JPS6341418A - 制癌剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、癌細胞を選択的に攻撃する型の新規な制癌剤
、殊に制癌効果を有する緑膿菌毒素を生体内の癌細ノ泡
部泣に選択的に運落するためのキャリアーである上皮成
長因子と複合せしめてなる上皮成長因子−緑嚢自１索汲
合体の癌細胞致死効果を更に増強せしめた制癌剤に関す
る。

より具体的には、本発明は上記の上皮成長因子−緑膿菌
毒素複合体に癌細胞致死効果を増強せしめるためにＮ−
ソラネシルーＮ、Ｎ！−ビス（３，４−ジメトキシベン
ジル）エチレンジアミンを配合してなる制癌剤に関する
。

〔従来技術と本発明が解決しようとする問題点〕従来癌
の化学療法剤として種々の薬剤が開発され、実用化され
ているものも数多いが、これら化学療法剤に共通する欠
陥として、これら化学療法剤には癌細胞を攻撃する一方
で正常細胞にも何らかの作用を及ぼし場合によっでは？
ＡＢ　ＪＱＩ青として作用する副作用があることが孕げ
られる。

ところで最近このような化学療法剤を癌、細胞に′Ｒ相
性のあるキャリアーに担持させ、癌細胞にのみ選択的に
化学療法剤を作用させろ手法が開発されこの手法がいわ
ゆるミサイル療法という呼称で注目されるようになった
。

このいわゆるミサイル療法剤の一つとして制癌剤として
も知られている緑膿菌毒素に上皮成長因子（Ｅｐｉｄｅ
ｒｚａｌ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ）　（ＥＣ）Ｆ
と略称する）を結合δせてなろ緑ＩＩ　醒毒素−ＥＣ）
Ｆ複合体が提案されており、このものは緑膿菌毒素が仔
する細胞毒としての制癌効果なＥＧＦによって癌細胞に
限定して発現させ、しかして所期の制癌効果を効果的に
発揮させるものとして期待されているものである。

一方、ＥＣ）Ｆ−緑膿菌毒素複合体を含むイムノトキシ
ンについて本発明者らはカルシウム拮抗剤のベラバミー
ルやカルモジュリン阻二ｇ剤のチオリダジンがその細）
ｒ、Ｍ致死効果を増強するものであることを見出したが
、更に本発明者らはベラバミールと類似の化学構造を有
するインブレノイドであるＮ−ンラネシルーＮ、Ｎ’−
ビス（６，４−ジメトキシベンジル）エチレンジアミン
（ＳＤＢ）もまたこの緑膿菌毒素−Ｅ（）Ｆ複合体の癌
細胞致死効果を著しく増強するものであることを見出し
て本発明を完成した。

従って本発明の目的は、緑膿菌毒素とＥＣ）Ｆとの複合
体の細胞致死効果を増強するためにこの複合体にＮ−ソ
ラ不シルーＮ、Ｎ’〜ビス（３，４−ジメトキシベンジ
ル）エチレンジアミンを配合することによって得らｎる
制癌剤を提供することにある。

〔問題を解決するための手段〕

本発明は上皮成長因子（ＥＣ）Ｆ）−緑膿菌毒素複合体
と の化合物又はその製薬上許容しつる塩とを活性成分とす
る制癌剤に関する。

この発明の制癌剤の成分の一つのＥＧＦ−緑膿菌毒素複
合体とは、ＥＧＦと緑膿菌毒素とを多官能性の架橋剤、
例えば式Ｒ−Ｌ−Ｒ’　（式中、ＲおよびＲ′は同一で
あるか相異しており、そして−ＮＨ２、−Ｃ○ＯＨ，−
ＣＯ２Ｒ’　（ここでＲ′は２−ヒドロキシピリジン、
ヒドロキシスクシンイミド、マレイミドアルキル、ヒド
ロキシアルキルなどである）、イミン、−ＣＨｏ、イン
シアナートスルホネートエステル、スルフェニルハライ
ド、アジドなどの官能基を表わし、そしてＬは単結合、
アルキレンまたは置換されたアルキレン基、フェニレン
または置換され／ζフェニレン基、または糖残基である
リンカ−を示す）で示されろ化合物で処理することによ
って複合させたものを指す。この多官能性の交叉結合剤
の具体例とり。

