JPH01272529A - 混合生ワクチン - Google Patents

混合生ワクチン

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JPH01272529A
JPH01272529A JP1055969A JP5596989A JPH01272529A JP H01272529 A JPH01272529 A JP H01272529A JP 1055969 A JP1055969 A JP 1055969A JP 5596989 A JP5596989 A JP 5596989A JP H01272529 A JPH01272529 A JP H01272529A
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は伝染性気管支炎ウィルスを含有する混合生ワク
チンに関する。
伝染性気管支炎ウィルス([BV)は、鳥類、特に家禽
に感染力を有するコロナウィルスの一種である。本ウィ
ルスに感染すると、気管う音、咳、くしゃみ、鼻水が特
徴の急性呼吸器疾患を引き起こす。伝染性気管支炎(i
、b、)は羅患ニワトリの間にかなりの死亡率を生じる
恐れがあり、さらにニワトリの腎臓を損傷する恐れがあ
る。産卵鶏と繁殖雌鶏では、その感染により、生殖路n
傷による卵生産低下が起こる恐れがある。多くの場合、
産卵低下には■;痢を起こす陽炎が伴う。
ワクヂン接種により18M感染に対して家禽を防護でき
る。ざらに、できるだけ若い時期に防護するのが望まし
い。これらの若鶏は、ニューカッスル病ウィルス(NO
V)、伝染性嚢包症ウィルス(I BDV) 、マレク
病ウィルス(MDV)、その他の鳥類ヘルペスウィルス
、鶏痘ウィルス(FPV) 、鳥類脳を陽炎ウィルス(
AEV>、細網内皮症ウィルス(REV)、鳥類アfノ
ウイルス、鳥類レオウィルスのような他のウィルスによ
る感染をも蒙り易い。もちろん、[BV感染に対してだ
けでなく、上記ウィルスのようなその他のウィルスによ
る感染に対しても若鶏を防護するのが望ましい。
このために、若鶏には、IBMから得た免疫原と他のウ
ィルスの少なくとも1種から得た免疫原との併用より成
るワクチンを接種している。これらのワクチンには生ウ
ィルスまたは不活性化ウィルスが含有されるが、原則的
には生ワクチンが好ましい。これらの混合生ワクチンに
関するよく知られた問題は、1つ以上の構成成分の効力
を低減さける抗原成分相互間の作用である。この問題は
IBM/NOV併用に関して、例えばRagpiとL 
ee (1964) !iA類疾患8 、471−48
0:HansonとA IbertS(八1. J、 
vet、 Rcs、 1959年3月、 352−35
6) :ThorntonとM uskett (T 
he  V eterinarl/Record、 1
975年5月、467−468)などにより報告されて
おり、またW 1nterfieldが相反する結果を
発表している(Poultry  5cience  
19B4.63゜182−184)。
上記の公知混合生ワクチンの欠点を、本発明による新ワ
クヂンを用いて克服できることが知見された。この混合
生ワクチンは、ニワトリ赤血球を自発的に凝集する特性
を示す少なくとも1種類の伝染性気管支炎生ウィルスと
、少なくとも1種類の他の家禽感染性ウィルスとより成
ることを特徴す とする。ニワトリ赤血球を装発的に凝集する特性を持つ
IBM−sが欧州特許第0.086.025号明細書に
よる優秀な予防接種特性を有することは公知である。ま
た、混合不活性化ワクチンにおけるこれらの特別なIB
M”sの使用は、前記欧州特許明細書に開示されている
。しかしながら、これら色 の繁発的凝集性IBM”sが同様に家禽感染性の他のウ
ィルスとともに混合生ワクチンの形での使用に特によく
適していることは、本発明までは認識されていなかった
