JPS63126868A

JPS63126868A - 化合物またはその塩、これらを含む医薬製剤、動物の腫瘍増殖の治療または予防方法、該化合物の製造方法、および新規な化学中間体

Info

Publication number: JPS63126868A
Application number: JP62261498A
Authority: JP
Inventors: ジェームス　レロイ　ケリイ
Original assignee: Wellcome Foundation Ltd
Current assignee: Wellcome Foundation Ltd
Priority date: 1986-10-18
Filing date: 1987-10-16
Publication date: 1988-05-30
Also published as: EP0268377A3; ES2030735T3; AU7987187A; DE3777544D1; ZA877801B; US4880812A; EP0268377A2; AU598307B2; EP0268377B1; GR3004273T3; ATE73780T1; GB8625019D0; CA1300807C

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】本発明は、新規なグルタミン酸、酸エステルおよび塩の
種類、それらの製造方法および中間体、これらを含有す
る医薬製剤およびヒトおよび動物用医薬品および責業に
おける用途に関する。

葉酸、さらに詳しくはその補酵素形のテトラヒドロ葉酸
あるいは関連誘導体は、生体にとって、ヌクレオチド、
アデニル酸、グアニル酸およびチミジル酸の生合成に必
要である。この必須ビタミンがないと、生体は生長でき
ず、しかも遂には死亡する。葉酸の構造の解明に続いて
、多くの清在括抗桑が化学療法剤の候補として合成され
ている。

こｎらの拮抗薬の多くはジヒドロ葉酸のテトラヒトｏ葉
酸への変換に関与するジヒドロ葉酸レダクターゼを阻害
する。該拮抗薬の例としては、Ｎ−（１−（２−アミノ
−４−ヒドロキシ−６−メチル−５−ピリミジル）−３
−プロピル）−ｐ−７ミノペンゾイルーＬ−グルタミン
酸〔ジャーナル・オデ・ファーマス−ティカル・サイエ
ンシズ（Ｊ。

Ｐｈａｒｍ、　Ｓｃｉ、　１９６３．５２．８４０〜８
４３））のような葉酸のピリミジル類似体および６−メ
チル化合物と比べて、ジヒドロ葉酸レダクターゼのはる
かに有効な阻害剤である相当する６−フェニル化合物が
ある〔ジャーナル・オデ・メデイシナル・ケミストリー
（Ｊ、　Ｍｅｄ、　Ｃｈｅｍ、入　１９６３．６．６６
４〜６＋５９））。

ジヒドロ葉酸レダクターゼを阻害しないと考えられる１
つの葉酸拮抗薬は、Ｍ酸塩分子のＣ−９原子とＮ−１０
原子の間に追加のメチレン基を有することのみが異なる
テトラヒドロ葉酸の類似体であるテトラヒドロホモ葉酸
である。この拮抗薬は、細菌に対して〔ジャーナル・オ
ブ・ジ・アメリカン・ケミカル・ソサイテイ（Ｊ、　Ａ
ｍ、　Ｃｈｅｍ。

ＳＯＣ，）、１９６４．８６，３０８〜６０９〕および
禎瘍細胞瑠殖〔キャンサー・リサーチ（ＣａｎｃｅｒＲ
ｅｓ、）、ｉ　９６６．２６．２３７４〜２３７９）に
対して有効である。少なくともマウスサルコーマ１８０
細胞に対するテトラヒドロホモ葉酸の有効性に関して、
活性剤は、実際にＮ−ホルミルグリシン−アミドリボヌ
クレオチド〔モレキュ２−・ファーマコロジ−（Ｍｏ１
．　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、　）　１９７５．１１．３１
９〜３２５〕の生合成を阻害する代謝産物であることが
報告されている。この代謝産物の構造同定は未だ十分に
解明されていないが、５゜１１−メテニルテトラヒドロ
−ホモ葉酸であるという１つの可能性が提案されている
〔ジャーナル・オプ・メデイシナル・ケミストリー（Ｊ
、　Ｍｅｄ。

Ｃｈｅｍ、）　、１９８１．２４．１０８６〜１０８８
］。

この化合物の作用機作も提案されている〔モレキュラー
・ファーマコロジー（Ｍｏ１．　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、
）、１９８３．２５．２９４〜３０２）が、確認が待た
れている。

グルタミンｅＲ１たは酸エステルは、ピリミジル部分が
２，４−シアミノ−１，６−シヒドロー６−オキソー５
−ピリミジニルであることに特徴のあるビリミゾルアル
キルアミノペンシル鎖によって置換されている、新規な
置換グルタミン酸および酸エステルの構造的に明瞭な種
類が今や見いだされｔｏさらに、これらは、化合物が未
分化細胞の非調節繁殖および増殖を阻害できる点で抗ｊ
ａ瘍活性を有することが分かった。該活性は、両者共後
述するリンパ球白血病Ｐ　３８８１０および細胞培養細
胞毒試験におけるリンパ球および結合組繊細胞に対して
示された。

従って、本発明によシ、式（１）（式中、ＲＬは水素、０１〜４アルキル、アセチルまた
はホルミルであシ　ＢａおよびＲ３は同一ま友は異なっ
て、水素またはｃｌ−４アルキルであシ　Ｈ４はＮＲＩ
ＩＲＩｌｌであり　、Ｒ１１、ＲＬａ　、Ｒ５およびＲ
６は同一または異なって、水素、Ｃ１−４アルキルま友
はｃｌ−１１１アシルであシ、Ｒテ、Ｒ’　、Ｒ’　ｆ
？よびＨＩＯは同一または異なって、水素、）１０、Ｃ
】〜４ノ１０アルキル、Ｃ１−４アルキルおよびＣ１〜
４フルコキシであ）、かつｎは２．３．４または５であ
シ、ｍは０または１〜６の整数である）の化合物、またはその塩が提供される。

Ｃ】〜４アルキルの場合　ＢＬの例はメチルがある。

しかしながら、Ｒ１は水素またはホルミルが好ましい。

０１〜４アルキルの場合、Ｒ２およびＲ３の例としては
メチルおよびエチルがある。しかしなからＲ２およびＲ
３が両者共水素であるのが好ましい。

ｎは６か好ましく、ｍは０〜２が適当であシ、ｍは０が好ましい。

本発明の化合物は、式（１ンにおいて星印で示す小倉炭
素原子を有し、従って光学異性体として存在できる。こ
のよりな異性体はすべて個々におよび混合物として、本
発明の範囲内に包含されるが、Ｌ−光学異性体が好まし
い。

以下に例示する化合物の中、好ましいものとしては、例
１の化合物がある。

本発明の化合物の塩としては、ピリミジル部分を置換す
る２個のアミノ末端基の何れかあるいはフェニレンおよ
び−（ｃＨ＊）ｎ一部分の間の鎖中に存在するアミノ基
から誘導された酸付加塩および式（Ｉ）（式中　Ｒ２お
よびＲ３の一方または双方は水素である）の化合物から
誘導されたアニオン種およびカチオンを含む塩がある。

この両者の型の塩において、抗禮瘍活性は、本明細書に
定義された本発明の化合物から誘導された部分にあシ、
しかも他成分の同定はそれ程重要でないが、治療および
予防のためには、患者にとって医薬的に許容し得るのか
好ましい。医薬的に許容し得る酸付加塩の例としては、
塩酸、臭化水素酸、リン酸メタリン酸、＃１＃および硫
酸のような鉱酸および酒石酸、酢酸、クエン酸、りンデ
酸、乳酸、フマル酸、安息香酸、グリコール酸、グルコ
ン酸、コハク酸おｊび７リールスルホンｅＲ１ｆＦＩＪ
ｔｔｄ　ｐ　−）ルエンスルホン酸のような有機酸から
誘導されたものかある。式（Ｉ）（式中　ＢａおよびＲ
３の一方または双方は水素であるンから誘導されるアニ
オン橿およびカチオンを含む塩の例としては、アンモニ
ウム塩、ナトリウム塩およびカリウム塩のよ５なアルカ
リ金属塩、マグネシウム塩およびカルシウム塩のような
アルカリ土類塩および有機塩基で形成された塩、例えば
トリエタノールアミンおよびジエチルアミノエチルアミ
ンのような七ノー、ジーまｔはトリー（低級アルキル）
あるいは（低級アルカノール）アミンから誘導されたア
ミノ塩およびピペリジン、ピリジン、ピペラジンおよび
モルホリンのような複素環アミンとの塩がある。このよ
うに許容できない塩と共に医薬的に許容し得る塩は、本
発明の化合物の単離および／または精製において有用で
あシ、ま＊＃Ｆ谷できない塩も当業界に既知の技術によ
って許容し侍る塩に変換できる点で有用である。

本発明は、ま次式（１）（式中　ＨＡは水素またはＣ】〜１アルキルであシ、Ｒ
”　、Ｒ３、Ｒフ　Ｒ１３、Ｒ９およびＲｌｏかつΩお
よびｍは特Ｉ！ｆ請求の範囲第１項に定義された通りで
あル、基Ｒ’　、Ｒ’　、Ｒ１１およびＲ１２の１つは
Ｃ】〜１２アシルであシ、他の基Ｒ’　、Ｒ６、Ｒ１１
およびＢ１１１は同一または異なって、水素ま友はｃＪ
−１２アシルである）の化合物を脱アシルし、その後、
任意に（１）式（１）の生成化合物においてＲＬが水素
の場合　Ｒ１がホルミルである式（１）の相当する化合
物を製造するように化合物をホルミル化し、および／ま
たは（ＩＩ）式（１）　（Ｄ　生ｊｌｉＥ　化合物（７
）　Ｒ”　、Ｒ３、Ｒ’　、　Ｒ’　、Ｒ１１ｂ　！び
Ｒ１２を他のＢａ　、Ｒ３、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ１１および
Ｒ１２に変換し、次いで任意に塩を形成することを特徴
とする、本明細曹に定義され次式（１）の化合物または
その塩の製造方法も提供する。

Ｃ】〜コ２アシルの場合、Ｒａ　、Ｒ６、Ｒ１１および
Ｒ１２は力ｋ　ｚｔＦ　ン１！ｌｉｅ　ＣＪ　−ｘ　ｚ
　７　シル２＞’好ましい。Ｃｌ−２２７シルの場合、
Ｒ５、Ｒ６、ＨｌｌおよびＢｌには同一または異なって
、Ｃ】〜１２カルボン酸アシルが最も好ましく、特にＣ
】〜６アルカノイル、と９わけア七チルである。

式ＩＩ）の化合物の脱アシルは、従来のように行うこと
かできる。Ｃｍ−ｚｘアシルの場合、Ｒ５、Ｒ６、ＲＩ
ＬおよびＨＩＪが同一または異なって、Ｃ１〜６アルカ
ノイルである好ましい場合、脱アシルは、水酸化ナトリ
ウムのような塩基の存在下における武（１）の生成化合
物が何ら酸化しないようにエタノールま次は少量の２−
メルカプトエタノールを含有するエタノールのようなア
ルコール系＃媒中で高温において行うのが好ましい。式
（Ｉｔ）の化合物においてＲ２およびＲ３の一方または
双方がＣ】〜４アルキルの場合は、脱アシルに好ましい
条件はまた脱エステルを生じると考えられる。このよう
な場合、脱アシルの生成物は　Ｒ３ＩおよびＲ３が共に
水素である式（１）の化合物である。従って、Ｒにおよ
びＲ３の一方または双方がＣ】〜４アルキルである式（
１）の化合物を製造する交めに　Ｂ２およびＲ３が共に
水素である式（１）の生成化合物を下記のようにエステ
ル化する。

ＢＬが水素である式（１）の生成化付物の任意のホルミ
ル化は、化合物を無水酢酸ギ酸と高温にかいて反応させ
ることによって行うのが好ましい。

式（１）の生成化合物におけるＢ２および／またはＲ３
の、他のＲ２および／ま友はＲ３への任意の変換の例と
しては、従来のエステル化試薬および条件、例えば酸の
存在下におけるｃｌ−４アルカノールを用いる水素のＣ
１〜、アルキルへの任意の変換がるる。このことは　Ｒ
２およびＲ３の一方または双方がｃｌ−４アルキルであ
る式（１）の化合物の製造において化合物が、前記の脱
エステルを行う場合に実施する有用な任意の変換であろ
う。このような場合、所望のエステルは、今記載した遊
離酸から製造できる。

式（１）の化合物の塩は、従来のように任意に形成でき
る。

式＜１１）の化合物は、式（１）（式中　Ｈ４−Ｒ６およびｎは本明細誓に定義された通
シである）の化合物と式（ＶＩ）（式中　ＨＡ　、　Ｒ２、Ｒ３、Ｈ？　、Ｒ８、Ｒ９お
よびＲｌｏは本明ａ書に定義された通りである）の化合物の混合物を還元し、次いで式（ＩＩ）の生成化
合物においてＨＡが水素の場合　ＨｌかＣ１〜４アルキ
ルである式Ｃｌンの相当する化合物を製造するように化
合物を任意にアルキル化することによって製造できる。

式（１）の化合物と式（■１）の化合物の混合物の還元
は、従来の還元的アルキル化反応によって行うことがで
きる。しかしなから、浴媒としても働く酢酸のような酸
の存在下に溶媒中において水素化シアノホウ素ナトリウ
ムによって還元を行うのか好ましい。

Ｒ１が水素である式（ＩＩ）の生成化合物の任意アルキ
ル化は、式（Ｎ）の化合物とｃｌ−４アルデヒドの混合
物を、酢酸のような酸の存在下に水素化シアノホウ素ナ
トリウムで還元する還元的アルキル化によって行うのが
好ｌしい。