ては、グリオキザール、マロンアルデヒド、スクシニル
アルデヒド、グルタルアルデヒド、ジアルデヒド殿粉な
どのポリアルデヒド類、ジエチルマロンイミド、ジエチ
ルアジピンイミド々とのイミドエステル類、ジインシア
ナート類、Ｓ−）リアジン類などが挙げられる。またＭ
ＢＳ（メタマレイミトヘンゾイルＮ−ヒドロキシスクシ
ンイミドエステル） も好ましい架情剤である。

このＥＧＦ−緑膿菌毒素複合体を構成するｇＯＦはＩｎ
ｔ、Ｊ、　Ｐｅｐｔｉｄｅ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｒｅｓ、
　９．１９７７　。

ｐｐ１０７〜１０８に記載の公知の化合物であってアミ
ノ改５６個から（４成で１しる不すベブチドである。そ
してそのアミノ酸の構成〆Ｃよってｍ！ｉ、ｃ−Ｆ（マ
ウスＥＧＦ　）および３Ｆ８．０Ｆ　（ヒトＥ（）Ｆ　
）　（ウロガストロン）の相違はあるが、こｎらＥ（）
Ｆは同一の生理活性を有しており、本発明においてもこ
れらは同様にすなわち互換的に用いうろものである。さ
らにこれらＥＧＦのカルボキシル基末端のアミノ酸が１
〜６個欠落したものも同一の生理活性を有することが知
られている。従って本発明においてＥＣ）ＦとはａｌＥ
（）ＦＸｈＥ（）Ｆおよびそれらのカルボキシル基末端
のアミノ酸が１〜６個欠落したものを包含するものであ
る。

またＥＣ）Ｆ−緑１１ｉｉ菌毒素複合体を構成する他の
成分の緑膿菌毒素は緑膿菌より産生される。例えば１０
％ｎｅｗ　ｂｏｒｎ　ｃａｌｆ　’ｓｅｒｕｍ　（ＮＢ
Ｃ８）、９υ悌Ｅａｇｌｅ’ｓ　ｂａｓａｌ　ｔｎｅｄ
ｉｕｍ　（ＥＢＭ）中のＨｅＬａ　＃［ｌ　／泡培養孜
に緑膿圃を植えると、用養液中に緑１」菌毒素を産生ず
る。この毒素の化学的注状はいまだ明らかにされていな
いが、無細胞糸でジフテリア毒素と同じ作用機作すなわ
ち細胞表面の受容体を介して細胞内に入り、蛋白質合成
１５ａ害作用を示して毒性を発揮する。そしてこの培養
液を濾過してえられるＦ液を０．５ないし１．０ゴ靜脈
内、腹腔内または皮下に注射すると１〜２日でウサギま
たはモルモットを死亡させる。

緑膿菌毒素およびＥＣ）Ｆ−緑膿菌毒素複合体の生理活
性についてはＤａｖｉｄ　Ｊ、　Ｐ、　Ｆｉｔｚｇｅｒ
ａｌｄ他１名による「Ｃｅ１１．　ｖｏｌ　３２　、６
０７〜６１７．　Ｆｅｂｒｕａｒｙ１９８３Ｊの論文に
詳説されている。

又、本発明において上皮成長因子−緑膿菌毒素複合体と
ともに用いられる式（１）の化合物〔即ちＮ−ソラネシ
ルーＮ、Ｎ’−ビス（３，４−ジメトキシベンジル）エ
チレンジアミン〕は、それ自体及びその製薬上許容しつ
る塩例えば塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、フマール酸
塩、（えん酸塩などである。そして式（１）の化合物そ
れ自体は公知の化合物である。

本発明では、上皮成長因子−緑膿菌毒素複合体と式（１
）の化合物又はその塩とを組み合わせて用いるが、その
際１日当りの投与景は複合体が約２０ｔｒｑＡｙ〜１　
？／ｋｙが適当であり、経口の場合約５０峰勺〜５００
鷹Ｖ似非経口の場合約２０ｇ＋９ｈ〜１００号勺が好ま
しい。

式（１）の化合物又はその塩が約４ｊ９〜２′？ｈが適
当であり、経口の場合約１０叩〜２　ＶＡｐ１日、非経
口の場合は約４す〜１　？Ａｙ７日が好ましい。

本発明の活性成分を経口投与する場合には種種の形、態
があるが例えば錠剤、顆粒、細粒、粉末、ンロツプ、エ
リキシルなどとすればよく、特に顆粒および粉末は必要
に応じてカプセルに封入して単位量投与形態とすること
がでごる。

