JPS63313800A - 副甲状腺ホルモン拮抗剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、生体内及び生体外で天然ホルモンペプチドを
阻害するためのペプチドホルモン類似体の用途に関する
。哺乳動物のようなを椎動物に投与された場合に、これ
らのペプチドホルモン類似体はペプチドホルモンまたは
他の類似分子の内分泌活性を阻止する。これらのペプチ
ドホルモン類似体は、天然ホルモンに関するバイオアッ
セイと共同して生体外においても用いられる。ペプチド
ホルモン類似体は、ホルモン過多に起因する様々な疾患
を治療しかつホルモン依存性腫瘍を治療するために用い
られる。本発明の一例は、生体内及び生体外双方におい
て副甲状腺ホルモンの作用を阻害する上で有用な副甲状
腺ホルモン類似体の合成に関する。

構造とホルモン機能との関係の分析は、ペプチドホルモ
ンの作用のメカニズムに関して重要な情報を与えた。各
タイプのペプチドホルモンは、それが結合する特異的レ
セプターに対して親和性を有している。結合時に、ペプ
チドホルモンは直接に作用するか、又は環状ＡＭＰ、環
状ＧＭＰもしくはカルシウムイオンのような第二メソセ
ンジャー分子の細胞内濃度に関して変化を引き起こす。

次いで、これらの第二メツセンジャー分子は細胞の代謝
又は生理機能上の変化を引き起こす。細胞の代謝又は生
理機能に関するこれらの変化は、その特異的細胞表面レ
セプターへのペプチドホルモンの結合に直接的に又は間
接的に依存している。

したがって、細胞表面レセプタニが遮断されている場合
には、ホルモン効果も遮断される。

ペプチドホルモン類似体は、ホルモンの生化学を研究か
つ評価で氷る方法として長期にわたり知られていた。内
分泌学者は、第二メツセンジャー分子に関して変化を生
じさせることなく特異的ホルモンレセプターを遮断し、
それによりホルモン誘導性代謝変化を回避できるペプチ
ドホルモン類似体類の製造方法を長い間望んでいた。

ローゼンブラット（Ｒｏｓｅｎｂｌａｔｔ）らの米国特
許第４，４２３．０３７号明細書及びそこで引用された
文献は、あるペプチドホルモン［（Ｕ体の構造及び細胞
レセプターに対するそれらの結合性について記載してい
る。特に、それらの文献は副甲状腺ホルモン類似体の性
質及びそれらの生理学的性質について記載している。

多年にわたる科学的努力は、ペプチドホルモンと各ペプ
チドホルモンに特異的な細胞表面レセプターとの相互作
用を理解することに向けられてきた。ペプチドホルモン
の１つ、即ち副甲状腺ホルモンは、副甲状腺ホルモン（
ＰＴＨ）［似体を用いて研究されてきた。これらの研究
の１つの目的は、天然ホルモンと同じか又はそれ以上の
親和性で結合する類似体を構成できるように、細胞表面
レセプターへのペプチドホルモンの結合性について理解
することであった。この類似体は、副甲状腺ホルモンの
ペプチドホルモン類似体が天然副甲状腺ホルモンの効果
を阻止するために用いられることを可能にする。臨床的
及び薬理学的に有効な副甲状腺ホルモン類似体に関する
この研究で遭遇した主な問題の１つは、作用剤活性の問
題であった。作用剤活性は、天然ホルモンの関与する生
理学的変化を引き起こす第二メツセンジャーにおける変
化をそれ自体が刺激するという、ペプチドホルモン類似
体の性質である。したがって、問題は、高親和性で適切
なホルモン細胞表面レセプターに結合するが、第二メツ
センジャー濃度に関スる変化を刺激しない、即ちそれ自
体ホルモンとして作用しないようなホルモンＷ４４Ｊ、
１体を製造することであった。そうすれば、これらの類
似体はホルモン関連疾患を治療するために用いることが
できる。

Ｐ’ｌ’Ｈの二次構造分析では、１２位付近の領域にお
いてＰＴＨがベーターターンであることが推定された。

チュー・Ｐ−Ｙら、バイオフィジカル・ジャーナル、第
２６巻、第３６７−３７３頁、１９７９年（Ｃｈｏｕ、
　ｐ、ｙ、　ｅｔ　ａｌ、、　Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ
Ｊｏｕｒｎａｌ、　２６：３６７−３７３（１９７９）
　）　、本発明では、二次構造コンホーメーションを安
定化させるために、この領域において一連のアミノ酸置
換を行なった。

