JPS63501875A - 活性分屑およびその製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 活性分屑およびその製造方法 技術分野 本発明はリステリア単核細胞（Ｌｉｓｔｅｒｉａｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ） 菌種Ｌ７９の醗酵肉汁から単離した新規な治療上の活性分屑およびその製造方法 ならびにこの分層を活性成分として含有する医薬組成物に関するものである。

背景技術 単環式食細胞系は腫瘍形成に対する宿主の免疫防御の重要な素材である（ディー ・オー・アダムス、アール・スナイダーマン著、Ｊ、　Ｎａｔｌ、　Ｃａｎｃｅ ｒ　Ｉｎ５ｔ、。

１９７９、１６．１３４１．ジエイ・ビー・ヒブス、エッチ・エイ・チャツプマ ン、ジエイ・ビー・ウニインバーブ著、Ｊ、　Ｒａｔｉｃｕｌｏｅｎｄｏｔｈｅ ｌ、、　１９７８．２４．５４９；　ディー・ニス・ネルソン、イー・ケイ・ホ ッパー、エム・ネルソン著、Ｈａｎｄｂｏｏｋ　ｏｆ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｍｍｕ ｎｏｌｏｇｙ　Ｖｏｌ。

■、エッチ・ウオターズ編、第１０７頁、ガーランド　パブリッシング　インソ ーボレーション、ニューヨーク、１９７９）。

マクロファージは、活性化が生じた際に数種の生物学的刺激により発生し得る腫 瘍細胞に対して生体外での適切な細胞毒性活性を働かせることができる（アール ・ケラー著、Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｍａｃｒｏｐｈａｇ ｅ、ディー・ニス・ネルソン編、第４８７頁、アカデミツクプレス、ニューヨー ク、１９７６、エル・ビイ−・ルコ、エム・ニス・メルツ著、Ｃｅ１１．　Ｉ＠ ｍｕｎｏ１．、４１．３５゜１９７８）。

数種の微生物、その内マイコバクテリウム　ボビス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕ ｍ　ｂｏｖｉｓ）　（アール・シイ−・バスト、ビイ−・ツバ−、ティー・ボル ソ等著、Ｎ、　Ｅｎｇｌ、　Ｊ。

Ｍｅｄ、、　２９０−１４１３−１４２０　；　１４５８−１４６９．１９７４ ）　、コリネバクテリウム　パルバム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｐａ ｒｖｕｍ）（シイ−・マセ、ビ―・ピュイラート、エル・シュワルツエンベルブ 著、Ｎａｔｌ、　Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｎ５ｔ、　Ｍ’ｏｎｏｇｒ、。

３５、３８１．１９７２；エル・イスラエル、ビイ−・ハルパーン著、Ｎｏｕｖ 、　Ｐｒｅｓｓ　Ｍｅｄ、、　１．１９．１９７２）、コリネバクテリウム　ダ ラヌロサム（ＣｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕＵｌｇｒａｎｕｌｏｓｕｍ）　（シ イ−・マセ著、上記文献）およびリステリア単核細胞（Ｌｉｓｔｅｒｉａ　ｍｏ ｎｏｃｙｔｏｇａｎｅｓ）　（ニス０ヨーデイム、エム・モゼー、オー・スタッ トマンｉ、Ｊ。

Ｎａｔｌ、　Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｎ５ｔ、、　５２．１９３．１９７４）は正常ま たは圧扁マクロファージに対する顕著な活性効果を示す。

さらに、アヘル・シイ−等（Ｊ、　Ｎａｔｌ、　ＣａｎｃｅｒＩｎｓｔ、、　５ ４（３）、　７４９．１９７５）は数種の微生物、特にリステリア単核細胞がい かにして宿主の免疫応答を刺激し、腫瘍の成長を抑制し得るかを記述している。

事実、コリネバクテリア種族の微生物から予め分離された細菌源の物質は免疫刺 激特性を有するが、水性媒質に不溶で、化学的に特性が劣り、その結果工業的か つ治療学的な使用が困難である。

