JPS6322028A - マレツク病予防用ワクチン - Google Patents
マレツク病予防用ワクチンInfo
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
発明の背景
本明細書を通じて、様々な刊行物がカッコ内に与えられ
た著者名と発行日とにより引用されているが、完全な引
用は明細書末尾に表の形でアルファベット類に示す。こ
れらの刊行物の開示全体は引用によって本明細書に取り
込まれ、これにより本明細内に記載されかつクレームさ
れている本願発明の発明の日における、当業者に公知の
技術水準がより充分に記載されるところとなる。
た著者名と発行日とにより引用されているが、完全な引
用は明細書末尾に表の形でアルファベット類に示す。こ
れらの刊行物の開示全体は引用によって本明細書に取り
込まれ、これにより本明細内に記載されかつクレームさ
れている本願発明の発明の日における、当業者に公知の
技術水準がより充分に記載されるところとなる。
マレック病は、天然に発生するニワトリの悪性リンパ球
増殖病であって、伝染性の極めて強い、感染しやすいニ
ワトリに容易に蔓延する細胞と関連したヘルペスウィル
スが原因となって発病する。
増殖病であって、伝染性の極めて強い、感染しやすいニ
ワトリに容易に蔓延する細胞と関連したヘルペスウィル
スが原因となって発病する。
この病気は１９０７年に初めてＪｏｓｅｆ Ｈａｒｅｋ
によって多発性神経炎の一種として記述されたが、これ
は羅患した小鳥における炎症性神経障害の発症を反映し
ている。その研究者は神経、内臓器官、筋肉および皮膚
におけるリンパ腫の発症を確認し、この病気の腫瘍性を
確証した。
によって多発性神経炎の一種として記述されたが、これ
は羅患した小鳥における炎症性神経障害の発症を反映し
ている。その研究者は神経、内臓器官、筋肉および皮膚
におけるリンパ腫の発症を確認し、この病気の腫瘍性を
確証した。
多くの細胞タイプがマレック病ウィルス（ＭＤ■）に感
染するが、形質転換の標的はＴ１［１胞である（Ｐｏｗ
ｅｌｌ他、１９７６） 。該ウィルスは、ウィルス性お
よび腫瘍細胞抗原に対し宿主内に強度の体液性および細
胞性免疫応答を惹き起す。この病気の最終的な結末は肉
眼的リンパ腫（ｇｒｏｓｓ ｌｙｍｐｈｏｍａｓ）の発
症であるが、ファブリシラス（Ｆａｂｒｉｃｉｕｓ）の
牌臓、胸腺及び滑液包（ｂｕｒｓａ）の第一次的リンパ
性器官においてリンパ球の早期の激しい減少が児られる
。この減少はこれらの器官内におけるＢおよびＴ細胞の
溶菌感染により生ずるが、感染しやすいニワトリにおい
ては免疫応答の激しい免疫抑制を惹き起す（Ｃａｌｎｅ
ｋ、 １９８０）。マレック病に抵抗性のあるニワトリ
は最初の免疫抑制から回復できるが、その後−生の間Ｍ
ＤＶに持続的に感染した状態になる。この慢性ウィルス
血症は良好な血清中和（ＳＮ）抗体力価を刺激し、この
ＳＮ抗体を卵黄のうを通過せしめることにより瞬化後３
〜４週間ＭＤＶから子孫を保護することが可能となる（
Ｃｈｕｂｂ及びＣｈｕｒｃｈｉｌｌ、 １９６８）。
染するが、形質転換の標的はＴ１［１胞である（Ｐｏｗ
ｅｌｌ他、１９７６） 。該ウィルスは、ウィルス性お
よび腫瘍細胞抗原に対し宿主内に強度の体液性および細
胞性免疫応答を惹き起す。この病気の最終的な結末は肉
眼的リンパ腫（ｇｒｏｓｓ ｌｙｍｐｈｏｍａｓ）の発
症であるが、ファブリシラス（Ｆａｂｒｉｃｉｕｓ）の
牌臓、胸腺及び滑液包（ｂｕｒｓａ）の第一次的リンパ
性器官においてリンパ球の早期の激しい減少が児られる
。この減少はこれらの器官内におけるＢおよびＴ細胞の
溶菌感染により生ずるが、感染しやすいニワトリにおい
ては免疫応答の激しい免疫抑制を惹き起す（Ｃａｌｎｅ
ｋ、 １９８０）。マレック病に抵抗性のあるニワトリ
は最初の免疫抑制から回復できるが、その後−生の間Ｍ
ＤＶに持続的に感染した状態になる。この慢性ウィルス
血症は良好な血清中和（ＳＮ）抗体力価を刺激し、この
ＳＮ抗体を卵黄のうを通過せしめることにより瞬化後３
〜４週間ＭＤＶから子孫を保護することが可能となる（
Ｃｈｕｂｂ及びＣｈｕｒｃｈｉｌｌ、 １９６８）。
マレック病は過去において甚大な経済的損失の原因とな
っており、また１９７０年代初期における種々のワクチ
ンの開発の成功にも拘わらず引続き家禽産業のプラクと
なっている（Ｗｉｔｔｅｒ他、１９７０．０ｋａｚａｋ
ｉ他、１９７０１Ｒｉｓｐｅｎｓ他、１９７２） 、こ
れらのワクチンはいかなる生物種においてもウィルス性
であろうとその他のものであろうといかなる癌であれそ
の最初の有効にして実用的な抑制作用を示した。
っており、また１９７０年代初期における種々のワクチ
ンの開発の成功にも拘わらず引続き家禽産業のプラクと
なっている（Ｗｉｔｔｅｒ他、１９７０．０ｋａｚａｋ
ｉ他、１９７０１Ｒｉｓｐｅｎｓ他、１９７２） 、こ
れらのワクチンはいかなる生物種においてもウィルス性
であろうとその他のものであろうといかなる癌であれそ
の最初の有効にして実用的な抑制作用を示した。
ＭＤＶの非病原性弱毒化株およびシチメンチョウの非病
原性ヘルペスウィルス（ＨＶＴ）が腫瘍原性ＭＤＶから
の保護のために広く用いられてきた。ＨＶＴはワクチン
接種を受けたものにおける細胞媒介免疫応答の維持作用
を有することが示され（５Ｃｈｉｅｒｌｌａｎ他、１９
７６） 、これら全ての株は第一次的リンパ性器官の初
期細胞溶解性感染を回避することにより明らかに急性感
染から保護する（Ｃａｌｎｅｋ他、１９７９）。
原性ヘルペスウィルス（ＨＶＴ）が腫瘍原性ＭＤＶから
の保護のために広く用いられてきた。ＨＶＴはワクチン
接種を受けたものにおける細胞媒介免疫応答の維持作用
を有することが示され（５Ｃｈｉｅｒｌｌａｎ他、１９
７６） 、これら全ての株は第一次的リンパ性器官の初
期細胞溶解性感染を回避することにより明らかに急性感
染から保護する（Ｃａｌｎｅｋ他、１９７９）。
しかしながら、それらは感染を多少は減少するものの、
これらの分離株（＋５ｏｔａｔｅｓ）のいずれも腫瘍原
性ＭＤＶの重感染を防止しないので、該ウィルスのもっ
と有毒な株による表面仕上げが行なわれつつある。ワク
チンの顕著な進歩が現在の多価ワクチンの使用をもたら
した（ Ｉ＃１ｔｔｅｒ及びＬｅｅ。
これらの分離株（＋５ｏｔａｔｅｓ）のいずれも腫瘍原
性ＭＤＶの重感染を防止しないので、該ウィルスのもっ
と有毒な株による表面仕上げが行なわれつつある。ワク
チンの顕著な進歩が現在の多価ワクチンの使用をもたら
した（ Ｉ＃１ｔｔｅｒ及びＬｅｅ。
１９８４）。
マレック病ウィルス（ＭＤＶ）の多くの血清学的に関連
した形態が分離されたが、その最初のものは１９６２年
に５ｅＶＯｉａｎの分離したＪＭ株であった。
した形態が分離されたが、その最初のものは１９６２年
に５ｅＶＯｉａｎの分離したＪＭ株であった。
５ｅｖｏｉａｎはＭＤＶ感染血液を感染しやすいニワト
リに通過させたが、その結果ＪＭＶと命名された致死リ
ンパ芽球白血病を確立することとなった（Ｓｅｖｏｉａ
ｎ、 １９６７ ） ａ ＪＭＶ ｒエージェント」の
サイズを決定する最初の研究において、ＨＯｎｌ）は種
々の孔度のミリボア膜で密閉した拡散チェンバ環に死に
かけているニワトリから採ったＪＭＶ血液を充填しつい
で該リングを１日令のひよこ腹膜腔に移植した。０．２
２ミクロン以上のフィルタを持ったニワトリの死亡率は
濾過性作用物またはウィルスの関与を示したが、供試ひ
よこの腎臓からはＭＤＶは何ら回収されず、また、ＭＤ
Ｖ感染に特徴的な細胞変性効果（ＣＦ’Ｅ）もＪＭＶ血
液と許容細胞の共培養によっては立証されなかった。
リに通過させたが、その結果ＪＭＶと命名された致死リ
ンパ芽球白血病を確立することとなった（Ｓｅｖｏｉａ
ｎ、 １９６７ ） ａ ＪＭＶ ｒエージェント」の
サイズを決定する最初の研究において、ＨＯｎｌ）は種
々の孔度のミリボア膜で密閉した拡散チェンバ環に死に
かけているニワトリから採ったＪＭＶ血液を充填しつい
で該リングを１日令のひよこ腹膜腔に移植した。０．２
２ミクロン以上のフィルタを持ったニワトリの死亡率は
濾過性作用物またはウィルスの関与を示したが、供試ひ
よこの腎臓からはＭＤＶは何ら回収されず、また、ＭＤ
Ｖ感染に特徴的な細胞変性効果（ＣＦ’Ｅ）もＪＭＶ血
液と許容細胞の共培養によっては立証されなかった。
その結果生じた、ＪＭＶ腫瘍は宿主リンパ球の新規なウ
ィルス性形質転換によって生ずるのか又は宿主内に移植
されたＪＭＶ細胞の生長によって生ずるのかということ
に関する論争はＪＭＶが腫瘍移植片であることが証明さ
れた時に解決された（ ５ｔｅｐｈｅｎｓ他、１９７Ｂ
） 、 Ｊ Ｍ Ｖリンパ芽球細胞株はそれ以来イン・
ビトロ浮遊培養物として確立された（ Ｈａｈｎ他、１
９１７、Ｈｕｎｃｈ及び５ｅｖｏｔａｎ、 １９７７、
Ｎａｚｅｒｉａｎ他、１９７７）。イずれも雌性核型を
表現シ、マレック病と関連した腫瘍特異抗原（ＭＡＴＳ
Ａ）を保持し、Ｔ細胞表面マーカーを表現する。Ｈａｈ
ｎ他（１９７７） （７）確立した細胞株（ＪＨ−ＶＬ
Ｃ） Ｇ、ｔ、他の二者に対し、最初それがＭＤＶ抗原
を保持しているように思われた点でユニークである。こ
の細胞株を接種したニワトリの腎細胞内において蛍光お
よび抗体分析によりウィルスを確認することができ、Ｍ
ＤＶに対する抗体をＪＭ−ＶＬＣを接種してあったニワ
トリ内で引き出すことができた。逆に、Ｈｕｎｃｈ及び
５ｅｖｏｉａｎの確立したＪＭＶ−１細胞株（１９７７
）及びＨＤＣＣ−ＲＰＩ （旧称Ｎａ７ｅｒｉａｎ他の
ＲＰＬ−１株（１９７７） ）は血清学的に検出可能な
又は誘尋可能なウィルスを有さないことが証明された。
ィルス性形質転換によって生ずるのか又は宿主内に移植
されたＪＭＶ細胞の生長によって生ずるのかということ
に関する論争はＪＭＶが腫瘍移植片であることが証明さ
れた時に解決された（ ５ｔｅｐｈｅｎｓ他、１９７Ｂ
） 、 Ｊ Ｍ Ｖリンパ芽球細胞株はそれ以来イン・
ビトロ浮遊培養物として確立された（ Ｈａｈｎ他、１
９１７、Ｈｕｎｃｈ及び５ｅｖｏｔａｎ、 １９７７、
Ｎａｚｅｒｉａｎ他、１９７７）。イずれも雌性核型を
表現シ、マレック病と関連した腫瘍特異抗原（ＭＡＴＳ
Ａ）を保持し、Ｔ細胞表面マーカーを表現する。Ｈａｈ
ｎ他（１９７７） （７）確立した細胞株（ＪＨ−ＶＬ
Ｃ） Ｇ、ｔ、他の二者に対し、最初それがＭＤＶ抗原
を保持しているように思われた点でユニークである。こ
の細胞株を接種したニワトリの腎細胞内において蛍光お
よび抗体分析によりウィルスを確認することができ、Ｍ
ＤＶに対する抗体をＪＭ−ＶＬＣを接種してあったニワ
トリ内で引き出すことができた。逆に、Ｈｕｎｃｈ及び
５ｅｖｏｉａｎの確立したＪＭＶ−１細胞株（１９７７
）及びＨＤＣＣ−ＲＰＩ （旧称Ｎａ７ｅｒｉａｎ他の
ＲＰＬ−１株（１９７７） ）は血清学的に検出可能な
又は誘尋可能なウィルスを有さないことが証明された。
いくつかのＭＤＶゲノムのコピーが不完全ではあるが各
細胞株に存在していることが知られており、これによっ
て該ウィルスの発現が妨げられる。
細胞株に存在していることが知られており、これによっ
て該ウィルスの発現が妨げられる。
現在いくつかのタイプのマレック病ワクチンが実用に供
されている。これらには、弱毒化腫瘍原性Ｍ Ｄ Ｖ
（Ｃｈｕｒｃｈｉｌｌ他、 １９６９、Ｒ＋ ５ｐｅｎ
ｓ他。
されている。これらには、弱毒化腫瘍原性Ｍ Ｄ Ｖ
（Ｃｈｕｒｃｈｉｌｌ他、 １９６９、Ｒ＋ ５ｐｅｎ
ｓ他。
１９７２） 、生来の非病原性ＨＶＴ （にａ＊ａｍｕ
ｒａ他。
ｒａ他。
１９６９、Ｗｉｔｔｅｒ他、 １９７０．０ｚａｋｉ、
１９７０） 、生来の非腫瘍原性または非病原性Ｍ Ｄ
Ｔ （Ｒｉｐｅｎｓ他、 １９７２）または新規の多
価ワクチンにおけるこれらの組合せ（ｗｔｔｔｅｒ及び
Ｌｅｅ、 １９８４）が含まれる。シチメンチョウのヘ
ルペスウィルス（ＨＶＴ）は、マレック病に対して最も
広く使用されいる商業用ワクチンであるが、マレック病
のヘルペスウィルスに極めて類似した抗原としての性質
を有する。
１９７０） 、生来の非腫瘍原性または非病原性Ｍ Ｄ
Ｔ （Ｒｉｐｅｎｓ他、 １９７２）または新規の多
価ワクチンにおけるこれらの組合せ（ｗｔｔｔｅｒ及び
Ｌｅｅ、 １９８４）が含まれる。シチメンチョウのヘ
ルペスウィルス（ＨＶＴ）は、マレック病に対して最も
広く使用されいる商業用ワクチンであるが、マレック病
のヘルペスウィルスに極めて類似した抗原としての性質
を有する。
ウィルスまたは腫瘍の抗原を含有する綱胞■または全＄
１［１胞試料で構成された多くの実験的ワクチンはマレ
ーク病における防御機構の理解に大いに役立ってきた。
１［１胞試料で構成された多くの実験的ワクチンはマレ
ーク病における防御機構の理解に大いに役立ってきた。
Ｌｅｓｎｉｋ ａｎｄ Ｒｏｓｓ、 １９７５． Ｋａ
ａｄｅｎｅｔ ａｔ、、 １９７４． Ｐｏｗｅｌｌ、
１９７５゜最も著名なものは、ＭＤＶのＪＭ株を感受
性のニワトリを通して急速継代することによって発育さ
ゼた移植可能な致死性のリンパ芽球白血病ＪＭＶである
（ ５ｅｖｏｉａｎ、 １９６７）。コ（１）急速な継
代の結果インキュベーション時間が短縮され、致死性が
増大した。それ以来ＪＭＶ株はＭＤＶに対するワクチン
研究において誘発株（ｃｈａｌｌｅｎｇｅ ５ｔｒａｉ
ｎ）として有効に使用されて来ており［Ｈａｎｇ ａｎ
ｃｌＳｅｖｏｉａｎ、 １９７５． Ｈｕｎｃｈ ａｎ
ｄ ５ｅｖｏｉａｎ、 １９８０１．１ｎＶｉｔｒＯの
セルラインとして受継がれて来ている［Ｎａｚｅｒｉａ
ｎ ｅｔ ａｌ、、 １９７７、 ｆｌａｈｎ ｅｔ
ａｔ、、 ｔ９７７゜Ｈｕｎｃｈ ａｎｄ ５ｅｖｏｉ
ａｎ、 １９７７］。
ａｄｅｎｅｔ ａｔ、、 １９７４． Ｐｏｗｅｌｌ、
１９７５゜最も著名なものは、ＭＤＶのＪＭ株を感受
性のニワトリを通して急速継代することによって発育さ
ゼた移植可能な致死性のリンパ芽球白血病ＪＭＶである
（ ５ｅｖｏｉａｎ、 １９６７）。コ（１）急速な継
代の結果インキュベーション時間が短縮され、致死性が
増大した。それ以来ＪＭＶ株はＭＤＶに対するワクチン
研究において誘発株（ｃｈａｌｌｅｎｇｅ ５ｔｒａｉ
ｎ）として有効に使用されて来ており［Ｈａｎｇ ａｎ
ｃｌＳｅｖｏｉａｎ、 １９７５． Ｈｕｎｃｈ ａｎ
ｄ ５ｅｖｏｉａｎ、 １９８０１．１ｎＶｉｔｒＯの
セルラインとして受継がれて来ている［Ｎａｚｅｒｉａ
ｎ ｅｔ ａｌ、、 １９７７、 ｆｌａｈｎ ｅｔ
ａｔ、、 ｔ９７７゜Ｈｕｎｃｈ ａｎｄ ５ｅｖｏｉ
ａｎ、 １９７７］。
１９７４年、５ｈｉｅｈと５ｅｖｏｉａｎはＪＭＶが抗
原的にみて同じではないとしても、ＨＶＴよりはＪＭと
関連が深いことを示した。彼等が発見したのは、ＪＭＶ
で免疫したヒヨコが産生ずる抗体のレベルは、ＪＭかＨ
ＶＴのいずれかに接触させられたくさらされた）ヒヨコ
よりかなり高いということであった。これらの抗体レベ
ルは４〜５週間後には低下するのが認められた。１９７
４年Ｈｏｎｇと５ｅｖｏｉａｎは、ＪＭＶによる免疫に
伴う母性の抗体産生を検討した。彼等は、抗体を中和す
る血清が、ワクチンを接種したＩ親とその子孫のどちら
でもＪＭＶによる免疫に応答して産生されることを見出
だした。ざらに、免疫した雌親の子孫では、ＪＭかＨＶ
Ｔのいずれかで免疫した雌親の子孫よりＪＭウィルス感
染と腫瘍の成長とに対する防御の程度がかなり高かった
。ＨＶＴで免疫した雌親かまたはまったく免疫していな
い雌親の子孫の’ＩＭＩＱからはウィルスが１００％回
収されるのに対し、天然状態で３週間ＪＭに接触し、Ｊ
ＭＶで免疫した雌親の子孫の培養した腎臓からはウィル
スは１２％しか回収されなかった。Ｌａｎｄｇｒａｆと
ＶｉＣｌ １ｔｚ（１９７８）は、弱毒化したＪＭＶ−
Ａを用いてＪＭＶに対する完全な防御が得られるがＭＤ
Ｖに対しては防御はたった４０〜６０％であることを示
すことができた。
原的にみて同じではないとしても、ＨＶＴよりはＪＭと
関連が深いことを示した。彼等が発見したのは、ＪＭＶ
で免疫したヒヨコが産生ずる抗体のレベルは、ＪＭかＨ
ＶＴのいずれかに接触させられたくさらされた）ヒヨコ
よりかなり高いということであった。これらの抗体レベ
ルは４〜５週間後には低下するのが認められた。１９７
４年Ｈｏｎｇと５ｅｖｏｉａｎは、ＪＭＶによる免疫に
伴う母性の抗体産生を検討した。彼等は、抗体を中和す
る血清が、ワクチンを接種したＩ親とその子孫のどちら
でもＪＭＶによる免疫に応答して産生されることを見出
だした。ざらに、免疫した雌親の子孫では、ＪＭかＨＶ
Ｔのいずれかで免疫した雌親の子孫よりＪＭウィルス感
染と腫瘍の成長とに対する防御の程度がかなり高かった
。ＨＶＴで免疫した雌親かまたはまったく免疫していな
い雌親の子孫の’ＩＭＩＱからはウィルスが１００％回
収されるのに対し、天然状態で３週間ＪＭに接触し、Ｊ
ＭＶで免疫した雌親の子孫の培養した腎臓からはウィル
スは１２％しか回収されなかった。Ｌａｎｄｇｒａｆと
ＶｉＣｌ １ｔｚ（１９７８）は、弱毒化したＪＭＶ−
Ａを用いてＪＭＶに対する完全な防御が得られるがＭＤ
Ｖに対しては防御はたった４０〜６０％であることを示
すことができた。
高度免役した雌親の子孫では防御は認められなかった。
１９７７年、Ｈｕｎｃｈと５ｅＶＯｉａｎはＪＭＶに感
染したヒヨコのｍｕからｉｎ ｖｉｔｒｏセルラインを
樹立することができた。これはＪＭＶ−１と名付けられ
た。
染したヒヨコのｍｕからｉｎ ｖｉｔｒｏセルラインを
樹立することができた。これはＪＭＶ−１と名付けられ
た。
ＪＮＶ−１１［１胞をｉｎ Ｖ＋ｔｒＯｔ’継代ｔ６．
！ｌ＜（７）Ｉｌｌｌｌ性が変化し、その最も劇的なも
のは致死性の低下であった。早い時期に滴定すると５０
％致死量（Ｌ Ｄ ｓｏ）の値は細胞１００個であるが
継代を重ねた後にはしＤ５ｏは２×１０ 個の細胞に
なった。致死性の低下は抗原性の衰退を伴っていなかっ
た。
！ｌ＜（７）Ｉｌｌｌｌ性が変化し、その最も劇的なも
のは致死性の低下であった。早い時期に滴定すると５０
％致死量（Ｌ Ｄ ｓｏ）の値は細胞１００個であるが
継代を重ねた後にはしＤ５ｏは２×１０ 個の細胞に
なった。致死性の低下は抗原性の衰退を伴っていなかっ
た。
後期継代し弱毒化したＪＭＶ−１１胞をワクチン接種し
たヒヨコは、その後毒性のより強い野生株のＪＭＶで誘
発しても生残った（Ｈｕｎｃｈ ｅｔ ａｌ、。