本発明によれば、そのワクチンは、IBVとtま異なる
少なくとも1種類の他の家禽感染性ウィルスより成る。
上記にいういわゆるその他のウィルスとしては、例;t
 ハN D V、IBDV、MDV、他の鳥類ノヘルペ
スウイルス、FPV、鳥類アデノウィルス、鳥類レオウ
ィルスなどから選択され得る。
本発明による使用に特によく適合するIBV株は、Ma
5株(米国ロックヴィル市のATCCに寄託番号V R
2199で1987年12月15日に寄託された活動種
)、ならびにD274,01466、0580.246
G、249G株(それぞれI −216,I −217
,I −218゜1−215. I −214の寄託番
号でパリのパスツール研究所のthe Co11ect
ion N ationale deCu+tures
 de  M 1cro−Or(Janislesで保
管)である。MaS株と246G株はマサチューセッツ
血清型に属し、0580株はコネチカット型に属するが
、残りの上記IBV株はそれぞれ他の異なる血清型に属
する。
本発明によるワクチン製造に用いるウィルスは、鳥類ウ
ィルスの培養に適したあらゆる培地中で成育可能である
。胚含有SPFニワトリ卵中もしくは、好ましくは鳥類
組織からの細胞培養上が、これらのウィルスの成育に特
に適している。
かくして、増殖ウィルスを望ましい割合で合わせること
ができ、その結果書た混合物を単一の烏かあるいは多数
の鳥のワクチン接種に適した量に分けることができる。
懸濁液の形でその生ワクチンを調整することもあるし、
凍結乾燥することもある。
凍結乾燥ワクチンにおいては、1種類以上の安定剤を添
加するのが好ましい。適当な安定剤としては、例えばS
 P G A (B ovarnickが報告(195
0)J 、 3acteriology 59;509
) 、炭水化物(ソルビトール、マンニトール、デンプ
ン、シヨ糖、デキストラン、グルコースなど)、タンパ
ク質(アルブミンまたはカゼイン)、あるいはその変性
産物、タンパク質含有物(ウシ血清あるいはスキムミル
クなど)、緩衝剤(アルカリ金属リン酸塩など)が挙げ
られる。
随意に、アジュバント活性を有する1つ以上の化合物を
添加することもあるト適当なアジュバントとしては、例
えば水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、または
酸化アルミニウム、鉱油(3ayol  F■、 Ma
rcol 52■など)、サポニンなどが挙げられる。
随意に、そのウィルスを弱毒化できる。ウィルスを胚含
有卵もしくは細胞培養(好ましくはニワトリ肝腎細胞)
に適応させ、例えば10−200倍の培養に通すことに
よってこの弱毒化を行う。
本発明の生ワクチンは、例えば筋肉、皮下あるいは卵内
性)1により、点眼、点鼻、飲料水中またはスプレ一方
式で、好ましくは生侵1日目から産卵時点(約18週日
)までの範囲の若齢で投与し得る。
群化後1臼目のニワトリへ投与するには、上記Ma5株
もしくはそれに由来しニワトリ赤血球の自発性凝集も示
す株を含有するワクチンを有利に使用することができる
生ワクチに関して、それぞれのウィルス株の用量は1羽
あたり31ogE I D5o−7too E I D
5o、好ましくは約410(] E I D5o−51
ogE I D5oの範囲で用いられ得る。
実験計画:群化1臼目SPEニワトリを8群に分け、負
圧隔離器に入れた。
1群には、点眼によりMa5株(HA+株)104EI
D5o/羽を接種した。
■群には、点眼によりI B V−M 1ldvac 
−M< I ntervet All1eriCa  
I nC,社製の生後1日目ブロイラ鶏用市販ワクヂン
:HA−株)104EID5o/羽を接種した。
5.8 ■群には、点眼により最小110   END5゜7羽
のNDV−81株(I ntervet Americ
