JPWO2004020633A1 - ヒト抗ヒトインターロイキン−6抗体及び該抗体フラグメント - Google Patents
ヒト抗ヒトインターロイキン−6抗体及び該抗体フラグメント Download PDFInfo
- Publication number
- JPWO2004020633A1 JPWO2004020633A1 JP2004532751A JP2004532751A JPWO2004020633A1 JP WO2004020633 A1 JPWO2004020633 A1 JP WO2004020633A1 JP 2004532751 A JP2004532751 A JP 2004532751A JP 2004532751 A JP2004532751 A JP 2004532751A JP WO2004020633 A1 JPWO2004020633 A1 JP WO2004020633A1
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- human
- antibody
- chain
- gene fragment
- gene
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
- C07K16/244—Interleukins [IL]
- C07K16/248—IL-6
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/005—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies constructed by phage libraries
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
- C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Description
とりわけ、IL−6が関与する疾患の中で慢性関節リウマチ(Rheumatoid arthritis;RA)は日本全国で約70万人が罹患し、近年漸増の傾向にあり、患者の高齢化も進み社会問題となりつつある(Ogata A.ら、臨床病理1999 Apr;47(4):321−326[Advances in interleukin−6 therapy])。
慢性関節リウマチの原因は不明であるが、関節腔内で起こった自己免疫反応が持続し慢性化した自己免疫疾患であり、難治性特定疾患に指定されている。これまでIL−6との関連性について調べられ、患者の関節液中に多量に存在し、炎症惹起だけでなく、滑膜繊維芽細胞の増殖にも関わっていることが明らかにされている。また自己抗体の産生を促している可能性も考えられる(Nishimoto N.ら、Clinical application of interleukin−6 receptor antibody.,日本免疫学会誌1997;20:87−94)。
したがって、IL−6の生物活性を阻害するような抗IL−6抗体を作れば、RAを含めた幾つかの免疫異常性疾患の対症療法的治療薬になる可能性があり、実際に検討が進められている(Mihara M.ら、Br.J.Rheumatol.1995 Apr;34(4):321−325;Mihara M.ら、Clin.Immunol.2001,98:319−326)。
RAでは患者の症状の進行状況に応じて、非ステロイド系消炎鎮痛剤、ステロイド剤、免疫抑制剤、代謝阻害剤等の薬剤療法や人工関節などの外科的療法など多種多様な治療法が疾患のステージに応じて施される。しかしながらこれらはいずれもRAを根治するような治療法ではなく、長期使用や大量使用による副作用の問題も存在している。IL−6は炎症拡大という役割を果たしているため、患者が感じる苦痛の大きな原因となっており、IL−6の活性を阻害することにより苦痛が軽減出来る可能性が指摘されていた。そのための候補としてヒト型化抗IL−6抗体が検討の対象として使われてきた(Montero−Julian F.A.ら、Blood 1995 Feb 15;85(4):917−24;Monier S.ら、Clin.Exp.Rheumatol.1994 Nov−Dec;12(6):595−602;Wendling D.ら、J.Rheumatol.1993 Feb;20(2):259−62)。一方で、IL−6はミエローマ細胞の増殖因子としての活性を有しており(前述:免疫学辞典第1版、49頁、1993)、このためIL−6と高親和力で結合する抗体を産生するハイブリドーマが得られても、産生された抗体によって培地中のIL−6が中和されてしまい増殖できなくなるので、結果的に高親和性の抗IL−6抗体は得られにくいという問題もあった。佐藤らが報告しているマウス由来抗ヒトIL−6抗体は11nMの高親和性を示したが、解離速度が3×10−2secと速いものしか得られていない(Sato K.ら、Hum.Antibodies Hybridomas 1996;7(4):175−83)。この様な従来の方法で得られた解離速度の速い抗体を用いてIL−6の活性を阻害するためには高濃度を維持する必要があった。ましてや完全ヒト抗体でそのような活性を持つ抗体は知られていない。
またヒト型化抗体では、完全ヒト抗体と異なり、投与された患者では抗IL−6抗体の活性を阻害するような抗体(阻止抗体)が作り出される可能性も否定できなかった。
(その解決方法)
そこで、本発明では、ファージ抗体法を用いて、スクリーニング系を工夫することにより完全ヒト抗ヒトIL−6一本鎖Fv(scFv)分子を取得し、その抗体のVH鎖及びVL鎖を明らかにした。さらに、その性状を解析し、当該scFvが、ヒトIL−6に対して従来得られていた各種動物由来の抗体よりも特に解離速度が遅く(10−3secオーダー、従来より約40倍解離速度が遅い)、かつ従来の抗体と同程度以上の高い親和性を有すること、またIL−6依存性細胞株の増殖を濃度依存的に抑制することを明らかにした。
