JPS63227527A

JPS63227527A - 貧血予防薬

Info

Publication number: JPS63227527A
Application number: JP62051185A
Authority: JP
Inventors: 高久　史麿; 荒井　弘文; 日下　多
Original assignee: Kirin Amgen Inc
Current assignee: Amgen K A Inc
Priority date: 1987-03-05
Filing date: 1987-03-05
Publication date: 1988-09-21

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】皮−直−ｉ−乱本発明は、ヒトエリスロポエチン（以下ｒＥＰＯＪとい
う）を有効成分として含む貧血予防薬、さらに詳しくは
外科手術等に伴う急性出血に起因する貧血予防薬に関す
る。

従−】Ｌ」［」１ＥＰＯは、主に腎臓で産生、分泌される造血ホルモンの
一種で、赤血球の前駆細胞に作用してこれを赤血球に分
化させる活性を有する分子量約３６，０００　（ＳＯ３
−ＰＡＣｉＥ法）の糖タンパクである。

ＥＰＯの製造技術は既に確立されており、例えばＪｏｕ
ｒｎａｌ　ｏｆ　Ｂｉｏ−１ｏｇｉｃａｌ　ｃｈｅｍｉ
ｓｔｒｙ、　２５２（１５）、　５５５ｇ−５５６４（
１９７７）　　［人尿よりの分離・精製法］、ＰＣＴに
基づく国際公開公報ＷＯ８５／２６１０号［遺伝子組換
え技術による製造法］に記載されている方法等により、
容易にＥＰＯを製造することができる。

また、ＥＰＯの用途に関しては、各種貧血症（例えば、
腎不全によるもの、外傷によるもの等）の治療薬、臨床
診断薬、さらには研究用試薬等として有効であるとの報
告がある（例えば、ＰＣＴに基づ←国際公開公報１１１
０８５／２６１０号参照）。

しかし、ＥＰＯの、外科手術等に伴う急性出血に起因す
る貧血の予防薬としての有効性については、これまで不
明であった。

一方、外科手術に伴う急性出血に起因する貧血の治療に
おいては、従来輸血が最も速効性のある有効な治療法と
して採用されている。しかし輸血には以下に示すような
大きな欠点があるため、急性出血に起因する貧血のより
よい治療法（ないし予防法）の開発が望まれているのが
現状である。

＋１１必要十分量の血液を確保することが必ずしも容易
でない。

（２）種々の副作用がある。　主なものとしては、不適
合輸血による溶血性副作用、発熱性副作用、アレルギー
性副作用、並びにエイズ、ウィルス性肝炎、梅毒などの
疾病の伝播。

なお、輸血に関する上記の欠点（２）を解決すべく、急
性出血、例えば外科手術、前に患者より血液を採血・保
存し、術後にこれを患者に輸注する所謂自己輸血も行わ
れてはいるが、この場合には特に必要十分量の血液を確
保することが困難である。

木え列ｑ既！本発明者らは、ラットの急性出血モデルを用いて、ＥＰ
Ｏの貧血予防効果について種々検討した結果、ＥＰＯが
優れた貧血予防効果を有することを見い出し、本発明を
完成した。

すなわち、本発明はＥＰＯを有効成分として含むことを
特徴とする貧血予防薬である。

木光乳ｑ肱展本発明の貧血予防薬を急性出血、例えば外科手術の直前
の数日間又は直前・直後の数日間患者に投与することに
より、急性出血に起因する貧血をきわめて効果的に予防
ないし抑制する（出血量が本発明の貧血予防薬の予防効
果を超えるときは所要輸血液量を減少させる）ことがで
きる。

また、本発明の貧血予防薬を外科手術前に数日間患者に
投与すると増血が起こるので、本発明の貧血予防薬は自
己輸血において必要な血液量を確保するための増血剤と
して採血前に使用することもできる。

