JPS6344894A - 抗ヒト血清アルブミンモノクロ−ナル抗体およびその製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、ヒト血清アルブミンで免疫したマウスのリン
パ球とマウスミエローマ細胞との細胞融合によって得ら
れたハイブリドーマをクローニングして樹立したハイブ
リドーマ株から産生された、医薬品、診断薬、試薬など
として利用できる「ヒト血清アルブミンに対する高い特
異的な反応性を有するモノクローナル抗体（即ち、抗ヒ
ト血清アルブミンモノクローナル抗体）Ｊ−４こ関する
ものであり、特に、ヒト血清アルブミンのみに対して、
または、ヒト血清アルブミン及びウシ血清アルブミンの
みに対して高い特異的な反応性を有するモノクローナル
抗体に関するものである。

さらに、本発明は、ヒト血清アルブミンで免疫したマウ
スのリンパ球とマウスミエローマ細胞との細胞融合によ
って得られたハイブリドーマ株を使用して、抗ヒト血清
アルブミンモノクローナル抗体を製造する方法に関する
ものである。

〔従来技術の説明〕

血清アルブミン（分子量：　、　６９，０００）は、血
しよう蛋白質中では量的に多い成分で、血中の脂肪酸、
胆汁色素、薬剤を結合して運搬する役目などを行　　゛
なっている。腎疾患、肝硬変症、低栄養、熱性疾患、ネ
フローゼなどの代表的疾患では血清アルダ　　。

ミンの変動が知られている。血清アルブミンの大□量精
製には、低温エタノール分画法（画分■は約９０％の純
度）が行なわれ、血清アルブミン液は医療用に、ウシ血
清アルブミレ粉末は実験用に市　−”ｕ＊Ｉ’ｔ、、”
ニー’ｒＭ’ａｒｔｖ７’、ｙａ’１５ＥＩ６ｔ４−ｂ
７？。

−ナル抗体を得たという報告は次に示すよ・うにいくつ
か見られる。

（ａ）イムノロシイ・レター（Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ　
Ｌｅｔｔｅｒｓ）主、３６５　（１９８１）、 （ｂ）モレキュラー・イムノロシイ　（Ｍｏｌｅｃｕｌ
ａｒＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）　＋　　２０．　５４９　
　（１９８３）、（・）クリニカル・イムノロシイ・ア
ンド・イムノ呉ソロシイ　（ＣＩｉｎ、　Ｉｍｍｕｎｏ
ｌ、　Ｉｎ＋ｍｕｎｏｐａｔｈｏ１．）　＋３０．３８
７　（１９８４）　　”　　。

（ｄ）特開昭６０−２５８１２８号公報これらの報告に
記載されたモノクローナル抗体は、（８）１．）、（。

）Ｔ：はぼ、血清ア７．ブ、ッ免疫、ウス牌細胞とマウ
スミエローマ細胞との細胞融合で作製したものであり、
＋ｄ）ではヒト血清アルブミン免疫ラット牌細胞とマウ
スミニ・ローマ細胞との細胞融合で作製したものである
。そして、それらのモノクローナル抗体とヒト以外の動
物由来の血清アルブミンとの反応性についての充分な検
討はなされていない。また、ウシ血清アルブミンに対し
て高い特異的な反応性を有するモノクローナル抗なく、
これら以外の文献でも、ウシ血清アルブミンに対するモ
ノクローナル抗体の作製例は見当たらない。

ところで、これらのモノクローナル抗体が物質　　　□
の精製や測定に利用できるためには、血清アルブミンに
対してのみ高い特異的な反応性を有していなければなら
ない。即ち、例えば、モノクローナル抗体を用いて血清
などから血清アルブミンなどの特定の物質を回収し精製
する場合には、血清中の血清アルブミン以外の物質と交
叉反応性を示すことは好ましくない。上記の各報告では
、それらのモノクローナル抗体が血清アルブミン以外の
血清成分とどの程度反応するのかほとんど開示されてい
ない。

