RU2779649C1 - Антитело, связывающее человеческий il-4r, его антигенсвязывающий фрагмент и его медицинское применение - Google Patents
Антитело, связывающее человеческий il-4r, его антигенсвязывающий фрагмент и его медицинское применение Download PDFInfo
- Publication number
- RU2779649C1 RU2779649C1 RU2021104984A RU2021104984A RU2779649C1 RU 2779649 C1 RU2779649 C1 RU 2779649C1 RU 2021104984 A RU2021104984 A RU 2021104984A RU 2021104984 A RU2021104984 A RU 2021104984A RU 2779649 C1 RU2779649 C1 RU 2779649C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- seq
- ser
- antibody
- sequence
- gly
- Prior art date
Links
- 102000004965 antibodies Human genes 0.000 title claims abstract description 284
- 108090001123 antibodies Proteins 0.000 title claims abstract description 284
- 230000027455 binding Effects 0.000 title claims abstract description 118
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title claims abstract description 103
- 102000038129 antigens Human genes 0.000 title claims abstract description 103
- 108091007172 antigens Proteins 0.000 title claims abstract description 103
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 29
- 108091006028 chimera Proteins 0.000 claims abstract description 15
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 15
- 230000001404 mediated Effects 0.000 claims abstract description 13
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 7
- 108040006852 interleukin-4 receptor activity proteins Proteins 0.000 claims abstract 16
- 210000004027 cells Anatomy 0.000 claims description 62
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 claims description 38
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 25
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 24
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 claims description 13
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 13
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 10
- 229920000023 polynucleotide Polymers 0.000 claims description 9
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 9
- 208000006673 Asthma Diseases 0.000 claims description 8
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims description 8
- 102100008989 IGHV1-2 Human genes 0.000 claims description 7
- 101710003461 IGHV1-2 Proteins 0.000 claims description 7
- 102100015834 IGHV3-48 Human genes 0.000 claims description 7
- 101710002411 IGHV3-48 Proteins 0.000 claims description 7
- 102100011571 IGKV2D-29 Human genes 0.000 claims description 7
- 101710009616 IGKV2D-29 Proteins 0.000 claims description 7
- 230000000172 allergic Effects 0.000 claims description 7
- 201000008937 atopic dermatitis Diseases 0.000 claims description 7
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 7
- 102100005979 IGKV3-11 Human genes 0.000 claims description 6
- 101710025011 IGKV3-11 Proteins 0.000 claims description 6
- 208000006641 Skin Disease Diseases 0.000 claims description 6
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 6
- 230000001575 pathological Effects 0.000 claims description 6
- 230000035693 Fab Effects 0.000 claims description 5
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 claims description 5
- 230000003405 preventing Effects 0.000 claims description 4
- 208000009094 Anemia, Hemolytic, Autoimmune Diseases 0.000 claims description 3
- 206010003246 Arthritis Diseases 0.000 claims description 3
- 208000000659 Autoimmune Lymphoproliferative Syndrome Diseases 0.000 claims description 3
- 201000011497 Barrett's esophagus Diseases 0.000 claims description 3
- 206010004137 Barrett's oesophagus Diseases 0.000 claims description 3
- 208000006545 Chronic Obstructive Pulmonary Disease Diseases 0.000 claims description 3
- 206010009137 Chronic sinusitis Diseases 0.000 claims description 3
- 206010064212 Eosinophilic oesophagitis Diseases 0.000 claims description 3
- 208000001083 Kidney Disease Diseases 0.000 claims description 3
- 208000000592 Nasal Polyps Diseases 0.000 claims description 3
- 206010029149 Nephropathy Diseases 0.000 claims description 3
- 206010029151 Nephropathy Diseases 0.000 claims description 3
- 206010039085 Rhinitis allergic Diseases 0.000 claims description 3
- 201000010105 allergic rhinitis Diseases 0.000 claims description 3
- 201000000448 autoimmune hemolytic anemia Diseases 0.000 claims description 3
- 201000004982 autoimmune uveitis Diseases 0.000 claims description 3
- 201000000708 eosinophilic esophagitis Diseases 0.000 claims description 3
- 200000000018 inflammatory disease Diseases 0.000 claims description 3
- 239000000546 pharmaceutic aid Substances 0.000 claims description 3
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 claims description 3
- 102200012020 ABCB4 S49A Human genes 0.000 claims description 2
- 102200044333 BAD R94K Human genes 0.000 claims description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 2
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 claims description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 2
- 102200106206 HSD3B1 R71I Human genes 0.000 claims description 2
- 241000235058 Komagataella pastoris Species 0.000 claims description 2
- 102200034906 LILRB1 A93T Human genes 0.000 claims description 2
- 102200042020 MOSMO F67S Human genes 0.000 claims description 2
- 102200003254 NEK10 L46P Human genes 0.000 claims description 2
- 210000001672 Ovary Anatomy 0.000 claims description 2
- 102200011655 PCDHGB2 V58I Human genes 0.000 claims description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 claims description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims description 2
- 102220168074 rs200199102 Human genes 0.000 claims description 2
- 230000003612 virological Effects 0.000 claims description 2
- 210000003734 Kidney Anatomy 0.000 claims 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 36
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 6
- 201000005794 allergic hypersensitivity disease Diseases 0.000 abstract description 5
- 102000010787 Interleukin-4 Receptors Human genes 0.000 description 102
- 108010038486 Interleukin-4 Receptors Proteins 0.000 description 102
- XGDCYUQSFDQISZ-BQBZGAKWSA-N Leu-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O XGDCYUQSFDQISZ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 59
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 55
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 55
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 55
- 241000880493 Leptailurus serval Species 0.000 description 54
- XZKQVQKUZMAADP-IMJSIDKUSA-N Ser-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O XZKQVQKUZMAADP-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 46
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 45
- 108010089804 glycyl-threonine Proteins 0.000 description 44
- OLIFSFOFKGKIRH-WUJLRWPWSA-N Gly-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CN OLIFSFOFKGKIRH-WUJLRWPWSA-N 0.000 description 35
- WOUIMBGNEUWXQG-VKHMYHEASA-N Ser-Gly Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O WOUIMBGNEUWXQG-VKHMYHEASA-N 0.000 description 34
- BCCRXDTUTZHDEU-VKHMYHEASA-N Gly-Ser Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O BCCRXDTUTZHDEU-VKHMYHEASA-N 0.000 description 31
- 108010017391 lysylvaline Proteins 0.000 description 30
- 108010026333 seryl-proline Proteins 0.000 description 30
- NFDYGNFETJVMSE-BQBZGAKWSA-N Ser-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO NFDYGNFETJVMSE-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 29
- 108010051242 phenylalanylserine Proteins 0.000 description 29
- RNKSNIBMTUYWSH-YFKPBYRVSA-N L-prolylglycine Chemical compound [O-]C(=O)CNC(=O)[C@@H]1CCC[NH2+]1 RNKSNIBMTUYWSH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 28
- VEYJKJORLPYVLO-RYUDHWBXSA-N Val-Tyr Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 VEYJKJORLPYVLO-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 28
- ROHDXJUFQVRDAV-UWVGGRQHSA-N Phe-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 ROHDXJUFQVRDAV-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 27
- STTYIMSDIYISRG-WDSKDSINSA-N Val-Ser Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O STTYIMSDIYISRG-WDSKDSINSA-N 0.000 description 27
- 108010068265 aspartyltyrosine Proteins 0.000 description 27
- 108010044655 lysylproline Proteins 0.000 description 26
- IPWKGIFRRBGCJO-IMJSIDKUSA-N Ala-Ser Chemical compound C[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](CO)C([O-])=O IPWKGIFRRBGCJO-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 25
- GVRKWABULJAONN-UHFFFAOYSA-N Valyl-Threonine Chemical compound CC(C)C(N)C(=O)NC(C(C)O)C(O)=O GVRKWABULJAONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 25
- 108010044292 tryptophyltyrosine Proteins 0.000 description 25
- UPJONISHZRADBH-XPUUQOCRSA-N Val-Glu Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O UPJONISHZRADBH-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 24
- 108010064235 lysylglycine Proteins 0.000 description 24
- BUQICHWNXBIBOG-LMVFSUKVSA-N Ala-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)N BUQICHWNXBIBOG-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 23
- ILVGMCVCQBJPSH-WDSKDSINSA-N Ser-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO ILVGMCVCQBJPSH-WDSKDSINSA-N 0.000 description 23
- 108010010147 glycylglutamine Proteins 0.000 description 23
- PNMUAGGSDZXTHX-BYPYZUCNSA-N Gly-Gln Chemical compound NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O PNMUAGGSDZXTHX-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 22
- TWVKGYNQQAUNRN-ACZMJKKPSA-N Ile-Ser Chemical compound CC[C@H](C)[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](CO)C([O-])=O TWVKGYNQQAUNRN-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 22
- BQBCIBCLXBKYHW-CSMHCCOUSA-N Thr-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)[C@@H]([NH3+])[C@@H](C)O BQBCIBCLXBKYHW-CSMHCCOUSA-N 0.000 description 22
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 22
- 108010069205 aspartyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 22
- 108010009962 valyltyrosine Proteins 0.000 description 22
- LRKCBIUDWAXNEG-CSMHCCOUSA-N Leu-Thr Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O LRKCBIUDWAXNEG-CSMHCCOUSA-N 0.000 description 21
- YQAIUOWPSUOINN-IUCAKERBSA-N Lys-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN YQAIUOWPSUOINN-IUCAKERBSA-N 0.000 description 21
- 108010086434 alanyl-seryl-glycine Proteins 0.000 description 21
- YZQCXOFQZKCETR-UWVGGRQHSA-N Asp-Phe Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 YZQCXOFQZKCETR-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 20
- DKEXFJVMVGETOO-LURJTMIESA-N Gly-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CN DKEXFJVMVGETOO-LURJTMIESA-N 0.000 description 20
- RWCOTTLHDJWHRS-YUMQZZPRSA-N Pro-Pro Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H]1NCCC1 RWCOTTLHDJWHRS-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 20
- VBKBDLMWICBSCY-IMJSIDKUSA-N Ser-Asp Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O VBKBDLMWICBSCY-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 20
- CKHWEVXPLJBEOZ-UHFFFAOYSA-N Threoninyl-Valine Chemical compound CC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)C(C)O CKHWEVXPLJBEOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 108010087924 alanylproline Proteins 0.000 description 20
- 108010073969 valyllysine Proteins 0.000 description 20
- SITLTJHOQZFJGG-XPUUQOCRSA-N α-Glu-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O SITLTJHOQZFJGG-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 20
- QXRNAOYBCYVZCD-BQBZGAKWSA-N (2S)-6-amino-2-[[(2S)-2-aminopropanoyl]amino]hexanoic acid Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN QXRNAOYBCYVZCD-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 19
- FBTYOQIYBULKEH-ZFWWWQNUSA-N His-Trp Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(O)=O)C1=CNC=N1 FBTYOQIYBULKEH-ZFWWWQNUSA-N 0.000 description 19
- LUMXICQAOKVQOB-UHFFFAOYSA-N Threoninyl-Isoleucine Chemical compound CCC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)C(C)O LUMXICQAOKVQOB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- ARPVSMCNIDAQBO-UHFFFAOYSA-N Glutaminyl-Leucine Chemical compound CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(N)=O ARPVSMCNIDAQBO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 108010078144 glutaminyl-glycine Proteins 0.000 description 18
- NALWOULWGHTVDA-UWVGGRQHSA-N Asp-Tyr Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 NALWOULWGHTVDA-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 17
- NYQBYASWHVRESG-MIMYLULJSA-N Phe-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 NYQBYASWHVRESG-MIMYLULJSA-N 0.000 description 17
- HMNSRTLZAJHSIK-YUMQZZPRSA-N Pro-Arg Chemical compound NC(=N)NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 HMNSRTLZAJHSIK-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 17
- 108010070643 prolylglutamic acid Proteins 0.000 description 17
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 17
- IJYZHIOOBGIINM-WDSKDSINSA-N Arg-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N IJYZHIOOBGIINM-WDSKDSINSA-N 0.000 description 16
- NFNVDJGXRFEYTK-YUMQZZPRSA-N Leu-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O NFNVDJGXRFEYTK-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 16
- JYOAXOMPIXKMKK-UHFFFAOYSA-N Leucyl-Glutamine Chemical compound CC(C)CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCC(N)=O JYOAXOMPIXKMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- AIXUQKMMBQJZCU-IUCAKERBSA-N Lys-Pro Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O AIXUQKMMBQJZCU-IUCAKERBSA-N 0.000 description 16
- NHUHCSRWZMLRLA-UHFFFAOYSA-N Sulfizole Chemical compound CC1=NOC(NS(=O)(=O)C=2C=CC(N)=CC=2)=C1C NHUHCSRWZMLRLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 108010050025 alpha-glutamyltryptophan Proteins 0.000 description 16
- 230000000903 blocking Effects 0.000 description 16
- 108010037850 glycylvaline Proteins 0.000 description 16
- NTQDELBZOMWXRS-UHFFFAOYSA-N Aspartyl-Threonine Chemical compound CC(O)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC(O)=O NTQDELBZOMWXRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- YHDXIZKDOIWPBW-UHFFFAOYSA-N Cysteinyl-Glutamine Chemical compound SCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCC(N)=O YHDXIZKDOIWPBW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- WBAXJMCUFIXCNI-WDSKDSINSA-N Ser-Pro Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O WBAXJMCUFIXCNI-WDSKDSINSA-N 0.000 description 15
- RZEQTVHJZCIUBT-UHFFFAOYSA-N Serinyl-Arginine Chemical compound OCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCCNC(N)=N RZEQTVHJZCIUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- XXDVDTMEVBYRPK-XPUUQOCRSA-N Val-Gln Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O XXDVDTMEVBYRPK-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 15
- 108010077245 asparaginyl-proline Proteins 0.000 description 15
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 15
- QLROSWPKSBORFJ-BQBZGAKWSA-N pro glu Chemical compound OC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 QLROSWPKSBORFJ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 15
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 14
- AFWBWPCXSWUCLB-WDSKDSINSA-N Pro-Ser Chemical compound OC[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)[C@@H]1CCC[NH2+]1 AFWBWPCXSWUCLB-WDSKDSINSA-N 0.000 description 14
- DSGIVWSDDRDJIO-ZXXMMSQZSA-N Thr-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O DSGIVWSDDRDJIO-ZXXMMSQZSA-N 0.000 description 14
- JKHXYJKMNSSFFL-IUCAKERBSA-N Val-Lys Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN JKHXYJKMNSSFFL-IUCAKERBSA-N 0.000 description 14
- 108091003598 dupilumab Proteins 0.000 description 14
- 108010031719 prolyl-serine Proteins 0.000 description 14
- LCNASHSOFMRYFO-WDCWCFNPSA-N (2S)-5-amino-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-amino-4-methylpentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-5-oxopentanoic acid Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O LCNASHSOFMRYFO-WDCWCFNPSA-N 0.000 description 13
- PMGDADKJMCOXHX-BQBZGAKWSA-N Arg-Gln Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O PMGDADKJMCOXHX-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 13
- JEFZIKRIDLHOIF-BYPYZUCNSA-N Gln-Gly Chemical compound NC(=O)CC[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O JEFZIKRIDLHOIF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 13
- JMEWFDUAFKVAAT-UHFFFAOYSA-N Methionyl-Asparagine Chemical compound CSCCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC(N)=O JMEWFDUAFKVAAT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- SBMNPABNWKXNBJ-UHFFFAOYSA-N Serinyl-Lysine Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CO SBMNPABNWKXNBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 108010081404 acein-2 Proteins 0.000 description 13
- 108010008355 arginyl-glutamine Proteins 0.000 description 13
- 108010078274 isoleucylvaline Proteins 0.000 description 13
- 108010070409 phenylalanyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 13
- VGRHZPNRCLAHQA-UHFFFAOYSA-N Aspartyl-Asparagine Chemical compound OC(=O)CC(N)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O VGRHZPNRCLAHQA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 229950003468 Dupilumab Drugs 0.000 description 12
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 12
- LLEUXCDZPQOJMY-AAEUAGOBSA-N Glu-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)N)C(O)=O)=CNC2=C1 LLEUXCDZPQOJMY-AAEUAGOBSA-N 0.000 description 12
- 210000004408 Hybridomas Anatomy 0.000 description 12
- BCVIOZZGJNOEQS-XKNYDFJKSA-N Ile-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)[C@@H](C)CC BCVIOZZGJNOEQS-XKNYDFJKSA-N 0.000 description 12
- 102000018358 Immunoglobulins Human genes 0.000 description 12
- 108060003951 Immunoglobulins Proteins 0.000 description 12
- LTFSLKWFMWZEBD-IMJSIDKUSA-N Ser-Asn Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O LTFSLKWFMWZEBD-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 12
- 108010069020 alanyl-prolyl-glycine Proteins 0.000 description 12
- 108010041407 alanylaspartic acid Proteins 0.000 description 12
- UKKNTTCNGZLJEX-UHFFFAOYSA-N γ-glutamyl-Serine Chemical compound NC(=O)CCC(N)C(=O)NC(CO)C(O)=O UKKNTTCNGZLJEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- XAEWTDMGFGHWFK-IMJSIDKUSA-N Ala-Asp Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O XAEWTDMGFGHWFK-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 11
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 11
- FUESBOMYALLFNI-VKHMYHEASA-N Gly-Asn Chemical compound NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O FUESBOMYALLFNI-VKHMYHEASA-N 0.000 description 11
- VYZAGTDAHUIRQA-WHFBIAKZSA-N L-alanyl-L-glutamic acid Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O VYZAGTDAHUIRQA-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 11
- HGNRJCINZYHNOU-LURJTMIESA-N Lys-Gly Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O HGNRJCINZYHNOU-LURJTMIESA-N 0.000 description 11
- 108010079364 N-glycylalanine Proteins 0.000 description 11
- 102100009178 RUNX1T1 Human genes 0.000 description 11
- IQHUITKNHOKGFC-MIMYLULJSA-N Thr-Phe Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 IQHUITKNHOKGFC-MIMYLULJSA-N 0.000 description 11
- MFEVVAXTBZELLL-UHFFFAOYSA-N Tyrosyl-Threonine Chemical compound CC(O)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 MFEVVAXTBZELLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 11
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 11
- 108010044374 isoleucyl-tyrosine Proteins 0.000 description 11
- WPWUFUBLGADILS-WDSKDSINSA-N Ala-Pro Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O WPWUFUBLGADILS-WDSKDSINSA-N 0.000 description 10
- OMSMPWHEGLNQOD-UHFFFAOYSA-N Asparaginyl-Phenylalanine Chemical compound NC(=O)CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 OMSMPWHEGLNQOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- PWWVAXIEGOYWEE-UHFFFAOYSA-N Isophenergan Chemical compound C1=CC=C2N(CC(C)N(C)C)C3=CC=CC=C3SC2=C1 PWWVAXIEGOYWEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- JAQGKXUEKGKTKX-HOTGVXAUSA-N L-tyrosyl-L-tyrosine Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 JAQGKXUEKGKTKX-HOTGVXAUSA-N 0.000 description 10
- NPBGTPKLVJEOBE-IUCAKERBSA-N Lys-Arg Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N NPBGTPKLVJEOBE-IUCAKERBSA-N 0.000 description 10
- ZOKVLMBYDSIDKG-CSMHCCOUSA-N Lys-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN ZOKVLMBYDSIDKG-CSMHCCOUSA-N 0.000 description 10
- KAKJTZWHIUWTTD-VQVTYTSYSA-N Met-Thr Chemical compound CSCC[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C([O-])=O KAKJTZWHIUWTTD-VQVTYTSYSA-N 0.000 description 10
- UBAQSAUDKMIEQZ-QWRGUYRKSA-N Tyr-Gln Chemical compound NC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 UBAQSAUDKMIEQZ-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 10
- BMPPMAOOKQJYIP-WMZOPIPTSA-N Tyr-Trp Chemical compound C([C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C([O-])=O)C1=CC=C(O)C=C1 BMPPMAOOKQJYIP-WMZOPIPTSA-N 0.000 description 10
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 108010049041 glutamylalanine Proteins 0.000 description 10
- 108010034529 leucyl-lysine Proteins 0.000 description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 description 10
- 108010077112 prolyl-proline Proteins 0.000 description 10
- ZQFAGNFSIZZYBA-UHFFFAOYSA-N γ-glutamyl-Tryptophan Chemical compound C1=CC=C2C(CC(NC(=O)C(CCC(N)=O)N)C(O)=O)=CNC2=C1 ZQFAGNFSIZZYBA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- FAQVCWVVIYYWRR-WHFBIAKZSA-N (2S)-2-[[(2S)-2,5-diamino-5-oxopentanoyl]amino]propanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O FAQVCWVVIYYWRR-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 9
- KYPMKDGKAYQCHO-RYUDHWBXSA-N (2S)-2-[[(2S)-2-amino-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-4-methylsulfanylbutanoic acid Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 KYPMKDGKAYQCHO-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 9
- ILDSIMPXNFWKLH-KATARQTJSA-N (2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-amino-4-methylpentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-hydroxypropanoic acid Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O ILDSIMPXNFWKLH-KATARQTJSA-N 0.000 description 9
- INGJLBQKTRJLFO-UKJIMTQDSA-N (4S)-4-amino-5-[[(2S,3S)-1-[[(1S)-1-carboxy-2-methylpropyl]amino]-3-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-oxopentanoic acid Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O INGJLBQKTRJLFO-UKJIMTQDSA-N 0.000 description 9
- MPZWMIIOPAPAKE-UHFFFAOYSA-N 4-amino-5-[[1-carboxy-4-(diaminomethylideneamino)butyl]amino]-5-oxopentanoic acid Chemical compound OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCCN=C(N)N MPZWMIIOPAPAKE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- SONUFGRSSMFHFN-IMJSIDKUSA-N Asn-Ser Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O SONUFGRSSMFHFN-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 9
- HXWUJJADFMXNKA-UHFFFAOYSA-N Asparaginyl-Leucine Chemical compound CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC(N)=O HXWUJJADFMXNKA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- WXOFKRKAHJQKLT-UHFFFAOYSA-N Cysteinyl-Lysine Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CS WXOFKRKAHJQKLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- CLSDNFWKGFJIBZ-UHFFFAOYSA-N Glutaminyl-Lysine Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(N)=O CLSDNFWKGFJIBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- YKRQRPFODDJQTC-UHFFFAOYSA-N Threoninyl-Lysine Chemical compound CC(O)C(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCCCN YKRQRPFODDJQTC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- CGWAPUBOXJWXMS-HOTGVXAUSA-N Tyr-Phe Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 CGWAPUBOXJWXMS-HOTGVXAUSA-N 0.000 description 9
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 9
- XPJBQTCXPJNIFE-ZETCQYMHSA-N (2S)-2-[[2-[(2-azaniumylacetyl)amino]acetyl]amino]-4-methylpentanoate Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)CN XPJBQTCXPJNIFE-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 8
- SNFUTDLOCQQRQD-UHFFFAOYSA-N 2-[(2-amino-4-carboxybutanoyl)amino]-3-methylpentanoic acid Chemical compound CCC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O SNFUTDLOCQQRQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- NAXPHWZXEXNDIW-JTQLQIEISA-N 2-[[2-[[(2S)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]acetyl]amino]acetic acid Chemical compound OC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 NAXPHWZXEXNDIW-JTQLQIEISA-N 0.000 description 8
- RDIKFPRVLJLMER-BQBZGAKWSA-N Ala-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)N RDIKFPRVLJLMER-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 8