たヒヨコは、その後毒性のより強い野生株のＪＭＶで誘
発しても生残った（Ｈｕｎｃｈ ｅｔ ａｌ、。
１９７８）。マレーク病に対して抵抗性かまたは感受性
であり、ＭＤＶで誘発する前にＪＭＶ−１で免疫したト
リの牌細胞は、免疫してないコントロールと比べて、誘
発腫瘍細胞に対する細胞毒性が高いことがわかった。免
疫してないがＭＤＶに感染しているトリは、免疫抑制を
意味する負の細胞毒性応答を示した。ＪＭＶ−１のゲル
タールアルデヒド固定した抽出物または膜抽出物では野
生型のＪＭＶの誘発に対する防御は得られなかった。
であり、ＭＤＶで誘発する前にＪＭＶ−１で免疫したト
リの牌細胞は、免疫してないコントロールと比べて、誘
発腫瘍細胞に対する細胞毒性が高いことがわかった。免
疫してないがＭＤＶに感染しているトリは、免疫抑制を
意味する負の細胞毒性応答を示した。ＪＭＶ−１のゲル
タールアルデヒド固定した抽出物または膜抽出物では野
生型のＪＭＶの誘発に対する防御は得られなかった。
Ｕ Ｓ Ｐ ３，９８１，７７１ （Ｓｅｖｏｉａｎ）
には、マレーク病ウィルスに対して家禽を免疫するため
のワクチンとそのワクチンの製法が開示されている。こ
のワクチンは、生きているニワトリから選択した組織を
用いて急速に順次継代することによってマレーク病のＪ
Ｍ株を毒性が高くなるまで変容させた後トリの胚中で弱
毒化して得られる。
には、マレーク病ウィルスに対して家禽を免疫するため
のワクチンとそのワクチンの製法が開示されている。こ
のワクチンは、生きているニワトリから選択した組織を
用いて急速に順次継代することによってマレーク病のＪ
Ｍ株を毒性が高くなるまで変容させた後トリの胚中で弱
毒化して得られる。
細胞中にＭＤＶのいくつかのゲノムコピーの存在が示さ
れてはいるが、このラインはウィルスを産生ずることは
なく、これらの細胞中でつ≧ルス性タンパク質が血清学
的に検出されることはない。
れてはいるが、このラインはウィルスを産生ずることは
なく、これらの細胞中でつ≧ルス性タンパク質が血清学
的に検出されることはない。
ＪＭＶ−１を接種したヒヨコの腎またはＪ Ｍ Ｖ −
１をヒヨコ胎児繊維芽細胞（ｅｍｂｒｙｏ ｆｉｂｒｏ
ｂｌａｓｔｓ。
１をヒヨコ胎児繊維芽細胞（ｅｍｂｒｙｏ ｆｉｂｒｏ
ｂｌａｓｔｓ。
ＣＥＦ）と共に培養した培養物からはウィルスは回収で
きない。また、これらの細胞を５−ブロモ−２°−デオ
キシウリジン（ＢＲＯＵ）で処理することによってウィ
ルスを誘発することもできない。それにもかかわらず、
１９８０年Ｈｕｎｃｈと５ｅｖｏｉａｎは、１週に至ら
ない日齢のヒヨコを弱毒化したＪＭＶ−１細胞で免疫す
ると、免疫していないＭＤＶで誘発されたヒヨコと比較
して、腫瘍の発育がかなり抑えられると共にウィルスが
腎から回収できることを報告した。免疫していないＭＤ
Ｖで誘発されたヒヨコと比較してＪＭＶ−１で免疫しＭ
ＤＶで誘発したヒヨコでは沈澱する抗体のレベルはかな
り高くなっていた。
きない。また、これらの細胞を５−ブロモ−２°−デオ
キシウリジン（ＢＲＯＵ）で処理することによってウィ
ルスを誘発することもできない。それにもかかわらず、
１９８０年Ｈｕｎｃｈと５ｅｖｏｉａｎは、１週に至ら
ない日齢のヒヨコを弱毒化したＪＭＶ−１細胞で免疫す
ると、免疫していないＭＤＶで誘発されたヒヨコと比較
して、腫瘍の発育がかなり抑えられると共にウィルスが
腎から回収できることを報告した。免疫していないＭＤ
Ｖで誘発されたヒヨコと比較してＪＭＶ−１で免疫しＭ
ＤＶで誘発したヒヨコでは沈澱する抗体のレベルはかな
り高くなっていた。
ＮａＺｅｒｉａｎとＷｉｔｔｅｒ （１９８４）は、非
産生性のＨＤＣＣ−ＲＰ１ラインを用いた最近の免疫試
験においてＭＤ■感染と腫瘍の増殖に対する同様な防御
を示すことができなかった。Ｖｏｎ Ｂｕｌｏ＊ （
１９７９）は以前、ＲＰＩラインの培養上清がＪＭＶの
誘発に対して防御することができないことを示している
。
産生性のＨＤＣＣ−ＲＰ１ラインを用いた最近の免疫試
験においてＭＤ■感染と腫瘍の増殖に対する同様な防御
を示すことができなかった。Ｖｏｎ Ｂｕｌｏ＊ （
１９７９）は以前、ＲＰＩラインの培養上清がＪＭＶの
誘発に対して防御することができないことを示している
。
本発明は、非産生性のＪＭＶ−１セルラインの細胞を含
有しない培養上清を、致死性のＪＭＶおよびマレーク病
ウィルス（ＭＤＶ）の誘発に対する免疫のために使用す
ることに関する。ＪＭＶ−１の細胞不含上清は、致死性
のＪＭＶの誘発に対して、ならびに生きているＪＭＶ−
１細胞の誘発に対して（むしろこの場合の方が良好であ
る）、ヒヨコを保護することができた。
有しない培養上清を、致死性のＪＭＶおよびマレーク病
ウィルス（ＭＤＶ）の誘発に対する免疫のために使用す
ることに関する。ＪＭＶ−１の細胞不含上清は、致死性
のＪＭＶの誘発に対して、ならびに生きているＪＭＶ−
１細胞の誘発に対して（むしろこの場合の方が良好であ
る）、ヒヨコを保護することができた。
広く利用されているマレーク病ワクチンは、生きている
タイプ（１ｉｖｅ ｔｙＤｅ） ２または３のマレーク
病のヘルペスウィルスから調製したものである（これら
は細胞性ワクチンとして最も有効である）。これらのワ
クチンは液体窒素中で保存しなければならない。
タイプ（１ｉｖｅ ｔｙＤｅ） ２または３のマレーク
病のヘルペスウィルスから調製したものである（これら
は細胞性ワクチンとして最も有効である）。これらのワ
クチンは液体窒素中で保存しなければならない。
本発明のワクチンはＪＭＶ−１腫瘍セルラインの増殖に
用いて費消された借地から調製される。
用いて費消された借地から調製される。
この費消された増殖信地または上滑は生存力のあるウィ
ルスまたはＪＭＶ−１細胞を含有しない。
ルスまたはＪＭＶ−１細胞を含有しない。
この上清は生存力（感染力）がないのでその貯蔵、輸送
および取扱いは、細胞を含有する凍結ワクチンまたは細
胞を含有しない凍結乾燥ワクチンの場合に必要とされる
よりもずっと容易となるであろう。
および取扱いは、細胞を含有する凍結ワクチンまたは細
胞を含有しない凍結乾燥ワクチンの場合に必要とされる
よりもずっと容易となるであろう。
発明の要旨
本発明は、ヘルペスウィルスまたはその血清学的に関連
した菌株による感染から動物を防Ｉ！ｌ（保護）する弱
毒化リンパ芽球細胞系の全生存細胞（ｗｈｏｌｅ １ｉ
ｖｅ ｃｅｌｌｓ）の培養物の無細胞上清に関する。ヘ
ルペスウィルスは鳥類のヘルペスウィルス、特にマレッ
ク病ウィルスまたはマレック病ウィルスの血清学的に関
連した菌株、好ましくはリンパ芽球細胞系ＪＨＶ−１（
ＡＴＣＣＮｏ、 ＣＲＬ９０９３） テある。
した菌株による感染から動物を防Ｉ！ｌ（保護）する弱
毒化リンパ芽球細胞系の全生存細胞（ｗｈｏｌｅ １ｉ
ｖｅ ｃｅｌｌｓ）の培養物の無細胞上清に関する。ヘ
ルペスウィルスは鳥類のヘルペスウィルス、特にマレッ
ク病ウィルスまたはマレック病ウィルスの血清学的に関
連した菌株、好ましくはリンパ芽球細胞系ＪＨＶ−１（
ＡＴＣＣＮｏ、 ＣＲＬ９０９３） テある。
本発明は、有効免疫量の本発明の無細胞上清と適当なキ
ャリアとを含む、動物にヘルペスウィルスまたはその血
清学的に関連した菌株による感染に対する能動免疫を付
与するためのワクチンにも関する。動物は好ましくは鳥
類、より好ましくはニワトリである。
ャリアとを含む、動物にヘルペスウィルスまたはその血
清学的に関連した菌株による感染に対する能動免疫を付
与するためのワクチンにも関する。動物は好ましくは鳥
類、より好ましくはニワトリである。
本発明の１具体例力ニワトリにマレック病ウィルスまた
はその血清学的に関連した菌株による感染に対する能動
免疫を付与するためのワクチンは、有効免疫量の弱毒化
リンパ芽球細胞系ＪＨＶ−１（ΔＴＣＣＮｏ、 ＣＲＬ
９０９３）の無細胞上清と適当なキャリアとを含む。
はその血清学的に関連した菌株による感染に対する能動
免疫を付与するためのワクチンは、有効免疫量の弱毒化
リンパ芽球細胞系ＪＨＶ−１（ΔＴＣＣＮｏ、 ＣＲＬ
９０９３）の無細胞上清と適当なキャリアとを含む。
本発明は、
ａ）ヘルペスウィルスまたはその血清学的に関連した菌
株に感染した動物由来のリンパ芽球細胞系の全生存細胞
の培養物を遠心分離して、上清と細胞とを分離し、 ｂ）■程ａ）の生成物を処理して細胞を除去し、Ｃ）上
清を回収することからなる上清の製造方法にも関する。
株に感染した動物由来のリンパ芽球細胞系の全生存細胞
の培養物を遠心分離して、上清と細胞とを分離し、 ｂ）■程ａ）の生成物を処理して細胞を除去し、Ｃ）上
清を回収することからなる上清の製造方法にも関する。
本発明は、動物に適当量の本発明のワクチンを投与する
ことからなる、動物をヘルペスウィルスまたはその血清
学的に関連した菌株による感染から防御する方法にも関
する。
ことからなる、動物をヘルペスウィルスまたはその血清
学的に関連した菌株による感染から防御する方法にも関
する。
本発明は、ニワトリに有効免疫量の本発明の上清を投与
することからなる、ニワトリにマレック病ウィルスまた
はその血清学的に関連した菌株による感染に対する能動
免疫を付与する方法にも関する。
することからなる、ニワトリにマレック病ウィルスまた
はその血清学的に関連した菌株による感染に対する能動
免疫を付与する方法にも関する。
発明の詳細な説明
弱毒化リンパ芽球細胞系の全生存細胞の培養物の無細胞
上清は、ヘルペスウィルスまたはその血清学的に関連す
る菌株による感染から動物を保護する。ヘルペスウィル
スは、鳥類ヘルペスウィルス、特にマレック病ウィルス
又は七面鳥のヘルペスウィルスであり得る。１つの具体
例においては、前記菌株は血清学的にマレック病ウィル
スに関連する。好ましい菌株は、Ｊ Ｍ Ｖ −１（Ａ
ＴＣＣＮｏ、 ＣＩ’１Ｌ９０９３ ）の弱毒化リンパ
芽球細胞系である。動物は鳥類であることが好ましく、
ニワトリ又は七面鳥であることがこのましい。しかし、
本発明はヘルペスウィルス又はその血清学的に関連する
菌株による感染から他の動物を保護する無細胞上清をも
提供する。
上清は、ヘルペスウィルスまたはその血清学的に関連す
る菌株による感染から動物を保護する。ヘルペスウィル
スは、鳥類ヘルペスウィルス、特にマレック病ウィルス
又は七面鳥のヘルペスウィルスであり得る。１つの具体
例においては、前記菌株は血清学的にマレック病ウィル
スに関連する。好ましい菌株は、Ｊ Ｍ Ｖ −１（Ａ
ＴＣＣＮｏ、 ＣＩ’１Ｌ９０９３ ）の弱毒化リンパ
芽球細胞系である。動物は鳥類であることが好ましく、
ニワトリ又は七面鳥であることがこのましい。しかし、
本発明はヘルペスウィルス又はその血清学的に関連する
菌株による感染から他の動物を保護する無細胞上清をも
提供する。
菌株Ｊ Ｍ Ｖ −１（ＡＴＣＣＮｏ、 ＣＲＬ ９０
９３ ）は、米国メリーランド州ロツクヴイルに所在す
るアメリカンタイプカルチャーコレクションに寄託され
ている。この寄託は、特許手続トの微生物の寄託の国際
的承認に関するブタベスト条約に基づきなされている。
９３ ）は、米国メリーランド州ロツクヴイルに所在す
るアメリカンタイプカルチャーコレクションに寄託され
ている。この寄託は、特許手続トの微生物の寄託の国際
的承認に関するブタベスト条約に基づきなされている。
ヘルペスウィルス又はその血清学的に関連する菌株の感
染に対し動物に能動免疫を与えるワクチンは、−投与予
あたり、本発明の有効量の無細胞上清と適当なキャリア
を含む。ヘルペスウイルスは任意の鳥類ヘルペスウィル
スであってよい。好ましくは、ヘルペスウィルスは、マ
レック病ウィルス、七面鳥ヘルペスウィルス又はマレッ
ク病ウィルス若しくは七面鳥ヘルペスウィルスに血清学
的に関連する菌株である。本発明に於いて好ましい菌株
は、ＪＭＶ−１（ＡＴＣＣＮｏ、 ＣＲＬ ９０９３
）の弱毒化リンパ芽球細胞系である。本発明の一具体例
に於いては、動物は、鳥類であり、ニワトリ又は七面鳥
である。しかし、本発明は、ヘルペスウィルス感染から
他の動物をも保護するワクチンを提供することをも意図
するものである。すなわち、マレック病ウィルス又はそ
の血清学的に関連する菌株の感染に対しニワトリに能動
免疫を与えるワクチンは一投与量あたり、Ｊ Ｍ Ｖ
−１（ＡＴＣＣＮｏ。
染に対し動物に能動免疫を与えるワクチンは、−投与予
あたり、本発明の有効量の無細胞上清と適当なキャリア
を含む。ヘルペスウイルスは任意の鳥類ヘルペスウィル
スであってよい。好ましくは、ヘルペスウィルスは、マ
レック病ウィルス、七面鳥ヘルペスウィルス又はマレッ
ク病ウィルス若しくは七面鳥ヘルペスウィルスに血清学
的に関連する菌株である。本発明に於いて好ましい菌株
は、ＪＭＶ−１（ＡＴＣＣＮｏ、 ＣＲＬ ９０９３
）の弱毒化リンパ芽球細胞系である。本発明の一具体例
に於いては、動物は、鳥類であり、ニワトリ又は七面鳥
である。しかし、本発明は、ヘルペスウィルス感染から
他の動物をも保護するワクチンを提供することをも意図
するものである。すなわち、マレック病ウィルス又はそ
の血清学的に関連する菌株の感染に対しニワトリに能動
免疫を与えるワクチンは一投与量あたり、Ｊ Ｍ Ｖ
−１（ＡＴＣＣＮｏ。
ＣＲＬ ９０９３）の弱毒化リンパ芽球細胞系の無細胞
上清の有効量と適当なキャリアを含む。
上清の有効量と適当なキャリアを含む。
更に、本発明は上記上清の製造方法を提供するが、この
製造方法は、 ａ、ヘルペスウィルスまたはその血清学的に関連する菌
株で感染した動物に由来するリンパ芽球細胞系の全生存
細胞の培養を遠心分離して、上清からＳ胞を分離し、 ｂｏ例えば、工程ａの生成物をＰ遇するなどの処理を施
して細胞を除去し、 Ｃ０上清を回収する ことからなる。
製造方法は、 ａ、ヘルペスウィルスまたはその血清学的に関連する菌
株で感染した動物に由来するリンパ芽球細胞系の全生存
細胞の培養を遠心分離して、上清からＳ胞を分離し、 ｂｏ例えば、工程ａの生成物をＰ遇するなどの処理を施
して細胞を除去し、 Ｃ０上清を回収する ことからなる。
マレック病ウィルスまたはその血清学的に関連する菌株
の感染に対しニワトリに能動免疫を与える方法は、本発
明上清の有効な免疫量をニワトリに投与することからな
る。有効な免疫最は、典型的には、上清の約０． ：ｌ
’ｄ以上である。
の感染に対しニワトリに能動免疫を与える方法は、本発
明上清の有効な免疫量をニワトリに投与することからな
る。有効な免疫最は、典型的には、上清の約０． ：ｌ
’ｄ以上である。
ヘルペスウィルスまたはその血清学的に関連する菌株、
例えばマレック病ウィルスによる感染から動物例えばニ
ワトリを保護する方法は、適当な投与ａの本発明ワクチ
ンを該動物に投与することからなる。
例えばマレック病ウィルスによる感染から動物例えばニ
ワトリを保護する方法は、適当な投与ａの本発明ワクチ
ンを該動物に投与することからなる。
本発明の無細胞上清は、数多く知られている投与方法の
いずれによってもニワトリに投与することができる。望
ましくは、腹腔注射又は首の背面における筋肉注射又は
皮下注射などの投与方法である。投与モードが注射であ
る場合には、任意の薬学的に許容され得るキャリアを使
用し得る。適当なキャリアの例としては、０．０１〜０
．１Ｍのリン酸バッファー例えば０．０５Ｍのリン酸バ
ッファー又は０．８％の生理食塩水などがある。
いずれによってもニワトリに投与することができる。望
ましくは、腹腔注射又は首の背面における筋肉注射又は
皮下注射などの投与方法である。投与モードが注射であ
る場合には、任意の薬学的に許容され得るキャリアを使
用し得る。適当なキャリアの例としては、０．０１〜０
．１Ｍのリン酸バッファー例えば０．０５Ｍのリン酸バ
ッファー又は０．８％の生理食塩水などがある。
また、キャリアは望ましくは保存剤を含有するのがよい
。特に適当な保存剤はチメロサール（エチル水銀チオサ
リチル酸ナトリウム）であり、これは細菌発育阻止剤（
ｂａｃｔｅｒｉＯ３ｔａｔ）及び真菌発育阻止剤（ｆｕ
ｎｑｉｓｔａｔ）として作用する。望ましくは、チメロ
サールをワクチン中最終濃度で約１０−４％存在させる
。
。特に適当な保存剤はチメロサール（エチル水銀チオサ
リチル酸ナトリウム）であり、これは細菌発育阻止剤（
ｂａｃｔｅｒｉＯ３ｔａｔ）及び真菌発育阻止剤（ｆｕ
ｎｑｉｓｔａｔ）として作用する。望ましくは、チメロ
サールをワクチン中最終濃度で約１０−４％存在させる
。
キャリアは望ましくは免疫強化剤又はアジュバントを含
むことができる。種々の免疫強化剤が当業界で知られて
いるが、これらを使用することができる。適当なアジュ
バントは９４％ Ｄｒａｋｅｏｌ ６−ＶＲ。
むことができる。種々の免疫強化剤が当業界で知られて
いるが、これらを使用することができる。適当なアジュ
バントは９４％ Ｄｒａｋｅｏｌ ６−ＶＲ。
５％ Ａｒ１ａｃｅｌ Ａ、 １％ Ｔｗｅｅｎ−８０
である。Ａｒ１ａｃｅｌ Ａハマンニドモルアート（ｍ
ａｎｎｔｄｅ ｍｏｎｏｌｅａｔｅ ）（Ｓａｎｄｒｉ
ａ Ｃｏｒ凱）であり、抗原と結合したときに強い免疫
強化活性を示す刺激剤である。Ｄｒａｋｅｏｌ６−ＶＲ
は低アレルギー性軽鉱油製品（Ｐｅｎｒｅｃｏ Ｃｏｒ
ｐ、 ）である。Ｔｗｅｅｎ−８０はポリオキシエチル
ソルビタンのモルアート誘導体であり、洗浄活性を有し
ている。他の適当なキャリア又は免疫強化剤としては、
オイルエマルジョン中の硫酸アルミニウムカリウム、水
酸化アルミニウム、リンフ才力イン及び水などがある。
である。Ａｒ１ａｃｅｌ Ａハマンニドモルアート（ｍ
ａｎｎｔｄｅ ｍｏｎｏｌｅａｔｅ ）（Ｓａｎｄｒｉ
ａ Ｃｏｒ凱）であり、抗原と結合したときに強い免疫
強化活性を示す刺激剤である。Ｄｒａｋｅｏｌ６−ＶＲ
は低アレルギー性軽鉱油製品（Ｐｅｎｒｅｃｏ Ｃｏｒ
ｐ、 ）である。Ｔｗｅｅｎ−８０はポリオキシエチル
ソルビタンのモルアート誘導体であり、洗浄活性を有し
ている。他の適当なキャリア又は免疫強化剤としては、
オイルエマルジョン中の硫酸アルミニウムカリウム、水
酸化アルミニウム、リンフ才力イン及び水などがある。
Ｊ Ｍ Ｖ−１＠胞系から誘導した上滑でもって免疫化
することにより、マレック病に対するｉｎ ｖｉｖ。
することにより、マレック病に対するｉｎ ｖｉｖ。
保護を試す研究を行った。致死ＪＭＶに対する保護アッ
