JPS63252253A - エイズ診断テスト - Google Patents
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- JPS63252253A JPS63252253A JP63040527A JP4052788A JPS63252253A JP S63252253 A JPS63252253 A JP S63252253A JP 63040527 A JP63040527 A JP 63040527A JP 4052788 A JP4052788 A JP 4052788A JP S63252253 A JPS63252253 A JP S63252253A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
この発明はウィルス病に対する診断テスト、特にエイズ
に対する診断テストに関する。
に対する診断テストに関する。
後天的免疫欠損症候群（エイズ）は主として血液および
血液製品によ）伝達されるレトロウィルスによりひき起
こされる。米国では、この病気は成る一定のグループに
おいて他のグループよりも多発している。すなわち、同
性愛者、ハイチ人、輸血の受血者および静脈内注射薬乱
用者に多発している。疫学者は現在、この病気はこれ迄
考えられていたよりもずっと感染性が強く、蔓延してい
ると考えている。
血液製品によ）伝達されるレトロウィルスによりひき起
こされる。米国では、この病気は成る一定のグループに
おいて他のグループよりも多発している。すなわち、同
性愛者、ハイチ人、輸血の受血者および静脈内注射薬乱
用者に多発している。疫学者は現在、この病気はこれ迄
考えられていたよりもずっと感染性が強く、蔓延してい
ると考えている。
エイズウィルス〔以下、ＨＩＶ（ヒト免疫欠損ウィルス
）という〕に免疫陽性である患者がすべて何らかの症状
を表わすとは限らない。実際、ＨＩＶに免疫陽性の患者
にこのウィルスが検出されないことがしばしばある。従
って、臨床家はＨＩＶに免疫陽性の患者の予後を迅速に
決定することを可能くする診断上のツールを必要とする
。
）という〕に免疫陽性である患者がすべて何らかの症状
を表わすとは限らない。実際、ＨＩＶに免疫陽性の患者
にこのウィルスが検出されないことがしばしばある。従
って、臨床家はＨＩＶに免疫陽性の患者の予後を迅速に
決定することを可能くする診断上のツールを必要とする
。
エイズウィルスはすでに同定され詳しく特徴が調べられ
ている。「サイエンス第２２４巻（１９８４年）」には
ＨＴＬＶ−１０）Ｉとして同定されたＨＩＶの単離物の
同定についての４編の論文が掲載されている−０ このウィルスのゲノムは完全な地図が作成されておシ、
ネイチャー第３１５巻２７７−２８４頁（１９８５年）
には一つの大きな地図が示されている。
ている。「サイエンス第２２４巻（１９８４年）」には
ＨＴＬＶ−１０）Ｉとして同定されたＨＩＶの単離物の
同定についての４編の論文が掲載されている−０ このウィルスのゲノムは完全な地図が作成されておシ、
ネイチャー第３１５巻２７７−２８４頁（１９８５年）
には一つの大きな地図が示されている。
ＨＩＶはレトロウィルスである。すなわち、遺伝材料と
してＤＮＡの替わりにＲＮＡを使用してＲＮＡ遺伝子の
ＤＮＡ等何物を産生して複製しなければならないウィル
スである。複製の仕方が普通ではないため、このウィル
スがコードづけしなければならない一つの酵素が逆転写
酵素でおる。
してＤＮＡの替わりにＲＮＡを使用してＲＮＡ遺伝子の
ＤＮＡ等何物を産生して複製しなければならないウィル
スである。複製の仕方が普通ではないため、このウィル
スがコードづけしなければならない一つの酵素が逆転写
酵素でおる。
逆転写酵素は宿主細胞内でウィルスＲＮＡからウィルス
ＤＮＡに遺伝暗号を転写する酵素である。
ＤＮＡに遺伝暗号を転写する酵素である。
これは上記ウィルスの複製サイクルにおける必要な工程
である。
である。
ＨＴＬＶ−１１／ＬＡＹの逆転写酵素はサイエンス。
第２３１巻１２８９頁（１９８６年）に記載されている
。ウイロロジー、第１４７巻５２６−５３５頁（１９８
