JPS63202394A - 菌体外の微生物セルロースの製法 - Google Patents
菌体外の微生物セルロースの製法Info
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- JPS63202394A JPS63202394A JP63012465A JP1246588A JPS63202394A JP S63202394 A JPS63202394 A JP S63202394A JP 63012465 A JP63012465 A JP 63012465A JP 1246588 A JP1246588 A JP 1246588A JP S63202394 A JPS63202394 A JP S63202394A
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Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/04—Polysaccharides, i.e. compounds containing more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic bonds
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、微生物セルロースの製法に関する。
多数の細菌、殊にアセトバクター（Ａｃｅｔｏｂａｃｔ
ｅｒ）属の菌株を培養して微生物セルロースを産生させ
ることができる。異なる細胞（菌体）からのフィブリル
同志が互に絡み合って、セルロースと細胞（菌体）との
混合物である薄膜を与える。微生物セルロースの製法は
米国特許第２１３１７０１号明細書に記載されている。
ｅｒ）属の菌株を培養して微生物セルロースを産生させ
ることができる。異なる細胞（菌体）からのフィブリル
同志が互に絡み合って、セルロースと細胞（菌体）との
混合物である薄膜を与える。微生物セルロースの製法は
米国特許第２１３１７０１号明細書に記載されている。
従来、微生物セルロースの製法では静止培養法が使用さ
れてきており、微生物セルロースの薄膜を、普通浅いト
レー中に含まれる静止培地の表面上に形成させている。
れてきており、微生物セルロースの薄膜を、普通浅いト
レー中に含まれる静止培地の表面上に形成させている。
現在まで微生物セルロースの満足できる収量は、静止培
養法で得られたにすぎなかった。振とうフラスコ及び撹
拌培地中での培養により何日間にもわたり再現性をもっ
て微生物セルロースを作ろうとする企みは、成功してお
らずまた低い収量を得たにすぎなかった。その結果とし
て今日まで、静止培養は微生物セルロースの首尾よい製
造のために必要であると広く考えられてきていた。この
ような考え方を示す文献の例としては、下記のものがあ
る。
養法で得られたにすぎなかった。振とうフラスコ及び撹
拌培地中での培養により何日間にもわたり再現性をもっ
て微生物セルロースを作ろうとする企みは、成功してお
らずまた低い収量を得たにすぎなかった。その結果とし
て今日まで、静止培養は微生物セルロースの首尾よい製
造のために必要であると広く考えられてきていた。この
ような考え方を示す文献の例としては、下記のものがあ
る。
（ａ） シュラム（Ｓｃｈｒａｍｍ）及びヘスチン（
Ｈｅｓｔｉｎ）（Ｊ、 Ｇｅｎ、 Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ
、、 １１．１２３．１９５４）、（ｂ） ライト（
Ｗｒｉｇｈｔ）及びウォーカー（Ｗａｌｋｅｒ）［Ｃｈ
ｅｍ、 ａｎｄ ｌｎｄ （Ｒｅｖ）、 ７４．１８．
１９５５ ）、（ｃ） シムウェル（Ｓｈｌｍｗｅｌ
ｌ） （Ｊ、 Ｉｎ５ｔ、 Ｂｒｅｗ。
Ｈｅｓｔｉｎ）（Ｊ、 Ｇｅｎ、 Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ
、、 １１．１２３．１９５４）、（ｂ） ライト（
Ｗｒｉｇｈｔ）及びウォーカー（Ｗａｌｋｅｒ）［Ｃｈ
ｅｍ、 ａｎｄ ｌｎｄ （Ｒｅｖ）、 ７４．１８．
１９５５ ）、（ｃ） シムウェル（Ｓｈｌｍｗｅｌ
ｌ） （Ｊ、 Ｉｎ５ｔ、 Ｂｒｅｗ。
８２、３３９．１９５８）、
（ｄ） スチール（Ｓｔｅｅｌ）及びウォーカー（Ｗ
ａｌｋｅｒ）（Ｊ、 Ｇｅｎ、 Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ
、、 １７． １２． １９５７ａ）、（ｅ） デ
ュッドマン（Ｄｕｄｍａｎ）（Ｊ、 Ｇｅｎ、 Ｍｉｃ
ｒｏｂｉｏｌ。
ａｌｋｅｒ）（Ｊ、 Ｇｅｎ、 Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ
、、 １７． １２． １９５７ａ）、（ｅ） デ
