JPS6374491A - 蛋白の産生法 - Google Patents
蛋白の産生法Info
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- JPS6374491A JPS6374491A JP61218886A JP21888686A JPS6374491A JP S6374491 A JPS6374491 A JP S6374491A JP 61218886 A JP61218886 A JP 61218886A JP 21888686 A JP21888686 A JP 21888686A JP S6374491 A JPS6374491 A JP S6374491A
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Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/67—General methods for enhancing the expression
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
(産業上の利用分野)
本発明は蛋白の産生法に関する。
(従来の技術)
組換えDNA技術によシ、目的とする蛋白をコードする
遺伝子の発現を可能とする組換えDNAを含有する形質
転換株を得、これを培養することによシ目的の遺伝子に
由来する蛋白を産生させることが行われている。
遺伝子の発現を可能とする組換えDNAを含有する形質
転換株を得、これを培養することによシ目的の遺伝子に
由来する蛋白を産生させることが行われている。
(発明が解決しようとしている問題点)この方法におけ
る問題の一つは、いかに目的蛋白を大量に産生させるか
であシ、このために培養方法についても種々の方法が提
案されている。
る問題の一つは、いかに目的蛋白を大量に産生させるか
であシ、このために培養方法についても種々の方法が提
案されている。
たとえば、濾過培養による産生蛋白の系外への除去(昭
和61年度 日本農芸化学会要旨集。
和61年度 日本農芸化学会要旨集。
5itiページ)、グルコース等の基質忙よる流加培養
による組換え菌体の高密度培養(同上、97ページ)等
が提案されている。
による組換え菌体の高密度培養(同上、97ページ)等
が提案されている。
しかしながら、本発明者らは、さらに生産効率を向上し
うる方法について種々検討を行った。
うる方法について種々検討を行った。
(問題点を解決するための手段)
本発明の要旨は、蛋白産生のための遺伝情報を有する組
換えDNAを含有する形質転換株を培養して蛋白を産生
させる方法において、リン脂質を含む培地中で該形質転
換株を培養することを特徴とする蛋白の産生法に存する
。
換えDNAを含有する形質転換株を培養して蛋白を産生
させる方法において、リン脂質を含む培地中で該形質転
換株を培養することを特徴とする蛋白の産生法に存する
。
以下1本発明の詳細な説明する。
まず1本発明における形質転換株は目的とする蛋白をコ
ードする遺伝子の発現を可能とする組換えDNAを含有
するものであり1通常の遺伝子操作技術によシ得ること
ができる。
ードする遺伝子の発現を可能とする組換えDNAを含有
するものであり1通常の遺伝子操作技術によシ得ること
ができる。
産生ずべき蛋白としては特に制限されないが。
例えば、アポ蛋白類、脂質の合成酵素、脂質転移蛋白、
腓バインディング蛋白等の両親媒性な有する蛋白が好適
である。
腓バインディング蛋白等の両親媒性な有する蛋白が好適
である。
本発明において用いられる宿主微生物としては枯草菌、
酵母、大腸菌等が挙げられる。
酵母、大腸菌等が挙げられる。
本発明において、上記形質転換株の培養はリン脂質を含
む培地中で行われる。
む培地中で行われる。
リン脂質としては、ホスファチジルコリン(レシチン)
、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセ
リン、ホスファチジルグリセロール、合成リン脂質であ
るシミリスチルホスファチジルコリン(DMPc)等が
挙げられるが、レシチンが最も好適である。
、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセ
リン、ホスファチジルグリセロール、合成リン脂質であ
るシミリスチルホスファチジルコリン(DMPc)等が
挙げられるが、レシチンが最も好適である。
さらには、これらを多量に含有する大豆、卵黄等の天然
物またはこれらの粗抽出物が挙げられる。
物またはこれらの粗抽出物が挙げられる。
培地は、宿主に適した合成、半合成培地が使用できる。
上記リン脂質の使用量はリン脂質の種類、産生蛋白の種