セイから、１×１０２個の全生存Ｊ Ｍ Ｖ −１細胞
及びｌＸ１０’個のＪＭＶ−１細胞から得られた無細胞
培養上清は致死ＪＭＶ感染に対し１００％の保護を与え
ることが判明した。この保護活性は、Ｊ Ｍ Ｖ−１細
胞に対して産生きれたウサギ抗血清であって正常ニワト
リ組織を用いて特異性を吸収したものでＪＭＶ−１細胞
又は培養上清を前処理することにより阻止（ｂｌｏｃｋ
）された。正常のウサギ血清は同様に吸収したとしても
この保護を阻止しなかった。無細胞上清によって得られ
る保護は、１×１０４細胞において希釈され得る。
セイから、１×１０２個の全生存Ｊ Ｍ Ｖ −１細胞
及びｌＸ１０’個のＪＭＶ−１細胞から得られた無細胞
培養上清は致死ＪＭＶ感染に対し１００％の保護を与え
ることが判明した。この保護活性は、Ｊ Ｍ Ｖ−１細
胞に対して産生きれたウサギ抗血清であって正常ニワト
リ組織を用いて特異性を吸収したものでＪＭＶ−１細胞
又は培養上清を前処理することにより阻止（ｂｌｏｃｋ
）された。正常のウサギ血清は同様に吸収したとしても
この保護を阻止しなかった。無細胞上清によって得られ
る保護は、１×１０４細胞において希釈され得る。
ＭＤＶの高度に腫瘍形成性であるＣｏｎｎ Ｂ菌株に対
する保護アッセイから、１ｘ１０６ＪＭＶ−１細胞の無
細胞免疫により、培養腎臓細胞からのウィルスの回収が
非常に減少すること、及び、５ＰＡＦＡＳやブロイラー
家畜のみならずＰ及びＮ系ヒヨコにおいてもリンパ腫発
生が激減することが判明した。
する保護アッセイから、１ｘ１０６ＪＭＶ−１細胞の無
細胞免疫により、培養腎臓細胞からのウィルスの回収が
非常に減少すること、及び、５ＰＡＦＡＳやブロイラー
家畜のみならずＰ及びＮ系ヒヨコにおいてもリンパ腫発
生が激減することが判明した。
この保護は、Ｐ系ヒヨコにおいてＭＤＶ感作後７週目に
減少し始めたがヒヨコの他の３つの系においてはＭ Ｄ
Ｖ感作後７週目にあっても依然、有効であった。
減少し始めたがヒヨコの他の３つの系においてはＭ Ｄ
Ｖ感作後７週目にあっても依然、有効であった。
細胞性免疫及び体液性免疫のアッセイを行ない、ホスト
の免疫応答におけるＪＭＶ−１細胞抗原の免疫効果を確
かめた。細胞性免疫のＤＴＨアッセイにおいて、ＪＭＶ
−１細胞で免疫したＰ系ヒョコはＭＤＶ感作後にあって
もり、 ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓに対するＤＴＨ応
答を示したが、Ｎ、Ｋ及びＳ系ヒヨコは該ＤＴＨ応答を
示さなかった。Ｐ系ヒョコのＤＴＨ応答はＭＤＶ又は腫
瘍発生に対する低抗性と関連していなかった。 Ｏｒ放
出アッセイ及びプラーク禁止アッセイのｉｎ Ｖｉｔｒ
Ｏ結果から、無細胞上清で免疫化したヒヨコにおいてＭ
ＤＶ感作前後に腫瘍細胞抗原又はウィルス抗原に対する
細胞性免疫応答が生じなかったことが判った。
の免疫応答におけるＪＭＶ−１細胞抗原の免疫効果を確
かめた。細胞性免疫のＤＴＨアッセイにおいて、ＪＭＶ
−１細胞で免疫したＰ系ヒョコはＭＤＶ感作後にあって
もり、 ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓに対するＤＴＨ応
答を示したが、Ｎ、Ｋ及びＳ系ヒヨコは該ＤＴＨ応答を
示さなかった。Ｐ系ヒョコのＤＴＨ応答はＭＤＶ又は腫
瘍発生に対する低抗性と関連していなかった。 Ｏｒ放
出アッセイ及びプラーク禁止アッセイのｉｎ Ｖｉｔｒ
Ｏ結果から、無細胞上清で免疫化したヒヨコにおいてＭ
ＤＶ感作前後に腫瘍細胞抗原又はウィルス抗原に対する
細胞性免疫応答が生じなかったことが判った。
ウィルス中和アッセイの結果によると、ＭＤＶで感作す
る前に無細胞Ｊ Ｍ Ｖ−１培養上清で免疫化したヒヨ
コにおいてはＭＤＶに対する非常に多くの中和抗体応答
が認められた。ＭＤＶ感作なしでは、上清免疫化ヒヨコ
に中和抗体応答又は沈降抗体応答が認められなかった。
る前に無細胞Ｊ Ｍ Ｖ−１培養上清で免疫化したヒヨ
コにおいてはＭＤＶに対する非常に多くの中和抗体応答
が認められた。ＭＤＶ感作なしでは、上清免疫化ヒヨコ
に中和抗体応答又は沈降抗体応答が認められなかった。
どちらも子孫又は上清による高度免疫化雌親に検出され
る母方抗体ではなかった。
る母方抗体ではなかった。
これらのデータはヒヨコが無細胞Ｊ Ｍ Ｖ−１培養上
清により免疫化されることによってウィルス感染から保
護されることを示唆している。なぜならば、ＭＤＶは多
くの抗体応答で中和されているからであり、また、ウィ
ルス伝染性が減少した結果、リンパ腫発生が減少するか
らである。
清により免疫化されることによってウィルス感染から保
護されることを示唆している。なぜならば、ＭＤＶは多
くの抗体応答で中和されているからであり、また、ウィ
ルス伝染性が減少した結果、リンパ腫発生が減少するか
らである。
その後の実験データから、ＭＤＶ及びＪＭＶの致死移植
に対し防御を示す抗原はＪ Ｍ Ｖ−１細胞系からの培
養上清中に流出していること、及びこれらの抗原は免疫
原性を保持していることが明らかとなった。ウィルス中
和アッセイは、上清で免疫化したＭＤＶ感作ニワトリに
ＭＤＶに対する抗体応答が多く現われることを示してい
る。
に対し防御を示す抗原はＪ Ｍ Ｖ−１細胞系からの培
養上清中に流出していること、及びこれらの抗原は免疫
原性を保持していることが明らかとなった。ウィルス中
和アッセイは、上清で免疫化したＭＤＶ感作ニワトリに
ＭＤＶに対する抗体応答が多く現われることを示してい
る。
ＭＤＶ抗原は血清学的には検出することができず、また
Ｊ Ｍ Ｖ−１１１１胞系から誘導できるものではない
（２１）が、ＪＭＶ−１とＭＤＶとＨＶＴとの間には明
らかな抗原性関係が存在する。しかしながら、ＨＶＴ及
び５Ｂ−１によりＪＭＶに対する保護が与えられるとい
うことは、ＪＭＶ−１細胞がＭＤＶ抗原を表示する可能
性があることを支持している。
Ｊ Ｍ Ｖ−１１１１胞系から誘導できるものではない
（２１）が、ＪＭＶ−１とＭＤＶとＨＶＴとの間には明
らかな抗原性関係が存在する。しかしながら、ＨＶＴ及
び５Ｂ−１によりＪＭＶに対する保護が与えられるとい
うことは、ＪＭＶ−１細胞がＭＤＶ抗原を表示する可能
性があることを支持している。
このＭＤＶ抗原は、通常の血清学的技術では検知不能で
あるが、おそらく非常に少量ではあるが存在しており、
検出できない程の低レベルの初期免疫刺激を与えるもの
と思われる。また、この抗原はＭＤＶ感作により非常に
増えるものと思われる。
あるが、おそらく非常に少量ではあるが存在しており、
検出できない程の低レベルの初期免疫刺激を与えるもの
と思われる。また、この抗原はＭＤＶ感作により非常に
増えるものと思われる。
これから、観察したウィルス中和力価（第１４表）の説
明ができる。しかし、培養上清によりＭＤＶ及びＪＭＶ
に対して認められる保護が、観察された。免疫応答に影
響を及ぼす特異的抗原及び非特異的モジュレータ−（ｍ
ｏｄｅｌａｔｏｒ）の存在によるものであるという可能
性を無視するわけにはいかない。免疫応答の特異性をよ
り一層明白なものとするためには、ヘルペスウィルス及
び非ヘルペスウィルスの他ＭＤＶ関連及び非ＭＤＶＩ！
１３！腫瘍細胞系に′ついての研究を続行しなければな
らない。
明ができる。しかし、培養上清によりＭＤＶ及びＪＭＶ
に対して認められる保護が、観察された。免疫応答に影
響を及ぼす特異的抗原及び非特異的モジュレータ−（ｍ
ｏｄｅｌａｔｏｒ）の存在によるものであるという可能
性を無視するわけにはいかない。免疫応答の特異性をよ
り一層明白なものとするためには、ヘルペスウィルス及
び非ヘルペスウィルスの他ＭＤＶ関連及び非ＭＤＶＩ！
１３！腫瘍細胞系に′ついての研究を続行しなければな
らない。
培養上清中に保護抗原が存在していることが判ったので
、ウィルス抗原又は腫瘍細胞を直接感染させなくとも、
ＭＤＶ保護抗原に対するヒヨコの免疫応答を調べること
ができる。更に、上清の保護性により、マレック病に対
する非腫瘍形成性及び非感染性免疫化剤の開発が可能と
なる。
、ウィルス抗原又は腫瘍細胞を直接感染させなくとも、
ＭＤＶ保護抗原に対するヒヨコの免疫応答を調べること
ができる。更に、上清の保護性により、マレック病に対
する非腫瘍形成性及び非感染性免疫化剤の開発が可能と
なる。
Ｊ Ｍ Ｖ−１上滑は、タイプ１のマレック病ウィルス
に対するニワトリの血清学的能動及び受身応答を増加さ
せる。この増加により、上清単独又は１−ＩＶＴ、５Ｂ
−１若しくはＣＶ Ｉ ９８８クローンＣ（ＲｉＳｐｅ
ｎ）のようなマレック病生ワクチンと上清を接種された
ｆｉ！親から、子孫は充分な母方抗体保護を受けるよう
になる。
に対するニワトリの血清学的能動及び受身応答を増加さ
せる。この増加により、上清単独又は１−ＩＶＴ、５Ｂ
−１若しくはＣＶ Ｉ ９８８クローンＣ（ＲｉＳｐｅ
ｎ）のようなマレック病生ワクチンと上清を接種された
ｆｉ！親から、子孫は充分な母方抗体保護を受けるよう
になる。
特定の無菌ひよこは、５ＰＡＦＡＳ、 Ｉｎｃ、、 Ｎ
ｏｒｗａｌｋ。
ｏｒｗａｌｋ。
ＣＴから入手した卵及び、コーネル大学、Ｉｔｈｉｃａ
。
。
Ｎ、ＹのＢ、Ｉ４． Ｃａ１ｎｅｋ博士から入手したＮ
及びＰ余罪を鼾化して得られたものである。夫々、３２
１及び８１９の主要組織適合抗原座に於いて同型接合体
であるＮ及びＰ系ひよこはマレック病（Ｈｕｔｔ及びＣ
ｏ１ｅ、 １９４７）に対して夫々耐性又は感受性とな
るように交配させられたものである。食肉用家畜である
ツーニッシュ／ホワイトロック異種交配のひよこはＨｕ
ｂｂａｒｄ Ｆａｒｍｓ、Ｗａｌｐｏｌｅ、Ｎｔｌから
入手した卵を１化して得た。Ｒｅｇｉｏｎａｌ ｐｏｕ
ｌｔｒｙ Ｌａｂｓから入手した卵を町化してＫ及びＳ
系ひよこを得た。マレック病に対して夫々耐性及び感受
性であるようにイースト・ランシング、■に系及びＳ系
が交配された。Ｋ系ひよこは８１５対立遺伝子に於いて
同型接合体であり、Ｓ系はＢ１及びＢ１５の三種の可能
な組合せに分離する（ Ｐａｚｄｅｒｋａ他、１９７５
） 、ひよこは全てＨａｒＳｔａｌｌ Ｂａｕｅｒ分離
ユニット′内で飼育した。
及びＰ余罪を鼾化して得られたものである。夫々、３２
１及び８１９の主要組織適合抗原座に於いて同型接合体
であるＮ及びＰ系ひよこはマレック病（Ｈｕｔｔ及びＣ
ｏ１ｅ、 １９４７）に対して夫々耐性又は感受性とな
るように交配させられたものである。食肉用家畜である
ツーニッシュ／ホワイトロック異種交配のひよこはＨｕ
ｂｂａｒｄ Ｆａｒｍｓ、Ｗａｌｐｏｌｅ、Ｎｔｌから
入手した卵を１化して得た。Ｒｅｇｉｏｎａｌ ｐｏｕ
ｌｔｒｙ Ｌａｂｓから入手した卵を町化してＫ及びＳ
系ひよこを得た。マレック病に対して夫々耐性及び感受
性であるようにイースト・ランシング、■に系及びＳ系
が交配された。Ｋ系ひよこは８１５対立遺伝子に於いて
同型接合体であり、Ｓ系はＢ１及びＢ１５の三種の可能
な組合せに分離する（ Ｐａｚｄｅｒｋａ他、１９７５
） 、ひよこは全てＨａｒＳｔａｌｌ Ｂａｕｅｒ分離
ユニット′内で飼育した。
ウィルス
ＭＤＶのＣｏｎｎＢ株はＰ系ひよこで継代培養し、マレ
ック病の臨床的徴候ｉ示したひよこからヘパ゛ リン処
理して全血を採取した。ＭＤＶ感染血液をひよこの腎細
胞を用いて力価測定し、所定のプラーク形成ユニット量
を有するものを液体チッ素内で保存し感染材料として使
用した。
ック病の臨床的徴候ｉ示したひよこからヘパ゛ リン処
理して全血を採取した。ＭＤＶ感染血液をひよこの腎細
胞を用いて力価測定し、所定のプラーク形成ユニット量
を有するものを液体チッ素内で保存し感染材料として使
用した。
２〜６週ｐ、ｉ、のＣｏｎｎＢ感染ひよこの主要羽区（
ｆｅａｔｈｅｒ ｔｒａｃｔ）から羽の細片及び皮膚を
除去して細胞非含有ＭＤＶを得た。該材料を安定化バッ
ファ（０，２１８Ｍシヨ糖、 Ｏ，０Ｏ０３８ＨＫ
Ｈ２Ｐ ０４ 。
ｆｅａｔｈｅｒ ｔｒａｃｔ）から羽の細片及び皮膚を
除去して細胞非含有ＭＤＶを得た。該材料を安定化バッ
ファ（０，２１８Ｍシヨ糖、 Ｏ，０Ｏ０３８ＨＫ
Ｈ２Ｐ ０４ 。
０．００７２ＨＫ ＨＰＯ４，Ｏ１００４９ＨＭＳＧ
、 １％ＢＳＡ、Ｏ１２％ＥＤＴＡ）内に入れ（Ｃａ
１ｎｅｋ他、１９７０＠照）、はさみで細かく切り刻み
、次に氷水浴上でＶｉｒｔｉｓミキサーにて均一化処理
した。ガーゼを通して口過することによって、上清を羽
や皮膚の残渣から分離し、液体チッ素及び水道水を使っ
て該上清の凍結−融解を三日繰り返し、次に６０にｃｙ
Ｎ ／秒のＢ１０３ｏｎｉｃオシレーター内で氷水浴上
２分間の音波処理にかけた。この上清を１０．０００×
９で１０分間遠心分離し、ＦＣ８中に予め浸漬させであ
る０、４μフイルターを通して口過滅菌した。
、 １％ＢＳＡ、Ｏ１２％ＥＤＴＡ）内に入れ（Ｃａ
１ｎｅｋ他、１９７０＠照）、はさみで細かく切り刻み
、次に氷水浴上でＶｉｒｔｉｓミキサーにて均一化処理
した。ガーゼを通して口過することによって、上清を羽
や皮膚の残渣から分離し、液体チッ素及び水道水を使っ
て該上清の凍結−融解を三日繰り返し、次に６０にｃｙ
Ｎ ／秒のＢ１０３ｏｎｉｃオシレーター内で氷水浴上
２分間の音波処理にかけた。この上清を１０．０００×
９で１０分間遠心分離し、ＦＣ８中に予め浸漬させであ
る０、４μフイルターを通して口過滅菌した。
ｌＩＩ胞非含有ウィルスのアリコートをひよこのＦ？
ｌ胞を用いて力価測定し、１０％ＤＭＳ○状態で液体チ
ッ素中で凍結した。
ｌ胞を用いて力価測定し、１０％ＤＭＳ○状態で液体チ
ッ素中で凍結した。
Ｌ、 ｍ０ｎＯｃ１７ｔＯ（ｌｅｎｅ抗原の分離１．１
ｓｔｃｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｑｅｎｅｓ 、 Ａ
４４１３株はマサチューセッツ大学微生物学部のＨａｒ
ｔｉｎＳ、讐ｉ Ｉｄｃｒ博士によって提供された。培
養物はトリブトーズ寒天斜面培１ｇ内で一２０℃で保存
し、使用に先立ち細菌は２００戒のトリブトーズ流体培
養基中で２４時間増殖させた、飽和（ＮＨ） ８０．
４℃で抗原を沈澱させ、これを５０００ｘ ｇで１５分
間遠心操作にかけた。得られたペレットを５０ｄのＰＢ
Ｓ（Ｎａ２ＨＰＯ４，３，４ａｇ： ＫＨ２ＰＯ４，６
，９２９：ＮａＣ１？ 、 ４．５ｇ ；蒸留水、１
００Ｍ） 、Ｉ）８７２に再溶解させ、ＰＢＳに対して
４８時間透析し、３〜５ｄ１．：濶Ｉした。コノ濃縮抗
原を５ｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−５０（ｐＢＳ、 ｐＨ７，
２＞により精製し、該カラムから溶出した最初のタンパ
クビークをＬｏｖｒｙタンパクアッセイにより定量した
（ Ｌｏｗｒｙ他、１９５１）。
ｓｔｃｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｑｅｎｅｓ 、 Ａ
４４１３株はマサチューセッツ大学微生物学部のＨａｒ
ｔｉｎＳ、讐ｉ Ｉｄｃｒ博士によって提供された。培
養物はトリブトーズ寒天斜面培１ｇ内で一２０℃で保存
し、使用に先立ち細菌は２００戒のトリブトーズ流体培
養基中で２４時間増殖させた、飽和（ＮＨ） ８０．
４℃で抗原を沈澱させ、これを５０００ｘ ｇで１５分
間遠心操作にかけた。得られたペレットを５０ｄのＰＢ
Ｓ（Ｎａ２ＨＰＯ４，３，４ａｇ： ＫＨ２ＰＯ４，６
，９２９：ＮａＣ１？ 、 ４．５ｇ ；蒸留水、１
００Ｍ） 、Ｉ）８７２に再溶解させ、ＰＢＳに対して
４８時間透析し、３〜５ｄ１．：濶Ｉした。コノ濃縮抗
原を５ｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−５０（ｐＢＳ、 ｐＨ７，
２＞により精製し、該カラムから溶出した最初のタンパ
クビークをＬｏｖｒｙタンパクアッセイにより定量した
（ Ｌｏｗｒｙ他、１９５１）。
遅延型過敏症（ＤＴＨ＞アッセイに必要とされるｌ １
ｓｔ（！ｒｉａ抗原の最Ｊｆｆｌは、Ｌ、 ｍｏｎｏｃ
ｔｏｇｅｎｅｓによる感作の三日後に５．１０及び２
０ｉの抗原希釈伍をひよこの一方の肉汁にまたもう一方
の肉汁にはＰＢＳを接種することにより決定した。
ｓｔ（！ｒｉａ抗原の最Ｊｆｆｌは、Ｌ、 ｍｏｎｏｃ
ｔｏｇｅｎｅｓによる感作の三日後に５．１０及び２
０ｉの抗原希釈伍をひよこの一方の肉汁にまたもう一方
の肉汁にはＰＢＳを接種することにより決定した。
細胞培養
Ｊ Ｍ Ｖ−１細胞系は４８時間毎にＲＰＭ Ｉ １６
４０培地（ＧＩＢＣＯ，Ｇｒａｎｄ ｌ５ｌａｎｄ、
ＮＹ）を使用しＴ１：１０に培養物を希釈して連続継代
した。尚、このｆｌＰＨＩ培地には１ｍ１ｙｌピルビン
酸ナトリウム、２ｍＭＬ−グルタミン酸塩、０．１ｍＨ
Ｍ Ｅ Ｍ非必須アミノ酸、５％［・多１ リブドーズリン゛ｒ’；イヨン、１０−”ｍＨβ−メル
カプトエタノール、１０％熱不活性化ひよこ血清（Ｃ３
）、８％牛脂児血清（ＦＣ８）並びにペニシリン、ジヒ
ドロストレプトマイシン及びマイコスタチンを夫々ｉｏ
、 ｏｏｏユニット、１０，０００．ｑ及び２，５００
ユニツトを補充しである。培養は３７℃、５％ＣＯ２含
有空気雰囲気下で行なった。
４０培地（ＧＩＢＣＯ，Ｇｒａｎｄ ｌ５ｌａｎｄ、
ＮＹ）を使用しＴ１：１０に培養物を希釈して連続継代
した。尚、このｆｌＰＨＩ培地には１ｍ１ｙｌピルビン
酸ナトリウム、２ｍＭＬ−グルタミン酸塩、０．１ｍＨ
Ｍ Ｅ Ｍ非必須アミノ酸、５％［・多１ リブドーズリン゛ｒ’；イヨン、１０−”ｍＨβ−メル
カプトエタノール、１０％熱不活性化ひよこ血清（Ｃ３
）、８％牛脂児血清（ＦＣ８）並びにペニシリン、ジヒ
ドロストレプトマイシン及びマイコスタチンを夫々ｉｏ
、 ｏｏｏユニット、１０，０００．ｑ及び２，５００
ユニツトを補充しである。培養は３７℃、５％ＣＯ２含
有空気雰囲気下で行なった。
Ｊ Ｍ Ｖ−１細胞非含有上清は継代前に４８時間培養
したものから調製した。トリバンブルー遮断によって細
胞数を視野内で係数した。培養物を４０００ｘｇで５分
間遠心にかけ、得られた培養上清を０．４μ孔径のニト
ロセルロース膜を通して口過した。
したものから調製した。トリバンブルー遮断によって細
胞数を視野内で係数した。培養物を４０００ｘｇで５分
間遠心にかけ、得られた培養上清を０．４μ孔径のニト
ロセルロース膜を通して口過した。
致死性移植物、即ちＪＭＶは前記のようにＮ系ひよこ内
イン・ヴイヴオで継代組持した。死にかけているひよこ