ｎが３である式（１）の化合物は、それ程好ましくなり
が、式（ＩＶ）ａ（式中　Ｒ４およびＲ５は本明細書に定義されｔ通シで
あるンの化合物と本明細書に定義された式（、ＹＩ）の化合物
の混合物を還元し、次いで式（１）の生成化合物におい
てＲ１が７に素の場合、ＲＡがＣ】〜４アルキルである
式（…）の相当する化合物を任意にアルキル化すること
によっても製造できる。

式（１ｖ）の化合物と式（ＶＤの化合物の混合物の還元
は、水素化シアノホウ素ナトリウムを酢酸のよ５な酸の
存在下に用いて還元を行９、式（１）の化合物と式（Ｖ
ｌ）の化合物の混合物の還元と同様に行うことができる
。しかしながら、式（ｖｌ）の化合物と式（ＩＶ）の化
合物の混合物の還元において、酢酸を溶媒としても使用
しないが、これについてメタノールまたはメタノールと
２−メトキシエタノールの混合物を使用するのが好まし
い。また、モレキュ２−シープのような脱水剤の存在下
に還元を行うのも好ましい。

Ｒ１１が水素である式（…）の生成化合物の任意アルキ
ル化は前記のように実施できる。

式（１）の化合物および式（バ）の化合物の両者は、式
（Ｖ）（式中　ＨＡ　ｌ　、Ｒ６、Ｒ６およびｎは本明細書に
定義された通シで；ｂシ、しかもＨＡ３はエチルのよう
なＣ］〜４アルキルである）の化合物の加水分解によって製造できる。

式（１）の化合物の製造の場合、加水分解は、シュウ酸
または４−トルエンスルホン酸のよｊ６２の存在下にジ
クロロメタンま几はアセトンのような溶媒中で行うこと
ができる。さらに、ｎが３である、式（１）の化合物の
製造の場合、加水分解は、また菫温またはわずかに高温
において、率に水中においても行うこともできる。

式（バ）の化合物の製造の場合、加水分解は、ｎが３で
ある式＜Ｖ）の化合物で行われ、しかもＳ＃水またはほ
ぼ沸騰水において簡単に行うことかできる。

式（Ｖ）の化合物は、式（Ｖｌｌ）（式中　Ｒ１３およびｎは本明細書に定義され之通夛で
ある）の化合物をアシル化することによって＃造できる。

式（Ｖｌｌ）の化合物のアシル化は、ピリジンのような
塩基の存在下に例えば酸無水物を用いて従来のように行
うことができる。

式（■）の化合物は、式（■）ｏ２Ｒ１４〇Ｈ（Ｃ’Ｈａ）ｎ−ＩＣＨ（０Ｒ１３）ｔａ　　　（
Ｖｍ）Ｎ（式中　ＲＡ３およびｎは本明細書に定義され九通）で
あＪ、Ｒ１４はエチルのようなｃｌ−４アルキルである
）の化合物とグアニジンを反応させることによって、製造
できる。

式（ＤＩ）の化合物とグアニシンの間の反応は、従来、
例えばエタノールのような溶媒中でナトリウムメトキシ
ドのような塩基の存在下に高温で行うことができる。

式（Ｖｌｌ）の化合物は、式（Ｍ）Ｃｏ２Ｒｌ４ＣＨ２（■）Ｎ（式中　Ｂ１４は本明細書に定義された通ルである）の
化合物と式（Ｘ）Ｌ　−（ＣＨ２）ｎ　−ｚ　ＣＨ（ＯＲＬ３）　＊　　
　（Ｘ　）（式中　Ｂ１３およびｎは本明細書に定義さ
れた通シであシ、かつＬはクロロ、ブロモ、ヨードま之
はトシルオキシのような脱離基である）の化合物を反応
させることによって製造できる。

式（Ｎ）の化合物と式（Ｘ）の化合物の反応は、例えば
エタノールのような溶媒中でナトリウムメトキシドのよ
うな塩基の存在下に、従来のよりに行うことができる。

式（ＶＪ）　、＜ｒＯおよび（Ｘ）の化合物は市販され
るか、またはこれらの公表された製造方法を実施するか
、あるいは構造的に類似の化合物の公表され７を製造方
法に類似の方法を実施することによって得ることができ
る。例えば、式（ＶＪ）の化合物は、ジャーナル・オデ
・ジ・、アメリカン・ケミカル・ソサイテイ（Ｊ、　Ａ
ｍ、　Ｃｈｅｍ、　５ｏｃ−）　、１９５８．８０、第
５７７８貞および次頁に記載の方法を用いて得ることが
できる。他方、式（ＩＩ）　、（１）　、（ＩＶ）およ
び（、Ｖ）の化合物は、式（１）の化合物製造用の新規
な中間体であシ、従って本発明の１部に相当する。

ｍが１または２である式ＣＩ）の化合物は、大腸菌ホリ
ルボジーα−グルタメートシンテターゼのような！ｉ１
当な＃素の存在下のグルタミン酸との反応によって、ｍ
が０である式（１）の相当する化合物から酵素的に製造
できる。

本発明の化合物ｔ＋友は塩は、原体として投与できるが
、これらは医薬展剤の形で提供するのが好ましい。従っ
て、本発明は、さらに前記に定義された本発明の化合物
またはその医薬的に許容し得る塩およびその医薬的に許
容し侍る担体を含むヒトまたは獣医用の医薬展剤を提供
する。

医薬組成物は、本発明の化合物または塩と共に有効に使
用できる他の治療剤、例えば本発明の化金物および塩の
抗Ｊ厘瘍活性を増進できるゾヒドロ：Ｊ！″酸レダクタ
ーゼ阻害剤を任意に含有し得る。担体に関して本明細書
に用いられる「医薬的に許容し祷る」の晴句は、製剤に
用いられる本発明の化合物または塩および存在し得る他
の治療剤と相容性であシ、シかもそのレシピエンドにと
って有害でないという意味で用いられる。担体自体は、
本発明の化合物または塩および存在する他の治療剤を医
薬製剤として配合できる薬学業界において従来用−られ
ている１種またはそれ以上の付形剤を構成し得る。

本発明の医薬製剤としては、経口、非経口（皮下、皮肉
、筋肉内および静脈内を含む）および直腸投与に適して
いるものがあるが、最適経路は、例えばレシピエンドの
条件および同定によって恐らく決まるであろう。製剤は
、従来単位剤形で提供でき、しかも薬学技術に既知の方
法の何れかによって製造できる。すべての方法には、有
効成分、すなわち本発明の化合物ま九は塩を担体と組み
合わせる工程がある。一般に、製剤は、有効成分を液体
担体または微粉砕固体担体あるいは両者と均一かつ緊密
に組み合わせ、次いで要すれば組み合わせた混合物を所
望の製剤とすることによって製造される。

経口投与に通した本発明の医薬製剤は、各々有効成分の
所定量を含有するカプセル剤、カシェ−剤、錠剤ま友は
ロゼンゾ剤のような分離単位、散剤、ｗ４粒剤、シロッ
プ剤、エリキシル剤または飲料、あるいは水中油型液体
エマルジョンまたは油中水型液体エマルジョンとして提
供できる。ま友製剤は巨丸薬、砥削まｔは泥青剤であっ
てもよい。

一般に、錠剤は、経口投与に適しｔ最適の医薬製剤であ
る。錠剤は、有効成分を医薬的に許容し侍る担体と共に
圧縮または成形することによって製造できる。圧縮前は
、適当な機械で、粉末または顆粒のようなさらさらした
形の有効成分を例えば結合剤、不活性希釈剤、１１＃沢
剤、崩壊剤および／または界面活性剤との混合物で、圧
縮することによって製造できる。成形腕は、適当な機械
で、不活性液体希釈剤で湿潤した粉末有効成分の混合物
を成形することによって製造できる。錠剤は、任意に被
覆または筋をつけ、しかも有効成分の徐放またはｆｆｔ
ｔｅａされ次放出を与えるように製剤できる。

非経口投与に通した本発明の医薬製剤としては、例えは
酸化防止剤、緩衝剤、静菌剤および組成物をレシピエン
ドの血液と等張にする溶質を含有し得る水性および非水
性無菌注射液および例えば沈殿防止剤および増粘剤を含
有し得る水性および非水性無菌懸濁液かある。製剤は単
位用量まｔは多用量容器、例えば封入アンプルおよびバ
イアルで提供され、しかも使用直前に無菌液体担体、例
えば注射用水の亀加のみを要する凍結乾燥状、帳で貯蔵
できる。即時注射液および５８Ｉｉｌ液は、前記の種類
の無菌粉末、頌粒および錠剤から製造できる。

直腸投与に適しｔ本発明の医薬製剤は、例えばココア脂
およびポリエチレングリコールを含有する層剤として提
供できる。

前記のように、本発明の化合物および塩は、本発明の代
表的数の化合物が特別のリンパ球および結合ｍ域細胞系
に対して活性であることが分かったリンパ球白血病Ｐ３
８８１０および細胞培養細胞ｍ試験において以下に示す
ように抗ｍ瘍活性を有する。従って本発明の化合物は腫
瘍増殖を阻害できることが確立された。従って、本発明
の化合物および塩はヒトおよび動物用医薬品において、
特に腫瘍増殖、と〕わけリンパ球白血病および悪性腫瘍
（あるいは一般に癌として知られる）の治療または予防
において有用である。従って、本発明は、さらに、本発
明の化合物ま几は塩の治療ま友は予防上有効量を動物に
投与することｔ−％黴とする、動物にかける腫瘍増殖の
治療ま之は予防方法を提供する。あるいは、またヒトま
たは動物用医薬品、特に腫瘍増殖の治療または予防用の
本発明の化合物ま之は塩も提供される。

本発明の化合物または塩を用いる治療または予防を要す
る動物は通常ヒトまたはヒト以外の噛゛乳動物である。

治＃！または予防を要する腫瘍増殖の特別の例としては
リンパ球白血病および悪性１座瘍がある。

前記のように、本発明の化合物または塩の抗帽瘍活性は
、ジヒドロ葉酸レダクターゼ阻害剤、例えば２，４−ジ
アミノ−＋５−（２，５−ジメトキシベンジル）−５−
メチルビリド−（２，３−ｄ）ピリミジン塩酸塩によっ
て増進できる。従って、帳瘍増殖の治療または予防にお
いて、本発明の化合物および塩と共にジヒドロ葉酸レダ
クターゼ阻害剤を使用するのが有利であろう。

本発明の化合物または塩は、経口、非経口（皮下、皮肉
、筋肉内、静脈内または直腸を含む）経路で、動物に投
与できる。化合物または塩を前記のように好ましい医薬
製剤の形で提供する場合、使用する実際の製剤は、もち
論医師または獣医によって選ばれた投与経路によって決
まる。例えば経口投与が好ましい場合、使用する医薬製
剤は該経路に適したものが好ましい。

本発明の化合物または塩の治療または予防上有効量は、
例えば動物の年齢および体重、治療ま友は予防を女する
正確な拭擦およびその重度、展剤の性質および投与の経
路ｔ−初め多数の要因によって決ま）、シかも結局は主
治医または獣医の裁量による。しかしながら、腫瘍増殖
、特にリンパ球白血病または悪性腫瘍の治療または予防
についての本発明の化合物の有効量は、一般に０．５り
／レシピエンド体重／日〜６００＋Ｗ／レシピエンド体
電７日の範囲内、よシ通常は７．０η／体重／日〜２０
０ダ／体重／日の範囲内にある。従って、７０ｋｇ成人
の患者には、毎日の実用量は、通常４９０■〜１４，０
ＯＯＷ＆９であシ、しかもこの量は、全日用量が同一で
あるように、単一日用量またはよ）普通には（２，３，
４，５ま之は６のような）多数の分割日用量である。本
発明の塩の有効量はこの化合物自体の有効量の割合とし
て決定できる。

本発明の化合物による腫瘍増殖の治療または予防には、
時折解毒剤または救急剤の動物への投与が必要であろう
。このような薬剤の特別の例としては、ロイコポリン、
ビキサンチンおよび５−７ミノイミダゾールー４−カル
ボキサミトリボヌクレオチド（ＡＩＣＡＲ）かあるが、
ロイコボリンが最も好ましい。

下記の例１．２および６の化合物も、ま几マイコプラズ
マ、スピロプラズマ・シトリ（Ｓｐｉｒｏｐｌａ−ｓｍ
ａ　ｃｉｔｒｉ）に対して活性を有することが分かった
。従ってこれらの化合物は、この微生物によって侵襲さ
れｔせ橘頌植物の治療または予防に有用である。化合物
は、噴繕、散布、土壌への混入または植物への圧入のよ
うな当業界に既知の方法によって植物に施用できる。例
１の化合物は、またそれ自体の葉酸を合成できず、従っ
て予め形成された葉酸塩を要するある種の細菌生物に対
して活性を有することも分かった。これらの生物は、２
クトバチルス・カゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　
ｃａｓｅｉ）およびストレットマイセスｅ７エシウム（
ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｒａｅｃｌｕｍ）である。′
１＋友、例３の化合物と共に、例１の化合物は、さらに
黄熱ウィルスに対して若干の活性を有することが分かっ
た。