(従来技術より有効な効果)
このような完全にヒト由来でかつ高親和性の抗体を用いることにより、キメラ抗体やヒト型化抗体に比べて低い抗体濃度で治療効果を発揮でき、従ってこの抗体に対する抗イディオタイプ抗体の産生も極めて低く抑えることが可能になり、抗IL−6アンタゴニストとして、IL−6依存性の白血病や慢性関節リウマチなどの自己免疫疾患の治療薬として優れた治療効果を有する抗ヒトIL−6抗体薬を提供することができると期待される。また副作用が少なく活性が強い、急性の炎症の治療薬としての利用も期待できる。
図2は、BIA COREにより測定したIL6gk3−2scFvのIL−6との結合親和力を測定した結果を示すグラフである。
図3は、IL−6依存性細胞株KT−3のIL−6依存性の増殖応答をIL6gk3−2scFvが抑制した結果を示すグラフである。
このscFv DNAをファージミドベクターpCANTAB5Eに組込み、109クローンからなる健常者由来scFv提示ファージライブラリーを作製した。このライブラリーを、固相に固定化されたヒトIL−6と結合させて回収、濃縮し、抗ヒトIL−6Fv提示ファージクローンをスクリーニングした。その結果、スクリーニングされたscFvクローン(IL6gk3−2)は、ヒトIL−6と結合するscFv抗体を産生した。
クローンIL6gk3−2が産生するscFv抗体は、一本鎖にも拘わらず通常の完全型抗体と同等の親和力でリガンド(IL−6)に特異的に結合した。
クローンIL6gk3−2が産生するscFv抗体は、ヒトIL−6に依存して増殖する細胞株KT−3に加えたときにIL−6依存的増殖応答を濃度依存的に阻害した。
上記阻害活性を有するscFvクローンのVH鎖及びVL鎖のアミノ酸配列及びそれをコードする塩基配列を、配列番号1及び2(VH鎖)、及び配列番号3及び4(VL鎖)にそれぞれ示す。
さらに、上記配列中、VH鎖及びVL鎖の相補性決定領域(CDR1〜3)のアミノ酸配列を下記に示す。
[VH鎖]
CDR1:Lys Tyr Tyr Met Ala<配列番号5>
CDR2:Thr Ile Ser Asn Ser Gly Asp Ile Ile Asp Tyr Ala Asp Ser Val Arg Gly<配列番号6>
CDR3:Glu Tyr Phe Phe Ser Phe Asp Val<配列番号7>
[VL鎖]
CDR1:Alg Ala Ser Gln Asp Ile Arg Asn Trp Val Ala<配列番号8>
CDR2:Asp Gly Ser Ser Leu Gln Ser<配列番号9>
CDR3:Gln Gln Ser Asp Ser Thr Pro Ile Thr Phe<配列番号10>
上記VH鎖及びVL鎖のいずれかまたは両方の可変領域を有する抗体フラグメントは、ヒト由来抗ヒトIL−6抗体の可変領域を有し、ヒトIL−6と強く反応して、IL−6とIL−6受容体間の結合に対して阻害作用を示す。
本発明で開示されるヒト抗ヒトIL−6抗体のVH鎖及び/またはVL鎖は、ファージ抗体法を用いてscFvの形で得られたものであるが、開示したVH鎖及び/またはVL鎖をヒト免疫グロブリンの定常部と連結した完全分子型ヒト抗ヒトIL−6抗体、またヒト免疫グロブリンの定常部の一部と組み合わせたFab、Fab’またはF(ab’)2などのヒト抗ヒトIL−6抗体フラグメント、さらにscFvをヒト免疫グロブリンの定常部と結合させたヒト抗ヒトIL−6一本鎖抗体(scAb)などの他のヒト抗ヒトIL−6抗体フラグメント、並びにこれら抗体または抗体フラグメントをコードする遺伝子断片をも本発明は包含する。また、これらの抗体及び抗体フラグメント蛋白分子に高分子修飾剤を結合させた修飾蛋白分子も本発明に包含される。
さらに、本発明のヒト抗ヒトIL−6抗体及び該抗体フラグメント分子は、その特性からヒト末梢血中または筋肉内のIL−6発現細胞を検出或いは測定する免疫学的測定法を提供することが可能である。
また、本発明のヒト抗ヒトIL−6抗体及び該抗体フラグメント分子は、免疫学的に不活性な吸着物質からなる免疫吸着物質と吸着させた複合体とすることにより多くの応用が可能になる。たとえば、ヒト末梢血中のIL−6をイムノアフィニティクロマトグラフィにより精製することができる。さらに、遺伝子組換え法により形質転換された培養細胞から産生される培養上清中のIL−6の精製に用いることが可能である。
また、本発明のヒト抗ヒトIL−6抗体の可変部位のペプチドまたはその誘導体は、それを認識するペプチドまたは抗イディオタイプ抗体を、ライブラリーより単離する新たな手段を提供する。得られるペプチドと抗イデオタイプ抗体、及びその誘導体は、IL−6の中和による急性炎症や自己免疫疾患の治療に有効であることが期待できる(Vreugdenhil G.ら、Rheumatol.Int.1990;10(3):127−30;Hirano T.ら、Ric.Clin.Lab.1989 Jan−Mar;19(1):1−10)。
以下、実施例にそって本発明をさらに詳細に説明するが、これら実施例は本発明の範囲を限定するものではない。
《実施例1:健常者からのファージライブラリーの構築》
ファージライブラリーの構築は、J.D.Marksら(J.Mol.Biol.,222:581−597,1991)により報告されている方法を参考に調製した。
健常者20名由来末梢血よりFicolを用いた比重遠心法にてリンパ球を分離し、PBSで充分に洗浄後、ISOGEN(日本ジーン)で処理して、total RNAを調製した。このtotal RNAを4つに分割し、ヒトIgG、IgM、κ鎖、λ鎖の定常領域に特異的なプライマーを使用し、first strand cDNA synthesis kit(Pharmacia biotech)にて、それぞれのcDNAを作製した。このcDNAをテンプレートにして、Marksらが報告したのと同様にVH(γまたはμ)とJH及びVκとJκ、VλとJλの組合せで各ジーンファミリーに特異的なプライマーを用いて、それぞれの抗体V領域遺伝子をポリメラーゼチェインリアクション(PCR)法にて増幅した。