特開昭６０−２５８１２８号公報の記載によれば、「ヒ
ト血清アルブミンに対して比較的高い特異性を有する抗
ヒト血清アルブミンモノクローナル抗体が、ヒト血清ア
ルブミンで免疫されたラットの肺臓リンパ球とマウスミ
エローマのＰ３Ｕ１を用いた細胞融合法で作製したハイ
ブリドーマ株から得られたこと、そのラット製のモノク
ローナル抗体のクラスはＩｇＭであること、モノクロー
ナル抗体の腹水生産にはヌードラットを使用すること、
さらにマウス製モノクローナル抗体の作製を試みたが卵
白アルブミンと全く反応しないモノクローナル抗体を得
ることができなかったこと」が開示されているが（そこ
で検討されたモノクローナル抗体の特異性を第１表に示
した）、前記の方法で作製したラット製モノクローナル
抗体の生産では、高価なヌードマウスあるいはヌードラ
ットなどを用いなければ腹水を得ることはできない。

また、このような動物を飼育するためには飼育方法に注
意を払い、飼育設備にも多額の投資を要する。それに対
し、マウス製モノクローナル抗体の生産では同系の胸腺
を有したマウス（−量的に広く用いられるマウス）を用
いることができるので、モノクローナル抗体の腹水生産
に有利である。

従って、モノクローナル抗体の生産をコスト面から考え
ると、ヒト血清アルブミン免疫マウスのリンパ球を用い
てマウス製のモノクローナル抗体産生ハイブリドーマ株
を得、これを用いてマウス腹腔内でモノクローナル抗体
を生産できる方が非常によい。

第１表 ラット製 抗原の種類　　　　　　モノクローナル抗体ヒト血清ア
ルブミン　　　　　４＋ ウシ　　　〃　　　　　　　　　− 卵白アルブミン　　　　　　　　− 抗原に対する抗体の反応性の順位； ４＋＞３＋＞２＋＞＋＞±〉− また、前述のように、モノクローナル抗体を用いて血清
などから、血清アルブミンなどの特定の物質を回収し精
製することに実際に使用できるほどに特異性の極めて高
い（即ち、ヒト血清アルブミン、ウシ血清アルブミンな
どのアルブミンに対しては高い反応性を有しているが、
それら以外の多くの抗原に対してはほとんど反応性を有
していなイ）「抗ヒト血清アルブミンモノクローナル抗
体」は、未だに充分に知られていなかったのである。

〔発明が解決しようとする問題点〕

本発明者らは、医薬、診断薬、試薬などとして実用的に
使用することができる「血清アルブミンに対して特異的
な高い反応性を有する新しい抗ヒト血清アルブミンモノ
クローナル抗体」、及び、そのような「抗ヒト血清アル
ブミンモノクローナル抗体」を実用的に容易に製造する
ことができる方法を提供することを目的として、鋭意研
究した。

〔問題点を解決するための手段〕

本発明者らは、前記の問題点を解決するために鋭意研究
した結果、ヒト血清アルブミンで免疫したマウスのリン
パ球とマウスミエローマ細胞との細胞融合で作製したハ
イブリドーマを多ローニングすることによって得られた
ハイブリドーマ株が、ヒト血清アルブミンに対して特異
的に極めて高い反応性を示す抗ヒト血清アルブミンモノ
クローナル抗体を産生ずることができることを見い出し
、本発明を完成した。

即ち、□本発明は、ヒト血清アルブミンで免疫したマウ
スのリンパ球とマウスミエローマ細胞との細胞融合によ
って得られたハイブリドーマ株がら産生される、ヒト血
清アルブミンのみ、またはヒト血清アルブミン及びウシ
血清アルブミンのみに対して高い特異的な反応性を示す
抗ヒト血清アルブミンモノクローナル抗体に関する。

また、本発明は、ヒト血清アルブミンで免疫したマウス
のリンパ球とマウスミエローマ細胞との細胞融合によっ
て得られたハイブリドーマ株を組織培養して、ヒト血清
アルブミンのみ、またはヒト血清アルブミン及びウシ血
清アルブミンのみに対して高い特異的な反応性を有する
モノクローナル抗体を生産することを特徴とする抗ヒト
血清アルブミンモノクローナル抗体の製法に関する。