下記の例および生物学的データは、本発明の例示として
与えられ、何ら本発明を制限するとは解釈すべきではな
い。

例１：式（１）　訃よび（ｎの化合物を経由するＮ−〔
４−（３−（２，４−ジアミノ−１，６−シヒドロー６
−オキンー５−ピリミジニル）プロピルアミノコベンゾ
イル〕−−−グルタミン酸の製造（ａ）２−シアノ−５
，５−ジェトキシペンタン酸エチルの製造ナトリウムメトキシド１６−２　＆　（０−３０ｍｏｌ
　）の攪拌されている無水エタノール溶液１００ｄに、
シアノ酢酸エチル１６Ｑａｌ（１７０ｇ、１．５０ｍ０
１）を加えた。この清液を４０℃において真空中で回転
蒸発し、次いで残留白色固体を乾燥ジメチルホルムアミ
）’２００ｇｊに精解した。この清液に、３−クロロプ
ロビオンアルデヒＰジエチルアセタール５０ｍ（５０＃
、０．５０ｍｏｌ）およびヨウ化ナトリウムの結晶を加
え、次いで清液を磁気攪拌および防湿しながら５時間蒸
気浴上で加熱した。赤褐色浴液を冷却し、氷水６００ｄ
に注入し、次にジエチルエーテル（６Ｘ２００１Ｌｌ）
で抽出した。有機相を水洗（６ｘ５０ｓｖＬ湯水洗浄（
５０ｍ）Ｌ、次に硫酸マグネシウム上で乾燥した。溶液
をろ過し、真空中で回転蒸発し、次に残留物を蒸留して
、次工程に対して十分に純粋である明澄な液体、沸点９
０’　〜１０８″（０，０５ｍｇ　）を得た。分留によ
って、主留分として、明澄な液体を得た。沸点ｉｏ６’
〜１０８°ＣＯ，０２５鵡Ｈｇ）；　ＮＭＲ（ＯＩＪＯ
１３）δ１．２０（ｔ、６Ｈ。

ｃＨ（ｏｃＨ２ｃＨす２）　ｍ　Ｌ５１　（ｔ　ｍ　３
　Ｈｅ　ｃｏｚｅＨ２ａ１（３）　。

１．９０　（ｍ　、　２　Ｈ、０Ｈ２０１１ＯＮ　）　
、　５．６０　（ｍ　＃５　Ｈ、０Ｈ（ＱＣ！シＯＨ３
）　ｇ＋ｃ旦Ｃｋｌ）　＃　４．２４　（（ｌ　ｅ　２
　Ｈ。

ＣＯ２０Ｈ２）　ｅ　４−５１　（ｔ　＃　１１Ｈ＊　
０Ｈ（ＯＯＨ２ＣＨ３）２）　＃ＩＲ（フィルム）２２
６５．１７５０．１４５０偽−１（１））３−（２，４−ジアミノ−１，６−ジヒＰロ６
−オキソー５−ピリミジニル）−プロビオンアルデヒド
ジエテルアセタールの製造ナトリウムメトキシド２２−０１１　（４０７ｍｏｌ　
）の無水エタノール浴液４００ｄに、グアニジン塩酸塩
１８−２＆（１９１ｍｍｏｌ）ｋＡび２−シアノ−５，
５−ジェトキシペンタン酸エチル４６．０．９（１８９
ｍｍｏ１）を加えた。この混合物を攪拌しながら２．５
時間還流し、室温において一夜攪拌し、次いで酢酸１５
−で中和した。塩をろ過によって除き、次いでエタノー
ル１００ｄで洗浄した。−緒にしたろ液訃よび洗液を真
空中で回転蒸発して、オフホワイト固体を得、この固体
を酢酸エチルで温浸し、次いで冷却した。固体を捕集し
、次に酢酸エチルで洗浄した。酢酸ナトリウムを含有す
るこの物質を１Ｎ水酸化ナトリウム１５０７に浴解し、
次いで攪拌し危がら酢酸１０１１７でＰ）１５〜６に酸
性化した。得られ九沈殿を集め、冷水５０−で洗浄し、
（生成物は水に１部溶解性）次いで乾燥した。収量２９
．０７　Ｎ　（６０％）、融点１７８°〜ｉａｉ’。１
部分を酢酸エチル−エタノールから再結晶して、分析試
料を得た。融点１７７′〜１７８°。ＴＬＯ（０６）（
６：　ＥｔＯＨ／　５：１）　；　ＮＭＲ（ＤＭ８０−
＋１．）δ１．１１（ｔ、６ＨｓｃＨ，、）、１．５６
（”　＃’２　Ｈｚ　ｃＥ２ｃＨｇ　ＯＨ）、２．１９
　（ｔ　、　２　Ｈ。

５．９８　（ａ　、　２　Ｈ、ＮＨ２）、９−８４　（
ｓ　、　Ｉ　Ｈ。

ＨＮ（！（０））元素分析’　”１１Ｈ２ＯＮ４０３について計算値　ａ
、　５１．６　；−Ｈ，７，８７；　Ｎ、　２１．９実
側値　ｃ、　５１．７　；　Ｈ，７，７９；　Ｎ、２　
ｉ、７（ｃ）３−（２−アセチルアミノ−４−ジアセチ
ルアミノ−１，６−シヒドロー６−オキソー５−ピリミ
ジニル）−プロピオンアルデヒドジエチルアセタールの
製造３−（２，４−ジアミノ−１，６−シヒドロー６−オキ
ソー５−ピリミジニル）−プロピオンアルデヒドジエチ
ルアセタール７．２０　＆　（２８，１ｍ　ｍｏｂ　）
　、乾燥ぎりジン３０ｗＩＩｓおよび新たに蒸留した無
水酢酸３０１Ｌｌの攪拌さｎている混合物を油浴上で９
０℃に６時間加熱し、次いで室温に２いて１夜攪拌した
。１５分で、生成したジアセチルピリミジノンとトリア
セチルピリミジノンの混合物として浴液が生じ、憚記化
合物のみを得るには長期間の反応を要した。浴液を真空
中で回転蒸発して、油を得た。酢酸エチルを加え、次い
で固体を得るまで数回回転蒸発した。固体をシクロヘキ
サンに分散し、次いで捕集した。収量８．８８　ｇ（８
２％）、融点１２６′〜１６７ｃ′（ＴＬＣ上１スポッ
ト）。１部分をシクロヘキサン−酢酸エチルから再結晶
して、分析試料を得た。―点１５８′〜１５９’ｏ　Ｔ
ＬＣ（０６Ｈ６：　ＦｉｔＯＨ／　ｓ：ｉ　）　；　Ｎ
ＭＲ（ＤＭ８０−＋１．）δ１．０８　（ｔ　、　６Ｈ
、２０Ｈ２Ｃシ）、１−６５　（ｍ　＝　２　Ｈ＃　０
Ｈ２０Ｈ２ＣＨ）、２．１３　（６。

３　Ｈ、Ａｃ　）、２．２７　（θｊ６ＨＩ２Ａｏ）、
２．２　（２Ｈ、０Ｈ２ＣｉＨ２０Ｈｓ　アセチルアミ
ノに重畳）、３−２−５−７　（ｍ　ｓ　４　Ｅｅ　２
　”　ｏｃｐ２）、４．４２　（ｔ　、　Ｉ　Ｈ、ＯＨ
）、１ｌ−８７（ｂｒｓ。

２　Ｈ、ＡＯＮＨ＄？工びＩ（ＮＯ（０）　）元素分’
ｆｌ’Ｉ　：　Ｏ１？Ｈｚ６Ｎ４０６Ｋ　ライ”Ｃ計算
値　ｃ、　５５．４　；　）１．６．８５　；　Ｎ、　
１４．６実測値　ｃ＝　５５−７　；　Ｈ−６−８７；
　Ｎ−１４−６式（５）の化合物の経路：（ｄ）２−アセトアミド−８−アセチル−５，６゜７．
８−テトラヒドロ−７−ヒドロキシピリド（２，３−＋
１１ピリミジン−４１Ｂ）−オンの製造３−（２−アセチルアミノ−４−ジアセチルアミノ−１
，６−ジヒＦロー６−オキソ−５−ピリミジニル）−ゾ
ロピオンアルデヒドジエチルアセタール（２５，０ｇ、
　０．６６　ｍｏｚ　）を、蒸気浴上、水１００ｍで４
時間加熱した。溶液を熱ろ過して、不溶性副生物を除き
、次いでろ液を真空中で濃シロップに回転蒸発した。こ
のシロップをエタノール次いで酢酸エチルに遂次浴解し
、次に各々回転蒸発して、固体を得、この固体を酢酸エ
チルで温浸した。この固体を集め、次いで乾燥した。さ
らに′！′ｇ製なしに使用したクリーム色固体の収量１
５．１．９　（７６％）、融点１９９°〜２０１’。１
部分を２−プロパツールから再結晶して分析試料を得た
。融点２０２′〜２０５’　　ＴＩＪＯ（０６Ｈ６：Ｅ
ｔＯＨ／　１０．１　）　；　ＮＭＲ（ＤＭ８０−（１
６）δ１１．７５（ｂｒ　８　、　Ｉ　Ｈ、ＮＨ）、１
１．３０（ｔ）ｒ８．ＩＢ。

Ｎ）Ｉ、Ｗｌ／２−５Ｈｚ）、６．１５（１，ＩＨｔＪ
−５、Ｑ　Ｈ２，ＯＨ）、６．ｏ　６　（ｍ　＃　１　
）ｉ　−Ｊ　−２−７ＨｚＤ２０交換に工ｆｉＯＨｔ−
除いｆｃ場合ＣＨ）、２．４６（８ｓ　３　Ｈ＃　ＣＨ
３）、２−１７　（ｓ　−３Ｈ、ＣＩ（３）、２．４０
−２−１０　（ｍ　、　２　Ｈ、ピリミジ７−ＣＨ２）
、２−０２−２−０２−１−４２（０Ｈ２０Ｈ２ｃＨ）
；１３０−７７　ｎｍｒ　（ＤＭｆｊＯ−ｄ、　）　ｐ
ｐｍ　：　１５．７．２６．９．２７．２．７２．８．
１　０２．２、１　４７．２．１５２．４．１　６０．
４．１　７１−０．１　７５−４　；　ＭＢ”Ｑ／ｅ２
６６、元素分析：　０１ｌＨｚ４Ｎ４０４について引算
値　ｏ、　４９．６　；Ｌ　５−！１０　；Ｎ、　２１
．［］４笑測値　ｃ、　４９．６　；　Ｈ，５，３６；
　Ｎ、　２０．３５ミド）−１，６−シヒドロー６−オ
キソー５−ぎりミジニル）プロピルアミノコベンゾイル
〕−Ｌ−グルタミン酸ジメチルの製造２−アセトアミド−８−アセチル−５、６、７゜８−テ
トラヒドロ−７−ヒドロキシピリド〔２゜６−ｉ〕ピリ
ミジノン４（５Ｈ）−：をン２．５０ｇ（７，６ｍ　ｍ
ｏｌ）、Ｎ−（４−アミノベンゾイル〕−ｐ　−りｈｐ
　ミ７ｉ１ジメチル２．４０　＆　（８，１５ｍｍｏｌ
）、６Ａモレキユラ一シープ５ｇ、メタノールｉ　５０
Ｗ１１お工び酢酸４ｍの混合物を、防湿しながら３時間
攪拌して、この時「イミン」形成が完了した。水素化シ
アノホウ素ナトリウム（０，３８９）および酢酸８ｄを
反応液に加えた。１５時間後、ＴＬＯ４Ｃよって中間体
「イミン」の痕跡が検出さｎ、さらに水素化シアノホウ
素ナトリウム５０■を加えた。１時間後、反応をクロロ
ホルム５００ｄで希釈し、次いで七ライトパッドでろ過
して不溶物を除いた。クロロホルム清液を５％重炭酸ナ
トリウム水溶１ｆｔ５０ｍで４回、水５０．ｄで２回、
塩水５０ｍで１回洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥し
、次いで真空中で回転蒸発した。得らまたフオームを酢
酸エチル５０−で摩砕して、白色結晶を得た。収量２．
７５．９　（６５％）、融点１４４′〜１５０°。エタ
ノールからの再結晶に１って、クロマトグラフィー的に
純粋な物質を得た。収量１．７０，５１（４０％）、融
点１３５’〜１４２′。前実験から融点１４０′〜１４
３″の分析的に純粋な試別を得た。ＴＬＯ（ＯａＨａ　
：　ＥｔＵＨ／　１　ｏ：ｉ　）　；ＮＭＲ（ｐＭｓｑ
−ａ、　）　ＩＩ　１１．６９　（’ｂｒ　ａ　ｅ　２
　Ｂ　ｍ２　ｈａＮＨ）、　９．６３　（ｂｒ　ｓ　　
、　　１　Ｈ、ｒｉｎｇ　ＮＨ）、８．２４　（ｂｒ　
（１、ｌ　Ｂ　、ムｒｏＯＮＨ）、７．６５　（ｄ　。

２　ｎ　ａ　ムｒＨ）、６．５３（１，２Ｈ，ムｒＨ）
、６．１７　（ｂｒ　ｔ　、　１Ｂ　、　　０Ｈ２ＮＨ
）、　４．３９　（ｍ　。

１Ｈ、０ＨＯＯ２０Ｈ３ン、３．６３　（ａ　ａ　３Ｈ
１ｏ０２ＣＨ３）、５、ｓｓ＜ａ　　ａ　　３ｍ−ｏｏ
２ｃＨ３）、３−０１　　（ｍ。

２　Ｈ、Ｃ！Ｈ２ＮＨムｒ）　、２−４３　（ｍ　ａ　
　２　Ｈ。

０Ｈ２００ｘＯＨ３）　、２−１　（４５１、ｉリミジ
ン−ＣＨ２ａｎｃＬＯＨＯＨ３、ムａＮＨビークにニジ
マスク）、２．１４（８゜３１！　、ム’）、２．０１
（ｓ、３ｇ、　ムＯ）、１．７２（！ｎ　＃　２　Ｂ　
ｅ　　０Ｈ２０Ｈ２０Ｈ２）元素分析：　０２ｓＨ３ｓ
ＮａＯｓ・１／２　Ｈ２Ｏについて計算値　ａｍ　５４
．２　；　Ｂ、　６．０１　；　Ｎ、　１５．２実測値
　０＝　５４−３　；　Ｈ＃　５−９０　；　Ｎ−１５
−３（ｆ）　　Ｎ　−（４−Ｃ３−（２、４−ジアミノ
−１゜６−シヒドロー６−オキソー５−ピリミジニル）
プロピルアミノコベンゾイル］−Ｌ−グルタミン酸の製
造Ｎ−［４−［３−（２，４−ビス（アセトアミド）−１
，６−シヒドロー６−オキソー５−ピリミジニル）フロ
ビルアミノコベンゾイル〕−Ｌ−グルタミン酸ジメチル
１−６０　Ｊｉ’　（２，８９ｍ　ｍｏｚ）、エタノー
ル５０．ｄおよび１Ｎ水酸化ナトリウム１００−の攪拌
さｎている溶液を５０′〜６０℃で２０時間加熱した。