更に、VH(γまたはμ)とVκ、及びVH(γまたはμ)とVλをリンカーDNAを用いて、アッセンブリーPCR法(McCafferty,J.ら:Antibody Engineering−A Practical Approach,IRL Press,Oxford,1996)により結合させ、一本鎖scFv DNAを作製した。scFv DNAは更にPCRを用いて、NotI及びSfiI制限酵素部位を付加し、アガロースゲルで電気泳動後、精製した。精製したscFv DNAは制限酵素SfiI(Takara)とNotI(Takara)で消化後、ファージミドpCANTAB5E(Pharmacia)にクローニングした。scFv DNAを結合させたpCANTAB5EはVH(γ)−Vκ、VH(γ)−Vλ、VH(μ)−Vκ、VH(μ)−Vλ毎にエレクトロポレイションにより大腸菌TG1に導入した。形質転換したTG1の数から、VH(γ)−Vκ、VH(γ)−Vλ、VH(μ)−Vκ、VH(μ)−Vλはそれぞれ1.1×108、2.1×108、8.4×107、5.3×107クローンの多様性を有すると評価された。この形質転換したTG1から、M13KO7ヘルパーファージを用いてファージ抗体を発現し、健常人由来scFv提示ファージライブラリーを調製した。
《実施例2:パンニング》
ヒトIL−6は0.1M NaHCO31mLに溶解し、35mmのディッシュ(岩城)に4℃で一晩反応させて固定化した。0.5%ゼラチン/PBSを用いて20℃で2時間ブロッキングした後、0.1%Tween20−PBSで6回洗浄した。これに健常人由来の抗体ファージライブラリー(一本鎖抗体提示ファージ液)を0.9mL(1×1012tu/mL)加え、反応させた。
0.1%Tween20−PBSで10回洗浄した後、1.0mLのグリシン緩衝液(pH2.2)を加え、IL−6と結合する一本鎖抗体提示ファージを溶出させた。溶出したファージは1M Tris(hydroxymethyl)aminomethane−HCl,pH9.1を加えてpHを調整した後、対数増殖期の大腸菌TG1に感染させた。感染後のTG1は3000×g,10分で遠心分離して、上清を除き、200μLの2×YT培地で懸濁し、SOBAGプレート(2%グルコース、100μg/mlのアンピシリン含有SOBプレート)に播き、30℃のふ卵器中で一晩培養した。生じたコロニーは適量の2×YT培地を加えスクレイパー(Coastor)を使って懸濁、回収した。
このTG1液50μLを、30mLの2×YTAG培地に植え、ヘルパーファージを用いてレスキューし、スクリーニング後のファージライブラリーを調製した。
健常人由来ファージライブラリーVH(γ)−Vκ、VH(γ)−Vλ、VH(μ)−Vκ、VH(μ)−Vλ、それぞれについて前述のIL−6固定化プレートを用いてパンニングを計4回行った。4回目のパンニング後に、SOBAGプレートから任意にクローンを抽出し、scFvの発現の確認及びIL−6 ELISAによる特異性の確認と塩基配列の解析を行った。
《実施例3:スクリーニングIL−6 ELISA》
分離したクローンのスクリーニングのためのELISAは以下のように行った。ヒトIL−6及びコントロール蛋白をELISAプレートに固定化してスクリーニングに用いた。1.25μg/mLのヒト組換えIL−6、2.5μg/mLのヒト血清アルブミン(HSA)、1.25μg/mLのヒト単球走化性タンパク質1(MCP−1)、ヒトMIP−1α(macrophage inflammatory protein 1−α)またはヒトAB型血清を40μL/well ELISAプレート(Nunc)に入れ、4℃で16時間静置し、固定化した。固定化プレートは、0.5%BSA、0.5%ゼラチン及び5%スキムミルクを含むPBS溶液400μL/wellを入れて4℃で2時間静置し、ブロッキングを行った。
scFv提示ファージを含む試料液40μL/wellを入れて反応させた後、試料液を捨て洗浄液で5回洗った。ビオチン標識した抗M13モノクローナル抗体(Pharmacia biotech)と反応させ、アルカリフォスファターゼ(AP)標識した抗マウスIgG抗体と反応させた。洗浄液で5回洗った後、発色基質液(1g/mL p−nitrophenyl phosphate(Wako)、10%ジエタノールアミン(Wako)を含むPBS溶液)を50μL/well入れ、遮光し、室温〜37℃で、5〜10分発色させた。マルチプレートオートリーダーNJ−2001(Inter Med)で405nmの吸光度を測定した結果、評価したクローン全てが、IL−6に特異的であることが確認できた(図1)。
《実施例4:クローンの配列分析》
単離したクローンのscFv遺伝子のVH及びVLのDNA塩基配列をDye terminator cycle sequencing FS Ready Reaction kit(Applied Biosystems)を用いて決定した。ELISA及び配列分析の結果、単離したクローンは4種に分類された。このうち、クローンIL6gk3−2のVH及びVLの塩基配列をそれぞれ配列番号1及び配列番号3に示す。
《実施例5:scFvの発現と回収》
可溶性scFvを大腸菌HB2151を用いて発現させ、大腸菌ペリプラズム画分より回収、粗精製した。更に精製が必要な場合はRAPAS Purification Module(Pharmacia Biotech)用いて、アフィニティ精製を行った。精製したscFv蛋白の純度は、SDS−ポリアクリルアミドゲル電気泳動と、scFv蛋白のC末端のEtagエピトープを標的にしたウェスタンブロッティングにより確認した。scFv蛋白精製品の蛋白濃度の決定には、Protein Assayキット(BIO−RAD)を用いた。
《実施例6:SPR法による精製scFvの親和性測定》
BIAcore(BIAcore社)を用いて、SPR法により精製scFvの親和性を測定した結果、単離されたクローンのうち最も高い親和性を示したクローンIL6gk3−2は、ヒトIL−6に対して13×10−9Mの解離定数を有すると評価された(図2)。