５年）には、逆転写酵素の特徴づけがなされているとと
もＫその検出のための最適条件が記載されている。
。ウイロロジー、第１４７巻５２６−５３５頁（１９８
５年）には、逆転写酵素の特徴づけがなされているとと
もＫその検出のための最適条件が記載されている。
ＨＩＶの逆転写酵素は通常、健康人に強い免疫反応をひ
き起こす。逆転写酵素の作用を阻害する抗体を検知する
ことによプ、ＨＩＶに免疫陽性であることが知られてい
る患者における疾患の将来の経過についての予測を行な
うことができることが、ここに発見された。これらの逆
転写酵素阻害抗体が存在すれば予後は良好であるが、被
検者が逆転写酵素阻害抗体を持っていなければ予後は良
くない。そのような被検者は個体の死を招来することの
あるエイズ関連症状を全面的に発症するかも知れない。
き起こす。逆転写酵素の作用を阻害する抗体を検知する
ことによプ、ＨＩＶに免疫陽性であることが知られてい
る患者における疾患の将来の経過についての予測を行な
うことができることが、ここに発見された。これらの逆
転写酵素阻害抗体が存在すれば予後は良好であるが、被
検者が逆転写酵素阻害抗体を持っていなければ予後は良
くない。そのような被検者は個体の死を招来することの
あるエイズ関連症状を全面的に発症するかも知れない。
この発明は、−面において、
１）ＨＩＶ逆転写酵素溶液、
２）適当なプライム化ＲＮＡテンプレート、３）ＤＮＡ
合成のためのヌクレオシドトリホスフェート、 ４）既知量のＨＩＶ逆転写酵素阻害抗体を含有する陽性
血清コントロール、および ５）ＨＩＶ抗体を含有しない陰性血清コントロール より成る、ＨＩＶに暴露されたことが知られている患者
の予後を展開するだめのキットを提供する。
合成のためのヌクレオシドトリホスフェート、 ４）既知量のＨＩＶ逆転写酵素阻害抗体を含有する陽性
血清コントロール、および ５）ＨＩＶ抗体を含有しない陰性血清コントロール より成る、ＨＩＶに暴露されたことが知られている患者
の予後を展開するだめのキットを提供する。
この発明は、別の面において、当該患者の体液中のＨＩ
Ｖ逆転写酵素阻害抗体の量を定量的に検知することから
成る、ＨＩＶＫ免疫陽性であることが知られている患者
の予後を展開する方法を提供する。
Ｖ逆転写酵素阻害抗体の量を定量的に検知することから
成る、ＨＩＶＫ免疫陽性であることが知られている患者
の予後を展開する方法を提供する。
この発明は、さらに別の面において、ＨＩＶに免疫陽性
の患者に製薬的に許容し得る量のＨＩＶ逆転写酵素阻害
抗体を投与することから成る、ＨＩＶに起因する疾患を
治療する方法を提供する。
の患者に製薬的に許容し得る量のＨＩＶ逆転写酵素阻害
抗体を投与することから成る、ＨＩＶに起因する疾患を
治療する方法を提供する。
この明細書において使用されているように、エイズおよ
びエイズ関連症状をひき起こすウィルスはヒト免疫欠損
ウィルス（ＨＩＶ）であると固定サレル。Ｉ−ＩＴＬＶ
−■お！びＬＡＶはＨＩＶＯ％定の分離体であると考え
ることができる。命名法に混乱があるものの殆んどの研
究者がこれらの異なる名称により同定されているウィル
スは、実際は、同一のウィルスの変異株であり、それら
はすべてエイズをひき起すことを確信している。
びエイズ関連症状をひき起こすウィルスはヒト免疫欠損
ウィルス（ＨＩＶ）であると固定サレル。Ｉ−ＩＴＬＶ
−■お！びＬＡＶはＨＩＶＯ％定の分離体であると考え
ることができる。命名法に混乱があるものの殆んどの研
究者がこれらの異なる名称により同定されているウィル
スは、実際は、同一のウィルスの変異株であり、それら
はすべてエイズをひき起すことを確信している。
この明細書に使用されているように、「゛エイズ」（獲
得免疫不全症候群）はカボジ肉腫、ガ１７ 二・ニュー
モシスチス肺炎等のような通性感染′の存在により定義
される臨床的に定義可能な疾患を指称する。
得免疫不全症候群）はカボジ肉腫、ガ１７ 二・ニュー
モシスチス肺炎等のような通性感染′の存在により定義
される臨床的に定義可能な疾患を指称する。
この明細書において使用されているように、「前エイズ