冷却し７’ｔ＆応液を真空中で５０ｉｉｊに回転蒸発、
冷却し次いで濃塩酸でｐ）１５〜６に中和した。得らｎ
た白色沈殿を集め、水洗し、ジエチルエーテルで洗浄し
、次いで乾燥した。収量０．８６　ｇ（６６％）、融点
（焼結１７０’）１９８’〜２０２ｃ′（発泡）。メタ
ノールからの再結晶によって、分析試料を得た。収量０
．３３　＆（６９％）、融点（固いフオームを形成ｉｓ
ｏ’）２６０°（発泡〕。ＴＬＱ　（ピリジ：／　：　
ＢｕＯＨ：Ｈ２０／１　：　１　：　１　）　；　ＮＭ
Ｒ（ＤＭ８０−＋１６　）δ８．０７（ａｔｌｍ、ムｒ
ｏＯＮＨ）、７．６５　（ｄ　、　２　Ｈ。

ムｒ■）、６−５４（４，２Ｈ，ＡｒＨ）、６．２２（
ｂｒ　ｅ　、　１Ｈ、ＣＨ２ＮＨ）、５．９４　Ｃ８、
２Ｈ。

ＮＨ２）、５．７５　（ｓ　、　２　Ｈ、ＮＨ２）、４
．６４（”　ｓ　１　ｋｌ　＠　ＣＨＯＯ２Ｈ）、３．
０３　（ｍ　、　２　Ｈ。

ＱＨ２ＮＨＡｒ　）、２．５０　（ｍ　Ｉ　４　Ｈ＃ピ
リミジンー０Ｈ２ａｎｄ　０Ｈ２ＣＯ２Ｈ）　、２−０
３　（ｍ　ｅ　２　Ｈ＊０ＨＯＢ２）、１−５８　（ｍ
　ｓ　２　Ｂ　−０Ｈ２０Ｈ２０Ｈ２）元素分析：　０
ｚｏＨハＮ６０６・Ｈ２Ｏについて計算値　ａ、　５０
．７　；　ｍｓ　５．８２　；　Ｎ、　１８．７実測値
　ａｔ　５０．４　；　Ｌ　５．７９　；　Ｎ、　１８
．６式（Ｉ）の化合物の経路：（ｇ）５−（２−７セチルアミノー４−ジアセチルアミ
ノ−１，６−シヒドロー６−オキソー５−ピリミジニル
）プロピオンアルデヒドの製造方法１　：５−Ｃ２−７
セチルアミノー４−ジアセチルアミノ−１，６−シヒド
ロー６−オキソー５−ピリミジニル）プロピオンアルデ
ヒドジエチルアセタール（１−００１ｓ　２−６　ｍ　
ｍｏｌ、　）　（Ｄ蒸貿水（３０，１ｌｊ）溶液を震源
に訃いて１８時間攪拌シタ。

この溶液をエチルエーテル（５Ｘ　５０　ｍｌ　）およ
びクロロホルム（５Ｘ５０−ｖ）で抽出した。クロロホ
ルム抽出物を一緒にして、水洗（２５ｍ４）、塩水（２
５ｍ）で洗浄し、乾燥（Ｍｇ８０．　）次いで真空中で
回転蒸発した。残留＠全クロロホルム／シクロヘキサン
から再結晶して、分析的に純粋な６−（２−アセチルア
ミノ−４−ジアセテルーアミノ−１，６−シヒドロー６
−オキソー５−ピリミジニル）プロピオンアルデヒドｌ
／４水塩、融点１６４′〜１６８℃０．２００　／　（
理論の２５％）を得た。

元素分析：　Ｃ工。Ｈ工。Ｎ４ｐｓ　ｌ／４　Ｉ（２０
（ＭＷ３１２−８０３）についてｉｔ算値　ｃ、　４９
．９　；　Ｂ、　５．３２　；　Ｎ、　１７．９実測値
　ｃ、　４９．８　；　Ｌ　５．３０　；　Ｎ、　１７
．６方法２：３−（２−７セチルアミノー４−ジアセチ
ルアミノ−１，６−シヒドロー６−オキソー５−ピリミ
ジニル）プロピオンアルデヒドジエチルアセタール（３
０−０１ｓ　７８−５　ｍ　ｍｏ’ｌ　）の蒸留水（６
００ｉｄ）溶液を５３℃において３．５時間攪拌し、次
いで真空中で４５℃に訃いて同転蒸発した。残留物をジ
クロロメタン（７５０，ｄ）に沼解し、塩水（５０，ｗ
Ｊ）で洗浄し、乾燥しくＭｇ８０４）、次いで真空中で
回転蒸発して、乾燥固体ｔ−得た。

アセトンから再結晶して、方法１によって製造さｎたも
のと同一の３−（２−７セテルアミノー４−ジアセチル
アミノ−１，６−シヒドロー６−オギソー５−ピリミジ
ニル）プロピオンアルデヒド、融点１６４℃〜１６８℃
　１６．２３９　（理論の６７％）を得た。

（旬　Ｎ−［４−（３−（２，４−ジアミノ−１゜６−
ジにドロー６−オキソ−５−ピリミジニル）プロピルア
ミノ〕ベンゾイル〕−シーグルタミン酸の製造３−（２−アセチルアミノ−４−ジアセチルアミノ−１
，６−ジヒＦロー６−オキソ−５−ピリジニル）プロピ
オンアルデヒド（９，５０ｇ、５Ｑ、２ｍｍｏｌ）＞工
びＮ−（４−アミノベンゾイル）−Ｌ−グルタミン酸ジ
メチル（９，８５，９゜５５．５　ｍ　ｍｏｂ　）　［
Ｒ，Ｋｏｅｈｌｒ　、　ＩＧｏｏｄｍａｎ　、　Ｊ。

ＤｅＧｒａｗ　ｊ？よびＢ、Ｒ，Ｂａｋｅｒ　、ジャー
ナル・オプ・ジ・アメリカン・ケミカル・ソサイテイ（
Ｊ、ムｍ。

ｏｈｅｍ、ａｏｃ、　）、８０．５７７９（１９５８）
］のメタノール（１７５ｓＪ）浴液に、酢酸（７，７ｄ
　）訃工び３ムモレキユラーシー！（Ｘ空中１９０°Ｇ
において１８時間活性化）を加えた。ＱａＣ！ｊ２乾保
管下に１時間攪拌後、水素化シアノホウ素ナトリウム（
２−０１／　％　５−１９　ｍ　ｗａｘ　）を少ｌずつ
２分にわ大って加えた。さらに６時間攪拌後、反応液を
ろ過し、次いでモレキュラーシープをメタノール洗浄し
た。このメタノールを真空中回転蒸発して、残留フオー
ムｔ−得た。このフオームを酢酸エチルで湿らしたシリ
カゲル６００カラム（４０■Ｘ１８０鵡）に加え、次い
でフラッシュクロマトグラフィー技術（Ｗ、Ｏ，日ｔｉ
ｌｌ　、Ｍ、Ｋａｈｎ　２よびＡ。

ｍ１ｔｒａ　、ず・ジャーナルリオゾ・オーガニック・
ケミストリー（Ｊ、Ｏｒｇ、Ｏｈｅｍ、　）、４３．２
９２６（１９７８）］を用いて溶出した。このカラムを
酢酸エチル１ノ、次いでメタノール／ジクロロメタン（
１：９）で洗浄して、生成物を浴出した。

生成物を含有する画分を一緒にし、次いで真空中で回転
蒸発して、アセチル化エステル中間体、融点１７５℃〜
１８０９０８．２Ｉｉを得た。この中間体７．２ｇの溶
液を水酸化ナトリウム（Ｉ　Ｎ、　５００ｍｇ）水浴液
およびエタノール（２５０＊）Ｋ浴Ｍし、次いで５５℃
にンいて１８時間攪拌した。反応液を真空中回転蒸発に
１ってｉｏｏ＊に′Ｓ縮し介−燗株震　ｒ　１９　に　
）甲　　　山か　Ａ　　ｎ　　Ｗ　ｗ１値　Ｉ　４冷却
後、沈殿を集め、次いで水およびエーテルで洗浄した。

生成物を吸引乾燥して、粗生成物６．０ｇ（５２％）を
得、この粗生成物を２−メトキシエタノール（７５ｓｌ
ｌ）に！解、ろ過し、次いで攪拌しながらエタノール（
２０Ｇ、ｊ）を徐々に加えて、式（Ｖ）の化合物を経て
製造さｎたものと同一のＮ−（４−［５−（２，４−ジ
アミノ−１，６−ジヒドは−６−オキソ−５−ピリミジ
ニル〕プロピルアずノ〕ベンゾイルーＬ−グルタミン酸
、融点１９５′〜２００°　１．０２ｇを得た。

−Ｎ−メチルプロピルアミノコベンゾイル］−Ｌ−グル
タミン酸の製造Ｎ−（４−（５−（２，４−ビス（アセトアミ１’）−
１，６−ジヒドロ−６−オキソ−５１’リミジニル）プ
ロピルアミノ〕ベンゾイル］−Ｌ＋グルタミン酸ジメチ
ル１−９９．ｌｉ’　（３−６ｍｍｏ１）の攪拌さｎて
いるアセトニル５０ｓ４ｆお工びジメチルホルムアミＷ
５ｄの溶液に６７％ホルムアルデヒド水溶液２１Ｌｌを
加え、次いで水素化シアノホウ素ナトリウム０．５０　
ｆｌ　（８，０ｍ　ｎｏｌ）　ｉ？よび酢酸２ｄを加え
た。１８時間後、混合物をろ過して、固形分を除き、次
いでろ液を真空中で回転蒸発した。

残留物を氷水１００ｄで希釈し、次いで二項化メチレン
２５ｔＪ丁つで４回抽出した。−緒にした抽出物を、ガ
ラスクールでろ通し、真空中で回転蒸発して、ＴＬＣ上
において単一スポットである油として標記化合物２．１
ｇを得た。油をエタノール５０、ｄお工ひ１Ｎ水酸化ナ
トリウム５０ｍに沼解し、次いで７０℃において２０時
間攪拌した。反応液を冷却し、次いで真空中でシロップ
に回転蒸発した。このシロップを水５０ｍに沼解し、氷
上冷却し次いでｒｓ塩酸でｐ）１３〜４にｒｓ性化した
。白色固体を集め、水洗し、最後にエーテル洗浄した。

収ｉ１．１０．！ｉ’（６７％）、融点１９０″〜２０
０’（３（ＴＬＯ上１スポットン。エタノールから再結
晶して、分析試料を得た。収ＪｌＯ，５４ｙ　Ｃ３ｓ％
）、融点（１６６’〜１６８’固いフオームに変化）１
９８〜２０４’ｏ　Ｔ’Ｌｒａ　（ピリジンＢｕＯＨ：
　ＨｚＯ／１　　：　１　　：　１　　）　　；　ＮＭ
Ｒ（ｎｕｓｏ−ａ、　）δ８．１６　（ｄ　。

１Ｈ、ＡｒＣ０Ｎ、ｇ　）、７．７１　　（ｄ　、　　
２　Ｈ、Ａｒ　）、６．６６　（ｄ　　、　　２　Ｈ、
Ａｒ　）、　５．９４　（Ｂ　　、　　２　Ｈ。

ＮＨ２）、５．７６　（ｓ　　、　２　Ｈ＝　ＮＨ２）
、４．５６　（ｍ。

１ｎ、ｃ旦ｃｏ２ａ　　）、　６−５　４　　（ｍ　　
、２　Ｈ、ｃＨ２Ｎ　（ＯＨ３％ｒ　％２−９３　　（
ｓ　　−３）１　　、　　Ｎ０Ｈ３）元素分ｉ　”　（
３ｚｏＨｚａＮ６０６”１／２　’Ｈ２０について計算
値　ｃ、　５２．７　；　Ｌ　５．９８　；　Ｎ、　１
８．４実測値　ａ−５２−６；　Ｈ＝　５−９５　；　
Ｎ−１８−４−Ｎ−ホルミルゾロビルアミノコベンゾイ
ル〕−Ｌ−グルタミン酸の製造９７％イｆ１ｉ！２５ｗｊお工び無水酢酸５−から製造
さｎた浴液中でＮ−［４−［３−（２，４−ジアミノ−
１，６−シヒドロー６−オキンー５−ピリミジニル〕ゾ
ロリルアミノ〕ベンゾイル］−Ｌ−グルタミン酸１−１
６９　（２，５ｍｍｏｌ　）の浴液を還流して、油浴上
で１時間加熱し穴。反応′ｅ、を冷却し、次いで真空中
で回転蒸発して、固いフオームを得、このフオームを繰
シ返しエタノールで覆い次いで再蒸発した。フオームを
磁気撹拌棒で１夜エタノール下に摩砕して、微細固体を
得、この固体金集め、エタノール洗浄し、次いで吸引乾
燥した。収量１．２２．９（９８％ン、融点１６０′〜
１６０’（発泡）。エタノールから数回再結晶して、分
析的に純粋な物質を得た。収量０．４９６　＆〔４０％
〕、融点１７０６〜１８０°（発泡）、ＮＭＲ（ＤＭＳ
Ｏ−ｄ６　）δ８．６３　（ｄ　、　ｉ　Ｈ、ムｒｏＯ
ＮＨ）、８−５５　ａｎｄ　８．３７　（２９°におい
て比９対１の２個の８は１２０℃に訃いて１重線に合体
する、ｉ　Ｈ、ＩＣ０Ｎ　）、７．９３　（Ｌ　、　２
Ｈ、ＡｒＨ）、７．５６　（８、フォルムアニリドの１
異性体のＡｒＨ）、７−４４　（ｄ　、　２Ｈ、ｈｒＨ
）、５．９３ａｎｃＬ５．７０（２個ｇ　＊　４　”　
ｔ　２個ＮＨ２）、４．４１　（ｍｊ　１）Ｔ＃ｃＨｃ
０２Ｈ）、５−７８　（ｍ　＊　２　Ｈ、ＣＨ２Ｎ（Ｃ
ＨＯ）Ａｒ　）元素分析：　ＣｚｏＨｚ４ＮａＣ１ｙ・
ＨｚＯについて計算１＠　　ａｔ　５０．２　；　ＩＬ
　５．４８　；Ｎ、１７．６実測値　ｃ、　５０．２　
；　Ｅ＃　５．１６　；　Ｎ、　１７．９１．６−シヒ
ドロー６−オキソー５−ピリミジニル）エチルアミノ〕
ベンゾイル］−Ｌ−グルタミン酸の製造（ａ）１−（２−７セトアミドー４−ジアセチルアミノ
−１，６−シヒドロー６−オキソー５−ピリミジニル）
アセトアルデヒドジエチルアセクールの製造新たに蒸留した無水酢酸（２５０ｄ）４１”、２−（２
，４−ジアミノ−１，６−シヒドロー６−オキソー５−
ピリミジニル）アセトアルデヒドジエチルアセタール〔
ヘミツシエ・ベリヒテ（Ｏｈｅｍ。