（後記実施例参照）本発明ぶりｕ１労先吸旦ＪツΣ 本発明で用いることのできるＥＰＯは、ヒトの赤血球の
前駆細胞に作用してこれを赤血球に分化させる活性を存
する物質である。　このようなＥＰＯは、次の公知の方
法により製造することができる。

ｉｌ＋遺伝遺伝子犬技術、すなわち、ＥＰＯをコードす
る遺伝子を人為的に細胞（例えば、ＣＨＯ細胞、大腸菌
、酵母等）内に導入しその形質を発現させることによっ
て製造する方法。

（２）ペプチド合成による方法。

（上記の１１１．１２１については、例えば、ＰＣＴに
基づく国際公開公報ＷＯ８５／２６１０号参照）１３１　Ｅ　Ｐ　Ｏ産生能を有する腫瘍細胞の培養上清
から分離・精製する方法（例えば、特開昭６０−２１５
６３２号公報参照）（４）ヒトの尿から分離・精製する
方法（例えば、Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｂｉｏｌｏｇｉ
ｃａｌＣｈｅ＋ｎ１ｓｔｒｙ　２５２（１５）　５５５
８−５５６４（１９７７）参照）１良１１鼾本発明の貧血予防薬は、ＥＰＯを有効成分として含むも
のであるが、必要に応じてＥＰＯに加えて薬学的に許容
される各種の補助成分（例えば、血清アルブミン、ゼラ
チン等の安定化剤、希釈剤、担体、ｐＨ１Ｆｌ整剤、無
痛化剤、防腐剤）並びに補助薬を含むことができる。こ
の補助薬としてはアドレナリン作動性物質、甲状腺ホル
モン、男性ホルモン、ＢＰＡ、鉄剤等ＥＰＯの効果を高
めることが報告されている物質を例示することができる
。

また、割型は、合目的的な任意のものでありうるが、前
記の方法により得られるＥＰＯを凍結乾燥したもの又は
水溶液としたもの等を例示することができる。

なお、本発明の貧血予防薬の好ましい組成の具体例は次
の通りである。ＥＰＯと安定化剤（ヒト血清アルブミン
、ゼラチン、又はこれらの混合物）を、リン酸緩衝生理
食塩水（ｐＨ＝７）に次の濃度範囲で溶解したもの。

Ｅ　Ｐ　Ｏ−１〜６０，０ＯＯＵ／　ｍ　１　　安定化
剤：　０．５〜１０ｍ　ｇ　７ｍ　ｊ尻汰二服１本発明の貧血予防薬は、外科手術等による急性出血が予
想される場合に、それに起因する貧血を予防するために
用いるものである。

具体的な用法・用量は、対象患者の健康状態、予想され
る出血量等を考慮して決定されるべきであるが２０〜１
，６００Ｕ／ｋ　ｇ／日、好ましくは５０〜８００Ｕ／
ｋｇ／日のＥＰＯを急性出血の直前の数日間又は直前・
直後の数日間非経口的（例えば静注、筋注、皮下性、腹
腔自注）に投与するのが普通である。

また、本発明の貧血予防薬を自己輸血を行う際の増血剤
として使用する場合には、自己輸血に使う血液の採血前
の数日間患者に投与する。

具体的な用法・用量は対象患者の健康状態、必要な自己
輸血量等を考慮して決定されるべきであるが、２０〜１
．６００ｔＪ／ｋ　ｇ／日、好ましくは５０〜８００Ｕ
／ｋｇ／日のＥＰＯを非経口的に投与するのが普通であ
る。

−４一旦ヱｐ１はし褌」（本発明においてＥＰＯ活性の測定は、ＰＣＴに基づく国
際公開公報Ｗ０８５／２６１０号に記載されている手順
に従い、ＲＩＡ法で測定した。

抗血清は、人尿中のＥＰＯを宮家らの方法（Ｊｏｕｒｎ
ａｌ　ｏｆ　ＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＣｈｅ＋５ｉｓｔｒ
ｙ、２５２（１５）５５５８−５５６４（１９７７））
に従い約７０，０ＯＯＵ／ｍｚまで精製し、これでウサ
ギを免疫することによって得た。　ＥＰＯ活性は、国際
標準ＥＰＯと比較することにより国際単位として求めた
。