」はＨＩＶに陽性の患者において免疫反応が強く抑制さ
れているがエイズであると診断される程重篤ではないこ
とを指称する。
」はＨＩＶに陽性の患者において免疫反応が強く抑制さ
れているがエイズであると診断される程重篤ではないこ
とを指称する。
この明細書において使用されているようＫ、「ＨＩＶ逆
転写酵素」は天然のウィルスにより産生されウィルスＲ
ＮＡをＤＮＡに転写する酵素を意味する。ＨＩＶ逆転写
酵素は、この明細書においては酵素源の如何を問わずそ
のような酵素を示すものとして使用される。例えば、−
個または二個以上のアミノ酸が置換している類似の逆転
写酵素のようなＨＩ Ｖ逆転写酵素の変種はそれを産生
ずるウィルスがＨＩＶの変異株であると考えられるなら
ばすべてＨＩＶ逆転写酵素であると考えることができる
。この酵素はウィルスにより天然に、または遺伝子工学
等の技法により人工的に製造することができる。
転写酵素」は天然のウィルスにより産生されウィルスＲ
ＮＡをＤＮＡに転写する酵素を意味する。ＨＩＶ逆転写
酵素は、この明細書においては酵素源の如何を問わずそ
のような酵素を示すものとして使用される。例えば、−
個または二個以上のアミノ酸が置換している類似の逆転
写酵素のようなＨＩ Ｖ逆転写酵素の変種はそれを産生
ずるウィルスがＨＩＶの変異株であると考えられるなら
ばすべてＨＩＶ逆転写酵素であると考えることができる
。この酵素はウィルスにより天然に、または遺伝子工学
等の技法により人工的に製造することができる。
この明細書において使用されるように、「Ｈ工ｖ逆転写
酵素阻害抗体」はＨＩＶ逆転写酵素の酵素作用を停止ま
たは阻害するＨＩＶ逆転写酵素に対する任意の抗体を意
味する。ＨＩＶ逆転写酵素に対してヒトの免疫応答によ
り多くの異なった抗体が産生され得るが、産生された抗
体はたいていＨＩＶ逆転写酵素の作用を阻害しないこと
が認識される。この発明はＨＩＶ逆転写酵素の作用の態
様を阻害する抗体のみに関する。多くの異なった特定抗
体がＨＩＶ逆転写酵素を阻害していることも考えられる
。そのような抗体のすべて、およびそのような抗体のす
べての組み合わせがこの発明の対象である。
酵素阻害抗体」はＨＩＶ逆転写酵素の酵素作用を停止ま
たは阻害するＨＩＶ逆転写酵素に対する任意の抗体を意
味する。ＨＩＶ逆転写酵素に対してヒトの免疫応答によ
り多くの異なった抗体が産生され得るが、産生された抗
体はたいていＨＩＶ逆転写酵素の作用を阻害しないこと
が認識される。この発明はＨＩＶ逆転写酵素の作用の態
様を阻害する抗体のみに関する。多くの異なった特定抗
体がＨＩＶ逆転写酵素を阻害していることも考えられる
。そのような抗体のすべて、およびそのような抗体のす
べての組み合わせがこの発明の対象である。
この明細書において使用されているようにＪＨＩＶに免
疫陽性」は患者がその血液中に、ウィルスを単離できる
か否かまたは疾患の明らかな症状を示しているか否かに
かかわらず、検知可能量のＨＩＶ抗体を有することを意
味する。
疫陽性」は患者がその血液中に、ウィルスを単離できる
か否かまたは疾患の明らかな症状を示しているか否かに
かかわらず、検知可能量のＨＩＶ抗体を有することを意
味する。
この明細書くおいて使用されているように、「キット」
は簡易包装され容易に使用できる、ＨＩＶ逆転写酵素阻
害抗体の存在を検知するための試薬を指称する。反応管
、ホルダー等の詳しい数は当業者の容易に選択し得ると
ころである。
は簡易包装され容易に使用できる、ＨＩＶ逆転写酵素阻
害抗体の存在を検知するための試薬を指称する。反応管
、ホルダー等の詳しい数は当業者の容易に選択し得ると
ころである。
この明細書において使用されているように、「ＲＮＡテ
ンプレート」という用語はこの発明の容器および方法に
おいて使用し得るＲＮＡポリマーを指称する。好適なＲ
ＮＡテンプレートはポリアデニル酸（以下、「ポリＡ」
という。）である。
ンプレート」という用語はこの発明の容器および方法に
おいて使用し得るＲＮＡポリマーを指称する。好適なＲ
ＮＡテンプレートはポリアデニル酸（以下、「ポリＡ」
という。）である。
プライム化ポリｒＡは逆転写酵素およびチミジン５′−