したがって、ＰＴＨ類僚体の生物活性を高めるためにＰ
ＴＨのコンホーメーションを安定化させることが、本発
明の主目的である。

本発明のもう１つの目的は、新規のＰＴＨ類似体を提供
することである。本発明の他の目的は、新規ＰＴＨ類似
体の投与によるＰＴＨ作用の阻害方法を提供することで
ある。本発明の更にもう１つの目的は、アミノ酸修正の
結果第二メソセンジャー分子を活性化することなくすべ
ての表面レセプターと結合するようになったＰＴＨＭ似
体を提供することである。上記の及び他の目的は、以下
で更に十分に記載されているように本発明によって達成
される。

本発明は、Ｇｌ　ｙ　Ｉ　２がＬ−Ｐｒｏ　％　Ｄ−Ｐ
ｒｏ　、、　Ｌ−Ａｌａ、Ｄ−八■ａ、八ｉｂ　　（ア
ミノイソ酪酸）及びＮＭｅＧＩｙからなる群より選択さ
れるアミノ酸で置換されているＰＴＨ（１−３４）　Ｎ
Ｈ２、［Ｔｙｒ”Ｊ　ＰＴＨ（１−３４）ＮＨ２、［Ｎ
ｌｅ”　”＋Ｔｙｒ３４コ　ＰＴＨ（Ｌ−３４）ＮＨ２
：　　ＰＴＩ（（３−３４）ＮＨ２、［Ｔｙｒ：１４］
ＰＴＨ（３−３４）　ＮＨ２、［ＮＩｅ”　”　、　Ｔ
ｙｒ３４］　ＰＴＨ（３−３４）ＮＨ２；ＰＴＨ（４−
３４）ＮＨ２、［Ｔｙｒ”］　ＰＴＨ（４−３４）ＮＨ
２、［Ｎ１ｅ８′Ｉｅ。

Ｔｙｒ３４コ　ＰＴＨ（４−３４）ＮＨ２、ＰＩ（５−
３４）Ｎｌ（２、ＥＴｙｒ””ＪＰＴＩＩ　（５−３４
）　ＮＨ２、［Ｎｌｅ”　＋８＋　Ｔｙｒ”］　ＰＴＨ
（５−３４）ＮＨｚ；ＰＴＨ（７−３４）ＮＨ２、［Ｔ
ｙｒ”］　ＰＴＨ（７−３４）ＮＨ−２、［Ｎ１ｅｌ′
″″。

Ｔｙｒ３４コ　ＰＴ）ｌ　（７−３４）Ｎ）１２からな
るペプチドを提供する。ＰＴＨはヒト副甲状腺ホルモン
（ｈＰＴＨ）　、ウシ副甲状腺ホルモン（ｂＰＴＨ）又
はラット副甲状腺ホルモン（ｒＰＴ）ｌ）である。本発
明のペプチド類似体の代表例の一部として下記のような
ものがある： ［Ｌ−Ａｌａ”］　ｈＰＴＨ（７−３４）ＮＨ２、［Ｌ
−Ａｌａｌ２、Ｔｙｒ３４］　ｈＰＴＨ（７−３４）Ｎ
Ｆ［２、［Ｌ−Ａｌａｌ２．　Ｎｌｅ”８、Ｔｙｒ３４
］　ｈＰＴＨ（７−３４）ＮＨｚ　；　　［Ｄ−Ａｌａ
”］　ｈＰＴＨ（７−３４）ＮＨ２、［Ｄ−Ａｌａ”　
、　Ｔｙｒ３４］　ｈＰＴＨ（７−３４）ＮＨ２、［Ｄ
−Ａｌａｌ２　、　　Ｎ１ｅ８′　１８、Ｔｙｒ：１４
コ　ｈＰＴＨ（７−３４）Ｎ）Ｉｚ　　；［八ｉｂ！２
］　　ｈＰＴＨ（７−３４）ＮＨｚ　　、　　［Ａｉｂ
Ｉ２．　　　Ｔｙｒ”］ｈＰＴＨ（７−３４）　ＮＨ２
、［ＡｉｂＩ２．　Ｎｌｅ”＋８４ｙｒ３４］　ｈｐＴ
ｎ（７〜３４）ＮＨ２゜これらの代表例は、本発明を制
限するものと解釈されるべきではない。