こ几ら経口投与剤の中、固形剤は通常用いられる賦形剤
例えば無水珪酸、メタ珪酸、アルミン酸マグネシウム、
合成珪酸アルミニウム、乳塘、砂糖、とうもろこし殿粉
、微晶質セルロース、ヒドロキシプロピルスターチ、マ
タはグリシン、結合剤例えばアラビアゴム、ゼラチン、
トラガント、ヒドロキシプロビルセルロースマタハポリ
ビニルビロリドン、滑沢剤例えばステアリン酸マグネシ
ウム、タルクまたはシリカ、崩壊剤例えば馬鈴薯殿粉、
カルボキシメチルセルロースカルシウムあるいは湿潤剤
例えばポリメチレングリコール、ソルビタンモノオレエ
ート、ポリオキシエチレン硬化ひまし油、ラウリル硫酸
ナトリウム等を含有してもよい。又、錠剤は常法に従っ
てコーティングしてもよい。

経口投与剤の中、液剤は水性または油性の乳濁液、シロ
ップ剤等にすればよく、あるいは使用する前に適当なビ
ヒクルで再溶屏し得る乾燥生成物にしてもよい。このよ
うな液剤は普通に用いられる添加剤例えば乳化補助剤で
あるソルビットシロラフ、メチルセルロース、ゼラチン
、とドロキシエチルセルロースなト、ｔ＆ａ化Ｍｌ」例
えばレシチンンルビタンモノオレート、ポリオキシエチ
レン硬化ひまし油、非水性ビヒクル例えば分別ココナツ
ツ油、アーモンド油、落花生油、防腐剤例えばｐ−ヒド
ロキシ安息香酸メチル、ｐ−ヒドロキシ安息香酸プロピ
ルまたはソルビン酸を添加してもよい。

更にまたこれらの経口投与剤には必要に応じて保存剤、
安定化剤などを含有せしめても良い。

又、本発明の活性成分を注射剤にする場合には油溶液、
乳化液、水溶液のような形態にすればよく、これらの液
体には通常用いられる乳化剤、安定化剤などを含有して
もよい。これら薬剤は投与方法により活性成分を１重ｊ
ｆ％以上、好ましくは５〜５０重童慢含有することがで
きる。又、本発明の活性成分を通常の方法に二り座剤と
することもできろう 本発明の制癌剤はＥＰ（Ｊ−緑膿菌毒素複合体のみを用
いる場合に比較してその制癌作用は著しく増強されるの
である。このことは例えばヒト鼻腔表皮由来」筋細胞を
培養して得られる一定数の細胞を含む培地に、対照とし
てのＥＰＣ）−緑膿菌毒素複合体の単独と、ＥＰＧ−緑
」菌毒素複合体と式（１）の化合物との組合わせとを加
え、更に９日間培養を続けて５０％細抱集落を抑制する
化合物の濃度のＩＤ５ａを測定したところ、２ＰＯ−緑
膿菌−Ｒ克復合体単独ではより５０　＝　１２　ｎｒ／
−であったが、式（＋）の化合物を１７μη賃の＠度で
加えた場合のＩＤ５０　”：２．５　ｎ？／ｍまた式（
Ｉ）の化合物を３４　ｔｔｙ／ｍｌのａ度で加えた場合
のＩＤ５０　＝　０．６　ｎｙ／ｍｌであることから明
らかで、前者の場合の併用効果は４．８倍、後者の場合
の併用効果は実に２０倍に達することからも明らかであ
る。

本発明の活性成分の毒性は上記式（＋）の化合物では、
マウス（ｄｄＹ、雄）に静脈内および腹腔内投与の際の
ＬＤ５０値（Ｊ、　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ　Ｅｘｐ、　Ｔ
ｈｅｒ、第９６巻第９９〜１１６頁（１９４９）参照）
がそれぞれ２６８号勺、３５０１Ｖｋｇであった。又、
緑膿菌毒素や複合体の場合、毒素それ自体では毒素は強
（小動物を培養ヂ液１０μｔまたはそれ以下で死亡させ
る。

以下に実施例によって本発明を更に詳細に説明する。

〔実施例〕

実施例１　経口用硬カプセル剤 式（１）の化合物２５？、上記複合体５ノおよびポリオ
キシエチレンひまし油７．５２をメタノールに石解し、
次に無水げいｒＲ２５Ｐを混合した。