以下、本発明について、さらに詳しく説明する。

本発明の抗ヒト血清アルブミンモノクローナル抗体を製
造する方法において、ハイブリドーマの作製は、従来公
知の方法、例えば、ネイチャーの方法に準じて行うこと
ができる。そのようなハイブリドーマの作製の好ましい
方法について、概略を以下順次説明する。

ｉ）免疫動物リンパ球の調製 本発明では、ヒト血清アルブミンで免疫したマウスのリ
ンパ球を使用するが、操作上はマウスの肺臓リンパ球を
用いた方がよい。マウスの免疫方法は、ＰＢＳ　　（リ
ン酸緩衝液）に溶解したヒト血清アルブミンをマウスに
数週間隔で数回投与することで行う。１回目の免疫は、
完全アジュバント（免疫促進物質）で乳濁液として投与
することが好ましい。最終免疫から数日後のリンパ節あ
るいは肺臓からリンパ球を得る。

ｉｉ）　ミエローマ細胞の調製 細胞融合に用いるミエローマ細胞としては、マウス由来
のＭＰＣ−１１、Ｐ３−Ｘ６３−Ａｇ８、Ｐ３−Ｘ６ｊ
−Ａｇ’８−Ｕｌ　（Ｐ２Ｏ３）　、Ｐ３−ＮＳ−１（
ＭＳ−１）、またはＳＦ３１０−八ｇ１４　（ＳＦ３　
’７０　）などがあるが、本発明においては、Ｐ２Ｏ３
、ＮＳ−１、またはＳＦ３１０などツマウスミエローマ
細胞が好ましい。

ｉｉｉ）ｉｍ胞融合 細胞融合は、前述のようにして免疫されたマウスのリン
パ球と、前記のマウスミエローマ細胞との細胞数を（５
〜１０）：１の割合で、一般に用いられるリンパ球培養
用培地成分溶液を用いて良く混合し、遠心分離した後の
ペレット（細胞塊）に、ＰＥＧ　（平均分子量；　１０
００〜６０００のポリエチレングリコール）の溶液（３
０〜６０重量％）を添加しつつよく混ぜることによって
行われる。

ｉｖ）ハイブリドーマの選択 ハイブリドーマの選択は、細胞融合の操作後の細胞をＨ
ＡＴ培地で培養して行う。細胞は、培養プレートに適当
な個数で培養し、必要に応じてフィーダー細胞を使用す
る。選択したハイブリドーマは、ＨＴ培地（ヒボキサン
チン、チミジンを添加した培地）で数日間培養した後１
．ウシ胎児血清を含有するリンパ球培養用培地で培養す
る。

■）抗体産生ハイブリドーマの選択 ＨＡＴ培地での選択を行って得られたハイブリドーマが
、ヒト血清アルブミンに対する抗体を産生じているか否
かの検定は、例えば、ＥＬＩＳＡ　　（酵素免疫測定法
）に準じて行う。即ち、ヒト血清アルブミンを固定化し
たＥＬＩＳＡプレートに、ハイブリドーマ培養上清を加
えて静置する。そして、これらの洗浄したウェル番二種
々の酵素で標識したマウス抗体などの標識物質を用いて
静置する。これらのウェルを洗浄し、基質溶液を加えて
酵素活性を測定する。酵素活性が認められれば、その培
養上清をとったウェル中に目的の抗体を産生ずるハイブ
リドーマが存在していたことがわかる。

ｖｉ）ハイブリドーマの株化 抗体産生が認められたウェルのハイブリドーマは、限界
希釈法あるいはシングル・セル・マユブレーション法な
どでクローニングすることができる。この時、ハイブリ
ドーマの増殖が認められたウェルの培養上清を用い、■
）の抗体産生ハイブリドーマの選択と同様の方法で、抗
体産生ウェルを検定し、抗体産生が認められたウェルの
上清については、さらに他の抗原との反応性も検定する
。