本発明以前の従来技術の一形態例として、エイ・アール・プレポット、ビイ−・ エフ・ハルパーン、エフ・ビオッジ、シイ−・スティフエル、ディー・ムートン 、ジェイ・シイ−・モランド、シイ・ボウシイリアー、シイ−・デクレウスファ ンド（Ｃ，Ｒ，Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、。

Ｐａｒｉｓ、　１９６３．２５７５ｅｒｉｅｓ　Ｄ、　１３）がコリネバクテリ ア菌種の幾つかの微生物の免疫刺激特性および抗腫瘍特性について記載している ことを挙げることができる。

活性分屑の分離に指向する多数の研究があり、その内ディー・ミグリオアーサモ ールおよびビー・ジョレス（Ｆｅｂｓ　Ｌｅｔｔｅｒｓ、　１９７２．２５（２ ）、　３０１）は腸微生物のアジュバント物性を維持し得る水溶性分層の分離に ついて開示している。

他方、ビー・ラロネット、ビイ−・ビジニ、エム・レイナウド（Ｎ、　Ｇ、　Ｍ 、　１９７５．２５．１３）はコリネバクテリア　グラヌロサムの分別にミグリ オアーサモールおよびジョレスの方法を用いることによりアジュバントおよび免 疫刺激活性が不溶性分層（以後Ｐ４０と略記する）に附随し、水溶性分層（以後 ｓ７０と略記する）に附随しないことを確めている。

かかる不溶性分層が化学および生物学的観点からねずみにおける腫瘍Ｐ８１５に 対し特に興味ある治療活性を有することをビイ−・ビジニ、ビイ−・マロ、ジェ イ・ラロネット（ｉｎ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　ｅｔ　Ｍａｌａｄｉｅｓｉｎｆｅｃ ｔｉｅｕｓｅｓ、　７８．　ｎ、９　Ｖｏｌ、　ＶＩＩｌ、　４０８−４１４頁 ）が開示している。

サラに、ビイ−・ラロネット、ビイ−・マロ、エイ・シュワルツ、ビイ−・ビジ ニ（（：、Ｒ，Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、。

Ｐａｒｉｓ、　１９７６）は不溶性分層Ｐ４０がシクロホスファミドの注射によ り抑圧されたねずみにおけるラムの抗体抗最近、従来技術の完全な写しを得るた めに、ティー・メチアナウ、ビイ−・ビジニ（フランス国特許出願願第８００８ ９７５．１９８０）は好気性細菌から抽出し、抗腫瘍性、抗細菌性およびインタ ーフェロン産出誘導特性を有する新規な分層ならびにその製造方法を見出だした 。

他方、このコリネバクテリア　カタリスから得た分層もまた水性媒質に不溶であ る。

発明の開示 リステリア単核球菌の免疫防御法への潜在影響に関する既に達成された知見を考 慮し、同一微生物が免疫系を活性化し得る活性素の生成を含有または誘導するこ とかできる仮定を基にして、本発明の主な目的は明瞭な化学的および生化学的物 性を有すると財時に工業的規模で再生し得る上記活性素を調査し、分離すること にある。

本発明の他の目的は、工業的かつ治療使用に附随した適切な利点を有する水性媒 質に可溶な前述した如き本発明の主題を形成する活性分層（以後便宜上ＬＭ８４ として示す）はメシナ大学微生物学研究所で下記の仕様に相当するものとして固 体化されたリステリア単核細胞Ｌ７９の菌種から得る。

病理学上の材料から分離され、メジナ大学微生物学研え簾二里茎ユ直丸に互λｌ ユｙｌ−Ｍｍｍｍｆ！ｐ−ｒｑ短グラム陽性桿状のアスボリゲンの好気性または ミクロ好気性菌で、２０〜２５℃、まれに３７℃で下記に十分特徴づけられる不 規則な回転移動性を示す：基溜水　ＩＱＯｌｌｍｌ −異染性粒子　− 一　へモリシス　＋（ベータ） ｐＨを７．２　に調節し、媒質を１２０℃で１５分間滅菌し、３０％（Ｗ／Ｖ） グルコース溶液を添加し、０．２％の最終濃ルムで１２時間、さらにクロロホル ム−メタノール（２：２）で１２時間処理する； ｂ）上記連続処理の各間に１２時間アセトンで処理する。