- BBIXOODYWPFNDT-CIUDSAMLSA-N Ile-Pro Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O BBIXOODYWPFNDT-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 8
- QOOWRKBDDXQRHC-BQBZGAKWSA-N L-lysyl-L-alanine Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN QOOWRKBDDXQRHC-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 8
- QCZYYEFXOBKCNQ-STQMWFEESA-N Lys-Phe Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 QCZYYEFXOBKCNQ-STQMWFEESA-N 0.000 description 8
- FFOKMZOAVHEWET-UHFFFAOYSA-N Serinyl-Cysteine Chemical compound OCC(N)C(=O)NC(CS)C(O)=O FFOKMZOAVHEWET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- HPYDSVWYXXKHRD-VIFPVBQESA-N Tyr-Gly Chemical compound [O-]C(=O)CNC(=O)[C@@H]([NH3+])CC1=CC=C(O)C=C1 HPYDSVWYXXKHRD-VIFPVBQESA-N 0.000 description 8
- 108010092854 aspartyllysine Proteins 0.000 description 8
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 8
- 108010067216 glycyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 8
- 102000005614 monoclonal antibodies Human genes 0.000 description 8
- 108010045030 monoclonal antibodies Proteins 0.000 description 8
- 108010020755 prolyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 8
- 108010003137 tyrosyltyrosine Proteins 0.000 description 8
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 8
- FEUPVVCGQLNXNP-IRXDYDNUSA-N (2S)-2-[[(2S)-2-[(2-aminoacetyl)amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoic acid Chemical compound C([C@H](NC(=O)CN)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 FEUPVVCGQLNXNP-IRXDYDNUSA-N 0.000 description 7
- OMNVYXHOSHNURL-WPRPVWTQSA-N Ala-Phe Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 OMNVYXHOSHNURL-WPRPVWTQSA-N 0.000 description 7
- GADKFYNESXNRLC-WDSKDSINSA-N Asn-Pro Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O GADKFYNESXNRLC-WDSKDSINSA-N 0.000 description 7
- HAYVTMHUNMMXCV-UHFFFAOYSA-N Cysteinyl-Alanine Chemical compound OC(=O)C(C)NC(=O)C(N)CS HAYVTMHUNMMXCV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- AYKQJQVWUYEZNU-UHFFFAOYSA-N Cysteinyl-Asparagine Chemical compound SCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC(N)=O AYKQJQVWUYEZNU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- OWOFCNWTMWOOJJ-WDSKDSINSA-N Gln-Glu Chemical compound NC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O OWOFCNWTMWOOJJ-WDSKDSINSA-N 0.000 description 7
- IKAIKUBBJHFNBZ-LURJTMIESA-N Gly-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CN IKAIKUBBJHFNBZ-LURJTMIESA-N 0.000 description 7
- PFMUCCYYAAFKTH-YFKPBYRVSA-N Gly-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CN PFMUCCYYAAFKTH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 7
- YSZNURNVYFUEHC-BQBZGAKWSA-N Lys-Ser Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YSZNURNVYFUEHC-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 7
- JQOHKCDMINQZRV-WDSKDSINSA-N Pro-Asn Chemical compound NC(=O)C[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)[C@@H]1CCC[NH2+]1 JQOHKCDMINQZRV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 7
- LAFKUZYWNCHOHT-WHFBIAKZSA-N Ser-Glu Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O LAFKUZYWNCHOHT-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 7
- QOLYAJSZHIJCTO-VQVTYTSYSA-N Thr-Pro Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O QOLYAJSZHIJCTO-VQVTYTSYSA-N 0.000 description 7
- TYYLDKGBCJGJGW-WMZOPIPTSA-N Trp-Tyr Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)N)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 TYYLDKGBCJGJGW-WMZOPIPTSA-N 0.000 description 7
- ZSXJENBJGRHKIG-UHFFFAOYSA-N Tyrosyl-Serine Chemical compound OCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 ZSXJENBJGRHKIG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- OBTCMSPFOITUIJ-FSPLSTOPSA-N Val-Asp Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O OBTCMSPFOITUIJ-FSPLSTOPSA-N 0.000 description 7
- GIAZPLMMQOERPN-YUMQZZPRSA-N Val-Pro Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O GIAZPLMMQOERPN-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 7
- 108010008685 alanyl-glutamyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 7
- 108010011559 alanylphenylalanine Proteins 0.000 description 7
- 229940079593 drugs Drugs 0.000 description 7
- 108010018006 histidylserine Proteins 0.000 description 7
- 108010038320 lysylphenylalanine Proteins 0.000 description 7
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 7
- 108010004914 prolylarginine Proteins 0.000 description 7
- 108010038745 tryptophylglycine Proteins 0.000 description 7
- VNYDHJARLHNEGA-RYUDHWBXSA-N (2S)-1-[(2S)-2-azaniumyl-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]pyrrolidine-2-carboxylate Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 VNYDHJARLHNEGA-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 6
- BVZABQIRMYTKCF-JSGCOSHPSA-N (2S)-2-[[(2S)-2-azaniumyl-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-4-methylsulfanylbutanoate Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O)=CNC2=C1 BVZABQIRMYTKCF-JSGCOSHPSA-N 0.000 description 6
- TUTIHHSZKFBMHM-UHFFFAOYSA-N 4-amino-5-[(3-amino-1-carboxy-3-oxopropyl)amino]-5-oxopentanoic acid Chemical compound OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O TUTIHHSZKFBMHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- SITWEMZOJNKJCH-UHFFFAOYSA-N Alanyl-Arginine Chemical compound CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCCNC(N)=N SITWEMZOJNKJCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- JHFNSBBHKSZXKB-VKHMYHEASA-N Asp-Gly Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O JHFNSBBHKSZXKB-VKHMYHEASA-N 0.000 description 6
- OAMLVOVXNKILLQ-BQBZGAKWSA-N Asp-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O OAMLVOVXNKILLQ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 6
- BSWHERGFUNMWGS-UHFFFAOYSA-N Aspartyl-Isoleucine Chemical compound CCC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC(O)=O BSWHERGFUNMWGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- BBBXWRGITSUJPB-YUMQZZPRSA-N Glu-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O BBBXWRGITSUJPB-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 6
- SSHIXEILTLPAQT-UHFFFAOYSA-N Glutaminyl-Aspartate Chemical compound NC(=O)CCC(N)C(=O)NC(CC(O)=O)C(O)=O SSHIXEILTLPAQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- SCCPDJAQCXWPTF-VKHMYHEASA-N Gly-Asp Chemical compound NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O SCCPDJAQCXWPTF-VKHMYHEASA-N 0.000 description 6
- 101710007377 H1-4 Proteins 0.000 description 6
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 6
- 108010064750 Humanized Monoclonal Antibodies Proteins 0.000 description 6
- 102000015434 Humanized Monoclonal Antibodies Human genes 0.000 description 6
- QNBYCZTZNOVDMI-HGNGGELXSA-N Ile-His Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 QNBYCZTZNOVDMI-HGNGGELXSA-N 0.000 description 6
- LESXFEZIFXFIQR-LURJTMIESA-N Leu-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O LESXFEZIFXFIQR-LURJTMIESA-N 0.000 description 6
- FMIIKPHLJKUXGE-GUBZILKMSA-N Lys-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN FMIIKPHLJKUXGE-GUBZILKMSA-N 0.000 description 6
- ADHNYKZHPOEULM-BQBZGAKWSA-N Met-Glu Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O ADHNYKZHPOEULM-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 6
- WEQJQNWXCSUVMA-RYUDHWBXSA-N Phe-Pro Chemical compound C([C@H]([NH3+])C(=O)N1[C@@H](CCC1)C([O-])=O)C1=CC=CC=C1 WEQJQNWXCSUVMA-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 6
- PPQRSMGDOHLTBE-UWVGGRQHSA-N Ser-Phe Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 PPQRSMGDOHLTBE-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 6
- LDEBVRIURYMKQS-UHFFFAOYSA-N Serinyl-Threonine Chemical compound CC(O)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CO LDEBVRIURYMKQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- HYLXOQURIOCKIH-VQVTYTSYSA-N Thr-Arg Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N HYLXOQURIOCKIH-VQVTYTSYSA-N 0.000 description 6
- GXDLGHLJTHMDII-WISUUJSJSA-N Thr-Ser Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O GXDLGHLJTHMDII-WISUUJSJSA-N 0.000 description 6
- WCRFXRIWBFRZBR-GGVZMXCHSA-N Thr-Tyr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 WCRFXRIWBFRZBR-GGVZMXCHSA-N 0.000 description 6
- UYKREHOKELZSPB-JTQLQIEISA-N Trp-Gly Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O)=CNC2=C1 UYKREHOKELZSPB-JTQLQIEISA-N 0.000 description 6
- AOLHUMAVONBBEZ-STQMWFEESA-N Tyr-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 AOLHUMAVONBBEZ-STQMWFEESA-N 0.000 description 6
- 108010047857 aspartylglycine Proteins 0.000 description 6
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 6
- YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N glycylglycine zwitterion Chemical compound [NH3+]CC(=O)NCC([O-])=O YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 description 6
- 108010015792 glycyllysine Proteins 0.000 description 6
- 108010085325 histidylproline Proteins 0.000 description 6
- 239000002609 media Substances 0.000 description 6
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 6
- 108010029020 prolylglycine Proteins 0.000 description 6
- 108010090894 prolylleucine Proteins 0.000 description 6
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 6
- 108010051110 tyrosyl-lysine Proteins 0.000 description 6
- LZDNBBYBDGBADK-KBPBESRZSA-N (2S)-2-[[(2S)-2-amino-3-methylbutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@@H](N)C(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 LZDNBBYBDGBADK-KBPBESRZSA-N 0.000 description 5
- MGHKSHCBDXNTHX-UHFFFAOYSA-N 4-amino-5-[(4-amino-1-carboxy-4-oxobutyl)amino]-5-oxopentanoic acid Chemical compound OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(O)=O MGHKSHCBDXNTHX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- DWBZEJHQQIURML-IMJSIDKUSA-N Asp-Ser Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O DWBZEJHQQIURML-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 5
- NPDLYUOYAGBHFB-UHFFFAOYSA-N Asparaginyl-Arginine Chemical compound NC(=O)CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCCNC(N)=N NPDLYUOYAGBHFB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- VBKIFHUVGLOJKT-UHFFFAOYSA-N Asparaginyl-Threonine Chemical compound CC(O)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC(N)=O VBKIFHUVGLOJKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 210000003719 B-Lymphocytes Anatomy 0.000 description 5
- YXQDRIRSAHTJKM-IMJSIDKUSA-N Cys-Ser Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YXQDRIRSAHTJKM-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 5
- RGTVXXNMOGHRAY-UHFFFAOYSA-N Cysteinyl-Arginine Chemical compound SCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCCNC(N)=N RGTVXXNMOGHRAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- NXTYATMDWQYLGJ-UHFFFAOYSA-N Cysteinyl-Leucine Chemical compound CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CS NXTYATMDWQYLGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- MRVYVEQPNDSWLH-UHFFFAOYSA-N Glutaminyl-Valine Chemical compound CC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(N)=O MRVYVEQPNDSWLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- KRBMQYPTDYSENE-BQBZGAKWSA-N His-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CNC=N1 KRBMQYPTDYSENE-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 5
- BCXBIONYYJCSDF-CIUDSAMLSA-N Ile-Val Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O BCXBIONYYJCSDF-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 5
- 108090001095 Immunoglobulin G Proteins 0.000 description 5
- UWBDLNOCIDGPQE-UHFFFAOYSA-N Isoleucyl-Lysine Chemical compound CCC(C)C(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCCCN UWBDLNOCIDGPQE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- SENJXOPIZNYLHU-IUCAKERBSA-N Leu-Arg Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N SENJXOPIZNYLHU-IUCAKERBSA-N 0.000 description 5
- 108010066427 N-valyltryptophan Proteins 0.000 description 5
- JWBLQDDHSDGEGR-DRZSPHRISA-N Phe-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 JWBLQDDHSDGEGR-DRZSPHRISA-N 0.000 description 5
- BXLYSRPHVMCOPS-UHFFFAOYSA-N Serinyl-Isoleucine Chemical compound CCC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CO BXLYSRPHVMCOPS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- VPZKQTYZIVOJDV-LMVFSUKVSA-N Thr-Ala Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O VPZKQTYZIVOJDV-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 5
- WXVIGTAUZBUDPZ-DTLFHODZSA-N Thr-His Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 WXVIGTAUZBUDPZ-DTLFHODZSA-N 0.000 description 5
- NLKUJNGEGZDXGO-XVKPBYJWSA-N Tyr-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 NLKUJNGEGZDXGO-XVKPBYJWSA-N 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 108010060035 arginylproline Proteins 0.000 description 5
- 108010040443 aspartyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 5
- 229920003013 deoxyribonucleic acid Polymers 0.000 description 5
- 201000004624 dermatitis Diseases 0.000 description 5
- 231100000406 dermatitis Toxicity 0.000 description 5
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 5
- 108010055341 glutamyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 5
- VPZXBVLAVMBEQI-VKHMYHEASA-N gly ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-VKHMYHEASA-N 0.000 description 5
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 5
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 5
- 108010000761 leucylarginine Proteins 0.000 description 5
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 5
- 108010056582 methionylglutamic acid Proteins 0.000 description 5
- 108010053725 prolylvaline Proteins 0.000 description 5
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 5
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 5
- 108010020532 tyrosyl-proline Proteins 0.000 description 5
- IOUPEELXVYPCPG-UHFFFAOYSA-N val-gly Chemical compound CC(C)C(N)C(=O)NCC(O)=O IOUPEELXVYPCPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- NJMYZEJORPYOTO-UHFFFAOYSA-N γ-glutamyl-Proline Chemical compound NC(=O)CCC(N)C(=O)N1CCCC1C(O)=O NJMYZEJORPYOTO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- ZJPGOXWRFNKIQL-JYJNAYRXSA-N (2S)-1-[(2S)-1-[(2S)-2-amino-3-phenylpropanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]pyrrolidine-2-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 ZJPGOXWRFNKIQL-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 4
- IAJFFZORSWOZPQ-SRVKXCTJSA-N (2S)-4-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-amino-4-methylpentanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O IAJFFZORSWOZPQ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 4
- KWBQPGIYEZKDEG-FSPLSTOPSA-N Asn-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O KWBQPGIYEZKDEG-FSPLSTOPSA-N 0.000 description 4
- QJMCHPGWFZZRID-UHFFFAOYSA-N Asparaginyl-Lysine Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC(N)=O QJMCHPGWFZZRID-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102100006400 CSF2 Human genes 0.000 description 4
- LOJYQMFIIJVETK-WDSKDSINSA-N Gln-Gln Chemical compound NC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O LOJYQMFIIJVETK-WDSKDSINSA-N 0.000 description 4
- YBTCBQBIJKGSJP-BQBZGAKWSA-N Glu-Pro Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O YBTCBQBIJKGSJP-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 4
- UQHGAYSULGRWRG-WHFBIAKZSA-N Glu-Ser Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O UQHGAYSULGRWRG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 4
- HHSJMSCOLJVTCX-UHFFFAOYSA-N Glutaminyl-Threonine Chemical compound CC(O)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(N)=O HHSJMSCOLJVTCX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- JBCLFWXMTIKCCB-VIFPVBQESA-N Gly-Phe Chemical compound NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 JBCLFWXMTIKCCB-VIFPVBQESA-N 0.000 description 4
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 4
- VHOLZZKNEBBHTH-YUMQZZPRSA-N His-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CNC=N1 VHOLZZKNEBBHTH-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 4
- WSDOHRLQDGAOGU-UHFFFAOYSA-N Histidinyl-Asparagine Chemical compound NC(=O)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 WSDOHRLQDGAOGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WKXVAXOSIPTXEC-UHFFFAOYSA-N Isoleucyl-Aspartate Chemical compound CCC(C)C(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC(O)=O WKXVAXOSIPTXEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- XWOBNBRUDDUEEY-UWVGGRQHSA-N Leu-His Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CNC=N1 XWOBNBRUDDUEEY-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 4
- OTXBNHIUIHNGAO-UWVGGRQHSA-N Leu-Lys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN OTXBNHIUIHNGAO-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 4
- FELJDCNGZFDUNR-WDSKDSINSA-N Pro-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 FELJDCNGZFDUNR-WDSKDSINSA-N 0.000 description 4
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- BECPPKYKPSRKCP-ZDLURKLDSA-N Thr-Glu Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O BECPPKYKPSRKCP-ZDLURKLDSA-N 0.000 description 4
- PDSLRCZINIDLMU-QWRGUYRKSA-N Tyr-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 PDSLRCZINIDLMU-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 4
- BNQVUHQWZGTIBX-IUCAKERBSA-N Val-His Chemical compound CC(C)[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@H](C([O-])=O)CC1=CN=CN1 BNQVUHQWZGTIBX-IUCAKERBSA-N 0.000 description 4
- WPSXZFTVLIAPCN-UHFFFAOYSA-N Valyl-Cysteine Chemical compound CC(C)C(N)C(=O)NC(CS)C(O)=O WPSXZFTVLIAPCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 4
- 230000000240 adjuvant Effects 0.000 description 4
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 4
- 229960000070 antineoplastic Monoclonal antibodies Drugs 0.000 description 4
- 108010009111 arginyl-glycyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 4
- 108010038633 aspartylglutamate Proteins 0.000 description 4
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 4
- 108010060199 cysteinylproline Proteins 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 4
- 108010081551 glycylphenylalanine Proteins 0.000 description 4
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 4
- 108010057821 leucylproline Proteins 0.000 description 4
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 4
- 238000006011 modification reaction Methods 0.000 description 4
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 4
- 229960000060 monoclonal antibodies Drugs 0.000 description 4
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 4
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 4
- RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N p-acetaminophenol Chemical compound CC(=O)NC1=CC=C(O)C=C1 RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 108010069117 seryl-lysyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 4
- 230000001225 therapeutic Effects 0.000 description 4
- 108010079202 tyrosyl-alanyl-cysteine Proteins 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- DOFAQXCYFQKSHT-SRVKXCTJSA-N (2S)-1-[(2S)-1-[(2S)-2-amino-3-methylbutanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]pyrrolidine-2-carboxylic acid Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(O)=O)CCC1 DOFAQXCYFQKSHT-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 3
- BQSLGJHIAGOZCD-CIUDSAMLSA-N (2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-amino-4-methylpentanoyl]amino]propanoyl]amino]-3-hydroxypropanoic acid Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O BQSLGJHIAGOZCD-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 3
- IGROJMCBGRFRGI-YTLHQDLWSA-N (2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-amino-3-hydroxybutanoyl]amino]propanoyl]amino]propanoic acid Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O IGROJMCBGRFRGI-YTLHQDLWSA-N 0.000 description 3
- PVMPDMIKUVNOBD-CIUDSAMLSA-N (3S)-3-[[(2S)-2-amino-4-methylpentanoyl]amino]-4-[[(1S)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O PVMPDMIKUVNOBD-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 3
- RFCVXVPWSPOMFJ-UHFFFAOYSA-N 2-[(2-azaniumyl-3-phenylpropanoyl)amino]-4-methylpentanoate Chemical compound CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 RFCVXVPWSPOMFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VWHGTYCRDRBSFI-ZETCQYMHSA-N 2-[[2-[[(2S)-2-amino-4-methylpentanoyl]amino]acetyl]amino]acetic acid Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)NCC(O)=O VWHGTYCRDRBSFI-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 3
- WUGMRIBZSVSJNP-UFBFGSQYSA-N Ala-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@@H](N)C)C(O)=O)=CNC2=C1 WUGMRIBZSVSJNP-UFBFGSQYSA-N 0.000 description 3
- RJUHZPRQRQLCFL-IMJSIDKUSA-N Asn-Asn Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O RJUHZPRQRQLCFL-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 3
- QCWJKJLNCFEVPQ-WHFBIAKZSA-N Asn-Gln Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O QCWJKJLNCFEVPQ-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 3
- KLKHFFMNGWULBN-VKHMYHEASA-N Asn-Gly Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O KLKHFFMNGWULBN-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- SJUXYGVRSGTPMC-UHFFFAOYSA-N Asparaginyl-Alanine Chemical compound OC(=O)C(C)NC(=O)C(N)CC(N)=O SJUXYGVRSGTPMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZSRSLWKGWFFVCM-WDSKDSINSA-N Cys-Pro Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O ZSRSLWKGWFFVCM-WDSKDSINSA-N 0.000 description 3
- OELDIVRKHTYFNG-UHFFFAOYSA-N Cysteinyl-Valine Chemical compound CC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CS OELDIVRKHTYFNG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KOSRFJWDECSPRO-WDSKDSINSA-N Glu-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O KOSRFJWDECSPRO-WDSKDSINSA-N 0.000 description 3
- KGVHCTWYMPWEGN-FSPLSTOPSA-N Gly-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CN KGVHCTWYMPWEGN-FSPLSTOPSA-N 0.000 description 3
- HTOOKGDPMXSJSY-STQMWFEESA-N His-Tyr Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)C1=CN=CN1 HTOOKGDPMXSJSY-STQMWFEESA-N 0.000 description 3
- 101000018983 IL4R Proteins 0.000 description 3
- RCFDOSNHHZGBOY-ACZMJKKPSA-N Ile-Ala Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O RCFDOSNHHZGBOY-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 3
- MUFXDFWAJSPHIQ-XDTLVQLUSA-N Ile-Tyr Chemical compound CC[C@H](C)[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@H](C([O-])=O)CC1=CC=C(O)C=C1 MUFXDFWAJSPHIQ-XDTLVQLUSA-N 0.000 description 3
- HFKJBCPRWWGPEY-BQBZGAKWSA-N L-arginyl-L-glutamic acid Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O HFKJBCPRWWGPEY-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 3
- UGTZHPSKYRIGRJ-YUMQZZPRSA-N Lys-Glu Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O UGTZHPSKYRIGRJ-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 3
- ATIPDCIQTUXABX-UWVGGRQHSA-N Lys-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN ATIPDCIQTUXABX-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 3
- IGRMTQMIDNDFAA-UHFFFAOYSA-N Lysyl-Histidine Chemical compound NCCCCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CN=CN1 IGRMTQMIDNDFAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- BXNGIHFNNNSEOS-UWVGGRQHSA-N Phe-Asn Chemical compound NC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 BXNGIHFNNNSEOS-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 3
- ZKQOUHVVXABNDG-IUCAKERBSA-N Pro-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 ZKQOUHVVXABNDG-IUCAKERBSA-N 0.000 description 3
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 3
- LZLREEUGSYITMX-UHFFFAOYSA-N Serinyl-Tryptophan Chemical compound C1=CC=C2C(CC(NC(=O)C(CO)N)C(O)=O)=CNC2=C1 LZLREEUGSYITMX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000002966 Serum Anatomy 0.000 description 3
- BWUHENPAEMNGQJ-ZDLURKLDSA-N Thr-Gln Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O BWUHENPAEMNGQJ-ZDLURKLDSA-N 0.000 description 3
- PWIQCLSQVQBOQV-AAEUAGOBSA-N Trp-Glu Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)=CNC2=C1 PWIQCLSQVQBOQV-AAEUAGOBSA-N 0.000 description 3
- LYMVXFSTACVOLP-ZFWWWQNUSA-N Trp-Leu Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C([O-])=O)=CNC2=C1 LYMVXFSTACVOLP-ZFWWWQNUSA-N 0.000 description 3
- DZHDVYLBNKMLMB-ZFWWWQNUSA-N Trp-Lys Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O)=CNC2=C1 DZHDVYLBNKMLMB-ZFWWWQNUSA-N 0.000 description 3
- NZCPCJCJZHKFGZ-UHFFFAOYSA-N Tryptophyl-Glutamine Chemical compound C1=CC=C2C(CC(N)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(O)=O)=CNC2=C1 NZCPCJCJZHKFGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010064997 VPY tripeptide Proteins 0.000 description 3
- GJNDXQBALKCYSZ-RYUDHWBXSA-N Val-Phe Chemical compound CC(C)[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@H](C([O-])=O)CC1=CC=CC=C1 GJNDXQBALKCYSZ-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 230000002009 allergen Effects 0.000 description 3