類等によって異なるが5通常100■〜!f−/を程度
、好適には一00■〜/1/を程度から選ばれる。
類等によって異なるが5通常100■〜!f−/を程度
、好適には一00■〜/1/を程度から選ばれる。
培養は宿主に最適な温度、pH、時間等を選んで行われ
る。
る。
培養終了後、常法によシ菌体内または培地よシ産生蛋白
を分離、精製することによシ目的とする蛋白を得ること
ができる。
を分離、精製することによシ目的とする蛋白を得ること
ができる。
(実施例)
以下、実施例によシ本発明をさらに詳細に説明するが1
本発明は、その要旨を越えない限シ以下の実施例によっ
て限定されるものではない。
本発明は、その要旨を越えない限シ以下の実施例によっ
て限定されるものではない。
参考例1
(アポ蛋白A I (ApoAI)遺伝子を含む形質転
換株pNYAJr/MI / / J 17)調製)プ
ラスミドphAIM−/(特開昭447−949q号公
報参照)を制限酵素11iieoRIで消化後、 T’
lDNA ポリメラーゼ処理後、HlndlII リ
ンカ−をリガーゼにより連結した。
換株pNYAJr/MI / / J 17)調製)プ
ラスミドphAIM−/(特開昭447−949q号公
報参照)を制限酵素11iieoRIで消化後、 T’
lDNA ポリメラーゼ処理後、HlndlII リ
ンカ−をリガーゼにより連結した。
ついで、制限酵素1findIIIで消化した後。
リガーゼ処理を行った。
得られるDNA試料を使用し、CILGtコ法によυ大
腸菌HB10/株を形質転換し、この株よシブラスミド
pBRAI−9Hな得喪。
腸菌HB10/株を形質転換し、この株よシブラスミド
pBRAI−9Hな得喪。
一方、プラスミドpN06(s、りkb ) を制限
酵素LすIで部分消化した後リガーゼ処理□した。
酵素LすIで部分消化した後リガーゼ処理□した。
このDNA試料を使いCaCtユ法により大腸菌H81
01株わ形質転換し、この株よシプラゼ遺伝子のシグナ
ルペプチドをコードするDNA断片をダ本の合成りNA
として作成しく図ユ参照。得られるDNA断片の塩基配
列は図3参照)、プラスミドpUCgを制限酵素Eeo
RIとBamHI で二重消化したものとりガーゼ処
理した。
01株わ形質転換し、この株よシプラゼ遺伝子のシグナ
ルペプチドをコードするDNA断片をダ本の合成りNA
として作成しく図ユ参照。得られるDNA断片の塩基配
列は図3参照)、プラスミドpUCgを制限酵素Eeo
RIとBamHI で二重消化したものとりガーゼ処
理した。
このDNA試料を使いCaCtコ法によシ大腸−番 −
菌HB10/株を形質転換し、この株よりプラスミドp
UA81I(コ、tr kb )を得た。
UA81I(コ、tr kb )を得た。
(プラスミドpNYA&の構築)
上記プラスミドpBRAI−9Hを制限酵素抛HI、且
廊dIIIで消化し、ざ、t 9 bp の断片を得
た。
廊dIIIで消化し、ざ、t 9 bp の断片を得
た。
また、プラスミドpNcAO/を制限酵L■す!、一旦
ユndIIIで消化しJ、t kbの断片を得、他方、
上記プラスミドpUA81Iを制限酵素シoRI、Ba
mHIで消化し/ / 7 bpの断片を得た。
ユndIIIで消化しJ、t kbの断片を得、他方、
上記プラスミドpUA81Iを制限酵素シoRI、Ba
mHIで消化し/ / 7 bpの断片を得た。
次いでこの3つの断片をリガーゼで連結し枯草菌MI/
/コを形質転換し、形質転換株p NYA −g /
M I / /コを得た。
/コを形質転換し、形質転換株p NYA −g /
M I / /コを得た。
実施例1
参考例1で得られた形質転換株pNYAg/MItiコ
を1OO−のLB培地を使い3クセで& 00 nm
の吸光度で°0.6まで培養した。
を1OO−のLB培地を使い3クセで& 00 nm
の吸光度で°0.6まで培養した。
一方、aO■の卵由来のホスファチジルコリンをiom
tのLB培地に懸濁し、氷上で30分間ソニケーション
を行い、先のpNYA/MI //コ培養液を加えた。
tのLB培地に懸濁し、氷上で30分間ソニケーション
を行い、先のpNYA/MI //コ培養液を加えた。
続けて37セで培養を行い、一方ホスファチジルコリン
を加える直前、加えてから1時間後コ時間後にそれぞれ
10−培養液をとりだし。
を加える直前、加えてから1時間後コ時間後にそれぞれ
10−培養液をとりだし。
遠心分離を行って培養上清を得た。
これら培養上清のApoAI濃度をRadio−1mm
une−ammay @にて測定した結果を表/[示す
。
une−ammay @にて測定した結果を表/[示す
。
表 / ApoAI濃度
(発明の効果)
本発明によれば蛋白の産生効率を向上しうる。