《実施例7:IL−6依存性細胞株の増殖応答に対する影響》
精製scFvを用いて、IL−6に依存的に増殖する細胞株KT−3のIL−6依存的な増殖応答に対する阻害効果について検討した。2x104個/200μl/ウエルに調製したKT−3をIL−6(80pg/ml)と1.25〜20μg/mlのクローンIL6gk3−2由来の精製scFv存在下、4日間培養しチミジン取り込みによるDNA合成を評価した結果、クローンIL6gk3−2由来scFvはKT−3細胞の増殖応答を濃度依存的に抑制することがわかった(図3)。
Claims (19)
- ヒトインターロイキン−6(以下、IL−6)に結合し、その生物活性を阻害するヒト抗ヒトIL−6抗体または該抗体フラグメント。
- 少なくとも1.0×10−8M以下の解離定数を有する請求項1記截のヒト抗ヒトIL−6抗体または該抗体フラグメント。
- ヒトIL−6に結合し、その生物活性を阻害するヒト抗ヒトIL−6抗体のVH鎖をコードする遺伝子断片。
- 当該VH鎖の相補性決定領域(CDR1〜3)が下記のアミノ酸配列を有する請求項3に記載の遺伝子断片。
CDR1:Lys Tyr Tyr Met Ala<配列番号5>
CDR2:Thr Ile Ser Asn Ser Gly Asp Ile Ile Asp Tyr Ala Asp Ser ValArg Gly<配列番号6>
CDR3:Glu Tyr Phe Phe Ser Phe Asp Val<配列番号7> - 当該VH鎖が配列番号2に記載のアミノ酸配列を有する請求項3または4に記載の遺伝子断片。
- 当該VH鎖のアミノ酸配列において1もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換もしくは付加されている請求項4または5に記載の遺伝子断片。
- ヒトIL−6に結合し、その生物活性を阻害するヒト抗ヒトIL−6抗体のVL鎖をコードする遺伝子断片。
- 当該VL鎖の相補性決定領域(CDR1〜3)が下記のアミノ酸配列を有する請求項7に記載の遺伝子断片。
CDR1:Arg Ala Ser Gln Asp Ile Arg Asn Trp Val Ala<配列番号8>
CDR2:Asp Gly Ser Ser Leu Gln Ser<配列番号9>
CDR3:Gln Gln Ser Asp Ser Thr Pro Ile Thr Phe<配列番号10> - 当該VL鎖が配列番号4に記載のアミノ酸配列を有する請求項7または8に記載の遺伝子断片。
- 当該VL鎖のアミノ酸配列において1もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換もしくは付加されている請求項8または9に記載の遺伝子断片。
- 請求項3から6のいずれかに記載のVH鎖をコードする遺伝子断片及び請求項7から10のいずれかに記載のVL鎖をコードする遺伝子断片を結合してなる、ヒトIL−6に結合し、その生物活性を阻害するヒト抗ヒトIL−6抗体の一本鎖Fv(以下、scFv)をコードする遺伝子断片。
- 請求項3から6のいずれかに記載のVH鎖をコードする遺伝子断片及び請求項7から10のいずれかに記載のVL鎖をコードする遺伝子断片を、それぞれヒト抗体CH鎖遺伝子及びヒト抗体CL鎖遺伝子と結合してなる、ヒトIL−6に結合し、その生物活性を阻害するヒト抗IL−6抗体をコードする遺伝子断片。
- 請求項3から6のいずれかに記載のVH鎖をコードする遺伝子断片及び請求項6から10のいずれかに記載のVL鎖をコードする遺伝子断片を、それぞれヒト抗体CH鎖遺伝子の一部及びヒト抗体CL鎖遺伝子の一部と結合してなる、ヒトIL−6に結合し、その生物活性を阻害するヒト抗IL−6抗体フラグメントをコードする遺伝子断片。
- 当該抗体フラグメントが、Fab、Fab’、またはF(ab’)2から選ばれる請求項13に記載の遺伝子断片。
- 請求項11に記載のscFv遺伝子断片を、ヒト抗体CH鎖遺伝子の一部、またはヒト抗体CL鎖遺伝子の一部と結合してなる、ヒトIL−6に結合し、その生物活性を阻害するヒト抗IL−6抗体フラグメントをコードする遺伝子断片。
- 請求項3から15のいずれかに記載の遺伝子断片を発現ベクターに組込み、遺伝子組換え法により発現される、ヒトIL−6に結合し、その生物活性を阻害するヒト抗ヒトIL−6抗体または該抗体フラグメント。
- 少なくとも1.0×10−8M以下の解離定数を有する請求項16記載のヒト抗ヒトIL−6抗体または該抗体フラグメント。
- 請求項1から17のいずれかに記載のヒト抗ヒトIL−6抗体または該抗体フラグメントを有効成分として含有するIL−6及びIL−6受容体の結合活性阻害剤。
- 請求項18に記載の結合活性阻害剤を用いるヒトIL−6及びヒトIL−6受容体の結合により惹起される炎症及び免疫異常性疾患の予防または治療薬。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2002253036 | 2002-08-30 | ||
JP2002253036 | 2002-08-30 | ||
PCT/JP2003/010923 WO2004020633A1 (ja) | 2002-08-30 | 2003-08-28 | ヒト抗ヒトインターロイキン−6抗体及び該抗体フラグメント |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPWO2004020633A1 true JPWO2004020633A1 (ja) | 2005-12-15 |
JP4463104B2 JP4463104B2 (ja) | 2010-05-12 |
Family
ID=31972776
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2004532751A Expired - Fee Related JP4463104B2 (ja) | 2002-08-30 | 2003-08-28 | ヒト抗ヒトインターロイキン−6抗体及び該抗体フラグメント |