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 3
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 3
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 3
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 3
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M buffer Substances [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000020411 cell activation Effects 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 230000005591 charge neutralization Effects 0.000 description 3
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 3
- 230000002708 enhancing Effects 0.000 description 3
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 3
- 108010013768 glutamyl-aspartyl-proline Proteins 0.000 description 3
- STKYPAFSDFAEPH-LURJTMIESA-N gly-val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CN STKYPAFSDFAEPH-LURJTMIESA-N 0.000 description 3
- 108010000434 glycyl-alanyl-leucine Proteins 0.000 description 3
- 108010050475 glycyl-leucyl-tyrosine Proteins 0.000 description 3
- 102000024888 human IL4R protein Human genes 0.000 description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 3
- 108010053037 kyotorphin Proteins 0.000 description 3
- 108010044311 leucyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 3
- 108010091871 leucylmethionine Proteins 0.000 description 3
- 230000001264 neutralization Effects 0.000 description 3
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 3
- 108010024654 phenylalanyl-prolyl-alanine Proteins 0.000 description 3
- 108010073025 phenylalanylphenylalanine Proteins 0.000 description 3
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 3
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 3
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 3
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 3
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 3
- 230000001235 sensitizing Effects 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 108010080629 tryptophan-leucine Proteins 0.000 description 3
- 108010071635 tyrosyl-prolyl-arginine Proteins 0.000 description 3
- OPINTGHFESTVAX-UHFFFAOYSA-N γ-glutamyl-Arginine Chemical compound NC(=O)CCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCCNC(N)=N OPINTGHFESTVAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N (+)-methoprene Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YYSWCHMLFJLLBJ-ZLUOBGJFSA-N (2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-aminopropanoyl]amino]propanoyl]amino]-3-hydroxypropanoic acid Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YYSWCHMLFJLLBJ-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 2
- 229920000160 (ribonucleotides)n+m Polymers 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 1-[(1S,2R,3R,4S,5R,6R)-3-carbamimidamido-6-{[(2R,3R,4R,5S)-3-{[(2S,3S,4S,5R,6S)-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)-3-(methylamino)oxan-2-yl]oxy}-4-formyl-4-hydroxy-5-methyloxolan-2-yl]oxy}-2,4,5-trihydroxycyclohexyl]guanidine Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- XUUXCWCKKCZEAW-YFKPBYRVSA-N 2-[[(2S)-2-amino-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]acetic acid Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N XUUXCWCKKCZEAW-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- XMBSYZWANAQXEV-UHFFFAOYSA-N 4-amino-5-[(1-carboxy-2-phenylethyl)amino]-5-oxopentanoic acid Chemical compound OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 XMBSYZWANAQXEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000001015 Abdomen Anatomy 0.000 description 2
- HSPSXROIMXIJQW-BQBZGAKWSA-N Asp-His Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CNC=N1 HSPSXROIMXIJQW-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- RGGVDKVXLBOLNS-UHFFFAOYSA-N Asparaginyl-Tryptophan Chemical compound C1=CC=C2C(CC(NC(=O)C(CC(N)=O)N)C(O)=O)=CNC2=C1 RGGVDKVXLBOLNS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940098773 Bovine Serum Albumin Drugs 0.000 description 2
- 108091003117 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 229920002676 Complementary DNA Polymers 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- 108010092799 EC 2.7.7.49 Proteins 0.000 description 2
- 102000033147 ERVK-25 Human genes 0.000 description 2
- FYYSIASRLDJUNP-WHFBIAKZSA-N Glu-Asp Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O FYYSIASRLDJUNP-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- LSPKYLAFTPBWIL-BYPYZUCNSA-N Glu-Gly Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O LSPKYLAFTPBWIL-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- SXGAGTVDWKQYCX-BQBZGAKWSA-N Glu-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O SXGAGTVDWKQYCX-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- VHLZDSUANXBJHW-UHFFFAOYSA-N Glutaminyl-Phenylalanine Chemical compound NC(=O)CCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 VHLZDSUANXBJHW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XBGGUPMXALFZOT-VIFPVBQESA-N Gly-Tyr Chemical compound NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 XBGGUPMXALFZOT-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- 210000000987 Immune System Anatomy 0.000 description 2
- 102000004559 Interleukin-13 Receptors Human genes 0.000 description 2
- 108010017511 Interleukin-13 Receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 2
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 2
- VTJUNIYRYIAIHF-IUCAKERBSA-N Leu-Pro Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O VTJUNIYRYIAIHF-IUCAKERBSA-N 0.000 description 2
- CIOWSLJGLSUOME-BQBZGAKWSA-N Lys-Asp Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O CIOWSLJGLSUOME-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- 241000282560 Macaca mulatta Species 0.000 description 2
- 210000000138 Mast Cells Anatomy 0.000 description 2
- OGGRSJFVXREKOR-CIUDSAMLSA-N Met-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCSC OGGRSJFVXREKOR-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- PESQCPHRXOFIPX-RYUDHWBXSA-N Met-Tyr Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 PESQCPHRXOFIPX-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 108091007229 NSP3 Papain-like protease domain Proteins 0.000 description 2
- RVQDZELMXZRSSI-IUCAKERBSA-N Pro-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 RVQDZELMXZRSSI-IUCAKERBSA-N 0.000 description 2
- UEKYKRQIAQHOOZ-KBPBESRZSA-N Pro-Trp Chemical compound N([C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)[O-])C(=O)[C@@H]1CCC[NH2+]1 UEKYKRQIAQHOOZ-KBPBESRZSA-N 0.000 description 2
- SSJMZMUVNKEENT-IMJSIDKUSA-N Ser-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CO SSJMZMUVNKEENT-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 2
- UJTZHGHXJKIAOS-WHFBIAKZSA-N Ser-Gln Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O UJTZHGHXJKIAOS-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- 210000001744 T-Lymphocytes Anatomy 0.000 description 2
- LCPVBXOHXMBLFW-JSGCOSHPSA-N Trp-Arg Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)=CNC2=C1 LCPVBXOHXMBLFW-JSGCOSHPSA-N 0.000 description 2
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 2
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 2
- VBJHPXDIVMXHJU-UHFFFAOYSA-N Zeocin Chemical compound N=1C(C=2SC=C(N=2)C(=O)NCCCCN=C(N)N)CSC=1CCNC(=O)C(C(O)C)NC(=O)C(C)C(O)C(C)NC(=O)C(C(OC1C(C(O)C(O)C(CO)O1)OC1C(C(OC(N)=O)C(O)C(CO)O1)O)C=1[N]C=NC=1)NC(=O)C1=NC(C(CC(N)=O)NCC(N)C(N)=O)=NC(N)=C1C VBJHPXDIVMXHJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010084455 Zeocin Proteins 0.000 description 2
- 108010052670 arginyl-glutamyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 230000004540 complement-dependent cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 230000000875 corresponding Effects 0.000 description 2
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 2
- 230000000534 elicitor Effects 0.000 description 2
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000037240 fusion proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010077515 glycylproline Proteins 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 230000002998 immunogenetic Effects 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 108010073472 leucyl-prolyl-proline Proteins 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 238000002826 magnetic-activated cell sorting Methods 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cells Anatomy 0.000 description 2
- 230000003472 neutralizing Effects 0.000 description 2
- 230000003287 optical Effects 0.000 description 2
- 210000000056 organs Anatomy 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic Effects 0.000 description 2
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 108010071207 serylmethionine Proteins 0.000 description 2
- 231100000486 side effect Toxicity 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000002194 synthesizing Effects 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 108010061238 threonyl-glycine Proteins 0.000 description 2
- 210000001519 tissues Anatomy 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 229960001322 trypsin Drugs 0.000 description 2
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 2
- CXRCVCURMBFFOL-FXQIFTODSA-N (2S)-1-[(2S)-2-[[(2S)-2-azaniumylpropanoyl]amino]propanoyl]pyrrolidine-2-carboxylate Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O CXRCVCURMBFFOL-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- KAJLHCWRWDSROH-BZSNNMDCSA-N (2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]butanedioic acid Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 KAJLHCWRWDSROH-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- BUZMZDDKFCSKOT-CIUDSAMLSA-N (2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-amino-4-carboxybutanoyl]amino]-4-carboxybutanoyl]amino]pentanedioic acid Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O BUZMZDDKFCSKOT-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- DWYAUVCQDTZIJI-VZFHVOOUSA-N (2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-amino-3-hydroxybutanoyl]amino]propanoyl]amino]-3-hydroxypropanoic acid Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O DWYAUVCQDTZIJI-VZFHVOOUSA-N 0.000 description 1
- BUDNAJYVCUHLSV-ZLUOBGJFSA-N (3S)-3-[[(2S)-2-aminopropanoyl]amino]-4-[[(1S)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O BUDNAJYVCUHLSV-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- 238000005084 2D-nuclear magnetic resonance Methods 0.000 description 1
- PABVKUJVLNMOJP-UHFFFAOYSA-N 4-amino-5-[(1-carboxy-2-sulfanylethyl)amino]-5-oxopentanoic acid Chemical compound OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(CS)C(O)=O PABVKUJVLNMOJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010077692 7B10 monoclonal antibody Proteins 0.000 description 1
- 101710016959 ALPG Proteins 0.000 description 1
- 206010069754 Acquired gene mutation Diseases 0.000 description 1
- 229960000643 Adenine Drugs 0.000 description 1
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Natural products NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HJCMDXDYPOUFDY-WHFBIAKZSA-N Ala-Gln Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O HJCMDXDYPOUFDY-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- JQFZHHSQMKZLRU-IUCAKERBSA-N Arg-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N JQFZHHSQMKZLRU-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- XNSKSTRGQIPTSE-UHFFFAOYSA-N Arginyl-Threonine Chemical compound CC(O)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCCNC(N)=N XNSKSTRGQIPTSE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FFMIYIMKQIMDPK-BQBZGAKWSA-N Asn-His Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 FFMIYIMKQIMDPK-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- FYRVDDJMNISIKJ-UWVGGRQHSA-N Asn-Tyr Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 FYRVDDJMNISIKJ-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- DVUFTQLHHHJEMK-IMJSIDKUSA-N Asp-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O DVUFTQLHHHJEMK-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- PSZNHSNIGMJYOZ-WDSKDSINSA-N Asp-Arg Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N PSZNHSNIGMJYOZ-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- CPMKYMGGYUFOHS-FSPLSTOPSA-N Asp-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CPMKYMGGYUFOHS-FSPLSTOPSA-N 0.000 description 1
- MQLZLIYPFDIDMZ-UHFFFAOYSA-N Asparaginyl-Isoleucine Chemical compound CCC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC(N)=O MQLZLIYPFDIDMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010003816 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 210000004369 Blood Anatomy 0.000 description 1
- 102100002977 CDR1 Human genes 0.000 description 1
- YLCZVTIXDNJWBV-UHFFFAOYSA-N CN(C1=CC=C(C2=CC=C(N(C)C)C=C2)C=C1)C.CN(C1=CC=C(C2=CC=C(N(C)C)C=C2)C=C1)C Chemical compound CN(C1=CC=C(C2=CC=C(N(C)C)C=C2)C=C1)C.CN(C1=CC=C(C2=CC=C(N(C)C)C=C2)C=C1)C YLCZVTIXDNJWBV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 210000000170 Cell Membrane Anatomy 0.000 description 1
- 231100000023 Cell-mediated cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 206010057250 Cell-mediated cytotoxicity Diseases 0.000 description 1
- OOULJWDSSVOMHX-UHFFFAOYSA-N Cysteinyl-Methionine Chemical compound CSCCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CS OOULJWDSSVOMHX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 238000000018 DNA microarray Methods 0.000 description 1
- 230000036947 Dissociation constant Effects 0.000 description 1
- 231100000491 EC50 Toxicity 0.000 description 1
- 210000003743 Erythrocytes Anatomy 0.000 description 1
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 1
- 108091006004 Fc-tagged proteins Proteins 0.000 description 1
- JZDHUJAFXGNDSB-WHFBIAKZSA-N Glu-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O JZDHUJAFXGNDSB-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- YBAFDPFAUTYYRW-YUMQZZPRSA-N Glu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O YBAFDPFAUTYYRW-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- JZOYFBPIEHCDFV-UHFFFAOYSA-N Glutaminyl-Histidine Chemical compound NC(=O)CCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CN=CN1 JZOYFBPIEHCDFV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AJHCSUXXECOXOY-NSHDSACASA-N Gly-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)CN)C(O)=O)=CNC2=C1 AJHCSUXXECOXOY-NSHDSACASA-N 0.000 description 1
- 210000003714 Granulocytes Anatomy 0.000 description 1
- 101710007380 H1-3 Proteins 0.000 description 1
- CZVQSYNVUHAILZ-UWVGGRQHSA-N His-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 CZVQSYNVUHAILZ-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- 101710008343 IL4R Proteins 0.000 description 1
- 102100015968 IL4R Human genes 0.000 description 1
- 229940072221 IMMUNOGLOBULINS Drugs 0.000 description 1
- HZYHBDVRCBDJJV-HAFWLYHUSA-N Ile-Asn Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O HZYHBDVRCBDJJV-HAFWLYHUSA-N 0.000 description 1
- CNPNWGHRMBQHBZ-ZKWXMUAHSA-N Ile-Gln Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O CNPNWGHRMBQHBZ-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- 206010021425 Immune system disease Diseases 0.000 description 1
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 description 1
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 description 1
- 108090000539 Immunoglobulin Isotypes Proteins 0.000 description 1
- 102000004090 Immunoglobulin Isotypes Human genes 0.000 description 1
- 229940028885 Interleukin-4 Drugs 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- DRCKHKZYDLJYFQ-UHFFFAOYSA-N Isoleucyl-Threonine Chemical compound CCC(C)C(N)C(=O)NC(C(C)O)C(O)=O DRCKHKZYDLJYFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NTISAKGPIGTIJJ-IUCAKERBSA-N Leu-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C NTISAKGPIGTIJJ-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- 210000004698 Lymphocytes Anatomy 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 210000002540 Macrophages Anatomy 0.000 description 1
- 210000003593 Megakaryocytes Anatomy 0.000 description 1
- IMTUWVJPCQPJEE-IUCAKERBSA-N Met-Lys Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN IMTUWVJPCQPJEE-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- WEDDFMCSUNNZJR-WDSKDSINSA-N Met-Ser Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O WEDDFMCSUNNZJR-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 1
- 108010061543 Neutralizing Antibodies Proteins 0.000 description 1
- 229920001850 Nucleic acid sequence Polymers 0.000 description 1
- 206010025310 Other lymphomas Diseases 0.000 description 1
- GLUBLISJVJFHQS-VIFPVBQESA-N Phe-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 GLUBLISJVJFHQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- SHAQGFGGJSLLHE-BQBZGAKWSA-N Pro-Gln Chemical compound NC(=O)CC[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)[C@@H]1CCC[NH2+]1 SHAQGFGGJSLLHE-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- OCYROESYHWUPBP-CIUDSAMLSA-N Pro-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)[C@@H]1CCC[NH2+]1 OCYROESYHWUPBP-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- 102000013968 STAT6 Transcription Factor Human genes 0.000 description 1
- 108010011005 STAT6 Transcription Factor Proteins 0.000 description 1
- PBUXMVYWOSKHMF-WDSKDSINSA-N Ser-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO PBUXMVYWOSKHMF-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- 108010070144 Single-Chain Antibodies Proteins 0.000 description 1
- 102000005632 Single-Chain Antibodies Human genes 0.000 description 1
- 210000000952 Spleen Anatomy 0.000 description 1
- 229960005322 Streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 1
- IOWJRKAVLALBQB-IWGUZYHVSA-N Thr-Asp Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O IOWJRKAVLALBQB-IWGUZYHVSA-N 0.000 description 1
- CUTPSEKWUPZFLV-UHFFFAOYSA-N Threoninyl-Cysteine Chemical compound CC(O)C(N)C(=O)NC(CS)C(O)=O CUTPSEKWUPZFLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DXYQIGZZWYBXSD-UHFFFAOYSA-N Tryptophyl-Proline Chemical compound C=1NC2=CC=CC=C2C=1CC(N)C(=O)N1CCCC1C(O)=O DXYQIGZZWYBXSD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QJKMCQRFHJRIPU-XDTLVQLUSA-N Tyr-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 QJKMCQRFHJRIPU-XDTLVQLUSA-N 0.000 description 1
- AUEJLPRZGVVDNU-STQMWFEESA-N Tyr-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 AUEJLPRZGVVDNU-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- OYOQKMOWUDVWCR-RYUDHWBXSA-N Tyr-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OYOQKMOWUDVWCR-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- QZOSVNLXLSNHQK-UHFFFAOYSA-N Tyrosyl-Aspartate Chemical compound OC(=O)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 QZOSVNLXLSNHQK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001793 Wilcoxon signed-rank test Methods 0.000 description 1
- 238000002441 X-ray diffraction Methods 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003044 adaptive Effects 0.000 description 1
- OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N adenosine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 1
- 108010044940 alanylglutamine Proteins 0.000 description 1
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminum Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 1
- 230000003042 antagnostic Effects 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 108010062796 arginyllysine Proteins 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated Effects 0.000 description 1
- 201000009596 autoimmune hypersensitivity disease Diseases 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 238000004159 blood analysis Methods 0.000 description 1
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000000546 chi-square test Methods 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement Effects 0.000 description 1
- 230000001808 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 102000003675 cytokine receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010057085 cytokine receptors Proteins 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 230000001419 dependent Effects 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000010195 expression analysis Methods 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 238000010358 genetic engineering technique Methods 0.000 description 1
- KGNSGRRALVIRGR-UHFFFAOYSA-N gln-tyr Chemical compound NC(=O)CCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 KGNSGRRALVIRGR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000267 glycino group Chemical group [H]N([*])C([H])([H])C(=O)O[H] 0.000 description 1
- 230000003899 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 108010084389 glycyltryptophan Proteins 0.000 description 1
- 108010087823 glycyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 239000001963 growth media Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 1
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 1
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 1
- 108010031614 immunorphin Proteins 0.000 description 1
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000001976 improved Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000031146 intracellular signal transduction Effects 0.000 description 1
- 230000004068 intracellular signaling Effects 0.000 description 1
- 238000009114 investigational therapy Methods 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 108010027338 isoleucylcysteine Proteins 0.000 description 1
- 108010090333 leucyl-lysyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000003278 mimic Effects 0.000 description 1
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108010087904 neutravidin Proteins 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 244000052769 pathogens Species 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 1
- 230000000275 pharmacokinetic Effects 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000009522 phase III clinical trial Methods 0.000 description 1
- 108010073101 phenylalanylleucine Proteins 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000003449 preventive Effects 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 description 1
- 229940002612 prodrugs Drugs 0.000 description 1
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 description 1
- 238000002818 protein evolution Methods 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 230000000284 resting Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained Effects 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000003248 secreting Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 1
- 239000004017 serum-free culture media Substances 0.000 description 1
- 108010048818 seryl-histidine Proteins 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000000528 statistical test Methods 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating Effects 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 1
- 108010071097 threonyl-lysyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 230000002588 toxic Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 108010084932 tryptophyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 108010078580 tyrosylleucine Proteins 0.000 description 1
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 1
- XITLYYAIPBBHPX-UHFFFAOYSA-N γ-glutamyl-Isoleucine Chemical compound CCC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(N)=O XITLYYAIPBBHPX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Abstract
Настоящее изобретение относится к биотехнологии, в частности, антителу, связывающему человеческий IL-4R, его антигенсвязывающему фрагменту и его медицинскому применению. Предложены химерное антитело и гуманизированное антитело, включающие область CDR из антитела, связывающего человеческий IL-4R, и его антигенсвязывающего фрагмента, фармацевтическая композиция, включающая антитело, связывающее человеческий IL-4R, и его антигенсвязывающий фрагмент, и их применение в качестве лекарственного средства, лечащего аллергическое заболевание. Также предложено применение гуманизированного IL-4R-cвязывaющeгo антитела в получении лекарственного средства, используемого для лечения IL-4R-опосредованных заболеваний или болезней. Изобретение позволяет эффективно лечить IL-4R опосредованные заболевания. 10 н. и 7 з.п. ф-лы, 1 ил., 12 табл., 11 пр.
Description
Данная заявка заявляет приоритет по китайской заявке CN 201810971269.2, поданной 24 августа 2018 года, китайской заявке CN 201811472752.2, поданной 4 декабря 2018 года, китайской заявке CN 201910221311.3, поданной 22 марта 2019 года, и китайской заявке CN 201910401923.0, поданной 15 мая 2019 года. Каждая из заявок, как описано выше, включена в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.
Область изобретения
Настоящее раскрытие относится к антителу, которое связывается с человеческим IL-4R, и его антигенсвязывающему фрагменту. Настоящее раскрытие также относится к химерным антителам или гуманизированным антителам, содержащим области CDR (от англ. complementary determining region - область, определяющая комплементарность) из указанного выше антитела; и фармацевтической композиции, содержащей антитело, которое связывается с человеческим IL-4R, и его антигенсвязывающий фрагмент; а также его применению в качестве лекарственного средства для лечения аутоиммунного заболевания.
Предшествующий уровень техники
Аллергическое заболевание представляет собой серьезное патологическое состояние, включающее: аллергические реакции, не представляющие угрозы для жизни, которые могут быть излечены на протяжении некоторого периода времени; и аллергические заболевания, представляющие угрозу для жизни.
Современные способы лечения аллергий включают избегание аллергенов, фармакологическое лечение симптомов и предупреждение посредством иммунотерапии, специфичной в отношении аллергена.
Интерлейкин-4 (IL-4, также известный как фактор стимуляции В-клеток или BSF-1 (от англ. В cell stimulating factor-1)) охарактеризован в отношении его способности симулировать пролиферацию В-клеток в ответ на низкую концентрацию антител против поверхностного иммуноглобулина. Оказалось, что IL-4 имеет широкий диапазон биологических активностей, включая стимуляцию роста Т-клеток, тучных клеток, гранулоцитов, мегакариоцитов и эритроцитов и т.д. IL-4 индуцирует экспрессию МНС-II (от англ. major histocompatibility complex - главный комплекс гистосовместимости) в покоящихся В-клетках и усиливает секрецию иммуноглобулина IgE и IgG1 активированными В-клетками.
Биологическая активность IL-4 опосредована конкретными рецепторами IL-4 поверхности клетки (IL-4R). Рецептор IL-4 (IL-4R) состоит из 802 аминокислотных остатков, и IL-4R экспрессируется на поверхности Т-клеток, В-клеток, тимоцитов, клеток костного мозга, макрофагов и тучных клеток. Цепь a IL-4R также представляет собой компонент рецептора IL-13 (IL-13R), таким образом, IL-4R может также опосредовать биологическую активность IL-13. В качестве нового терапевтического способа, лекарственное средство или композицию, содержащую антагонист IL-4R, можно вводить субъекту перед, во время или после того, как субъект подвергается воздействию аллергенов или демонстрирует аллергические симптомы.
В настоящее время многие фармацевтические компании в разных странах разрабатывают моноклональные антитела против IL-4R для лечения разных родственных аллергических заболеваний. Родственные патентные заявки включают, например, WO 2010053751, WO 2001092340, WO 2008054606, WO 2014031610 и т.д. Среди них Дупилумаб, лекарственное средство против астмы, которое было разработано Sanofi Regeneron, одобрено для продажи на рынке при признаках дерматита. При признаках астмы клинические испытания, фаза III, также выполнены и вступили в фазу регистрации.
Существующие стратегии лечения не являются эффективными или имеют большие риски. Таким образом, в данной области все еще существует необходимость в предложении антител, которые бы связывались с человеческим IL-4R (hIL-4R) с высокой селективностью и высокой биологической активностью, с возможностью предложить лекарственное средство и композицию, а также терапевтические способы, которые могут лечить IL-4R-опосредованное аллергическое заболевание за счет связывания с hIL-4R с высокой аффинностью и нейтрализации биологической активности IL-4R (включая блокирование взаимодействия с IL-4R).
Краткое изложение сущности изобретения
В некоторых воплощениях в данном документе предложено антитело, которое специфично связывается с IL-4R (также называемое антителом, которое связывается с человеческим IL-4R, антителом против человеческого IL-4R), или его антигенсвязывающий фрагмент, в котором вариабельная область тяжелой цепи содержит:
(I) определяющие комплементарность области тяжелой цепи (HCDR, от англ. - heavy-chain complementarity determining region) HCDR1, HCDR2 и HCDR3, как показано в SEQ ID NO 3, SEQ ID NO 4 и SEQ ID NO 5, соответственно; или варианты HCDR с 3, 2 или 1 отличием(ями) в аминокислотах, в сравнении с HCDR1, HCDR2 и HCDR3, как показано в SEQ ID NO 3, 4 и 5, соответственно; или
(II) HCDR1, HCDR2 и HCDR3, как показано в SEQ ID NO 11, SEQ ID NO 12 и SEQ ID NO 13, соответственно; или варианты HCDR с 3, 2 или 1 отличием(ями) в аминокислотах, в сравнении с HCDR1, HCDR2 и HCDR3, как показано в SEQ ID NO 11, 12 и 13, соответственно;
и/или, вариабельная область легкой цепи содержит:
(I) определяющие комплементарность области легкой цепи (LCDR, от англ. - light-chain complementarity determining region) LCDR1, LCDR2 и LCDR3, как показано в SEQ ID NO 6, SEQ ID NO 7 и SEQ ID NO 8, соответственно; или варианты LCDR с 3, 2 или 1 отличием(ями) в аминокислотах, в сравнении с LCDR1, LCDR2 и LCDR3, как показано в SEQ ID NO 6, 7 и 8, соответственно; или
(II) LCDR1, LCDR2 и LCDR3, как показано в SEQ ID NO 14, SEQ ID NO 15 и SEQ ID NO 16, соответственно; или варианты LCDR с 3, 2 или 1 отличием(ями) в аминокислотах, в сравнении с LCDR1, LCDR2 и LCDR3, как показано в SEQ ID NO 14, 15 и 16, соответственно; или
(III) LCDR1, LCDR2 и LCDR3, как показано в SEQ ID NO 38, SEQ ID NO 7 и SEQ ID NO 40, соответственно; или варианты LCDR с 3, 2 или 1 отличием(ями) в аминокислотах, в сравнении с LCDR1, LCDR2 и LCDR3, как показано в SEQ ID NO 38, 7 и 40, соответственно; или
(IV) LCDR1, LCDR2 и LCDR3, как показано в SEQ ID NO 42, SEQ ID NO 39 и SEQ ID NO 8, соответственно; или варианты LCDR с 3, 2 или 1 отличием(ями) в аминокислотах, в сравнении с LCDR1, LCDR2 и LCDR3, как показано в SEQ ID NO 42, 39 и 8, соответственно.
В некоторых воплощениях антитело, которое связывается с человеческим IL-4R или его антигенсвязывающим фрагментом, содержит любое, выбранное из группы, состоящей из нижеследующего (I)-(IV):
(I) вариабельная область тяжелой цепи, содержащая HCDR1, HCDR2 и HCDR3, как показано в SEQ ID NO 3, SEQ ID NO 4 и SEQ ID NO 5, соответственно; и
вариабельная область легкой цепи, содержащая LCDR1, LCDR2 и LCDR3, как показано в SEQ ID NO 6, SEQ ID NO 7 и SEQ ID NO 8, соответственно;
(II) вариабельная область тяжелой цепи, содержащая HCDR1, HCDR2 и HCDR3, как показано в SEQ ID NO 11, SEQ ID NO 12 и SEQ ID NO 13, соответственно; и
вариабельная область легкой цепи, содержащая LCDR1, LCDR2 и LCDR3, как показано в SEQ ID NO 14, SEQ ID NO 15 и SEQ ID NO 16, соответственно;
(III) вариабельная область тяжелой цепи, содержащая HCDR1, HCDR2 и HCDR3, как показано в SEQ ID NO 3, SEQ ID NO 4 и SEQ ID NO 5, соответственно; и
вариабельная область легкой цепи, содержащая LCDR1, LCDR2 и LCDR3, как показано в SEQ ID NO 38, SEQ ID NO 7 и SEQ ID NO 40, соответственно; и
(IV) вариабельная область тяжелой цепи, содержащая HCDR1, HCDR2 и HCDR3, как показано в SEQ ID NO 3, SEQ ID NO 4 и SEQ ID NO 5, соответственно; и
вариабельная область легкой цепи, содержащая LCDR1, LCDR2 и LCDR3, как показано в SEQ ID NO 42, SEQ ID NO 39 и SEQ ID NO 8, соответственно.
В некоторых воплощениях антитела, которое связывается с человеческим IL-4R, или его антигенсвязывающего фрагмента, вариабельная область тяжелой цепи содержит:
(I) последовательность, как показано в SEQ ID NO 1, последовательность, обладающую по меньшей мере 70%-ной, 80%-ной, 90%-ной, 95%-ной, 98%-ной, 99%-ной идентичностью с SEQ ID NO 1; или
(II) последовательность, как показано в SEQ ID NO 9, или последовательность, обладающую по меньшей мере 70%-ной, 80%-ной, 90%-ной, 95%-ной, 98%-ной, 99%-ной идентичностью с SEQ ID NO 9; или
(III) последовательность, как показано в SEQ ID NO 43, или последовательность, обладающую по меньшей мере 70%-ной, 80%-ной, 90%-ной, 95%-ной, 98%-ной, 99%-ной идентичностью с SEQ ID NO 43;
и/или,
вариабельная область легкой цепи содержит:
(I) последовательность, как показано в SEQ ID NO 2, или последовательность, обладающую по меньшей мере 70%-ной, 80%-ной, 90%-ной, 95%-ной, 98%-ной, 99%-ной идентичностью с SEQ ID NO 2; или
(II) последовательность, как показано в SEQ ID NO 10, или последовательность, обладающую по меньшей мере 70%-ной, 80%-ной, 90%-ной, 95%-ной, 98%-ной, 99%-ной идентичностью c SEQ ID NO 10; или
(III) последовательность, как показано в SEQ ID NO 37, или последовательность, обладающую по меньшей мере 70%-ной, 80%-ной, 90%-ной, 95%-ной, 98%-ной, 99%-ной идентичностью с SEQ ID NO 37; или
(IV) последовательность, как показано в SEQ ID NO 41, или последовательность, обладающую по меньшей мере 70%-ной, 80%-ной, 90%-ной, 95%-ной, 98%-ной, 99%-ной идентичностью с SEQ ID NO 41.
В по меньшей мере одном воплощении антитела, которое связывается с человеческим IL-4R, или его антигенсвязывающим фрагментом, где:
вариабельная область тяжелой цепи представляет собой такую, как показано в SEQ ID NO 1, и вариабельная область легкой цепи представляет собой такую, как показано в SEQ ID NO 2; или
вариабельная область тяжелой цепи представляет собой такую, как показано в SEQ ID NO 9, и вариабельная область легкой цепи представляет собой такую, как показано в SEQ ID NO 10; или
вариабельная область тяжелой цепи представляет собой такую, как показано в SEQ ID NO 43, и вариабельная область легкой цепи представляет собой такую, как показано в SEQ ID NO 37; или
вариабельная область тяжелой цепи представляет собой такую, как показано в SEQ ID NO 43, и вариабельная область легкой цепи представляет собой такую, как показано в SEQ ID NO 41.
В некоторых воплощениях антитела, которое связывается с человеческим IL-4R, или его антигенсвязывающего фрагмента, где
вариабельная область тяжелой цепи содержит:
(I) последовательность, как показано в одной из SEQ ID NO: 25-27, или последовательность, обладающую по меньшей мере 70%-ной, 80%-ной, 90%-ной, 95%-ной, 98%-ной или 99%-ной идентичностью с одной из SEQ ID NO: 25-27; или
(II) последовательность, как показано в одной из SEQ ID NO: 31-33, или последовательность, обладающую по меньшей мере 70%-ной, 80%-ной, 90%-ной, 95%-ной, 98%-ной или 99%-ной идентичностью с одной из SEQ ID NO: 31-33;
и/или
вариабельная область легкой цепи содержит:
(I) последовательность, как показано в одной из SEQ ID NO: 28-30, или последовательность, обладающую по меньшей мере 70%-ной, 80%-ной, 90%-ной, 95%-ной, 98%-ной или 99%-ной идентичностью с одной из SEQ ID NO: 28-30; или
(II) последовательность, как показано в одной из SEQ ID NO: 34-36, или последовательность, обладающую по меньшей мере 70%-ной, 80%-ной, 90%-ной, 95%-ной, 98%-ной или 99%-ной идентичностью с одной из SEQ ID NO: 34-36.
В некоторых конкретных воплощениях вариабельная область тяжелой цепи представляет собой такую, как показано в одной из SEQ ID NO: 25-27, и вариабельная область легкой цепи представляет собой такую, как определено в одной из SEQ ID NO: 28-30.
В других конкретных воплощениях вариабельная область тяжелой цепи представляет собой такую, как показано в одной из SEQ ID NO: 31-33, и вариабельная область легкой цепи представляет собой такую, как показано в одной из SEQ ID NO: 34-36.
В некоторых воплощениях тяжелая цепь антитела, которое связывается с человеческим IL-4R, или его антигенсвязывающего фрагмента содержит:
(I) последовательность, как показано в SEQ ID NO 17, или последовательность, обладающую по меньшей мере 70%-ной, 80%-ной, 90%-ной, 95%-ной, 98%-ной или 99%-ной идентичностью с SEQ ID NO 17; или
(II) последовательность, как показано в SEQ ID NO 19, или последовательность, обладающую по меньшей мере 70%-ной, 80%-ной, 90%-ной, 95%-ной, 98%-ной или 99%-ной идентичностью с SEQ ID NO 19; или
(III) последовательность, как показано в SEQ ID NO 44, или последовательность, обладающую по меньшей мере 70%-ной, 80%-ной, 90%-ной, 95%-ной, 98%-ной или 99%-ной идентичностью с SEQ ID NO 44.
В некоторых воплощениях легкая цепь антитела, которое связывается с человеческим IL-4R, или его антигенсвязывающего фрагмента содержит:
(I) последовательность, как показано в SEQ ID NO 18, или последовательность, обладающую по меньшей мере 70%-ной, 80%-ной, 90%-ной, 95%-ной, 98%-ной или 99% идентичностью c SEQ ID NO 18; или
(II) последовательность, как показано в SEQ ID NO 20, или последовательность, обладающую по меньшей мере 70%-ной, 80%-ной, 90%-ной, 95%-ной, 98%-ной или 99%-ной идентичностью с SEQ ID NO 20; или
(III) последовательность, как показано в SEQ ID NO 45, или последовательность, обладающую по меньшей мере 90%-ной, 95%-ной, 98%-ной или 99%-ной идентичностью с SEQ ID NO 45; или
(IV) последовательность, как показано в SEQ ID NO 46, или последовательность, обладающую по меньшей мере 90%-ной, 95%-ной, 98%-ной или 99%-ной идентичностью c SEQ ID NO 46.
В по меньшей мере одном воплощении тяжелая цепь представляет собой такую, как определено в SEQ ID NO 17, и легкая цепь представляет собой такую, как показано в SEQ ID NO 18.
В еще одном воплощении тяжелая цепь представляет собой такую, как определено в SEQ ID NO 19, и легкая цепь представляет собой такую, как показано в SEQ ID NO 20.
В еще одном воплощении тяжелая цепь представляет собой такую, как определено в SEQ ID NO 44, и легкая цепь представляет собой такую, как показано в SEQ ID NO 45.
В еще одном воплощении тяжелая цепь представляет собой такую, как определено в SEQ ID NO 44, и легкая цепь представляет собой такую, как показано в SEQ ID NO 46.
В некоторых воплощениях антитело против IL-4R или его антигенсвязывающий фрагмент представляет собой мышиное антитело, химерное антитело, человеческое антитело, гуманизированное антитело или его фрагмент.
В некоторых конкретных воплощениях антитело против IL-4R или его антигенсвязывающий фрагмент является гуманизированным.
В некоторых воплощениях антитело против IL-4R или его антигенсвязывающий фрагмент включает фрагмент или их комбинацию, выбранную из группы, состоящей из нижеследующего:
- последовательность каркасной области (FR, от англ. - framework region), происходящая из IGKV3-11 *01 легкой цепи зародышевой линии человека;
- последовательность с обратной мутацией, обладающая по меньшей мере 95%-ной идентичностью с областью FR, происходящей из IGKV3-11*01 легкой цепи зародышевой линии человека. В некоторых конкретных воплощениях обратная мутация представляет собой любую мутацию, выбранную из группы, состоящей из L46P, L47W и F71Y или их комбинации.
В некоторых воплощениях антитело против IL-4R или его антигенсвязывающий фрагмент содержит фрагмент или их комбинацию, выбранную из группы, состоящей из нижеследующего:
- последовательность области FR, происходящая из IGHV3-48*01 тяжелой цепи зародышевой линии человека;
- последовательность с обратной мутацией, обладающая по меньшей мере 95%-ной идентичностью с областью FR, происходящей из IGHV3-48*01 тяжелой цепи зародышевой линии человека. В некоторых конкретных воплощениях обратная мутация представляет собой любую мутацию, выбранную из группы, состоящей из S49A, F67S и А93Т или их комбинации.
В некоторых воплощениях антитело против IL-4R или его антигенсвязывающий фрагмент содержит фрагмент или их комбинацию, выбранную из группы, состоящей из нижеследующего:
- последовательность области FR, происходящая из IGKV2D-29*01 легкой цепи зародышевой линии человека;
- последовательность с обратной мутацией, обладающая по меньшей мере 95%-ной идентичностью с областью FR, происходящей из IGKV2D-29*01 легкой цепи зародышевой линии человека. В некоторых конкретных воплощениях обратная мутация выбрана из группы, состоящей из M4L и/или V58I.
В некоторых воплощениях антитело против IL-4R или его антигенсвязывающий фрагмент дополнительно содержит фрагмент или их комбинацию, выбранную из группы, состоящей из нижеследующего:
- последовательность области FR, происходящая из IGHV1-2*02 тяжелой цепи зародышевой линии человека;
- последовательность с обратной мутацией, обладающая по меньшей мере 95%-ной идентичностью с областью FR, происходящей из IGHV1-2*02 тяжелой цепи зародышевой линии человека. В некоторых конкретных воплощениях обратная мутация представляет собой любую мутацию, выбранную из группы, состоящей из M69L, R71I, T73K и R94K, или их комбинации.
В некоторых воплощениях вариабельная область тяжелой цепи антитела против IL-4R или его антигенсвязывающего фрагмента содержит каркасные области тяжелой цепи человеческого IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4 их варианты. В некоторых конкретных воплощениях вариабельная область тяжелой цепи содержит каркасные области тяжелой цепи человеческого IgG1 или их варианты, например, вариабельная область тяжелой цепи, как показано в SEQ ID NO 43, или вариант вариабельной область тяжелой цепи, обладающий по меньшей мере 85%-ной идентичностью последовательностей с SEQ ID NO 43.
В некоторых воплощениях антитело против IL-4R или его антигенсвязывающий фрагмент содержит константную(ые) область(ти) человеческой цепи κ, λ или ее варианты, например, вариабельную область легкой цепи, как показано в SEQ ID NO 44, или вариант вариабельной области легкой цепи, обладающий по меньшей мере 85%-ной идентичностью последовательностей с SEQ ID NO 44.
В некоторых воплощениях гуманизированное антитело против IL-4R или его фрагмент, как описано выше, дополнительно содержит константную(ые) область(и) человеческого IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4 или их варианты.
В по меньшей мере одном воплощении антитело содержит константную(ые) область(и) тяжелой цепи человеческого IgG2 или IgG4. IgG2 или IgG4 не обладает токсичностью ADCC (от англ. antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity антителозависимая клеточная цитотоксичность). В качестве альтернативы, можно использовать IgG1 без токсичности ADCC (антителозависимая клеточная цитотоксичность) после аминокислотной мутации.
В по меньшей мере одном воплощении вариант содержит мутацию(и) константной области тяжелой цепи, выбранную(ые) из группы, состоящей из: мутации(й), которая(ые) уменьшает(ют) функцию ADCC, или вызывает(ют) потерю функции ADCC, как например, N297A, L234A, L235A в IgG1, но, не ограничиваясь ими.
В некоторых воплощениях антитело против IL-4R или его антигенсвязывающий фрагмент, где антитело представляет собой гуманизированное антитело, и последовательность тяжелой цепи представляет собой такую, как показано в SEQ ID NO 17, или обладает по меньшей мере 85%-ной идентичностью последовательностей с SEQ ID NO 17; последовательность легкой цепи представляет собой такую, как показано в SEQ ID NO 18, или обладает по меньшей мере 85%-ной идентичностью последовательностей с SEQ ID NO 18.
В некоторых воплощениях антитела против IL-4R или его антигенсвязывающего фрагмента, где антитело представляет собой гуманизированное антитело, и последовательность тяжелой цепи представляет собой такую, как показано в SEQ ID NO 19, или обладает по меньшей мере 85%-ной идентичностью последовательностей с SEQ ID NO 19; последовательность легкой цепи представляет собой такую, как показано в SEQ ID NO 20, или обладает по меньшей мере 85%-ной идентичностью последовательностей с SEQ ID NO 20.
В некоторых воплощениях антитела против IL-4R или его антигенсвязывающего фрагмента, где антитело представляет собой гуманизированное антитело, и последовательность тяжелой цепи представляет собой такую, как показано в SEQ ID NO 44, или обладает по меньшей мере 85%-ной идентичностью последовательностей с SEQ ID NO 44; последовательность легкой цепи представляет собой такую, как показано в SEQ ID NO 45, или обладает по меньшей мере 85%-ной идентичностью последовательностей с SEQ ID NO 45.
В некоторых воплощениях антитела против IL-4R или его антигенсвязывающего фрагмента, где антитело представляет собой гуманизированное антитело, и последовательность тяжелой цепи представляет собой такую, как показано в SEQ ID NO 44, или обладает по меньшей мере 85%-ной идентичностью последовательностей с SEQ ID NO 44; последовательность легкой цепи представляет собой такую, как показано в SEQ ID NO 46, или обладает по меньшей мере 85%-ной идентичностью последовательностей с SEQ ID NO 46.
В некоторых воплощениях предложено выделенное антитело против IL-4R или его антигенсвязывающий фрагмент, которое характеризуется тем, что оно конкурирует за связывание с человеческим IL-4R с любым антителом, которое связывается с человеческим IL-4R или его антигенсвязывающий фрагментом, как описано выше.
В некоторых воплощениях предложено биспецифичное антитело или мультиспецифичное антитело, которое содержит вариабельную область легкой цепи и/или вариабельную область тяжелой цепи антитела, которое связывается с человеческим IL-4R, или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящей заявке.
В другом воплощении предложено одноцепочечное антитело, которое содержит вариабельную область легкой цепи и/или вариабельную область тяжелой цепи антитела, которое связывается с человеческим IL-4R, или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящей заявке.
В некоторых воплощениях предложен полинуклеотид, который кодирует антитело, которое связывается с человеческим IL-4R, или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящей заявке.
В других воплощениях предложен полинуклеотид, который кодирует антитело, которое конкурентно связывается с IL-4R или его эпитопом с антителом, которое связывается с человеческим IL-4R, или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящей заявке.
В других воплощениях предложен полинуклеотид, который кодирует биспецифичное антитело, мультиспецифичное антитело или одноцепочечное антитело, как описано выше.
В некоторых воплощениях полинуклеотид по настоящей заявке представляет собой ДНК или РНК.
В некоторых воплощениях предложен вектор, содержащий полинуклеотид, как описано выше, который представляет собой эукариотический экспрессионный вектор, прокариотический экспрессионный вектор или вирусный вектор.
В некоторых случаях предложена клетка-хозяин, которая трансформирована вектором, как описано выше, и клетка-хозяин выбрана из группы, состоящей из прокариотической клетки или эукариотической клетки.
В по меньшей мере одном воплощении прокариотическая клетка выбрана из бактерий, таких как Е. coli,
В по меньшей мере одном воплощении эукариотическая клетка выбрана из группы, состоящей из клеток дрожжей или млекопитающего, таких как клетки Pichia pastoris или СНО (от англ. - Chinese Hamster Ovary - яичник китайского хомячка).
В некоторых воплощениях предложен способ выявления или измерения IL-4R, включающий стадию приведения образца в контакт с антителом против IL-4R или его антигенсвязывающим фрагментом, как описано выше.
В некоторых воплощениях предложен реагент для выявления или измерения человеческого IL-4R, и данный реагент содержит антитело против IL-4R или его антигенсвязывающий фрагмент, как описано выше.
В некоторых воплощениях предложен реагент для выявления или измерения человеческого IL-4R, содержащий антител, которое конкурентно связывается с IL-4R или его эпитопом с антителом, которое связывается с человеческим IL-4R, или его антигенсвязывающим фрагментом согласно настоящей заявке.
В некоторых воплощениях предложен реагент для выявления или измерения человеческого IL-4R, содержащий биспецифичное антитело, мультиспецифичное антитело и одноцепочечное антитело, как описано выше.
В некоторых воплощениях предложено диагностическое средство для осуществления диагностики заболевания, связанного с клетками позитивными в отношении человеческого IL-4R, причем данное диагностическое средство содержит указанное антитело против IL-4R или его антигенсвязывающий фрагмент, как описано выше. В еще одних воплощениях диагностическое средство содержит антитело, которое конкурентно связывается с IL-4R или его эпитопом с антителом, которое связывается с человеческим IL-4R, или его антигенсвязывающим фрагментом согласно настоящей заявке.
В некоторых воплощениях предложена фармацевтическая композиция, которая содержит:
- антитело, которое связывается с человеческим IL-4R, или его антигенсвязывающий фрагмент согласно настоящей заявке, и
- фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество, разбавитель или носитель.
В некоторых конкретных воплощениях единица дозы фармацевтической композиции составляет от 1 мг до 1000 мг антитела против IL-4R или его антигенсвязывающего фрагмента согласно настоящей заявке.
В некоторых конкретных воплощениях концентрация антитела против IL-4R или его антигенсвязывающего фрагмента, содержащаяся в фармацевтической композиции, составляет от 1 мг/л до 1000 мг/л.
В некоторых конкретных воплощениях фармацевтическая композиция содержит буфер, содержание буфера составляет от 1 мМ до 1000 мМ.
В некоторых воплощениях предложено применение антитела, которое связывается с человеческим IL-4R, или его антигенсвязывающего фрагмента, как описано выше, в получении лекарственного средства для лечения или предупреждения заболевания или патологического состояния, опосредованного IL-4R.
В некоторых воплощениях предложено применение фармацевтической композиции, как описано выше, в получении лекарственного средства для лечения или предупреждения заболевания или патологического состояния, опосредованного IL-4R.
В некоторых воплощениях предложено антитело, которое связывается с человеческим IL-4R, или его антигенсвязывающий фрагмент, как описано выше, для применения в лечении или предупреждении заболевания или патологического состояния.
В некоторых воплощениях предложена фармацевтическая композиция, описанная выше, для применения в лечении или предупреждении заболевания или патологического состояния.
В контексте настоящей заявки состояние или патологическое состояние могут представлять собой заболевание или патологическое состояния иммунной системы.
В некоторых воплощениях заболевание или патологическое состояние выбрано из группы, состоящей из следующих заболеваний или патологических состояний: астма, полипы носовой полости, хронический синусит, аллергическое кожное заболевание, эозинофильный эзофагит, хроническая обструктивная болезнь легких, аллергический ринит, артрит, воспалительное заболевание, аллергическая реакция, аутоиммунный лимфопролиферативный синдром, аутоиммунная гемолитическая анемия, пищевод Барретта, аутоиммунный увеит, туберкулез и нефропатия.
В по меньшей мере одном воплощении заболевание или патологическое состояние представляет собой астму.
В еще одних воплощениях заболевание или патологическое состояние представляет собой аллергическое кожное заболевание.
В некоторых воплощениях предложено антитело, которое связывается с человеческим IL-4R, или его антигенсвязывающий фрагмент, где указанный антигенсвязывающий фрагмент представляет собой Fab, Fv, scFv или F(ab')2.
В некоторых воплощениях предложен способ лечения и/или предупреждения заболевания или патологического состояния, опосредованного IL-4R, причем способ включает: введение терапевтически эффективного количества (или профилактически эффективного количества) антитела, которое связывается с человеческим IL-4R, или его антигенсвязывающего фрагмента, как описано выше, пациенту (или субъекту), нуждающемуся в этом.
В некоторых воплощениях предложен способ лечения и/или предупреждения заболевания или патологического состояния, опосредованного IL-4R, причем способ включает: введение терапевтически эффективного количества (или профилактически эффективного количества) фармацевтической композиции, как описано выше, пациенту (или субъекту), нуждающемуся в этом. В некоторых воплощениях предложен способ лечения и/или предупреждения иммунного заболевания, включающий введение терапевтически эффективного количества (или профилактически эффективного количества) антитела, которое связывается с человеческим IL-4R, или его антигенсвязывающего фрагмента или фармацевтической композиции, как описано выше, пациенту (или субъекту), нуждающемуся в этом.
Терминология
Для более легкого понимания настоящего раскрытия некоторые технические и научные термины конкретно определены ниже. Если в другом месте данного документа конкретно не определено иное, все другие технические и научные термины, используемые в данном документе, имеют значение, обычно подразумеваемое специалистом средней квалификации в области, к которой принадлежит настоящая заявка.
Термин «человеческий IL-4R (hIL-4R)» означает человеческий рецептор цитокинов, который специфично связывается с интерлейки ном-4 (IL-4), IL-4Rα.
В том виде, в котором они используются в данном документе, трехбуквенный код и однобуквенный код для аминокислот представляют собой такие, как описано в J. Biol. Chem, 243, (1968) р3558.
Термин «антитело» относится к иммуноглобулину, который представляет собой структуру четырех пептидных цепей, образованную посредством связывания двух идентичных тяжелых цепей и двух идентичных легких цепей дисульфидными связями. Разные константные области тяжелой цепи иммуноглобулина демонстрируют разные составы и порядок последовательности аминокислот, представляя, вследствие этого, разные виды антигенности. Соответственно, иммуноглобулины могут быть подразделены на пять категорий (или так называемых изотипов иммуноглобулинов), а именно IgM, IgD, IgG, IgA и IgE, их тяжелые цепи представляют собой цепь μ, цепь δ, цепь γ, цепь α и цепь ε, соответственно. В соответствии с аминокислотным составом шарнирной области, а также числом и локализацией дисульфидных связей тяжелой цепи, один и тот же тип lg может быть дополнительно подразделен на разные подкатегории; например, IgG может быть подразделен на IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4. Легкая цепь может быть подразделена на цепь κ или λ, с учетом разных константных областей. Каждый из пяти lg может иметь цепь κ или λ.
Легкая цепь антитела дополнительно содержит константную область легкой цепи, которая содержит цепь κ, λ человека или мыши, или ее варианты.
Тяжелая цепь антитела дополнительно содержит константную область тяжелой цепи, которая содержит IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 человека или мыши, или ее варианты.
Рядом с N-концом тяжелых цепей и легких цепей антитела, последовательность, примерно 110 аминокислот, сильно варьирует, которая известна как вариабельная область (область V); остальная часть аминокислотной последовательности рядом с С-концом относительно стабильна, которая известна как константная область (область С). Вариабельная область содержит три гипервариабельные области (HVR - от англ. hypervariable region) и четыре каркасные области (FR - от англ. framework region), имеющие относительно консервативную последовательность. Данные три гипервариабельные области определяют специфичность антитела, также известные как области, определяющие комплементарность (CDR). Каждая вариабельная область легкой цепи (LCVR - от англ. light chain variable region) и каждая вариабельная область тяжелой цепи (HCVR - от англ. heavy chain variable region) состоит из трех CDR и четырех FR, расположенных от N-конца к С-концу в следующем порядке: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 и FR4. Три CDR легкой цепи относятся к LCDR1, LCDR2 и LCDR3; три CDR тяжелой цепи относятся к HCDR1, HCDR2 и HCDR3.
Антитела включают мышиные антитела, химерные антитела, гуманизированные антитела и человеческие антитела, которые могут быть получены посредством рекомбинации, например, могут представлять собой рекомбинантные человеческие антитела, полученные посредством созревания аффинности.
Термин «рекомбинантное человеческое антитело» включает человеческие антитела, получаемые, экспрессируемые, создаваемые или выделяемые посредством метода генной инженерии, и данные используемые методики и способы хорошо известны в данной области, как например: (1) антитела, выделенные из животных, трансгенных в отношении гена иммуноглобулина человека, или животных, трансхромосомных в отношении гена иммуноглобулина человека (например, мышей), или полученной из них гибридомы; (2) антитела, выделенные из трансформированных клеток-хозяев, экспрессирующих данные антитела, таких как трансфектома; (3) антитела, выделенные из комбинаторной библиотеки рекомбинантных человеческих антител; и (4) антитела, получаемые, экспрессируемые, созданные или выделенные в результате сплайсинга последовательности гена иммуноглобулина человека до других ДНК-последовательностей или т.п. Такие рекомбинантные человеческие антитела содержат вариабельную область и константную область, такие области включают специфичные последовательности иммуноглобулина зародышевой линии человека, кодируемые генами зародышевой линии, а также включают последующие перестройки и мутации, такие как перестройки и мутации, происходящие во время созревания антитела.
Термин «мышиное антитело» в данном документе относится к моноклональным антителам против человеческого IL-4R, которые получают в соответствии со знанием и умениями в данной области. Во время получения объекту испытания инъецируют антиген IL-4R или полипептид, содержащий его эпитоп, и затем отделяют гибридому, экспрессирующую антитело, которое имеет желаемую последовательность или функциональные характеристики. В некоторых конкретных воплощениях мышиное антитело против IL-4R или его антигенсвязывающий фрагмент дополнительно сдержит константную(ые) область(и) легкой цепи мышиной цепи κ, λ или ее варианты, или дополнительно содержит константную(ые) область(и) тяжелой цепи мышиного IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4, или ее варианты.
Термин «человеческое антитело» включает антитела, имеющие вариабельную(ые) и константную(ые) область(ти) из последовательностей иммуноглобулина зародышевой линии человека. Человеческие антитела по настоящей заявке могут включать аминокислотные остатки, которые не кодируются последовательностями иммуноглобулина зародышевой линии человека (например, мутации, вводимые посредством случайного или сайт-специфичного мутагенеза in vitro или посредством соматической мутации in vivo). Однако, термин «человеческое антитело» не включает антитело, в котором последовательности CDR, происходящие из зародышевой линии млекопитающего другого вида (как например, мыши), были привиты на последовательность каркасной области человека (а именно, «гуманизированное антитело»).
Термин «гуманизированное антитело», также известное как антитело с привитыми CDR, относится к антителам, созданным посредством прививания последовательностей CDR вида, не являющегося человеческим, в каркас вариабельной области человеческого антитела. Гуманизированные антитела преодолевает сильный гуморальный ответ, вызываемый химерными антителами, которые несут большое количество гетерогенных белковых компонентов. Для того, чтобы избежать снижения активности наряду со снижением иммуногенности, вариабельная область человеческого антитела может подвергаться минимальной обратной мутации с сохранением активности.
Термин «химерное антитело» представляет собой антитело, которое образовано слиянием вариабельной области мышиного антитела с константной областью человеческого антитела, химерное антитело может смягчать иммунный ответ, вызываемый мышиным антителом. Для создания химерного антитела сначала создают гибридому, секретирующую специфичное мышиное моноклональное антитело, затем ген вариабельной области клонируют из клеток гибридомы мыши, затем при желании клонируют ген константной области человеческого антитела, ген вариабельной области мыши лигируют с геном константной области человека с образованием химерного гена, который может быть вставлен в человеческий вектор, и, наконец, молекула химерного антитела экспрессируется в эукариотической или прокариотической промышленной системе. Константная область человеческого антитела выбрана из константной(ых) области(ей) тяжелой цепи человеческого IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4, или ее вариантов, предпочтительно константной(ых) области(ей) тяжелой цепи человеческого IgG2 или IgG4, или IgG1, которая не обладает ADCC (антителозависимая клеточная цитотоксичность) после аминокислотной мутации.
Термин «антигенсвязывающий фрагмент» относится к Fab фрагменту, Fab' фрагменту, F(ab')2 фрагменту, обладающему антигенсвязывающей активностью, Fv фрагменту, scFv фрагменту, связывающемуся с человеческим IL-4R, а также полипептиду или белку, содержащему приведенные выше фрагменты. Указанный «антигенсвязывающий фрагмент» содержит одну или более CDR антитела согласно настоящей заявке. Fv фрагмент представляет собой минимальный фрагмент антитела, несущий все антигенсвязывающие сайты, он содержит вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, но без константной области. Обычно антитело Fv дополнительно содержит полипептидный линкер между доменами VH и VL и способно к образованию структуры, необходимой для связывания антигена. Также, разные линкеры могут быть использованы для соединения вариабельных областей двух антител с образованием полипептидной цепи, а именно одноцепочечного антитела или одноцепочечного Fv (scFv).
Термин «связывание с IL-4R» относится к способности взаимодействовать с человеческим IL-4R. Термин «сайт связывания антигена», в том виде, в котором он используется в данном документе, относится к трехмерным сайтам, распознаваемым антителом или антигенсвязывающим фрагментом по настоящей заявке.
Термин «эпитоп» относится к сайтам на антигене, которые специфично связываются с иммуноглобулином или антителом. Эпитоп может быть образован смежными аминокислотами или несмежными аминокислотами, которые были приближены, благодаря третичной укладке белка. Эпитоп, образованный смежными аминокислотами, обычно сохраняется после воздействия денатурирующего растворителя, тогда как эпитоп, образованный третичной укладкой, обычно утрачивается после обработки денатурирующими растворителями. Эпитопы обычно включают по меньшей мере 3-15 аминокислот в уникальной пространственной конформации. Способы определения эпитопа, связанного данным антителом, хорошо известны в данной области, включая анализ иммуноблоттинг и иммунопреципитация и т.п. Способы определения пространственной конформации эпитопа включают методики в данной области и методики, описанные в данном документе, такие как рентгеноструктурный анализ и двумерный ядерный магнитный резонанс и т.п.
Термины «специфично связывается с» и «селективно связывается с» относятся к связыванию антитела с эпитопом на заданном антигене. Обычно, антитело связывается с заданным антигеном с равновесной константой диссоциации (KD) приблизительно меньше чем 10-7 М или даже меньше, и аффинность антитела в отношении связывания с заданным антигеном по меньшей мере в два раза выше, чем в случае неспецифичных антигенов (таких как БСА (бычий сывороточный альбумин)), отличных от заданного антигена или близкородственных антигенов, как измерено на приборе посредством методики поверхностного плазмонного резонанса (SPR - от англ. surface plasmon resonance), где рекомбинантный человеческий IL-4R используют в качестве аналита, в то время как антитело используют в качестве лиганда. Термин «антитело, распознающее антиген» может использоваться в данном документе взаимозаменяемо с термином «антитело, специфично связывающееся с».
Термин «перекрестная реакция» относится к способности антитела по настоящей заявке связываться с IL-4R из отличающегося вида. Например, антитело по настоящей заявке, которое связывается с человеческим IL-4R, может также связываться с IL-4R из другого вида. Перекрестную реактивность измеряют посредством выявления специфичной реактивности с очищенным антигеном в анализах связывания (например, SPR и ELISA), или посредством выявления связывания или функционального взаимодействия с клетками, физиологически экспрессирующими IL-4R. Способы определения перекрестной реактивности включают стандартные анализы связывания, как описано в данном документе, такие как анализ поверхностный плазмонный резонанс (SPR) или проточная цитометрия.
Термин «нейтрализация» или «блокирование» антитела относится к антителу, которое связывается с hIL-4R и приводит к ингибированию биологической активности hIL-4 и/или hIL-3. Данное ингибирование биологической активности hIL-4 и/или IL-13 может оцениваться посредством измерения одного или более индикаторов биологической активности hIL-4/или hIL-13, хорошо известных в данной области, как например, hIL-4 и/или hIL-13-индуцированная активация клеток и связывание hIL-4 с hIL-4R, например, таких как в CN 103739711 А. Предполагается, что термин «ингибирование роста» (например, в отношении клеток) включает любое поддающееся измерению уменьшение в росте клеток.
Термины «вызывающий иммунный ответ» и «усиливающий иммунный ответ» используются взаимозаменяемо и относятся к иммунному ответу на стимуляцию конкретным антигеном (а именно, пассивному или адаптивному). В отношении CDC (от англ. complement-dependent cytotoxicity - комплемент-зависимая цитотоксичность) или ADCC, термин «вызывающий» относится к стимуляции конкретного механизма для прямого уничтожения клеток.
Термин «ADCC» (антителозависимая клеточная цитотоксичность) относится к клеткам, экспрессирующим Fc-рецептор, которые непосредственно уничтожают клетки-мишени, покрытые антителом, в результате распознавания Fc-сегмента антитела. Эффекторная функция ADCC антитела может ослабляться или исключаться в результате модификации Fc-сегмента IgG. Модификация относится к мутациям, выбранным из группы, состоящей из N297A, L234A и L235A в IgG1, химере IgG2/4 и F235E или L234A/E235A мутации в IgG4.
Слитый белок представляет собой белковый продукт, который совместно экспрессируется двумя генами посредством ДНК-рекомбинации. Рекомбинантный слитый белок внеклеточной области IL-4R и Fc представляет собой слитый белок, полученный посредством совместной экспрессии внеклеточной области IL-4R с фрагментом Fc антитела человека в результате рекомбинации ДНК. Внеклеточная область IL-4R относится к части белка IL-4R, экспрессируемой за пределами клеточной мембраны.
Способы получения и очистки антител и антигенсвязывающих фрагментов хорошо известны в данной области и могут быть найдены, например, в руководстве по лабораторным технологиям с антителами Колд-Спринг-Харбор, глава 5-8 и 15. Например, мыши могут быть иммунизированы человеческим IL-4R или его фрагментом, и затем полученные антитела могут быть ренатурированы, очищены и секвенированы с использованием общепринятых способов, хорошо известных в данной области. Антигенсвязывающие фрагменты можно также получать общепринятыми способами. Антитело или антигенсвязывающий фрагмент, описанные в данном документе, генетически конструируют с добавлением одной или более человеческих FR в CDR, не являющиеся человеческими. Последовательности FR зародышевой линии человека могут быть получены из ImMunoGeneTics (IMGT), через их веб-сайт http://imgt.cines.fr, или из The Immunoglobulin FactsBook, 2001ISBN012441351.
Сконструированное антитело или антигенсвязывающий фрагмент можно получать и очищать, используя традиционные способы. Например, последовательности кДНК, кодирующие тяжелую цепь и легкую цепь, могут быть клонированы и рекомбинированы в экспрессионный вектор GS. Затем клетки СНО можно подвергать стабильной трансфекции рекомбинантным экспрессионным вектором иммуноглобулина. Последовательность гуманизированного антитела в данном документе вставляют в соответствующий экспрессионный вектор посредством технологии молекулярного клонирования, и соответствующее гуманизированное антитело получают посредством экспрессии в экспрессионной системе на основе клеток HEK293. В качестве более рекомендованного способа в данной области экспрессионная система млекопитающего может приводить к гликозилированию антител, обычно на высоко консервативном N-конце в Fc области. Стабильные клоны могут быть получены в результате экспрессии антитела, специфично связывающегося с человеческим антигеном. Позитивные клоны могут быть размножены в культуральной среде, не содержащей сыворотку, для получения антител в биореакторах. Культуральная среда, в которую антитело секретировалось, может быть собрана и очищена общепринятыми методиками. Антитело может подвергаться фильтрованию и концентрированию с использованием стандартных методик. Растворимые смеси и мультимеры могут быть эффективно удалены стандартными методиками, включая молекулярное сито или ионный обмен. Полученный продукт будет сразу же заморожен, например, при -70°С, или может быть лиофилизирован.
Антитело по настоящему изобретению может представлять собой моноклональное антитело (mAb), которое относится к антителу, полученному из моноклональной линии, которая представляет собой эукариотическую, прокариотическую или фаговую клональную клеточную линию, но не ограничивается ими. Монокпональные антитела и их антигенсвязывающий фрагмент могут быть получены, например, посредством технологий на основе гибридомы, методов генной инженерии, технологий фагового дисплея, технологий синтеза (например, CDR-прививка) или других технологий, известных в данной области.
Антитела могут представлять собой моноспецифичные, биспецифичные или мультиспецифичные антитела. Мультиспецифичные антитела демонстрируют специфичность в отношении разных эпитопов пептида-мишени или могут также содержать антигенсвязывающие домены, которые демонстрируют специфичность в отношении более чем одного пептида-мишени. Человеческое антитело против IL-4R может быть связано с или совместно экспрессироваться с другой функциональной молекулой (такой как другой пептид или белок). Например, антитело или его фрагменты могут быть функционально (например, посредством химического связывания, слияния генов, нековалентного связывания или других способов) соединены с одной или более другими молекулами (например, другое антитело или антигенсвязывающий фрагмент) с получением биспецифичного или мультиспецифичного антитела, обладающего второй специфичностью связывания.
Термин «введение», «осуществление введения» и «обработка» при применении к животному, человеку, экспериментальному субъекту, клетке, ткани, органу или биологической жидкости, относится к приведению экзогенного фармацевтического, терапевтического, диагностического средства или композиции в контакт с животным, человеком, субъектом, клеткой, тканью, органом или биологической жидкостью. Термины «введение», «осуществление введения» и «обработка» могут относиться, например, к терапевтическим, фармакокинетическим, диагностическим, исследовательским и экспериментальным способам. Обработка клетки включает приведение реагента в контакт с клеткой, а также приведение реагента в контакт с жидкостью, где указанная жидкость находится в контакте с клеткой. Термины «введение», «осуществление введения» и «обработка» также означают обработку in vitro и ex vivo, например клетки, посредством использования реагента, диагностического средства, связывающей композиции или посредством использования другой клеткой. Термин «лечение», при применении к субъекту-человеку, субъекту ветеринарии или субъекту исследования, относится к терапевтическому лечению, профилактическим или превентивным мерам, к исследовательским, а также диагностическим применениям.
Термин «лечить» означает вводить терапевтическое средство (такое как композиция, содержащая любое из антител или их антигенсвязывающего фрагмента по настоящей заявке) внутрь или наружно пациенту (или субъекту), имеющему, с подозрением на то, что имеет, или чувствительному к одному или более симптомам заболевания, в отношении которого данное средство обладает известной терапевтической активностью. Типично терапевтическое средство вводят в количестве, эффективном для облегчения одного или более симптомов заболевания у пациента (или субъекта) или популяции, подлежащих лечению, или вызывая регрессию такого(их) симптома(ов) или ингибируя прогрессирование такого(их) симптома(ов) до какой-либо клинически измеряемой степени. Количество терапевтического средства, которое является эффективным для облегчения какого-либо определенного симптома заболевания (также называемое «терапевтически эффективным количеством»), может варьировать в зависимости от факторов, таких как течение заболевания, возраст и масса пациента (или субъекта), и способности лекарственного средства вызывать желаемый эффект у пациента (или субъекта). Был ли облегчен симптом заболевания можно оценить посредством любого клинического измерения, обычно используемого лечащими врачами или другими квалифицированными медицинскими работниками, для оценки тяжести или статуса прогрессирования того симптома. В то время как воплощение настоящей заявки (например, способ лечения или продукт производства) может не быть эффективным в облегчении исследуемого(ых) симптома(ов) заболевания у каждого пациента (или субъекта), оно должно облегчать исследуемый(е) симптом(ы) заболевания у статистически значимого числа пациентов (или субъектов), как определено любым статистическим критерием, известным в данной области, таким как t-критерий Стьюдента, критерий хи-квадрат, U-критерий Манна и Уитни, критерий Краскела - Уоллиса (Н-критерий), критерий Джонкхира-Терпстры и критерий Уилкоксона.
Термин «консервативная модификация» или «консервативное замещение или замена» означает замену аминокислот в белке другими аминокислотами, демонстрирующими похожие характеристики (например, заряд, размер боковых цепей, гидрофобность/гидрофильность, конформация и жесткость остова и т.д.), таким образом, что данную модификацию можно часто осуществлять без изменения биологической активности белка. Специалисты в данной области знают, что в общем одна аминокислотная замена в заменимой области полипептида существенно не изменяет биологическую активность (см., например, Watson et al. (1987) Molecular Biology of the Gene, The Benjamin / Cummings Pub. Co., page 224 (4th edition)). Кроме того, замена аминокислот с похожей структурой или функцией маловероятно нарушит биологическую активность.
Термин «эффективное количество» включает количество, достаточное для смягчения или предупреждения симптома или признака патологического состояния. Эффективное количество также означает количество, достаточное для обеспечения или облегчения диагностирования. Эффективное количество для конкретного субъекта или субъекта ветеринарии может варьировать в зависимости от факторов, таких как состояние, подлежащее лечению, общее здоровье субъекта, путь и доза введения, и тяжесть побочных эффектов. Эффективное количество может представлять собой максимальную дозу или протокол дозирования, которые позволяют избежать значимых побочных эффектов или токсичных эффектов.
Термин «экзогенный» относится к веществам, которые образуются вне организма, клетки или тела человека, в зависимости от контекста.
Термин «эндогенный» относится к веществам, которые продуцируются в клетке, организме или теле человека, в зависимости от контекста.
Термин «гомология» или «идентичность» относится к сходству последовательностей между двумя полинуклеотидными последовательностями или между двумя полипептидами. Когда положение в двух последовательностях, подлежащих сравнению, занято одной и той же мономерной субъединицей - основанием или аминокислотой - например, когда положение в каждой из двух молекул ДНК занято аденином, тогда данные молекулы являются гомологичными в данном положении. Процент идентичности двух последовательностей является функцией числа совпадающих/гомологичных положений, являющихся общими у данных двух последовательностей, деленного на число сравниваемых положений, и затем умноженного на 100%. Например, при оптимальном выравнивании последовательностей, если 6 из 10 положений в двух последовательностях совпадают или являются гомологичными, тогда данные две последовательности обладают 60%-ной идентичностью. В общем, сравнение проводят, когда две последовательности выравнивают с получением максимального процента идентичности. В том виде, в которой она используется в данном документе, фраза «по меньшей мере 85%-ная идентичность последовательностей» означает, что вариант обладает по меньшей мере 85%-ной гомологией с исходной последовательностью, две последовательности обладают по меньшей мере 85%-ной гомологией. В некоторых воплощениях, обладая по меньшей мере 86%-ной, 87%-ной, 88%-ной, 89%-ной, 90%-ной, 91%-ной, 92%-ной, 93%-ной, 94%-ной, 95%-ной, 96%-ной, 97%-ной, 98%-ной или 99%-ной гомологией последовательностей; в некоторых конкретных воплощениях, обладая 90%-ной, 95%-ной или 99%-ной или выше; в других конкретных воплощениях, обладая по меньшей мере 95%-ной гомологией последовательностей. Аминокислотная последовательность, обладающая по меньшей мере 85%-ной идентичностью последовательностей, включает одну или более аминокислотных делеций, вставок или мутаций по типу замены при сравнении с исходной последовательностью.
В том виде, в котором они используются в данном документе, выражения «клетка», «клеточная линия» и «клеточная культура» используются взаимозаменяемо, и все такие обозначения включают их потомство. Таким образом, слова «трансформант» и «трансформированная клетка» включают первичные исследуемые клетки и полученные из них культуры без учета числа переносов. Также следует понимать, что все потомство не может быть с точностью идентичным по содержанию ДНК вследствие целенаправленных или случайных мутаций. Также учитывается потомство с мутациями, полученное посредством скрининга, которое имеет такую же функцию или биологическую активность, как функция или биологическая активность исходно трансформированной клетки.
Термин «возможный» или «возможно» означает, что событие или ситуация, которая следует, может происходить, но не обязательно происходит. Описание включает примеры, в которых событие или ситуация происходит или не происходит. Например, фраза «возможно содержит 1-3 вариабельную(ые) область(ти) тяжелой цепи антитела» означает, что вариабельная область тяжелой цепи антитела с конкретной последовательностью может присутствовать, но не обязательно присутствует.
Термин «фармацевтическая композиция» относится к композиции, содержащей смесь одного или более антител или их антигенсвязывающих фрагментов, как описано в данном документе, или его(их) физиологически/фармацевтически приемлемой соли или пролекарства с другими химическими компонентами, а также дополнительными компонентами, такими как физиологически/фармацевтически приемлемые носители и вспомогательные вещества. Целью фармацевтической композиции является содействие введению в организм, облегчение поглощения активного вещества и оказание, таким образом, биологического действия.
Описание графических материалов
Фиг. 1: В мышиной модели дерматита после сенсибилизации ацетоном гуманизированные антитела hu25G7-A, hu25G7-B и референсное антитело Дупилумаб в качестве положительного контроля вводили подкожно дважды в неделю, в сутки 27 измеряли толщину уха мышей. Результаты показывают, что, в сравнении с контрольной группой, hu25G7-A, hu25G7-B и Дупилумаб может эффективно уменьшать толщину уха мышей, и hu25G7-B демонстрирует эффект, лучше, чем эффект Дупилумаба.
Подробное описание раскрытия
Далее в данном документе настоящее раскрытие дополнительно описано со ссылкой на примеры. Однако, объем настоящего раскрытия не ограничивается ими. В примерах, где не описаны конкретные условия, эксперименты обычно проводят в общепринятых условиях, как описано в руководстве по лабораторным технологиям с антителами и молекулярному клонированию, Колд-Спринг-Харбор, или в условиях, предложенных производителями сырья или продукта. Когда источник реагентов конкретным образом не приведен, реагенты представляют собой реагенты, имеющиеся в продаже.
Пример 1: Иммунизация мышей и тестирование
Рекомбинантный белок IL-4R человека с меткой his (h-IL-4R-his), рекомбинантный белок IL-4R с меткой his (m-IL-4R-his) и рекомбинантный белок IL-4R макака-резуса с меткой his (rhesus-IL-4R-his) синтезировали с помощью Acrobiosystems, экспрессировали в HEK293 и очищали.
Рекомбинантный белок человеческого IL-4R с Fc-меткой человека (h-IL-4R-Fc) конструировали, экспрессировали и очищали самостоятельно. Очищенный белок использовали в каждом из следующих экспериментов в разделе Примеры.
Число и положение аминокислотных остатков CDR в областях VL и VH антитела или антигенсвязывающего фрагмента в данном примере соответствуют известной системе нумерации Kabat (LCDR1-3, HCDR2-3) или соответствуют системе нумерации Kabat и CHOTHIA (ABM) (HCDR1).
Моноклональные антитела против человеческого IL4R получали посредством иммунизации мышей. В эксперименте использовали самок мышей C57BL/6 в возрасте 6-8 недель (JOINN Laboratories (Suzhou) Research Center Co., Ltd., номер лицензии на животноводство: 201503052).
Среда кормления: уровень SPF (от англ. Specified Pathogen Free - свободный от патогенной флоры). Сразу после приобретения мышей их содержали в лаборатории в течение 1 недели, адаптировали к циклу света и темноты 12/12-часов, при температуре 20-25°С с влажностью 40-60%. Адаптированных мышей делили на 3 клетки, по 5 в каждой клетке. Антиген иммунной системы представлял собой рекомбинантный белок человеческого IL-4R с Fc-меткой (h-IL4R-Fc, концентрация 0,73 мг/мл). Антиген эмульгировали посредством адъюванта Фрейнда (sigma, кат. №F5881): полный адъювант Фрейнда (CFA, Pierce, кат. №77140) использовали для первой иммунизации, и адъювант нуклеиновой кислоты (CpG, Shanghai Sangon) и алюминиевый адъювант (Alum, Thermo, кат.№77161) использовали для остальной части повторной иммунизации.
В сутки 0, 70 мкг/мышь эмульгированного антигена инъецировали внутрибрюшинно (в.б.). В сутки 14, 28, 42, 56, 77, в соответствии с массой спины и увеличением объема живота, антиген инъецировали в спину и внутрибрюшинно (каждая инъекция 0,1 мл). Осуществляли забор крови в сутки 21, 35, 49, 63 и 84 для анализа крови. Анализ ELISA (от англ. enzyme-linked immunosorbent assay - твердофазный иммуноферментный анализ) проводили на мышиной сыворотке в соответствии с Примером анализа 1 для определения титра антител в мышиной сыворотке. После четвертой иммунизации мышей с высоким титром антител в сыворотке и титром, имеющим тенденцию к выходу на плато, отбирали для слияния спленоцитов; за трое суток до слияния проводили повторную иммунизацию; раствор антигена, полученный посредством использования фосфатного буфера, инъецировали внутрибрюшинно в количестве 10 мкг/мышь. Используя оптимизированные ПЭГ-опосредованные стадии слияния, лимфоциты селезенки и миеломные клетки, клетки Sp2/0 (АТСС® CRL-8287™) сливали с получением гибридом.
Пример 2: Анализ ELISA и осуществление скрининга антител
1. Анализ связывания ELISA:
Анализ ELISA использовали для выявления свойств связывания антител против IL-4R. Использовали планшет для микротитрования, непосредственно покрытый рекомбинантным белком IL-4R с меткой his, антитело добавляли в каждую лунку и затем активности связывания данного антитела с антигеном выявляли посредством добавления вторичного антитела (антитело против первичного антитела Fc, конъюгированное с HRP (от англ. horseradish peroxidase - пероксидаза хрена)), и субстрата HRP ТМВ (от англ. tetramethylbenzidine - тетраметилбензидин).
Белком IL-4R-his человека или макака-резуса покрывали 96-луночный планшет для микротитрования, 100 мкл на лунку в концентрации 0,5 мкг/мл, и инкубировали в течение ночи при 4°С. Планшет промывали промывочным раствором три раза, 250 мкл/лунка. Каждую стадию промывки проводили при встряхивании на протяжении 10 секунд для обеспечения достаточной промывки. 200 мкл/лунка блокирующего раствора добавляли и инкубировали при комнатной температуре в течение 2 часов. Планшет промывали промывочным раствором три раза, 250 мкл/лунка. Каждую стадию промывки проводили при встряхивании в течение 10 секунд для обеспечения достаточной промывки. 100 мкл антитела против IL-4R, подлежащего анализу, разведенного разбавителем, добавляли в каждую лунку и инкубировали при комнатной температуре в течение 1 часа. Планшет промывали промывочным раствором три раза, 250 мкл/лунка. 100 мкл вторичного антитела козы против человеческого IgG, меченного HRP, (разведенного в соотношении 1:20000 разбавителем) добавляли в каждую лунку и инкубировали при комнатной температуре в течение 1 часа. Планшет промывали промывочным раствором три раза, 250 мкл/лунка. 100 мкл ТМВ добавляли в каждую лунку, и реакцию поддерживали в течение 15 минут в темноте. 50 мкл 0,16 М/л серной кислоты добавляли в каждую лунку. Значение OD (от англ. optical density - оптическая плотность) при 450 нм получали посредством микропланшет-ридера Thermo MultiSkanFc, рассчитывали значение ЕС50 (от англ. half maximal effective concentration - полумаксимальная эффективная концентрация) связывания антитела против IL-4R с IL-4R. 2. Анализ блокирования ELISA:
В данном анализе посредством эксперимента по блокированию in vitro, выявляли блокирование связывания человеческого IL-4R с человеческим IL-4 выбранными антителами против человеческого IL-4R. Конкретно, рекомбинантным белком IL-4R с меткой Fc покрывали 96-луночный планшет для микротитрования, антитело, которое связывает человеческий IL-4R, добавляли для полного связывания с эпитопом, и затем добавляли IL-4 (Biolegend, кат.№574004), антитело против IL-4, конъюгированное с биотином, и нейтравидин-HRP (Pierce, кат.№31001) использовали для выявления того, может ли IL-4 связываться с IL-4R, значение IC50 (от англ. half maximal inhibitory concentration - концентрация полумаксимального ингибирования) рассчитывали в отношении блокирования антителом против IL-4R связывания IL-4/IL-4R.
Человеческим белком IL-4R-Fc покрывали 96-луночный планшет для микротитрования, 100 мкл на лунку в концентрации 0,5 мкг/мл и инкубировали в течение ночи при 4°С. Планшет промывали промывочным буфером три раза, 250 мкл на лунку. Каждую стадию промывки проводили при встряхивании в течение 10 секунд для обеспечения достаточной промывки. 200 мкл/лунка блокирующего раствора добавляли и инкубировали при комнатной температуре в течение 2 часов. Планшет промывали промывочным раствором три раза, 250 мкл на лунку. Каждую стадию промывки проводили при встряхивании в течение 10 секунд для обеспечения достаточной промывки. 100 мкл антитела против IL-4R, предназначенного для анализа, разведенного разбавителем, добавляли в каждую лунку и инкубировали при комнатной температуре в течение 1 часа. Планшет промывали промывочным раствором три раза, 250 мкл/лунка. 100 мкл разведенного IL-4 добавляли в каждую лунку и инкубировали при комнатной температуре в течение 1 часа. Планшет промывали промывочным раствором три раза. 100 мкл разведенного антитела против IL-4, конъюгированного с биотином, добавляли в каждую лунку и инкубировали при комнатной температуре в течение 1 часа. Планшет промывали промывочным раствором три раза. Нейтравидин, меченный HRP (разведенный в соотношении 1:5000 разбавителем), добавляли и инкубировали при комнатной температуре в течение 1 часа. Планшет промывали промывочным раствором три раза, 250 мкл/лунка. 100 мкл ТМВ добавляли в каждую лунку, и реакцию поддерживали в течение 15 минут в темноте. 50 мкл 0,16 М/л серной кислоты добавляли в каждую лунку. Значение OD при 450 нм получали посредством микропланшет-ридера Thermo MultiSkanFc, значение IC50 рассчитывали в отношении антитела против IL-4R, блокирующего связывание IL-4R с IL-4.
Пример 3: Эксперимент по оценки активности репортерных клеток с использованием антител, которые связываются с человеческим IL-4R
Клетки HEK-Blue IL-4 приобретали в Invivogen (кат. №hkb-stat6). Клетки стабильно трансфицировали геном человеческого IL-4R и STAT6-опосредованным геном SEAP (от англ. secreted embryonic alkaline phosphatase - секретируемая эмбриональная щелочная фосфатаза). SEAP, секретируемую в супернатант, можно выявлять посредством субстрата SEAP QUANTI-Blue для характеристики уровня активации IL-4R-сигнального пути.
В данном эксперименте выявляли активацию клеток HEK-Blue IL-4, и клеточную активность in vitro антитела против IL-4R оценивали в соответствии с IC50. Клетки HEK-Blue IL-4 культивировали в среде DMEM (от англ. Dulbecco modified Eagle's medium -среда Иглу, модифицированная по Дульбекко), содержащей 10% FBS (от англ. Fetal Bovine Serum - фетальная телячья сыворотка), 100 мкг/мл Зеоцина (Invivogen, кат. № ant-zn-05) и 10 мкг/мл бластицидина (Invivogen, кат. № ant-bl-05); клетки субкультивировали 2-3 раза в неделю, в соотношении 1:5 или 1:10. Для субклонирования среду удаляли, и слой клеток промывали 5 мл 0,25% трипсина, затем трипсин удаляли, клетки помещали в инкубатор на 3 - 5 минут, и свежую среду добавляли для ресуспендирования клеток. 100 мкл клеточной суспензии добавляли в 96-луночный планшет для культуры клеток, при плотности 5×105 клеток/мл, среда представляла собой DM ЕМ, содержащую 10% FBS, 100 мкг/мл Зеоцина и 30 мкг/мл бластицидина, и 100 мкл стерильной воды добавляли по всему 96-луночному планшету. Планшет для культуры инкубировали в инкубаторе в течение 24 часов (37°С, 5% CO2). Как только клетки прилипали к стенке, 100 мкл серийно разведенного антитела, подлежащего анализу, добавляли в каждую лунку. Планшет для культуры инкубировали в инкубаторе в течение 20-24 часов (37°С, 5% CO2). 20 мкл клеточного супернатанта переносили из каждой лунки в новый 96-луночный плоскодонный планшет. 180 мкл раствора субстрата QUANTI-Blue добавляли, и планшет для культуры инкубировали в инкубаторе в темноте в течение 1-3 часов. Поглощение при 620 нм измеряли посредством микропланшет-ридера (Thermo MultiSkanFc).
Пример 4: Антитело, которое связывается с человеческим IL-4R, ингибирует пролиферацию клеток TF-1
Клетки TF-1 (АТСС CRL-2003) представляют собой клетки лимфомы, которые экспрессируют IL-4R и являются чувствительными к цитокинам, таким как IL-4/IL-13. IL-4 может стимулировать пролиферацию клеток TF-1 в отсутствии GM-CSF (от англ. Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor - Гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор). Нейтрализующие активности разных антител против IL-4R сравнивали в эксперименте посредством добавления нейтрализующих антител для блокирования пути IL-4 и для ингибирования пролиферации клеток TF-1. Клетки TF-1 культивировали в среде RPMI1640, содержащей 10% FBS, 2 нг/мл GM-CSF (R&D, кат. №215-GM-010); клетки субкультивировали 2-3 раза в неделю в соотношении 1:10. 100 мкл клеточной суспензии добавляли в 96-луночный планшет для культуры клеток, при плотности 2×105 клеток/мл, среда представляла собой среду RPMI1640, содержащую 10% FBS, и 100 мкл стерильной воды добавляли по всему 96-луночному планшету. 50 мкл серийно разведенного антитела, подлежащего анализу, и 50 мкл IL-4 (R&D, кат. №204-IL-050) в конечной концентрации 0,7 нг/мл добавляли в каждую лунку, планшет для культуры инкубировали в инкубаторе в течение 72 часов (37°С, 5% CO2). Когда культивирование заканчивали, пролиферацию клеток выявляли, используя набор CTG (Promega, кат. №G7572).
Пример 5:
Эксперименты по аффинности и кинетике связывания in vitro Прибор Biacore, GE использовали для определения аффинности связывания гуманизированного антитела против человеческого IL-4R с человеческим IL-4R.
Человеческое антитело против захватывающего антитела ковалентно связывалось с биосенсорным чипом СМ5 прибора Biacore (Biacore Х100, GE) в соответствии со способом, описанным в инструкции набора человеческих антител против захватывающего антитела (кат. №BR-1008-39, GE), таким образом, некоторое количество антитела, подлежащего анализу, захватывалось за счет аффинности; серия градиентов концентраций антигенов IL-4R (антигены IL-4R, приобретенные у Acrobiosystems, кат .№ILR-H5221) пропускалась через поверхность чипа, сигналы взаимодействия выявляли в реальном времени, используя приборы Biacore (Biacore Х100, GE), с получением кривых связывания и диссоциации. После диссоциации каждый цикл завершался, биочип очищали и регенерировали посредством раствора для регенерации, предоставленного внутри набора человеческих антител против захватывающего антитела. Набор для связывания аминогрупп, используемый в эксперименте, приобретали у GE (кат. №BR-1000-50, GE), и буфер представлял собой буферный раствор HBS-EP+10× (кат. №BR-1006-69, GE), разбавленный д.и. водой (деионизированной водой) до 1× (рН 7,4).
Данные, полученные из эксперимента, аппроксимировали с помощью (1:1) модели связывания, используя программное обеспечение для оценки 2.0 GE BiacoreX100, и получали значение аффинности.
Пример 6: Последовательность и получение антител
Посредством эксперимента по ELISA связывания (ELISA связывания человеческого IL-4R-his) и эксперимента по ELISA блокирования (ELISA блокирования hIL-4/IL-4R) в приведенном выше Примере 2, анализа ингибирования активации клеток HEK293-Blue IL-4, стимулированных IL-4 в Примере 3, и анализа ингибирования пролиферации клеток TF-1, стимулированных IL-4 в Примере 4, отбирали две линии моноклональных клеток гибридомы, демонстрирующие наилучшую активность in vitro. Результаты анализа активности показаны в Таблице 2.
Отбирали линии моноклональных клеток гибридомы 25G7 и 7В10 с наилучшей активностью in vitro, и оттуда клонировали последовательность моноклонального антитела. Способ клонирования последовательности из гибридомы выглядит следующим образом. Клетки гибридомы собирали в логарифмическую фазу роста, РНК выделяли посредством тризола (Invitrogen, 15596-018) (в соответствии с инструкциями к набору), проводили обратную транскрипцию (обратная транскриптаза PrimeScript™, Takara, кат.№2680А). кДНК, полученную в результате обратной транскрипции, амплифицировали посредством ПЦР (полимеразная цепная реакция), используя набор праймеров к мышиному lg (Novagen, ТВ326 Rev. В0503), и затем доставляли в компанию, занимающуюся секвенированием, для секвенирования, и анализировали полученную последовательность антитела.
Последовательности вариабельной области тяжелой цепи и легкой цепи мышиного моноклонального антитела 25G7 выглядят следующим образом:
HCVR 25G7
LCVR 25G7
Последовательности CDR, содержащиеся в них, показаны в Таблице 3.
Последовательности вариабельной области тяжелой цепи и легкой цепи мышиного моноклонального антитела 7В10 выглядят следующим образом:
HCVR 7В10
Последовательности CDR, содержащиеся в них, показаны в Таблице 4.
Полученную последовательность вариабельной области связывали с последовательностью константной области человека с получением последовательности химерного антитела человека-мыши. Используя технологию молекулярного клонирования, последовательность химерного антитела вставляли в соответствующий экспрессионный вектор. Используя экспрессионную систему клеток HEK293, могут быть получены химерные антитела человека-мыши 25G7-C и 7В10-С.
Согласно способу Примеров 2-5, очищенное химерное антитело анализировали в отношении активности in vitro. Данные показаны в Таблице 5. Результаты показали, что в случае антитела 25G7-C, и блокирующее действие на связывание IL-4 и ингибирующее действие на пролиферацию клеток были значимо лучше, чем блокирующее действие на связывание IL-4 и ингибирующее действие на пролиферацию клеток референсного антитела Дупилумаб (синтезированного в соответствии с WHO Drug Information, Vol. 26, No. 4, 2012 synthesis).
Пример 7: Эксперимент по гуманизации мышиного антитела
Две линии (25G7 и 7В10), демонстрирующие самую сильную функциональную активность среди полученных мышиных антител, подвергали гуманизации. На основе полученной типичной структуры мышиного антитела VH/VLCDR, последовательности вариабельной области тяжелой, легкой цепей выравнивали посредством базы данных по антителам зародышевой линии, с получением матрицы зародышевой линии человека с высокой гомологией. Среди них, каркасная область легкой цепи зародышевой линии человека происходит из генов легкой цепи каппа человека, предпочтительно матриц IGKV3-1T01 (SEQ ID NO 22, в случае антитела 25G7) и IGKV2D-29*01 (SEQ ID NO 24, в случае антитела 7В10) легкой цепи зародышевой линии человека. Каркасная область тяжелой цепи зародышевой линии человека происходит из тяжелой цепи человека, предпочтительно матрицы IGHV3-48*01 (SEQ ID NO 21, в случае антитела 25G7) и IGHV1-2*02 (SEQ ID NO 23, в случае антитела 7В10) тяжелой цепи зародышевой линии человека.
Последовательности матрицы зародышевой линии человека показаны ниже.
Матрица IGHV3-48*01 тяжелой цепи зародышевой линии человека:
Матрица IGKV3-11*01 легкой цепи зародышевой линии человека:
Матрица IGHV1-2*02 тяжелой цепи зародышевой линии человека:
Матрица IGKV2D-29*01 легкой цепи зародышевой линии человека:
Области CDR мышиного антитела прививали на выбранную матрицу для гуманизации с замещением гуманизированной вариабельной области, которую затем рекомбинировали с константной областью IgG. Затем, в зависимости от трехмерной структуры мышиного антитела, вставленные остатки, остатки, которые непосредственно взаимодействуют с областями CDR, и остатки, которые оказывают важное влияние на конформацию VL и VH, подергали обратной мутации с получением целого ряда гуманизированных молекул.
Среди них, Hu7B10-VH-a, hu7B10-VH-b и hu7B10-VH-c модифицировали с фармацевтической целью, и первое положение матрицы зародышевой линии человека тяжелой цепи меняли с Q на Е. hu25G7 также подвергали модификации с фармацевтической целью. Последовательности вариабельной области тяжелой цепи двух гуманизированных антител представляют собой такие, как показано в SEQ ID NO: 25-27 и SEQ ID NO: 31-33, соответственно; последовательности вариабельной области легкой цепи представляют собой такие, как показано в SEQ ID NO: 28-30 и SEQ ID NO: 34-36, соответственно.
hu25G7-VH-a:
hu25G7-VH-b:
hu25G7-VH-c:
hu25G7-VL-a:
hu25G7-VL-b:
hu25G7-VL-c:
hu7B10-VH-a:
hu7B10-VH-b:
hu7B10-VH-c:
hu7B10-VL-a:
hu7B10-VL-b:
hu7B10-VL-c:
Выбор матриц и схема обратных мутаций для клона гибридомы 25G7 показаны в Таблице 6.
Выбор матриц и схема обратных мутаций для клона гибридомы 7В10 показаны ниже в Таблице 7:
После маломасштабного анализа экспрессии приведенных выше комбинаций легкой и тяжелой цепей и сравнения числа обратных мутаций, конечную молекулу гуманизированного антитела hu25G7 (с тяжелой цепью VH-c и легкой цепью VL-a) и антитела hu7B10 (с тяжелой цепью VH-b и легкой цепью VL-b) всесторонне оценивали и проводили отбор; их соответствующие полные последовательности легкой и тяжелой цепей представляют собой такие, как показано в SEQ ID NO: 17-20.
НС hu25G7
LC hu25G7
НС hu7B10
LC hu7B10
Последовательность гуманизированного антитела вставляли в соответствующий экспрессионный вектор посредством технологии молекулярного клонирования, и соответствующие гуманизированные антитела получали посредством экспрессии в экспрессионной системе клеток HEK293.
Пример 8: Данные по активности гуманизированного антитела Гуманизированные антитела hu25G7 и hu7B10 анализировали in vitro, как описано в Примерах 2-5, и результаты анализа показаны в Таблице 8. Результаты показали, что как hu25G7, так и hu7B10 связываются исключительно с человеческим IL-4R, а не с IL-4R макака-резуса, указывая на то, что оба антитела связываются с эпитопом(ами) человеческого IL-4R, который не гомологичен IL-4R макака-резуса; и могут специфично связываться с человеческим IL-4R. Оба антитела могут блокировать связывание IL-4/IL-4R и внутриклеточные сигнальные пути, приводя к нейтрализации эффекта активации IL-4 и ингибированию пролиферации клеток TF-1, где блокирующая и ингибирующая активность hu25G7 еще значимо лучше, чем блокирующая и ингибирующая активность референсного антитела Дупилумаб, тогда как значение KD аффинности относительно ниже.
Пример 9: Эксперимент по созреванию аффинности гуманизированного антитела hu25G7
Для получения более эффективных антител против человеческого IL-4R антитело 25G7 подвергали созреванию аффинности посредством платформенной технологии дрожжевого дисплея, и библиотеку с дрожжевым дисплеем созревания аффинности, нацеленную на 6 CDR, конструировали и получали на основе антитела hu25G7, и конструировали вырожденные праймеры. Сконструированные мутантные аминокислоты вводили в библиотеку антител hu25G7-scFv посредством ПЦР и гомологичной рекомбинации; размер каждой библиотеки составлял примерно 109. Сконструированную дрожжевую библиотеку проверяли способом секвенирования второго поколения (GENEWIZ) для подтверждения разнообразия библиотеки.
Человеческий IL-4R, меченный биотином, использовали для отбора высокоаффинных антител из дрожжевой библиотеки hu25G7-scFv. После двух раундов скрининга MACS (от англ. Magnetic-activated cell sorting - магнитно-активированная сортировка клеток) (магнитные шарики со стрептомицином, Invitrogen) и двух раундов скрининга FACS (от англ. fluorescence-activated cell sorting - сортировка клеток с активированной флуоресценцией) (BD FACSAriaTM FUSION), одиночный дрожжевой клон отбирали для моноклонального культивирования и индукции экспрессии. FACS (BD FACSCanto II) использовали для выявления связывания одиночного дрожжевого клона с человеческим IL-4R, и одиночный дрожжевой клон с более высокой аффинностью, чем аффинность антитела 25G7 дикого типа, отбирали для проверки последовательности. После выравнивания и анализа секвенируемых клонов, удаляли избыточную последовательность, неизбыточную последовательность превращали в молекулу полноразмерного человеческого антитела для экспрессии в клетках млекопитающего. Полноразмерное антитело после аффинной очистки анализировали в отношении аффинности, используя BIAcoreTM Х-100 (GE Life Sciences), и молекулы антитела -кандидата с более высокой аффинностью в отношении человеческого IL-4R отбирали следующим образом. Аффинность данных молекул антител к человеческому IL-4R выше, чем аффинность антитела hu25G7 дикого типа, где аффинность молекулы антитела hu25G7-A сопоставима с аффинностью Дупилумаба, в то время как аффинность молекулы hu25G7-B значимо лучше, чем аффинность Дупилумаба.
После созревания аффинности последовательность вариабельной области легкой цепи антитела hu25G7-A выглядит следующим образом:
LCVR hu25G7-A
Последовательности CDR, содержащиеся в вышеуказанном, показаны в Таблице 9.
Последовательность вариабельной области легкой цепи антитела hu25G7-B выглядит следующим образом:
LCVR hu25G7-B
Последовательности CDR, содержащиеся в вышеуказанном, показаны в Таблице 10.
Упомянутая выше вариабельная область легкой цепи LCVR hu25G7-A подвергалась рекомбинации с константной областью легкой цепи hu25G7 с получением легкой цепи антитела hu25G7-A; упомянутая выше вариабельная область легкой цепи LCVR hu25G7-B подвергалась рекомбинации с константной областью легкой цепи hu25G7 с получением легкой цепи антитела hu25G7-B.
Нестабильные аминокислотные остатки в hu25G7-VH-c оптимизировали для усиления способности к получению лекарственного средства, что приводило к получению вариабельной области тяжелой цепи hu25G7-VH:
Вариабельную область тяжелой цепи, описанную выше, можно рекомбинировать с константной областью тяжелой цепи hu25G7, что приводит к получению тяжелой цепи антитела hu25G7-A/hu25G7-B.
Полноразмерные последовательности тяжелой цепи hu25G7-A и hu25G7-B показаны в SEQ ID NO 44.
НС hu25G7
Каждая из полноразмерных последовательностей легкой цепи показана в SEQ ID NO: 45-46.
LC hu25G7-A
LC hu25G7-B
Пример 10: Данные по активности созревания аффинности гуманизированного антитела
Два антитела hu25G7-A и hu25G7-B тестировали, как описано в Примере 3 и Примере 4; оба антитела hu25G7-A и hu25G7-B могут блокировать связывание IL-4/IL-4R и внутриклеточный сигнальный путь, приводя к нейтрализации эффекта активации IL-4 и IL-13 и ингибированию пролиферации клеток TF-1; данные по активности показаны в Таблице 11.
В эксперименте по ингибированию пролиферации клеток TF-1, вызываемой стимуляцией IL-13, оба hu25G7-A и hu25G7-B демонстрировали полезные эффекты. Эффект повторно проверяли, и результаты показывали, что в одних и тех же условиях значение ингибирования (IC50) hu25G7-A в отношении пролиферации клеток TF-1, стимулируемой IL-13, составляло 11,68, и значение ингибирования (IC50) контрольного Дупилумаба в отношении пролиферации клеток TF-1, стимулируемой IL-13, составляло 22,85. По сравнению с Дупилумабом, hu25G7 оказывает значимо улучшенное действие в блокировании связывания IL-4, IL-13 с IL-4R, а также пролиферации клеток, вызываемой таким связыванием.
Пример 11: Исследование эффекта гуманизированного антитела, оказываемого на мышиный дерматит
Для создания модели мышиного дерматита использовали трансгенных по IL-4/IL-4Rα мышей (приобретенных в Cyagen Bioscience Biological Research Center (Taicang) Co., Ltd.). 100 мкл 1,5% раствора смеси ацетона и оливкового масла OXZ (соотношение ацетон:оливковое масло составляет 4:1) равномерно наносили на брюхо каждой мыши, от примерно 3 см х 3 см, для сенсибилизации. Сутки сенсибилизации принимали за DO (Сутки 0). В Сутки 7, 20 мкл 1% раствора смеси ацетона и оливкового масла OXZ равномерно наносили на оба уха (обе стороны) мышей для стимуляции и стимулировали один раз каждые 72 часа.
В данном эксперименте формировали в общей сложности 5 групп, включая нормальную контрольную группу (для сенсибилизации и стимуляции наносили только раствор ацетона и оливкового масла), контрольную группу модели, группу hu25G7-A, hu25G7-B и Дупилумаба, с 3-5 мышей на группу. Дозировка введения для группы введения составляла 50 мг/кг, и способ введения представлял собой подкожное введение, дважды в неделю (см. Таблицу 12 для получения подробной информации). В сутки 27 толщину ушей измеряли посредством штангенциркуля, и результаты показаны на Фиг. 12.
Результаты показали, что уши мыши в контрольной группе модели демонстрировали очевидное патологическое повреждение, и толщина уха была значимо больше, чем толщина уха нормальной контрольной группы. Толщина уха мышей в группах hu25G7-A, hu25G7-B и Дупилумаба была значимо меньше, чем толщина уха контрольной группы модели в сутки 27. Иными словами, hu25G7-A, hu25G7-B и Дупилумаб могут быть использованы для лечения дерматита, и hu25G7-B является более эффективным, чем Дупилумаб.
--->
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> JIANGSU HENGRUI MEDICINE CO., LTD.; SHANGHAI HENGRUI PHARMACEUTICAL
CO., LTD.
<120> АНТИТЕЛО, СВЯЗЫВАЮЩЕЕ ЧЕЛОВЕЧЕСКИЙ IL-4R, ЕГО АНТИГЕНСВЯЗЫВАЮЩИЙ
ФРАГМЕНТ И ЕГО МЕДИЦИНСКОЕ ПРИМЕНЕНИЕ
<130> 719056CPCT
<160> 46
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 118
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> Домен
<222> (1)..(118)
<223> Вариабельная область тяжёлой цепи мышиного моноклонального
антитела (mAb) 25G7
<400> 1
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Phe Ile Ser Ser Gly Ser Ser Ile Ile Tyr Tyr Ala Asp Ile Val
50 55 60
Lys Gly Arg Ser Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Thr Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Gly Asn Lys Arg Gly Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ile Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 2
<211> 108
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> Домен
<222> (1)..(108)
<223> Вариабельная область легкой цепи мышиного mAb 25G7
<400> 2
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Leu Met Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Asn Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Arg Lys Pro Arg Ser Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr
35 40 45
Leu Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Val Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Arg Ser Asn Pro Pro Met
85 90 95
Leu Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Val Lys
100 105
<210> 3
<211> 10
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> Домен
<222> (1)..(10)
<223> Определяющая комплементарность область 1 тяжелой цепи (HCDR1)
мышиного mAb 25G7
<400> 3
Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Gly Met His
1 5 10
<210> 4
<211> 17
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> Домен
<222> (1)..(17)
<223> HCDR2 мышиного mAb 25G7
<400> 4
Phe Ile Ser Ser Gly Ser Ser Ile Ile Tyr Tyr Ala Asp Ile Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 5
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> Домен
<222> (1)..(9)
<223> HCDR3 мышиного mAb 25G7
<400> 5
Gly Asn Lys Arg Gly Phe Phe Asp Tyr
1 5
<210> 6
<211> 10
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> Домен
<222> (1)..(10)
<223> Определяющая комплементарность область 1 легкой цепи (LCDR1)
мышиного mAb 25G7
<400> 6
Asn Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met Tyr
1 5 10
<210> 7
<211> 7
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> Домен
<222> (1)..(7)
<223> LCDR2 мышиного mAb 25G7
<400> 7
Leu Thr Ser Asn Leu Ala Ser
1 5
<210> 8
<211> 11
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> Домен
<222> (1)..(11)
<223> LCDR3 мышиного mAb 25G7
<400> 8
Gln Gln Trp Arg Ser Asn Pro Pro Met Leu Thr
1 5 10
<210> 9
<211> 125
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> Домен
<222> (1)..(125)
<223> Вариабельная область тяжёлой цепи мышиного mAb 7B10
<400> 9
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Thr Glu Leu Leu Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Ser Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Leu Ile His Pro Asn Ser Asp Thr Thr Lys Phe Ser Glu Asn Phe
50 55 60
Lys Thr Arg Ala Thr Leu Thr Ile Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Lys Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Ser Lys Ile Ile Thr Thr Ile Val Ala Arg His Trp Tyr Phe
100 105 110
Asp Val Trp Gly Thr Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 10
<211> 111
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> Домен
<222> (1)..(111)
<223> Вариабельная область легкой цепи мышиного mAb 7B10
<400> 10
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Pro Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Gly
20 25 30
Gly Asp Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Leu Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Val Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Glu Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Asn
85 90 95
Glu Asn Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 11
<211> 10
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> Домен
<222> (1)..(10)
<223> HCDR1 мышиного mAb 7B10
<400> 11
Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Trp Met His
1 5 10
<210> 12
<211> 17
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> Домен
<222> (1)..(17)
<223> HCDR2 мышиного mAb 7B10
<400> 12
Leu Ile His Pro Asn Ser Asp Thr Thr Lys Phe Ser Glu Asn Phe Lys
1 5 10 15
Thr
<210> 13
<211> 16
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> Домен
<222> (1)..(16)
<223> HCDR3 мышиного mAb 7B10
<400> 13
Ser Lys Ile Ile Thr Thr Ile Val Ala Arg His Trp Tyr Phe Asp Val
1 5 10 15
<210> 14
<211> 15
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> Домен
<222> (1)..(14)
<223> LCDR1 мышиного mAb 7B10
<400> 14
Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Gly Gly Asp Ser Tyr Met Asn
1 5 10 15
<210> 15
<211> 7
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> Домен
<222> (1)..(7)
<223> LCDR2 мышиного mAb 7B10
<400> 15
Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser
1 5
<210> 16
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> Домен
<222> (1)..(9)
<223> LCDR3 мышиного mAb 7B10
<400> 16
Gln His Ser Asn Glu Asn Pro Pro Thr
1 5
<210> 17
<211> 445
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> Цепь
<222> (1)..(445)
<223> Тяжелая цепь гуманизированного антитела hu25G7
<400> 17
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Phe Ile Ser Ser Gly Ser Ser Ile Ile Tyr Tyr Ala Asp Ile Val
50 55 60
Lys Gly Arg Ser Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Gly Asn Lys Arg Gly Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys
210 215 220
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
225 230 235 240
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
245 250 255
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln
260 265 270
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
275 280 285
Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
290 295 300
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
305 310 315 320
Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
325 330 335
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
340 345 350
Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
355 360 365
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
370 375 380
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
385 390 395 400
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
405 410 415
Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
420 425 430
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435 440 445
<210> 18
<211> 215
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> Цепь
<222> (1)..(215)
<223> Легкая цепь гуманизированного антитела hu25G7
<400> 18
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Asn Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Leu Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Arg Ser Asn Pro Pro Met
85 90 95
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala
100 105 110
Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser
115 120 125
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu
130 135 140
Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser
145 150 155 160
Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
180 185 190
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys
195 200 205
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 19
<211> 455
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> Цепь
<222> (1)..(455)
<223> Тяжелая цепь гуманизированного антитела hu7B10
<400> 19
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Leu Ile His Pro Asn Ser Asp Thr Thr Lys Phe Ser Glu Asn Phe
50 55 60
Lys Thr Arg Val Thr Met Thr Ile Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Ser Lys Ile Ile Thr Thr Ile Val Ala Arg His Trp Tyr Phe
100 105 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
115 120 125
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser
130 135 140
Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
145 150 155 160
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
165 170 175
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
180 185 190
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys
195 200 205
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu
210 215 220
Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
225 230 235 240
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
245 250 255
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
260 265 270
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
275 280 285
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
290 295 300
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
305 310 315 320
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
325 330 335
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
340 345 350
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
355 360 365
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
370 375 380
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
385 390 395 400
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
405 410 415
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
420 425 430
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
435 440 445
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455
<210> 20
<211> 218
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> Цепь
<222> (1)..(218)
<223> Легкая цепь гуманизированного антитела hu7B10
<400> 20
Asp Ile Val Leu Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Gly
20 25 30
Gly Asp Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Gln Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser
65 70 75 80
Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Asn
85 90 95
Glu Asn Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 21
<211> 98
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> Домен
<222> (1)..(98)
<223> Матрица IGHV3-48*01 тяжелой цепи зародышевой линии человека
<400> 21
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg
<210> 22
<211> 95
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> Домен
<222> (1)..(95)
<223> Матрица IGKV3-11*01 легкой цепи зародышевой линии человека
<400> 22
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro
85 90 95
<210> 23
<211> 98
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> Домен
<222> (1)..(98)
<223> Матрица IGHV1-2*02 тяжелой цепи зародышевой линии человека
<400> 23
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg
<210> 24
<211> 100
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> Домен
<222> (1)..(100)
<223> Матрица IGKV2D-29*01 легкой цепи зародышевой линии человека
<400> 24
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Pro
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Glu Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ser
85 90 95
Ile Gln Leu Pro
100
<210> 25
<211> 118
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> Домен
<222> (1)..(118)
<223> hu25G7-VH-a
<400> 25
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Phe Ile Ser Ser Gly Ser Ser Ile Ile Tyr Tyr Ala Asp Ile Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Asn Lys Arg Gly Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 26
<211> 118
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> Домен
<222> (1)..(118)
<223> hu25G7-VH-b
<400> 26
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Phe Ile Ser Ser Gly Ser Ser Ile Ile Tyr Tyr Ala Asp Ile Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Gly Asn Lys Arg Gly Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 27
<211> 118
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> Домен
<222> (1)..(118)
<223> hu25G7-VH-c
<400> 27
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Phe Ile Ser Ser Gly Ser Ser Ile Ile Tyr Tyr Ala Asp Ile Val
50 55 60
Lys Gly Arg Ser Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Gly Asn Lys Arg Gly Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 28
<211> 108
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> Домен
<222> (1)..(108)
<223> hu25G7-VL-a
<400> 28
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Asn Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Leu Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Arg Ser Asn Pro Pro Met
85 90 95
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 29
<211> 108
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> Домен
<222> (1)..(108)
<223> hu25G7-VL-b
<400> 29
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Asn Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Leu Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Arg Ser Asn Pro Pro Met
85 90 95
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 30
<211> 108
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> Домен
<222> (1)..(108)
<223> hu25G7-VL-c
<400> 30
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Asn Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Pro Trp Ile Tyr
35 40 45
Leu Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Arg Ser Asn Pro Pro Met
85 90 95
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 31
<211> 125
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> Домен
<222> (1)..(125)
<223> hu7B10-VH-a
<400> 31
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Leu Ile His Pro Asn Ser Asp Thr Thr Lys Phe Ser Glu Asn Phe
50 55 60
Lys Thr Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Lys Ile Ile Thr Thr Ile Val Ala Arg His Trp Tyr Phe
100 105 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 32
<211> 125
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> Домен
<222> (1)..(125)
<223> hu7B10-VH-b
<400> 32
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Leu Ile His Pro Asn Ser Asp Thr Thr Lys Phe Ser Glu Asn Phe
50 55 60
Lys Thr Arg Val Thr Met Thr Ile Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Ser Lys Ile Ile Thr Thr Ile Val Ala Arg His Trp Tyr Phe
100 105 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 33
<211> 125
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> Домен
<222> (1)..(125)
<223> hu7B10-VH-c
<400> 33
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Leu Ile His Pro Asn Ser Asp Thr Thr Lys Phe Ser Glu Asn Phe
50 55 60
Lys Thr Arg Val Thr Leu Thr Ile Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Ser Lys Ile Ile Thr Thr Ile Val Ala Arg His Trp Tyr Phe
100 105 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 34
<211> 111
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> Домен
<222> (1)..(111)
<223> hu7B10-VL-a
<400> 34
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Gly
20 25 30
Gly Asp Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Gln Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser
65 70 75 80
Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Asn
85 90 95
Glu Asn Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 35
<211> 111
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> Домен
<222> (1)..(111)
<223> hu7B10-VL-b
<400> 35
Asp Ile Val Leu Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Gly
20 25 30
Gly Asp Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Gln Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser
65 70 75 80
Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Asn
85 90 95
Glu Asn Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 36
<211> 111
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> Домен
<222> (1)..(111)
<223> hu7B10-VL-c
<400> 36
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Gly
20 25 30
Gly Asp Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Gln Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser
65 70 75 80
Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Asn
85 90 95
Glu Asn Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 37
<211> 108
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> Домен
<222> (1)..(108)
<223> вариабельная область легкой цепи hu25G7-A
<400> 37
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Pro Tyr Met
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Leu Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Arg Ala Tyr Pro Pro Met
85 90 95
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 38
<211> 10
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> Домен
<222> (1)..(10)
<223> LCDR1 hu25G7-A
<400> 38
Arg Ala Ser Ser Ser Val Pro Tyr Met Tyr
1 5 10
<210> 39
<211> 7
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> Домен
<222> (1)..(7)
<223> LCDR2 hu25G7-B
<400> 39
Leu Ala Ser Ser Arg Pro Ser
1 5
<210> 40
<211> 11
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> Домен
<222> (1)..(11)
<223> LCDR3 hu25G7-A
<400> 40
Gln Gln Trp Arg Ala Tyr Pro Pro Met Leu Thr
1 5 10
<210> 41
<211> 108
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> Домен
<222> (1)..(108)
<223> вариабельная область легкой цепи hu25G7-B
<400> 41
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Pro Gly Val Pro Pro Leu
20 25 30
Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Leu Ala Ser Ser Arg Pro Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Arg Ser Asn Pro Pro Met
85 90 95
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 42
<211> 10
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> Домен
<222> (1)..(10)
<223> LCDR1 hu25G7-B
<400> 42
Arg Ala Ser Pro Gly Val Pro Pro Leu Ala
1 5 10
<210> 43
<211> 118
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> Домен
<222> (1)..(118)
<223> оптимизированная вариабельная область тяжёлой цепи hu25G7-VH-c
<400> 43
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Phe Ile Ser Ser Gly Ser Ser Ile Ile Tyr Tyr Ala Asp Ile Val
50 55 60
Lys Gly Arg Ser Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Gly Asn Lys Arg Gly Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 44
<211> 445
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> Цепь
<222> (1)..(445)
<223> Тяжелая цепь hu25G7-A и hu25G7-B
<400> 44
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Phe Ile Ser Ser Gly Ser Ser Ile Ile Tyr Tyr Ala Asp Ile Val
50 55 60
Lys Gly Arg Ser Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Gly Asn Lys Arg Gly Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys
210 215 220
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
225 230 235 240
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
245 250 255
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln
260 265 270
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
275 280 285
Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
290 295 300
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
305 310 315 320
Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
325 330 335
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
340 345 350
Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
355 360 365
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
370 375 380
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
385 390 395 400
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
405 410 415
Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
420 425 430
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435 440 445
<210> 45
<211> 215
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> Цепь
<222> (1)..(215)
<223> Легкая цепь hu25G7-A
<400> 45
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Pro Tyr Met
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Leu Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Arg Ala Tyr Pro Pro Met
85 90 95
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala
100 105 110
Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser
115 120 125
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu
130 135 140
Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser
145 150 155 160
Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
180 185 190
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys
195 200 205
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 46
<211> 215
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> Цепь
<222> (1)..(215)
<223> Легкая цепь hu25G7-B
<400> 46
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Pro Gly Val Pro Pro Leu
20 25 30
Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Leu Ala Ser Ser Arg Pro Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Arg Ser Asn Pro Pro Met
85 90 95
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala
100 105 110
Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser
115 120 125
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu
130 135 140
Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser
145 150 155 160
Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
180 185 190
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys
195 200 205
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<---
Claims (93)
1. Антитело против IL-4R или его антигенсвязывающий фрагмент, содержащее любое выбранное из нижеследующих (I) – (IV):
(I) вариабельная область тяжелой цепи, содержащая определяющие комплементарность области тяжелой цепи (HCDR) HCDR1, HCDR2 и HCDR3, как показано в SEQ ID NO 3, SEQ ID NO 4 и SEQ ID NO 5, соответственно; и
вариабельная область легкой цепи, содержащая определяющие
комплементарность области легкой цепи (LCDR) LCDR1, LCDR2 и LCDR3, как показано в SEQ ID NO 6, SEQ ID NO 7 и SEQ ID NO 8, соответственно;
(II) вариабельная область тяжелой цепи, содержащая HCDR1, HCDR2 и HCDR3,
как показано в SEQ ID NO 11, SEQ ID NO 12 и SEQ ID NO 13, соответственно; и
вариабельная область легкой цепи, содержащая LCDR1, LCDR2 и LCDR3, как показано в SEQ ID NO 14, SEQ ID NO 15 и SEQ ID NO 16, соответственно;
(III) вариабельная область тяжелой цепи, содержащая HCDR1, HCDR2 и HCDR3,
как показано в SEQ ID NO 3, SEQ ID NO 4 и SEQ ID NO 5, соответственно; и
вариабельная область легкой цепи, содержащая LCDR1, LCDR2 и LCDR3, как показано в SEQ ID NO 38, SEQ ID NO 7 и SEQ ID NO 40, соответственно;
(IV) вариабельная область тяжелой цепи, содержащая HCDR1, HCDR2 и HCDR3,
как показано в SEQ ID NO 3, SEQ ID NO 4 и SEQ ID NO 5, соответственно; и
вариабельная область легкой цепи, содержащая LCDR1, LCDR2 и LCDR3, как показано в SEQ ID NO 42, SEQ ID NO 39 и SEQ ID NO 8, соответственно.
2. Антитело против IL-4R или его антигенсвязывающий фрагмент по п. 1, которое дополнительно содержит фрагмент или их комбинацию, выбранную из группы, состоящей из нижеследующего:
- последовательность каркасной области (FR), происходящая из IGKV3-11*01 легкой цепи зародышевой линии человека; и
- последовательность с обратной мутацией, обладающая по меньшей мере 95%-ной идентичностью с областью FR, происходящей из IGKV3-11*01 легкой цепи зародышевой линии человека;
предпочтительно обратная мутация выбрана из группы, состоящей из L46P, L47W и F71Y или их комбинации;
и/или указанное антитело против IL-4R или его антигенсвязывающий фрагмент дополнительно содержит фрагмент или их комбинацию, выбранную из группы, состоящей из нижеследующего:
- последовательность области FR, происходящая из IGHV3-48*01 тяжелой цепи зародышевой линии человека; и
- последовательность с обратной мутацией, обладающая по меньшей мере 95%-ной идентичностью с областью FR, происходящей из IGHV3-48*01 тяжелой цепи зародышевой линии человека;
предпочтительно обратная мутация выбрана из группы, состоящей из S49A, F67S и A93T или их комбинации.
3. Антитело против IL-4R или его антигенсвязывающий фрагмент по п. 1, которое дополнительно содержит фрагмент или их комбинацию, выбранную из группы, состоящей из нижеследующего:
- последовательность области FR, происходящая из IGKV2D-29*01 легкой цепи зародышевой линии человека; и
- последовательность с обратной мутацией, обладающая по меньшей мере 95%-ной идентичностью с областью FR, происходящей из IGKV2D-29*01 легкой цепи зародышевой линии человека;
предпочтительно обратная мутация выбрана из группы, состоящей из M4L и/или V58I;
и/или указанное антитело против IL-4R или его антигенсвязывающий фрагмент дополнительно содержит фрагмент или их комбинацию, выбранную из группы, состоящей из нижеследующего:
- последовательность области FR, происходящая из IGHV1-2*02 тяжелой цепи зародышевой линии человека; и
- последовательность с обратной мутацией, обладающая по меньшей мере 95%-ной идентичностью с областью FR, происходящей из IGHV1-2*02 тяжелой цепи зародышевой линии человека;
предпочтительно обратная мутация выбрана из группы, состоящей из M69L, R71I, T73K и R94K или их комбинации.
4. Антитело против IL-4R или его антигенсвязывающий фрагмент по п. 1, где:
антигенсвязывающий фрагмент выбран из группы, состоящей из фрагмента Fab, Fab'-SH, Fv, scFv и F(ab')2,
вариабельная область тяжелой цепи антитела содержит каркасную(ые) область(и) тяжелой цепи человеческого IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4 или их варианты,
предпочтительно, вариабельная область тяжелой цепи антитела содержит каркасную(ые) область(и) тяжелой цепи человеческого IgG1, IgG2 или IgG4;
более предпочтительно, вариабельная область тяжелой цепи антитела содержит каркасную(ые) область(и) тяжелой цепи человеческого IgG4.
5. Антитело против IL-4R или его антигенсвязывающий фрагмент по п. 1, в котором:
вариабельная область тяжелой цепи содержит:
(I) последовательность, как показано в SEQ ID NO 1, или последовательность, обладающую по меньшей мере 90%-ной, 95%-ной, 98%-ной, 99%-ной идентичностью с SEQ ID NO 1; или
(II) последовательность, как показано в SEQ ID NO 9, или последовательность, обладающую по меньшей мере 90%-ной, 95%-ной, 98%-ной, 99%-ной идентичностью с SEQ ID NO 9; или
(III) последовательность, как показано в SEQ ID NO 43, или последовательность, обладающую по меньшей мере 90%-ной, 95%-ной, 98%-ной, 99%-ной идентичностью с SEQ ID NO 43;
и/или вариабельная область легкой цепи содержит:
(I) последовательность, как показано в SEQ ID NO 2, или последовательность, обладающую по меньшей мере 90%-ной, 95%-ной, 98%-ной, 99%-ной идентичностью с SEQ ID NO 2; или
(II) последовательность, как показано в SEQ ID NO 10, или последовательность, обладающую по меньшей мере 90%-ной, 95%-ной, 98%-ной, 99%-ной идентичностью с SEQ ID NO 10; или
(III) последовательность, как показано в SEQ ID NO 37, или последовательность, обладающую по меньшей мере 90%-ной, 95%-ной, 98%-ной, 99%-ной идентичностью с SEQ ID NO 37; или
(IV) последовательность, как показано в SEQ ID NO 41, или последовательность, обладающую по меньшей мере 90%-ной, 95%-ной, 98%-ной, 99%-ной идентичностью с SEQ ID NO 41;
предпочтительно, антитело против IL-4R или его антигенсвязывающий фрагмент, содержащее:
вариабельную область тяжелой цепи, как показано в SEQ ID NO 1, и вариабельную область легкой цепи, как показано в SEQ ID NO 2; или
вариабельную область тяжелой цепи, как показано в SEQ ID NO 9, и вариабельную область легкой цепи, как показано в SEQ ID NO 10; или
вариабельную область тяжелой цепи, как показано в SEQ ID NO 43, и
вариабельную область легкой цепи, как показано в SEQ ID NO 37; или
вариабельную область тяжелой цепи, как показано в SEQ ID NO 43, и вариабельную область легкой цепи, как показано в SEQ ID NO 41.
6. Антитело против IL-4R или его антигенсвязывающий фрагмент по п. 1, в котором:
вариабельная область тяжелой цепи содержит:
(I) последовательность, как показано в одной из SEQ ID NO: 25-27, или последовательность, обладающую по меньшей мере 90%-ной, 95%-ной, 98%-ной или 99%-ной идентичностью с одной из SEQ ID NO: 25-27; или
(II) последовательность, как показано в одной из SEQ ID NO: 31-33, или последовательность, обладающую по меньшей мере 90%-ной, 95%-ной, 98%-ной или 99%-ной идентичностью с одной из SEQ ID NO: 31-33;
и/или вариабельная область легкой цепи содержит:
(I) последовательность, как показано в одной из SEQ ID NO: 28-30, или последовательность, обладающую по меньшей мере 90%-ной, 95%-ной, 98%-ной или 99%-ной идентичностью с одной из SEQ ID NO: 28-30; или
(II) последовательность, как показано в одной из SEQ ID NO: 34-36, или последовательность, обладающую по меньшей мере 90%-ной, 95%-ной, 98%-ной или 99%-ной идентичностью с одной из SEQ ID NO: 34-36.
7. Антитело против IL-4R или его антигенсвязывающий фрагмент по п. 1, в котором:
тяжелая цепь содержит:
(I) последовательность, как показано в SEQ ID NO 17, или последовательность, обладающую по меньшей мере 90%-ной, 95%-ной, 98%-ной или 99%-ной идентичностью с SEQ ID NO 17; или
(II) последовательность, как показано в SEQ ID NO 19, или последовательность, обладающую по меньшей мере 90%-ной, 95%-ной, 98%-ной или 99%-ной идентичностью с SEQ ID NO 19; или
(III) последовательность, как показано в SEQ ID NO 44, или последовательность, обладающую по меньшей мере 90%-ной, 95%-ной, 98%-ной или 99%-ной идентичностью с SEQ ID NO 44;
и/или легкая цепь содержит:
(I) последовательность, как показано в SEQ ID NO 18, или последовательность, обладающую по меньшей мере 90%-ной, 95%-ной, 98%-ной или 99%-ной идентичностью с SEQ ID NO 18; или
(II) последовательность, как показано в SEQ ID NO 20, или последовательность, обладающую по меньшей мере 90%-ной, 95%-ной, 98%-ной или 99%-ной идентичностью с SEQ ID NO 20; или
(III) последовательность, как показано в SEQ ID NO 45, или последовательность, обладающую по меньшей мере 90%-ной, 95%-ной, 98%-ной или 99%-ной идентичностью с SEQ ID NO 45; или
(IV) последовательность, как показано в SEQ ID NO 46, или последовательность, обладающую по меньшей мере 90%-ной, 95%-ной, 98%-ной или 99%-ной идентичностью с SEQ ID NO 46;
предпочтительно, антитело против IL-4R или его антигенсвязывающий фрагмент содержит любое выбранное из группы, состоящей из нижеследующего:
тяжелая цепь, как показано в SEQ ID NO 17, и легкая цепь, как показано в SEQ ID NO 18; или
тяжелая цепь, как показано в SEQ ID NO 19, и легкая цепь, как показано в SEQ ID NO 20; или
тяжелая цепь, как показано в SEQ ID NO 44, и легкая цепь, как показано в SEQ ID NO 45; или
тяжелая цепь, как показано в SEQ ID NO 44, и легкая цепь, как показано в SEQ ID NO 46.
8. Антитело против IL-4R или его антигенсвязывающий фрагмент по п. 1, которое представляет собой мышиное антитело, химерное антитело, человеческое антитело, гуманизированное антитело или его фрагмент.
9. Полинуклеотид, кодирующий антитело против IL-4R или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп. 1-8.
10. Вектор экспрессии, содержащий полинуклеотид по п. 9, предпочтительно, данный вектор представляет собой эукариотический экспрессионный вектор, прокариотический экспрессионный вектор или вирусный вектор.
11. Клетка-хозяин для экспрессии антитела против IL-4R или его антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп. 1-8, содержащая вектор по п. 10, предпочтительно данная клетка-хозяин выбрана из группы, состоящей из клетки бактерий, дрожжей, млекопитающих,
более предпочтительно указанная клетка-хозяин выбрана из группы, состоящей из Escherichia coli, Pichia pastoris, клеток яичника китайского хомячка, клеток эмбриональных почек человека 293.
12. Способ выявления IL-4R, включающий:
стадию приведения образца в контакт с антителом против IL-4R или его антигенсвязывающим фрагментом по любому из пп. 1-8.
13. Реагент для применения в диагностике заболевания, связанного с клетками, позитивными в отношении человеческого IL-4R, содержащий антитело против IL-4R или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп. 1-8.
14. Фармацевтическая композиция для лечения или предупреждения IL-4R-опосредованных заболеваний, содержащая: антитело против IL-4R или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп. 1-8; и фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество, разбавитель или носитель.
15. Применение любого выбранного из группы, состоящей из нижеследующего, в получении лекарственного средства для лечения или предупреждения IL-4R-опосредованного заболевания или патологического состояния:
антитело против IL-4R или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп. 1-8, полинуклеотид по п. 9 и фармацевтическая композиция по п. 14;
предпочтительно заболевание или патологическое состояние выбрано из группы, состоящей из:
астмы, полипов носовой полости, хронического синусита, аллергического кожного заболевания, эозинофильного эзофагита, хронической обструктивной болезни легких, аллергического ринита, артрита, воспалительного заболевания, аллергической реакции, аутоиммунного лимфопролиферативного синдрома, аутоиммунной гемолитической анемии, пищевода Барретта, аутоиммунного увеита, туберкулеза и нефропатии;
более предпочтительно, заболевание или патологическое состояние представляет собой астму или аллергическое кожное заболевание.
16. Способ лечения или предупреждения IL-4R-опосредованного заболевания или патологического состояния, включающий:
введение субъекту антитела против IL-4R или его антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп. 1-8, фармацевтической композиции по п. 14;
предпочтительно заболевание или патологическое состояние выбрано из группы, состоящей из:
астмы, полипов носовой полости, хронического синусита, аллергического кожного заболевания, эозинофильного эзофагита, хронической обструктивной болезни легких, аллергического ринита, артрита, воспалительного заболевания, аллергической реакции, аутоиммунного лимфопролиферативного синдрома, аутоиммунной гемолитической анемии, пищевода Барретта, аутоиммунного увеита, туберкулеза и нефропатии; более предпочтительно, заболевание или патологическое состояние представляет собой астму или аллергическое кожное заболевание.
17. Способ получения антитела против IL-4R или его антигенсвязывающего фрагмента, включающий следующие стадии:
осуществление экспрессии антитела против IL-4R или его антигенсвязывающего фрагмента в клетке-хозяине по п. 11 и
выделение антитела против IL-4R или его антигенсвязывающего фрагмента из указанной клетки-хозяина.
Applications Claiming Priority (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201810971269.2 | 2018-08-24 | ||
CN201811472752.2 | 2018-12-04 | ||
CN201910221311.3 | 2019-03-22 | ||
CN201910401923.0 | 2019-05-15 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2779649C1 true RU2779649C1 (ru) | 2022-09-12 |
Family
ID=
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2382049C2 (ru) * | 2004-08-03 | 2010-02-20 | Новартис Аг | ЧЕЛОВЕЧЕСКИЕ МОНОКЛОНАЛЬНЫЕ АНТИТЕЛА К ЧЕЛОВЕЧЕСКОМУ ИНТЕРЛЕЙКИНУ-4 (hIL-4) |
US20130259866A1 (en) * | 2007-10-15 | 2013-10-03 | Sanofi | Antibodies that bind il-4 and/or il-13 and their uses |
WO2014031610A8 (en) * | 2012-08-21 | 2014-11-20 | Sanofi | Methods for treating or preventing asthma by administering an il-4r antagonist |
EP3064511A1 (en) * | 2008-10-29 | 2016-09-07 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | High affinity human antibodies to human il-4 receptor |
Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2382049C2 (ru) * | 2004-08-03 | 2010-02-20 | Новартис Аг | ЧЕЛОВЕЧЕСКИЕ МОНОКЛОНАЛЬНЫЕ АНТИТЕЛА К ЧЕЛОВЕЧЕСКОМУ ИНТЕРЛЕЙКИНУ-4 (hIL-4) |
US20130259866A1 (en) * | 2007-10-15 | 2013-10-03 | Sanofi | Antibodies that bind il-4 and/or il-13 and their uses |
RU2580049C2 (ru) * | 2007-10-15 | 2016-04-10 | Санофи-Авентис | Антитела, связывающие il-4 и/или il-13, и их применение |
EP3064511A1 (en) * | 2008-10-29 | 2016-09-07 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | High affinity human antibodies to human il-4 receptor |
WO2014031610A8 (en) * | 2012-08-21 | 2014-11-20 | Sanofi | Methods for treating or preventing asthma by administering an il-4r antagonist |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
TWI718206B (zh) | Pd-l1抗體、其抗原結合片段及其醫藥用途 | |
JP7405831B2 (ja) | ヒトil-4r結合抗体、その抗原結合フラグメント、およびそれらの医学的使用 | |
CA2771781C (en) | Antikine antibodies that bind to multiple cc chemokines | |
CN110366560B (zh) | 抗b7-h4抗体、其抗原结合片段及其医药用途 | |
US11525005B2 (en) | Anti-CD40 antibody, antigen binding fragment thereof and medical use thereof | |
US20220340654A1 (en) | Antibody capable of binding to thymic stromal lymphopoietin and use thereof | |
JP7053479B2 (ja) | IL7受容体細胞外ドメインα鎖に対する非拮抗性抗体及び癌治療におけるそれらの使用 | |
MX2011001909A (es) | Anticuerpos anti-interleucina-13 modificados, composiciones, metodos y usos. | |
WO2021213245A1 (zh) | 抗体或其抗原结合片段、其制备方法及医药用途 | |
RU2779649C1 (ru) | Антитело, связывающее человеческий il-4r, его антигенсвязывающий фрагмент и его медицинское применение | |
WO2022078490A1 (zh) | 抗erbb3抗体或其抗原结合片段及其医药用途 | |
WO2021209066A1 (zh) | 特异性抗原结合分子,其制备方法及医药用途 | |
WO2022117079A1 (zh) | 结合胸腺基质淋巴细胞生成素的抗体及其应用 | |
RU2792748C2 (ru) | Антитело к b7-h4, его антигенсвязывающий фрагмент и его фармацевтическое применение | |
RU2779128C2 (ru) | Антитело к cd40, его антигенсвязывающий фрагмент и его медицинское применение | |
RU2574786C2 (ru) | Антикиновые антитела, которые связываются с несколькими сс-хемокинами | |
CN115947855A (zh) | 抗cd24抗体的制备及其用途 |