脱脂質化した細菌を機械的ボッター均質器内で崩壊させる（最高速度で１分間の 処理を１０回；氷冷）。

崩壊した細菌の懸濁液を２０００ｘｇで遠心分離する前に常温で一定にかきまぜ ながら５時間維持して損傷のない細菌を除去する。

上澄液を８０℃に加熱し、硫酸アンモニウムの飽和溶液（または１．２５Ｍ燐酸 モノまたはジカリウム）の添加により４０％飽和濃度に調節する。

４℃で一夜放置した後、生成した沈殿物を１００００ｇでの遠心分離により捕集 する。

沈殿物を再び蒸溜水に懸濁させ、硫酸アンモニウム（または燐酸カリウム）の存 在が検知されなくなるまで蒸溜水で透析する。

水性媒質に不溶な分層に相当する部分（約６ｍｇ／ｇの脱脂質化された細菌）を 凍結乾燥する。

凍結乾燥後、前記留分を６Ｍ濃度の尿素（または炭酸水素ナトリウム）の存在下 に溶解させる。

尿素を用いて溶解する場合、次の蒸留水での透析をあらゆる尿素の痕跡が全く排 除されるまで実施する。

溶解媒質の除去後でも分層は水性媒質に可溶のまま残る。

次いで、活性物質の精製をセファローズ６ＢまたはウルトラゲルＡｃＡ３４上で のトリス緩衝液によるカラムクロマトグラフィー法により行う。

後述する分析結果は上述した抽出および精製処理により得た合計ｌＯバッチに対 して得た平均値である。

蛋白質分 ローリイー法により実施した投与によりｌｏｇの活性分層ＬＭ８４当り０．７５ ±０．１ｍｇの蛋白質分が得られる。

水　分　− １Ｏ％まで 灰　分 １ｍｇの１Ｍ８４　（乾燥重量）当り灰分０．０５−０．０８Ｂ中性糖分（アン トロン法） １ｍｇのＬＭ８４当り中性糖分０．０５−２％ヘキソサミン類（エルラン−モル ガン法）１ｍｇの１．Ｍ　８４当りへキソサミン類０−６−１．８％分子量 分子量は次の標準物質：　ＩｇＧ　、牛のシエロアルブミン、卵アルブミン、ミ オグロビン（製薬キット）が充填されたウルトラゲルＡｃＡ３４のカラムクロマ トグラフィー法によりめる。

分層な下降側に僅かに非対象に特異なピークの形状で溶出する。

分子量は２９０，０００〜３３０，０００ダルトン（平均３００．０００ダルト ン）である。

アミノ酸　断器によるアミノ酸組成の決定Ａｓｐ　５７ｊ６　６．４９　１５５ Ｔｈｒ　２１．３２　２．４０　８４ Ｓｅｒ　２２．４９　２．５３　７７ Ｇｌｕ　１９３．４５　２１．７３　４７０Ｐｒｏ　３６．２５　４．０７　１ １３６ｔｙ　１８．６９　２．１０　８９ Ａｌａ　５８．３５　Ｂ、５６　２３４Ｖａｌ　２６．５９　２．９９　８１ Ｃｙｓ”　−−− Ｍ　ｅ　ｔ　５　、９７　０　、６７　１４１１ｅ　２９．７８　３．３５　８ １ Ｌｅｕ　６３．６０　７．１５　１７４Ｔｙｒ　１７．２１　１．９３　３４ Ｐｈ’ｅ　１２．０δ　１．３６　２６Ｌｙｓ　９３．２０　１０．４７　２２ ８Ｈｉｓ　１１．１５　１．２５　２６ Ａｒｇ　３９．２５　４．４１　８１ ＤＡＰ　１５３．００　１７．１９　２８８合　計　８６０．１２　９６．６５ 　２２３７Ｃｙｓ“はＣＭ”　Ｃｙｓの形状で測定した。