トリホスフェート（以下、「ｄＴＴＰＪという。）の存
在下、かつ、ＨＩＶ逆転写酵素阻害抗体の不存在下に、
ポリチミジル酸（以下、［ボ１ｊｄＴＪという。）を生
成する。
トリホスフェート（以下、「ｄＴＴＰＪという。）の存
在下、かつ、ＨＩＶ逆転写酵素阻害抗体の不存在下に、
ポリチミジル酸（以下、［ボ１ｊｄＴＪという。）を生
成する。
この明細書において使用されているように、「プライム
化ＲＮＡテンプレート」は３’−ＯＨ端に短い相補ＤＮ
Ａストランドを持つＲＮＡの長いストランドを指称する
。典型的には、このＤＮＡの長さは約１２〜１８塩基で
ある。特に好適なプライム化ＲＮＡテンプレートはポリ
アデニル酸：オリゴチミジル酸（以下、［ポリｒＡ：オ
リゴｄＴＪという。）である。
化ＲＮＡテンプレート」は３’−ＯＨ端に短い相補ＤＮ
Ａストランドを持つＲＮＡの長いストランドを指称する
。典型的には、このＤＮＡの長さは約１２〜１８塩基で
ある。特に好適なプライム化ＲＮＡテンプレートはポリ
アデニル酸：オリゴチミジル酸（以下、［ポリｒＡ：オ
リゴｄＴＪという。）である。
この明細書において使用されているように、 ｒＤＮＡ
合成のためのヌクレオンドトリホスフエート」はＨＩ
Ｖ逆転写酵素を検知できるならばどんなデオキシリボヌ
クレオシドトリホスフェートであってもよい。好適なヌ
クレオシドトリフオスフェート（ＲＮＡテンプレートが
ボＩ）ｒｋの場合には唯一の使用可能なものである）は
ｄＴＴＰ″ｔ１′ある。
合成のためのヌクレオンドトリホスフエート」はＨＩ
Ｖ逆転写酵素を検知できるならばどんなデオキシリボヌ
クレオシドトリホスフェートであってもよい。好適なヌ
クレオシドトリフオスフェート（ＲＮＡテンプレートが
ボＩ）ｒｋの場合には唯一の使用可能なものである）は
ｄＴＴＰ″ｔ１′ある。
ｄＴＴＰはトリチウムまたはビオチン−アビジン酵素の
ようなりＮ人生酸物を検知する他の任意の材料で放射標
識することができる。この発明の予後テストにおいて、
ＨＩ Ｖ逆転写酵素阻害抗体の不存在は、放射標識ポＩ
Ｊ ｄ Ｔの合成と存在によって推論することができる
。逆に、この抗体の存在は、放射標識ポリ ｄ Ｔの合
成がないことと不存在により推論することができる。
ようなりＮ人生酸物を検知する他の任意の材料で放射標
識することができる。この発明の予後テストにおいて、
ＨＩ Ｖ逆転写酵素阻害抗体の不存在は、放射標識ポＩ
Ｊ ｄ Ｔの合成と存在によって推論することができる
。逆に、この抗体の存在は、放射標識ポリ ｄ Ｔの合
成がないことと不存在により推論することができる。
この明細書において使用されているように、口易性血清
コントロール」は既知量の逆転写酵素阻害抗体を含有す
る溶液である。
コントロール」は既知量の逆転写酵素阻害抗体を含有す
る溶液である。
この明細書において使用されているように、「陰性血清
コントロール」はＨＩＶ関連蛋白に対する抗体を含有し
ない健常者の血清である。
コントロール」はＨＩＶ関連蛋白に対する抗体を含有し
ない健常者の血清である。
この明細書において使用されているように、［体液」は
抗体をもつ人体に含有されまたは産生される任意の体液
であってよい。好適な体液は血清である・ 〔用途〕 この発明はＨＩＶＫ免疫陽性であることが知られている
患者の予後を展開するのに有用である。
抗体をもつ人体に含有されまたは産生される任意の体液
であってよい。好適な体液は血清である・ 〔用途〕 この発明はＨＩＶＫ免疫陽性であることが知られている
患者の予後を展開するのに有用である。
この発明の予後テストは誰がエイズを発症しそうである
か、誰が明白な症状を表わしそうにないかを早期に決定
することを可能にする。血液スクリーニングがＨＩＶの
存在を検知するために広まるＫつれて、ＨＩＶに陽性で
あることを知ったものの疾患の症状が出るか否かを知ら
ず、心理的ストレスを感じる人が多くなっている。早期
予測は前エイズ症状に進行してはならない場合に早期臨
床的介入を行なうのＫも役立つ。
か、誰が明白な症状を表わしそうにないかを早期に決定
することを可能にする。血液スクリーニングがＨＩＶの
存在を検知するために広まるＫつれて、ＨＩＶに陽性で