Country Status (8)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US7482436B2 (ja) |
EP (1) | EP1536012A4 (ja) |
JP (1) | JP4463104B2 (ja) |
KR (1) | KR20050058486A (ja) |
CN (1) | CN1678744B (ja) |
AU (1) | AU2003261787B2 (ja) |
CA (1) | CA2496523A1 (ja) |
WO (1) | WO2004020633A1 (ja) |
Families Citing this family (49)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
PA8672101A1 (es) * | 2005-04-29 | 2006-12-07 | Centocor Inc | Anticuerpos anti-il-6, composiciones, métodos y usos |
PT1960430E (pt) * | 2005-12-09 | 2015-01-05 | Ucb Pharma Sa | Moléculas de anticorpo com especificidade para il-6 humana |
MX2008014804A (es) * | 2006-06-02 | 2009-01-27 | Regeneron Pharma | Anticuerpos de afinidad elevada a receptor de il-6 humano. |
MX2009001110A (es) | 2006-08-03 | 2009-05-11 | Vaccinex Inc | Anticuerpos monoclonales anti-il-6 y usos de los mismos. |
US8414897B1 (en) | 2006-10-02 | 2013-04-09 | The Uab Research Foundation | Pathway for Th-17 cell development and methods utilizing same |
WO2008065384A2 (en) * | 2006-11-30 | 2008-06-05 | Astrazeneca Ab | Antibodies specific for the complex of interleukin-6 and the interleukin-6 receptor |
TW200831528A (en) * | 2006-11-30 | 2008-08-01 | Astrazeneca Ab | Compounds |
US8062864B2 (en) | 2007-05-21 | 2011-11-22 | Alderbio Holdings Llc | Nucleic acids encoding antibodies to IL-6, and recombinant production of anti-IL-6 antibodies |
US8252286B2 (en) | 2007-05-21 | 2012-08-28 | Alderbio Holdings Llc | Antagonists of IL-6 to prevent or treat thrombosis |
US20090238825A1 (en) * | 2007-05-21 | 2009-09-24 | Kovacevich Brian R | Novel rabbit antibody humanization methods and humanized rabbit antibodies |
MX343879B (es) * | 2007-05-21 | 2016-11-25 | Alderbio Holdings Llc | Metodo de humanizacion de anticuerpo de conejo novedoso y anticuerpos de conejo humanizados. |
US8178101B2 (en) | 2007-05-21 | 2012-05-15 | Alderbio Holdings Inc. | Use of anti-IL-6 antibodies having specific binding properties to treat cachexia |
US9701747B2 (en) | 2007-05-21 | 2017-07-11 | Alderbio Holdings Llc | Method of improving patient survivability and quality of life by anti-IL-6 antibody administration |
US8404235B2 (en) | 2007-05-21 | 2013-03-26 | Alderbio Holdings Llc | Antagonists of IL-6 to raise albumin and/or lower CRP |
US7906117B2 (en) * | 2007-05-21 | 2011-03-15 | Alderbio Holdings Llc | Antagonists of IL-6 to prevent or treat cachexia, weakness, fatigue, and/or fever |
PL2164514T3 (pl) | 2007-05-21 | 2017-08-31 | Alderbio Holdings Llc | Przeciwciała przeciwko IL-6 i ich zastosowanie |