本発明は、上記治療有効量の副甲状腺ホルモン類似体を
投与することを含んでなる、副甲状腺ホルモン作用の阻
害方法についても提供する。本発明は、上記治療有効量
の副甲状腺ホルモン１ｆＪＪ体を投与することを含んで
なる、骨粗鬆症又は高カルシウム血症の治療方法をも提
供する。本発明の治療、有効量の副甲状腺ホルモン類似
体を投与することを含んでなる副甲状腺機能亢進症の治
療力−１０４゜ 法も提供される。高カルシウム血症、腎不全又は高血圧
として発症する副甲状腺機能亢進症の治療方法も提供さ
れる。ペプチドホルモン様分子を過剰産生ずる腫瘍又は
他の細胞により引き起される症状の治療方法及び症状が
炎症、アレルギー反応又は活性光道リンパ球である免疫
疾患の治療方法も、本発明の新規ペプチドホルモン類似
体によって提供される。

本発明の様々な他の目的、特徴及び付随的利点は、それ
が下記の詳細な説明から更によく理解されていくにつれ
て、更に十分に明らかにされていくであろう。

広範囲の構造及び活性研究は、第二メソセンジャー分子
の産生を刺激することなく、それらの各細胞表面レセプ
ターに対して高い結合親和性を有するペプチドホルモン
類似体のデザインを導くに至った。かかるペプチドホル
モン類似体の例としては、生体内でＰＴＨを阻害するも
のの作用剤としては機能しない［Ａｉｂ”、Ｔｙｒ”コ
ｈＰＴＨ（７−３４）ＮＨｚアミドがある。

作用剤活性はＮ末端アミノ酸配列の存在に依存している
。末端アミノ酸２〜６個の除去により、すべて作用剤活
性でない場合には、大部分消失させる結果になる。した
がって、第二メソセンジャー分子は、代わりのアミノ末
端を有するそれらの類似体によって影響をうけない。

Ｎ末端からアミノ酸２〜６個が除かれたＰＴＨ類似体は
、環状Ａ　Ｍ　Ｐ　ｔａ度の変化を生じさせることなく
ペプチドホルモンレセプターと高親和性でなおも結合す
る阻害剤を提供することになる。

以下は、ウシ副甲状腺ホルモン（ｂＰＴＨ）の３４アミ
ノ酸配列である： ）１２Ｎ−ＡＬＡ−ＶＡＬ−ＳＥＲ−ＧＬＩＪ　−ＩＬ
Ｅ−ＧＬＮ−ＰＨＥ−ＭＥＴ−ＨＩ　５−ＡＳｌｉｌ　
−ＬＥＵ−ＧＬＹ−ＬＹＳ−ＨＩＳ−ＬＥＵ（１５）−
３ＥＲ−５ＥＲ−ＭＥＴ−ＧＬＩＪ−八ＲＧ−ＶＡＬ−
ＧＬＵ−ＴＲＰ−ＬＥＵ−ＡＲＧ−ＬＹＳ−ＬＹＳ−Ｌ
ＥＵ−ＧＬＮ−ＡＳＰ　（３０）−ＶＡＬ−ＨＩＳ−Ａ
ＳＮ−ＰＨＥ−ＣＯＯＨ。

以下は、ヒト副甲状腺ホルモン（ｈｐＴＨ）の３４アミ
ノ酸配列である： Ｈ２Ｎ−５ＥＲ−ＶＡＬ−５ＥＲ−ＧＬＵ−Ｉ　ＬＥＩ
　ＧＬＮ−Ｌｌ！Ｕ　−ＭＥＴ−ＨＩＳ−ＡＳＮ（１０
）−Ｌｌｌｉｔｌ−ＧＬＹ−ＬＹＳ−）ＩＩＳ−ＬＥＤ
−八５Ｎ−３ＥＲ−１’１ＥＴ−ＧＬＵ−ＡＲＧ（２０
）−ＶＡＬ−ＧＬＵ−’ｒＲＰ−ＬＥＵ−ＡＲＧ−ＬＹ
Ｓ−ＬＹＳ−ＬＥＵ−ＧＬＮ−ＡＳＰ（３０）−ＶＡＬ
−ＩＩＩｓ−ＡＳＮ−ＰＨＥ−Ｃｏｏｌ　　。