al nc、社製のH1tchner型NDV株の市販
ワクチン)を接種した。
■群と7群には、点眼によりI B V −M ild
vac−M株とNDV−131株とを併用して(単一接
種の場合と同円mで)接種した。
V1群と■群には、点眼によりM2S株とNDV−81
株を併用して(単一接種の場合と同用量で)接種した。
■群には、点眼により陰性尿崩液を接種し、対照とした
USDA−I BM−M4141試験1.Il、IV。
■群と■群の一部)もしくはUSOA−NDV試験株(
IIl、 V、■群と■群の一部)を用いて接種後の2
1検体で試験を実施した。
USDA−I BV −M41試験株による試験を施し
た烏からは、試験侵4日目に臨床症候を記録した;次に
その鳥を層殺し、ウィルス回復を試み且つ臨床的動きを
観察するために、気管を集めた。
tJsDA−NOV試験株で試験した鳥の方は、試験後
10日間、死亡率および臨床徴候を観察した。
結  果 : 表1には、試験復4日目のウィルス回復、繊毛静止、臨
床徴候により測定した場合のUSDA−IBV−M41
試験に対するバーセンタイル防護が示されている。
K−−ユ る烏のパーセンテージ。
M2S株(HA” )株は、NDV株と併用の場合、M
−41試験株による試験に対してM i 1dvac 
−M(H/M )株よりも良好な防護を示す。NOV試
験を施した群間には防護に際して有意差は認められなか
った。全症例において防護は申し分なかった。:全群の
90%以上のヒヨコが防護された。
1亙旦ユ 釘止1臼目の市販ブロイラ鶏を5群に分け、隔離器に入
れた。
2群にはH120/クローン30併用接種しく1群はざ
っとスプレーし、他方は点眼による)、他の2群には、
Ma5/クローン30を併用接種(1群にはざっとスプ
レーし、他方は点眼)した。残りの1群は未接種対照と
してそのままにした。
クローン30はNOVワクヂンで、I nterVet
社から市販されている。
接種後4日目と8日目に、1群当たり6羽を取り出し、
臨床徴候を記録して、その気管を繊毛静止検査で調べた
接種後4遍間目に、点眼接種した鳥にM41−試験株に
より試験を施した(10  EID5゜7羽、点眼)。
M41試験後4日目に臨床徴候を記録し、繊毛静止検査
用に気管を採取した。
スプレー接種鳥に接種後5透口にNDV試験を施しく 
N D V −Herts試験株、10 EID5゜7
羽、:M注)、12日間毎日、臨床症候と死亡率を記録
した。
結果二表2.3.4および5は上記実験結果を示してい
る。自発性血球凝集性18株(Mn2)と併用すると、
M41−試験株とN0V−試験株とによる試験に対して
、自発的にニワトリ赤血球を擬果しない18株(H12
0)との併用よりも良好な防護が示された。
表   2 接種後の臨床症候 一一−1日目に予防接種。
一接種後(P、 V、 )4日目と8日目の臨床症候(
クシゃみ。
M41 7.6; NDV 5.2゜ 表   3 一1日目に予防接種。
表   4 NDに対するワクチン併用防護 一一1日目に予防接種。
一接種後5週間目にNDV−試験株で試験。
表   5 1Bに対するワクチン併用防護 一1日目に予防接種。
一接種後5週間目にM41−試験株で試験。
宋」11旦 「 251日目sp薬ニワトリ(SPAFAS■)を各50
羽含有の4群に分けて負圧隔離器に入れた。
次いで、以下の株を用いて鳥に接種した;1群:Ma5
 : 10  E 1050/動物(点@):)IA+
株。
■群: M 1ldvac −M (塊状;848株、
l ntervet A merica  l nc、
社から市販);10 EID5o/動物(点眼):HA
−株。
■群:13−vac−M (塊状HQ onnaugh
t株、l ntervet America  I n
C,社より市販);10  EID5o/動物(点眼)
;HA−株。
■群:陰性尿嚢液:  0.1d/5ill物(点眼)