アミノ酸組成の決定は、２４時間の酸加水分解物に対するスパックマン法（Ａｎ ａｌ、　Ｃｈｅｍ、　１９５Ｂ、　３０．１１９０）に従ってベックマンモデル マルチクロムＢ４２５５自動分析器により三重法で行う。

メチオニンはモアー法（Ｊ、　Ｒｉｏｔ、　Ｃｈｅｍ　；　１９６３゜２３８、 ２３５）に従ってめる。トリプトファンはガイトントートベイ比色法（Ｂｉｏｃ ｈｅｍ、　Ｊ、、　１９７０．１１７．９０７）に従ってめる。

分層ＬＭ８４の薬学および生物学的物性の分析毒性の測定 該物質をねずみに皮下、筋肉内、静脈内経路で１ｍｇ／ねずみ（体重１にｇ当り ５０ｍｇに相当）の投与量で投与しても毒性現象は何等生じない。

腫瘍の成長および転移形成の抑制に関す−る効果の分析ゲリンＴ８、不定形の転 移性エビテリオーマを使用する。腫瘍、ノルベギカス菌種をねずみの背側の皮下 領域に２０日毎に移植する。転移形成の影響を制御するための第二実験では、移 植を同一領域に毎日行う。

分層Ｌ　ｉｌ＋　８４を腫瘍の移植後３日目に静脈内経路により単一投与量（２ ００μｇ／ねすみ）で投与する。ねずみ（処理および未処理）における腫瘍Ｔ８ ゲリンの成長曲線により立証されるように、腫瘍Ｔ８の成長は上記化合物の単一 静脈内投与により著しく抑制される。

転移の発現は上記化合物での処理により十分に抑制され、移植後２００日目未処 理ねずみにおける転移の平均重量は３，１９６±１６４ｍｇである。

カンジダアルビカンスの食作用と細胞内致死腹膜マクロファージによるカンジダ アルビカンスの食作用と致死に関する試験のためにスミスーロンメルのマイクロ 法（Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　Ｍｅｔｈｏｄｓ、　１９７７、１７．２４１）を 使用する。

未処理の腫瘍担持ねずみの腹膜マクロファージの食細胞活性は対照動物に対し著 しく低下され、該動物でのカンジダアルビカンスの細胞内致死は不変である。

これに対し、分層ＬＭ８４で処理された腫瘍担持ねずみのマクロファージ類の食 細胞活性は対照マクロファージのものに対し一層高い値に保持されることが次の 第１表に示されている。

同表には、細胞内致死活性が分層ＬＭ８４での処理により著しく影響されるが低 い食細胞活性度（ｐ　＜　０．００１）であることも示されている。

第１表 腫瘍担持ねすみにおけるカンジダアルビカンスの食作用と細胞内致死に対する分 層ＬＭ８４の静脈内投与（２００μｇの単一投与量）の効果 食作用％　致死％ 対照ねずみ　６０±６”　２１±４ 未処理の腫瘍担持ねすみ　３０±５　１８±２上記結果は５回の実験の平均とし て示し、士は標準誤差； ａ＝未処理腫瘍担持ねすみに対する有効差（ｐ＜ｏ、ｏｏｏｉ）　。

ｂ＝未処理腫瘍担持ねすみに対する有効差（ｐ＜０．００１）。

腹膜マクロファージの化学的走性応答に対する分層ＬＭ８４での処理による効果 エンドトキシンで活性化したねずみの漿液を、正常な漿液を１　ｍｇ／ｍｌのエ スチュリシアコリのエンドトキシンて定温培養することにより調整する。使用し た方法はマデラッゾおよびワロニックにより開示されているものである（人体顆 粒性白血球走化性の変性微視孔フィルターアッセイ、キュイー・ピーシイー、° ガリン・ジエイ・エル編、Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ　ｃｈｅｍｏｔａｘｉｓ、ラベン ブレス、ニューヨーク、１９７８．　Ｉ）、４３）。