Ｂａｒ−）、１９７７．１１０．１４６２）　（５０，
０＆ｓ　０．２０６　ｍｏｌ）の乾燥ビリジ／（２５０
−）清液に加えた。浴液を防湿し、しかも磁気撹拌しな
がら蒸気浴上で５日間加熱した。反応液をアスピレータ
−下にエチレングリコールモノメチルエーテルを添加し
て真空中で回転蒸発し、最後に機械ポンプ真空で回転蒸
発した。残留物をエーテルから再結晶して、２−（２−
アセチルアミノ−４−ジアセテルアミノ−１，６−ジヒ
ドロ−６−オキン−５−ピリミジニル）−アセトアルデ
ヒドジエチルアセタール、融点１２８Ｑ〜１ｔＯ’２ｔ
、Ｏｇ（理論の３０％）を得た。分析試料は試料をクロ
ロホルムに沼解し、次いで浴液をスーパーフィルトロー
　ル（８ｕｐｅｒｆｉｌｔｒｏｌ　）μｍ　９　（Ｆｉ
ｌｔｒｏｌｑｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ　）で洗浄すること
によって製造した。

浴液を真空中で回転蒸発し、次いで残留物をエーテル／
シクロヘキサンから再結晶して、分析的に純粋な物質、
融点１２９℃〜１６０℃を得た。

元素分析：　０１ｃＨｚ４Ｎ４０ａ　（ＭＹ　３６８−
４０）について計算値　ｃ、　５２−１７　；　Ｈ，６
，９７；　Ｎ、　１５．２０実側値　ｃ、　５１．８２
　；　Ｈ，６，５０；　Ｎ、　１５．２５方法１ニジリ
カデル６［］（６，０＆ｓ　メルクμ７．７３４．７０
メツシユ〜２３０メツシユ）訃よびシュウ酸水沼液（１
０％、０−６−）のジクロロメタン（１２ｍ）スラリー
を１５分攪拌した。２−（２−アセチルアミノ−４−ジ
アセチルアミノ−１，６−シヒドロー６−オキソー５−
ぎりミジニル）アセトアルデヒドジエチルアセタール（
１，０９、’１．７　ｍ　ｍｏｌ　）を加え、次いで混
合物を１８時間攪拌した。１炭酸ナトリウム（０，２，
９，２，４ｍ　ｍｏｌ　）　’ｅ加え、次いで１０分後
にスラリーをろ過し、次に酢酸エチルで洗浄した。ろ液
お工び洗液を一緒にして、真空中で回転蒸発して、２−
（２−アセチルアミノ−４−ジアセチルアミノ−１，６
−シヒドロー６−オキソー５−ピリミジニル）アセトア
ルデヒド０．３７　ｇ（Ｗ論の４６％）を得た。分析試
料はアセトンから再結晶することによって製造して０．
２１９　（理論の２６％〕、融点１６９℃〜１７０℃を
得た。

元素分析：　ＣｘａＨｘ４Ｎ４０ｓ　（ＭＹ　２９４−
２７）について計算値　ｃ、　４８．９８　；　Ｈ，４
，８０；　Ｎ、　１７．０８実測値　ｃ、　４８．９０
　；　Ｅ、　４．８３　；　Ｎ、　１９．２６方法２：
２−（２−７セチルアミノー４−ジアセチルアミノ−１
，６−ジヒド０−６−オキソー５−ピリミジニル）アセ
トアルデヒドジエチルアセタール（２，０１１，５，４
ｍ　ｍｏｌ）お工び４−トルエンスルホン酸１水塩（０
，０５０ｇ、０．２６ｍ　ｍｏｌ　）のアセトン（１０
０１１Ｊ）浴液を２日攪拌した。固形分を集め、アセト
ンで洗浄し、次いで乾燥して、方法１に工って製造さｎ
たものと同一の２−（２−１セチルアミノ−４−ジアセ
チルアミノ−１゜６−ジヒＦロー６−オキソ−５−ピリ
ミジニル）アセトアルデヒド融点１６８°〜１７０’０
．７ｉＪｉ’（理論の４６％）を得た。

（０７Ｎ　−（４−（２−（２−アセチルアミノ−４−
ジアセチルアミノ−１，６−シヒドロー６−ンゾイル］
−ｂ−グルタミン酸ジメチル水和物の製造２−（２−アセチルアミノ−４−ジアセチルアミノ−１
，６−シヒドロー６−オキソー５−ピリミジニル）アセ
トアルデヒド（１，７４，９，５，９２ｍ　ｎｏ］、　
）およびＮ−（４−アミノベンゾイル）−Ｌ−グルタミ
ン酸ジメチル〔ジャーナル・オプ・ジ・アメリカン・ケ
ミカル・ソサイティ（Ｊ、Ａｍ＊（３ｈｅｍ、Ｂｏａ、
）、１９５８．８０．５７７９）（１，７４＃、５．９
２　ｍ　ｍｏｂ　）の酢酸（９０，、ｖ）ｍ液を１０分
攪拌した。水素化シアノホウ素ナトリウム（０，８４＆
、ｉ　３．４　ｍ　ｍｏｂ　）を１時間にわたって少量
ずつ添加した。さらに６０分後、反応液を真空中で濃厚
油に回転蒸発した。油を酢酸エチル（５００ｄ）に溶解
して、中性になるまで５％重炭酸ナトリウム水溶液で洗
浄し、水（５０ｍ）、塩水（５０ｄ）で洗浄し、硫酸マ
グネシウムで乾燥し、次いで真空中で回転蒸発した。不
浴物を除くろ過によって酢酸エチルから再結晶して、Ｎ
−（４−Ｃ２−（２−アセチルアミノ−４−ジアセチル
アミノ−１，６−シヒドロー６−オキソー５−ピリミジ
ニル）エチルアミノ〕ベンゾイル〕−Ｌ−グルタミン酸
ジメチル、融点１６８℃〜１７８℃　１．５　ｇ（理論
の４９％〕を得た。酢酸エチル（ノーリット）から再結
晶して、分析試料、融点１７６℃〜１７９℃　０．８３
０　ｇ（理論の２５％）を得た。

元素分析：　ＣｚａＨｓｚＮ６υ９”Ｈ２Ｏ（ＭＷ　５
９０−６０）Ｋツいテ計算値　ｃ、　４９．７９　；　
Ｈ，５，６８；　Ｎ、　１８．９５実測値　ｃ、　４９
．６２　；　Ｈ，５，５３；　Ｎ、　１８．８７（ｄ）
　　Ｎ　−Ｃ４−Ｃ２−（２、４−ジアミノ−１゜６−
ジヒＦロー６−オキソ−５−ピリミジニル）エチルアミ
ノ〕ベンプイル〕−Ｌ−グルタミン酸の製造Ｎ−［４−［２−（２−アセチルアミノ−４−ジアセチ
ルアミノ−１，６−シヒドロー６−オキソー５−ピリミ
ジニル）エチルアミノコベンゾイル］−Ｔ、＋−グルタ
ミン酸ジメチル水和物の粗生成物（再結晶なしに３．３
　ｍ　ｍｏｌ規模で製造〕を、１Ｎ水酸化ナトリウム（
１００厘ｇ）ｊ？工び２−メルカプトエタノール（０，
２５ｄ　）を含有するエタノール（５０ｄ）に溶解した
。反応液を、攪拌しながら１８時間で５５℃に加熱し、
次いで真空中で小体積に回転蒸発した。氷水浴冷却浴液
の−を塩酸（１２Ｎ）で−４に調節して生成物を沈殿し
た。

メタノール／エーテルから再結晶して％　Ｎ−（４−（
２−（２，４−ジアミノ−１，６−シヒドロー６−オキ
ソー５−ピリミジニル）エチルアミノコペン・ｌイル］
−Ｌ−グルタミン酸、融点１８０’〜〜１８５°０．５
２　ｇ（理論の３８％）を得た。

元素分析”　’１８Ｈ２２Ｎ６’６＋Ｈ２’・０．１　
ｘｔ２ｏ　（ＭＹ　４４５．８４）について計算値　ｃ、　４９．７９　；　Ｅ、　５．６８　；　
Ｎ、　１８．９２実測値　ｃ、　４９．６２　；　Ｈ，
５，５５；　Ｎ、　１８．８７例５：Ｎ−［４−［２−
（２，４−ジアミノ−１゜６−シヒドロー６−オキソー
５−Ｖ！リミジニル）エチル−Ｎ−メチルアミノコベン
ゾイル）−Ｌ−グルタミン酸の製造（ａ）　　Ｎ　−（４−Ｃ２−（２、４−ｔ？ス（アセ
トアミド）−１，６−シヒドロー６−オキソー５−ぎり
ミジニル）エチル−Ｎ−メチルアミノコベンゾイル）−
Ｌ−グルタミン酸ジメチルの製造２−（２−アセチルア
ミノ−４−ジアセチルアミノ−１，６−シヒドロー６−
オキソー５−ピリミジニル）アセトアルデヒド（２，９
３ｇ、１０ｍ　ｍｏｌ　＞よびＮ−（４−７ミノベンゾ
イル）−Ｌ−グルタミｙｌｌジメテ／Ｉ／（２，９５９
，ｉ　［１ｎｚｎｏｌ）の酢Ｍ溶液（２００ｄ）を室温
で１５分攪拌した。

水素化シアノホウ素ナトリウム（０，５５０ｇ、５．６
ｍ　ｍｏｂ　）を加え、さらに１０分後ホルムアルデヒ
ド水沼液（５７％）（４，２，ｄ）を加えた。

１０分後、さらに水素化シアノホウ素ナトリウム（１，
５ｇ、２　！１−９　ｍ　ｍｏｂ　）を加え、次いで反
応液ｔ−６０分攪拌した。濯媒を５０℃に訃いて真空中
回転蒸発によって除いた。粘稠な油をクロロホルム：メ
タノール（１：１０．５００ｊ）に濯解し、次いで水（
５０ｍ）、５％重炭酸ナトリウム水溶液（１０ａ＃）で
抽出し、次いで硫酸マグネシクム上で乾燥しな。真空中
で回転蒸発後、残留物をエーテルから再結晶して、淡黄
色粉末３．１４　ｇを得た。生成物をジクロロメタンで
湿らしたシリカデル６０（メルクμ７７３４．６６μｍ
〜２００μｍ）カラムＣ５ｍ×２５−ａカラム）上で開
放カラムクロマドグ２フイーによって精製し、次いで４
％メタノールのジクロロメタン溶液で溶出した。適切な
画分を一緒ＫＬ、次いで真空中で回転蒸発し、しかも残
留物を酢酸エチルから再結晶してＮ−（４−（２−（２
，４−ビス（アセトアミド〕−１，６−シヒドロー６−
オキンー５−ピリミジニルンーエチルーＮ−メチルアミ
ノ〕ベンゾイル〕−Ｌ−グルタミン酸ジメチル、融点１
６８′〜１７５°１．！ｔＮ（理論の２２％）を得た。

元素分析：　０２！ＬＨ３３Ｎ６０Ｂ・０．５　Ｎ２０
　（ＭＹ　５５３．５８）について計算値　ｃ−５４−２４ｓ…、　６．０１　；　Ｎ、　
１５．１８実測値　０−５３−８８　；Ｈ−５−７５；
Ｎ１１　ｂ−２８（１））　　Ｎ　−Ｃ４−Ｃ２−（２
、４−ジアミノ−１゜６−シヒドロー６−オキソー５−
ピリミジニル）エテル−Ｎ−メチルアミノ〕ベンゾイル
］−Ｌ−グルタミン酸の製造Ｎ−［：４−（２−（２−アセチルアミノ−４−ジアセ
チルアミノ−１，６−シヒドロー６−オキソー５−ぎり
ミジニル）エチル−Ｎ−メチルアミノ〕ベンゾイル］−
Ｌ−グルタミン酸ジメチル（０，２５ｇ、０．４３　ｍ
　ｍｏｂ　）、２−メルカプトエタノール（０，２５ａ
＃）、１Ｎ水酸化ナトリウム（２０１Ｌｌ）シエびエタ
ノール（１０ｄ）の沼液會窒素下に６０℃において１８
時間攪拌した。反応液を水浴中で冷却し、次いで塩！（
１２Ｎ）で溶液の−を４に調節した。得らｎた沈殿を集
め、次いで２−メルカゾトエタノール（０，２５ｍ　）
を含有するエタノールから再結晶してＮ−［４−（２−
（２，４−ジメチルアミノ−１，６−シヒドロー６−オ
キソー５−ピリミジニル）エチル−Ｎ−メチルアミノコ
ベンゾイル）　−Ｌ−クルクミンｇ、融点１８０′〜１
８８’０−０７７１（理論の４１％）を得た。こめ物質
は長期間露光すると淡褐色になった白色粉末でめった。

