JPH10175881A - 伝染性気管支炎ウイルス培養物及びそれからのワクチン - Google Patents

伝染性気管支炎ウイルス培養物及びそれからのワクチン

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Abstract

(57)【要約】 【課題】 伝染性気管支炎ウイルス感染症から家禽を免
疫化するための新規ワクチンの提供。 【解決手段】 特定の菌株の伝染性気管支炎ウイルスよ
りなるワクチン。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は伝染性気管支炎ウイ
ルスを含有する生ワクチンに関する。
【０００２】
【従来の技術】伝染性気管支炎ウイルス（ＩＢＶ）は、
鳥類、特に家禽に感染力を有するコロナウイルスの一種
である。本ウイルスに感染すると、気管ラ音、咳、くし
ゃみ、鼻水が特徴の急性呼吸器疾患を引き起こす。伝染
性気管支炎（ｉ．ｂ．）は羅患ニワトリの間にかなりの
死亡率を生じる恐れがあり、さらにニワトリの腎臓を損
傷する恐れがある。産卵鶏と繁殖雌鶏では、その感染に
より、生殖路損傷による卵生産低下が起こる恐れがあ
る。多くの場合、産卵低下には下痢を起こす腸炎が伴
う。
【０００３】ワクチン接種によりＩＢＶ感染に対して家
禽を防護できる。さらに、できるだけ若い時期に防護す
るのが望ましい。これらの若鶏は、ニューカッスル病ウ
イルス（ＮＤＶ）、伝染性嚢包症ウイルス（ＩＢＤ
Ｖ）、マレク病ウイルス（ＭＤＶ）、その他の鳥類ヘル
ペスウイルス、鶏痘ウイルス（ＦＰＶ）、鳥類脳脊髄炎
ウイルス（ＡＥＶ）、細網内皮症ウイルス（ＲＥＶ）、
鳥類アデノウイルス、鳥類レオウイルスのような他のウ
イルスによる感染をも蒙り易い。もちろん、ＩＢＶ感染
に対してだけでなく、上記ウイルスのようなその他のウ
イルスによる感染に対しても若鳥を防護するのが望まし
い。
【０００４】このために、若鳥には、ＩＢＶから得た免
疫原と他のウイルスの少なくとも１種から得た免疫原と
の併用より成るワクチンを接種している。これらのワク
チンには生ウイルスまたは不活性化ウイルスが含有され
るが、原則的には生ワクチンが好ましい。これらの混合
生ワクチンに関するよく知られた問題は、１つ以上の構
成成分の効力を低減させる抗原成分相互間の作用であ
る。この問題はＩＢＶ／ＮＤＶ併用に関して、例えばＲ
aggiとＬee（1964）鳥類疾患８，471-480;Ｈanson とＡ
lberts(Am.J.Vet.Res.1959年３月，352-356)；Ｔhornto
n とＭuskett（Ｔhe Ｖeterinary Ｒecord,1975年５
月、467-468)などにより報告されており、またＷinterf
ieldが相反する結果を発表している（Ｐoultry Ｓcien
ce 1984, 63, 182-184)。
【０００５】上記の公知混合生ワクチンの欠点を、新ワ
クチンを用いて克服できることが知見された。この混合
生ワクチンは、ニワトリ赤血球を自発的に凝集する特性
を示す少なくとも１種類の伝染性気管支炎生ウイルス
と、少なくとも１種類の他の家禽感染性ウイルスとより
成ることを特徴とする。ニワトリ赤血球を自発的に凝集
する特性を持つＩＢＶ′ｓが欧州特許第 0.086.025号明
細書による優秀な予防接種特性を有することは公知であ
る。また、混合不活性化ワクチンにおけるこれらの特別
なＩＢＶ′ｓの使用は、前記欧州特許明細書に開示され
ている。しかしながら、これらの自発的凝集性ＩＢＶ′
ｓが同様に家禽感染性の他のウイルスとともに混合生ワ
クチンの形での使用に特によく適していることは、本発
明までは認識されていなかった。
【０００６】そのワクチンは、ＩＢＶとは異なる少なく
とも１種類の他の家禽感染性ウイルスより成る。
【０００７】上記にいういわゆるその他のウイルスとし
ては、例えばＮＤＶ、ＩＢＤＶ、ＭＤＶ、他の鳥類のヘ
ルペスウイルス、ＦＰＶ、鳥類アデノウイルス、鳥類レ