あることを知ったものの疾患の症状が出るか否かを知ら
ず、心理的ストレスを感じる人が多くなっている。早期
予測は前エイズ症状に進行してはならない場合に早期臨
床的介入を行なうのＫも役立つ。
この発明のキットはＨＩＶ逆転写酵素を阻害する、患者
の血清中のヒト抗体の量を決定する免疫検定を包含する
。このキットは、 （ａ）ＨＩＶ逆転写酵素溶液、 （ｂ） 適当なプライム化ＲＮＡテンプレート、（Ｃ
） 少なくとも一種の放射標識ヌクレオシドトリフオ
スフェートを包含する、ＤＮＡ合成のための適当なヌク
レオシドトリ７オスフエート、（ｄ） 陽性血清コン
トロール、および（ｅ） 陰性血清コントロール を包含する。
の血清中のヒト抗体の量を決定する免疫検定を包含する
。このキットは、 （ａ）ＨＩＶ逆転写酵素溶液、 （ｂ） 適当なプライム化ＲＮＡテンプレート、（Ｃ
） 少なくとも一種の放射標識ヌクレオシドトリフオ
スフェートを包含する、ＤＮＡ合成のための適当なヌク
レオシドトリ７オスフエート、（ｄ） 陽性血清コン
トロール、および（ｅ） 陰性血清コントロール を包含する。
適当なプライム化ＲＮＡテンプレートは、通常、ポリｒ
Ａ ：オリゴｄＴである。ＤＮＡ合成のだめの適当な
ヌクレオシドトリフオスフェートは、通常、トリチウム
化ｄＴＴＰである。ヌクレオシドトリフオスフェートは
、もちろん、プライム化ｒＬＮＡテンプレート−の相補
体でなければならない。プライマーとして天然のＲＮＡ
、すなわち、四種の塩基のすべてから成る天然のＲＮＡ
ストランド、を使用するならば、四種のデオキシリボン
ドトリフオスフェートのすべてが存在していなければな
らない。ポリｒＡがテンプレートとして使用するならば
、前駆体はｄＴＴＰでなければならない。ポリｒＡの相
補体であるポリ ｄ Ｔは逆転写の過程で生成される。
Ａ ：オリゴｄＴである。ＤＮＡ合成のだめの適当な
ヌクレオシドトリフオスフェートは、通常、トリチウム
化ｄＴＴＰである。ヌクレオシドトリフオスフェートは
、もちろん、プライム化ｒＬＮＡテンプレート−の相補
体でなければならない。プライマーとして天然のＲＮＡ
、すなわち、四種の塩基のすべてから成る天然のＲＮＡ
ストランド、を使用するならば、四種のデオキシリボン
ドトリフオスフェートのすべてが存在していなければな
らない。ポリｒＡがテンプレートとして使用するならば
、前駆体はｄＴＴＰでなければならない。ポリｒＡの相
補体であるポリ ｄ Ｔは逆転写の過程で生成される。
ポリ「ＡはＲＮＡストランドの６−ＯＨ端において約１
２〜１８個のヌクレオチドを有するオリゴｄＴの短いス
トランドでプライムされる。
２〜１８個のヌクレオチドを有するオリゴｄＴの短いス
トランドでプライムされる。
ヌクレオシドトリホスフェート、プライム化テンプレー
トおよび逆転写酵素は酵素反応緩衝液中に存在させる。
トおよび逆転写酵素は酵素反応緩衝液中に存在させる。
好適な反応緩衝液は５０ ｍＭ ） ’）ス−ＨＣｌ
、 ｐＨ７，９、５ｍＭジチオスレイトール、 ０．５
ｍＭ還元グルタチオン、５ｍＭ塩化マグネシウム。
、 ｐＨ７，９、５ｍＭジチオスレイトール、 ０．５
ｍＭ還元グルタチオン、５ｍＭ塩化マグネシウム。
１５０ｍＭ塩化カリウム、０．５ｍＭエチレングリコー
ル−ビス−（−アミノエチルエーテル）−Ｎ。
ル−ビス−（−アミノエチルエーテル）−Ｎ。
Ｎ’７テトラ酢酸（以下、ｒＥＧＴＡＪという。）、０
．０５％トリトンＸ−１００，２％エチレングリコール
２，５μＩテンプレート・プライマー、および２０μ
Ｃ放射標識トリチウム化ｄＴＴＰから成る。
．０５％トリトンＸ−１００，２％エチレングリコール
２，５μＩテンプレート・プライマー、および２０μ
Ｃ放射標識トリチウム化ｄＴＴＰから成る。
陽性血清コントロールは既知濃度のＨＩＶ逆転写酵素阻
害抗体を含有するスタンダードである。
害抗体を含有するスタンダードである。
陰性血清コントロールはＨＩＶ抗体を含有しない健常者
の血清である。陽性および陰性の両コントロールは基準
線を作成するのに使用する。抗体の量は未知試料から検
出された放射能を上記二つのコントロールから検出され
る放射能と比較することにより定量される。