工２ そして、ヒト血清アルブミン（抗原）に対して特異性が
高く且つ抗体価の高いハイブリドーマ株を選択する。

ｖＨ）モノクローナル抗体の生産　　　　　。

前述のｖｉ）ハイブリドーマの株化において選択したハ
イブリドーマ株を用いて、フラスコ内での培養、または
マウス腹腔内での培養で、モノクローナル抗体を生産す
る。フラスコ培養では、例えば、０〜２０％ウシ胎児血
清を含むリンパ球培養培地、で細胞濃度が上限に達する
まで培養する。モノ、クローナル抗体は、遠心操作で得
た培養上清中に含まれている。一方、生産コスト面も考
慮して、さらに大量の抗体を得るためには、マウスミエ
ローマ細胞と同系統のマウスを使用することが好ましい
。　プリスタンな？の鉱物油をマウスの腹腔内に投与し
、数週間後に１０６〜，１０７個のハイブリドーマ株細
胞を投与すれば、数週間でハイブリドーマ株細胞を高密
度に増殖させることができ、そのマウスの腹水の抗体濃
度は培養上清の１０〜１０００倍となる。

−ｒ％Ａ１ 前述のようにして得た抗ヒト血清アルブミンモノクロー
ナル抗体は、ヒト血清アルブミンのみに対して特異的に
反応するものと、ヒト血清アルブミン及びウシ血清アル
ブミンのみに対しても特異的に反応するものである。

従って、これらの抗ヒト血清アルブミンモノクローナル
抗体は、医薬品、診断薬、試薬などとして利用できる物
質の精製や、ウシ、ヒトの血清アルブミンの測定、精製
などに非常に有用なものである。

〔実施例〕

以下、本発明の実施例を具体的に説明する。なお、これ
らの実施例は、本発明の範囲を限定するものではない。

実施例１ （ａ）マウスの免疫及び肺臓リンパ球の調製ヒト血清ア
ルブミン（抗原）５μｇを熔解したＰＢＳ　　（リン酸
緩衝液、ｐＨ７，４）　０．２５　ｍｌｌと、プロイン
ドの完全アジュバント０．２５ｍｌ１とを混合して乳濁
液とし、その乳濁液０．５ｍ　ＩｌをＢＡＬＢ／ｃマウ
４二 ス（♂、４週齢）の腹腔内に投与した。４週間後に、前
記の抗原５μｇを溶解したＰＢＳ０．２５　ｍ　Ｉｔと
、フロイントの不完全アジュバント０．２５ｍｊ２とを
混合して乳濁液とし、その乳濁液０．５　ｍ　ｌを前記
マウスの腹腔内に投与した。さらに、３週間後に、最終
免疫として、前記の抗原５μｇを溶解したＰＢＳ０．５
　ｍ　Ｉｔを前記マウスの尾静脈に投与した。このよう
にして免疫されたマウスから、最終免疫から４日目に摘
出したマウスの膵臓を、氷冷下に、ＲＰＭ１１６４０液
（リンパ球培養用培地成分）を入れたシャーレ中で洗い
、新たに用意したＲＰＭ１１６４０液の中に移して、ピ
ンセットでほぐした。このようにして得た浮遊リンパ球
を、ＲＰＭ１１６４０液に懸濁して、遠心分離しく回転
数；　１０００　ｒｐｍ、時間；５分間）　、ＲＰＭ１
１６４０液に懸濁し、細胞融合に使用するマウスｎ臓リ
ンパ球とした。

（ｂ）細胞融合 ８−アザグアニン耐性のマウスミエローマ細胞（ＮＳ−
１）を２×１０７個と、前記のマウスの肺臓リンパ球ｌ
ＸＩＯ３個とを５９　ｍ　ｌプラスチック遠心管に入れ
、混合し、次いで、上清を遠心分離した後に（回転数ｉ
　１１０００ｒｐ　、時間；５分間）、同遠心管を軽く
たたいてペレットをほぐした。このペレットの中に、５
０％ＰＥＧ（３７℃）１ｍｌを激しく振とうしながら１
分間で入れ、１分間激しく振とうした。さらに、同遠心
管を穏やかに振とうしながらＲＰＭ１１６４０液を徐々
に加え、最終的には１０ｍｌとし、室温で遠心分離（回
転数；１０００ｒｐ１１１、時間：５分間）して、上滑
を吸引除去した。遠心管を軽くたたいてペレットをほぐ
し、ＨＡＴ培地（ＩＸＩＯ−４Ｍヒボキサンチン、４×
１０−７Ｍアミノプテリン、及び１．６Ｘ１０−５Ｍチ
ミジンを含有する１５％ウシ胎児血清−ＲＰＭ１１６４
０培地３２０ｍ７！に懸濁して、９６ウエルの培養プレ
ート２枚の各ウェルに１００μｌづつ分注して、ＣＯ２
インキユベーターで培養した。