EA017815B1 (ru) | 2007-06-08 | 2013-03-29 | Байоджен Айдек Ма Инк. | Биомаркеры для прогнозирования чувствительности или отсутствия чувствительности к анти-фно агентам |
US20100203009A1 (en) * | 2007-10-02 | 2010-08-12 | The Uab Research Foundation | Pathway for Th-17 Cell Development and Methods Utilizing Same |
ES2564635T3 (es) | 2008-05-13 | 2016-03-28 | Novimmune Sa | Anticuerpos anti-IL-6/IL-6R y métodos de uso de los mismos |
US8188235B2 (en) | 2008-06-18 | 2012-05-29 | Pfizer Inc. | Antibodies to IL-6 and their uses |
WO2010056948A2 (en) * | 2008-11-13 | 2010-05-20 | Femta Pharmaceuticals, Inc. | Humanized anti-il-6 antibodies |
NZ602166A (en) | 2008-11-25 | 2014-02-28 | Alder Biopharmaceuticals Inc | Antibodies to il-6 and use thereof |
US9452227B2 (en) | 2008-11-25 | 2016-09-27 | Alderbio Holdings Llc | Methods of treating or diagnosing conditions associated with elevated IL-6 using anti-IL-6 antibodies or fragments |
US9212223B2 (en) | 2008-11-25 | 2015-12-15 | Alderbio Holdings Llc | Antagonists of IL-6 to prevent or treat thrombosis |
US8420089B2 (en) | 2008-11-25 | 2013-04-16 | Alderbio Holdings Llc | Antagonists of IL-6 to raise albumin and/or lower CRP |
US8992920B2 (en) | 2008-11-25 | 2015-03-31 | Alderbio Holdings Llc | Anti-IL-6 antibodies for the treatment of arthritis |
US8323649B2 (en) * | 2008-11-25 | 2012-12-04 | Alderbio Holdings Llc | Antibodies to IL-6 and use thereof |
US8337847B2 (en) | 2008-11-25 | 2012-12-25 | Alderbio Holdings Llc | Methods of treating anemia using anti-IL-6 antibodies |
KR20120118088A (ko) | 2009-11-24 | 2012-10-25 | 앨더바이오 홀딩스 엘엘씨 | Ⅰl-6에 대한 항체 및 이들의 용도 |
US9775921B2 (en) | 2009-11-24 | 2017-10-03 | Alderbio Holdings Llc | Subcutaneously administrable composition containing anti-IL-6 antibody |
AU2011332817A1 (en) | 2010-11-23 | 2013-06-13 | Alder Biopharmaceuticals, Inc. | Anti-IL-6 antibodies for the treatment of anemia |
WO2012118813A2 (en) | 2011-03-03 | 2012-09-07 | Apexigen, Inc. | Anti-il-6 receptor antibodies and methods of use |
AU2013335004B2 (en) | 2012-10-22 | 2018-06-28 | Oneness Biotech Co. LTD | Antibodies to interleukin-6 and uses thereof |
JP2018529756A (ja) | 2015-07-31 | 2018-10-11 | メディミューン リミテッド | ヘプシジン媒介性障害を治療するための方法 |
EP3576790A4 (en) | 2017-02-01 | 2020-12-23 | Yale University | TREATMENT OF DIURETIC RESISTANCE |
CA3087699A1 (en) | 2018-01-05 | 2019-07-11 | Corvidia Therapeutics, Inc. | Methods for treating il-6 mediated inflammation without immunosuppression |
CN110283249A (zh) * | 2018-03-19 | 2019-09-27 | 江苏莱博德医疗科技有限公司 | 一种抗白介素6的人ScFv单链抗体 |
CN112996805A (zh) | 2018-08-30 | 2021-06-18 | Hcw生物科技公司 | 多链嵌合多肽和其用途 |