の血清である。陽性および陰性の両コントロールは基準
線を作成するのに使用する。抗体の量は未知試料から検
出された放射能を上記二つのコントロールから検出され
る放射能と比較することにより定量される。
逆転写酵素、プライム化ＲＮＡテンプレートおよびヌク
レオシドトリホスフェートの溶液は約５０〜７０°Ｃ１
好ましくは５７°Ｃで２４〜４８時間、好ましくは約４
８時間インキュベートされる。インキュベーション期間
中に逆転写酵素の存在下でプライム化ＲＮＡテンプレー
ト上にヌクレオシドトリホスフェートからＤＮＡが形成
される。
レオシドトリホスフェートの溶液は約５０〜７０°Ｃ１
好ましくは５７°Ｃで２４〜４８時間、好ましくは約４
８時間インキュベートされる。インキュベーション期間
中に逆転写酵素の存在下でプライム化ＲＮＡテンプレー
ト上にヌクレオシドトリホスフェートからＤＮＡが形成
される。
この発明は、標＠ＤＮＡストランドが形成されたらこれ
を単離する手段を必要とする。好適な方法はＤＮＡの沈
澱である。この発明の好適な実施態様において形成され
たＤＮＡはボ！Ｊ ｒ Ａ ：ポリｄＴである。インキ
ュベートした溶液はｄＴＴＰを通過させるがＤＮＡを通
過させない微孔性フィルタを通過させることができる。
を単離する手段を必要とする。好適な方法はＤＮＡの沈
澱である。この発明の好適な実施態様において形成され
たＤＮＡはボ！Ｊ ｒ Ａ ：ポリｄＴである。インキ
ュベートした溶液はｄＴＴＰを通過させるがＤＮＡを通
過させない微孔性フィルタを通過させることができる。
そのような微孔性フィルタの一つにホワットマン（ＷＨ
ＡＴＭＡＮ ”） Ｇ Ｆ／Ａガラス・マイクロファイ
バーフィルタがある。
ＡＴＭＡＮ ”） Ｇ Ｆ／Ａガラス・マイクロファイ
バーフィルタがある。
次いで、このフィルタの保持する放射能を分析すること
ができる。
ができる。
′周知の手段でＤＮＡを分離すればその保持する放射能
は定量的に検出される。検出された放射能の量は次いで
患者のサンプルの替わＪ）Ｋ陽性および陰性コントロー
ルを使用したときの量と比較される。
は定量的に検出される。検出された放射能の量は次いで
患者のサンプルの替わＪ）Ｋ陽性および陰性コントロー
ルを使用したときの量と比較される。
実地上は、患者の血清サンプルをキット中の試薬と接触
させることによりＨＩ Ｖ逆転写酵素阻害抗体の存在を
テストする。患者の血清がＨＩＶ逆転写酵素阻害抗体を
含有していればボ１７ ｄ Ｔの形成が阻害されまたは
妨害される。患者の血清中のＨＩＶ逆転写酵素阻害抗体
の量は既知量の逆転写酵素抗体を含有する陽性血清コン
トロールと比較することにより定量することができる。
させることによりＨＩ Ｖ逆転写酵素阻害抗体の存在を
テストする。患者の血清がＨＩＶ逆転写酵素阻害抗体を
含有していればボ１７ ｄ Ｔの形成が阻害されまたは
妨害される。患者の血清中のＨＩＶ逆転写酵素阻害抗体
の量は既知量の逆転写酵素抗体を含有する陽性血清コン
トロールと比較することにより定量することができる。
患者の血清が逆転写酵素に対する阻害抗体を含有してい
ない場合は、ポリチミジル酸の形成は陰性血清コントロ
ールとほぼ同速度である。
ない場合は、ポリチミジル酸の形成は陰性血清コントロ
ールとほぼ同速度である。
当業者には明らかなように、ＨＩＶ逆転写酵素に対する
抗体は多数の周知の択一的な方法により検知することが
できる。例えば、抗原抗体複合体を形成しＥＬＩＳＡ検
定法、ウェスタンプロット法等を使用して検知すること
ができる。しかしながら、ＨＩ Ｖ逆転写酵素の阻害を
定量する技法だけがＨＩ Ｖ逆転写酵素阻害抗体を検出
するのに使用できる。
抗体は多数の周知の択一的な方法により検知することが
できる。例えば、抗原抗体複合体を形成しＥＬＩＳＡ検
定法、ウェスタンプロット法等を使用して検知すること
ができる。しかしながら、ＨＩ Ｖ逆転写酵素の阻害を
定量する技法だけがＨＩ Ｖ逆転写酵素阻害抗体を検出
するのに使用できる。
この発明は、ＨＩＶに陽性であるがＨＩＶ逆転写酵素阻
害抗体に陰性であることが知られている患者の治療方法
も提供する。