以下は、ラット副甲状腺ホルモン（ｒＰＴＨ）の３４ア
ミノ酸配列である： Ｈ２Ｎ−ＡＬＡ−ＶＡＬ−３ＥＲ−ＧＬＵ−ＩＬＥ−Ｇ
ＬＮ−ＬＥＵ−ＭＥＴ−ＨＩＳ−ＡＳＮ（１０）−ＬＥ
Ｕ−ＧＬＹ−ＬＹＳ−ＨＩＳ−ＬＥＵ−ＡＬＡ−５ＥＲ
−ＶＡＬ−ＧＬＩＪ−ＡＲＧ（２０）　−ＭＥＴ−ＧＬ
Ｎ−ＴＲＰ−ＬＥＵ−ＡＲＧ−ＬＹＳ−ＬＹＳ−ＬＥＵ
−ＧＬＮ−ＡＳＰ（３０）−ＶＡＬ−）＋１３−ＡＳＮ
−ＰＨＥ−Ｃｏｏｌ（０細胞表面レセプターへの結合に
ついて特異的な領域を含むペプチドホルモンの断片は、
阻害剤又は遮断剤として使用することができる。副甲状
腺ホルモンの場合、Ｎ末端３４アミノ酸は副甲状腺ホル
モン細胞表面レセプターに対する結合特異性を明らかに
する上で十分である。このレセプター特異性は、参考の
ため本明細書に組込まれる下記文献によって更に明確化
される二Ｍ・ローゼンブラソトら、エンドクリノロジー
、第１０７巻、第２号、第５４５−５５０頁、１９８０
年（Ｍ。

Ｒｏｓｅｎｂｌａｔｔ　ｅｔ　ａｌ、、　Ｅｎｄｏｃｒ
ｉｎｏｌｏｇｙ、　１０７：２．５４５−５５０．１９
８０）及びＳ−Ｒ・ナスバウムら、ジャーナル・オブ・
バイオロジカル・ケミストリー、第２５５巻、第１０１
８３頁、１９８０年（Ｓ、Ｒ。

Ｎｕｓｓｂａｕｍ　ｅｔ　ａｌ、、　Ｊｏｕｒｎａｌ　
ｏｆ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ。

２５５：１０１８３．１９８０）。

ペプチドホルモン中においてＬ−アミノ酸の代わりにＤ
−アミノ酸が存在する場合には、異化作用に耐性のペプ
チドが得られる。−しかしながら、かかる置換によって
すべてが活性ペプチドホルモンとなるわけではない。Ｐ
ＴＨの３４位におけるＤ−チロシンの挿入は、ペプチド
の安定性を高めることに加え、ホルモンの生物学的活性
に関して重大な増加を引き起こす。ペプチドホルモン合
成におけるＤ−アミノ酸の利用については、参考のため
本明細書に組込まれる下記文献中に記載されているニコ
ルｉレラら、バイオケミストリー、第１９巻、第４３’
８０１４３ｓ　ｓ頁、１９８０年（Ｃｏｌｔｒｅｒａ　
ｅｔ　ａｌ、、　’Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ＋　１９
’：４３８０−４３８５．１９８０）　　、ローセンブ
ラットら、バイオケミストリー、第２０巻、第７２４６
−７２５０頁、’１９８１年。