図1はプラスミドpNYAffの構築を示す工程図であ
る。 図ユはプラスミドpUA84(の構築を示す工程図であ
る。 図3はBaalllus amyloll 1faei
ensのアミラーゼ遺伝子のシグナルペプチドをコード
するDNA部分の塩基配列を示す図である。 出願人 三菱化成工業株式会社 代理人 弁理士 長谷用 − ほか1名 手続補正書動側 昭和61年12月l1日
る。 図ユはプラスミドpUA84(の構築を示す工程図であ
る。 図3はBaalllus amyloll 1faei
ensのアミラーゼ遺伝子のシグナルペプチドをコード
するDNA部分の塩基配列を示す図である。 出願人 三菱化成工業株式会社 代理人 弁理士 長谷用 − ほか1名 手続補正書動側 昭和61年12月l1日
Claims (1)
- (1)蛋白産生のための遺伝情報を有する組換えDNA
を含有する形質転換株を培養して蛋白を産生させる方法
において、リン脂質を含む培地中で該形質転換株を培養
することを特徴とする蛋白の産生法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP61218886A JPS6374491A (ja) | 1986-09-17 | 1986-09-17 | 蛋白の産生法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP61218886A JPS6374491A (ja) | 1986-09-17 | 1986-09-17 | 蛋白の産生法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS6374491A true JPS6374491A (ja) | 1988-04-04 |
Family
ID=16726849
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP61218886A Pending JPS6374491A (ja) | 1986-09-17 | 1986-09-17 | 蛋白の産生法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPS6374491A (ja) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1994018240A1 (fr) * | 1993-02-11 | 1994-08-18 | Institut National De La Recherche Agronomique-Inra | Proteines de champignons filamenteux capables de realiser la fixation et le transport de lipides, leur procede d'obtention et leurs applications |
JP2018023356A (ja) * | 2016-08-04 | 2018-02-15 | 三洋化成工業株式会社 | 有用物質の生産方法 |
-
1986
- 1986-09-17 JP JP61218886A patent/JPS6374491A/ja active Pending
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1994018240A1 (fr) * | 1993-02-11 | 1994-08-18 | Institut National De La Recherche Agronomique-Inra | Proteines de champignons filamenteux capables de realiser la fixation et le transport de lipides, leur procede d'obtention et leurs applications |
US5717070A (en) * | 1993-02-11 | 1998-02-10 | Institut National De La Recherche Agronomique-Inra | Filamentous fungus proteins for binding and transporting lipids, method for preparing them and their applications |
JP2018023356A (ja) * | 2016-08-04 | 2018-02-15 | 三洋化成工業株式会社 | 有用物質の生産方法 |
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