以下本発明を実施例により具体的に説明するが、本発明
はこれらに限定されるものではない。

夾−絡一■ 以下の実施例においては、ＥＰＯとして、遺伝子組換え
技術によりＣＨＯ細胞で生産されたものを用いた。

の血　の′告緩衝液（２０ｍＭクエン酸ナトリウム／１００ｍＭ塩化
ナトリウム、ＰＨ−６，８〜７．０）を用いて、下記の
組成のＥＰＯ水溶液を無菌的に調整し、これをバイヤル
に分注・密封し、注射薬とした。

日の　　　の［試験Ａ］方法：手術時の出血モデル実験としてＳＤ系雄性ラット
（体重３００〜３５０ｇ）の総頚静脈より体重の１％の
脱血を行った。　脱血の８日前、５日前、３日前及び脱
血直後から、それぞれ毎日１回、５日間連日、２００Ｕ
／ｋｇのＥＰＯを静脈内投与し経口的に尾採血し、その
赤血球数（ＲＢＣ数）、ヘモグロビン値（Ｈｇｂ値）及
びヘマトクリット値（Ｈｃｔ値）等を測定した。

成績：脱血の８日前からの投与では、脱血直前のＲＢＣ
数、Ｈｇｂ値、Ｈｃｔ値はともに増加（Ｈｇｂ値は約１
２％）し、脱血後の貧血は対照群と比較し、軽度であっ
た（第１．２図参照）、　脱血の５日前又は３日前から
の投与では、脱血直前の増血は軽度であり、かつ脱血後
の貧血は対照群に比べ軽度であった（第３〜８図参照）
、　脱血直後からの投与では、脱血直後の貧血は抑制で
きなかったが、回復を早めた（第９．１０図参照）。

［試験Ｂ］方法：手術時の出血モデル実験としてＳＤ系雄性ラット
（体重３００〜３５０ｇ）の総頚静脈より体重の１％ま
たは２％の脱血を行った。　脱血の３日前より毎日１回
４日間連日、それぞれ１００．２００．４００．８００
、または１，６００　Ｕ／ｋ　ｇのＥＰＯを静脈内投与
し、経口的に試験Ａと同様の計測を行った。

成績：体重の１％脱血でＲＢＣ数、Ｉ１ｇｂ値、Ｈｃｔ
値は約２０％低下したが脱血の３日前からＥＰＯを投与
したものはいずれも脱血後の貧血は対照群に比べ軽度で
あった（表１．２、第１１．１２図参照）、　体−７＝重の２％脱血ではＲＢＣ数、Ｈｇｂ値、Ｈｃｔ値は約３
５％低下したが、脱血の３日前からＥＰＯを投与したも
のはいずれも脱血後の貧血た。