から肝臓及びＩＩ！￥Ｒのホモジネートを作り、これを
生後数日（ｄａｙ−ｏｖｄ＞のひよこを使ってその力価
を測定し、１０，０００のひよこ致死投与Ｑ （ｃｈｉ
ｃｋ １ｅｔｈａｌ ｄｏｓｅ、 ＣＬＤ）のアリコー
トを液体チッ素中で保存し、感染材料として用いた。
イン・ヴイヴオで継代組持した。死にかけているひよこ
から肝臓及びＩＩ！￥Ｒのホモジネートを作り、これを
生後数日（ｄａｙ−ｏｖｄ＞のひよこを使ってその力価
を測定し、１０，０００のひよこ致死投与Ｑ （ｃｈｉ
ｃｋ １ｅｔｈａｌ ｄｏｓｅ、 ＣＬＤ）のアリコー
トを液体チッ素中で保存し、感染材料として用いた。
心臓穿刺によって放血させた種々の処理群のひよこから
こよこ腎細胞単層を樹立した。腎臓を無菌的に回収し結
合組織を除去した。該組織をシリンジを通して静かに生
理リン酸バッファ（ＰＢＳ）溶液、ｐＨ７，２（０，２
５％トリプシン）内に押し込んだ。細胞懸濁液をトリプ
シンで１０分ずつ３回処理し、１９９培地（ＧＩＢＣＯ
，Ｇｒａｎｔｌ ｌ５ｌａｎｄ、 ＮＹ）で３回洗浄し
た。尚、１９９培地には０６％重炭酸ナトリウム、１０
％トリブトーズリン酸塩、抗生物質、１ｘＦＣ８を補充
しである。これを３７℃で５％ＣＯ２含有空気雰囲気下
で培養して、７〜１０日後にＭＤプラークを計測した。
こよこ腎細胞単層を樹立した。腎臓を無菌的に回収し結
合組織を除去した。該組織をシリンジを通して静かに生
理リン酸バッファ（ＰＢＳ）溶液、ｐＨ７，２（０，２
５％トリプシン）内に押し込んだ。細胞懸濁液をトリプ
シンで１０分ずつ３回処理し、１９９培地（ＧＩＢＣＯ
，Ｇｒａｎｔｌ ｌ５ｌａｎｄ、 ＮＹ）で３回洗浄し
た。尚、１９９培地には０６％重炭酸ナトリウム、１０
％トリブトーズリン酸塩、抗生物質、１ｘＦＣ８を補充
しである。これを３７℃で５％ＣＯ２含有空気雰囲気下
で培養して、７〜１０日後にＭＤプラークを計測した。
ポリクローナル抗体産生
若い成獣雌ニューシーラントラビットに対し、ＰＢＳ中
に懸濁させたＪＭＶ−１細胞を、その投与岱を増加させ
ながら４週間に恒って抹潤耳静猟に４回接種した。最後
の接種後７１７及び２７日後にラビットの且から放血さ
せ、全面からの血清を５６°Ｃで３０分間不活性化し、
ＣＲＢＣ８、ひよこＩＱ、肝臓、Ｉｔ！ｌｌ臓、胸腺及
び包のう細胞で吸収した。
に懸濁させたＪＭＶ−１細胞を、その投与岱を増加させ
ながら４週間に恒って抹潤耳静猟に４回接種した。最後
の接種後７１７及び２７日後にラビットの且から放血さ
せ、全面からの血清を５６°Ｃで３０分間不活性化し、
ＣＲＢＣ８、ひよこＩＱ、肝臓、Ｉｔ！ｌｌ臓、胸腺及
び包のう細胞で吸収した。
Ｊ Ｍ Ｖ−１１１１胞に対する抗血清の特異性は蛍光
抗体アッセイによって測定した。１×１０６の胸腺又は
包のう（ｂｕｒｓａ＞細胞又はＪＭＶ−１細胞を５０７
のＪ Ｍ Ｖ−１抗血清又はコントロールであるラビッ
ト血清と伴に４℃で２０分間インキュベートした。ＰＢ
Ｓ’″ｃ細胞を３回洗い、フルオロセインイソチオシア
ネート（ＦＩＴＣ）結合ヤギ抗ラビット抗血清中に再懸
濁させ、再に２０分間前と同様にインキユベートシ、Ｐ
ＢＳで３回洗浄した。細胞を７０％グリセロール含有水
冷ＰＢＰＢＳ中懸濁し、直ちに標準Ｚｅｉｓｓ ＬＩＶ
顕微鏡を用いて紫外光線下で観察した。
抗体アッセイによって測定した。１×１０６の胸腺又は
包のう（ｂｕｒｓａ＞細胞又はＪＭＶ−１細胞を５０７
のＪ Ｍ Ｖ−１抗血清又はコントロールであるラビッ
ト血清と伴に４℃で２０分間インキュベートした。ＰＢ
Ｓ’″ｃ細胞を３回洗い、フルオロセインイソチオシア
ネート（ＦＩＴＣ）結合ヤギ抗ラビット抗血清中に再懸
濁させ、再に２０分間前と同様にインキユベートシ、Ｐ
ＢＳで３回洗浄した。細胞を７０％グリセロール含有水
冷ＰＢＰＢＳ中懸濁し、直ちに標準Ｚｅｉｓｓ ＬＩＶ
顕微鏡を用いて紫外光線下で観察した。
方 法
移植可能致死ＪＨＶに対する保護
ＪＨＶ感染に対して保護作用があることが予め判明して
いる完全なＪＭＶ−１生綱胞１×１０２、超音波処理に
より蒸溜水中で溶解したＪＨＶ−１細胞１×１０２、あ
るいは上述のようにして１０６のＪＨＶ−１細胞から得
た培養物濾過上清により、生後間もないＮ系ヒョコの免
疫化試験を行った。上記の材料は全てＪＨＶ−１細胞の
４８時間の培養物から得た。免疫化から１５日後にヒヨ
コをＪＨＶの１０００ＣＬ［ｌにより感染させ、１５日
間ＪＨＶ−特異致死率を調べた。致死率は感染後３〜１
４日に牌腫、肝癌及び死亡より決定した。
いる完全なＪＭＶ−１生綱胞１×１０２、超音波処理に
より蒸溜水中で溶解したＪＨＶ−１細胞１×１０２、あ
るいは上述のようにして１０６のＪＨＶ−１細胞から得
た培養物濾過上清により、生後間もないＮ系ヒョコの免
疫化試験を行った。上記の材料は全てＪＨＶ−１細胞の
４８時間の培養物から得た。免疫化から１５日後にヒヨ
コをＪＨＶの１０００ＣＬ［ｌにより感染させ、１５日
間ＪＨＶ−特異致死率を調べた。致死率は感染後３〜１
４日に牌腫、肝癌及び死亡より決定した。
免疫化の前に、ＪＨＶ−１細胞及び上清をウナギ、ｊト
ＩＶ−１抗血清、あるいは抗Ｊ）ＩＶ−１血清と同時に
正常ニワトリ組織に吸着された正常ウサギ血清の１：８
０稀釈物と共に３７℃で３０．９間インキュベートする
処理を行い上記の試験を繰返した。
ＩＶ−１抗血清、あるいは抗Ｊ）ＩＶ−１血清と同時に
正常ニワトリ組織に吸着された正常ウサギ血清の１：８
０稀釈物と共に３７℃で３０．９間インキュベートする
処理を行い上記の試験を繰返した。
Ｒｅａｄ及び）ｌｅｕｎｃｈ（１９３８）の方法により
、致死Ｊ）ＩＶの感染に対するＪＨＶ−１細胞及び細胞
非含有上清の５０％ 致死徂（ＬＯ５０）及ＣＦ ５０
％ （ｆｊＡ ；ａ Ｍｔ （ＰＤ５０）ヲ調ヘタ。
、致死Ｊ）ＩＶの感染に対するＪＨＶ−１細胞及び細胞
非含有上清の５０％ 致死徂（ＬＯ５０）及ＣＦ ５０
％ （ｆｊＡ ；ａ Ｍｔ （ＰＤ５０）ヲ調ヘタ。
４８時間培養物から得た１×１０７の細胞あるいは細胞
非含有上清の一連の１０倍稀釈物を生後間もない６群の
ヒヨコに腹腔内（ｉｐ）投与した。１５日間ヒヨコのＪ
ＨＶ−特異致死率を観察し、その後ＪＭＶの１０００Ｃ
ＬＤを感染させ、上記のようにしてＪＨＶ−特異致死率
を観察した。
非含有上清の一連の１０倍稀釈物を生後間もない６群の
ヒヨコに腹腔内（ｉｐ）投与した。１５日間ヒヨコのＪ
ＨＶ−特異致死率を観察し、その後ＪＭＶの１０００Ｃ
ＬＤを感染させ、上記のようにしてＪＨＶ−特異致死率
を観察した。
ＭＤＶ感染に対する保護
ＪＨＶ−１培養物上清のＨＤＶ感染及びｆ４瘍成長に対
する保護のアッセイを、Ｎ系、Ｐ系、ブロイラー及び５
ＰＡＦＡＳニワトリについて行った。各試験において、
ヒョ」ノ１／２ヲ生後１日テ、ｌＸ１０６（７） ＪＨ
Ｖ−１細胞の濾過培養物上清０．２ｄにより免疫化した
（ｉｏ）。１５日後、各群の１７２をＨＤＶのコネチカ
ットＢ株（Ｊａｋｏｗｓｋｉ等、 １９７０）の２００
〜５００のプラーク形成単位（ＰＦＵ）により感染させ
た。感染後、２．５及び７ｉに各群の１／３放血し、腫
瘍成長総Ｅを調べた。ウィルスを回収するために、腎臓
を培養した。牌臓は５１Ｃｒリリースアツセイに使用す
るためにとり、血清試石はウィルス中和試験のために保
存した。
する保護のアッセイを、Ｎ系、Ｐ系、ブロイラー及び５
ＰＡＦＡＳニワトリについて行った。各試験において、
ヒョ」ノ１／２ヲ生後１日テ、ｌＸ１０６（７） ＪＨ
Ｖ−１細胞の濾過培養物上清０．２ｄにより免疫化した
（ｉｏ）。１５日後、各群の１７２をＨＤＶのコネチカ
ットＢ株（Ｊａｋｏｗｓｋｉ等、 １９７０）の２００
〜５００のプラーク形成単位（ＰＦＵ）により感染させ
た。感染後、２．５及び７ｉに各群の１／３放血し、腫
瘍成長総Ｅを調べた。ウィルスを回収するために、腎臓
を培養した。牌臓は５１Ｃｒリリースアツセイに使用す
るためにとり、血清試石はウィルス中和試験のために保
存した。
Ｎ及びＰ系についてはそれぞれ５回、ブロイラーは１回
、５ＰＡＦＡＳニワトリについては２回の試験を行った
。５回のＮ及びＰ系のうち２回は、細胞非含有上清を無
機油助剤との１；１混合物として乳化し、数箇所での皮
下注射及びｉｐにより投与した。
、５ＰＡＦＡＳニワトリについては２回の試験を行った
。５回のＮ及びＰ系のうち２回は、細胞非含有上清を無
機油助剤との１；１混合物として乳化し、数箇所での皮
下注射及びｉｐにより投与した。
ＤＴ）−１アツセイ
ＪＨＶ−１による免疫化及びその後のＨＤＶ感染の、ヒ
ヨコの細胞媒介ＤＴＨ応答に対する効果を調べた。
ヨコの細胞媒介ＤＴＨ応答に対する効果を調べた。
非処理対照、ＩＸ １０２ＪＨＶ−１細胞を受けた生後
間もないヒヨコ、１Ｘ１０２の細胞を受けその後１５日
後にＨＤＶ感染を受けた生後間もな・いヒョコ、及び１
５日令に感染匿のＨＤＶの投与だけを受けたヒヨコの４
つの処理群で行った。対照群１の３羽を除いて、２４時
間リステリア菌培養物のＰＢＳ中の１：１０稀釈物１１
ｄと共に、１４日後に全群をＨＤＶで感染させた。リス
テリア菌培養物による感作の４日後、感作ヒヨコの１つ
の肉汁に ＰＢＳ中のリステリア抗原を、他方の肉汁に
ＰＢＳだけを、そして非感作対照ヒヨコの肉汁にもＰＢ
Ｓだけを注射した。２４時間後、肉２止の膨張をダイヤ
ルゲージカリバスで調定し、（試験ヒヨコの肉汁膨張度
一対照ヒヨコの肉踊膨張度）／対照ヒヨコの肉汁膨張度
をＤＴＩ＋指数として決定した。
間もないヒヨコ、１Ｘ１０２の細胞を受けその後１５日
後にＨＤＶ感染を受けた生後間もな・いヒョコ、及び１
５日令に感染匿のＨＤＶの投与だけを受けたヒヨコの４
つの処理群で行った。対照群１の３羽を除いて、２４時
間リステリア菌培養物のＰＢＳ中の１：１０稀釈物１１
ｄと共に、１４日後に全群をＨＤＶで感染させた。リス
テリア菌培養物による感作の４日後、感作ヒヨコの１つ
の肉汁に ＰＢＳ中のリステリア抗原を、他方の肉汁に
ＰＢＳだけを、そして非感作対照ヒヨコの肉汁にもＰＢ
Ｓだけを注射した。２４時間後、肉２止の膨張をダイヤ
ルゲージカリバスで調定し、（試験ヒヨコの肉汁膨張度
一対照ヒヨコの肉踊膨張度）／対照ヒヨコの肉汁膨張度
をＤＴＩ＋指数として決定した。
！１１１１０００ｒＭＤＶ感染に対する保護］の項で記
載したものである。感作リンパ球は、無菌的に採取しＴ
ｅｎ ＢｒｏｅｃｋグラインダーによりＰＢＳ中で穏や
かに破砕した牌臓から得た。粒状物及び赤血球１ｎｆｔ
ｌを３０分間沈澱させ、細胞密度を５×１０６生育可能
細胞／ＲＰＨ） １６４０戒に調整した。
載したものである。感作リンパ球は、無菌的に採取しＴ
ｅｎ ＢｒｏｅｃｋグラインダーによりＰＢＳ中で穏や
かに破砕した牌臓から得た。粒状物及び赤血球１ｎｆｔ
ｌを３０分間沈澱させ、細胞密度を５×１０６生育可能
細胞／ＲＰＨ） １６４０戒に調整した。
標的細胞は、ＪＭＶ−１の２４ｈｒｌ濁液培養物及びＭ
ＳＢ−１（Δｋｉｙａｍａ及びＫａｔｏ、 １９７４）
細胞培養物あるいは２４ウエル［培養プレート上のヒヨ
コ腎ｇＡＩ８１１胞単層から得た。ＲＰＭρ１６４０培
地中の１×１０１０７Ｊ〜１及びＭ Ｓ Ｂ−１細胞の
懸濁液を殺菌食塩水中の２００マイクロキユリーの”１
Ｃｒ （３００−５００ｃｌ／ｇ Ｓ、八、、 Ｎ
ｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｎｕｃｌｅａｒ、 Ｂｏ
ｓｔｏｎ。
ＳＢ−１（Δｋｉｙａｍａ及びＫａｔｏ、 １９７４）
細胞培養物あるいは２４ウエル［培養プレート上のヒヨ
コ腎ｇＡＩ８１１胞単層から得た。ＲＰＭρ１６４０培
地中の１×１０１０７Ｊ〜１及びＭ Ｓ Ｂ−１細胞の
懸濁液を殺菌食塩水中の２００マイクロキユリーの”１
Ｃｒ （３００−５００ｃｌ／ｇ Ｓ、八、、 Ｎ
ｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｎｕｃｌｅａｒ、 Ｂｏ
ｓｔｏｎ。
Ｈ八）で標識した。混合物を３７℃で２詩間インキュベ
ートし、その後２０％ＦＣ８を含有するＲＰＭρ１６４
０中遠心分離により５回洗浄した。細胞密度をｌＸ１０
”生育可能１ｔｌｌ胞／ｒｄに調整し、目的１胞に対す
る比５０：１のエフェクターを得た。
ートし、その後２０％ＦＣ８を含有するＲＰＭρ１６４
０中遠心分離により５回洗浄した。細胞密度をｌＸ１０
”生育可能１ｔｌｌ胞／ｒｄに調整し、目的１胞に対す
る比５０：１のエフェクターを得た。
ヒヨコ腎臓細胞単層を２００マイクロキユリー５１Ｃｒ
／２４ウエルプレートで標識し、３７℃で２時間インキ
ュベートした。その後Ｔｅｋｔａｔｏｒシェーカーで回
転してＰＢＳにより５回洗浄した。この培養物のエフェ
クターの標的細胞に対する比は約１０：１であった。
／２４ウエルプレートで標識し、３７℃で２時間インキ
ュベートした。その後Ｔｅｋｔａｔｏｒシェーカーで回
転してＰＢＳにより５回洗浄した。この培養物のエフェ
クターの標的細胞に対する比は約１０：１であった。
１００ＩＩｉの標的細胞と １００戒の感作リンパ球細
胞を含む２００ｉｉｉの培養混合物をＵ型底の９６ウエ
ルマイクロタイタープレートに入れ、また各腎臓細胞ウ
ェルに１ｄの感作牌細胞を加え、予め至適化した５％Ｃ
Ｏ２を含有する空気雰囲気下で６時間インキュベートし
た（にｃｌｌｅｒ、 １９８１）。その後培養物を２０
０Ｏｒｐｍで５分間遠心分離し、１００１Ｊｉの上清液
を取り、５ｃｉｎｔｉ ｖｅｒｓｅ （Ｆｉｓｈｅｒ
５ｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ）中のシンチレーションバイア
ルに入れ、５ｅａｒｌｅＤｅｌｔａ ３００液体シンブ
レーションシステムでカウントした。 。
胞を含む２００ｉｉｉの培養混合物をＵ型底の９６ウエ
ルマイクロタイタープレートに入れ、また各腎臓細胞ウ
ェルに１ｄの感作牌細胞を加え、予め至適化した５％Ｃ
Ｏ２を含有する空気雰囲気下で６時間インキュベートし
た（にｃｌｌｅｒ、 １９８１）。その後培養物を２０
０Ｏｒｐｍで５分間遠心分離し、１００１Ｊｉの上清液
を取り、５ｃｉｎｔｉ ｖｅｒｓｅ （Ｆｉｓｈｅｒ
５ｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ）中のシンチレーションバイア
ルに入れ、５ｅａｒｌｅＤｅｌｔａ ３００液体シンブ
レーションシステムでカウントした。 。
標的細胞中への標識の総給合量は、反応混合物の３つの
試料の放射活性の測定により決定した。
試料の放射活性の測定により決定した。
最大の５１Ｃｒリリースは、１０（ｌｄの反応混合物を
ｐｉ（７，４の０．０５Ｍ トリス中２％ＮＰ−４０と
共に４時間インキュベートして決定した。これを２００
Ｏｒｐｍで５分間遠心分離し、５ｃｉｎｔｉ ｖｅｒｓ
ｅ中でカウントした。この活性はリリース可能５１ｃｒ
の１００％を示し、リンパ球細胞なしにインキュベート
した標ントで示す。（（免疫リンパ細胞存在下での５１
Ｃｒリリース−正常リンパ細胞存在下での５１Ｃｒリリ
ース）／正常リンパ細胞存在下での最大の５１Ｃｒリリ
ース）Ｘ１００＝％比溶解。
ｐｉ（７，４の０．０５Ｍ トリス中２％ＮＰ−４０と
共に４時間インキュベートして決定した。これを２００
Ｏｒｐｍで５分間遠心分離し、５ｃｉｎｔｉ ｖｅｒｓ
ｅ中でカウントした。この活性はリリース可能５１ｃｒ
の１００％を示し、リンパ球細胞なしにインキュベート
した標ントで示す。（（免疫リンパ細胞存在下での５１
Ｃｒリリース−正常リンパ細胞存在下での５１Ｃｒリリ
ース）／正常リンパ細胞存在下での最大の５１Ｃｒリリ
ース）Ｘ１００＝％比溶解。
プラーク阻害アッセイ
エフェクター細胞は、ＪＭＶ−１培養物の濾過上清３ｍ
の初回接種を受け、２週間後とその１２週間後にざらに
ｅ過培養物上清２．０ｍ１．の追加接種を受けたに系雌
性成体から１ｑた。ｆｉｃｏｌ ｈｙｐａｑｕｅｃｕｓ
ｈｉｏｎによりヘパリンを加えた全面から白血球を分離
した。細胞をＰＢＳで３回洗浄し、細胞容品ヲ１０％
Ｆ ＣＳ ヲ加エタ１９９培地ｍＡ ”５ ’） ２Ｘ
１０５．２×１０ 及び２×１０７細胞に調整した
。同じ頃に時化したに系の免疫化していないものを同様
に調製して陰性対照ＰＢＬとした。
の初回接種を受け、２週間後とその１２週間後にざらに
ｅ過培養物上清２．０ｍ１．の追加接種を受けたに系雌
性成体から１ｑた。ｆｉｃｏｌ ｈｙｐａｑｕｅｃｕｓ
ｈｉｏｎによりヘパリンを加えた全面から白血球を分離
した。細胞をＰＢＳで３回洗浄し、細胞容品ヲ１０％
Ｆ ＣＳ ヲ加エタ１９９培地ｍＡ ”５ ’） ２Ｘ
１０５．２×１０ 及び２×１０７細胞に調整した
。同じ頃に時化したに系の免疫化していないものを同様
に調製して陰性対照ＰＢＬとした。
標的細胞は、生後数日でＭＤＶにより感染された５週令
のに系のヒヨコからのＰＢＬであった。
のに系のヒヨコからのＰＢＬであった。
白血球を上述のようにヘパリンを加えた全血から分離し
、１０％ＦＣ３を添加した１９９培地中２×１０７細胞
／ｄに調整した。
、１０％ＦＣ３を添加した１９９培地中２×１０７細胞
／ｄに調整した。
増加濃度の０．５ｄ中の感作エフェクター細胞を０、５
ＩＲＩｌ中の１×１０７標的細胞と混合し、殆んど融合
性の単層腎臓細胞培養物の上に重ね、３７℃で培養した
。２４時間後に、１０％ＦＣ３を加えた１９９培地で培
養物を洗浄し、２週間プラーク成長を観察した。通常１
０日間のインキュベート後、プラークをカウントするこ
とができた。
ＩＲＩｌ中の１×１０７標的細胞と混合し、殆んど融合
性の単層腎臓細胞培養物の上に重ね、３７℃で培養した
。２４時間後に、１０％ＦＣ３を加えた１９９培地で培
養物を洗浄し、２週間プラーク成長を観察した。通常１
０日間のインキュベート後、プラークをカウントするこ
とができた。
ウィルス中和アッセイ
試験血清の１＝２０希釈物の一連の２倍連続希釈物を細
胞非含有ウィルスの１００ＰＦＵと混合し、３７℃で３
０分間インキュベートした。その後混合物を２４ウ工ル
組織培養プレート中のとヨコ幣臓細胞単層上に重ねて１
時装置いた。この時、各ウェルに１０％ＦＣ３を加えた
１９９培地ｉ、ｏｍＩｌを加えた。
胞非含有ウィルスの１００ＰＦＵと混合し、３７℃で３
０分間インキュベートした。その後混合物を２４ウ工ル
組織培養プレート中のとヨコ幣臓細胞単層上に重ねて１
時装置いた。この時、各ウェルに１０％ＦＣ３を加えた