以下の説明は２つのセクションに分けられる。

セクション■はペプチドホルモンの阻害剤の製造及び構
造について記載しており、セクション■はペプチドホル
モン阻害剤の用途について述べている。

■、ペプチドホルモン阻害剤の製造及び構造メリフィー
ルド（Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ）　　（“固相ペプチド合
成”、アトパンセス・イン・エンザイモロジ−（八ｄｖ
ａｎｃｅｓ　ｉｎ　Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ）　、第３２
巻＼第２２１−２９６頁、１９６９年〕により開発され
た固相ペプチド合成技術は、副甲状腺ホルモンを含むペ
プチドホルモンの合成に用いられて成功してきた。この
方法は、ペプチドのカルボキシル末端を固体担体に共有
結合させておく方法に基づいている。望ましいペプチド
配列は、単一アミノ酸をペプチド鎖に順次結合させて、
カルボキシルからアミノ末端に向けて成長させることに
より製造される。各アミノ酸をほぼ同じ一連の反応によ
って結合させるため、合成に関する入念な方法の必要性
は最小化される。溶解性は、ペプチドが固体担体に結合
せしめられているため、合成に際して大きな問題ではな
い。この方法は迅速であって、しかもそれは−人の作業
者で利用することができる。その方法はアミノ末端置換
をうけた複数の類似体の合成にとって非常に便利である
が、その理由は、単一の合成がアミノ末端近くで複数の
方向に分岐して、アミノ末端領域でのみ変化した多くの
類似体を生じさせることができるためである。

■、ペプチドホルモン阻害剤の用途 ペプチドホルモン作用の阻害方法は、２つのＮ末端アミ
ノ酸が除かれかつ次の４つのＮ末端アミノ酸のうち０又
はそれ以上がＮ末端から順次除かれているいずれかのペ
プチドホルモン又は類似体の治療有効量を投与すること
を含んでなる。これらのホルモン類似体は、生理学的応
答性を刺激することなく、細胞表面レセプターに対する
特異性を保持している。この用途は、完全ペプチドホル
モンもしくはその類似体、又はレセプター結合部位を有
するペプチドホルモン部位にも適用されるペプチドホル
モン類似体の用途は、副甲状腺ホルモン類似体によって
例示される。副甲状腺ホルモンは、ウシ、ヒト、ラット
由来でも、又はいずれのを推動物源由来であってもよい
。類似体は修正されたＮ末端領域を除きすべてのアミノ
酸を有していてもよく、又はＮ末端７−３４アミノ酸を
有していてもよい。個々のアミノ酸は、本発明において
チロシン又はノルロイシンで例示されるように、安定性
を改善するために置換することができる。

本発明のペプチドホルモン類似体は、天然ペプチドホル
モンの濃度を測定するために生体外で使用することがで
きる。このバイオアッセイ操作は副甲状腺ホルモンに関
するバイオアッセイによって説明される。溶液中におけ
る副甲状腺ホルモンの未知濃度は、副甲状腺ホルモン細
胞表面レセプターへのその結合を阻害するために必要な
副甲状腺ホルモン類似体の量を測定することによって決
定できる。副甲状腺ホルモンの作用を阻止するために必
要なＰＴＨ類似体の濃度は、副甲状腺ホルモン濃度の直
接的指標である。

副甲状腺ホルモン類似体は、本発明の副甲状腺ホルモン
類似体の治療有効量投与により骨粗鬆症又は高カルシウ
ム血症の原因を調べたり又はそれらを治療するために使
用することができる。同様に、副甲状腺機能亢進症及び
高カルシウム血症、腎不全もしくは高血圧のような副甲
状腺機能亢進症の他の症状は、本発明の副甲状腺ホルモ
ン類似体の投与によって治療することができる。

腫瘍及び他の異常細胞増殖は、病的状態を引き起こすホ
ルモン様物質を産生ずる。かかるホルモン様物質による
刺激を遮断するためのペプチドホルモン類似体の使用結
果として、病的状態を緩和することができる。したがっ
て、本発明のペプチドホルモン類似体は、ホルモン様物
質の異常産生に起因する疾患を治療するために使用する
ことができる。

炎症、アレルギー反応及び活性亢進リンパ球のような免
疫疾患は、免疫系細胞へのＰＴＨ結合を阻害するＰＴＨ
類似体のような、ペプチドホルモンの作用を阻止するペ
プチドホルモン類似体の投与によって治療することがで
きる。

本発明のペプチドホルモン類似体は経口及び非経口双方
の活性を示し、経口、非経口、経直腸、鼻腔内又は局所
投与用の用量形で処方することができる。経口投与用の
固体用量形としては、カプセル、錠剤、ピル、粉末及び
顆粒がある。かかる固体用量形において、活性化合物は
、スクロース、ラクトース又はデンプンのような少なく
とも１種の不活性希釈剤（ｄｉｌｕｅｎｔ）と混合され
る。かかる用量形は、通常の実務のように、不活性希釈
剤以外の他の物質も含有することができる。カプセル、
錠剤及びピルの場合には、用量形は緩衝剤を含有してい
てもよい。錠剤及びピルは更に腸溶性皮膜を付して製造
することもできる。