接種侵5週日に、全群にM41試験株による試験を施し
た。試験後5日目に、1群当たり10羽かイ1t ら臨床症策を記録し、次いでその鳥を屠殺して気管を摘
出し、ウィルスを再単離し且つ繊毛活性を観察した。試
験後7日目に、全群の残りの鳥を剖検した。
緻−碧 表   6 試験後5日目の試験1クイルスの回復 II  烏の総数当りのウィルス産生鳥の数を表ねり比
率表   7 試験後5日目の臨床症候 表   8 試験後5日目の繊毛静止検査 表   9 割 試験後7日目の部検結果 結論:自発的血球凝集を示すMa5株は、試験  1に
対して、同一血清型に属するものと比較した場  L合
、2種のHA−株よりも良好な保護を生じる。
さらに、本実施例に示されない実験では、Ma5株が他
のIBV株との併用ワクチンの形でも顕著  1な特性
を有することが認められた。         Lff
lヱ ITL−ワクチンと併用投与した場合の、自発的血球凝
集性IBM−マサチューセッツ株(Ma   15)と
非血球′a集性IBM−マサチューセッツ株(H120
)の免疫原性を比較するために本実験を実施した。  
                    R材料と方
法: ワクチン                   σ実
験には以−1・のワクチン株を用いた:      轡
(1)IBV−Ma5               
 K本ワクチンをリン酸トリプトース ブロスで:10
0に希釈し、その0.1mを名馬に点眼投与4.6 、た(滴定1:Ma5株10  EID5o/羽)。
(2)  18V−8120 本ワクチンをリン酸トリプトース ブロスで:  10
0に希釈し、その0.1aeを名馬に点眼投与5.1 、た(滴定量: )l 120株10   EID5o
/羽)。
(3)ILT−ワクチン 本ワクチンをメーカーの指示に従って希釈し、:馬用量
を鳥に点眼投与した。
実験計画: c先後4週間口のSPE鶏を3群に分け、負圧l離器に
入れた。
1群には1鳥用量のMa5ワクチンと1馬用m)ILT
−ワクチンを点眼接種した。第3群は対穫としてそのま
まにしておいた。接種後4週間1二、[BV−M41試
験株を用いて鳥に接種した(M41−第8継代接種(W
 eybridge株);4.8 10  EID5o/羽:点眼)。
試験侵411目に、鳥を層殺し、その気管を採取して、
繊毛活性を調べ且つウィルス回復を試みた。
髭−1: 表1に示されている通り、Ma5− I LT接種群の
鳥の100%、l−1120−I LT接種群の烏の6
4%が、繊毛静止検査で測定した場合、M41−試験株
での試験に対して保護された。
Ma5− I LT併用接種鳥の36%から、ト112
0−ILT併用接種烏の全島から試験ウィルスが回復さ
れた。
結  a : 自発的血球凝集性IBV−株Ma5をI LT−ワクチ
ンと併用して得る防護は、非血球凝集性IBM−株(H
120と同様)をILT−ワクチンと併用して得る保護
を上回っている。
表10 畔化後4週間目に予防接種し、8週間目にM41試験株
で試験した5PF−ニワトリにおけるMa5−ILT混
合ワクチンとH120−I LT混合ワクチンの効力。
代理人弁理士 船  山    武 手続補正書 2、発明の名称   混合生ワクチン 3、補正をする者 事件との関係  特許出願人 名 称   アクゾ・エヌ・ヴ工− 5、補正命令の日付    自 発 6、補正により増加する請求項の数   27、補正の
対象      明細内 8、補正の内容 (1)明細書中、特許請求の範囲を別紙の通り補止する
2、特許請求の範囲 (1)  ウィルス感染症に対して家禽を免疫化するた
めの混合生ワクチンで、ニワトリ赤血球を自発的に凝集
する特性を示す少なくとも1種類の伝染性気管支炎生ウ
ィルスと、家禽感染症の少なくとも1種類の他のウィル
スより成るワクチン。
■ 上記の少なくとも1種類の他の家禽感染症ウィルス
が、ニューカッスル病ウィルス、伝染性嚢包症ウイルス