AU2019328313A1 (en) | 2018-08-30 | 2021-02-25 | HCW Biologics, Inc. | Single-chain chimeric polypeptides and uses thereof |
WO2020047473A1 (en) | 2018-08-30 | 2020-03-05 | HCW Biologics, Inc. | Single-chain and multi-chain chimeric polypeptides and uses thereof |
MA55809A (fr) | 2019-05-01 | 2022-03-09 | Novo Nordisk As | Formulation d'anticorps anti-il-6 |
US11738052B2 (en) | 2019-06-21 | 2023-08-29 | HCW Biologics, Inc. | Multi-chain chimeric polypeptides and uses thereof |
EP4103601A2 (en) | 2020-02-11 | 2022-12-21 | HCW Biologics, Inc. | Methods of treating age-related and inflammatory diseases |
CA3169243A1 (en) | 2020-02-11 | 2021-08-19 | HCW Biologics, Inc. | Methods of activating regulatory t cells |
JP2023519106A (ja) | 2020-02-11 | 2023-05-10 | エイチシーダブリュー バイオロジックス インコーポレイテッド | クロマトグラフィー樹脂およびその使用 |
CN115836087A (zh) | 2020-04-29 | 2023-03-21 | Hcw生物科技公司 | 抗cd26蛋白及其用途 |
WO2021247003A1 (en) | 2020-06-01 | 2021-12-09 | HCW Biologics, Inc. | Methods of treating aging-related disorders |
IL298608A (en) | 2020-06-01 | 2023-01-01 | Hcw Biologics Inc | Methods for treating disorders related to aging |
WO2023168363A1 (en) | 2022-03-02 | 2023-09-07 | HCW Biologics, Inc. | Method of treating pancreatic cancer |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5959085A (en) * | 1993-11-23 | 1999-09-28 | Schering Corporation | Human monoclonal antibodies against human cytokines and methods of making and using such antibodies |
CN100374159C (zh) * | 1998-03-17 | 2008-03-12 | 中外制药株式会社 | 一种包含il-6拮抗剂活性成分的炎性肠道疾病的预防或治疗剂 |
US7763249B2 (en) | 2004-04-27 | 2010-07-27 | Juridical Foundation The Chemo-Sero-Therapeutic Research Institute | Human anti-amyloid β peptide antibody and fragment of said antibody |
-
2003
- 2003-08-28 AU AU2003261787A patent/AU2003261787B2/en not_active Ceased
- 2003-08-28 CA CA002496523A patent/CA2496523A1/en not_active Abandoned
- 2003-08-28 EP EP03791369A patent/EP1536012A4/en not_active Withdrawn
- 2003-08-28 US US10/526,072 patent/US7482436B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2003-08-28 KR KR1020057003095A patent/KR20050058486A/ko not_active Application Discontinuation
- 2003-08-28 JP JP2004532751A patent/JP4463104B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2003-08-28 WO PCT/JP2003/010923 patent/WO2004020633A1/ja active Application Filing
- 2003-08-28 CN CN038203340A patent/CN1678744B/zh not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US7482436B2 (en) | 2009-01-27 |
US20060240012A1 (en) | 2006-10-26 |
JP4463104B2 (ja) | 2010-05-12 |
AU2003261787B2 (en) | 2008-11-06 |
EP1536012A4 (en) | 2006-03-08 |
WO2004020633A1 (ja) | 2004-03-11 |