経口投与用の液体用量形としては、薬業界で常用される
不活性希釈剤を含有した薬学上許容される乳濁液、溶液
、懸濁液、シロップ及びエリキシルがある。不活性希釈
剤以外にも、かかる組成物は湿潤剤、乳化及び懸濁剤、
並びに甘味剤のようなアジュバントを含有しうる。非経
口投与用の本発明の製剤としては、無菌の水性もしくは
非水性溶液、懸濁液又は乳濁液がある。非水性溶媒又は
ビヒクルの例には、プロピレングリコール、ポリエチレ
ングリコール、オリーブ油等の植物油及びオレイン酸エ
チル等の注射用有機エステル類がある。

直腸投与用組成物は、活性物質に加えてカカオ脂又は半
割用ロウのような賦形剤を含有する半割である。本発明
の組成物における活性成分の用量は変動しうるが、しか
しながら活性成分量は適切な用量形が得られにようなも
のであることが必要である。選択される用量形は、望ま
しい治療効果、投与経路及び治療期間に依存している。

明らかに、本発明の多数の修正及び変更が上記開示から
みて可能である。したがって、特許請求の範囲内におい
て、本明細書で具体的に記載されている以外の発明も実
施しうると理解されるであろう。

実施例Ｉ ＰＴＨのペプチドホルモン類似体の合成及び精製副甲状
腺ホルモン類似体をメリフィールドの固相法の変法によ
り製造した。合成はアプライド・バイオシステムズ４３
０Ａシンセサイザー（ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅ
ｍｓ　４３０八５ｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ）を用いて行な
った。

カルボキシアミド（ＣＯＮＨｚ）　Ｃ０ＯＨ末端修正を
行なうために、固体担体としで４−メチルベンズヒドリ
ルアミン塩酸樹脂（ポリスチレン−１％ジビニルベンゼ
ン、ＵＳＢ）を用いた。

カンブリングの際に各アミノ酸のα−アミノ基を保護す
るため、三級ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）基を用
いた。側官能基保護は次のように行なわれた：（ａ）セ
リンのヒドロキシル基はＯ−ベンジルエーテルとして；
（ｂ）チロシンのヒドロキシル基はＯ−２，６−シクロ
ヘキシルエステル又はｐ−ブロモベンジルオキシカルボ
ニルエステルとして；（Ｃ）グルタミン酸及びアスパラ
ギン酸のカルボキシル基はベンジル又はシクロヘキシル
エステルとして；かつｆｄｌヒスチジンのイミダゾール
窒素はベンジルオキシメチル（ＲＯＭ）によって保護さ
れたが、アルギニンのグアニジン官能基はｐ＝トルエン
スルホニル基で保護され、インドーバイミンはホルミル
基で保護された。すべてのアミノ酸は、アプライド・バ
イオシステムズ社（Ａｐｐｌ　ｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅ
ｍｓ、　Ｉｎｃ、）　、ベニンスラ・ラボラトリーズ（
Ｐｅｎｉｎｓｕｌａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）又は
バチエム・ケミカルズ（１３ａｃｈ６Ｈ（：ｈｅｍｉｃ
ａｌｓ）から入手した。