メタノールを蒸発した後さらにカルホキジメチルセルロ
ースカルシウム５？、とうもろこし殿粉５？、ヒドロキ
シプロピルセルロース７、５　？および微結晶セルロー
ス２０？を混合し、３〇−の水を加えて練合しそして粒
状化した。これを煮２４メツシュ（Ｂ、Ｓ、）のスクリ
ーンに付した造粒機で造粒した。順７粒は水分５％以下
に乾燥Ｌ−ｔしてノに１６メツシユ（Ｂ、Ｓ、）のふる
いで処理した。次にこの粒子をカプセル光項機で１カプ
セル当り２００＃＋９を充填した。

実施例２　経口用軟カプセル剤 式（１）の化合物６０ｖ１上記複合体７．５９およヒホ
リエチレングリコール（マクロフール４００　）１３０
′？を混合して均一な溶液とした。別にゼラチン９３？
、グリセリン１９Ｓ’、Ｄ−ノルビトール１０？、バラ
オキシ安息香酸エテル０．４？、バラオキシ安息香酸エ
テル０，２？および酸化ナタン０．４？の組成からなる
セラチン溶液を調製し、これをカプセル皮膜剤として手
動式平板打抜法により内容物１９０ａｙを含有するソフ
トカプセルを製造した。

実施例５　経口用軟カプセル剤 式（１）の化合物４０？、上記複合体４′？およびポリ
エチレングリコール（マクロゴール４００　）１２０Ｆ
を混合して均一な溶液とした。別にゼラチン９０？、グ
リセリン１６？、Ｄ−ソルビトール８？、パラオキシ安
息香酸エチル０．５５９゜パラオキシ安息香醒プロピル
０．２２および酸化チタン０．６ｔの組成からなるセラ
チン溶液を調製し、これをカプセル皮膜剤として手動式
平板打抜法により内容物１８０１９を含有するソフトカ
プセルを製造した。

実施例４　注射剤 式（Ｉ）の化合物の塩酸塩５ｔ、上記複合体５？、落花
生油適量およびベンジルアルコール１？を混合し、さら
に落花生油を使用して全量を１００ｃｃとした。この溶
液を無菌操作によりアンプルに１ｃｃ分注して９閉した
。

実施例５　注射剤 式（１）の化合物の塩酸塩５１Ｆ、上記複合体５？、落
花生油適量およびベンジルアルコール１ｔを混合し、さ
らに落花生油を使用して全量を１００伽とした。この溶
液を無菌操作によりアンプルに１　ｃｃ分注して９閉し
た〇 実施例６　注射剤 式（りの化合物の塩酸塩９９．上記複合体４　ｔ。

水素添加ひまし油ポリオキシエチレン（６０モル）エー
テル〔ニツコールＨＣＯ６０コ５．Ｏｒ、プロピレング
リコール２０９、グリセリン１０　Ｆ。

およびエチルアルコール５．Ｏ２を混合し、これに蒸留
水１００ゴを加えて攪拌した。この溶液を無菌操作によ
りアンプル２．０−に分注して９閉した。

実施例７　注射剤 式（１）の化合物の塩酸塩５ｔ、上記複合体５２、水素
添加ひまし油ポリオキシエチレン（６０モル）　ｘ　−
チル５．Ｏｆ、プロピレングリコール２０ｔ１　グリセ
リン１０２およびエチルアルコール５、ＯＦを混合し、
これに蒸留水１００−を加えて攪拌した。この溶液を無
菌操作によりアンプル２．０−に分注して９閉した。

実施例８ ヒト鼻腔表皮由来腫瘍細胞（ＫＢ−３−１）　３００個
をイーグル培地中にて３７℃、２４時間培養後、ＥＧＦ
−ＰＥ単独あるいは式（１）の化合物との併用にてさら
に９日間培養しコロニー数（細胞集落形成数）を０．５
１　ｍｅｔｈｙｌｅｎｅ　ｂｌｕｅで栗色して算出する
。その数よりＩＤ５Ｑ　（５０％細胞集洛を抑制する化
合物の濃度）を、ｔｔ算し、下記の式で併用効果を求め
る。なお式（１）の化合物はエチルアルコールに溶解し
て培養液中に加えた。

ＫＢ−３１１２− １７２゜５４．８ ３４　　　　　　　　　０．６　　　　２０℃表から明
らかなように本発明の活性成分であるＥＧＦ−ＰＥと式
（りの化合物との組合せにより、ＥＧＦ−ＰＥの制癌作
用は増強されろことが認められた。

ネｊ許出題人　日清製粉株式会社 外２名

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 上皮成長因子−緑膿菌毒素複合体と式 ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） の化合物又はその製薬上許容される塩とを活性成分とす
   る制癌剤。