全ての実験を三重法で行い、平均化学的走性指数（（：Ｉ）と移動距離とを計算 する。

腫瘍担持ねずみの腹膜細胞の化学的走性応答は対照マクロファージに対し著しく 低下される。

化学的走性指数と細胞の心動のμとしての平均距離とは対照値に対し腫瘍担持ね すみにおいて著しく減少されている。

第２表は分層Ｌ　Ｍ　８４で処理された動物で得た腹膜細胞の化学的走性応答が 著しく発現される（　ｐ　＜　０．０００１）腫瘍担持ねずみでの腹膜マクロフ ァージの化学的走性応答に対する分層ＬＭ８４の静脈内投与（２００μ８／ねす み）の効果 化学的走性指数　移動前端 対照ねずみ　４５．２５±５．２”　１１Ｂ±９ｂａ＝未処理腫瘍担持ねすみに 対する有効差（ｐ＜０．００１） ｂ＝未処理腫瘍担持ねすみに対する有効差（ｐ＜０．０００１） Ｉｌ乙初＝θ＝ゼ」潰里ｉ墨１−創史≦」」ユ」屑しＭＢ２での処理効果 この効果なボニナ等著の方法（Ｉｎｆｅｃｔ　Ｉｍｍｕｎ、。

１９８３、３９．５７５）で試験する。

腹膜マクロファージの内因性活性、抗）１ｓＶ−１を数群のねずみに対しＨ５Ｖ −１の発現曲線の分析により評価する。

次の第３表は２４時間定温培養後のＨ５Ｖ−１の産出が対照ねずみまたは分層Ｌ Ｍ８４で処理した腫瘍担持ねすみから捕集したマクロファージよりも未処理腫瘍 担持ねすみから得たマクロファージ（Ｐ　＜　０．００２）において高いことを 示す。

これに対し、Ｈ５Ｖ−１分は１Ｍ８４で処理された腫瘍担持、　ねずみのマクロ ファージと対照マクロファージとの間において統計学的差がない。

第３表 静脈内経路での単一投与（２００μｇ／ねすみ）の１Ｍ８４で処理した腫瘍担持 ねずみのマクロファージの内因性活性、抗Ｈ５Ｖ−１ ２４時間での１（ＳＶ−１の産出 （ＰＦＵ／ｍｌ） 対照ねずみ　Ｍｏｌ　１２ｘｌＯ’±ｌｘｌｏ２ＭＯＩＩ０４ｘｌＯ’±２ｘ１ ０２ 未処理腫瘍担持ねずみ　Ｍｏｌ　ｌ　８ｘｌＯ６±３ｘ１０３ＭＯＩＩＯ２ｘ１ ０５±２ｘ１０３ 測定結果は５回の実験の平均値として示す。ａ＝未処理の腫瘍担持ねずみと比較 してｐ　＜　０．００２゜腹膜マクロファージの外因性活性、抗Ｈ５Ｖ−１に対 する。　屑ＬＭ８４による処理効果 外因性活性による機構はマクロファージがウィルスの近傍Ｍ５胞での繁殖を抑制 し得ることを意味する。

この活性はウィルディ等による方法（Ｉｎｆｅｃｔ　Ｉｍｍｕｎ。

１９８２、３７．４０）に従って試験する。

外因性活性、抗Ｈ５Ｖ−１はアルギニンの使用濃度でのウィルス成長の減少で表 す（ボニナ等著、ＶｉｒｕｓＲｅｓ、、　１！１８４．１５０１）。

次の第４表に示すように、ベロ細胞上で得られるような）ＩＳＶ−１の成長は腫 瘍担持ねずみの腹膜細胞に培養した細胞または対照ねずみの細胞の場合と統計学 的に差がない。これに対し、分層ＬＭ８４で処理した腫瘍担持ねずみの種々の腹 膜細胞濃度で培養したベロ細胞上でのＩＳＶ−１の成長は未処理腫瘍担持ねずみ のマクロファージおよび対照ねずみのマクロファージで得た値と著しく異なる（ 　ｐ　＜　０．００２．　ｐ　＜　０．０Ｑｌ）。