ペプチド−樹脂合成は、アプライド・バイオシステムズ
社指定プロトコールを用いて行なった。

二重カップリングを各アミノ酸の組込みのために行なっ
た。トリフルオロ酢酸による脱保護時間は、製造者プロ
トコールよりも６分間延長された。

ペプチドは、タム、ジャーナル・オブ・アメリカン・ケ
ミカル・ソサエテー、第１０５巻、第６４４１−６４５
５頁、１９８３年（Ｔ、ＩＨ，Ｊｏｕｒｎａｌｏｆ　　
Ａｍｅｒｉｃａｎ　　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　　５ｏｃｉｅ
ｔｙ、　　１０５：６４４２−６４５５（１９８３）　
）に記載された２段階ＨＦ切断操作と同様にして、側鎖
保護基の同時除去と共にコポリマー樹脂から切断された
。最初のＨＦ段階では、下記比率の試薬を用いた２５％
ｐ−クレゾール、５％ｐ−チオクレゾール、６５％ジメ
チルスルフィド及び２５％ＨＦ、ペプチド−樹脂１グラ
ムにつき混合物１０ｍＡを０℃で２時間用いた。第二の
Ｉ（Ｆ段階では、下記比率の試薬を用いた＝５％ｐ−ク
レゾール、５％ｐ−チオクレゾール及び９ｏ％ＨＦ０切
断は０℃で７５分間行なわれた。ＨＦ除去後、ペプチド
−樹脂混合物を無水エーテルで洗浄して、スキャベンジ
ャ−（Ｓｃａｖｅｎｇｅｒ）を除去した。次いで、ペプ
チドを５０％酢酸及び水で抽出した。洗液を集め、セフ
ァデックス（Ｓｅｐｈａｄｅｘ）Ｇ−５０Ｆを用いてク
ロマトグラフィーに付し、５０％ＨＯＡｃで溶離した。

凍結乾燥後、部分精製ペプチドを逆相ＨＰＬＣによるク
ロマトグラフィーに付した〔バイダック（Ｖｙｄａｃ）
　Ｃａ結合シリカ、１５μ粒径、３００人孔径、０．１
％ＴＦＡ含有水性アセトニトリル勾配を用いる〕。

実施例２ ＰＴＨ結合アッセイ結果 ＰＴＨ４ｉ似体をローゼンブラットら、エンドクリノロ
ジー、第１０７巻、第５４５−５５０頁、１９８０年に
報告されたアッセイを修正した新しつり いレセプターアッセイで分析した。結合アッセイではＨ
ＰＬＣ（ツバパック（Ｎｏｖａｐａｋ）　Ｃ＋　８．０
．１％ＴＦＡ中３２〜３５％ＣＨ３ＣＮ）で精製された
［Ｎ１ｅ８１１８　、　　＋２ＳＩ−Ｔｙｒ３４コｂＰ
Ｔ）ｌ　（１−３４）　Ｎｌ２を用い、−７０℃で２５
ｍＭ）リスＨＣＩ／１％ＢＳＡ中アリクオツとして（ａ
ｌｉｑｕｏｔｓ）貯蔵した。ウシ腎皮質原形質膜を２１
℃で３０分間トリス含有緩衝液（２５０μ＃）中放射性
リガンド（２５、ＯＯＯｃｐｍ）と共にインキュベート
した。平衡に到達すると、結合及び遊離の放射性リガン
ドを遠心分離した。ウシ腎皮質膜に対する高い特異的結
合（８５％）が−貫して得られた。