害抗体に陰性であることが知られている患者の治療方法
も提供する。
この治療方法はＨＩＶ逆転写酵素阻害抗体をＨＩＶに免
疫陽性であることが知られている患者に投与することか
ら成る。このような投与によりＩ（ＩＶによるそれ以上
の疾患に対抗するのに必要な抗体が提供される。この治
療法はエイズまたは前エイズの治療に有利に使用できる
。
疫陽性であることが知られている患者に投与することか
ら成る。このような投与によりＩ（ＩＶによるそれ以上
の疾患に対抗するのに必要な抗体が提供される。この治
療法はエイズまたは前エイズの治療に有利に使用できる
。
キットに使用するＨＩＶ逆転写酵素はＩｆ Ｉ Ｖ感染
細胞からＨＩＶ逆転写酵素を単離することにより提供す
ることができるし、遺伝子工学的技法により得ることも
できる。
細胞からＨＩＶ逆転写酵素を単離することにより提供す
ることができるし、遺伝子工学的技法により得ることも
できる。
ＨＩｖ逆転写酵素阻害抗体はこの抗体を産生ずることが
知られている個体の血τｇから単離することにより提供
できる。有効な抗体は単クローン抗体技法を使用しても
製造できる。
知られている個体の血τｇから単離することにより提供
できる。有効な抗体は単クローン抗体技法を使用しても
製造できる。
Claims (15)
- （１）１）ＨＩＶ逆転写酵素溶液、 ２）適当なプライム化ＲＮＡテンプレート、３）ＤＮＡ
合成のためのヌクレオシドトリホスフェート、 ４）既知量のＨＩＶ逆転写酵素阻害抗体を含有する陽性
血清コントロール、および ５）ＨＩＶ抗体を含有しない陰性血清コントロール より成るＨＩＶに免疫陽性であることが知られている患
者のための予後を展開するためのキット。 - （２）プライム化テンプレートがポリｒＡ：オリゴｄＴ
であることを特徴とする、特許請求の範囲第１項に記載
のキット。 - （３）ヌクレオシドトリホスフェートがトリチウム化ｄ
ＴＴＰであり、かつポリｒＡ：ポリｄＴが合成ＤＮＡの
形であることを特徴とする、特許請求の範囲第１項に記
載のキット。 - （４）ポリｒＡ：ポリｄＴを沈澱させる手段を包含する
ことを特徴とする、特許請求の範囲第３項に記載のキッ
ト。 - （５）ポリｒＡ：ポリｄＴを沈澱させる手段がｄＴＴＰ
の通過を許容するがポリｒＡ：ポリｄＴの通過を許容し
ない微孔性フィルタであることを特徴とする、特許請求
の範囲第４項に記載の方法。 - （６）トリチウム化ポリチミジル酸から放射される放射
能を定量的に検知する手段を包含することを特徴とする
、特許請求の範囲第１項に記載のキット。 - （７）当該患者の体液中のＨＩＶ逆転写酵素阻害抗体の
量を定量的に検知することから成る、ＨＩＶに免疫陽性
であることが知られている患者の予後を展開する方法。 - （８）患者の体液サンプルを、ＨＩＶ逆転写酵素、プラ
イム化ＲＮＡテンプレートおよび該プライム化ＲＮＡテ
ンプレートに相補的な標識ヌクレオチド前駆体の溶液と
接触させる工程と、得られた混合物を所定時間インキュ
ベートする工程と、形成された標識ポリｒＡ：ポリｄＴ
の量を検知する工程とから成ることを特徴とする、特許
請求の範囲第７項に記載の方法。 - （９）未反応の標識ヌクレオチド前駆体を形成されたポ
リマーから分離する工程を包含することを特徴とする、
特許請求の範囲第７項に記載の方法。 - （１０）体液中の標識ポリｒＡ：ポリｄＴの定量的検知
量を既知濃度のＨＩＶ逆転写酵素阻害抗体を有するスタ
ンダードと比較する工程を包含することを特徴とする、
特許請求の範囲第８項に記載の方法。 - （１１）体液中にＨＩＶ逆転写酵素阻害抗体が存在する
ことに基いて良いとされ、または体液中にＨＩＶ逆転写
酵素阻害抗体が存在しないことに基いて悪いとされる患
者の予知を行なう工程を包含することを特徴とする、特
許請求の範囲第１０項に記載の方法。 - （１２）ＨＩＶに免疫陽性の患者に製薬的に許容し得る
量のＨＩＶ逆転写酵素阻害抗体を投与することから成る
ＨＩＶに起因する疾患を治療する方法。 - （１３）患者がＨＩＶ感染に起因する疾病徴候を表わし
ていることを特徴とする、特許請求の範囲第１２項に記
載の方法。 - （１４）疾病徴候が前エイズ症状であることを特徴とす