第４表 １Ｍ８４で処理した腫瘍担持ねずみのマクロファージの外因性活性、抗Ｈ５Ｖ− １ 対照ねずみ　５　／　１　６ｘｌＯ６±２ｘ１０２１０　／　１　２ｘｌＯ６± ２ｘｌＯ２ベロ細胞　２ｘｌＯ’　±６ｘ１０２ ａ＝結果を２４時間培養後のウィルス成長として４回の実験の平均値で示す。

ｂ＝未処理担体に対する有効差（、Ｐ　＜　０．００２）Ｃ＝未処理担体の値に 対する有効差（ｐ　＜　０．００１）羊の赤血球（ＧＲＭ）の投与に対する１Ｍ ８４の静脈内処理（２００μｇ／Ｋｇ／死　７日間）の応答血液凝集素をスイス ねずみにビオラ等の方法に従フて投与す゛る（Ａｎｎ、　Ｉｎ５ｔ、’　Ｐａ５ ｔｅｕｒ、　１９６６、１１０．５ｕｐｐｌ。

３、７−３２）。その読取りをミクロプレート上での技術により行う（レイナー ト等著、Ａｎｎ、　Ｉｎ５ｔ、　Ｐａ５ｔｅｕｒ。

１９７２、１２２．６９５）。

羊の赤血球を５ｘｌＯ’細胞の量で投与する。時間の関数としての血液凝集濃度 の変化から、対照動物に対しては血液凝集濃度が長期間極めて低い値で維持され ることが分る。これに対し、分層ＬＭ８４で処理した動物では濃度が速やかに増 大してＧＲＭの注入から約１週間で最高値に達する。

インターフェロン誘導活性の測定 実験を体重２０ｇのスイスねずみで行う。本発明に係わる製品を０．５ｍｌの容 積当り２００μｇの投与量で静脈内に投与し、対照動物を等容積の生理食塩水で 処理する。

濃度測定用の血液抽出を化合物の投与から１．２，４，８゜２４時間後に行う。

インターフェロンの測定は細胞変性作用の抑制方法に従って細胞ラインＬ９２９ および拮抗ウィルスとしての水痘性口内炎のウィルスを用いることにより行う（ メチアニュー等著、Ｃｏｍｐ、　Ｉｍｍｕｎ、　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、　Ｉｎｆ ｅｃｔ、Ｄｉｓ、　１９８１．４．２４）。

インターフェロンの濃度を標準血清に対する単位として調節する。

結果を次の第５表に示す。

１Ｍ８４での静脈内処理によるインターフェロン銹導活性インターフェロンの国 際単位時ｊ ＬＡ１８４（２００μｇｉｖ）　１００　４００　４００　３００　２００　１ ００担体　３３３　３　３３ 上述した一般的でない特異な目的および有効性を有する試験から、１Ｍ８４と略 記し本発明の主題となる分層は腫瘍の成長および転移形成を抑制し、免疫刺激効 果（食細胞活性の刺激）、致死量の増大（マクロファージの殺菌活性の活性化） 、マクロファージの抗菌活性の保存を有し、インターフェロン産出を誘導し、抗 体産出を増強せしめ得ることが分る。

その結果、かかる分層を治療学的に適した形態で、また感染病に、免疫防御系の 妥協を含む全ての病理学的形態で使用することができる。

実験条件および物質の物性から、該物質自体の臨床使用に適合する投与経路（筋 肉内および静脈内）ならびに投与量（５０〜４００γの単一投与または特殊な病 気による１〜３週間の定期的投与）を達成することが可能になる。