ュッドマン（Ｄｕｄｍａｎ）（Ｊ、 Ｇｅｎ、 Ｍｉｃ
ｒｏｂｉｏｌ。
２２、 ２５−３９． １９６０）。
微生物セルロース薄膜（ｐｅｌｌｉｃｌｅ）はすぐれた
液体吸収性を有し、広範多様な医学医療用途において（
例えば英国特許第２１３１７０１号明細書に記載される
如き吸収パッドにおいて）使用できる。そのような医学
医療用途のためには、静止培養で作られた薄膜を直接に
使用することもできる。しかし、微生物セルロースには
その他の非医学、非医療的用途もあり、そのような非医
学、非医療的用途のためには、一般的には薄膜をより小
さな片へ破壊する必要がある。
液体吸収性を有し、広範多様な医学医療用途において（
例えば英国特許第２１３１７０１号明細書に記載される
如き吸収パッドにおいて）使用できる。そのような医学
医療用途のためには、静止培養で作られた薄膜を直接に
使用することもできる。しかし、微生物セルロースには
その他の非医学、非医療的用途もあり、そのような非医
学、非医療的用途のためには、一般的には薄膜をより小
さな片へ破壊する必要がある。
微生物セルロースは、細胞外（菌体外）多糖類とみなす
ことができる。回分または連続培養法で作られる場合、
そのような多糖類は、培地中に実質的に過剰の炭素源を
存在させて、窒素または燐源のような他の栄養による制
限を受けた条件下で製造されるのが普通である。しばし
ば炭素源は、例えばキサンタン・ガム生産プロセスにお
いて、極めて著しく過剰に存在する。
ことができる。回分または連続培養法で作られる場合、
そのような多糖類は、培地中に実質的に過剰の炭素源を
存在させて、窒素または燐源のような他の栄養による制
限を受けた条件下で製造されるのが普通である。しばし
ば炭素源は、例えばキサンタン・ガム生産プロセスにお
いて、極めて著しく過剰に存在する。
本発明によれば、菌体外の微生物セルロースを産生しう
る細菌菌株を、炭素源及びその他の必要栄養を含む培地
中で好気培養する菌体外の微生物セルロースの製法であ
って： （ａ） 存在する実質上すべての炭素源が利用されて
培地が炭素制限状態に至るまで撹拌バッチ培地中で上記
菌株を培養する増殖工程、 （ｂ） 炭素制限された培地に対してその培地を炭素
制限状態に維持し、かつ微生物セルロースが撹拌培養中
に蓄積しうるような速度で、炭素源を連続的に供給する
蓄積工程、 （ｃ） 菌体及び蓄積された微生物セルロースを上記
蓄積工程の終了時に培地から取り出す除去工程、及び （ｄ） 微生物セルロースを菌体から分離する分離工
程、 の諸工程を含む上記微生物セルロースの製法が提供され
る。
る細菌菌株を、炭素源及びその他の必要栄養を含む培地
中で好気培養する菌体外の微生物セルロースの製法であ
って： （ａ） 存在する実質上すべての炭素源が利用されて
培地が炭素制限状態に至るまで撹拌バッチ培地中で上記
菌株を培養する増殖工程、 （ｂ） 炭素制限された培地に対してその培地を炭素
制限状態に維持し、かつ微生物セルロースが撹拌培養中
に蓄積しうるような速度で、炭素源を連続的に供給する
蓄積工程、 （ｃ） 菌体及び蓄積された微生物セルロースを上記
蓄積工程の終了時に培地から取り出す除去工程、及び （ｄ） 微生物セルロースを菌体から分離する分離工
程、 の諸工程を含む上記微生物セルロースの製法が提供され
る。
菌体外セルロースを産生しうるいずれの細菌菌株も本発
明の目的のために使用できる。適当な菌株の例としては
、アセトバクター（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ）属に属す
る菌株、例えばＡＴＣＣ寄託第寄託第２３帰８９ （ｘｙｌｉｎｕｍ）種の菌株がある。
明の目的のために使用できる。適当な菌株の例としては
、アセトバクター（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ）属に属す
る菌株、例えばＡＴＣＣ寄託第寄託第２３帰８９ （ｘｙｌｉｎｕｍ）種の菌株がある。
非常に適当な菌株はアセトバクター・オルレアネンシス
（ｏｒｌｃａｎｅｎｓｉｓ）菌株Ｎ Ｃ Ｉ Ｂ １２
５８４であり、このものは特許手続のための微生物の寄
託に関するブタペスト条約の規定の下に１９８７年９月
２４日にＮＣＩＢ（ナショナル・コレクション・オブ・
インダストリアル・バクテリア）によって受託された。
（ｏｒｌｃａｎｅｎｓｉｓ）菌株Ｎ Ｃ Ｉ Ｂ １２
５８４であり、このものは特許手続のための微生物の寄
託に関するブタペスト条約の規定の下に１９８７年９月
２４日にＮＣＩＢ（ナショナル・コレクション・オブ・
インダストリアル・バクテリア）によって受託された。
ＮＣＩＢは英国スコツトランド・アバーディーン・アビ
イロード・１３５ （ＰＯ ＢＯＸ ３１）のトーリ
イ（Ｔｏｒｒｙ）リサーチ◆ステーションに所在する。