元素分析：　０ｘｏＨｚ４ＮｅＯｅ・Ｈ２Ｏ（ＭＹ　４
５０．４６）について計算値　ｃ、　５０．６６　；　
Ｈ，５，８２；　Ｎ、　１８．６６実測値　ｃ、　５０
．４９　；　ＩＬ　５．７７　；　Ｎ、　１８．５２例
６Ｎ−［４−（３−（２，４−ジアミノ−１，６−シヒド
ロー６−オキソー５−ピリミジニル）プロピルアミノコ
ベンゾイル］−Ｌ−グルタミル−Ｌ−グルタミン酸（２
）およびＮ　−Ｃ４−（５−（２゜４−ジアミノ−１，
６−ジヒＦロー６−オキソ−５−ピリミジニル）プロピ
ルアミノコベンゾイル〕−Ｌ−グルタミル−Ｌ−グルタ
ミル−Ｌ−グルタミン酸（３）の製造化合物２お工び３を、Ｎ−［４−（！１−（２゜４−ジ
アミノ−１，６−シヒドロー６−オキソー５−ピリミジ
ニル）プロぎルアミノ〕ベンゾイル〕−Ｌ−グルタミン
酸（１）水利物訃よびＬ−グルタミン酸から大腸菌ホリ
ルボジーｒ−グルタメートシンテターゼ（Ｂｏｇｎａｒ
　Ａ、８．．０ｓｂｏｒｎｅ　、　Ｃ，，８ｈａｎｅＢ
、Ｂｉｎｇｅｒ　８．Ｃ，ｈ工び！Ｐｅｒｏｎｅ　Ｒ，
、ジャーナＡ／１１オプ・バイオロジカル・ケミストリ
ー（Ｊ、Ｂ１０１゜Ｏｈｅｍ−）　、２６０．５６２５
〜５６３０、（１９８５））によって酵素的に合成し九
。

３７℃水浴で緩やかに振とうしてアンバー気密びん中で
２０時間の反応を行った。アルジン飽和２０ｍ反応液は
、ベンゾイルカルボニルに標識さｎた１４（３−１４ｍ
ｍｏｌ、Ｌ−グルタミン酸４０μｍｏｌ、ＩＣＣ）１ｍ
ｍｏｌ、牛血渭アルブミン４〜．２−メルカットエタノ
ール（２−ＭＥＴ　）　１．４　ｍｍｏｌ、アデノシン
−５′−トリホスフェートＱ、ｉ　ｍ　ｍｏｌ、Ｍｇ０
ｊ２　０．２　ｍ　ｍｏｂ　、）リス−Ｈａｒ　　ｐ）
ｊ８．６　（３７つ２　ｍ　ｍｏｌおよび酵素５０単位
を官有した。２０時間後の反応混合物１００μＪのＨＩ
ＰＬ分析に工って、２種の１４ｃ　ｉ有生成物および残
留１４０−　（１）のないことが分かった。

反応混合物を、１０％ｗｔ　／　ｖｏｗ　）リフルオロ
酢酸（ＴＦＡ　）　２．８　ｄで−１に調節した。この
反応混合物を取扱いの間中、光から防いだ。５．０−の
部分を、２−プロパツール（工ＳＦ）　５ｄｓ　Ｈ２Ｏ
１ｏｔａよび０．１％ｗｔ　／　ｖｏｌ　　ＴＦＡ　５
−で予め洗浄したウオーターズ０１８　　日＠ｐ−ＰＩ
ＬＯｋ上で脱塩した。

この１４０含有生成物を、０．１％ｗｔ　／　ｖｏｌ　
　ＴＦム１〇−洗浄の間８ｅｐ−Ｐａｋ上に保ち、次い
で０．１％ＴＦムｓｙ、５０％　工８Ｆで２−　ＭＥＴ
　５　［１ｍに浴出した。沼出液を密刺アンバーびん中
において、アルビンて飽和、シェル凍結し、次いで凍結
乾燥した。乾燥試料を、３％アセトニトリル（ＡｃＮ　
）のＨＰＬｃｍ媒（Ｕ、１４　Ｍ酢酸ナトリウＡ　ｐ）
ｉ６．４．０．０５％トリエチルアミン）液１．ローに
浴解し、次いで０．４５μｍミリポア　ＨＶフィルター
を通した。ろ液（８４０μ））ｔ−１０−クーオーター
ズ０１　＠　Ｎｏｖａ−１’ａｋ　Ｒａｄｉｃａｌ　Ｃ
ｏｍｐｒｓｅｓｉｏｎ　Ｃｏｌｕｍｎ上で１ｗｌ　／　
ｍｉｎ　（ムＯＮのＨＰＩａＯ溶媒１．５％液１５分に
次いでムＯＮのＨＰＬＯ溶媒２．４％液）でクロマトグ
ラフした。３お工び２として棒間さｎた２個の１４０含
有ピークはそｎ−４：ｆ′Ｌ２７分および６６分で浴出
した。試料をｐＨ１に調節し、０１８　　ｓｅｐ　−Ｐ
ａｋＥｌ上で脱塩し、２−Ｍｅｔに漕出し、アルゴン飽
和し、次いで前記のように、凍結乾録した。乾燥試料を
各々アルゴン飽和５００μＭ　ＮａＯＨＯ−５ｄにｍｍ
した。最終収量は６で１９１ｎ　ｍｏｂであシ、かつ２
では５３７　ｎ　ｍｏｂでめった。合計は１から総合収
率７１％に等しい。

６訃工び２の同定は、七のま＼の分子お工ひそのＫＭｎ
Ｏ４−ａ２ｏ　３　＄％発分解生成物の疎水性クロマド
グ２フイーによって確立さｎた。プテロイルポリグルタ
メートを、ｐＨ２において０１８上に保つのに主な要因
はこのプテロイルポリグルタメートお工び近い類俳体の
酸化状態であることが分かる。該化合物は、１〜７グル
タメートで、ｉ　ｄ　／　ｍｌｎＯｏｌ％ＴＦ人、１２
％　ムＯＮで６８４秒後に単一の鋭いピークで０．１％
　ＴＦＡ、４％　ムＯＮお工び俗出液に保持さｊる。化
合物３および２は前記条件下に１と共クロマトグラフさ
−ｆＬ穴。このことから、化合物のピリミジニルプロピ
ル部分が栽化合’ｌ！１１にンけると同じであることが
分かつ友。

６および２のグルタメート鎖長は、こｎら化合物をプロ
ピルアミノＯ−Ｎ結合における分解後に確立さｎた。（
−９に２けるｉ、ｏＩＩｊｍ液を２％ＫＭｎＯ４ｌ　Ｑ
　Ｏμ）で酸化した。１分後、６０％Ｈ２Ｏ２８０ｐノ
を加え工、ＫＭｎＯ２を沈殿した。１１μｌｌ　／　ｄ
牛肉カタラーゼ、Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ　Ｂｉｏｃｈ
ｅｍｉｃａｌｃｏｒｐ−２０μノの添加によって過剰の
Ｈ２Ｏ２ｔ−分解した）。２シよび６の１４ｏ樟ｖｌｔ
酸化生成物は、４−アミツペンゾイルーＬ−グルタミル
−Ｌ−グルタミル−Ｌ−グルタミン酸（ＰＡＢＧ、　）
お工び４−アミノベンジル−Ｌ−グルタミル−Ｌ−グル
タミニ／　ｌ！　（ＰＡＢＧ２　）でそｎぞｎ　（０−
１％　ＴＦＡ　ｓ　４　’ｆ。

ムＯＮに”１８上で）共クロマトグラフした。このこと
から、６に対応する化合物は、４−アミノ安息香酸に結
合した３個のグルタミン酸残基を含有することが分かる
。２に対応する化合物は、４−アミノ安息香酸に結合し
た２個のグルタミン酸残基を含有する。ＰＡＢＧ　、お
工びＰＡＢ（）３ｉ準におけるよりに、ペゾチＦ結合は
、グルタメートのα−カルボキシルを経ている。

Ｎ−（ベンジルオキシカルボニル）−Ｌ−ｒ　−Ｎ−（
ベンジルオキシカルボニル）−Ｌ−グルタミン酸α−ｔ
ｅｒｔ−デチルエステルジシクロヘキシルアミン塩６．
８９１１　（７，５ｍｍｏＬ　）、Ｌ−グルタミン酸ビ
ス（ｔｅｒｔ−エチル）エステル塩酸塩２−２２９　（
７−５ｍｍｏｌ）および１−ヒドロキシベンゾトリアゾ
ール１．０１９　（７，５ｔｈｍｏｌ）の攪拌されてい
るジクロロメタン溶液２０都に、１．６−ジシクロへキ
シルカル？ジイミド１．７０ｇ（８，２５ｍｍｏｘ　）
を加えた。反応液を１７時間攪拌し、次いでろ過した。

ろ液を、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（２Ｘ４０１１７
）、５％クエン酸水溶液（２Ｘ４０ｄ）および飽和塩水
（２ｘ４０ｄ）で逐次洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥
、ろ過し、次いで真空中で回転蒸発した。生成物をシリ
カデル６０（１５０＃、ｌｔｏメツシュ〜４００メツシ
ュ、８Ｍ試薬）上で、ヘキサン：酢酸エチル（１：１　
）で７ラツシユクロマトグラフイーによって精製した。

適切な画分を、ＴＬＣ相関関係に基づいて一緒にし、次
いで真空中で回転蒸発して、Ｎ　−（ベンジルオキシカ
ルボニル）−Ｌ−ｒ−グルタミル−Ｌ−グルタミン酸ト
リス（ｔｅｒｔ−ブチル）エステル３．３４　！ｌ　（
理論の７７％）を無色ガム質として得た。

ＴＬＣ（ヘキサン：酢酸エチル−３：　１　）　ｅ　Ｒ
ｆ−０，４（アニスアルデヒド）；瓶Ｒ（ＤＭ８０−ｄ
、）　　δ１−３９　（ｓ−２７Ｈ＃　Ｏ−ｔ　−Ｂｕ
　）　ｓ　１−７０　（ｍ　＊２Ｈ，α−ＣＨ２）　−
１−８５（ｍ　ｅ　２　Ｈ−αＣＨ２）　。

２．２０　（ｍ　、　４　Ｈ、β−Ｃ！Ｈ２）　、　４
．００　（ｍ　。

２Ｈ２αＨ）　ｓ　５−０４　（Ｂ　ｅ　２　Ｈ＊　Ｎ
ＣＯ２ＣＨ２）　。

７．３５　（ａ　、　５　Ｈ、Ａｒ　）　、　７．５５
　（ｔｉ　、　Ｉ　Ｈ。

ＮＨ）、８．０５（ａ、１ａ、ＮＨ）元素分析：　Ｃ３０Ｈ４６Ｎ２０Ｇ　（ＭＷ　５７８．
７０　）について計算値ｃ　、　６２．２７　：　Ｈ、８，０１；　Ｎ　
、　４．８４実測値ｃ、６１．９９：Ｈ，８，［１３；
Ｎ、４．７９゜Ｎ−（ベンジルオキシカルボニル）−Ｌ
−γ−グルタミルーＬ−グルタミン酸トリス（ｔｅｒｔ
　−ブチル）エステル３．３４１１　（５，７７ｍｍｏ
ｌ）の９５係エタノール溶液１００虹および炭素担持１
０釜パラジウム８０１ｎ９を水素２２　ｐｓｉにおいて
水素の存在下に１８時間振とうした。この触媒をろ過に
よって除き、次いでろ液を真空中で回転蒸発して、Ｌ−
ｒ−グルタミル−Ｌ−グルタミン酸トリス（ｔｅｒｔ−
ブチル）エステル２．３９　＆　（理論の９６％）を無
色シロッノとして得た。ＴＬＣ（酢酸エチル）％Ｒｆ−
０，３にンヒドリン）。この生成物をさらに確認するこ
となく次反応に用いた。

！Ｎ−（ベンジルオキシカルボニル）−Ｌ−グルタミン酸
α−ｔｅｒｔ−ブチルエステルジシクロヘキシルアミン
塩２−７９　、Ｓ’　（５，３８ｍｍｏｌ　）、Ｌ−ｒ
−グルタミル−Ｌ−グルタミン酸トリス（ｔｅｒｔ−エ
チル）エステル２．３９１　（５，３８ｍｍｏｌ）、１
−ヒドロキシベンゾトリアゾール０．７３　＆（５，３
８ｍｍｏｌ　）および１．ＯＮ塩酸５．３８１１１７の
ジクロロメタン３０３１４中の攪拌されている混合物に
、１．６−ジシクロへキシルカルボジイミド１．２２、
ｌｉ＋　（５，９１ｍｍｏｌ　）を加えた。反応液を１
６時間攪拌し、次いでろ過した。ろ液を逐次飽和ム炭酸
ナトリウム水溶液（２Ｘ５０ｍ）、５％クエン酸水浴液
（２Ｘ５０μ）および飽和塩水（２ｘ５０μ）で洗浄し
、硫酸マグネシウムで乾燥、ろ過し、次いで真空中で回
転蒸発した。生成物をシリカデル６０（１５０ｇ、２３
０メツシユ〜４００メツシユ、８Ｍ試薬）上で酢酸エチ
ル：へキサン（１：１）で７ラツシユクロマトグラフイ
ーによって精製した。適切な画分をＴＬＣ相関関係に基
づいて一緒にし、次いで真空中で回転蒸発して、Ｎ−（
ベンゾイルオキシカルボニル）−Ｌ−γ−グルタミルー
Ｌ−ｒ−グルタミル−Ｌ−グルタミン酸テトラキス（ｔ
ｅｒｔ−エチル）エステル３．１０９（理論の７５％）
、融点７６°〜７８°を得た。

ＴＬＣ（ヘキサン：酢酸エチル−１：　１　）　、　Ｒ
ｆ霊０．４（アニスアルデヒド）　；　ＮＭＲ（ＤＭ８
０−ｄ、　）δ１．３９　（ｓ　、　３６Ｈ，Ｏ−ｔ−
Ｂｕ　）　、　１．７５（ｍ　＊　３　ＨＩα−ＣＨ２
）　−１−９１（ｍ　−３Ｈ＊α−”Ｈ２）　＃　２−
２２　（ｍ　、　６　Ｈ、β−ＣＨ２）　。

３．９０　（ｍ　、　Ｉ　Ｈ、α−ａ）、４．１０（ｍ
、２Ｈ。

α−Ｈ）　、　５．０４　（ｄａ　、　２　Ｈ、ＮＣ０
２ＣＨ，）　。

７−６６　（ｓ　−５Ｈａ　Ａｒ　）　＊　７−６１　
（ｄ　−Ｉ　Ｈ＊ＮＨ）　、　８．０９　（ｍ　、　２
　Ｈ、ＮＨ）元素分析：　Ｃ３ｏＨａｘＮ３０１ａ　（
ＭＷ　７６３．９２　）　Ｋ　ツｖｈ　テ計算値ｃ　、
　６１．３２　：　Ｈ、８，０５；　Ｎ　、　５．５０
実測値Ｃ，６１，０９；Ｈｓ　８．２１　：Ｎ、５．４
５チルの製造 “Ｎ−（ベンジルオキシカルボニル）−Ｌ−γ−グルタ
ミルーＬ−γ−グルタミル−Ｌ−グルタミン酸テトラキ
ス（ｔｅｒｔ−ブチル）エステル６．１０１１　（４−
０６ｍｍｏｌ）の９５％エタノール溶液１００紅および
炭素担持１０％パラジウム１００ｒＲＱを２２　ｐｓｉ
において水素の存在下に８時間振とうした。この触媒を
ろ過によって除き、ろ液を真空中で回転蒸発して、Ｌ−
ｒ−グルタミル−Ｌ−ｒ−グルタミル−Ｌ−グルタミン
酸テトラキス（ｔｅｒｔ−エチル）エステル２．２３９
　（理論の８７％）を無色ガム質として得た。ＴＬＣ（
９５％エタノール）、Ｒｆ−０−７にンヒドリン）。こ
の生成物を、他の確認なしに次反応に用いた。

Ｎ−（ベンゾイルオキシカルボニル）−Ｌ−グルタミン
酸α−ｔｅｒｔ　−ｉチルエステルジシクロヘキシルア
ミン塩１．８３１１　（３，５２ｍｍｏｌ）、Ｌ−γ−
グルタミルーＬ−ｒ−グルタミル−Ｌ　−グルタミン酸
テトラキス（ｔｅｒｔ−ブチル）エステル２．２３．９
　（３，５２皿０１）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾ
ール０．４７４　！ｌ　（３−５２ｍｍｏｌ　）および
１．ＯＮ塩酸３．５２　ａＪのジクロロメタン２５紅中
の攪拌されている混合物に１，３−ジクロロへキシルカ
ルざジイミド０−８００１！　（３，８８ｍｍｏｌ）を
加えた。反応液を１７時間攪拌し、次いでろ過した。ろ
液を逐次、飽和重炭酸すｈ　ＩＪウム水浴液（２ｘ５Ｑ
ａｕ）、５％クエン酸水浴液（２Ｘ５０１）および飽和
塩水（２ｘ５０ａｔ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾
燥、ろ過し、次いで真空中で回転蒸発した。この生成物
をシリカゾル６０（１５０＆、２３０メツシユ〜４００
メツシユ、ＥＭ試薬）上でヘキサン：酢酸エチル（３ニ
ア）でフラッシュクロマトグラフィーによって精製した
。適切な画分をＴＬＣ相関関係に基づいて一緒にし、次
いで真空中で回転蒸発して、Ｎ−（ベンジルオキシカル
ボニル）−ｘ、、−ｒ−グルタミル−Ｌ−γ−グルタミ
ルーＬ−ｒ−グルタミル−Ｌ−グルタミン酸ペンタキス
（ｔｅｒｔ−ブチル）エステル２．７１．９　（理論の
８１％）、融点７５°を得た。

ＴＬＣ（ヘキサン＝酢酸エチル−３：　７　）　、　Ｒ
ｔ　−０，５（アニスアルデヒド）　；　ＮＭＲ（ＤＭ
８０−ｄ、　）δ１−３９　（ｓ　ｅ　４５　Ｈ＝　Ｏ
−ｔ　−Ｂｕ　）　−Ｃ７５（ｍ　ｔ　　４　ａ　ａ　
α−ＣＨ，）＄　　１．９２（ｍｙ　　４Ｈ＃　α−ｃ
Ｈ＋？）、１．９２（ｍ＊４ａ、α−ＣＨ，）　ｅｌ、
９２（Ｉｎ、４Ｈ＃　　α−ＣＨ２）　＃　　２−２２
　（ｍ　−８Ｈ１β−ＣＨ２）　−３−８９（ｍ　、　
　１Ｈ、α−Ｈ）。

４．１　０　（、ｍ　、　　３　Ｈｅ　　α−Ｈ）Ｉ　
　５−０４　（ｄ　ｄ　。

２Ｈｇ　ＮＣＯ２ＣＨ２）　　ｅ　　７−３７　（８ａ
　　５　Ｈｅ　　Ａｒ　）　　＊７．６３　（ｄ　、　
　Ｉ　Ｈ、ＮＨ）　、　　８−０　（ｍ　、　３　Ｈ、
ＮＨ）元Ｘ分析：　Ｃ４ａＨ’ｙａＮ４０ｘａ　（ＭＷ
　９４９−１５　）について計算値ｃ　、　６０．７４
　；　Ｈ、８，０７；　Ｎ　、　５．９０実測値Ｃ、６
０，９１；　Ｈ、８，０９；　Ｎ　、　６．１１Ｎ−（
ベンゾイルオキシカルボニル）−Ｌ−ｒ−グルタミルー
Ｌ−γ−グルタミルーＬ−γ−グルタミル−Ｌ−グルタ
ミン酸ペンタキス（ｔｅｒｔ−ブチル）エステル２−７
１９　（２，８６ｍｍｏｌ　）の９５％エタノール浴液
１００齢および炭素担持１０％パラジウム１００１１９
を４０　ｐｓｉにおいて水素の存在下に１９時間攪拌し
た。この触媒をろ過によって除き、次いでろ液を真空中
で回転蒸発して、Ｌ−ｒ−グルタミル−Ｌ−γ−グルタ
きルーＬ−ｒ−グルタミルーＬ−グルタミン酸ペンタキ
ス（ｔｅｒｔ−ブチル）エステル２．２９　ｇ（理論の
９８％）を白色フオームとして得た。ＴＬＣ（酢酸エチ
ル：メタノール−９＝１）、Ｒｒ　−０，５＜ニンヒド
リン）。この生成物をさらに確認せずに次反応に用いた
。

Ｎ−（ベンジルオキシカルボニル）−Ｌ−グルタミン酸
α−ｔ、ｅｒｉ　−ブチルエステルジシクロヘキシルア
ミン塩１．４６９　（２，８０ｍｍｏｌ）、Ｌ−ｒ−グ
ルタミル−Ｌ−１−グルタミル−Ｌ−ｒ−グルタミル−
Ｌ−グルタミン酸ペンタキス（ｔｅｒｔニブチル）エス
テル２−２９　／ｌ　（２，８０ｍｍｏｌ）、１−ヒド
ロキシベンゾトリアゾール０．３８０．９（２，８０韮
ｏ１　）および１．ＯＮ塩［２，８紅のジクロロメタン
６５凝中の攪拌されている混合物に、１．３−ジシクロ
へキシルカルボジイミド０．６３５＆　（３，０８ｍｍ
ｏｘ　）を加えた。コノ反応液ヲ１９時間攪拌し、次い
でろ過した。ろ液を逐次、飽和重炭酸す）　ＩＪウム水
溶液（２Ｘ２５１ｊ）、５％クエン酸水溶液（２Ｘ２５
１１４）および飽和塩水（２Ｘ　２５Ｎ）で洗浄し、硫
酸マグネシウムで乾燥、ろ過し、次いで真空中で回転乾
燥した。生成物を、シリカゲル６０（１５０＆、２３０
メツシユ〜４００メツシユ、ＥＭ試薬）上でヘキサン：
酢酸エチル（１：２）を用いて、フラッシュクロマトグ
ラフィーによって精製した。適切な画分を、ＴＬＣ相関
関係に基づいて一緒にし、次いで真空中で回転蒸発して
、Ｎ−（ペンジルオキシカルボニキス（ｔｅｒｔ−ブチ
ル）エステル２．４０　ｇ（理論の７６％）を白色７オ
ーム、融点７４°〜７６°として得た。ＴＬＣ（ヘキサ
ン：酢酸エチル−１：２）、Ｒｆ−０，４（アニスアル
デヒド）。

元素分析：　Ｃｓ７ＨｏｚＨａＯｘｓ　（ＭＷ　１１３
４．３７　）　Ｋライて計算値Ｃ、６０，３５；　）Ｉ　、　８．０９　；　Ｎ
　、　６．１７実測値Ｃ、５９，９４；　Ｈ、８，１６
；　Ｎ　、　５．８９ルの製造Ｎ−（ベンジルオキシカルボニル）−Ｌ−γ−グルタミ
ルーＬ−ｒ−グルタミル−Ｌ−ｒ−グルタミル−Ｌ−ｒ
−グルタミル−Ｌ−グルタミン酸へキサキス（ｔｅｒｔ
−ブチル）エステル２，４０　ｇ（２，１１ｍｍｏｌ）
の９５係エタノール溶液１００μおよび炭素担持１０％
パラジウム２００■を４５　ｐｓｉにおいて水素の存在
下に４．５時間振とうした。この触媒金ろ過によって除
いた。ろ液を真空中で回転蒸発して、Ｌ−ｒ−グルタミ
ル−Ｌ−γ−グルタミルーＬ−ｒ−グルタミル−Ｌ−γ
−グルタミルーＬ−グルタミン酸へキサキス（ｔａｒｔ
−ブチル）エステル２．１４．９　（理論の１００％）
を無色ガム色として得た。ＴＬＣ（酢酸エチル：メｆｉ
）−ルー　９　：　１　）、Ｒｔ　−０，３（＝　ンヒ
）’　ＩＪ　７）、１この生成物をさらに確認せずに次
反応に用いた。

Ｎ−（ベンジルオキシカルボニル）−Ｌ−グルタミン酸
α−ｔｅｒｔ−デチルエステルジシクロヘキシルアミン
塩１．１１９　（２，１４ｍｘｎｏｌ）、Ｌ−ｒ−グル
タミル−Ｌ−ｒ−グルタミル−Ｌ−γ−グルタミルーＬ
−ｒ−グルタミル−Ｌ−グルタミン酸へキサキス（ｔｅ
ｒｔ　−ｉチル）エステル２．１４１１　（２−１４ｍ
ｍｏｘ　）、１−　ヒ）’　ｏ　キ’／ヘンｆ　）　リ
アゾール０−２８９．９（２−１４ｍｍｏｌ）および１
．ＯＮ塩酸２．１４Ｍのジクロロメタン２０ｕ中の攪拌
されている混合物に１．３−ジシクロヘキシルカルボジ
イミド０−４８６１　（２，３５ｍｍ０１　）を加えた
。

反応液を１８時間攪拌し、次いでろ過した。ろ液を逐次
、飽和重炭酸ナトＩＪウム水浴液（２Ｘ５０−）、５％
クエン酸水溶液（２Ｘ５０１１Ｊ）および飽和塩水（２
Ｘ２５１１Ａ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥、ろ
過し、次いで真空中で回転蒸発した。生成物をシリカゾ
ル６０（１５０Ｉｉ、２３０メツシユ〜４００メツシユ
、ＥＭ試薬）上でヘキサン：酢酸エチル（１：３）を用
いて、フラッシュクロマトグラフィーによって精製した
。適切な画分をＴＬＣ相圓関係に基づいて一緒にし、次
いで真空中で回転蒸発して、Ｎ−（ベンジルオキシカル
ビニル）−り一γ−グルタミルーＬ−ｒ−グルタミル−
Ｌ−ｒ−グルタミル−Ｌ−γ−グルタミルーＬ−グルタ
ミン酸へブタキス（ｔｅｒｔ−ブチル）エステル２．０
３　＆　（理論の７２％）ｔ−白色フオーム、融点７７
′〜８０（Ｊとして得た。ＴＬＣ（ヘキサン：酢酸エチ
ル−１：３）、Ｒｆ−０，４（アニスアルデヒド）。