表

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、Ｇｌｙ＾１＾２がＬ−Ｐｒｏ、Ｄ−Ｐｒｏ、Ｌ−Ａ
   ｌａ、Ｄ−Ａｌａ、Ａｉｂ及びＮＭｅＧｌｙからなる群
   より選択されるアミノ酸で置換されているＰＴＨ（１−
   ３４）ＮＨ＿２、［Ｔｙｒ＾３＾４］ＰＴＨ（１−３４
   ）ＮＨ＿２、［Ｎｌｅ＾８＾，＾１＾８、Ｔｙｒ＾３＾
   ４］ＰＴＨ（１−３４）ＮＨ＿２；ＰＴＨ（３−３４）
   ＮＨ＿２、［Ｔｙｒ＾３＾４］ＰＴＨ（３−３４）ＮＨ
   ＿２、［Ｎｌｅ＾８＾，＾１＾８、Ｔｙｒ＾３＾４］Ｐ
   ＴＨ（３−３４）ＮＨ＿２；ＰＴＨ（４−３４）ＮＨ＿
   ２、［Ｔｙｒ＾３＾４］ＰＴＨ（４−３４）ＮＨ＿２、
   ［Ｎｌｅ＾８＾，＾１＾８、Ｔｙｒ＾３＾４］ＰＴＨ（
   ４−３４）ＮＨ＿２；ＰＴＨ（５−３４）ＮＨ＿２、［
   Ｔｙｒ＾３＾４］ＰＴＨ（５−３４）ＮＨ＿２、［Ｎｌ
   ｅ＾８＾，＾１＾８、Ｔｙｒ＾３＾４］ＰＴＨ（５−３
   ４）ＮＨ＿２；ＰＴＨ（７−３４）ＮＨ＿２、［Ｔｙｒ
   ＾３＾４］ＰＴＨ（７−３４）ＮＨ＿２、［Ｎｌｅ＾８
   ＾，＾１＾８、Ｔｙｒ＾３＾４］ＰＴＨ（７−３４）か
   らなるペプチド。 ２、ＰＴＨがｈＰＴＨ、ｂＰＴＨ又はｒＰＴＨである、
   請求項１記載のペプチド。 ３、［Ｌ−Ａｌａ＾１＾２］ｈＰＴＨ（７−３４）ＮＨ
   ＿２、［Ｌ−Ａｌａ＾１＾２、Ｔｙｒ＾３＾４］ｈＰＴ
   Ｈ（７−３４）ＮＨ＿２、［Ｌ−Ａｌａ＾１＾２、Ｎｌ
   ｅ＾８＾，＾１＾８、Ｔｙｒ＾３＾４］ｈＰＴＨ（７−
   ３４）ＮＨ＿２；［Ｄ−Ａｌａ＾１＾２］ｈＰＴＨ（７
   −３４）ＮＨ＿２、［Ｄ−Ａｌａ＾１＾２、Ｔｙｒ＾３
   ＾４］ｈＰＴＨ（７−３４）ＮＨ＿２、［Ｄ−Ａｌａ＾
   １＾２、Ｎｌｅ＾８＾，＾１＾８、Ｔｙｒ＾３＾４］ｈ
   ＰＴＨ（７−３４）ＮＨ＿２；［Ａｉｂ＾１＾２］ｈＰ
   ＴＨ（７−３４）ＮＨ＿２、［Ａｉｂ＾１＾２、Ｔｙｒ
   ＾３＾４］ｈＰＴＨ（７−３４）ＮＨ＿２、［Ａｉｂ＾
   １＾２、Ｎｌｅ＾８＾，＾１＾８、Ｔｙｒ＾３＾４］ｈ
   ＰＴＨ（７−３４）ＮＨ＿２である、請求項２記載のペ
   プチド。 ４、［Ａｉｂ＾１＾２、Ｔｙｒ＾３＾４］ｂＰＴＨ（７
   −３４）ＮＨ＿２、［ＮＭｅＧｌｙ＾１＾２、Ｔｙｒ＾
   ３＾４］ｂＰＴＨ（７−３４）ＮＨ＿２、［Ａｉｂ＾１
   ＾２、Ｔｙｒ＾３＾４］ｂＰＴＨ（７−３４）ＮＨ＿２
   、［Ｄ−Ａｌａ＾１＾２、Ｔｙｒ＾３＾４］ｈＰＴＨ（
   １−３４）ＮＨ＿２、［Ｌ−Ａｌａ＾１＾２、Ｔｙｒ＾
   ３＾４］ｈＰＴＨ（１−３４）ＮＨ＿２、［Ａｉｂ＾１
   ＾２、Ｔｙｒ＾３＾４］ｈＰＴＨ（１−３４）ＮＨ＿２
   、［Ｐｒｏ＾１＾２、Ｔｙｒ＾３＾４］ｈＰＴＨ（１−
   ３４）ＮＨ＿２である、請求項２記載のペプチド。 ５、哺乳動物に有効量の請求項１記載のペプチドを投与
   することを含んでなるＰＴＨレセプター上における作用
   方法。 ６、ペプチドがｈＰＴＨである、請求項５記載の方法。 ７、一定量の請求項１記載の類似体が生体外においてＰ
   ＴＨレセプターに対する副甲状腺ホルモンの結合を阻害
   する、副甲状腺ホルモンの生体外バイオアッセイ。 ８、投与が高カルシウム血症の治療用である、請求項５
   記載の方法。 ９、投与が副甲状腺機能亢進症の診断又は治療用である
   、請求項５記載の方法。 １０、投与が骨粗鬆症の治療用である、請求項５記載の
   方法。 １１、腫瘍が副甲状腺ホルモン様物質を産生する、請求
   項５記載の方法。 １２、投与が免疫疾患の治療用である、請求項５記載の
   方法。 １３、投与が高血圧の治療用である、請求項５記載の方
   法。 １４、有効量の請求項１記載のペプチド及び薬学上許容
   される担体とを含んでなる薬学組成物。