イロード・１３５ （ＰＯ ＢＯＸ ３１）のトーリ
イ（Ｔｏｒｒｙ）リサーチ◆ステーションに所在する。
またＮ Ｃ Ｉ Ｂ １２５８４菌株から誘導された変
異体及び突然変異体も非常に好ましい。別の適当な菌株
はアセトバクター・アセチ（ ａｃｅｔ ｉ ）サブス
プ（ｓｕｂｓｐ．）オルレアネンシス菌株ＮＣＩＢ８７
４７であり、このものはＮＣＩＢから入手できる。
異体及び突然変異体も非常に好ましい。別の適当な菌株
はアセトバクター・アセチ（ ａｃｅｔ ｉ ）サブス
プ（ｓｕｂｓｐ．）オルレアネンシス菌株ＮＣＩＢ８７
４７であり、このものはＮＣＩＢから入手できる。
増殖及び蓄積工程は同一の培養槽中で実施しうるのが好
ましい。しかしこれらの両工程は別々の培養槽で実施す
ることができ、この場合増殖工程で得られた培養物をそ
れが作られた培養槽から、第２の槽へ移し、その第２の
槽に炭素源を連続的に供給する。この移行は、増殖工程
が完結する前及び炭素制限下での増殖が開始する前に、
行なってもよい。使用培養槽は機械的に撹拌することが
でき、あるいは培養槽中へ酸素含有ガスを吹き込むこと
により撹拌を行なう「エヤ・リフト」式のものであって
もよい。
ましい。しかしこれらの両工程は別々の培養槽で実施す
ることができ、この場合増殖工程で得られた培養物をそ
れが作られた培養槽から、第２の槽へ移し、その第２の
槽に炭素源を連続的に供給する。この移行は、増殖工程
が完結する前及び炭素制限下での増殖が開始する前に、
行なってもよい。使用培養槽は機械的に撹拌することが
でき、あるいは培養槽中へ酸素含有ガスを吹き込むこと
により撹拌を行なう「エヤ・リフト」式のものであって
もよい。
適当な「エヤ・リフト」式培養槽（発酵槽）の例は、我
々の英国特許第１３５３００８号、第１４１７４８６号
及び第１４１７４８７号明細書に記載されている。
々の英国特許第１３５３００８号、第１４１７４８６号
及び第１４１７４８７号明細書に記載されている。
本発明の方法において、炭素源は、生育のための炭素源
であるのが適当であるが、このことは必ずしも要件では
ない。広範囲の炭素源を使用することができ、例えば乳
酸塩（エステル）、エタノール、グリセロール、糖密、
及びその他の果糖及び殊にグルコースのような糖類があ
る。
であるのが適当であるが、このことは必ずしも要件では
ない。広範囲の炭素源を使用することができ、例えば乳
酸塩（エステル）、エタノール、グリセロール、糖密、
及びその他の果糖及び殊にグルコースのような糖類があ
る。
適当には、増殖工程のための培地は、初期に２〜２０ｇ
／Ωの範囲内の濃度で炭素源を含む。蓄積工程中に、炭
素源′を１〜ＬＯｇ／ＩＩ／時の範囲内の濃度で培地に
供給するのが好ましい。増殖及び蓄積工程のために適当
な培地の一例は、下記の組成を有する。
／Ωの範囲内の濃度で炭素源を含む。蓄積工程中に、炭
素源′を１〜ＬＯｇ／ＩＩ／時の範囲内の濃度で培地に
供給するのが好ましい。増殖及び蓄積工程のために適当
な培地の一例は、下記の組成を有する。
ペプトン（ ｒｏｘｏｉｄＪ ：商標） ５．０ ｇ／
（１酵母エキス（ ｒｏｘｏｉｄＪ ：商標） ５．０
ｇ／ＩＩＮ ａ ２ Ｈ Ｐ ０ ４
２．７ ｇ ／Ωクエン酸 １．１５ｇ
／Ｎ グルコース ２０ｇ／Ｄ（ｐＨ８．０に
調節） 増殖及び蓄積工程を実施する初期ｐＨ値は４〜６、５の
範囲内であるのが好ましく、約５のｐＨ値が好ましい。
（１酵母エキス（ ｒｏｘｏｉｄＪ ：商標） ５．０
ｇ／ＩＩＮ ａ ２ Ｈ Ｐ ０ ４
２．７ ｇ ／Ωクエン酸 １．１５ｇ
／Ｎ グルコース ２０ｇ／Ｄ（ｐＨ８．０に
調節） 増殖及び蓄積工程を実施する初期ｐＨ値は４〜６、５の
範囲内であるのが好ましく、約５のｐＨ値が好ましい。
増殖及び蓄積工程は１５℃〜３５℃の範囲内の温度で実
施するのが適当であり、好ましくは２０℃〜２８℃の範
囲内の温度で実施する。
施するのが適当であり、好ましくは２０℃〜２８℃の範
囲内の温度で実施する。
蓄積工程中には培養液に対して、上澄液中の炭素源の濃
度がいつも０〜０．５ ｇ／ρであるような速度で（量
で）炭素源を供給する。培養液中のその他の栄養は、そ
れらの他の栄養の１つまたはそれ以上が培養液中で用い
尽されるに至るまで次第に低減する。蓄積工程はこの時
点で終了させてよく、あるいはその他の栄養供給をさら
に行なってもよい。この後者の場合に、培養液が満足す
べき通気のために粘稠になり過ぎるようになるまで、培
養を継続することができる。蓄積工程中に、菌体外セル
ロースは、（静止培養中に形成されるような大きな薄膜
の形ではな（）フロック（綿状のかたまり）として形成
される。
度がいつも０〜０．５ ｇ／ρであるような速度で（量
で）炭素源を供給する。培養液中のその他の栄養は、そ
れらの他の栄養の１つまたはそれ以上が培養液中で用い
