍｅ：メチル； Ｅｔ：エチル；及び Ａｃ：アセチルを、それぞれ示す。

実施例４：処方例
（カプセル剤） １０００カプセル
アレンドロネート ５．０ｇ
化合物Ａ ３０．０ｇ
乳糖 １１５．０ｇ
トウモロコシデンプン ４０．０ｇ
ポリビニルピロリドンＫ３０ ４．０ｇ
タルク ５．４ｇ
ステアリン酸マグネシウム ０．６ｇ
２００．０ｇ
アレンドロネートを乳糖３５．０ｇ及びトウモロコシデンプン５ｇと混合し、ポリビニルピロリドンＫ３０（１．０ｇ）糊液を用いて練合後、２０メッシュの篩を通して造粒し、５０℃で２時間乾燥した後、２４メッシュの篩を通す。化合物Ａを残りの乳糖、トウモロコシデンプン及びポリビニルピロリドンＫ３０糊液を用いて同様に造粒する。両粒子とタルクおよびステアリン酸マグネシウムを混合し、硬カプセルに２００ｍｇずつ充填してカプセル剤を製する。
実施例５：キット
（１）週１回投与用のアレンドロネート３５ｍｇ錠 １錠と、１日１回投与用の化合物Ａ１００ｍｇ錠 ７錠を収納したＰＴＰ包装を含むキット
（２）１日１回投与用のミノドロネート１ｍｇ錠 １錠と、１日２回投与用の化合物Ａ３０ｍｇ錠 ２錠を収納し、各錠剤収納箇所に近い部分にそれぞれの服用時間を示す表示を有するＰＴＰ包装を含むキット

本発明の非生体由来の非ペプチド性骨芽細胞分化促進化合物と骨吸収抑制作用を有するビスホスホネートを含有する医薬組成物若しくは組合せ物は、骨代謝をコントロールして骨量及び／又は骨強度を増加させる骨量増加誘導剤として有用である。
具体的には、骨量及び／又は骨強度の減少を伴う、骨粗鬆症、線維性骨炎（副甲状腺機能亢進症）、骨軟化症、ページェット病等の代謝性骨疾患の予防若しくは治療剤；骨折、再骨折、骨欠損、変形性骨関節症、多発性骨髄腫、癌の骨転移等の骨組織損傷における骨組織修復剤；更に歯科領域における歯周病治療剤、歯周組織欠損の修復剤、人工歯根の安定化剤、顎堤形成促進剤等として有用である。特に、骨粗鬆症等の代謝性骨疾患の予防若しくは治療剤、中でも骨形成能が低下した老人性骨粗鬆症の予防若しくは治療剤として期待される。
ビスホスホネートやＰＴＨを用いた現行治療法では、臨床上重篤な大腿骨頸部（皮質骨）骨折に対する予防効果は十分ではないと言われており、前記実施例２に示すように、特に皮質骨の骨量及び／又は強度を顕著に増加できる本発明の医薬組成物若しくは組合せ物は、臨床上非常に有用である。
また、本発明の非生体由来の非ペプチド性骨芽細胞分化促進化合物を有効成分とするビスホスホネートの骨量増加作用増強剤は、ビスホスホネートの長期投与による低骨代謝回転状態において懸念される、ｏｌｄ ｂｏｎｅ蓄積による微細骨構造の脆弱化や過度のミネラル化、骨折治癒（修復）過程の遅延の予防剤としても有用である。

Claims (20)

1. 第一成分として非生体由来の非ペプチド性骨芽細胞分化促進化合物、及び第二成分としてビスホスホネートを含有して成る骨量増加誘導剤である医薬組成物。
2. 第一成分が下記一般式（Ｉ）で示される含窒素複素環化合物又はその塩である請求の範囲１記載の医薬組成物。
   

   