（Ｃ）ハイブリドーマの選択 前述の培養開始から１〜３週間かけて、細胞増殖が認め
られた培養プレートの各ウェルの培養上清中に、抗ヒト
血清アルブミン抗体が含まれているか否かを、次に示す
ＥＬＩＳＡ法で検討した。まず、９６ウエルＵ底ＥＬＩ
ＳＡプレートの各ウェルに、ヒト血清アルブミンの溶液
（１０μｇ　７ｍ　ｌ　、　ＰＢＳに溶解）を５０ｐｌ
づつ分注し、４℃で１晩静置した。次いで、ＥＬＩＳＡ
プレートの各ウェルを洗浄液（０，１％のＴｗｅｅｎ２
０を含むＰＢＳ　）で洗浄した後、前記培養プレートの
各ウェルの培養上清を、５０μβづつ、ＥＬＩＳＡプレ
ートの各ウェルに分注して室温で２時間静置した（陰性
対照としての上滑には、融合前のマウスＩｐＩ！臓リン
パ球とマウスミエローマ細胞との混合物を同様に培養し
て得た上滑を用いた）。次に、ＥＬＩＳＡプレートの各
ウェルを洗浄し、マウス免疫グロブリンに対するベルオ
キシターゼ標識抗体液を、５０μβづつ、各ウェルに分
注し、室温で２時間静置した。そして、ＥＬＩＳＡプレ
ートの各ウェルを洗浄後、基質溶液（０−フェニレンジ
アミン２０　ｍ　ｇ　ｓ及び３５％Ｈ２Ｏ２溶液１０μ
ｌを、ｐＨ５，０の０．１　Ｍクエン酸緩衝液５０ｍｌ
に熔解）を１００μβづつ、各ウェルに分注し、遮光し
て室温で３０分間静置した。最後に、前記の各ウェルに
２Ｎの硫酸を５ｏμｌづつ分注して酵素反応を停止し、
５００ｎｍの吸光度を測定した。酵素活性が陽性であっ
た上滑をとった培養プレートの各ウェル中に、抗ヒト血
清アルブミンモノクローナル抗体を産生ずるハイブリド
ーマが存在することが確認された。

以上のようにして、ハイブリドーマの培養に使用した培
養プレートのウェルの上清をそれぞれ検討した結果、（
抗体産生ウェル数／ＥＬＩＳＡウェル数）の比は、４３
／９０であった。

（ｄ）ハイブリドーマの株化 １５％ウシ胎児血清−ＲＰＭ１１６４０培地を用いて、
前述の（Ｃ）工程において示した抗体産生ウェルのハイ
ブリドーマをシングル・セル・マニプレーション法（倒
立顕微鏡下、１ウエルに１個のハイブリドーマを入れる
方法）でクローニングした。培養には、９６ウエル培養
プレートを用い、支持細胞としてＢＡＬＢ／ｃマウスの
胸腺細胞を１０７個／ｍｉ使用して、（ハイブリドーマ
１個）　／　（Ｉｌｆｊｌ腺細胞懸濁液１００μｍ２）
／ウェルで培養した。前記の培養において、１０日目頃
から単一コロニーとして観察される培養プレートのウェ
ルの上滑を採取して、ヒト血清アルブミンを用いたＥＬ
ＩＳＡ法（前述の（Ｃ）工程と同様の方法）を行い、抗
体産生が認められた上清については、さらに他の抗原（
ウシ血清アルブミン、ウサギ血清アルブミン、卵白アル
ブミン、など）との反応性を検討した。