オウイルスなどから選択され得る。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】伝染性気管支炎ウイル
ス感染症に対する新規ワクチンを提供することが本発明
の課題である。
【０００９】
【課題を解決するための手段】本発明による使用に特に
よく適合するＩＢＶ株は、Ｍａ５株（米国ロックヴィル
市のＡＴＣＣに寄託番号ＶＲ2199で1987年12月15日に寄
託された活動種）、ならびにＤ274,Ｄ1466, Ｄ580, 246
Ｇ,249Ｇ株（それぞれＩ−216,Ｉ−217,Ｉ−218,Ｉ−21
5,Ｉ−214 の寄託番号でパリのパスツール研究所のthe
Ｃollection Ｎationale de Ｃultures de Ｍicro-org
anismes で保管）である。Ｍａ５株と 246Ｇ株はマサチ
ューセッツ血清型に属し、Ｄ 580株はコネチカット型に
属するが、残りの上記ＩＢＶ株はそれぞれ他の異なる血
清型に属する。
【００１０】
【発明の実施の形態】本発明によるワクチン製造に用い
るウイルスは、鳥類ウイルスの培養に適したあらゆる培
地中で成育可能である。胚含有ＳＰＦニワトリ卵中もし
くは、好ましくは鳥類組織からの細胞培養上が、これら
のウイルスの成育に特に適している。
【００１１】かくして、増殖ウイルスを望ましい割合で
合わせることができ、その結果得た混合物を単一の鳥か
あるいは多数の鳥のワクチン接種に適した量に分けるこ
とができる。
【００１２】懸濁液の形でその生ワクチンを調整するこ
ともあるし、凍結乾燥することもある。
【００１３】凍結乾燥ワクチンにおいては、１種類以上
の安定剤を添加するのが好ましい。適当な安定剤として
は、例えばＳＰＧＡ（Ｂovarnickが報告(1950)Ｊ．Ｂac
teriology 59;509）、炭水化物（ソルビトール，マンニ
トール，デンプン，ショ糖，デキストラン，グルコース
など）、タンパク質（アルブミンまたはカゼイン）、あ
るいはその変性産物、タンパク質含有物（ウシ血清ある
いはスキムミルクなど）、緩衝剤（アルカリ金属リン酸
塩など）が挙げられる。
【００１４】随意に、アジュバント活性を有する１つ以
上の化合物を添加することもある。適当なアジュバント
としては、例えば水酸化アルミニウム、リン酸アルミニ
ウム、または酸化アルミニウム、鉱油（Ｂayol Ｆ（登
録商標），Ｍarcol 52（登録商標）など）、サポニンな
どが挙げられる。
【００１５】随意に、そのウイルスを弱毒化できる。ウ
イルスを胚含有卵もしくは細胞培養（好ましくはニワト
リ胚腎細胞）に適応させ、例えば10-200倍の培養に通す
ことによってこの弱毒化を行う。
【００１６】本発明の生ワクチンは、例えば筋肉、皮下
あるいは卵内注射により、点眼、点鼻、飲料水中または
スプレー方式で、好ましくは生後１日目から産卵時点
（約18週目）までの範囲の若齢で投与し得る。
【００１７】孵化後１日目のニワトリへ投与するには、
上記Ｍａ５株もしくはそれに由来しニワトリ赤血球の自
発性凝集も示す株を含有するワクチンを有利に使用する
ことができる。
【００１８】生ワクチンに関して、それそれのウイルス
株の用量は１羽あたり３log ＥＩＤ 50−７log ＥＩ
Ｄ50、好ましくは約４log ＥＩＤ50−５log ＥＩＤ50の
範囲で用いられ得る。
【００１９】
【実施例】実施例Ｉ ＮＤＶ／ＩＢＶ２種混合生ワクチンと各ウイルスの個別
ワクチンとの比較 実験計画：孵化１日目ＳＰＥニワトリを８群に分け、負
圧隔離器に入れた。
【００２０】Ｉ群には、点眼によりＭａ５株（ＨＡ
+ 株）１０4 ＥＩＤ50／羽を接種した。
【００２１】II群には、点眼によりＩＢＶ−Ｍildvac−
Ｍ（Ｉntervet Ａmerica Ｉnc. 社製の生後１日目ブロ
イラ鶏用市販ワクチン；ＨＡ- 株）１０4 ＥＩＤ50／羽
を接種した。
【００２２】III 群には、点眼により最小量１０5.8 Ｅ
ＩＤ50／羽のＮＤＶ−Ｂ１株（Ｉntervet Ａmerica Ｉ
nc. 社製のＨitchner 型ＮＤＶ株の市販ワクチン）を接
種した。
【００２３】IV群とＶ群には、点眼によりＩＢＶ−Ｍil
dvac−Ｍ株とＮＤＶ−Ｂ１株とを併用して（単一接種の
場合と同用量で）接種した。
【００２４】VI群とVII 群には、点眼によりＭａ５株と
ＮＤＶ−Ｂ１株を併用して（単一接種の場合と同用量
で）接種した。
【００２５】VIII群には、点眼により陰性尿嚢液を接種
し、対照とした。
【００２６】ＵＳＤＡ−ＩＢＶ−Ｍ４１試験株（Ｉ，I
I，IV，VI群とVIII群の一部）もしくはＵＳＤＡ−ＮＤ
Ｖ試験株（III ，Ｖ，VII 群とVIII群の一部）を用いて
接種後の21検体で試験を実施した。
【００２７】ＵＳＤＡ−ＩＢＶ−Ｍ４１試験株による試
験を施した鳥からは、試験後４日目に臨床症侯を記録し
た；次にその鳥を屠殺し、ウイルス回復を試み且つ臨床
的動きを観察するために、気管を集めた。ＵＳＤＡ−Ｎ
ＤＶ試験株で試験した鳥の方は、試験後10日間、死亡率
および臨床徴候を観察した。
【００２８】結果：表１には、試験後４日目のウイルス
回復、繊毛静止、臨床徴候により測定した場合のＵＳＤ
Ａ−ＩＢＶ−Ｍ４１試験に対するパーセンタイル防護が
示されている。
【００２９】
【表１】
【００３０】Ｍａ５株（ＨＡ+ ）株は、ＮＤＶ株と併用
の場合、Ｍ−４１試験株による試験に対してＭildvac−
Ｍ（ＨＡ- ）株よりも良好な防護を示す。ＮＤＶ試験を
施した群間には防護に際して有意差は認められなかっ
た。全症例において防護は申し分なかった。：全群の90
％以上のヒヨコが防護された。
【００３１】実施例II 孵化１日目の市販ブロイラ鶏を５群に分け、隔離器に入
れた。
【００３２】２群にはＨ120 ／クローン30併用接種し
（１群はざっとスプレーし、他方は点眼による）、他の
２群には、Ｍａ５／クローン30を併用接種（１群にはざ
っとスプレーし、他方は点眼）した。残りの１群は未接
種対照としてそのままにした。
【００３３】クローン30はＮＤＶワクチンで、Ｉnterve
t 社から市販されている。
【００３４】接種後４日目と８日目に、１群当たり６羽
を取り出し、臨床徴候を記録して、その気管を繊毛静止
検査で調べた。
【００３５】接種後４週間目に、点眼接種した鳥にＭ４
１−試験株により試験を施した（１０6 ＥＩＤ50／羽、
点眼）。Ｍ４１試験後４日目に臨床徴候を記録し、繊毛
鬱血検査用に気管を採取した。
【００３６】スプレー接種鳥に接種後５週目にＮＤＶ試
験を施し（ＮＤＶ−Ｈerts試験株、１０7 ＥＩＤ50／
羽、；筋注）、12日間毎日、臨床症侯と死亡率を記録し
た。
【００３７】結果：表２，３，４および５は上記実験結
果を示している。自発性血球凝集性ＩＢ株（Ｍａ５）と
併用すると、Ｍ４１−試験株とＮＤＶ−試験株とによる
試験に対して、自発的にニワトリ赤血球を凝集しないＩ
Ｂ株（Ｈ120)との併用よりも良好な防護が示された。
【００３８】
【表２】
【００３９】
【表３】
【００４０】
【表４】
【００４１】
【表５】
【００４２】実施例III 251日目ＳＰＦニワトリ（ＳＰＡＦＡＳ（登録商標））
を各50羽含有の４群に分けて負圧隔離器に入れた。次い
で、以下の株を用いて鳥に接種した： Ｉ群：Ｍａ５；１０4 ＥＩＤ50／動物（点眼）；ＨＡ+
株。
【００４３】II群：Ｍildvac−Ｍ（塊状；Ｂ48株、Ｉnt
ervet Ａmerica Ｉnc. 社から市販）；１０4 ＥＩＤ50
／動物（点眼）；ＨＡ- 株。
【００４４】III 群：ＩＢ−ｖａｃ−Ｍ（塊状；Ｃonna
ught株、Ｉntervet Ａmerica Ｉnc. 社より市販）；１
０4 ＥＩＤ50／動物（点眼）；ＨＡ- 株。
【００４５】IV群：陰性尿嚢液； 0.1ml／動物（点
眼）。
【００４６】接種後５週目に、全群にＭ４１試験株によ
る試験を施した。試験後５日目に、１群当たり10羽から
臨床症候を記録し、次いでその鳥を屠殺して気管を摘出