   （式中の記号は以下の意味を有する。
   Ｒａ及びＲｂ：同一又は異なって、Ｈ；ＣＯ−低級アルキル；ＳＯ_２−低級アルキル；置換基を有していてもよいシクロアルキル；置換基を有していてもよいアリール；又は、置換基を有していてもよいシクロアルキル、置換基を有していてもよいアリール、置換基を有していてもよい４乃至８員の単環飽和若しくは一部不飽和ヘテロ環、ＣＯ−低級アルキル、ＳＯ_２−低級アルキル、ＯＲ^１、ＳＲ^１、ＮＲ^１Ｒ^２、ハロゲン、ＮＯ_２、ＣＮ、及びＣＯＯＲ^１からなる群から選択される１〜３個の置換基を有していてもよい低級アルキル；但し、Ｒａ及びＲｂの少なくとも一方はＨ以外の基を示す、
   又は、ＲａとＲｂは隣接するＮ原子と一体となって、ヘテロ原子としてＮ原子を１〜２個含有する４乃至８員飽和若しくは一部不飽和ヘテロ環を形成し、該ヘテロ環は、ベンゼン環若しくはシクロアルキル環と縮合していてもよく、架橋を有していてもよく又はスピロ環を形成してもよい、更に、該ヘテロ環は１〜５個の置換基を有していてもよい、
   Ｅ：単結合、Ｃ_１−３アルキレン、ビニレン（−ＣＨ＝ＣＨ−）、エチニレン（−Ｃ≡Ｃ−）、ＣＯ、ＮＲ^３、ＣＨ_２−Ｊ、ＣＯＮＲ^４又はＮＲ^５ＣＯ、
   Ｊ：Ｏ、Ｓ、ＮＲ^６、ＣＯ、ＳＯ又はＳＯ_２、
   Ｒ：置換基を有していてもよいアリール、置換基を有していてもよいヘテロアリール、置換基を有していてもよいシクロアルキル、置換基を有していてもよいシクロアルケニル又は置換基を有していてもよい４乃至８員の単環飽和若しくは一部不飽和ヘテロ環、
   Ｒ^１〜Ｒ^６：同一又は異なって、Ｈ又は低級アルキル
   但し、以下の化合物を除く。
   （１）ＲａとＲｂが隣接するＮ原子と一体となってピペリジノを形成し、Ｅが単結合、且つ、Ｒがピペリジノ、未置換フェニル、ｐ−（トリフルオロメチル）フェニル、ｐ−クロロフェニル又はｏ−ニトロフェニルである化合物、
   （２）ＲａとＲｂが隣接するＮ原子と一体となって、４−メチル−１−ピペラジニルを形成し、Ｅが単結合、且つ、Ｒが未置換フェニル、ｐ−メチルフェニル、ｍ−メチルフェニル、ｐ−メトキシフェニル、ｍ−クロロフェニル、ｐ−クロロフェニル又はｍ−ニトロフェニルである化合物、
   （３）Ｒが置換基を有していてもよいイミダゾリル、５−ニトロ−２−フリル又は５−ニトロ−２−チエニルである化合物、
   （４）ＲａがＨ、Ｒｂがシクロプロピル、Ｅが単結合、且つ、Ｒがｐ−（トリフルオロメチル）フェニルである化合物、及び
   （５）Ｒａがメチル、Ｒｂが２−ヒドロキシ−プロピル、Ｅが単結合、且つ、Ｒが３−ピリジルである化合物。）
3. 第一成分が６−アゾカン−１−イル−３−（６−メトキシピリジン−２−イル）−１，２，４−トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン、６−アゼパン−１−イル−３−（６−ブロモピリジン−２−イル）−１，２，４−トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン、３−（３−メトキシフェニル）−６−（ピペリジン−１−イル）−１，２，４−トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン、３−（３−ブロモフェニル）−６−（ピペリジン−１−イル）−１，２，４−トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン、６−アゼパン−１−イル−３−（６−メトキシピリジン−２−イル）−１，２，４−トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン、６−（４−フルオロピペリジン−１−イル）−３−（６−メトキシピリジン−２−イル）−１，２，４−トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン、６−（３−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−３−イル）−３−（６−メトキシピリジン−２−イル）−１，２，４−トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン、６−（４，４−