、産卵低下(エッグ・ドロップ)症候群ウィルス、マレ
ク病ウィルス、ニワトリの伝染性脳W随炎ウィルス、細
網内皮症ウィルス、鳥類ヘルペスウィルス、白血症ウィ
ルス、鳥類アデノウィルス、鳥類レオウィルスより成る
群から選択されることを特徴とする特許請求の範囲第1
項記載のワクチン。
3) 米国メリーランド州ロックヴィル市のATCCに
寄託番号V R2199で寄託されている菌株もしくは
それに由来する自発性血球凝集性菌株に属する伝染性気
管支炎ウィルスより成る特許請求の範囲第1項記載のワ
クチン。
(4)  米国メリーランド州ロックヴィル市のATC
Cに寄託番号V R2199で寄託されている菌株もし
くはそれに由来する菌株に属する伝染性気管支炎ウィル
スとニューカッスル病ウィルスより成る特許請求の範囲
第1項記載のワクチン。
■ 米国メリーラ9ンド州ロックヴィル市のATCCに
寄託番号V R2199で寄託されている菌株もしくは
それに由来する菌株に属する伝染性気管支炎ウィルスの
実質的に純粋な培養物。
に対して家禽を免疫イするためのワクチン。
■ 鳥類ウィルス性疾患に対して家禽を免疫化する方法
で、特許請求の範囲第1項記載の混合生ワクチンを投与
することより成る方法。
の〉 ウィルス感染症に対して家禽を免疫化するための
混合生ワクチンの製造方法で、少なくとも一方のウィル
スが自発的にニワトリ赤血球を凝集する伝染性気管支炎
ウィルスである少なくとも2種類の異なる鳥類ウィルス
を合わせることより成る製造方程。
丸性i互星よ

Claims (7)

    【特許請求の範囲】
  1. (1)ウイルス感染症に対して家禽を免疫化するための
    混合生ワクチンで、ニワトリ赤血球を自発的に凝集する
    特性を示す少なくとも1種類の伝染性気管支炎生ウイル
    スと、家禽感染症の少なくとも1種類の他のウイルスよ
    り成るワクチン。
  2. (2)上記の少なくとも1種類の他の家禽感染症ウイル
    スが、ニューカッスル病ウイルス、伝染性嚢包症ウイル
    ス、産卵低下(エッグ・ドロップ)症候群ウイルス、マ
    レク病ウイルス、ニワトリの伝染性脳脊髄炎ウイルス、
    細網内皮症ウイルス、鳥類ヘルペスウイルス、白血症ウ
    イルス、鳥類アデノウイルス、鳥類レオウイルスより成
    る群から選択されることを特徴とする特許請求の範囲第
    1項記載のワクチン。
  3. (3)米国メリーランド州ロックヴィル市のATCCに
    寄託番号VR2199で寄託されている菌株もしくはそ
    れに由来する自発性血球凝集性菌株に属する伝染性気管
    支炎ウイルスより成る特許請求の範囲第1項記載のワク
    チン。
  4. (4)米国メリーランド州ロックヴィル市のATCCに
    寄託番号VR2199で寄託されている菌株もしくはそ
    れに由来する菌株に属する伝染性気管支炎ウィルスとニ
    ューカッスル病ウイルスより成る特許請求の範囲第1項
    記載のワクチン。
  5. (5)米国メリーランド州ロックヴィル市のATCCに
    寄託番号VR2199で寄託されている菌株もしくはそ
    れに由来する菌株に属する伝染性気管支炎ウイルスの実
    質的に純粋な培養物。
  6. (6)鳥類ウイルス性疾患に対して家禽を免疫化する方
    法で、特許請求の範囲第1項記載の混合生ワクチンを投
    与することより成る方法。
  7. (7)ウイルス感染症に対して家禽を免疫化するための
    混合生ワクチンの製造方法で、少なくとも一方のウイル
    スが自発的にニワトリ赤血球を凝集する伝染性気管支炎
    ウイルスである少なくとも2種類の異なる鳥類ウイルス
    を合わせることより成る製造方程。
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