KR20050058486A (ko) | 2005-06-16 |
AU2003261787A1 (en) | 2004-03-19 |
CN1678744B (zh) | 2010-05-26 |
EP1536012A1 (en) | 2005-06-01 |
CA2496523A1 (en) | 2004-03-11 |
CN1678744A (zh) | 2005-10-05 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP4463104B2 (ja) | ヒト抗ヒトインターロイキン−6抗体及び該抗体フラグメント | |
JP5150516B2 (ja) | 抗体剤ヒトil−22およびその使用 | |
JP4426449B2 (ja) | ヒト抗ヒトmcp−1抗体及び該抗体フラグメント | |
JP4914209B2 (ja) | ヒトil−21受容体に対する抗体および該抗体の使用 | |
EP3837283B1 (en) | Anti-il1rap antibody compositions | |
CN112513090A (zh) | 结合人il-4r的抗体、其抗原结合片段及其医药用途 | |
US7384633B2 (en) | Human type antihuman IgE receptor antibody and fragment | |
WO2008128456A1 (fr) | Épitope fonctionnel d'ostéopontine, anticorps monoclonal anti-ostéopontine et leur utilisation | |
Yuan et al. | Construction of human nonimmune library and selection of scFvs against IL-33 | |
KR101525919B1 (ko) | 자가면역 질환 예방 및 치료를 위한 tnfr2를 기반으로 하는 이중 항체 | |
Gejima et al. | Human single-chain Fv (scFv) antibody specific to human IL-6 with the inhibitory activity on IL-6-signaling | |
TWI793503B (zh) | 抗IL-1β抗體 | |
RU2779649C1 (ru) | Антитело, связывающее человеческий il-4r, его антигенсвязывающий фрагмент и его медицинское применение | |
CN118019760A (zh) | 抗IL-1-β抗体 | |
JP2006124297A (ja) | Il−18様ペプチド、その融合ペプチド、製造方法および用途 | |
JPH0681599B2 (ja) | インターロイキン―1βに対する抗体 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20060530 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20090714 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20090909 |
|
RD03 | Notification of appointment of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7423 Effective date: 20090916 |
|
RD04 | Notification of resignation of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424 Effective date: 20090916 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20091104 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20091224 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20100209 |
|
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20100216 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130226 Year of fee payment: 3 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130226 Year of fee payment: 3 |
|
S533 | Written request for registration of change of name |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313533 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130226 Year of fee payment: 3 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20140226 Year of fee payment: 4 |
|
S531 | Written request for registration of change of domicile |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313532 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |