JPS641118B2 - - Google Patents
Info
- Publication number
- JPS641118B2 JPS641118B2 JP54097848A JP9784879A JPS641118B2 JP S641118 B2 JPS641118 B2 JP S641118B2 JP 54097848 A JP54097848 A JP 54097848A JP 9784879 A JP9784879 A JP 9784879A JP S641118 B2 JPS641118 B2 JP S641118B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- interferon
- human
- aqueous solution
- cells
- silicic acid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired
Links
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 claims description 48
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 claims description 48
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 claims description 47
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 15
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 12
- RMAQACBXLXPBSY-UHFFFAOYSA-N silicic acid Chemical compound O[Si](O)(O)O RMAQACBXLXPBSY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 235000012239 silicon dioxide Nutrition 0.000 claims description 10
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 6
- 229910004298 SiO 2 Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 14
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 8
- 239000000440 bentonite Substances 0.000 description 7
- 229910000278 bentonite Inorganic materials 0.000 description 7
- SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N bentoquatam Chemical compound O.O=[Si]=O.O=[Al]O[Al]=O SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 7
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 5
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 241000711408 Murine respirovirus Species 0.000 description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 3
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 3
- RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N Acetaminophen Chemical compound CC(=O)NC1=CC=C(O)C=C1 RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IYLLULUTZPKQBW-UHFFFAOYSA-N Acrinol Chemical compound CC(O)C(O)=O.C1=C(N)C=CC2=C(N)C3=CC(OCC)=CC=C3N=C21 IYLLULUTZPKQBW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000005995 Aluminium silicate Substances 0.000 description 2
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000011691 Burkitt lymphomas Diseases 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 235000012211 aluminium silicate Nutrition 0.000 description 2
- 239000004927 clay Substances 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 2
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 2
- NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N kaolin Chemical compound O.O.O=[Al]O[Si](=O)O[Si](=O)O[Al]=O NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- JNYAEWCLZODPBN-JGWLITMVSA-N (2r,3r,4s)-2-[(1r)-1,2-dihydroxyethyl]oxolane-3,4-diol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1O JNYAEWCLZODPBN-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 208000023611 Burkitt leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010035039 Piloerection Diseases 0.000 description 1
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 241000711975 Vesicular stomatitis virus Species 0.000 description 1
- 150000005215 alkyl ethers Chemical class 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 210000001691 amnion Anatomy 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 210000004544 dc2 Anatomy 0.000 description 1
- 238000011033 desalting Methods 0.000 description 1
- PGZIKUPSQINGKT-UHFFFAOYSA-N dialuminum;dioxido(oxo)silane Chemical compound [Al+3].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O PGZIKUPSQINGKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 210000003200 peritoneal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 230000005371 pilomotor reflex Effects 0.000 description 1
- -1 polyoxyethylene Polymers 0.000 description 1
- 229920002503 polyoxyethylene-polyoxypropylene Polymers 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000003307 reticuloendothelial effect Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Description
本発明はヒト由来細胞から誘発・産生されたイ
ンターフエロンを工業的規模において回収する方
法に関するものである。 インターフエロンはウイルスその他の物質の刺
激によりヒトを含む動物細胞から産生されるある
種の糖蛋白質である。このものはウイルスや細菌
又は原虫の細胞内増殖を阻止する機能をもつてい
るが、この機能は動物種に特異的であることか
ら、医薬としてヒトに用いる場合はヒトの細胞か
ら産生されたインターフエロンを得る必要があ
る。ヒトのインターフエロンを大量に得るために
は、ヒトリンパ球、ヒト繊維芽細胞又はヒト株化
リンパ芽球等を大量に集め、これらの細胞に適当
な刺激を与えてインターフエロンを産生させ、こ
の産生されたインターフエロンを収率よく回収し
なければならない。 しかし従来の回収法は複雑な操作と長い時間を
要しており、工業的規模で行うには不適なだけで
なく、収率も低いという欠点があつた。 発明者は長年にわたつてインターフエロンを簡
易な操作で収率よく回収する方法を研究し、ペン
トナイトや酸性白土などのケイ酸を含有する組成
物がインターフエロンを特異的に吸着することを
見出し、さらにこの吸着体からインターフエロン
を溶出させる研究を続け、非イオン性界面活性剤
およびアクリフラビン類を含有する水溶液を用い
るとインターフエロンが吸着体から特異的に溶出
されることを見出し、これらの新しい知見に基づ
いて本発明を完成し、インターフエロンを工業的
規模において簡易な操作で収率よく回収すること
に成功した。 本発明はヒト由来細胞から誘発・産生されたイ
ンターフエロンを含む水溶液とケイ酸（SiO2）
を含有する組成物を接触させてこの組成物にイン
ターフエロンを吸着させ、吸着されたインターフ
エロンを非イオン性界面活性剤およびアクリフラ
ビン類を含有する水溶液により溶出させるのであ
る。 本発明におけるヒト由来細胞としては白血球、
リンパ球、腹腔、肺、脾等の細胞のような網内系
細胞、培養ヒトリンパ芽球様細胞等あらゆる公知
のインターフエロン産生細胞を利用できるが、好
ましいものは産生能等の点からヒト白血球および
培養ヒトリンパ芽球様細胞であり、培養ヒトリン
パ芽球様細胞としては特にナマルバ
（Namalwa）株が好ましい。ナマルバ株は20種
のバーキツトリンパ腫および白血病患者由来の株
化リンパ球の中から選出された株化細胞であり、
現在この細胞はインターフエロンを最もよく産生
する細胞として知られている（Intern.J.Cancer
第11巻、327号、1973年およびJ.Clinical
Microbiol.第１巻、第１号、1975年）。 ケイ酸（SiO2）を含有する組成物としてはベ
ントナイト、酸性白土、カオリン、ケイ酸アルミ
ン酸マグネシウムおよびこれらに相応する化合物
が使用できる。ケイ酸を含有する組成物の使用濃
度は0.001〜2.0w／ｖ％の範囲であり、通常は
0.01〜1.0w／ｖ％の濃度で使用する。ケイ酸含有
組成物とインターフエロンを含む水溶液の接触
は、通常はバツチ式操作によりケイ酸含有組成物
をインターフエロン水溶液に添加する。この接触
はPH５〜９で行うのが有利であり、温度は室温で
よく、接触時間は１〜５時間であり、撹拌するの
が有利である。このような接触操作によりインタ
ーフエロンはケイ酸含有組成物に吸着され、その
吸着は極めて特異的である。 吸着されたインターフエロンの溶出はその水溶
液とケイ酸含有組成物を分離し、この組成物を洗
浄したのちアクリフラビン類と非イオン性界面活
性剤を含有する水溶液によつておこなう。水溶液
のPHは1.5〜9.0に調整されていることが好まし
く、その濃度は通常0.01〜1.0w／ｖ％である。ア
クリフラビン類としてはアクリノールが水に溶解
しやすい点で有利である。非イオン性界面活性剤
としてはソルビタンモノアルキルエステル型、ア
ルキルエーテル型、ポリオキシエチレンポリオキ
シプロピレン共重合体などのポリオキシエチレン
系のものが、蛋白との結合が殆んどない点で有利
であり、その使用濃度は0.001〜2.0w／ｖ％であ
る。これらの非イオン性界面活性剤は単独で用い
ても溶出効果は低く、アクリフラビン類と併用す
ることにより溶出効果が著るしく高められる。 溶出されたインターフエロンは粗精製されたも
のを出発物質とした場合はそのまゝ又は安定剤を
加えて脱塩透析し、除菌過し、分注したのち凍
結乾燥を行つて乾燥製剤とし、原料段階を出発物
質とした場合は脱塩、透析、濃縮等の処理を行つ
て粗精製し、次に公知の精製法を行つて高純度に
精製したのち製剤処理を行つて乾燥製剤とする。
本発明に組合せる精製法を例示すると、エタノー
ル分画法（Tissue Culture Association：In
Proceedings of ａ Tissue Culture
Association Work Shop In Vitro論文３号、
1973年）、弱酸性および弱塩基性イオン交換体を
用いるカラムクロマトグラフイーとゲル過を組
み合せた精製方法（特公昭51―34442号）、塩化ア
ンモニウムあるいはデキストランを用いた精製法
〔Ann.Med.Exp.Fenn.44，265〜273，1966，およ
び同45，20〜29（1967）〕、強酸性陽イオン交換体
による分画法（特願昭52―156019号：出願人 株
式会社ミドリ十字）等である。 本発明に係るインターフエロンの回収法は回収
率において従来法と同等又はそれ以上であり、回
収操作はインターフエロン水溶液とケイ酸含有組
成物との接触及び非イオン性界面活性剤とアクリ
フラビン類を含む水溶液によるインターフエロン
の溶出であり、これらの操作はいずれも簡易であ
つて作業工程を大巾に簡略化できるから、工業的
規模におけるインターフエロンの製法として極め
て好適である。 本発明の実験例および実施例を説明するが、本
発明はこれらの実施例、実験例に限定されるもの
ではない。又実験例や実施例におけるインターフ
エロンの活性は、ヴエシクラー・ストマテイテイ
ス・ウイルス（Vesicular stomatitis virus）と
ヒト羊膜由来のFL細胞を用い、50％プラツク減
少法により測定した。インターフエロンの力価は
被検試硫と同時に測定したスタンダード・インタ
ーフエロンの力価より国際単位（IU）に換算し
た（最新医薬29(4)660、1974）。 実験例 ヒト静脈由来のリンパ球の培養系から得た粗製
インターフエロン液５（比活性3000IU／mg蛋
白）を用いてインターフエロンの吸着材料及び溶
出条件の実験を行つた。用いた吸着材料及び溶出
条件は第１表の通りである。この実験は粗製イン
ターフエロン液を遠心分離して上清を集め、これ
に各種吸着剤を1w／ｖ％の割合で添加し、室温
で約２時間撹拌したのち遠心分離して吸着剤を回
収した。この吸着剤を洗浄したのち、各種溶出液
にてインターフエロンを溶出させた。インターフ
エロンを含む溶出液を透析し、濃縮したのち、そ
の活性を測定して回収率を計算した。その結果非
イオン性界面活性剤及びアクリフラビン類を含有
する溶出液は著明な効果を示した。
ンターフエロンを工業的規模において回収する方
法に関するものである。 インターフエロンはウイルスその他の物質の刺
激によりヒトを含む動物細胞から産生されるある
種の糖蛋白質である。このものはウイルスや細菌
又は原虫の細胞内増殖を阻止する機能をもつてい
るが、この機能は動物種に特異的であることか
ら、医薬としてヒトに用いる場合はヒトの細胞か
ら産生されたインターフエロンを得る必要があ
る。ヒトのインターフエロンを大量に得るために
は、ヒトリンパ球、ヒト繊維芽細胞又はヒト株化
リンパ芽球等を大量に集め、これらの細胞に適当
な刺激を与えてインターフエロンを産生させ、こ
の産生されたインターフエロンを収率よく回収し
なければならない。 しかし従来の回収法は複雑な操作と長い時間を
要しており、工業的規模で行うには不適なだけで
なく、収率も低いという欠点があつた。 発明者は長年にわたつてインターフエロンを簡
易な操作で収率よく回収する方法を研究し、ペン
トナイトや酸性白土などのケイ酸を含有する組成
物がインターフエロンを特異的に吸着することを
見出し、さらにこの吸着体からインターフエロン
を溶出させる研究を続け、非イオン性界面活性剤
およびアクリフラビン類を含有する水溶液を用い
るとインターフエロンが吸着体から特異的に溶出
されることを見出し、これらの新しい知見に基づ
いて本発明を完成し、インターフエロンを工業的
規模において簡易な操作で収率よく回収すること
に成功した。 本発明はヒト由来細胞から誘発・産生されたイ
ンターフエロンを含む水溶液とケイ酸（SiO2）
を含有する組成物を接触させてこの組成物にイン
ターフエロンを吸着させ、吸着されたインターフ
エロンを非イオン性界面活性剤およびアクリフラ
ビン類を含有する水溶液により溶出させるのであ
る。 本発明におけるヒト由来細胞としては白血球、
リンパ球、腹腔、肺、脾等の細胞のような網内系
細胞、培養ヒトリンパ芽球様細胞等あらゆる公知
のインターフエロン産生細胞を利用できるが、好
ましいものは産生能等の点からヒト白血球および
培養ヒトリンパ芽球様細胞であり、培養ヒトリン
パ芽球様細胞としては特にナマルバ
（Namalwa）株が好ましい。ナマルバ株は20種
のバーキツトリンパ腫および白血病患者由来の株
化リンパ球の中から選出された株化細胞であり、
現在この細胞はインターフエロンを最もよく産生
する細胞として知られている（Intern.J.Cancer
第11巻、327号、1973年およびJ.Clinical
Microbiol.第１巻、第１号、1975年）。 ケイ酸（SiO2）を含有する組成物としてはベ
ントナイト、酸性白土、カオリン、ケイ酸アルミ
ン酸マグネシウムおよびこれらに相応する化合物
が使用できる。ケイ酸を含有する組成物の使用濃
度は0.001〜2.0w／ｖ％の範囲であり、通常は
0.01〜1.0w／ｖ％の濃度で使用する。ケイ酸含有
組成物とインターフエロンを含む水溶液の接触
は、通常はバツチ式操作によりケイ酸含有組成物
をインターフエロン水溶液に添加する。この接触
はPH５〜９で行うのが有利であり、温度は室温で
よく、接触時間は１〜５時間であり、撹拌するの
が有利である。このような接触操作によりインタ
ーフエロンはケイ酸含有組成物に吸着され、その
吸着は極めて特異的である。 吸着されたインターフエロンの溶出はその水溶
液とケイ酸含有組成物を分離し、この組成物を洗
浄したのちアクリフラビン類と非イオン性界面活
性剤を含有する水溶液によつておこなう。水溶液
のPHは1.5〜9.0に調整されていることが好まし
く、その濃度は通常0.01〜1.0w／ｖ％である。ア
クリフラビン類としてはアクリノールが水に溶解
しやすい点で有利である。非イオン性界面活性剤
としてはソルビタンモノアルキルエステル型、ア
ルキルエーテル型、ポリオキシエチレンポリオキ
シプロピレン共重合体などのポリオキシエチレン
系のものが、蛋白との結合が殆んどない点で有利
であり、その使用濃度は0.001〜2.0w／ｖ％であ
る。これらの非イオン性界面活性剤は単独で用い
ても溶出効果は低く、アクリフラビン類と併用す
ることにより溶出効果が著るしく高められる。 溶出されたインターフエロンは粗精製されたも
のを出発物質とした場合はそのまゝ又は安定剤を
加えて脱塩透析し、除菌過し、分注したのち凍
結乾燥を行つて乾燥製剤とし、原料段階を出発物
質とした場合は脱塩、透析、濃縮等の処理を行つ
て粗精製し、次に公知の精製法を行つて高純度に
精製したのち製剤処理を行つて乾燥製剤とする。
本発明に組合せる精製法を例示すると、エタノー
ル分画法（Tissue Culture Association：In
Proceedings of ａ Tissue Culture
Association Work Shop In Vitro論文３号、
1973年）、弱酸性および弱塩基性イオン交換体を
用いるカラムクロマトグラフイーとゲル過を組
み合せた精製方法（特公昭51―34442号）、塩化ア
ンモニウムあるいはデキストランを用いた精製法
〔Ann.Med.Exp.Fenn.44，265〜273，1966，およ
び同45，20〜29（1967）〕、強酸性陽イオン交換体
による分画法（特願昭52―156019号：出願人 株
式会社ミドリ十字）等である。 本発明に係るインターフエロンの回収法は回収
率において従来法と同等又はそれ以上であり、回
収操作はインターフエロン水溶液とケイ酸含有組
成物との接触及び非イオン性界面活性剤とアクリ
フラビン類を含む水溶液によるインターフエロン
の溶出であり、これらの操作はいずれも簡易であ
つて作業工程を大巾に簡略化できるから、工業的
規模におけるインターフエロンの製法として極め
て好適である。 本発明の実験例および実施例を説明するが、本
発明はこれらの実施例、実験例に限定されるもの
ではない。又実験例や実施例におけるインターフ
エロンの活性は、ヴエシクラー・ストマテイテイ
ス・ウイルス（Vesicular stomatitis virus）と
ヒト羊膜由来のFL細胞を用い、50％プラツク減
少法により測定した。インターフエロンの力価は
被検試硫と同時に測定したスタンダード・インタ
ーフエロンの力価より国際単位（IU）に換算し
た（最新医薬29(4)660、1974）。 実験例 ヒト静脈由来のリンパ球の培養系から得た粗製
インターフエロン液５（比活性3000IU／mg蛋
白）を用いてインターフエロンの吸着材料及び溶
出条件の実験を行つた。用いた吸着材料及び溶出
条件は第１表の通りである。この実験は粗製イン
ターフエロン液を遠心分離して上清を集め、これ
に各種吸着剤を1w／ｖ％の割合で添加し、室温
で約２時間撹拌したのち遠心分離して吸着剤を回
収した。この吸着剤を洗浄したのち、各種溶出液
にてインターフエロンを溶出させた。インターフ
エロンを含む溶出液を透析し、濃縮したのち、そ
の活性を測定して回収率を計算した。その結果非
イオン性界面活性剤及びアクリフラビン類を含有
する溶出液は著明な効果を示した。
【表】
実施例 １
ヒト静脈由来のリンパ球をヒトアルブミン0.25
％添加MEM培地で培養し、センダイウイルスに
よりインターフエロンを産生させ、その後塩酸に
よりPH２に調整してインデユーサーとして用いた
センダイウイルスを不活化し、この粗製インター
フエロン液を遠心分離して上清を集めた。集めた
上清を1Nの水酸化ナトリウムによりPHを中性に
戻したのち、ベントナイトを1.0w／ｖ％添加し
て室温で２時間撹拌し、インターフエロンをベン
トナイトに吸着させた。このベントナイトを遠心
分離により集め、1.0w／ｖ％のNaClをベントナ
イトの湿重量当り２培量加え、よく撹拌したのち
再度遠心分離によりベントナイトを集めた。この
操作を２回繰返したのち、0.5％のアクリノール
と２％プルオニツクF68（（Wyandotte Chen.
Corp.）を含有する水溶液を加え、1Nの塩酸でPH
を2.0に修正し、37℃で１時間撹拌してインター
フエロンを溶出させた。次に溶出液を0.05Mトリ
ス塩酸緩衝液により４℃で約12時間透析を行いつ
つ濃縮して精製インターフエロンを得た。回収率
は出発培養液の粗製インターフエロン活性を100
％として50％であり、精製度は1000倍であつた。 精製インターフエロンの濃縮液を除菌過し、
分注し、凍結乾燥を行つて乾燥製剤とした。この
製剤をマウス及びウサギに100万IU／Kg投与し、
７日間観察をおこなつたが、体重の増加、減少、
立毛等の異常は認められなかつた。 実施例 ２ 実施例１におけるベントナイトの代りにカオリ
ンを1.0w／ｖ％添加し、その他は実施例１と同
じ処理を行つて精製インターフエロンを得た。回
収率は56％で、精製度950倍であつた。このもの
の乾燥製剤をマウスおよびウサギについて実施例
１と同じ実験を行つたが、異常は認められなかつ
た。 実施例 ３ ヒト株化リンパ球（ナマルバ細胞）を
RPMI1640培養液（日水製薬）を用いて増殖さ
せ、これにセンダイウイルスをインデユーサーと
して添加してインターフエロンを産生させた。こ
のインターフエロンに実施例１と同じ処理を行つ
て精製しインターフエロンを得た。回収率は53％
で、精製度980倍であつた。このものの乾燥製剤
をマウスおよびウサギについて実施例１と同じ実
験を行つたが、異常は認められなかつた。
％添加MEM培地で培養し、センダイウイルスに
よりインターフエロンを産生させ、その後塩酸に
よりPH２に調整してインデユーサーとして用いた
センダイウイルスを不活化し、この粗製インター
フエロン液を遠心分離して上清を集めた。集めた
上清を1Nの水酸化ナトリウムによりPHを中性に
戻したのち、ベントナイトを1.0w／ｖ％添加し
て室温で２時間撹拌し、インターフエロンをベン
トナイトに吸着させた。このベントナイトを遠心
分離により集め、1.0w／ｖ％のNaClをベントナ
イトの湿重量当り２培量加え、よく撹拌したのち
再度遠心分離によりベントナイトを集めた。この
操作を２回繰返したのち、0.5％のアクリノール
と２％プルオニツクF68（（Wyandotte Chen.
Corp.）を含有する水溶液を加え、1Nの塩酸でPH
を2.0に修正し、37℃で１時間撹拌してインター
フエロンを溶出させた。次に溶出液を0.05Mトリ
ス塩酸緩衝液により４℃で約12時間透析を行いつ
つ濃縮して精製インターフエロンを得た。回収率
は出発培養液の粗製インターフエロン活性を100
％として50％であり、精製度は1000倍であつた。 精製インターフエロンの濃縮液を除菌過し、
分注し、凍結乾燥を行つて乾燥製剤とした。この
製剤をマウス及びウサギに100万IU／Kg投与し、
７日間観察をおこなつたが、体重の増加、減少、
立毛等の異常は認められなかつた。 実施例 ２ 実施例１におけるベントナイトの代りにカオリ
ンを1.0w／ｖ％添加し、その他は実施例１と同
じ処理を行つて精製インターフエロンを得た。回
収率は56％で、精製度950倍であつた。このもの
の乾燥製剤をマウスおよびウサギについて実施例
１と同じ実験を行つたが、異常は認められなかつ
た。 実施例 ３ ヒト株化リンパ球（ナマルバ細胞）を
RPMI1640培養液（日水製薬）を用いて増殖さ
せ、これにセンダイウイルスをインデユーサーと
して添加してインターフエロンを産生させた。こ
のインターフエロンに実施例１と同じ処理を行つ
て精製しインターフエロンを得た。回収率は53％
で、精製度980倍であつた。このものの乾燥製剤
をマウスおよびウサギについて実施例１と同じ実
験を行つたが、異常は認められなかつた。
Claims (1)
- １ ヒト由来細胞から誘発・産生されたインター
フエロンを含む水溶液とケイ酸（SiO2）を含有
する組成物を接触させてこの組成物にインターフ
エロンを吸着させ、吸着されたインターフエロン
を非イオン性界面活性剤およびアクリフラビン類
を含有する水溶液により溶出させることを特徴と
するインターフエロンの回収法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9784879A JPS5620520A (en) | 1979-07-30 | 1979-07-30 | Recovery of interferon |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9784879A JPS5620520A (en) | 1979-07-30 | 1979-07-30 | Recovery of interferon |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5620520A JPS5620520A (en) | 1981-02-26 |
| JPS641118B2 true JPS641118B2 (ja) | 1989-01-10 |
Family
ID=14203144
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP9784879A Granted JPS5620520A (en) | 1979-07-30 | 1979-07-30 | Recovery of interferon |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5620520A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0526568U (ja) * | 1991-09-25 | 1993-04-06 | ブレーンエンジニアリング株式会社 | 自動車用カバー |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3215508C2 (de) * | 1982-04-26 | 1986-11-06 | Kernforschungszentrum Karlsruhe Gmbh, 7500 Karlsruhe | Verfahren zur Verbesserung der Radionuklid-Rückhalteeigenschaften von Verfestigungen radioaktiver Abfälle |
| EP0157771A1 (en) * | 1983-10-17 | 1985-10-16 | Chem-Nuclear Systems, Inc. | Improved solidification of aqueous radioactive waste using insoluble compounds of magnesium oxide |
| JPH0664194B2 (ja) * | 1987-05-21 | 1994-08-22 | 九州電力株式会社 | 使用済イオン交換樹脂のセメント固化処理方法 |
-
1979
- 1979-07-30 JP JP9784879A patent/JPS5620520A/ja active Granted
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0526568U (ja) * | 1991-09-25 | 1993-04-06 | ブレーンエンジニアリング株式会社 | 自動車用カバー |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS5620520A (en) | 1981-02-26 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI72124C (fi) | Foerfarande foer tillvaratagande av interferon. | |
| EP0118808B1 (de) | Reinigung von Interferon | |
| JP3438735B2 (ja) | 上清ｉｖ、特にｉｖ−４またはコーンフラクションｖまたはそれと類似の上清または画分からヒトアルブミンを単離する方法 | |
| NL7907791A (nl) | Werkwijze voor het zuiveren van interferon. | |
| US4278661A (en) | Purification of interferon | |
| EP0097057B1 (en) | Method of producing human epidermal growth factor | |
| NZ203364A (en) | Method for purifying human immune interferon;homogeneous human immune interferon | |
| JP3360315B2 (ja) | ヒト血清アルブミンの高度精製方法 | |
| JPS641118B2 (ja) | ||
| EP0071647B1 (en) | Process for recovering interferon | |
| US4617378A (en) | Purification of biologically active human immune interferon | |
| JPS641117B2 (ja) | ||
| JP2732514B2 (ja) | リゾチーム二量体の製造方法 | |
| JP2573767B2 (ja) | 分泌大腸菌突然変異体からのヒトインターロイキン―４の精製 | |
| US5739293A (en) | Δ1 -acid glycoprotein purfication process and product | |
| JPH08116985A (ja) | 遺伝子操作に由来するヒト血清アルブミンの精製方法 | |
| US4723000A (en) | Human interferon gamma and interleukin-2 | |
| JP2885212B2 (ja) | 遺伝子操作由来のヒト血清アルブミンより得られる高純度ヒト血清アルブミン含有組成物 | |
| EP0446850B1 (en) | Process for purifying recombinant human beta-interferon | |
| GB1601744A (en) | Processes for the purification of interferon certain new and useful intermediates formed therein the purified interferon thus produced and pharmaceutical compositions containing | |
| AT391482B (de) | Verfahren zur industriellen herstellung von hochreinem menschlichem leukozyteninterferon | |
| JPH022390A (ja) | 新規なヒト顆粒球マクロファージコロニー刺激因子 | |
| JPS6411640B2 (ja) | ||
| KR920009520B1 (ko) | 재조합 인체 종양괴사인자(TNF-α)의 정제방법 | |
| JPS619298A (ja) | α‐インターフエロンの単離および精製のための方法 |