上述のようにして、５株（Ｈ５八−１、Ｈ８＾−２、Ｉ
ＳＡ　−３、ＩＳＡ　−４、Ｈ３八−５；昭和６１年７
月３０日に工業技術院へ寄託申請し、６１年８月５日に
寄託受託拒否通知（６１微寄文第　１０３　号）を受け
た〕を選択し、再クローニングして（第２表に示す）、
その培養プレートのウェルの上清から抗ヒト血清アルブ
ミンモノクローナル抗体を次の測定試験■及び■で確認
した。

夾定成験土 〔抗ヒト血清アルブミンモノクローナル抗体のクラス・
サブクラスの決定〕 ５株が産生じた免疫グロブリンのクラス・サブクラスの
決定は、各クラス・サブクラスに特異的なペルオキシダ
ーゼ標識抗体液（即ち、ＩｇＧ　、、ＩｇＧ　２　ａ　
、　ＩｇＧ　２　ｂ　、　ＩｇＧ　３　、ＩｇＭ　、Ｉ
ｇＡに対する抗体）を用い、前述の（Ｃ）工程と同様の
ＥＬＩＳＡの方法で行った。５株が産生じたモノクロー
ナル抗体は、その全てが０１であった（第２表に示す）
。

なお、前記の各抗体のし鎖の型は、全てに型であった。

第２表 株のＮ類　　産生抗体のクラス　し鎖の種類・サブクラ
ス ＩＳＡ−Ｉ　　　　　Ｇ１　　　　　に〃　−２Ｇ１　
　　　　に ｔｔ　　−３Ｇ、　　　　　　に ｔｔ　　−４Ｑ、　　　　　　に 〃　−５０１に 異性の検討〕 前記の５株が産生ずるモノクローナル抗体の特異性につ
いて、第２表の抗原のＮ類の欄に示す物質について、次
に示す方法で反応性を検討した。

まず、９６ウエルＵ底ＥＩＪＳＡプレートの各ウェルに
、各種の血清アルブミン、その他の各種抗原溶液（いず
れの抗原も１０．１７　ｇ／ｍｌ　ＰＢＳに溶解、ウシ
及びウサギ血清はＰＢＳで１００倍に希釈）を、１００
μβづつ分注し、４℃で１晩静置した。次いで、ＥＬＩ
ＳＡプレートの各ウェルを洗浄液で洗浄した後、希釈液
で多段階に希釈した前記５株の培養上清を１０（ｌｃｒ
Ａ！づつ、ＥＬＩＳＡプレートの各ウェルに分注して、
室温で２時間静置した。そして、ＥＬＩＳＡプレートの
各ウェルを洗浄液で洗浄し、マウス免疫グロブリンに対
するペルオキシダーゼ標識抗体液を、１００μβづつ、
前記各ウェル中に分注し、室温で２時間静置した。以後
の操作は、前述の（Ｃ）工程におけるＥＬＩＳＡ法と同
様の方法で行った（第３表に結果を示す）。

第３表 第３表に示したように、５株が産生じたモノクローナル
抗体は、いずれもヒト血清アルブミンとよく反応してい
る。また、上記の５株が産生ずるモノクローナル抗体が
認識する抗原部位の構造は、全て異なっていると考えら
れる。即ち、５種のモノクローナル抗体は各々異なった
モノクローナル抗体と考えられる。

以上のことから、上記の５株が産生ずるモノクローナル
抗体は、ヒトまたはウシ血清アルブミンをアフィニティ
ーで除去または精製するすることに使用することができ
ることが明らかである。

実施例２ 〔フラスコ培養でのモノクローナル抗体の生産〕モノク
ローナル抗体の生産は、フラスコ培養で行った。１５％
ウシ胎児血清−ＲＰＭ１１６４０培地で培養して得たハ
イブリドーマ株細胞（前記のＨ５Ａ−１株、Ｈ５八−４
株）をＲＰＭ１１６４０液に移しかえて、死滅直前まで
培養した。モノクローナル抗体は遠心分１１ｔ（回転数
；　３０００ｒｐｍ　、時間；５分間）して得られる上
清中に各々３０．４０μｇ／ｍβ含有されていた（第４
表に示す）。