１９９培地ｉ、ｏｍＩｌを加えた。
希釈物は２つずつ作成し１４日までプラーク成長をＩＡ
察した。各試験において、既知の陽性及び陰性血清も使
用した。
察した。各試験において、既知の陽性及び陰性血清も使
用した。
中和抗体力価は、血清で処理した感染培養物に対してウ
ィルス誘発プラークを９０％減少させる血清希釈物をＭ
ＤＶに対して陰性として考慮した。
ィルス誘発プラークを９０％減少させる血清希釈物をＭ
ＤＶに対して陰性として考慮した。
１１五豆１ユ
過免疫化に系雌体からのヒヨコ、及び同じ頃に時化した
非免疫化に系からのヒヨコを生後１日で、ＭＤＶのＣｏ
ｎｎＥ株の約５００ ＰＦＵ テ感染させ、２週令時に
心臓穿刺により放血した。血清はアガーゲル免疫核酸試
験（ＡＧＩＤ）のために保存し、腎臓は無菌的に取り出
して萌述したように培養した。培養物は、１４日までＭ
ＤＶ−特異細胞変性効果（ＣＰＥ）の進行を観察した。
非免疫化に系からのヒヨコを生後１日で、ＭＤＶのＣｏ
ｎｎＥ株の約５００ ＰＦＵ テ感染させ、２週令時に
心臓穿刺により放血した。血清はアガーゲル免疫核酸試
験（ＡＧＩＤ）のために保存し、腎臓は無菌的に取り出
して萌述したように培養した。培養物は、１４日までＭ
ＤＶ−特異細胞変性効果（ＣＰＥ）の進行を観察した。
アガーゲル免疫拡散試験（ＡＧＩＤ）
ＡＧＩＤ試験を血清試料中のＭＤＶ特異沈降抗体の検出
に使用した（ Ｃｈｕｂｂ及びＣｈｕｒｃｈｉｌｌ。
に使用した（ Ｃｈｕｂｂ及びＣｈｕｒｃｈｉｌｌ。
１９６９ ）。ｐＨ７，４のＰＢＳ中の高級アガー１％
懸濁液を使用した（ ０ｋａｚａｋｉ等、１９７０）
。プレートを室温で７２時間インキュベートし、抗原抗
体反応沈降素系の成長を観察した。
懸濁液を使用した（ ０ｋａｚａｋｉ等、１９７０）
。プレートを室温で７２時間インキュベートし、抗原抗
体反応沈降素系の成長を観察した。
際の誘発システム
マレック病の誘発システムは解明されている。
効能試験に使用される３つの基本的な誘発剤がある。第
１のものは、非常に毒性の強いＪＭＶ剤である。ＪＭＶ
による誘発では１０日以内に１００％致死となる。第２
の誘発剤はＪＭウィルスである。
１のものは、非常に毒性の強いＪＭＶ剤である。ＪＭＶ
による誘発では１０日以内に１００％致死となる。第２
の誘発剤はＪＭウィルスである。
このウィルスのＧａ株によるものは標準的誘発とされて
いる。３０〜５０％の致死率が観察される。このウィル
スは当初いくらかの内臓障害と共に神経障害を引き起す
。第３の誘発剤はＲＢＩＢに代表される。非常に毒性の
高いＭＤウィルスである。ＨＶＴあるいはＳＳ−ＩＭＤ
ワクチンを使用すると接種を受けたものの最大５０％が
保護される。ＩｔＢＩＢは初期の内臓障害により８０％
以上の致死率を引き起し得る。これ等の３つの誘発剤は
ＪＭＶ−１上清ワクチンの１価に使用し得る。
いる。３０〜５０％の致死率が観察される。このウィル
スは当初いくらかの内臓障害と共に神経障害を引き起す
。第３の誘発剤はＲＢＩＢに代表される。非常に毒性の
高いＭＤウィルスである。ＨＶＴあるいはＳＳ−ＩＭＤ
ワクチンを使用すると接種を受けたものの最大５０％が
保護される。ＩｔＢＩＢは初期の内臓障害により８０％
以上の致死率を引き起し得る。これ等の３つの誘発剤は
ＪＭＶ−１上清ワクチンの１価に使用し得る。
基本種継代の確立
上清ワクチンの活性物質は生育可能なものではないので
、ＪＭＶ−１セルラインを基本種（ｍａｓｔｅｒｓｅｅ
ｄ ）として調整する。連続した継代による抗原性の低
下は報告されていない。しかし、ワクチ、ンの一貫性を
確保するために継代を２０に１Ｉｌｌ限する。
、ＪＭＶ−１セルラインを基本種（ｍａｓｔｅｒｓｅｅ
ｄ ）として調整する。連続した継代による抗原性の低
下は報告されていない。しかし、ワクチ、ンの一貫性を
確保するために継代を２０に１Ｉｌｌ限する。
約、０６．５〜１０７／ｄの生育可能細胞が力・クント
できる連続した第３番目の継代を第Ｘ噂代とする。
できる連続した第３番目の継代を第Ｘ噂代とする。
ｘ＋１からｘ＋１９までを生産種として使用する。Ｘ。
ｘ＋５． ｘ＋１５及び×＋２０継代を核学に使用する
。上清に存在する抗原が同定される。
。上清に存在する抗原が同定される。
実施例 １
１×１０２個の生きているＪＨＶ−１全細胞又は溶解Ｊ
）ＩＶ−１細１１１、又ハ１０６１ｉ１（７）ＪＨＶ−
１細胞ヲ０．４ミクロンのフィルターで濾過１ノて得た
上清を使用して免疫感作試験を実施し、１０００ＣＬＤ
のＪＨＶでヒヨコを感作した処、ａｖＩを含まない上清
は生きているＪＨＶ−１と同等又はそれよりも良好にヒ
ョニＪを防御することが認められたく第１表）。これら
のデータは更に、溶解細胞によりある程度の防御は与え
られるが、感作に対して相当の防御を得るためには生存
可能なＪＨＶ−１細胞が必要であることを示しており、
ＪＨＶ感作に対して防御性を有する抗原のいくつかはＪ
ＨＶ−１細胞によるｉｎ ｖｉｔｒｏ産生後に放棄され
ることも示している。
）ＩＶ−１細１１１、又ハ１０６１ｉ１（７）ＪＨＶ−
１細胞ヲ０．４ミクロンのフィルターで濾過１ノて得た
上清を使用して免疫感作試験を実施し、１０００ＣＬＤ
のＪＨＶでヒヨコを感作した処、ａｖＩを含まない上清
は生きているＪＨＶ−１と同等又はそれよりも良好にヒ
ョニＪを防御することが認められたく第１表）。これら
のデータは更に、溶解細胞によりある程度の防御は与え
られるが、感作に対して相当の防御を得るためには生存
可能なＪＨＶ−１細胞が必要であることを示しており、
ＪＨＶ感作に対して防御性を有する抗原のいくつかはＪ
ＨＶ−１細胞によるｉｎ ｖｉｔｒｏ産生後に放棄され
ることも示している。
免疫感作に先立ち、希釈度１・８０の抗ＪＨＶ−１抗血
清又は正常ウサギ血清を免疫血清と同時に吸収させない
かあるいは吸収させ、Ｊ Ｈｔ／ −１細胞及び上清を
３７℃で３０分間インキュベートした以外は、上記処理
と同様にしてこの試験を繰り返した（第２図）。第１図
から明らかなように、ウサギ抗ＪＨＶ−１による免疫感
作剤の処理は防御抗原を仝ＪＨＶ−１細胞で完全に阻止
し、上清による与えられる防御を著しく変化させるが、
溶解ＪＨＶ−１細胞の防御特徴は変化させない。ＪＨＶ
−１培養株上清を正常ウサギ血清で前処理しても防御特
徴には影響しなかった。
清又は正常ウサギ血清を免疫血清と同時に吸収させない
かあるいは吸収させ、Ｊ Ｈｔ／ −１細胞及び上清を
３７℃で３０分間インキュベートした以外は、上記処理
と同様にしてこの試験を繰り返した（第２図）。第１図
から明らかなように、ウサギ抗ＪＨＶ−１による免疫感
作剤の処理は防御抗原を仝ＪＨＶ−１細胞で完全に阻止
し、上清による与えられる防御を著しく変化させるが、
溶解ＪＨＶ−１細胞の防御特徴は変化させない。ＪＨＶ
−１培養株上清を正常ウサギ血清で前処理しても防御特
徴には影響しなかった。
２／１０ｂ５／１０ ０／９ ８／９（ａ）
１０ 個のＪ）ＩＶ−１生績胞、１０２個の溶解Ｊ
）ＩＶ−１細胞、又は１０６個の細胞を０．４ミクロン
のフィルターで濾過して得た上清で感作したか、又は未
処理（Ｎ、Ｔ、）の日齢ヒヨコ。１５日齢のヒヨコをヒ
ヨコ致死ゲ（ＣＬＤ）の１０００倍のＪＨＶで感作した
。
１０ 個のＪ）ＩＶ−１生績胞、１０２個の溶解Ｊ
）ＩＶ−１細胞、又は１０６個の細胞を０．４ミクロン
のフィルターで濾過して得た上清で感作したか、又は未
処理（Ｎ、Ｔ、）の日齢ヒヨコ。１５日齢のヒヨコをヒ
ヨコ致死ゲ（ＣＬＤ）の１０００倍のＪＨＶで感作した
。
（ｂ） ＪＨＶ特異死亡数／試験したヒヨコの個数。
± 溶解細胞 、し−謂 よｊ 上−Ｐ Ｎ
、Ｔ〈抗Ｊ）ＩＶ−１） （抗ＪＨＶ−１） （抗Ｊ
ＨＶ−１） （ＮＲ３） （Ｎ、Ｔ、） 非１０
／１０ ５／１０ ９／１０ ・・・
・・・ ９／９・・・ ・・・ ５／６
１／６ １／６ ６／６（ａ） ＋ｏ 個のＪ）
ＩＶ−１生細胞、１０２個の溶解Ｊ）ＩＶ−１細胞、又
は１０”個のＪＨＶ−１細胞をｏ、ＩＸミクロンのフィ
ルターで濾過して得た上清７：感作したか、又は未処理
（Ｎ、Ｔ、）の日齢ヒョコ。免疫感作に先立ち、全剤を
希釈度１；８０のＪＨＶ−１ウサギ抗血清（抗ＪＨＶ−
１）又は正常ウサギ血清（ＮＲ３）と共にインキュベー
トした。１５日齢のヒヨコを１０００ＣＬＤのＪ）ＩＶ
で感作した。
、Ｔ〈抗Ｊ）ＩＶ−１） （抗ＪＨＶ−１） （抗Ｊ
ＨＶ−１） （ＮＲ３） （Ｎ、Ｔ、） 非１０
／１０ ５／１０ ９／１０ ・・・
・・・ ９／９・・・ ・・・ ５／６
１／６ １／６ ６／６（ａ） ＋ｏ 個のＪ）
ＩＶ−１生細胞、１０２個の溶解Ｊ）ＩＶ−１細胞、又
は１０”個のＪＨＶ−１細胞をｏ、ＩＸミクロンのフィ
ルターで濾過して得た上清７：感作したか、又は未処理
（Ｎ、Ｔ、）の日齢ヒョコ。免疫感作に先立ち、全剤を
希釈度１；８０のＪＨＶ−１ウサギ抗血清（抗ＪＨＶ−
１）又は正常ウサギ血清（ＮＲ３）と共にインキュベー
トした。１５日齢のヒヨコを１０００ＣＬＤのＪ）ＩＶ
で感作した。
（ｂ） Ｊ）ＩＶ特異死亡率／試験したヒヨコの個数。
ＪＨＶ−１細胞を連続継代に維持し、致死ＪＨＶに対す
るＬＤ５ｏ及びＰ Ｄ ｓｏアッセイを毎年実施した。
るＬＤ５ｏ及びＰ Ｄ ｓｏアッセイを毎年実施した。
第３表及Ｕ 第４ 表ハＪＨＶ−１細胞ヲ１９８２年か
ら１９８４年の間、細胞を含まない上清を１９８４年に
試験したこれらのアッセイの結果を示している。ＪＨＶ
−１細胞はヒヨコ１匹当り １００００細胞よりやや少
ない数に相当するＬ Ｄ ｓｏで安定したが、１×１０
個のＪＨＶ−１＠胞をどのような希釈度にしでも細胞
を含まない上清はヒヨコを致死に至らしめなかった。
ら１９８４年の間、細胞を含まない上清を１９８４年に
試験したこれらのアッセイの結果を示している。ＪＨＶ
−１細胞はヒヨコ１匹当り １００００細胞よりやや少
ない数に相当するＬ Ｄ ｓｏで安定したが、１×１０
個のＪＨＶ−１＠胞をどのような希釈度にしでも細胞
を含まない上清はヒヨコを致死に至らしめなかった。
ＪＨＶ−１細胞で初期免疫感作した後も生存している全
動物は致死ＪＨＶ感作に対して防御されているものと認
められた。一方、細胞を含まない上清により致死ＪＨＶ
に対して与えられた防御は、約１ｏｏｏｏ個のＪＨＶ−
１細胞に弱められることが認められる。
動物は致死ＪＨＶ感作に対して防御されているものと認
められた。一方、細胞を含まない上清により致死ＪＨＶ
に対して与えられた防御は、約１ｏｏｏｏ個のＪＨＶ−
１細胞に弱められることが認められる。
！−≦シー人
作投与良
ＪＨＶ−１，１９８２４１５２１５３１５２１５２１５
０１５ＪＨＶ−１，１９８３３／６４／６３／６１／６
０／６０／６ＪＨＶ−１，１９８４３１５１／３３１５
３１５２１５２１５１１５上清、 １９８４ ０１５
０１５０１５０１５０１５（ａ） ＪＨＶ特異死亡数／
試験したヒヨコの個数。
０１５ＪＨＶ−１，１９８３３／６４／６３／６１／６
０／６０／６ＪＨＶ−１，１９８４３１５１／３３１５
３１５２１５２１５１１５上清、 １９８４ ０１５
０１５０１５０１５０１５（ａ） ＪＨＶ特異死亡数／
試験したヒヨコの個数。
第 ４ 表
胆７艮６す５す４す３す２す１■
Ｊ１４Ｖ−１，１９８２０／１ａＯ／２０／２０／３０
／３０１５３／３ＪＨＶ−１，１９８３０／３０／２０
／３０１５０／６０１５５１５ＪＨＶ−１，１９８４０
／２０／２０／２０／２０／３０／３０／４５１５上清
、 １９８４ ０１５１１５０１５２１５４１５
４１５（ａ） ＪＨＶ特異死亡数／試験したヒヨコの
個数。
／３０１５３／３ＪＨＶ−１，１９８３０／３０／２０
／３０１５０／６０１５５１５ＪＨＶ−１，１９８４０
／２０／２０／２０／２０／３０／３０／４５１５上清
、 １９８４ ０１５１１５０１５２１５４１５
４１５（ａ） ＪＨＶ特異死亡数／試験したヒヨコの
個数。
Ｎ及びＰ系ヒヨコ及び）Ｉｕｂｂａｒｄブロイラー家畜
及び無病原体（ＳＰＡＦＡＳ）ヒヨコで試験を実施した
。
及び無病原体（ＳＰＡＦＡＳ）ヒヨコで試験を実施した
。
上清をアジュバントに懸濁してＮ及びＰ系試験を実施し
た処、非アジュバント試験とはかなり異なる結果が得ら
れた。Ｎ及びＰ系試験は同時に行ったので、設備の不備
によるヒヨコの非特異的死傷数が高かった。従って、第
５表と第２図及び第３図とに示した結果は、５回のＮ及
びＰ系試験で１ηられたデータの合成である。第６表は
、１回のブロイラー試験と２回の５ＰＡＦＡＳ試験との
結果を要約したものである。これらのデータは、両ウィ
ルスの回収度（第７表及び第８表）が著しく減少してい
ること（Ｐ＜０．０１）、上清で免疫感作したＮ及びＰ
系、ブロイラー及び５ＰＡＦＡＳヒヨコではＨＤＶ感作
感作後間週間に腫瘍形成が顕茗である（第７表及び第８
表）ことを示している。５週後、免疫感作したＰ系ヒョ
コ及びしなかったＰ系ヒョコの間に死亡が住じたが、７
週まで生存したヒヨコはウィルス回収度が低かった。免
疫感作は７週間の間にＮ系、ブロイラー及び５ＰＡＦＡ
Ｓをウィルス感染から防御することが可能であった（
Ｐ ＜ ０．００１）。
た処、非アジュバント試験とはかなり異なる結果が得ら
れた。Ｎ及びＰ系試験は同時に行ったので、設備の不備
によるヒヨコの非特異的死傷数が高かった。従って、第
５表と第２図及び第３図とに示した結果は、５回のＮ及
びＰ系試験で１ηられたデータの合成である。第６表は
、１回のブロイラー試験と２回の５ＰＡＦＡＳ試験との
結果を要約したものである。これらのデータは、両ウィ
ルスの回収度（第７表及び第８表）が著しく減少してい
ること（Ｐ＜０．０１）、上清で免疫感作したＮ及びＰ
系、ブロイラー及び５ＰＡＦＡＳヒヨコではＨＤＶ感作
感作後間週間に腫瘍形成が顕茗である（第７表及び第８
表）ことを示している。５週後、免疫感作したＰ系ヒョ
コ及びしなかったＰ系ヒョコの間に死亡が住じたが、７
週まで生存したヒヨコはウィルス回収度が低かった。免
疫感作は７週間の間にＮ系、ブロイラー及び５ＰＡＦＡ
Ｓをウィルス感染から防御することが可能であった（
Ｐ ＜ ０．００１）。
Ｐ系
処 理 ２週 ５週 ７ 週
ａ ｂ
上清＋ＨＤＶ ３．９５：！：２．２８ ２３．
１９＋２．０１ １２１．６７＋２．６９゜
ｄ ＨＤＶ ４９．３３＋２．０１５８．１１＋２．４６
１６６．４６＋２．６９ｃＮ系 処理 、２ｍｌ二連 −司一二凋 ］ａ 上Ｍ＋ＨＤＶ ３．０９）１．８２ ０．ＯＯ
＋１６１ ２２．９６＋２．０１”ａ
ｂ ）ＩＤＶ ４．１Ｓ±２．０１ ８４．３８＋２．
１３ ７３．６９＋１．６１ｂ（１）免疫感作量の細胞
を含まないＪＨＶ−１培養株上清で感作したか又は未処
理の日齢ヒヨコ。１５日齢のこれらの群の各々の１７２
をＨＤＶのＣｏｎｎ８株２００〜５００Ｐ劃で感作した
。アッセイはＨＤＶ感作から２週、５週及び７週後に実
施した。
１９＋２．０１ １２１．６７＋２．６９゜
ｄ ＨＤＶ ４９．３３＋２．０１５８．１１＋２．４６
１６６．４６＋２．６９ｃＮ系 処理 、２ｍｌ二連 −司一二凋 ］ａ 上Ｍ＋ＨＤＶ ３．０９）１．８２ ０．ＯＯ
＋１６１ ２２．９６＋２．０１”ａ
ｂ ）ＩＤＶ ４．１Ｓ±２．０１ ８４．３８＋２．
１３ ７３．６９＋１．６１ｂ（１）免疫感作量の細胞
を含まないＪＨＶ−１培養株上清で感作したか又は未処
理の日齢ヒヨコ。１５日齢のこれらの群の各々の１７２
をＨＤＶのＣｏｎｎ８株２００〜５００Ｐ劃で感作した
。アッセイはＨＤＶ感作から２週、５週及び７週後に実
施した。
（２） １０６個の腎細胞中のプラークの平均数±３個
１組の培養株の平均の標準誤差。ＨＤＶ感作を受けなか
ったヒヨコから採取した腎臓にはプラークの形成は観察
されなかった。
１組の培養株の平均の標準誤差。ＨＤＶ感作を受けなか
ったヒヨコから採取した腎臓にはプラークの形成は観察
されなかった。
（ａ−ｄ）各上付き文字は系内の平均間の統計的な有意
差を示す。
差を示す。
免疫感作しないヒヨコに対して免疫感作したヒヨコのプ
ラーク形への最小面積平均を５ｔｕｄｅｎｔの試験によ
り比較した。細胞を含まない上清で免疫感作したＰ系ヒ
ヨコは、免疫感作しないヒヨコに比較した場合、ＨＤＶ
感作から２週後（ｐ ＜ ０．０５゜２．３５．４９（
Ｈ）及び５週後（Ｐ＜０．０５．２．０３．４８（Ｈ）
にＨＤＶ感染に対して著しく防御されていることが認め
られた。感作から７週後に、免疫感作したＰ系ヒョコ及
びしないＰ系ヒョコに回収可能なウィルスの著しい僧加
が認められた（ Ｐ ＜ ０．０１．３．２８゜３８（
Ｈ）。感作後２週以内に、ＨＤＶで感作し且つ細胞を含
まない上滑で免疫感作しなかったヒヨコは回収可能なウ
ィルスを高いレベルで産生じていた。
ラーク形への最小面積平均を５ｔｕｄｅｎｔの試験によ
り比較した。細胞を含まない上清で免疫感作したＰ系ヒ
ヨコは、免疫感作しないヒヨコに比較した場合、ＨＤＶ
感作から２週後（ｐ ＜ ０．０５゜２．３５．４９（
Ｈ）及び５週後（Ｐ＜０．０５．２．０３．４８（Ｈ）
にＨＤＶ感染に対して著しく防御されていることが認め
られた。感作から７週後に、免疫感作したＰ系ヒョコ及
びしないＰ系ヒョコに回収可能なウィルスの著しい僧加
が認められた（ Ｐ ＜ ０．０１．３．２８゜３８（
Ｈ）。感作後２週以内に、ＨＤＶで感作し且つ細胞を含
まない上滑で免疫感作しなかったヒヨコは回収可能なウ
ィルスを高いレベルで産生じていた。
所与の処理群における反応は広い範囲に渡っていた。免
疫感作しないがＨＤＶ感作したヒヨコの場合、２．５及
び７週後に培養株当たり ２００以上のプラークが形成
され、２週後の２０％から７週後の８０％の範囲に渡っ
ていた。感作から２週後に、残っている培養株の５０％
は培養株当たりのプラーク形成数が１０未満であり、３
０％は１０〜５０であった。５週後までに、はとんどの
培養株は株当たり２０〜８０のプラークを形成した。免
疫感作したＰ系ヒヨコからの培養株を感作から２週及び
５週後にＶＡ察した処、感作から５週後に試験した１匹
のヒヨコからの培養株は株当たり２００個より多くのプ
ラークを形成していたが、それ以外で２０より多くのプ
ラークを形成したものは認められなかった。感作から２
及び５週後の培養株の９０％は株当たりのプラーク形成
数が５未満又はゼロであった。一方、感作から７週後で
は、免疫感作したヒヨコ及びしないヒヨコからの培養株
の８０％までが株当たり２００１ｉ４のプラークを形成
していた。