ジフルオロピペリジン−１−イル）−３−（６−メトキシピリジン−２−イル）−１，２，４−トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン、６−（３，３−ジフルオロピペリジン−１−イル）−３−（６−メトキシピリジン−２−イル）−１，２，４−トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン、６−アゾカン−１−イル−３−（６−ブロモピリジン−２−イル）−１，２，４−トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン、及び６−（８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−８−イル）−３−（６−ブロモピリジン−２−イル）−１，２，４−トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジンから選択される含窒素複素環化合物又はその塩である請求の範囲２記載の医薬組成物。
4. 第二成分が、アレンドロネート、リセドロネート、パミドロネート、インカドロネート、ミノドロネート、イバンドロネート及びゾレドロネートから選択されるビスホスホネートである請求の範囲２記載の医薬組成物。
5. 骨量増加誘導剤が代謝性骨疾患の予防若しくは治療剤である請求の範囲１〜４のいずれか１項記載の医薬組成物。
6. 骨量増加誘導剤が骨代謝回転低下型（ＩＩ型）骨粗鬆症の予防若しくは治療剤である請求の範囲１〜４のいずれか１項記載の医薬組成物。
7. 第一製剤として非生体由来の非ペプチド性骨芽細胞分化促進化合物を含有する製剤、及び第二製剤としてビスホスホネートを含有する製剤の２種の製剤からなる骨量増加誘導剤である組み合わせ物であって、該第一及び第二製剤は同時にもしくは別々に投与されるものである組み合わせ物。
8. 第一製剤が請求の範囲２の一般式（Ｉ）で示される含窒素複素環化合物又はその塩を含有する製剤である請求の範囲５記載の組み合わせ物。
9. 第一製剤として非生体由来の非ペプチド性骨芽細胞分化促進化合物を含有する製剤、及び第二製剤としてビスホスホネートを含有する製剤の少なくとも２種の製剤を含むキットである請求の範囲７若しくは８記載の組み合わせ物。
10. ビスホスホネートを有効成分とする、非生体由来の非ペプチド性骨芽細胞分化促進化合物の骨量増加作用増強剤。
11. 請求の範囲２の一般式（Ｉ）で示される含窒素複素環化合物又はその塩の骨量増加作用増強剤である請求の範囲１０記載の剤。
12. 非生体由来の非ペプチド性骨芽細胞分化促進化合物を有効成分とする、ビスホスホネートの骨量増加作用増強剤。
13. 請求の範囲２の一般式（Ｉ）で示される含窒素複素環化合物又はその塩を有効成分とするビスホスホネートの骨量増加作用増強剤である請求の範囲１２記載の剤。
14. 非生体由来の非ペプチド性骨芽細胞分化促進化合物及びビスホスホネートの、骨量増加誘導剤である医薬を製造するための使用。
15. 非生体由来の非ペプチド性骨芽細胞分化促進化合物の、ビスホスホネートと併用して骨量の増加を誘導する医薬を製造するための使用。
16. ビスホスホネートの、非生体由来の非ペプチド性骨芽細胞分化促進化合物の骨量増加作用を増強する医薬を製造するための使用。
17. 患者の骨量及び／又は骨強度の減少を伴う代謝性骨疾患の予防若しくは治療方法であって、有効量の非生体由来の非ペプチド性骨芽細胞分化促進化合物と、有効量のビスホスホネートを、同時に若しくは別々に投与することからなる方法。
18. 患者の骨量及び／又は骨強度の減少を伴う代謝性骨疾患が骨代謝回転低下型（ＩＩ型）骨粗鬆症である請求の範囲１７記載の方法。
19. 骨量及び／又は骨強度の増加を必要とする患者に、有効量の非生体由来の非ペプチド性骨芽細胞分化促進化合物及び有効量のビスホスホネートを、同時に若しくは別々に投与することからなる、患者の骨量増加誘導方法。
20. 非生体由来の非ペプチド性骨芽細胞分化促進化合物が請求の範囲２の一般式（Ｉ）で示される含窒素複素環化合物又はその塩である請求の範囲１７〜１９のいずれか１項記載の方法。

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