実施例３ 〔マウス腹腔内でのモノクローナル抗体の生産〕大量の
抗ヒト血清モノクローナル抗体を得るために、マウス腹
腔内でハイブリドーマ株細胞（前記の１（ＳＡ−１株、
または）ＩｓＡ−４株）を培養した。

ＢＡＬＢ／ｃマウス（♂、６週齢、２週間前にブリスタ
ンを０．５　ｍ　Ｉｌ腹腔内に投与した）に、ＲＰＭ１
１６４０で浮遊させた５Ｘ１０６個のハイブリドーマ株
細胞（Ｈ３Ａ−１株、または■５Ａ−４株）を各々腹腔
内に投与した。それらのマウスの体重は、１週間目頃か
ら顕著な増加を示し、２週間目に腹水（いずれの場合に
も８ｍＩ！／匹）を採取した。この腹水を遠心分離（回
転数；　３０００ｒｐｍ　、時間；５分間）して、腹水
上清を得た。モノクローナル抗体はこの腹水上清中に各
々６．８ｍｇ／ｍβ含有されていた。「上記の実施例２
及び３におけるフラスコ、またはマウスを使用した場合
のモノクローナル抗体Ｊの生産の状況及びそれらの各抗
原に対する反応性は、第４表に示す。

第４表に示したように、）ＩＳＡ　−１、Ｉ（ＳＡ−４
株が産生したモノクローナル抗体の反応性は、各株の組
織培養及びマウス腹腔内培養のいずれにおいても、第３
表に示した場合と同じであった。

第４表 〔本発明の作用効果〕 本発明の抗ヒト血清アルブミンモノクローナル抗体は、
ヒト血清アルブミンで免疫されたマウスのリンパ球とマ
ウスミエローマ細胞との細胞融合によって得られたハイ
ブリドーマ株から産生されたヒト血清アルブミンのみに
対して、或いは、ヒト血清アルブミン及びウシ血清アル
ブミンのみに対して、特異的な反応性を有し、他の抗原
に対しては実質的に反応性を示さないものもあるので、
医薬、診断薬、試薬などとして有用である。

特に、ヒト血清アルブミンに対する特異性が高いので、
ヒト血清アルブミンの精製または除去などにも使用する
ことができる。

また、本発明の抗体は、免疫されたマウス由来のリンパ
球とマウスミエローマ細胞とから得られたパイブリドー
マ株から産生された抗ヒト血清アルブミンモノクローナ
ル抗体であるので、ヌードマウス、ヌードラットなどを
用いることなく、胸腺を有するマウス（一般に広く用い
られているＢＡＬＢ／ｃマウス）の腹腔内でハイブリド
ーマ株を培養することによって抗ヒト血清アルブミンモ
ノクローナル抗体の大量生産ができた。

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. （１）ヒト血清アルブミンで免疫したマウスのリンパ球
   とマウスミエローマ細胞との細胞融合によって得られた
   ハイブリドーマ株から産生される、ヒト血清アルブミン
   のみに対して高い特異的な反応性を示す抗ヒト血清アル
   ブミンモノクローナル抗体。
2. （２）ヒト血清アルブミンで免疫したマウスのリンパ球
   とマウスミエローマ細胞との細胞融合によって得られた
   ハイブリドーマ株から産生される、ヒト血清アルブミン
   及びウシ血清アルブミンのみに対して高い特異的な反応
   性を示す抗ヒト血清アルブミンモノクローナル抗体。
3. （３）ヒト血清アルブミンで免疫したマウスのリンパ球
   とマウスミエローマ細胞との細胞融合によって得られた
   ハイブリドーマ株を培養して、ヒト血清アルブミンのみ
   、またはヒト血清アルブミン及びウシ血清アルブミンの
   みに対して高い特異的な反応性を有するモノクローナル
   抗体を生産することを特徴とする抗ヒト血清アルブミン
   モノクローナル抗体の製法。
4. （４）ハイブリドーマ株をマウスの腹腔内で培養する特
   許請求の範囲第３項記載の抗ヒト血清アルブミンモノク
   ローナル抗体の製法。