疫感作しないがＨＤＶ感作したヒヨコの場合、２．５及
び７週後に培養株当たり ２００以上のプラークが形成
され、２週後の２０％から７週後の８０％の範囲に渡っ
ていた。感作から２週後に、残っている培養株の５０％
は培養株当たりのプラーク形成数が１０未満であり、３
０％は１０〜５０であった。５週後までに、はとんどの
培養株は株当たり２０〜８０のプラークを形成した。免
疫感作したＰ系ヒヨコからの培養株を感作から２週及び
５週後にＶＡ察した処、感作から５週後に試験した１匹
のヒヨコからの培養株は株当たり２００個より多くのプ
ラークを形成していたが、それ以外で２０より多くのプ
ラークを形成したものは認められなかった。感作から２
及び５週後の培養株の９０％は株当たりのプラーク形成
数が５未満又はゼロであった。一方、感作から７週後で
は、免疫感作したヒヨコ及びしないヒヨコからの培養株
の８０％までが株当たり２００１ｉ４のプラークを形成
していた。
第 ６ 表
ブロイラー
処 理 ２ｍｌ一凋 ５ 週
−ムー二凋ａ 上ｆｆｉ＋ＨＤＶ □、００＋２．６９ ２．１
４−１−２．６９” １．９ｊ、３．０＋”ＨＤＶ
０．０Ｏ−）−２，４６３６，２ｍｌ！：２
．６９ ２００．０＋４．２Ｇ。
−ムー二凋ａ 上ｆｆｉ＋ＨＤＶ □、００＋２．６９ ２．１
４−１−２．６９” １．９ｊ、３．０＋”ＨＤＶ
０．０Ｏ−）−２，４６３６，２ｍｌ！：２
．６９ ２００．０＋４．２Ｇ。
ＳＰ八「八Ｓ
処 理 ２ 週 ５ 週
ｌ−二速上ｉＮ＋ＨＤＶ ０．４７＋０．０２
０．１０＋０．０２８３．３８＋１．９２”ＨＤＶ
３．８１＋０．８５ａ１１．２０＋２．９７ｂ４
７．９２＋５．１４ｃ（１）免疫感作吊の細胞を含まな
いＪＨＶ−１培養株上清で感作したか又は未処理の日齢
ヒヨコ。１５日齢テコれらの群の各々の１／２をＨＤＶ
のＣｏｎｎ３株２００〜５００ＰＦＵで感作した。アッ
セイはＨＤＶ感作から２週、５週及び７週後に実施した
。
ｌ−二速上ｉＮ＋ＨＤＶ ０．４７＋０．０２
０．１０＋０．０２８３．３８＋１．９２”ＨＤＶ
３．８１＋０．８５ａ１１．２０＋２．９７ｂ４
７．９２＋５．１４ｃ（１）免疫感作吊の細胞を含まな
いＪＨＶ−１培養株上清で感作したか又は未処理の日齢
ヒヨコ。１５日齢テコれらの群の各々の１／２をＨＤＶ
のＣｏｎｎ３株２００〜５００ＰＦＵで感作した。アッ
セイはＨＤＶ感作から２週、５週及び７週後に実施した
。
（２）１０６個の腎細胞中のプラークの平均数千平均の
標準誤差。腎臓は３個１組で培養した。未処理又は上清
感作のみを受けたヒヨコからの腎臓にはプラークの形成
は観察されなかった。
標準誤差。腎臓は３個１組で培養した。未処理又は上清
感作のみを受けたヒヨコからの腎臓にはプラークの形成
は観察されなかった。
（ａ−ｄ）各上付き文字は系内の平均間の統計的な有Ｑ
差を示す。
差を示す。
感作から２週後のＮ系ヒョコからの腎細胞培養株は、免
疫感作したヒヨコとしないヒヨコとの間でプラーク形成
に著しい差を示さなかった。一方、感作から５週後では
、免疫感作しないヒヨコに対して免役感作したヒヨコか
らの株で回収可能なウィルスは著しく減少しくＰ＜０．
００１．３．４９．４９ｄｆ）、この減少は感作後７週
間の間顕著に維持された（Ｐ＜０．０１．３．２４．４
８６ｆ）。免疫感作しなかったヒヨコからの全培養株は
、感作から５週後に有意なレベルのウィルス誘導プラー
ク（ｐ ＜ ０．０５゜１．９８．６７ｄｆ）を形成し
た。感作から５週後に、試験した腎臓の３分の１はプラ
ークを形成せず、３分の１は培養株光たり１０〜５０個
のプラークを形成し、３分の１は培養株光たり２００を
越えるプラークを形成した。感作から７週後にも同様の
パターンが認められた。一方、免疫感作したヒヨコでは
、感作から５週及び７週で培養した腎臓にプラークは認
められず、培養株光たり２００より多くのプラークを形
成したのはただ１匹であった。残っている培養株が形成
したプラーク数はいずれも培養株光たり４未満又はゼロ
であった。
疫感作したヒヨコとしないヒヨコとの間でプラーク形成
に著しい差を示さなかった。一方、感作から５週後では
、免疫感作しないヒヨコに対して免役感作したヒヨコか
らの株で回収可能なウィルスは著しく減少しくＰ＜０．
００１．３．４９．４９ｄｆ）、この減少は感作後７週
間の間顕著に維持された（Ｐ＜０．０１．３．２４．４
８６ｆ）。免疫感作しなかったヒヨコからの全培養株は
、感作から５週後に有意なレベルのウィルス誘導プラー
ク（ｐ ＜ ０．０５゜１．９８．６７ｄｆ）を形成し
た。感作から５週後に、試験した腎臓の３分の１はプラ
ークを形成せず、３分の１は培養株光たり１０〜５０個
のプラークを形成し、３分の１は培養株光たり２００を
越えるプラークを形成した。感作から７週後にも同様の
パターンが認められた。一方、免疫感作したヒヨコでは
、感作から５週及び７週で培養した腎臓にプラークは認
められず、培養株光たり２００より多くのプラークを形
成したのはただ１匹であった。残っている培養株が形成
したプラーク数はいずれも培養株光たり４未満又はゼロ
であった。
ブロイラー家畜及び５ＰＡＦＡＳからのウィルス回収デ
ータはＮ及びＰ系試験によるデータよりも変化が少なく
、Ｎ系ヒヨコに？ｉｌＪ察されると同様の防御特徴を示
した。感作から２週後に培養したブロイラー家畜からの
腎臓にはプラークは何も形成されなかった。一方、感作
から５週後では免疫感作しないヒヨコに有意なレベルの
プラーク形成＜ｐ＜０．０１．３．２８．２８ｄｆ）が
観察サレ、更ニ感作カラ７週後では有意な増加（Ｐ＜０
．０１．３．４３．１５６ｆ）が観察された。一方、免
疫感作したヒヨコは感作後７週間の間に有意なプラーク
形成を生じなかった。
ータはＮ及びＰ系試験によるデータよりも変化が少なく
、Ｎ系ヒヨコに？ｉｌＪ察されると同様の防御特徴を示
した。感作から２週後に培養したブロイラー家畜からの
腎臓にはプラークは何も形成されなかった。一方、感作
から５週後では免疫感作しないヒヨコに有意なレベルの
プラーク形成＜ｐ＜０．０１．３．２８．２８ｄｆ）が
観察サレ、更ニ感作カラ７週後では有意な増加（Ｐ＜０
．０１．３．４３．１５６ｆ）が観察された。一方、免
疫感作したヒヨコは感作後７週間の間に有意なプラーク
形成を生じなかった。
５ＰＡＦＡＳヒヨコからの培養物は、ＭＤＶ感染後２週
間（ｐ＜０．０１．３．２８．５８６ｆ） 、５週問（
Ｐ＜０．０１．５．６２．２０ｔＨ）及び７週間（ｐ
＜ ０．０１．３．３４゜３４１Ｈ）において、免疫し
ていないヒヨコからのものの方が免疫したヒヨコからの
ものよりはるかに高いプラーク増殖発生率を示した。
間（ｐ＜０．０１．３．２８．５８６ｆ） 、５週問（
Ｐ＜０．０１．５．６２．２０ｔＨ）及び７週間（ｐ
＜ ０．０１．３．３４゜３４１Ｈ）において、免疫し
ていないヒヨコからのものの方が免疫したヒヨコからの
ものよりはるかに高いプラーク増殖発生率を示した。
処理グループ同士のリンパ腫増殖比較によっても同様の
防護プロフィールが呈示される。免疫したＰ系統ヒヨコ
は免疫したＮ系統ヒヨコ、ブロイラーあるいは５ＰＡＦ
ＡＳより高いリンパ腫増殖発生率をＭＤＶ＠染後５週間
にわたり示したが、上記いずれの系統においても免疫し
たヒヨコは、ＭＤＶ感染させた免疫していないヒヨコに
比較するとはるかに良好に（ｐ＜０．０１）誘発から防
護された。
防護プロフィールが呈示される。免疫したＰ系統ヒヨコ
は免疫したＮ系統ヒヨコ、ブロイラーあるいは５ＰＡＦ
ＡＳより高いリンパ腫増殖発生率をＭＤＶ＠染後５週間
にわたり示したが、上記いずれの系統においても免疫し
たヒヨコは、ＭＤＶ感染させた免疫していないヒヨコに
比較するとはるかに良好に（ｐ＜０．０１）誘発から防
護された。
感染後２″Ｆ４間ではいずれの系統においても、感染さ
せた免疫済みヒヨコと感染させた未免疫ヒヨコとの間に
重大な相違は認められなかった。しかし、感染後５週間
経過するまでに、ＭＤＶ感染させた未免疫ヒヨコの７５
〜１００％でリンパ腫増殖が観察され、一方ＭＤＶ感染
させた免疫済みヒヨコの方はＰ系統ヒヨコのみが高率で
リンパ腫を増殖させた。とはいえ、免疫済みのＰ系統ヒ
ヨコの示したリンパ腫増殖は未免疫ヒヨコの示したもの
より５５％少なかった。Ｐ系統ヒヨコの場合感染後７週
間を経過するまでに、腫瘍の増殖を低下させる免疫化の
効果は失われ、全試験ヒヨコの９０〜１００ｘがリンパ
腫を増殖させた。感染後７週間の時点には免疫済みのＮ
系統ヒヨコ、ブロイラー及び５ＰＡＦＡＳにおいても、
５週間経過時のデータに比較すればリンパ腫増殖率の上
昇がみられた。ブロイラー及び５ＰＡＦＡＳの場合、免
疫化は感染後７週間においてもなお少なくとも５０％の
リンパ腫増殖率低下をもたらした。免疫済みのＮ系統ヒ
ヨコにおけるリンパ腫増殖は感染後７週間において、他
の免疫済みヒヨコ及び未免疫ヒヨコにおける増殖の４０
％を下回った。
せた免疫済みヒヨコと感染させた未免疫ヒヨコとの間に
重大な相違は認められなかった。しかし、感染後５週間
経過するまでに、ＭＤＶ感染させた未免疫ヒヨコの７５
〜１００％でリンパ腫増殖が観察され、一方ＭＤＶ感染
させた免疫済みヒヨコの方はＰ系統ヒヨコのみが高率で
リンパ腫を増殖させた。とはいえ、免疫済みのＰ系統ヒ
ヨコの示したリンパ腫増殖は未免疫ヒヨコの示したもの
より５５％少なかった。Ｐ系統ヒヨコの場合感染後７週
間を経過するまでに、腫瘍の増殖を低下させる免疫化の
効果は失われ、全試験ヒヨコの９０〜１００ｘがリンパ
腫を増殖させた。感染後７週間の時点には免疫済みのＮ
系統ヒヨコ、ブロイラー及び５ＰＡＦＡＳにおいても、
５週間経過時のデータに比較すればリンパ腫増殖率の上
昇がみられた。ブロイラー及び５ＰＡＦＡＳの場合、免
疫化は感染後７週間においてもなお少なくとも５０％の
リンパ腫増殖率低下をもたらした。免疫済みのＮ系統ヒ
ヨコにおけるリンパ腫増殖は感染後７週間において、他
の免疫済みヒヨコ及び未免疫ヒヨコにおける増殖の４０
％を下回った。
処理を施さなかったヒヨコ、あるいは上清での免疫化し
か行なわなかったヒヨコからはウィルスは回収されず、
またこのようなヒヨコでは腫瘍の増殖は観察されなかっ
た。
か行なわなかったヒヨコからはウィルスは回収されず、
またこのようなヒヨコでは腫瘍の増殖は観察されなかっ
た。
表 ７
Ｐ系統
処 理 ２週間 ５週間 ７週間す
上清＋ＨＯＶ ２／１０ ５／１２ １０／
１０ＨＤＶ ３／１２ ９／１０ ７
／７Ｎ系統 処 理 ２週間 ５ＬｉＬＭ Ｌ！
ｉＪｌ上清＋ＨＤＶ １／１５ １／１５
２／１２ＨＤＶ ２／１０
１１／１４ ６／１／１ａ；複数羽の日齢のと
ヨコに、免疫化量のセルフリーＪＨＶ−１培養上清を付
与し、あるいは付与しなかった。１５日目に、上記２種
のヒヨコのグルレープ各々の１７２にＨＤＶのＣｏｎｎ
８株２００〜５００ＰｒＬＩｓを付与した。ＭＤＶ感染
の２週間後、５週間後及び７週間後にアッセイを実施し
た。
１０ＨＤＶ ３／１２ ９／１０ ７
／７Ｎ系統 処 理 ２週間 ５ＬｉＬＭ Ｌ！
ｉＪｌ上清＋ＨＤＶ １／１５ １／１５
２／１２ＨＤＶ ２／１０
１１／１４ ６／１／１ａ；複数羽の日齢のと
ヨコに、免疫化量のセルフリーＪＨＶ−１培養上清を付
与し、あるいは付与しなかった。１５日目に、上記２種
のヒヨコのグルレープ各々の１７２にＨＤＶのＣｏｎｎ
８株２００〜５００ＰｒＬＩｓを付与した。ＭＤＶ感染
の２週間後、５週間後及び７週間後にアッセイを実施し
た。
ｂ；陽性ヒヨコの個体数／観察したヒヨコの総個体数。
リンパ腫の増殖は、未処理のヒヨコ、あるいは上清での
免疫化しか行なわなかったヒヨコでは一切観察されなか
った。
免疫化しか行なわなかったヒヨコでは一切観察されなか
った。
表 ８
ブロイラー
処 理 ２週間 １７週間
す
上清＋ＨＤＶ Ｏ／６ ０１５ １／６Ｈ
ＤＶ Ｏ／６ ５１５ ６／６十清
＋ＨＤＶ １／１３ １／７ ２／８ＨＤ
Ｖ １／Ｎｏ ６／８ ５／６ａ
−複数羽の日齢のヒヨコに、免疫化量のセルフリー Ｊ
ＨＶ−１培養物上清を付与し、あるいは付与しなかった
。１５日目に、上記２種のヒヨコのグループ各々の１／
２にＨＤＶのＣｏｎｎ３株２００〜５００ＰＦＵＳを付
与した。ＭＤＶ感染の２週間後、５週間後及び７週間後
にアッセイを実施した。
ＤＶ Ｏ／６ ５１５ ６／６十清
＋ＨＤＶ １／１３ １／７ ２／８ＨＤ
Ｖ １／Ｎｏ ６／８ ５／６ａ
−複数羽の日齢のヒヨコに、免疫化量のセルフリー Ｊ
ＨＶ−１培養物上清を付与し、あるいは付与しなかった
。１５日目に、上記２種のヒヨコのグループ各々の１／
２にＨＤＶのＣｏｎｎ３株２００〜５００ＰＦＵＳを付
与した。ＭＤＶ感染の２週間後、５週間後及び７週間後
にアッセイを実施した。
ｂ；陽性ヒヨコの個体数／観察したヒヨコの総個体数。
リンパ腫の増殖は、未処理のヒヨコ、あるいは上清での
免疫化しか行なわなかったヒヨコでは一切観察されなか
った。
免疫化しか行なわなかったヒヨコでは一切観察されなか
った。
実施例 ２
Ｊ）ＩＶ−１抗原による免疫とＨＤＶ感作とを順次行な
ったときの遅延型過敏（ＤＴＨ）反応に対する効果を測
定するために、被検ヒヨコを前記のごとく１グル一プ２
５羽以内の４グループに分割した。ＪＨＶ−１で免疫し
たＮ系統及びＰ系統のヒヨコのＤＴＨアツセイによれば
、この細胞性反応が、免疫又は非免疫のＮ系統のヒヨコ
ではＨＤＶ感染後には維持されていないが（表９）、Ｐ
系統のヒヨコでは維持されていることが判明した（ ｐ
＜ ０．０５）。Ｐ系統のヒヨコの１）１０反応は全
体としてＮ系統の反応よりもかなり低いように見えるが
、これはＰ系統のヒヨコの対照足ｙｔの特異的反応が別
の被検系統の場合よりも大きいことを反映している。
ったときの遅延型過敏（ＤＴＨ）反応に対する効果を測
定するために、被検ヒヨコを前記のごとく１グル一プ２
５羽以内の４グループに分割した。ＪＨＶ−１で免疫し
たＮ系統及びＰ系統のヒヨコのＤＴＨアツセイによれば
、この細胞性反応が、免疫又は非免疫のＮ系統のヒヨコ
ではＨＤＶ感染後には維持されていないが（表９）、Ｐ
系統のヒヨコでは維持されていることが判明した（ ｐ
＜ ０．０５）。Ｐ系統のヒヨコの１）１０反応は全
体としてＮ系統の反応よりもかなり低いように見えるが
、これはＰ系統のヒヨコの対照足ｙｔの特異的反応が別
の被検系統の場合よりも大きいことを反映している。
日齢の時期にＪＨＶ−１１１胞で免疫し引き続いてＨＤ
Ｖで感作したＳ系統及びに系統のヒヨコはいずれも、非
免疫対照にヨコを上回る統計的に有意なりＴＩＩ１１反
応く示さなかった。
Ｖで感作したＳ系統及びに系統のヒヨコはいずれも、非
免疫対照にヨコを上回る統計的に有意なりＴＩＩ１１反
応く示さなかった。
表 ９
ＪＭＶ−１細胞で免疫しＭＤＶで感作したヒヨコのＤＴ
Ｈ指数１ 処 置 ヒヨコ系統 Ｎ、Ｔ、 ＪＨＶ−１単独 ＪＨＶ−
１４ＨＤＶ Ｈ［１Ｖｉｌ独Ｎ系統８．４０８８．５
６ａｂ ２．９０ ２．９７ｂ ＰＪＫ統０．７８ａ０．９３ａＯ１７４ａ−０，１３ｂ
Ｋ系Ｍ ４．７０ａ５．２９ａ５．５６８２．８
０ａＳＭ統２．５２ａ２．７３ａ１．３１ａ１．７７ａ
ａ種々の上つき文字は系統内部の平均指数間の統計的に
有意な（ｐ ＜ ０．０５）差を示す。
Ｈ指数１ 処 置 ヒヨコ系統 Ｎ、Ｔ、 ＪＨＶ−１単独 ＪＨＶ−
１４ＨＤＶ Ｈ［１Ｖｉｌ独Ｎ系統８．４０８８．５
６ａｂ ２．９０ ２．９７ｂ ＰＪＫ統０．７８ａ０．９３ａＯ１７４ａ−０，１３ｂ
Ｋ系Ｍ ４．７０ａ５．２９ａ５．５６８２．８
０ａＳＭ統２．５２ａ２．７３ａ１．３１ａ１．７７ａ
ａ種々の上つき文字は系統内部の平均指数間の統計的に
有意な（ｐ ＜ ０．０５）差を示す。
ｓ 、 ５１ｃ 、遊離アッセイ
非産生細胞系ＪＨＶ−１と産生細胞系Ｈ８Ｂ−１とに対
するＮ系統、Ｐ系統、５ＰＡＦＡＳ及びブロイラーのヒ
ヨコの牌臓細胞の免疫反応性を検定するために標的細胞
のＨＤＶ感作の２．５及び７週後にアッセイを行なった
。更に、ＪＨＶ−１及ヒＨｓ［ｌ−ｉ 、及Ｕ、１ウェ
ル当り２Ｘ１０６細胞のプラーク形成単位（ＰＦＵ）を
約５０含むＨＤＶ感染腎臓細胞単層に対してｐ、ｉの３
．６．８及び１１日後にアッセイを行なった。６時間の
アッセイで全部の処置グループが未処置グループに比較
して有意な反応性を全く示さなかった。
するＮ系統、Ｐ系統、５ＰＡＦＡＳ及びブロイラーのヒ
ヨコの牌臓細胞の免疫反応性を検定するために標的細胞
のＨＤＶ感作の２．５及び７週後にアッセイを行なった
。更に、ＪＨＶ−１及ヒＨｓ［ｌ−ｉ 、及Ｕ、１ウェ
ル当り２Ｘ１０６細胞のプラーク形成単位（ＰＦＵ）を
約５０含むＨＤＶ感染腎臓細胞単層に対してｐ、ｉの３
．６．８及び１１日後にアッセイを行なった。６時間の
アッセイで全部の処置グループが未処置グループに比較
して有意な反応性を全く示さなかった。
遊離密度（ＳＲｌｓｐｅｃＲｉｃ ｒｅｌｅａｓｅ）は
−９，４７と８．０３との間で変化した（表１０．１１
及び１２）。
−９，４７と８．０３との間で変化した（表１０．１１
及び１２）。
Ｃ，プラーク阻害アッセイ
ＨＤＶ抗原に対する細胞性反応が、無細胞ＪＨＶ−１上
清で超免疫した成年ニワトリで生じるか否かを測定する
ためにプラーク阻害アッセイを行なった（表１３）。上
清免疫するが又は非免疫のに系統の同時にふ化したニワ
トリがら得たＰＢＬを、ＨＤＶ感染したに系統ニワトリ
のＰＢＬ標的に対するエフェクター細胞として使用する
と、Ｋ系統腎臓に重層されたＰＢＬ標的だけを含有する
対照培養物でのプラーク増殖に比較してに系統腎臓細胞
中で有意な程度（Ｐ ＜ ０．０００１）のプラーク阻
害が観察された。
清で超免疫した成年ニワトリで生じるか否かを測定する
ためにプラーク阻害アッセイを行なった（表１３）。上
清免疫するが又は非免疫のに系統の同時にふ化したニワ
トリがら得たＰＢＬを、ＨＤＶ感染したに系統ニワトリ
のＰＢＬ標的に対するエフェクター細胞として使用する
と、Ｋ系統腎臓に重層されたＰＢＬ標的だけを含有する
対照培養物でのプラーク増殖に比較してに系統腎臓細胞
中で有意な程度（Ｐ ＜ ０．０００１）のプラーク阻
害が観察された。
しかし乍ら、上清免疫ニワトリからのＰＢＬによって示
されたプラーク阻害の尾は、同時にふ化した非免疫ニワ
トリからのＰＢＬによって示された阻害に比較して有意
な差はなかった。これに相関してプラーク阻害の有意な
減少もなかった。
されたプラーク阻害の尾は、同時にふ化した非免疫ニワ