国際調査報告 １ｍ・＋ｙａｎ＊ＩＩａｌＡｔｍｋａ＋＋・内Ｎ・ＰＣＴ／ＥＰ、８６１００６ ７９入ＮＮＥＸ　Ｔｏ　Ｔｆ（Ｅ　ｒＮＴＥＲＮＡτｌ０ＮＡＬ　５ＥＡＲＣＨ ＲＥＰＯＲＴ　ｕＮＦ’Ｒ−Ａ−２２９３２１３０２１０７／７６　Ｎｏｎｅ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）リステリア単核細胞菌種Ｌ７９の培養物からバクテリアの脱脂質化、崩壊、 硫酸アンモニウムおよび燐酸塩緩衝液から選択した薬品による沈殿、蒸留水での 透析、不溶留分の凍結乾燥、尿素および炭酸ナトリウムより選択した化合物の存 在下での可溶化、クロマトグラフィー法による精製により得たことを特徴とする 活性分層。 ２）下記の分析特性： ローリィー法による蛋白質分：活性分層の０．７５±０．１ｍｇ／ｍｇ； 水分：１０％まで； 灰分：分層の乾燥重量ｍｇ当り０．０５−０．０８ｍｇ；中性糖分（アントロン 法）：活性分層ｍｇ当り中性糖分０．５−２％； ヘキソサミン（エルソン−モルガン法）：活性分層ｍｇ当りヘキソサミン０．６ −１％；分子量：２９０，０００〜３３０．０００、平均３００，０００；を有 することを特徴とする請求の範囲第１項記載の活性分層。 ３）加水分解２４時間後下記のアミノ酸組成アミノ酸μｇ％　　　　　％　　　 　　１分子当りの　　　　　　　　　　　　　　　　　　ＡＡ基の％数Ａｓｐ　 　５７．７６　　６．４９　　１５５Ｔｈｒ　　２１．３２　　２．４０　　６ ４Ｓｅｒ　　２２．４９　　２．５３　　７７Ｇｌｕ　　１９３．４５　２１． ７３　４７０Ｐｒｏ　　３６．２５　　４．０７　　１１３Ｇｌｙ　　１８．６ ９　　２．１０　　８９Ａｌａ　　５８．３５　　６．５６　　２３４Ｖａｌ　 　２６．５９　　２．９９　　８１Ｇｙｓ＋　−　　　　　　−　　　　　−Ｍ ｅｔ　　５．９７　　　０．６７　　１４Ｉｌｅ　　２９．７８　　３．３５　 　８１Ｌｅｕ　　６３．６０　　７．１５　　１７４Ｔｙｒ　　１７．２１　　 １．９３　　３４Ｐｈｅ　　１２．０６　　１．３６　　２６Ｌｙｓ　　９３． ２０　　１０．４７　２２８Ｈｉｓ　　１１．１５　　１．２５　　２６Ａｒｇ 　　３９．２５　　４．４１　　８１ＤＡＰ　　１５３．００　１７．１９　２ ８８を有することを特徴とする請求の範囲第２項記載の活性分層。 ４）腫瘍集団の成長蜂転移の形成を抑止し得ることを特徴とする請求の範囲第１ 項ないし第３項のいずれかの項に記載の活性分層。 ５）食細胞活性の刺激から誘導された免疫調節活性を有し、マクロファージの殺 菌活性を活性化し、マクロファージの抗ウィルス活性を回復させることを特徴と する請求の範囲第１項ないし第３項のいずれかの項に記載の活性分層。 ６）インターフェロンの生産を誘導し得ることを特徴とする請求の範囲第１項な いし第３項のいずれかの項に記載の活性分層。 ７）抗体生産を増強し得ることを特徴とする請求の範囲第１項ないし第３項のい ずれかの項に記載の活性分層。 ８）リステリア単核細胞菌種Ｌ７９を培質中で培養し、 生成したバクテリアを集め、 集めたバクテリアを脱脂質化し、 このバクテリアを崩壊させ、 不溶留分を硫酸アンモニウムおよび燐酸の緩衝液から選択した薬品で沈殿させ、 蒸留水で透析し、 不溶留分を凍結乾燥し、 凍結乾燥物を尿素および炭酸ナトリウムから選択した薬品の存在下で溶解して水 性媒質に可溶な留分を得、 クロマトグラフィー法により精製する 工程よりなることを特徴とする前記請求の範囲第１項ないし第７項のいずれかの 項に記載の活性分層の製造方法。 ９）リステリア単核細胞菌種Ｌ７９は下記の特性：−短グラム陽性桿状のアスポ リゲンの好気性またはミクロ好気性菌で、２０〜２５℃、まれに３７℃で下記に 十分特徴づけられる不規則な回転移動性；カタラーゼ　　　　　　　　　　＋ 異染性粒子　　　　　　　　　　− へモリシス　　　　　　　　　　＋（ベータ）−下記の物質からの酸生産 グルコース　　　　　　　　　　＋ ラクトース　　　　　　　　　　− マルトース　　　　　　　　　　＋ マンニトール　　　　　　　　　− ソリシン　　　　　　　　　　　＋ サッカロース　　　　　　　　　− スレオロース　　　　　　　　　＋ キシロース　　　　　　　　　　− タルシトール　　　　　　　　　− ＵＶＰ　　　　　　　　　　　　＋ −エスタリンの加水分解　　　　＋ −硝酸塩還元　　　　　　　　　− −ゼラチン液化　　　　　　　　− −ウレアーゼ　　　　　　　　　− −シモンズクエン酸塩　　　　　− −フェニルアラニン デアミナーゼ　　　　　　　　　− ープロファージＬＭ７９の担体 を有することを特徴とする請求の範囲第８項記載の活性分層の製造方法。 １０）脱脂質化をソックスレー装置内でａ）エーテル−エタノール（１：１）で １２時間；ｂ）クロロホルムで１２時間； ｃ）クロロホルムとメタノール（２：１）で１２時間；ｄ）上記処理間にアセト ンで各々１２時間の処理により実施することを特徴とする請求の範囲第８項記載 の活性分層の製造方法。 １１）崩壊を機械的均質器内で冷却しながら行う請求の範囲第８項記載の活性分 層の製造方法。 １２）崩壊したバクテリアの懸濁液を遠心分離して損傷のないバクテリアを除去 することを特徴とする請求の範囲第１１項記載の活性分層の製造方法。 １３）遠心分離工程の上澄層を８０℃まで加熱し、硫酸アンモニウムの飽和溶液 の添加により４０％飽和濃度に調節し、４℃で一夜維持し、次いで沈殿物を遠心 分離により回収することを特徴とする請求の範囲第１２項記載の活性分層の製造 方法。 １４）硫酸アンモニウムの代わりに燐酸カリウムおよびジカリウムの１．２５Ｍ 緩衝液を用いることを特徴とする請求の範囲第１．３項記載の活性分層の製造方 法。 １５）回収した沈殿物を蒸留水に懸濁させ、硫酸アンモニウムまたは燐酸塩緩衝 液から浄化し、水性媒質に不溶な留分を得ることを特徴とする請求の範囲第１３ 項または第１４項記載の活性分層の製造方法。 １６）浄化を蒸留水に対する透析により行うことを特徴とする請求の範囲第１５ 項記載の活性分層の製造方法。 １７）不溶留分を凍結乾燥することを特徴とする請求の範囲第１５項記載の活性 分層の製造方法。 １８）凍結乾燥物を６Ｍの尿素または炭酸ナトリウムの存在下で溶解し、次いで 尿素の存在下で蒸留水による透析を行うことを特徴とする請求の範囲第８項およ び第１７項記載の活性分層の製造方法。 １９）溶解した留分をカラムクロマトグラフィー法により精製することを特徴と する請求の範囲第８項および第１８項記載の活性分層の製造方法。 ２０）活性成分として請求の範囲第１項ないし第３項のいずれかの項に記載の活 性分層を含有する医薬組成物。 ２１）筋肉内および静脈内投与に適した形態とすることを特徴とする請求の範囲 第２０項記載の医薬組成物。 ２２）５０〜４００γの活性分層を含有することを特徴とする請求の範囲第２０ 項記載の医薬組成物。 ２３）病理学的形態に有用なことを特徴とする請求の範囲第２０項ないし第２３ 項のいずれかの項に記載の医薬組成物。 ２４）微生物およびウィルス源の病理学上の感染状態の処理に有用なことを特徴 とする請求の範囲第２０項ないし第２３項のいずれかの項に記載の医薬組成物。 ２５）免疫防御系に影響する病理学上の状態の処理に有用なことを特徴とする請 求の範囲第２０項ないし第２３項のいずれかの項に記載の医薬組成物。