尽されるに至るまで次第に低減する。蓄積工程はこの時
点で終了させてよく、あるいはその他の栄養供給をさら
に行なってもよい。この後者の場合に、培養液が満足す
べき通気のために粘稠になり過ぎるようになるまで、培
養を継続することができる。蓄積工程中に、菌体外セル
ロースは、（静止培養中に形成されるような大きな薄膜
の形ではな（）フロック（綿状のかたまり）として形成
される。
蓄積工程の終了後、菌体（細胞）及び蓄積セルロースか
らなるマスを、除去工程において培養液から適宜な方法
で取り出す。好ましくは、これは濾過により実施する。
らなるマスを、除去工程において培養液から適宜な方法
で取り出す。好ましくは、これは濾過により実施する。
生成セルロースは次いで分離工程において菌体（細胞）
から分離される。この分離は、セルロース及び菌体から
なるマスを、セルロースに影響を与えずに菌体を溶解さ
せる薬剤、例えばアルカリ性剤で処理することによるの
が適当であり、そのセルロースを次いで分離することが
できる。菌体を溶解し、そしてセルロースを分離するた
めの好ましい方法は、菌体／セルロースマスを種水酸化
ナトリウム溶液、例えば０．１〜５．０％（好ましくは
０６３〜３％）水酸化ナトリウム溶液で処理することで
ある。分離後、微生物セルロースはさらに処理（例えば
乾燥）することができる。
から分離される。この分離は、セルロース及び菌体から
なるマスを、セルロースに影響を与えずに菌体を溶解さ
せる薬剤、例えばアルカリ性剤で処理することによるの
が適当であり、そのセルロースを次いで分離することが
できる。菌体を溶解し、そしてセルロースを分離するた
めの好ましい方法は、菌体／セルロースマスを種水酸化
ナトリウム溶液、例えば０．１〜５．０％（好ましくは
０６３〜３％）水酸化ナトリウム溶液で処理することで
ある。分離後、微生物セルロースはさらに処理（例えば
乾燥）することができる。
本発明の方法で作られる微生物セルロースは、静止培養
法で作られた薄膜状のセルロースよりも、食品中の増量
剤として、または錠剤化助剤として、一層容易に使用で
きる。
法で作られた薄膜状のセルロースよりも、食品中の増量
剤として、または錠剤化助剤として、一層容易に使用で
きる。
広範囲′の培地が本発明の方法での使用に適当であり、
培地は当業者にとって慣用的な操作法により調製できる
。
培地は当業者にとって慣用的な操作法により調製できる
。
本発明を以下実施例により説明する。
実施例 １
下記の培地を調製した。
ペプトン（ｒｏｘｏｉｄＪ ：商標） ５．０ ｇ／Ｉ
Ｉ酵母エキス（ｒｏｘｏｉｄＪ ） ５．０ ｇ
／ΩＮａ２ＨＰＯ４２，７ｇ／Ω クエン酸 １．１５ｇ／、Ｑグルコース
２０ｇ／Ω（ｐＨ６，０に調節） この培地２５０ｍ１を含むフラスコを、アセトバクター
・アセチ・サブスプ・オルレアネンシス菌株ＮＣＩ Ｂ
８７４７の７日経過した同定培養物のかきまぜにより
得られた５ｍｌの上澄液と共にインキュベートした。（
その培養物は、セルロース非産生性細胞を一般的に平板
培養した後にそのセルロース非産生性細胞のコロニーか
ら拾い出し分離したセルロース産生性細胞のコロニーか
ら作り、上記と同じ境地で２８°Ｃでインキュベートし
たものである。） フラスコを回転振とう機で１２０ｒｐｍにおいて２８°
Ｃで２日間インキュベートした。この時間後、得られた
増殖物を上記培地（ただしグルコース濃度を２．５ｇ、
Ｑとしたもの）３ｇを含む培養器に移した。
Ｉ酵母エキス（ｒｏｘｏｉｄＪ ） ５．０ ｇ
／ΩＮａ２ＨＰＯ４２，７ｇ／Ω クエン酸 １．１５ｇ／、Ｑグルコース
２０ｇ／Ω（ｐＨ６，０に調節） この培地２５０ｍ１を含むフラスコを、アセトバクター
・アセチ・サブスプ・オルレアネンシス菌株ＮＣＩ Ｂ
８７４７の７日経過した同定培養物のかきまぜにより
得られた５ｍｌの上澄液と共にインキュベートした。（
その培養物は、セルロース非産生性細胞を一般的に平板
培養した後にそのセルロース非産生性細胞のコロニーか
ら拾い出し分離したセルロース産生性細胞のコロニーか
ら作り、上記と同じ境地で２８°Ｃでインキュベートし
たものである。） フラスコを回転振とう機で１２０ｒｐｍにおいて２８°
Ｃで２日間インキュベートした。この時間後、得られた
増殖物を上記培地（ただしグルコース濃度を２．５ｇ、
Ｑとしたもの）３ｇを含む培養器に移した。
この培養器を２８℃とし、かきまぜは５００ｒｐｍとし
、ｐＨはアルカリの添加により６に維持した。
、ｐＨはアルカリの添加により６に維持した。
上澄グルコース濃度をモニターし、それが０．５〜０．
２ｇ／、Ｑに低下したときにグルコースを滅菌溶液の形
で添加した。その添加は、上澄液グルコース濃度が０．
５〜０．２ｇ／Ｎに維持されるような量（速度）で行な
った。
２ｇ／、Ｑに低下したときにグルコースを滅菌溶液の形