トリからのＰＢＬによって示された阻害に比較して有意
な差はなかった。これに相関してプラーク阻害の有意な
減少もなかった。
表 １０
Ｐ系統
処 置 ＬＪ ２Ｕ 互Ｊｉｌｔ上ｆｉ＋ＨＤＶ
ＪＨＶ−１０，００ｂ４．０２ ０．００８３Ｂ
−１４，５７１，１５０，００ ＨＤＶ ＪＭＶ−１０，６６３，１５０，００Ｈ
３Ｂ−１２，８７４，０００，００ 上清 ＪＨＶＩ ８．０３ ０．００ ２
．５２Ｈ３Ｂ−１５，６８０，３００，０２ Ｎ系統 処 置 標 的 ２二逓 −５３−
ＬＩ上清＋ＨＤＶ ＪＨＶ−１４，０７０，０９５，
２ＯＮＳＢ−１５，０３３，２９１，２２ ＨＤＶ ＪＭＶ−１２，３０３，００４，
０５Ｈ３Ｂ−１１，１０２，３２１，３１ 上清 Ｊ）４Ｖ−１０，００２，７６０，００Ｈ３
Ｂ−１１，２３３，４５０，００ ａ 免疫吊の無細胞ＪＨＶ−１培養土清で処置するか又
は処置しない日齢時期のヒヨコを用いた。１５日目に各
グル−プの１７２のサンプルに２００〜５００ＰＦｔｌ
のＨＤＶのＣｏｎｎＢ株を投与した。ＨＤＶ感作の２．
５及び７週後に７ツセイを行なった。
ＪＨＶ−１０，００ｂ４．０２ ０．００８３Ｂ
−１４，５７１，１５０，００ ＨＤＶ ＪＭＶ−１０，６６３，１５０，００Ｈ
３Ｂ−１２，８７４，０００，００ 上清 ＪＨＶＩ ８．０３ ０．００ ２
．５２Ｈ３Ｂ−１５，６８０，３００，０２ Ｎ系統 処 置 標 的 ２二逓 −５３−
ＬＩ上清＋ＨＤＶ ＪＨＶ−１４，０７０，０９５，
２ＯＮＳＢ−１５，０３３，２９１，２２ ＨＤＶ ＪＭＶ−１２，３０３，００４，
０５Ｈ３Ｂ−１１，１０２，３２１，３１ 上清 Ｊ）４Ｖ−１０，００２，７６０，００Ｈ３
Ｂ−１１，２３３，４５０，００ ａ 免疫吊の無細胞ＪＨＶ−１培養土清で処置するか又
は処置しない日齢時期のヒヨコを用いた。１５日目に各
グル−プの１７２のサンプルに２００〜５００ＰＦｔｌ
のＨＤＶのＣｏｎｎＢ株を投与した。ＨＤＶ感作の２．
５及び７週後に７ツセイを行なった。
ｂ 細胞溶解のパーセントは、処ｄヒョコの牌臓細胞の
存在下に遊離された５１Ｃｒの量から未処置ヒヨコの牌
臓細１嵜在下に遊離された５１Ｃｒの僅を減算して両者
の差を算出し、未処置ヒヨコの牌臓細胞の存在下にＭｖ
された５１０ｒの量を減算した５１Ｃｒの最大値（常に
１００）によって除算して得られる。
存在下に遊離された５１Ｃｒの量から未処置ヒヨコの牌
臓細１嵜在下に遊離された５１Ｃｒの僅を減算して両者
の差を算出し、未処置ヒヨコの牌臓細胞の存在下にＭｖ
された５１０ｒの量を減算した５１Ｃｒの最大値（常に
１００）によって除算して得られる。
表 １１
ブロイラー
処 置 標 的 ２二遍−１７二通上清＋
ＨＤＶ ＪＨＶ−１−１，５００，４５０，０４８Ｓ
Ｂ−１１，６２，７０２，３５ ＨＤＶ ＪＨＶ−１−１，８３０，１９０，１９
８３８−１１，２７１，９０１，８２ 上清 ＪＨＶ−１０，００２，１９０，００８３８
−１０，０９−２，０７１，４８ＰＡＦＡＳ 処 置 標 的 ２Ｕ 塁二遇
ヱーー週上清＋ＨＤＶ ＪＨＶ−１１，０５０，１５
−１，３６８３８−１−０，３６−８，１４ ＨＤＶ ＪＨＶ−１０，６６０，１８１，
３０Ｈ３Ｂ−１−０，７７−１１，１９ 上清 ＪＨＶ−１−０，５３−１，３５−１，７５
８３８−１−１，０８−９，４７ ａ 免疫化の無線Ｉｌｌ ＪＨＶ−１培養上清で処置す
るか又は処置しない日齢時期のヒヨコを用いた。１５日
目に各グル−プの１７２のサンプルに２００〜５ｏｏｐ
ｒｕのＨＤＶのＣｏｎｎ３株を投与した。ＨＤＶ感作の
２．５及び７週後にアッセイを行なった。
ＨＤＶ ＪＨＶ−１−１，５００，４５０，０４８Ｓ
Ｂ−１１，６２，７０２，３５ ＨＤＶ ＪＨＶ−１−１，８３０，１９０，１９
８３８−１１，２７１，９０１，８２ 上清 ＪＨＶ−１０，００２，１９０，００８３８
−１０，０９−２，０７１，４８ＰＡＦＡＳ 処 置 標 的 ２Ｕ 塁二遇
ヱーー週上清＋ＨＤＶ ＪＨＶ−１１，０５０，１５
−１，３６８３８−１−０，３６−８，１４ ＨＤＶ ＪＨＶ−１０，６６０，１８１，
３０Ｈ３Ｂ−１−０，７７−１１，１９ 上清 ＪＨＶ−１−０，５３−１，３５−１，７５
８３８−１−１，０８−９，４７ ａ 免疫化の無線Ｉｌｌ ＪＨＶ−１培養上清で処置す
るか又は処置しない日齢時期のヒヨコを用いた。１５日
目に各グル−プの１７２のサンプルに２００〜５ｏｏｐ
ｒｕのＨＤＶのＣｏｎｎ３株を投与した。ＨＤＶ感作の
２．５及び７週後にアッセイを行なった。
ｂ 細胞溶解のパーセントは、処置ヒヨコの牌臓細胞の
存在下に遊離された５１Ｃｒの量から未処置シし ヒヨコのＮ臓細胞存在下に遊離された５１Ｃｒの吊を減
算して両者の差を算出し、未処買ヒョコの牌臓細胞の存
在下に遊離された５１０ｒの量を減算した５１ｃｒの最
大Ｉ（常に１００）によって除算して得られる。
存在下に遊離された５１Ｃｒの量から未処置シし ヒヨコのＮ臓細胞存在下に遊離された５１Ｃｒの吊を減
算して両者の差を算出し、未処買ヒョコの牌臓細胞の存
在下に遊離された５１０ｒの量を減算した５１ｃｒの最
大Ｉ（常に１００）によって除算して得られる。
表 １２
アッセイ
遊離密度
ＪＨＶ−１３−３，１７−０，８６−１，７８６０，３
６０，６３０，１４ ８−０，９００，３５０，０８ １１０，０２０，３７０，５２ ８ＳＢ−１３０，２７１，３６１，４８６０，０２ｍｌ
０，０１−０，０ ７８Ｌ２７ １．０９ １．１ ７１１ １．０５ １．０３ −０．６３に系
統 ３ ４．０９ ４．６２ ６．４９感
染 ６ −０．６２ −２．１４ −２
．０３腎１ｍ ８ ０．０７ −０．８７
−２．８４１１ １．０５ １．０３
−０．６３に系統 健常 平均 −２，１５−Ｌ１５ −１．１５
腎臓 ｂｌｌｌ胞溶解のパーセントは、処置ヒヨコの牌臓細胞
の存在下に遊離された５１ ｃ 、の吊から未処置ヒヨ
コの牌臓細胞の存在下に遊離された５１ｃｒの量を減算
して両者の差を算出し、未処置ヒヨコの牌臓細胞の存在
下に遊離された５１ｃ、の稙を減算した５１Ｃｒの最大
値（常に１００）によって除算して得られる。
６０，６３０，１４ ８−０，９００，３５０，０８ １１０，０２０，３７０，５２ ８ＳＢ−１３０，２７１，３６１，４８６０，０２ｍｌ
０，０１−０，０ ７８Ｌ２７ １．０９ １．１ ７１１ １．０５ １．０３ −０．６３に系
統 ３ ４．０９ ４．６２ ６．４９感
染 ６ −０．６２ −２．１４ −２
．０３腎１ｍ ８ ０．０７ −０．８７
−２．８４１１ １．０５ １．０３
−０．６３に系統 健常 平均 −２，１５−Ｌ１５ −１．１５
腎臓 ｂｌｌｌ胞溶解のパーセントは、処置ヒヨコの牌臓細胞
の存在下に遊離された５１ ｃ 、の吊から未処置ヒヨ
コの牌臓細胞の存在下に遊離された５１ｃｒの量を減算
して両者の差を算出し、未処置ヒヨコの牌臓細胞の存在
下に遊離された５１ｃ、の稙を減算した５１Ｃｒの最大
値（常に１００）によって除算して得られる。
表 １３
上清免疫 ５．３０±４．８ １３．５７±１
３．０７ １３．８Ｂ±１３，３非免疫 １．３１
±６．１４ １９．３８−←１１．８４ １γ、７１±
８．６対 照 ５１．８６±１８．６０ａ Ｋ系
統腎臓中層中で増殖したプラークの平均数上平均の標準
誤差。標的はに系統ＨＯＶ ｇ作ヒヨコからのＰａｌで
ある。
３．０７ １３．８Ｂ±１３，３非免疫 １．３１
±６．１４ １９．３８−←１１．８４ １γ、７１±
８．６対 照 ５１．８６±１８．６０ａ Ｋ系
統腎臓中層中で増殖したプラークの平均数上平均の標準
誤差。標的はに系統ＨＯＶ ｇ作ヒヨコからのＰａｌで
ある。
実施例 ３
前述の４つの処理グループから得た血清を用いてｉｎ
ＶｉｔｒＯウィルス中和アッセイを行なった結果、ＭＤ
Ｖ感染操作に先立って無細胞Ｊ Ｍ Ｖ−１培養上澄み
で免疫処理したヒヨコは例外なく、免疫処理せずにＭＤ
ＶＩ染したヒヨコより大きい中和抗体価を生じることが
判明した。表１４はｐ、ｉ、２〜７遍間の５ＰＡＦＡＳ
ヒヨコとｐ、ｉ、５〜７週間のＰ及びＮ系統ヒヨコとに
関して、ＭＤＶに特異的なプラークの形成を９０％低下
させるのに必要な抗血清希釈度を示している。この表１
４には比較の目的で、前述のヒヨコから得た腎細胞培養
物から形成されたプラークの平均数と、リンパ腫発生率
とをも示した。
ＶｉｔｒＯウィルス中和アッセイを行なった結果、ＭＤ
Ｖ感染操作に先立って無細胞Ｊ Ｍ Ｖ−１培養上澄み
で免疫処理したヒヨコは例外なく、免疫処理せずにＭＤ
ＶＩ染したヒヨコより大きい中和抗体価を生じることが
判明した。表１４はｐ、ｉ、２〜７遍間の５ＰＡＦＡＳ
ヒヨコとｐ、ｉ、５〜７週間のＰ及びＮ系統ヒヨコとに
関して、ＭＤＶに特異的なプラークの形成を９０％低下
させるのに必要な抗血清希釈度を示している。この表１
４には比較の目的で、前述のヒヨコから得た腎細胞培養
物から形成されたプラークの平均数と、リンパ腫発生率
とをも示した。
ｐ、ｉ、２週間では５ＰＡＩ’ＡＳヒヨコに関しては免
疫したグループでも免疫していないグループでも検出し
得る中和抗体は発生しなかったが、非免疫ヒヨコにはＭ
ＤＶに特異的なプラークの形−成及びリンパ腫の発生が
見られた。ｐ、ｉ、５週間では、５ＰＡＦＡＳ。
疫したグループでも免疫していないグループでも検出し
得る中和抗体は発生しなかったが、非免疫ヒヨコにはＭ
ＤＶに特異的なプラークの形−成及びリンパ腫の発生が
見られた。ｐ、ｉ、５週間では、５ＰＡＦＡＳ。
Ｐ系統及びＮ系統のヒヨコ総てが４０より大きい抗体価
を示した。この抗体価は日齢時期のヒヨコをＭＤＶ感染
操作の２週間前に無細胞Ｊ Ｍ Ｖ−１培養上澄みで免
疫処理した場合に生じる価である。これに対し、感染操
作に先立って免疫しなかったヒヨコのうちｐ、ｉ、５週
間で検出し得る抗体価を生じたのはＮ系統ヒョコー羽の
みであり、５ＰＡＦＡＳヒヨコ及びＰ系統ヒヨコでは一
羽もいなかった。このｐ、ｉ、時点ｔ’ ハ、免疫セｆ
ｋ−ＭＤＶ感染シタ５ＰＡＦＡＳ及びＰ系統ヒヨコ全部
と、２つのＮ系統ヒヨコのうちの一方とについて、腎Ｓ
胞培養物から多くのウィルスが回収された。８０のＶＮ
価を示したもう一方のＮ系統ヒヨコから培養した腎細胞
にはプラークの形成が殆んど見られなかった。ｐ、ｉ、
７週間では、ＭＤＶ感染に先立って上澄みによる免疫を
受けた総ての系統のヒヨコが４０より大きい抗体価を維
持していた。ウィルス回収率は低いままであり、リンパ
腫の発生は見られなかつｔζが、例外として、５ＰＡＦ
ＡＳヒヨコの一羽は４０の抗体価を示した。
を示した。この抗体価は日齢時期のヒヨコをＭＤＶ感染
操作の２週間前に無細胞Ｊ Ｍ Ｖ−１培養上澄みで免
疫処理した場合に生じる価である。これに対し、感染操
作に先立って免疫しなかったヒヨコのうちｐ、ｉ、５週
間で検出し得る抗体価を生じたのはＮ系統ヒョコー羽の
みであり、５ＰＡＦＡＳヒヨコ及びＰ系統ヒヨコでは一
羽もいなかった。このｐ、ｉ、時点ｔ’ ハ、免疫セｆ
ｋ−ＭＤＶ感染シタ５ＰＡＦＡＳ及びＰ系統ヒヨコ全部
と、２つのＮ系統ヒヨコのうちの一方とについて、腎Ｓ
胞培養物から多くのウィルスが回収された。８０のＶＮ
価を示したもう一方のＮ系統ヒヨコから培養した腎細胞
にはプラークの形成が殆んど見られなかった。ｐ、ｉ、
７週間では、ＭＤＶ感染に先立って上澄みによる免疫を
受けた総ての系統のヒヨコが４０より大きい抗体価を維
持していた。ウィルス回収率は低いままであり、リンパ
腫の発生は見られなかつｔζが、例外として、５ＰＡＦ
ＡＳヒヨコの一羽は４０の抗体価を示した。
ＭＤ９感染に先立って免疫しなかったＮ系統ヒヨコは４
０の抗体価を維持し、それに付随してウィルス回収率が
低く且つリンパ腫の発生は見られなかった。しかしなが
ら、この処理グループのＰ系統及びＳＰ＾［ＡＳヒョコ
は検出しくｑる抗体価を生じなかった。ウィルス回収率
は依然として高く、リンパ腫の発生も明白であった。
０の抗体価を維持し、それに付随してウィルス回収率が
低く且つリンパ腫の発生は見られなかった。しかしなが
ら、この処理グループのＰ系統及びＳＰ＾［ＡＳヒョコ
は検出しくｑる抗体価を生じなかった。ウィルス回収率
は依然として高く、リンパ腫の発生も明白であった。
ＭＤＶ感染を行なわない場合には、時間に関係なく、い
ずれのヒヨコでもウィルス中和抗体価が生じることはな
かった。これらのアッセイは総て、ＭＤＶ回復期血清を
陽性対照として使用し且つ日齢時期の５ＰＡＦＡＳヒヨ
コの血清を陰性対照として使用しながら行なった。
ずれのヒヨコでもウィルス中和抗体価が生じることはな
かった。これらのアッセイは総て、ＭＤＶ回復期血清を
陽性対照として使用し且つ日齢時期の５ＰＡＦＡＳヒヨ
コの血清を陰性対照として使用しながら行なった。
Ｂ、母児抗体アッセイ
成長したに系統雌親をＡＧＩＤで予テストし且つ腎細胞
培養によってＭ Ｄ Ｖの存在を調べた後、無細胞Ｊ
Ｍ Ｖ−１培養上澄みにより１４週間に亘って高度免疫
処理した。これらの雌親の子供と免疫してないに系統ハ
ツチメート（ｈａｔｃｈｍａｔｅｓ ）の子供とを、日
齢時期に５００ ＰＦＵのＣｏｎｎ ＢＨＤＶで感染処
理した。
培養によってＭ Ｄ Ｖの存在を調べた後、無細胞Ｊ
Ｍ Ｖ−１培養上澄みにより１４週間に亘って高度免疫
処理した。これらの雌親の子供と免疫してないに系統ハ
ツチメート（ｈａｔｃｈｍａｔｅｓ ）の子供とを、日
齢時期に５００ ＰＦＵのＣｏｎｎ ＢＨＤＶで感染処
理した。
ｐ、ｉ、２週間でこれらのヒヨコを心臓穿刺により放血
処理し、大きい腫瘍の形成を調べ、且つ腎臓を培養して
ＭＤＶに特異的なＣＰＥの発生を観察した。上澄みで免
疫した雌親の子供と免疫しなかった雌親の子供との間に
は腎細胞培養におけるプラークの形成に関して大きな差
は見られなかった。
処理し、大きい腫瘍の形成を調べ、且つ腎臓を培養して
ＭＤＶに特異的なＣＰＥの発生を観察した。上澄みで免
疫した雌親の子供と免疫しなかった雌親の子供との間に
は腎細胞培養におけるプラークの形成に関して大きな差
は見られなかった。
（表１５）。
表 １４
Ｐ系統 ５ ８０ ４．７ − ＜
２０ ７０．６ ４１６０ １．０
− ＜２０ ４８．０
＋７４００．６ − ＜２０
７２．０ ÷（＋）対照、 ＞６４０
（−）対照 ：〈２０上ｆｆｉミノミニ ＜２０未
！ｉ！ＩＦＩ！ ： ＜２Ｏ ＮＭ片５ ３２０ ０．０ − ＜２０
＞２００．０ ＋１６０ ０．６
− ８０ ０．６ ÷７ ８０
０．６ − ４０ ０．６
−３２Ｑ Ｏ，Ｑ −４００，０−（
＋）対照：４０（−）対照 ： 〈５上澄みのみ
：〈５未処理：＜２０ ａ：血清中和価（ＳＮ）＝プラーク形成を９０％低下さ
せる最大希釈度の逆数。
２０ ７０．６ ４１６０ １．０
− ＜２０ ４８．０
＋７４００．６ − ＜２０
７２．０ ÷（＋）対照、 ＞６４０
（−）対照 ：〈２０上ｆｆｉミノミニ ＜２０未
！ｉ！ＩＦＩ！ ： ＜２Ｏ ＮＭ片５ ３２０ ０．０ − ＜２０
＞２００．０ ＋１６０ ０．６
− ８０ ０．６ ÷７ ８０
０．６ − ４０ ０．６
−３２Ｑ Ｏ，Ｑ −４００，０−（
＋）対照：４０（−）対照 ： 〈５上澄みのみ
：〈５未処理：＜２０ ａ：血清中和価（ＳＮ）＝プラーク形成を９０％低下さ
せる最大希釈度の逆数。
ｂ：テストしたヒヨコからの腎細胞培養物３つ分のプラ
ーク数の平均値。
ーク数の平均値。
Ｃ： （＋）及び（−）はテストしたヒヨコ体内におけ
る大きなリンパ腫の有無を示ず。
る大きなリンパ腫の有無を示ず。
表 １５
免疫した雌親の子供 免疫してない雌親の子供１４．５
８±１３．７６ ２０．０５±２５．４０ａ゛
プラークの数は細胞数２Ｘ １０６の培養３つで増殖し
たグループ当り２０の腎細胞培養の平均値である。
８±１３．７６ ２０．０５±２５．４０ａ゛
プラークの数は細胞数２Ｘ １０６の培養３つで増殖し
たグループ当り２０の腎細胞培養の平均値である。
Ｃ３Ａｇｉｄプロフィル
総ての処理グループからのＮ系統及びＰ系統ヒヨコの寒
天ゲル免疫拡散プロフィルを表１６に示す。
天ゲル免疫拡散プロフィルを表１６に示す。
ＭＤＶ感染を行なわないと、時間に関係なく、沈降性抗
体の反応は生じなかった。ＭＤＶ感染処理したグループ
ではＡＧＩＤ陽性対ＡＧＩＤ陰性のヒヨコ数に大きな差
は見られない。
体の反応は生じなかった。ＭＤＶ感染処理したグループ
ではＡＧＩＤ陽性対ＡＧＩＤ陰性のヒヨコ数に大きな差
は見られない。
表 １６
（＋） （−） （÷） （−） （＋） （−）
上澄ミ＋ＨＤＶ Ｎ系統２ ４ ６０ ４０Ｐ系
統 ３ ３ ３３ ６０ ＨＤＶ（７）ミＮ系統１ ５ ６０ ４２Ｐ系統
１ ３ ４ ０ ａ：ＡＧＩＤが陽性又は陰性であるヒヨコの数。未処理
のヒヨコ及び上澄み免疫しただけのヒヨコの血清は総て
陰性であった。
上澄ミ＋ＨＤＶ Ｎ系統２ ４ ６０ ４０Ｐ系
統 ３ ３ ３３ ６０ ＨＤＶ（７）ミＮ系統１ ５ ６０ ４２Ｐ系統
１ ３ ４ ０ ａ：ＡＧＩＤが陽性又は陰性であるヒヨコの数。未処理
のヒヨコ及び上澄み免疫しただけのヒヨコの血清は総て
陰性であった。
ＪＭＶ−１上澄みワクチンの効力を細胞結合ＨＶＴワク
チンの効力と比較し、ワクチン処理したトリをワクチン
後７日及び１４日でＪＭＶ感染物質を用いて感染操作す
ることによりその効力を測定した。
チンの効力と比較し、ワクチン処理したトリをワクチン
後７日及び１４日でＪＭＶ感染物質を用いて感染操作す
ることによりその効力を測定した。
使用したトリはイリノイ州ＳＰＦ、 ５ｐａｒａｓ Ｉ
ｎｃ、から入手した４５個の受精卵を軒化したものであ
る。
ｎｃ、から入手した４５個の受精卵を軒化したものであ
る。
細胞数３．３Ｘ１０６／ｄで細胞を用いて７／１０と称
する凍結乾燥ＪＭＶ−１上澄みワクチンを製造した。
する凍結乾燥ＪＭＶ−１上澄みワクチンを製造した。
細胞数５．２ｘ１０６／ｘｉ！で細胞を使用して７／１
８と称づる凍結乾燥ＪＭＶ−１上澄みワクチンを製造し
且つ細胞数３．８Ｘ １０６／ｄで細胞を用いて７／２
３と称する凍結乾燥Ｊ Ｍ Ｖ−１上澄みワクチンを製
造した。
８と称づる凍結乾燥ＪＭＶ−１上澄みワクチンを製造し
且つ細胞数３．８Ｘ １０６／ｄで細胞を用いて７／２
３と称する凍結乾燥Ｊ Ｍ Ｖ−１上澄みワクチンを製
造した。
４０羽／グループの数グループのトリに、ＪＭＶ−１上
澄みワクチンの１×１０６細胞等価物を腹腔内（ＩＰ）
接種した。°用量は７／１８及び７／２３が０．２ｄ／