【図面の簡単な説明】

第１図及び第２図は、それぞれ、試験Ａにおいて、脱血
の８日前からＥＰＯを投与したときのＥＰＯの貧血抑制
効果（第１図はＲＢＣ数、第２図はＨｃｔ値）を示す図
である。　図中の記号の意味は次の通り。ｒ　・□・　」・・・・・対照群（ｎ−６）ｒｏ−−−
−ＯＪ　・・・・・試験群（ｎ−６）第３〜５図は、そ
れぞれ、試験Ａにおいて、脱血の５日前からＥＰＯを投
与したときのＥＰＯの貧血抑制効果（第３図はＲＢＣ数
、第４図はＨｃｔ値、第５図は１（ｇｂ値）を示す図で
ある。図中の記号の意味は次の通り。「　・□・　」・・・・・対照群（ｎ＝６）ｒｏ−−−
−ＯＪ　・・・・・試験群（ｎ−５）第６〜８図は、そ
れぞれ、試験Ａにおいて、脱血の３日前からＥＰＯを投
与したときのＥＰＯの貧血抑制効果（第６図はＲＢＣ数
、第７図はＨｃｔ値、第８図はＨｇｂ値）を示す図であ
る。　図中の記号の意味は次の通り。「　・□・　」・・・・・対照群（ｎ−６）「　○−−
−−ＯＪ　・・・・・試験群（ｎ−５）第９．１０図は
、それぞれ、試験Ａにおいて、脱血直後からＥＰＯを投
与したときの効果（第９図はＲＢＣ数、第１θ図はＨｃ
ｔ値）を示す図である０図中の記号の意味は次の通り。「　・□・　」・・・・・対照群（ｎ−６）「　ｏ−−
一−ＯＪ　・・・・・試験群（ｎ−６）第１１．１２図
は、それぞれ、試験Ｂにおいて、１％脱血した場合のＥ
ＰＯの貧血抑制効果（第１１図はＲＢＣ数、第１２図は
Ｈｃｔ（ｉ）を示す図である。　図中の記号の意味は次
の通り。「　・□・　」・・・・・対照群（ｎ−６）「　ｏ−ｍ
−−Ｏ」・・・・・試験群（ＥＰＯ：１００Ｕ／ｋｇ）
　（ｎ　−６）「　Δ−−−−−−−−Δ　Ｊ　””’
試験群（ＥＰＯ：２００１／ｋｇ）　（ｎ　＝　６　）
［ロー・−・−・−・口　Ｊ””’試験群（ＥＰＯ：４
００Ｌｌ／ｋｇ）　（ｎ　−６）「　−・・−・・−・
　Ｊ　”・・’試験群（ＥＰＯ：８００１／ｋｇ）　（
ｎ　＝　６　）第１３〜１５図は、それぞれ試験Ｂにお
いて、２％脱血した場合のの通り。「　・□・　」・・・・・対照群（ｎ＝６）ｒ　　Ｏ−
−−−ＯＪ　・・・・・試験群（ＥＰＯ：１００１／ｋ
ｇ）　　（ｎ　−６）「　Δ−−−−−−−−Δ　Ｊ　
””・試験群（ＥＰＯ：２０００／ｋｇ）　　（ｎ　−
９）「　ロー・−・−・−・口　Ｊ　””’試験群（Ｅ
ＰＯ：４００１／ｋｇ）　　（ｎ　−６）ｒ　　Ｖ−、
、−、−−−ｊ　””’試験群（ＥＰＯ：８００１１／
ｋｇ）　　（ｎ　−６）［◇−−−◇　Ｊ　””’試験
群（ＥＰＯ：１６００１／ｋｇ）　　（ｎ＝５）なお、
第１〜１５図において「ｉ」、［マ」、「＊」、「＊＊
」、ｒ＊＊＊Ｊの意味は次の通り。「↑」・・・・・ＥＰＯまたは溶媒を投与したことを示
す。「マ」・・・・・脱血したことを示す。

Claims

【特許請求の範囲】１、ヒトエリスロポエチンを有効成分として含む貧血予
防薬。２、ヒトエリスロポエチンが、ヒトエリスロポエチンを
コードする遺伝子を人為的に細胞内に導入しその形質を
発現させることにより生産されたものである特許請求の
範囲第１項記載の貧血予防薬。３、細胞が、ＣＨＯ（チャイニーズ・ハムスター・オバ
リー）細胞である特許請求の範囲第２項記載の貧血予防
薬。４、ヒトエリスロポエチンが、人尿由来のものである特
許請求の範囲第１項記載の貧血予防薬。５、安定化剤として、血清アルブミンおよび／またはゼ
ラチンを含む特許請求の範囲第１項から第４項のいずれ
かに記載の貧血予防薬。