で添加した。その添加は、上澄液グルコース濃度が０．
５〜０．２ｇ／Ｎに維持されるような量（速度）で行な
った。
約４日後、培養を終了した。得られたセルロース収量は
５．２ｇ／Ωであった。
５．２ｇ／Ωであった。
実施例 ２
下記の基本培地を調製した。
酵母エキス ５．０ｇ／ｌペ プ ト
ン ５．０ ｇ
／ΩＫＨ２ＰＯ４１，９ｇ／Ｄ Ｎ ａ Ｈ４Ｆ Ｏ４１，５６ｇ／Ｎ （ＮＨ４）２Ｓ０４ １．８０ｇ／ΩＭｇＳ
Ｏ４・７ Ｈ２００，２０ｇ／Ωクエン酸
１．１５ｇ／Ｎ ＦｅＣΩ −６Ｈ２Ｏ０，００１ｇ＃ 微量元素類 １．００ｇ／ρこの基本培地
を、下記の三つの微生物を用いての三つの別々の実験に
使用した。
ン ５．０ ｇ
／ΩＫＨ２ＰＯ４１，９ｇ／Ｄ Ｎ ａ Ｈ４Ｆ Ｏ４１，５６ｇ／Ｎ （ＮＨ４）２Ｓ０４ １．８０ｇ／ΩＭｇＳ
Ｏ４・７ Ｈ２００，２０ｇ／Ωクエン酸
１．１５ｇ／Ｎ ＦｅＣΩ −６Ｈ２Ｏ０，００１ｇ＃ 微量元素類 １．００ｇ／ρこの基本培地
を、下記の三つの微生物を用いての三つの別々の実験に
使用した。
アセトバクターｓｐ菌株ＮＣＩ Ｂ ８６２４ ；ア
セトバクター・バステウリアヌス （ｐａｓｔｅｕｒｉａｎｕｓ）菌株ＮＣＩ Ｂ ７０２
９ 。
セトバクター・バステウリアヌス （ｐａｓｔｅｕｒｉａｎｕｓ）菌株ＮＣＩ Ｂ ７０２
９ 。
アセトバクター・バステウリアヌス菌株ＮＣＩ ８５３
４Ｂ。
４Ｂ。
各微生物について実験操作は同じであった。各場合に２
００ｍ１の基本培地に２０ｇ／Ωのグルコースを加えた
ものを１０１００Ｏバッフル付きフラスコ中で１２１℃
において２７分間滅菌した。フィルター滅菌済セルラー
ゼ溶液を添加した〔デンマークのノボ（Ｎｏｖｏ）社販
売の「セルクラスト（ｃＥＬＬＵＣＬＡＳＴ ：商標）
の１１５稀釈液２ｍｌを添加した〕。
００ｍ１の基本培地に２０ｇ／Ωのグルコースを加えた
ものを１０１００Ｏバッフル付きフラスコ中で１２１℃
において２７分間滅菌した。フィルター滅菌済セルラー
ゼ溶液を添加した〔デンマークのノボ（Ｎｏｖｏ）社販
売の「セルクラスト（ｃＥＬＬＵＣＬＡＳＴ ：商標）
の１１５稀釈液２ｍｌを添加した〕。
各実験で試験されるべき微生物を寒天平板から白金耳一
杯取り出して、振とうフラスコに接種するのに用いた。
杯取り出して、振とうフラスコに接種するのに用いた。
フラスコを軌道振とう機で２０Ｏｒｐｍにおいて２４時
間３０℃において接種した。
間３０℃において接種した。
このようにして得られた培養液を微生物セルロースの製
造のために用いた。その製造条件は各実験において同じ
であった。各場合に、３〜４！：Ｉの標識容量をもつ培
養槽を用い、下記条件下で実験を実施した。
造のために用いた。その製造条件は各実験において同じ
であった。各場合に、３〜４！：Ｉの標識容量をもつ培
養槽を用い、下記条件下で実験を実施した。
温度；３０°Ｃ
ｐｉｔ ： ５．０（２ＭのＮａＯＨ及び２Ｍ
のＨＣΩを用いて調節） 通気： ０．２５ｖ／ｖ／Ｍ かきまぜ： ５００ｐｐｍ 使用培地は、上記のものであり、基本培地とグルコース
からなるものであったが、グルコースの初期濃度を１０
ｇ／Ωとした。
のＨＣΩを用いて調節） 通気： ０．２５ｖ／ｖ／Ｍ かきまぜ： ５００ｐｐｍ 使用培地は、上記のものであり、基本培地とグルコース
からなるものであったが、グルコースの初期濃度を１０
ｇ／Ωとした。
グルコースを用い尽した時には、グルコースを培養槽に
対して（培養が終了するまで）Ｌ、Ｏｇ／ｆｌ／時の量
で供給した。
対して（培養が終了するまで）Ｌ、Ｏｇ／ｆｌ／時の量
で供給した。
結果を表１に示し、また添付図に収量（グルコースｇ／
セルロースｇ：縦軸）対時間（ｈ）のグラフの形で示し
である。
セルロースｇ：縦軸）対時間（ｈ）のグラフの形で示し
である。
表 １
実施例 ３
振とうフラスコに菌株ＮＣＩ Ｂ １２５８４ （この
ものは「菌株９９」としても知られている）を接種し、
これを２４時間増殖させ、この時間後、得られたセルロ
ースの純度を評定した。この培養物を、炭素源グルコー
スが１０ｇ／ＩＩの濃度で存在する培地を含む別の培養
槽に移した。そのグルコース濃度を、培養物の増殖中に
モニターし、それが０．５ｇ／Ωまで降下したことが判
ったときに培養槽へのグルコースの供給を開始し、６４
時間継続した。菌体乾燥型ｆｆｌ（ｇ／Ω）、セルロー
ス乾燥型ｆｆｌ（ｇ／ρ）及びグルコース吸収量（ｇ・
／Ω）の測定をある時間間隙で実施した。その結果を表
２に示す。この表は、セルロースの最適収量（すなわち
セルロースｇ／グルコースｇ）は４１時間後に達成され
たことを示す。その後、グルコースはセルロースは、さ
らにはセルロースを生成させることなく菌体乾燥重量を
増加させるように、消費され続けた。
ものは「菌株９９」としても知られている）を接種し、
これを２４時間増殖させ、この時間後、得られたセルロ