トリ、７／１０が０．３ｄ／トリである。ワクチンはい
ずれも殺菌マレック希釈剤を用いて戻した。−緒に罫化
したヒヨコ２０羽の首筋に細胞結合ＨＶＴワクチンを０
．２ａｔｅの用量で皮下投与した。−緒に幹化したヒヨ
コ２０羽からなるグループ３つを各々隔離して配置した
。２つのグループのトリを非ワクチン処理感染対照とし
て用い、第３のグループを非ワクチン非感染処理対照と
して用いた。日齢１のヒヨコに感染物質を２度与えた。
澄みワクチンの１×１０６細胞等価物を腹腔内（ＩＰ）
接種した。°用量は７／１８及び７／２３が０．２ｄ／
トリ、７／１０が０．３ｄ／トリである。ワクチンはい
ずれも殺菌マレック希釈剤を用いて戻した。−緒に罫化
したヒヨコ２０羽の首筋に細胞結合ＨＶＴワクチンを０
．２ａｔｅの用量で皮下投与した。−緒に幹化したヒヨ
コ２０羽からなるグループ３つを各々隔離して配置した
。２つのグループのトリを非ワクチン処理感染対照とし
て用い、第３のグループを非ワクチン非感染処理対照と
して用いた。日齢１のヒヨコに感染物質を２度与えた。
この感染物質の力価を日齢１週間及び２週間のヒヨコに
関して調べた。これらの日齢における力価は夫々４．７
４．２１０ ＣＩＤ
１０．２ｄ及び１０ ＣＩＤ５゜１０．２ ｊｄ！で
あった。ＪＭＶは約２５００ Ｉ Ｄ ５ｏ１０．２ｄ
含まれるように希釈した。
関して調べた。これらの日齢における力価は夫々４．７
４．２１０ ＣＩＤ
１０．２ｄ及び１０ ＣＩＤ５゜１０．２ ｊｄ！で
あった。ＪＭＶは約２５００ Ｉ Ｄ ５ｏ１０．２ｄ
含まれるように希釈した。
ワクチン接種後（ＰＶ）７日で各ワクチン接種グループ
からの２０羽のトリと、非ワクチン処理対照２０羽とを
感染用量０．２Ｉｌ１７！で希釈感染物質により感染処
理した。
からの２０羽のトリと、非ワクチン処理対照２０羽とを
感染用量０．２Ｉｌ１７！で希釈感染物質により感染処
理した。
ワクチン接種から１４日後に、残りのワクチン接種動物
（ワクチン当り２０羽）と非ワクチン接種感染対照２０
羽とを２５０ＣＩ Ｄ５ｏ１０．２ ｄの用量でＩＰ感
染処理した。感染したトリを、感染後３〜１４日の時点
で、ＪＭＶ感染に起因する死亡率に関して観察した。こ
のテストは２次感作処理から１４日後に終了した。各感
作（感染）処理は対照の少なくとも８０％が死亡すれば
有効と見なした。このテストは各感作処理毎にＨＶＴト
リの９０％が生き残れば有効と見なした。
（ワクチン当り２０羽）と非ワクチン接種感染対照２０
羽とを２５０ＣＩ Ｄ５ｏ１０．２ ｄの用量でＩＰ感
染処理した。感染したトリを、感染後３〜１４日の時点
で、ＪＭＶ感染に起因する死亡率に関して観察した。こ
のテストは２次感作処理から１４日後に終了した。各感
作（感染）処理は対照の少なくとも８０％が死亡すれば
有効と見なした。このテストは各感作処理毎にＨＶＴト
リの９０％が生き残れば有効と見なした。
ワクチン接種後（ＰＶ）７日の感染処理対照の９５％が
死亡した。Ｐ Ｖ １４日の感染処理対照の死亡率は８
９％であった。ＨＶＴワクチンは接種後７日及び１４日
の感染処理で夫々９０％及び１００ｘの感染保護効果を
もたらした。７／１８と称するワクチンは接種後７日の
感染に対して６３％の保護効果を示し、接種後１４日の
感染に対して５５％の保護効果を示した。１／２３ワク
チンを接種すると接種後７日の感染に対して６５％、１
４日の感染に対して５３％の保護が得られた。７／１０
ワクチンを接種すると接種少７日の感染に対して５５％
、１４日の感染に対して４５％の保護が得られた。これ
より前の検査では、１×１０ ／７ｄまで増殖した細
胞培養の上澄みを除去して凍結したものから製造したＪ
ＭＶ−１上澄みワクチンを接種すると、７日後の感染に
対して４５％、１４日後の感染に対して３０％の保護が
得られた。
死亡した。Ｐ Ｖ １４日の感染処理対照の死亡率は８
９％であった。ＨＶＴワクチンは接種後７日及び１４日
の感染処理で夫々９０％及び１００ｘの感染保護効果を
もたらした。７／１８と称するワクチンは接種後７日の
感染に対して６３％の保護効果を示し、接種後１４日の
感染に対して５５％の保護効果を示した。１／２３ワク
チンを接種すると接種後７日の感染に対して６５％、１
４日の感染に対して５３％の保護が得られた。７／１０
ワクチンを接種すると接種少７日の感染に対して５５％
、１４日の感染に対して４５％の保護が得られた。これ
より前の検査では、１×１０ ／７ｄまで増殖した細
胞培養の上澄みを除去して凍結したものから製造したＪ
ＭＶ−１上澄みワクチンを接種すると、７日後の感染に
対して４５％、１４日後の感染に対して３０％の保護が
得られた。
表 １１
ＨＶＴ １８／２０ ９０
２０／２０ １００７／１０ＪＨＶ−１１１／２
０ ５５ ９／２０ ４５７／１
８ＪＨＶ−１１２／１９ ６３ １１／２０
５５７／２３ＪＨＶ−１１３／２０ ６
５ １０／１９ ５３非ワクチン接種 感染対照 １／２０ ５ ２／１９ １１
非ワクチン接種 非感染処理対照 ａ：ＨＶ Ｔワクチンは皮下投与した。ＪＭＶ−１ワク
ヂンは腹腔的投与した。
２０／２０ １００７／１０ＪＨＶ−１１１／２
０ ５５ ９／２０ ４５７／１
８ＪＨＶ−１１２／１９ ６３ １１／２０
５５７／２３ＪＨＶ−１１３／２０ ６
５ １０／１９ ５３非ワクチン接種 感染対照 １／２０ ５ ２／１９ １１
非ワクチン接種 非感染処理対照 ａ：ＨＶ Ｔワクチンは皮下投与した。ＪＭＶ−１ワク
ヂンは腹腔的投与した。
２．４
ｂ；感染処理はいずれもヒヨコ当り１０ＣＩＤ５ｏでＪ
ＭＶ−ＩＣＰ２を腹腔的投与することによって行った。
ＭＶ−ＩＣＰ２を腹腔的投与することによって行った。
実施例 ５
ＪＭＶ−１上澄みワクチンの効力
日齢１のＳＰＦ及びブロイラーチキン４０羽からなるグ
ループに下記のＭＤワクヂンを皮下投与し得る。
ループに下記のＭＤワクヂンを皮下投与し得る。
１．１−ＩＶＴ
２、ＪＭＶ−１上澄み
３、ＨＶＴ＋５Ｂ−１
４、ＨＶＴ十上澄み
各ワクブングループからの２０羽のワクチン接種動物と
２０羽の非ワクチン処理感染対照とを、毒性の極めて強
いＭＤ株ＲＢＩＢを接種してから７日後に感染処理し、
５６日間観察する。この間に生存者を剖検して腫瘍を調
べる。接種から１４日後に残りのワクチン接種動物と２
０羽の非ワクチン接種感染対照とを前述の如くチャレン
ジ処理する。
２０羽の非ワクチン処理感染対照とを、毒性の極めて強
いＭＤ株ＲＢＩＢを接種してから７日後に感染処理し、
５６日間観察する。この間に生存者を剖検して腫瘍を調
べる。接種から１４日後に残りのワクチン接種動物と２
０羽の非ワクチン接種感染対照とを前述の如くチャレン
ジ処理する。
実施例 ６
ニワトリをマレック病に対して免疫するための組成物は
ＪＨＶ−１上澄みと適当な担体とから製造し得る。この
上澄みワクチンは凍結乾燥後も有効であるため、凍結乾
燥ワクチンを製造することができる。また、ＨＶＴと上
澄みワクチンとを組合わせたものも使用し得る。このワ
クチンに適した担体の１つは、約５％のＡｒ１ａＣｅＩ
Ａ、 ９４％のＤｒａｋｅＯＩ６−ＶＲ及び１％のＴ
ｗｅｅｎ ２０からなる。このワクチンはニワトリの年
令に係わりなく、好ましくは腹腔的投与又は皮下投与に
より接種し得る。このワクチンを接種したトリはマレッ
ク病に起因する病気、抑圧状態又は死去から保護される
ことになる。
ＪＨＶ−１上澄みと適当な担体とから製造し得る。この
上澄みワクチンは凍結乾燥後も有効であるため、凍結乾
燥ワクチンを製造することができる。また、ＨＶＴと上
澄みワクチンとを組合わせたものも使用し得る。このワ
クチンに適した担体の１つは、約５％のＡｒ１ａＣｅＩ
Ａ、 ９４％のＤｒａｋｅＯＩ６−ＶＲ及び１％のＴ
ｗｅｅｎ ２０からなる。このワクチンはニワトリの年
令に係わりなく、好ましくは腹腔的投与又は皮下投与に
より接種し得る。このワクチンを接種したトリはマレッ
ク病に起因する病気、抑圧状態又は死去から保護される
ことになる。
第１図は正常なウサギ血清（ＮＲ８）又は免疫ウサギ血
清（Ｒ−アルファーＪＭＶ−１）を用いた、免疫物質で
予処理する前及び後において、弱毒化Ｊ Ｍ Ｖ−１細
胞及びＪ Ｍ Ｖ−１培養上澄みにより移植性ＪＭＶに
対して保護されたニワトリの％を示すグラフである。 出願人 サルスベリイ・ラボラトリーズ・インコーホレ
イテッド 代理人 弁理士 川 口 義 雄 代理人 弁理士 中 村 至 図面の浄書（内容に変更なし） Ｆ襠ぼｅＩ Ｋ勾阿マ―Ｉ 沖−神ｆｆ−１手続補正
書 昭和６２年６月１０日 特許庁長官 黒 １）明 雄 殿 １、事件の表示 昭和６２年特許願第１０８７６０
号事件との関係 特許出願人 名 称 サルスベリイ・ラボラトリーズ・インコ
ーホレイテッド ５、補正命令の日付 自 発 ６、補正により増加する発明の数 ７、補正の対象 明細書 ８、補正の内容 正式明細書を別紙の通り補充する
。 （内容に変更なし） 手続補正書（方式） ％式％ １、事件の表示 、昭和６２年特許願第１０８７６
０号２、発明の名称 マレック病予防用ワクチン３
、補正をする者 ゛１．：事件との関係 特許出願人 名 称 サルスベリイ・ラボラトリーズ・インコ
ーホレイテッド ４、代 理 人 東京都新宿区新宿１丁目１番１４
号 山田ピル及び委任状 ７、補正の内容 （１）黒色で鮮明に描いた適正な図面を別超の通り補充
する。（内容に変更なし） （２）鮮明に浄書した明細書については本願に関する昭
和６２年６月１０日付の手続補正書（自発）にて、出願
人の代表者を記載した適正なｍ出及び委任状については
本願に関する昭和６２年７月２日付の手続補正書（自発
）にてそれぞれ提出致しました。
清（Ｒ−アルファーＪＭＶ−１）を用いた、免疫物質で
予処理する前及び後において、弱毒化Ｊ Ｍ Ｖ−１細
胞及びＪ Ｍ Ｖ−１培養上澄みにより移植性ＪＭＶに
対して保護されたニワトリの％を示すグラフである。 出願人 サルスベリイ・ラボラトリーズ・インコーホレ
イテッド 代理人 弁理士 川 口 義 雄 代理人 弁理士 中 村 至 図面の浄書（内容に変更なし） Ｆ襠ぼｅＩ Ｋ勾阿マ―Ｉ 沖−神ｆｆ−１手続補正
書 昭和６２年６月１０日 特許庁長官 黒 １）明 雄 殿 １、事件の表示 昭和６２年特許願第１０８７６０
号事件との関係 特許出願人 名 称 サルスベリイ・ラボラトリーズ・インコ
ーホレイテッド ５、補正命令の日付 自 発 ６、補正により増加する発明の数 ７、補正の対象 明細書 ８、補正の内容 正式明細書を別紙の通り補充する
。 （内容に変更なし） 手続補正書（方式） ％式％ １、事件の表示 、昭和６２年特許願第１０８７６
０号２、発明の名称 マレック病予防用ワクチン３
、補正をする者 ゛１．：事件との関係 特許出願人 名 称 サルスベリイ・ラボラトリーズ・インコ
ーホレイテッド ４、代 理 人 東京都新宿区新宿１丁目１番１４
号 山田ピル及び委任状 ７、補正の内容 （１）黒色で鮮明に描いた適正な図面を別超の通り補充
する。（内容に変更なし） （２）鮮明に浄書した明細書については本願に関する昭
和６２年６月１０日付の手続補正書（自発）にて、出願
人の代表者を記載した適正なｍ出及び委任状については
本願に関する昭和６２年７月２日付の手続補正書（自発
）にてそれぞれ提出致しました。
Claims (23)
- （１）ヘルペスウィルスまたはその血清学的に関連した
菌株による感染から動物を防御する弱毒化リンパ芽球細
胞系の全生存細胞の培養物の無細胞上清。 - （２）ヘルペスウィルスが鳥類のヘルペスウィルスであ
る特許請求の範囲第１項に記載の上清。 - （３）ヘルペスウィルスがマレツク病ウィルスである特
許請求の範囲第２項に記載の上清。 - （４）菌株が血清学的にマレック病ウィルスに関連して
いる特許請求の範囲第１項に記載の上清。 - （５）菌株がＪＭＶ−１（ＡＴＣＣ Ｎｏ．ＣＲＬ９０
９３）と呼称される弱毒化リンパ芽球細胞系である特許
請求の範囲第４項に記載の上清。 - （６）動物が鳥類である特許請求の範囲第１項に記載の
上清。 - （７）動物がニワトリである特許請求の範囲第６項に記
載の上清。 - （８）動物にヘルペスウィルスまたはその血清学的に関
連した菌株による感染に対する能動免疫を付与するため
のワクチンであつて、有効免疫量の特許請求の範囲第１
項に記載の無細胞上清と適当なキャリアとを含むワクチ
ン。 - （９）ヘルペスウィルスが鳥類のヘルペスウィルスであ
る特許請求の範囲第８項に記載のワクチン。 - （１０）ヘルペスウィルスがマレツク病ウィルスである
特許請求の範囲第９項に記載のワクチン。 - （１１）菌株が血清学的にマレック病ウィルスに関連し
ている特許請求の範囲第８項に記載のワクチン。 - （１２）菌株がＪＨＶ−１（ＡＴＣＣ Ｎｏ．ＣＲＬ９
０９３）と呼称される弱毒化リンパ芽球細胞系である特
許請求の範囲第１１項に記載のワクチン。 - （１３）動物が鳥類である特許請求の範囲第８項に記載
のワクチン。 - （１４）動物がニワトリである特許請求の範囲第１３項
に記載のワクチン。 - （１５）ニワトリにマレック病ウィルスまたはその血清
学的に関連した菌株による感染に対する能動免疫を付与
するためのワクチンであって、有効免疫量の特許請求の
範囲第３項に記載の無細胞上清と適当なキャリアとを含
むワクチン。 - （１６）菌株がＪＨＶ−１（ＡＴＣＣ Ｎｏ．ＣＲＬ９
０９３）と呼称される弱毒化リンパ芽球細胞系である特
許請求の範囲第１５項に記載のワクチン。 - （１７）特許請求の範囲第１項に記載の上清の製造方法
であって、 ａ）ヘルペスウィルスまたはその血清学的に関連した菌
株の全生存細胞の培養物を遠心分離して上清と細胞とを
分離し、 ｂ）工程ａ）の生成物を処理して細胞を除去し、ｃ）上
清を回収することからなる方法。 - （１８）ニワトリにマレック病ウィルスまたはその血清
学的に関連した菌株による感染に対する能動免疫を付与
する方法であって、ニワトリに有効免疫量の特許請求の
範囲第１項に記載の上清を投与することからなる方法。 - （１９）有効免疫量が約０．２ｍｌ以上である特許請求
の範囲第１８項に記載の方法。 - （２０）ニワトリをマレツク病ウィルスまたはその血清
学的に関連した菌株による感染から防御する方法であっ
て、ニワトリに適当量の特許請求の範囲第１５項に記載
のワクチンを投与することからなる方法。 - （２１）動物をヘルペスウィルスまたはその血清学的に
関連した菌株による感染から防御する方法であつて、動
物に適当量の特許請求の範囲第８項に記載のワクチンを
投与することからなる方法。 - （２２）特許請求の範囲第１項に記載の無細胞上清から
誘導される免疫性付与剤。 - （２３）特許請求の範囲第１項に記載の凍結乾燥上清。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US85860486A | 1986-05-01 | 1986-05-01 | |
| US858604 | 1986-05-01 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6322028A true JPS6322028A (ja) | 1988-01-29 |
Family
ID=25328693
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62108760A Pending JPS6322028A (ja) | 1986-05-01 | 1987-05-01 | マレツク病予防用ワクチン |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0244760A3 (ja) |
| JP (1) | JPS6322028A (ja) |
| AU (1) | AU7243187A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002247979A (ja) * | 2001-02-23 | 2002-09-03 | Nippon Biologicals Inc | マレック病ワクチンおよびその製造方法 |
| US8294029B2 (en) | 2006-12-26 | 2012-10-23 | Asahi Kasei Fibers Corporation | Expandable electric cord and production method thereof |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3981771A (en) * | 1973-07-19 | 1976-09-21 | Martin Sevoian | Marek's disease vaccine |
-
1987
- 1987-04-30 EP EP87106271A patent/EP0244760A3/en not_active Withdrawn
- 1987-05-01 JP JP62108760A patent/JPS6322028A/ja active Pending
- 1987-05-01 AU AU72431/87A patent/AU7243187A/en not_active Abandoned
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002247979A (ja) * | 2001-02-23 | 2002-09-03 | Nippon Biologicals Inc | マレック病ワクチンおよびその製造方法 |
| US8294029B2 (en) | 2006-12-26 | 2012-10-23 | Asahi Kasei Fibers Corporation | Expandable electric cord and production method thereof |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU7243187A (en) | 1987-11-05 |
| EP0244760A2 (en) | 1987-11-11 |
| EP0244760A3 (en) | 1988-08-03 |
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