し、ウイルスを再単離し且つ繊毛活性を観察した。試験
後７日目に、全群の残りの鳥を剖検した。
【００４７】結果
【００４８】
【表６】
【００４９】
【表７】
【００５０】
【表８】
【００５１】
【表９】
【００５２】結論：自発的血球凝集を示すＭａ５株は、
試験に対して、同一血清型に属するものと比較した場
合、２種のＨＡ- 株よりも良好な保護を生じる。さら
に、本実施例に示されない実験では、Ｍａ５株が他のＩ
ＢＶ株との併用ワクチンの形でも顕著な特性を有するこ
とが認められた。
【００５３】実施例IV ＩＬＴ（ニワトリ喉頭気管支炎）−ワクチンと併用投与
した場合の、自発的血球凝集性ＩＢＶ−マサチューセッ
ツ株（Ｍａ５）と非血球凝集性ＩＢＶ−マサチューセッ
ツ株（Ｈ120)の免疫原性を比較するために本実験を実施
した。
【００５４】材料と方法：ワクチン 実験には以下のワクチン株を用いた： (1) ＩＢＶ−Ｍａ５ 本ワクチンをリン酸トリプトース ブロスで１： 100に
希釈し、その 0.1mlを各鳥に点眼投与した（滴定量：Ｍ
ａ５株１０4.6 ＥＩＤ50／羽）。
【００５５】(2) ＩＢＶ−Ｈ120 本ワクチンをリン酸トリプトース ブロスで１： 100に
希釈し、その 0.1mlを各鳥に点眼投与した（滴定量：Ｈ
120 株１０5.1 ＥＩＤ50／羽）。
【００５６】(3) ＩＬＴ−ワクチン 本ワクチンをメーカーの指示に従って希釈し、１鳥用量
を鳥に点眼投与した。
【００５７】実験計画：孵化後４週間目のＳＰＥ鶏を３
群に分け、負圧隔離器に入れた。
【００５８】１群には１鳥用量のＭａ５ワクチンと１鳥
用量のＩＬＴ−ワクチンを点眼接種した。第３群は対照
としてそのままにしておいた。接種後４週間目に、ＩＢ
Ｖ−Ｍ４１試験株を用いて鳥に接種した（Ｍ４１−第８
継代接種（Ｗeybridge株）；１０4.8 ＥＩＤ50／羽；点
眼）。
【００５９】試験後４日目に、鳥を屠殺し、その気管を
採取して、繊毛活性を調べ且つウイルス回復を試みた。
【００６０】結果：表１０に示されている通り、Ｍａ５
−ＩＬＴ接種群の鳥の 100％、Ｈ120 −ＩＬＴ接種群の
鳥の64％が、繊毛静止検査で測定した場合、Ｍ４１−試
験株での試験に対して保護された。
【００６１】Ｍａ５−ＩＬＴ併用接種鳥の36％から、Ｈ
120 −ＩＬＴ併用接種鳥の全鳥から試験ウイルスが回復
された。
【００６２】結論：自発的血球凝集性ＩＢＶ−株Ｍａ５
をＩＬＴ−ワクチンと併用して得る防護は、非血球凝集
性ＩＢＶ−株（Ｈ120 と同様）をＩＬＴ−ワクチンと併
用して得る保護を上回っている。
【００６３】
【表１０】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ Ａ６１Ｋ 39/245 Ａ６１Ｋ 39/245 39/255 39/255 Ｃ１２Ｎ 7/04 Ｃ１２Ｎ 7/04

Claims (3)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 米国メリーランド州ロックヴィル市のＡ
    ＴＣＣに寄託番号ＶＲ2199で寄託されている菌株もしく
    はそれに由来する菌株に属する伝染性気管支炎ウイルス
    の実質的に純粋な培養物。
  2. 【請求項２】 米国メリーランド州ロックヴィル市のＡ
    ＴＣＣに寄託番号ＶＲ2199で寄託されている菌株もしく
    はそれに由来する菌株に属する伝染性気管支炎ウイルス
    より成る伝染性気管支炎ウイルス感染症に対して家禽を
    免疫化するためのワクチン。
  3. 【請求項３】 米国メリーランド州ロックヴィル市のＡ
    ＴＣＣに寄託番号ＶＲ2199で寄託されている菌株もしく
    はそれに由来する菌株に属する伝染性気管支炎ウイルス
    を薬剤に調製することより成るウイルス感染症に対して
    家禽を免疫化するためのワクチンの製造方法。
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