ースの純度を評定した。この培養物を、炭素源グルコー
スが１０ｇ／ＩＩの濃度で存在する培地を含む別の培養
槽に移した。そのグルコース濃度を、培養物の増殖中に
モニターし、それが０．５ｇ／Ωまで降下したことが判
ったときに培養槽へのグルコースの供給を開始し、６４
時間継続した。菌体乾燥型ｆｆｌ（ｇ／Ω）、セルロー
ス乾燥型ｆｆｌ（ｇ／ρ）及びグルコース吸収量（ｇ・
／Ω）の測定をある時間間隙で実施した。その結果を表
２に示す。この表は、セルロースの最適収量（すなわち
セルロースｇ／グルコースｇ）は４１時間後に達成され
たことを示す。その後、グルコースはセルロースは、さ
らにはセルロースを生成させることなく菌体乾燥重量を
増加させるように、消費され続けた。
添付図は実施例２の結果を示すグラフであり、縦軸は収
量（セルロースｇ／グルコースｇ）、横軸は培養時間（
ｈ）である。 （外４名）
量（セルロースｇ／グルコースｇ）、横軸は培養時間（
ｈ）である。 （外４名）
Claims (10)
- （１）菌体外の微生物セルロースを産生しうる細菌菌株
を、炭素源及びその他の必要栄養を含む培地中で好気培
養する菌体外の微生物セルロースの製法であって： （ａ）存在する実質上すべての炭素源が利用されて培地
が炭素制限状態に至るまで撹拌バッチ培地中で上記菌株
を培養する増殖工程、 （ｂ）炭素制限された培地に対してその培地を炭素制限
状態に維持し、かつ微生物セルロースが撹拌培養中に蓄
積しうるような速度で、炭素源を連続的に供給する蓄積
工程、 （ｃ）菌体及び蓄積された微生物セルロースを上記蓄積
工程の終了時に培地から取り出す除去工程、及び （ｄ）微生物セルロースを菌体から分離する分離工程、 の諸工程を含む上記微生物セルロースの製法。 - （２）細菌菌株がアセトバクター菌株である特許請求の
範囲第１項に記載の方法。 - （３）細菌菌株がアセトバクター菌株（ＮＣＩＢ１２５
８４）またはこの菌株から誘導された変異株もしくは突
然変異株である特許請求の範囲第２項に記載の方法。 - （４）細菌菌株がアセトバクター・キシリニウム菌株（
ＡＴＣＣ２３７６９）またはアセトバクター・アセチ・
サブスプ、オルレアネンシス菌株（ＮＣＩＢ８７４７）
である特許請求の範囲第２項に記載の方法。 - （５）増殖工程（ａ）中の初期炭素源濃度は２〜２０ｇ
／ｌの範囲内である特許請求の範囲第１〜４項のいずれ
かに記載の方法。 - （６）蓄積工程（ｂ）において炭素源１〜１０ｇ／ｌ／
時の範囲内の濃度で培地に供給する特許請求の範囲第１
〜５項のいずれかに記載の方法。 - （７）炭素源は細菌菌株の増殖のための炭素源である特
許請求の範囲第１〜６項のいずれかに記載の方法。 - （８）増殖及び蓄積の両工程を実施する際の初期ｐＨは
４〜６．５の範囲内である特許請求の範囲第１〜７項の
いずれかに記載の方法。 - （９）増殖及び蓄積の両工程を実施する温度は１５〜３
５℃の範囲内である特許請求の範囲第１〜８項のいずれ
かに記載の方法。 - （１０）分離工程（ａ）中に、細菌菌株／セルロース・
マスを、０．１〜５．０％の範囲内の濃度を有する水酸
化ナトリウム溶液で処理する特許請求の範囲第１〜９項
のいずれかに記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB8701396 | 1987-01-22 | ||
| GB878701396A GB8701396D0 (en) | 1987-01-22 | 1987-01-22 | Production of microbial cellulose |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS63202394A true JPS63202394A (ja) | 1988-08-22 |
Family
ID=10611055
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP63012465A Pending JPS63202394A (ja) | 1987-01-22 | 1988-01-22 | 菌体外の微生物セルロースの製法 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4929550A (ja) |
| EP (1) | EP0279506A1 (ja) |
| JP (1) | JPS63202394A (ja) |
| GB (1) | GB8701396D0 (ja) |
| ZA (1) | ZA88322B (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7485720B2 (en) | 2001-11-08 | 2009-02-03 | Asahi Kasei Kabushiki Kaisha | Cellulose-type material |
Families Citing this family (17)
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|---|---|---|---|---|
| US5821109A (en) * | 1985-10-18 | 1998-10-13 | Monsanto Life Sciences Co. | Reticulated cellulose and methods and microorganisms for the production thereof |
| US5871978A (en) * | 1985-10-18 | 1999-02-16 | Monsanto Life Sciences Co | Method of producing reticulated cellulose having type II crystalline cellulose |
| US5144021A (en) | 1985-10-18 | 1992-09-01 | Weyerhaeuser Company | Reticulated cellulose and methods and microorganisms for the production thereof |
| US5079162A (en) * | 1986-08-28 | 1992-01-07 | Weyerhaeuser Company | Reticulated cellulose and methods and microorganisms for the production thereof |
| US4954439A (en) * | 1987-03-09 | 1990-09-04 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Multiribbon microbial cellulose |
| GB8800183D0 (en) * | 1988-01-06 | 1988-02-10 | Ici Plc | Process for production of microbial cellulose |
| US5273891A (en) * | 1988-01-06 | 1993-12-28 | Imperial Chemical Industries Plc | Process for the production of microbial cellulose |
| US5228900A (en) * | 1990-04-20 | 1993-07-20 | Weyerhaeuser Company | Agglomeration of particulate materials with reticulated cellulose |
| US5207826A (en) * | 1990-04-20 | 1993-05-04 | Weyerhaeuser Company | Bacterial cellulose binding agent |
| US5114849A (en) * | 1990-10-26 | 1992-05-19 | Weyerhaeuser Company | Protectants for microbial fermentation |
| US5580348A (en) * | 1994-05-10 | 1996-12-03 | Kimberly-Clark Corporation | Absorbent structure comprising a microbial polysaccharide and a process of making the same |
| US5955326A (en) * | 1995-08-01 | 1999-09-21 | Rensselaer Polytechnic Institute | Production of microbial cellulose using a rotating disk film bioreactor |
| JPH09308495A (ja) * | 1996-05-21 | 1997-12-02 | Bio Polymer Res:Kk | バクテリアセルロースの連続的製造方法 |
| AU3379397A (en) * | 1996-06-20 | 1998-01-07 | Nutrasweet Kelco Company, The | Food products containing bacterial cellulose |