る、特許請求の範囲第１３項に記載の方法。 - （１５）疾病徴候がエイズ症状であることを特徴とする
、特許請求の範囲第１３項に記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US017,450 | 1987-02-24 | ||
| US07/017,450 US4942122A (en) | 1987-02-24 | 1987-02-24 | Aids prognosis test detecting the presence of antibodies inhibiting HIV reverse transcriptase |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS63252253A true JPS63252253A (ja) | 1988-10-19 |
Family
ID=21782654
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP63040527A Pending JPS63252253A (ja) | 1987-02-24 | 1988-02-23 | エイズ診断テスト |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4942122A (ja) |
| JP (1) | JPS63252253A (ja) |
| CA (1) | CA1296623C (ja) |
| DE (1) | DE3805331A1 (ja) |
| FR (1) | FR2611274B1 (ja) |
| GB (1) | GB2201775B (ja) |
| IT (1) | IT1219844B (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH02231430A (ja) * | 1988-12-12 | 1990-09-13 | Res & Education Inst Inc Harbor Ucla Medical Center | エイズの治療方法及び治療器具 |
| WO1996037781A1 (fr) * | 1995-05-26 | 1996-11-28 | Asahi Kasei Kogyo Kabushiki Kaisha | Methode de dosage d'anticorps inhibant l'activite de la transcriptase inverse |
Families Citing this family (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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| KR970002255B1 (ko) * | 1990-06-11 | 1997-02-26 | 넥스스타 파아마슈티컬드, 인크. | 핵산 리간드 |
| DE4027616A1 (de) * | 1990-08-31 | 1992-03-05 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur bestimmung von polymerase-aktivitaet |
| JP3011987B2 (ja) * | 1990-10-11 | 2000-02-21 | 旭化成工業株式会社 | 固相化プライマーを用いる逆転写酵素の測定法 |
| DE4041114C2 (de) * | 1990-12-21 | 1994-02-17 | Michael Dr Med Gruenspan | Arzneimittel enthaltend eine IgG 2a-Antikörperfraktion aus Körperflüssigkeiten von HIV-infizierten Patienten |
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