| US6838399B1 (en) | 2000-12-01 | 2005-01-04 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Fibrous layer providing improved porosity control for nonwoven webs |
| US7832857B2 (en) * | 2008-08-18 | 2010-11-16 | Levinson Dennis J | Microbial cellulose contact lens |
| US20170216486A1 (en) * | 2016-01-29 | 2017-08-03 | Genadyne Biotechnologies, Inc. | System and Method for Treating a Wound |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4209590A (en) * | 1978-06-19 | 1980-06-24 | Chevron Research Company | Cellulose fermentation process |
| US4378431A (en) * | 1980-09-02 | 1983-03-29 | The University Of N.C. At Chapel Hill | Production of a cellulose-synthetic polymer composite fiber |
| US4588400A (en) * | 1982-12-16 | 1986-05-13 | Johnson & Johnson Products, Inc. | Liquid loaded pad for medical applications |
| US4745058A (en) * | 1984-05-10 | 1988-05-17 | Townsley Philip M | Method for producing cellulosic fibers and microcrystalline cellulose |
| CA1335266C (en) * | 1985-10-18 | 1995-04-18 | Arie Ben-Bassat | Reticulated cellulose product, sheets formed therefrom, methods and microorganisms for the production thereof |
| EP0260093A3 (en) * | 1986-09-08 | 1988-12-28 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Methods for production of cellulose i involving in vitro synthesis |
| JPH02265990A (ja) * | 1989-04-05 | 1990-10-30 | Dainippon Ink & Chem Inc | 強誘電性液晶組成物 |
-
1987
- 1987-01-22 GB GB878701396A patent/GB8701396D0/en active Pending
-
1988
- 1988-01-14 EP EP88300279A patent/EP0279506A1/en not_active Ceased
- 1988-01-18 ZA ZA88322A patent/ZA88322B/xx unknown
- 1988-01-19 US US07/145,819 patent/US4929550A/en not_active Expired - Fee Related
- 1988-01-22 JP JP63012465A patent/JPS63202394A/ja active Pending
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7485720B2 (en) | 2001-11-08 | 2009-02-03 | Asahi Kasei Kabushiki Kaisha | Cellulose-type material |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0279506A1 (en) | 1988-08-24 |
| ZA88322B (en) | 1989-04-26 |
| GB8701396D0 (en) | 1987-02-25 |
| US4929550A (en) | 1990-05-29 |
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