元素分析：　Ｃ６ａＨｘｏａＮ６０ｚｚ　（ＭＷ　１３
１９．５９　）について計算値Ｃｅ　６０．０７　；　Ｈ、８，１０；　Ｎ　、
　６．３７実測値ｃ　、　６０．００　；　Ｈｅ　８．
１１　；　Ｎ　、　６．３５Ｎ−（ベンジルオキシカル
ボニル）　−１，、−γ−グルタミルーＬ−ｒ−グルタ
ミル−Ｌ−７−グルタミル−Ｌ−ｒ−グルタミル−Ｌ−
グルタミン酸へブタキス（ｔｅｒｔ−ブチル）エステル
２．００　ｇ（１，５２ｍＩｎｏｘ　）の９５％エタノ
ール浴液１０〇−および炭素担持１０％パラジウム１０
０〜を４３　ｐｓｉにおいて水素の存在下に１６時間振
とうし九。この触媒をろ過によって除き、次いでろ液を
真空中で回転蒸発して、Ｌ−ｒ−グルタミル−Ｌ−γ−
グルタミルーＬ−ｒ−グルタミル−Ｌ−γ−グルタミル
ーＬ−グルタミン酸へブタキス（ｔｅｒｔ−ブチル）エ
ステル１．６７１（理論の９６％）を白色フオーム、融
点６７°〜６９°として得た。’Ｉ’ＬＣ（酢酸エチル
：メタノール−９＝１）、Ｒｔ　−０，５にンヒドリン
）、ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ、　）δ１−３９（８８６３Ｈｓ
　　Ｏ−ｔ−Ｂｕ）＊　１−１−７４（６Ｈ＃　α−ｃ
）１２）　、　１．９２（ｍ　ｅ　６　Ｈａ　α−ＣＨ
２）　ｅ　２．２１　　（ｍ　ｔ　　１２　Ｈｔβ−０
Ｍ２）　、　４．０８　（ｍ　、　６　Ｈ、α−Ｈ）。

８．１５　（ｍ　、　７　Ｈ、ＮＨ）　；質量スペクト
ル（化学イオン化）ｍ／ｚ１１８６（８５，０％相対量
；（Ｍ”　Ｈ”　）　、　！’Ｚ　１００１　（２７，
５％）　、　ｍ／ｚ８１５（１００％）元素分析：　０３ＢＨ１ＯｇＮ６０１ｇ　（ＭＷ　１１
８５−４６　）にツいて計’ｌｉ−値ｃ　、　５８．７７　；Ｈ，８，５０；Ｎ
、　７．０９実測値ｃ　、　５８．７８　；　Ｈ、８，
５８；　Ｎ　＃　７，０３３−（２−（アセチルアミノ
）−４−（ジアセチルアミノ）−１，６−シヒドロー６
−オキソー５−ピリミジニル〕プロピオンアルデヒド１
．２５、！？　（４−００ｍｍｏｌ）、ｐ　−７ミ／　
安息香酸−ｒ−チル０−７４３１　（４，５０ｍｍｏｌ
　）、氷酢酸１．０Ｍおよび３Ａモレキユラーシープの
メタノール２５μ中の混合物を、水素化シアノホウ素ナ
トリウム０．２８１　（４，４７ｍｍｏｌ　）を２分間
にわたって加える前に、窒素下に６時間室温において攪
拌した。

攪拌１７時間後、混合物をろ過した。ろ液を真空中で黄
色７オームに回転蒸発した。生成物をシリカｒル６０（
１００，！ｉ’、２３０メｙシュ〜４００メツシュ、８
Ｍ試薬）上で酢酸エチルを用いて、フラッシュクロマト
グラフィーによ′つて混合物から分離した。適切な両分
をＴＬＣ相関関係に基づいて一緒にし、次いで溶媒を真
空中で回転蒸発して除いた。酢酸エチルから貴結晶して
、（４−（３−（２−（アセチルアミノ）−４−（ジア
セチルアミノ）−１，６−ジヒドロ−６−オキソ−５−
ピリミジニルプロビル〕アミノ〕安息香酸エチル０．４
４１１Ｃ理論の２４％）を白色固体、融点１９７゜〜１
９８°として得た。ＴＬＣ（酢酸エチル）、Ｒｆ−０，
５゜ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−δ５）　Ｊ　１−２８　（ｔ　
−Ｊ　＝７−Ｉ　Ｈｚ　ｔ　３　Ｈ＃　ＣＨ３）　ｊ　
１−６５　（ｍ　＃　２　Ｈ＃ＣＣＨ２Ｃ）　、　２．
１４（ｓ　、　３Ｈ，ＡＣ）　、　　２．２（ｍ。

２　Ｈ＃　ＣＨ２Ｈｅｔ　）　ｅ　　２．２３　（Ｂ　
＃　　６　Ｈ＃　２　ＡＣ）　ｔ３．０５　（ｍ　、　
　２　Ｈ、ＣＨ２Ｎ　）　　ｔ　　４．２２　（Ｑ　ｅ
　Ｊ　−７−Ｉ　　Ｈｚ　　＃　　２　Ｈ＊　　ＣＯ２
ＣＨ２＃　　６−５　（ｂｒ　　ｅ　　Ｉ　　Ｈｅ　　
Ａｒによシネ鮮明ＡｃＮＨ）　、　６．５７　（ａ　、
　２　Ｈ、ＡｒＨ）ｓ７．６９　（ａ　、　　２　Ｈ、
ＡｒＨ）元素分析：　Ｃ２２Ｈ２ｑＮｓＯ６・０−５　
Ｈ２Ｏ（ＭＷ　４６６．４９　）について計算値ｃ　、　５６．６４　：　）Ｉ　、　６．０５　
；　Ｎ　、　１５．０１実測値Ｃ、５６，８８；　）！
　、　６．０１　；　Ｎ　ｅ　１４．８８４−（３−（
２−（アセチルアミノ）−４−（ジアセチルアミノ）−
１，６−シヒドロー６−オキソー５−Ｖｐリミジニル〕
プロピル〕アミノ〕安息香酸エチル０−２２１１　（０
，４７ｍｍｏｌ　）の９５係エチルアルコール溶液７．
０紅に１−ＯＮ　ＮａＯＨ１５紅を加えた。反応液を７
０℃において２０時間加熱した。混合物を、真空中で回
転蒸発によって体積１０１に減容し、次いで１．０　Ｎ
　Ｈｅ２でｐ）１５に調節した。沈殿をろ過によって集
め、水洗し、次いで真空乾燥して、４−（（３−（２，
４−ジアミノ−１，６−シヒドロー６−オキソー５−Ｖ
！リミジ二ル）プロピル〕アミノ〕安息香酸１／２ナト
リウム塩０．１１．９　（理論の７１％）を白色固体、
融点２７３’（分解）として得た。Ｖｅｒｓａｐａｃｋ
　Ｃ−１８（１０ミクロン、４．６　Ｘ　２５０　ｎ　
）上−ｒ　Ｏ，２％ト’）フルオａ酢酸含有６０％メタ
ノール水浴液を用いたＨＰＬＣにより、１個の主ピーク
を得た。

ｋ”　＝　０−５８　；　ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−δ６）　
Ｊ　１−５８　（ｍ　、　２Ｈ。

ＣＣＨ２Ｃ）　−２−２４（ｔ　−２Ｈ、Ｈｅｔ−ＣＨ
２）　−３−０２（ｍ　−２Ｈ＃　ＣＨ２Ｎ　）　ｅ　
５−７７　（ｂｒ　ｓ　−２Ｈ＃ＮＨｓａ　）　−５−
９４（ｂｒ　ｓ　、　２　Ｈ、ＮＨ２）　ｅ　６．４６
（ｔ　、　Ｉ　Ｈ＃　ＮＨ−Ａｒ　）　＃　６．５４　
（ｄ　＃　２　Ｈ、Ａｒ）。

７．６５　（ｄｔ　２　Ｈ、Ａｒ　）　ｓ　９．８０　
（ｂｒ　ｓ　、　ＩＨ。

ＮＨ）、１１−９５（ｂｒｓ−０−５Ｈ，Ｃ０２Ｈ）元
素分析：　Ｃｚ４Ｈｚｇ、５Ｎｓ０３Ｎａ□、５．０−
７５Ｈ２０（ＭＹ３２７．８２　）について計算値ｃ　、　５１．２９　；　Ｈ、５，５３；　Ｎ　
、　２１．３６：Ｎａ　　、　　３．５　１実測値ｃ、　５１．３４　；Ｈ，５，３９；Ｎ、　２１
．３２；Ｎａ　　ｓ　　５−６３　　　。

製造４−（（３−（２，４−ジアミノ−１，６−シヒドロー
６−オキンー５−ピリミジニル）プロピル〕アミノ〕安
息香酸１／２ナトリウム塩ｏ、ｓ　ｏ　＆（１−５３ｍ
ｍｏｌ　）、水０．７５およびトリフルオロ酢酸無水物
５．０５＋７　Ｏｉ［Ｊ＆合物を室温において窒素下に
１Ｂ時間撹拌した。コハク色の溶液を２５℃において真
空中で回転蒸発した。残留７オームを、均質なベージュ
色の粉末が得られるまで水（１５Ｉｕ）で摩砕した。固
体をろ過によって集め、水洗（２Ｘ２ＪＩＪ）、Ｌ、次
いで真空乾燥して、４−〔Ｎ−（３−（２，４−ジアミ
ノ−１，６−シヒドロー６−オキソー５−ピリミジニル
）プロピル〕トリフルオロアセトアミド〕安息香酸０．
６１７　！Ｉ（理論の８１％）、融点２２９°〜２６０
°を得た。Ｖｅｒｓａｐａｃｋ　Ｃ−１８（１０ミクロ
ン、４．６×２５０　ｍ　）上でトリフルオロ酢酸０．
１％を含有する５０％メタノール水浴液を用いたＨＰＬ
Ｃで、１個の主ピークを得た。Ｋ１−１．００；ＴＬＣ
（メタノール：酢酸エチル−１：１）、Ｒｒ−０，５；
ＮＭＲ（ｐＭｓｏ−ａｓ）δ１．５０（ｍ、　２Ｈ，Ｃ
ＣＨ２Ｃ）　。

２．２０　（ｔ　、　２　Ｆｌ　、　Ｈａｔ−ＣＨ２）
　、　３．７４　（ｔ。

２　Ｈａ　ＣＨ２Ｎ　）　ｅ　６−６７　（１）ｒ　Ｂ
　ｓ　２Ｈ＃　ＮＨ２）　ｅ７．４３　（ｂｒ　＃　２
　ＥＩ　、　ＮＨ２）　、　７．５５　（ａ　、　２　
Ｈ。

Ａｒ　）　ｓ　８−０２　（ｄ　ｓ　２Ｈ＊　Ａｒ　）
　；質量スペクトル（メタン化学イオン化）　ｍ／ｚ　
４００　（１８，５φ：相対ｉ；　（Ｍ＋Ｈ）十）、３
５６（５，９１％。

（Ｍ　−ｃｏ、１　）＋　）　、　１６７　（１０，７
２％）、１１５（１００％）。

元素分析：　０１６Ｈ４６Ｆ３Ｎ５０４．　ＣＦ３ＣＯ
ＯＨ（ＭＷ５１３．３５３　）について計算値Ｃ、４２，１’ｌ　；　Ｈ、３，３４；　Ｎ　、
　１３．６４゜実測値ｃ　、　４２．４７　；　Ｈ、３
，４９；　Ｎ　、　１４．１３１．６−ジヒドｃＩ−６
−オキソー５−ビリミジニ室温のＮ、Ｎ−ジメチルホル
ムアミド２．Ｏｄ中の４−（（Ｎ−（５−（２，４−ジ
アミノ−１゜６−シヒドロー６−オキソー５−ピリミジ
ニル）プロピル〕トリフルオロアセトアミド〕安息香酸
０．１０＆　（０，２０ｍ１ｎＯ１）、Ｌ−ｒ−グルタ
ミル−Ｌ−ｒ−グルタミル−Ｌ−ｒ−グルタミル−Ｌ−
ｒ−グルタミル−Ｌ−ｒ−グルタミル−Ｌ−グルタミン
酸へシタキス（ｔｅｒｔ−エチル）エステル０−２　Ａ
ｌｌ　（０，２０ｍｍｏｌ　）、１−ヒドロキシベンゾ
トリアゾール０．０２７１１　（０，２０ｍｍｏｌ）お
よびトリエチルアミン０−０２０１１　（０，２０ｍｍ
ｏｌ）に、１．３−ジシクロへキシルカルボジイミド０
．０４６　ｊｌ　（０，２２ｍｘｎｏｌ）を加えた。反
応液を２２時間攪拌し、次いでろ過した。ろ液を真空中
で回転蒸発し、次いでコハク色の残留物をジクロロメタ
ン（２５ｍｇ）および飽和１炭酸ナトリウム水溶液（１
５Ｍ）の間に分配した。有機層を逐次飽和東炭酸す）　
ＩＪクム（１５１１１１Ａ）および飽和塩水（２ｘ１０
Ｕ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥、ろ過し、次い
で真空中でフオームに回転蒸発した。

残留物を酢酸エチル５紅と混合し、不溶性固体の少量を
ろ過によって除いた。ろ液を真空中で回転蒸発して、Ｎ
−Ｃ４−（Ｎ−（３−（２，４−ジアミノ−１，６−シ
ヒドロー６−オキソー５−ピリミジニル）ｆロビル〕ト
リフルオロアセトアミド〕ベンゾイル〕−Ｌ−ｒ−グル
タミル−Ｌ−ｒ−グルタミル−Ｌ−γ−グルタミルーＬ
−γ−グルタミル−Ｌ−１−グルタミル−Ｌ−グルタミ
ン酸へブタキス（ｔａｒｔ　−ｉ　ｆル）エステル０．
３０ｙ（理論の９６％）をページ色固体、融点１１４゜
（分解）として得た。８ｕｐｅ’ｌｃｏ　ＬＣ−８上で
トリエチルアミン０．１％を含有する８０％メタノール
水浴液を用いたＨＰＬ、Ｃにより１個の主ピークを得た
。ｋ”−３，３５；　　ＴＬＣ（メタノール：酢酸エチ
ル−１：９）、　Ｒｆ−０，３（ｕｖオよびアニスアル
テヒド）　；　ＮＭＲ（ＤＭ８０−δ６）δ１．３８（
ｍ、６３Ｈ。

０−　ｔ　−Ｂｕ　）　＊　１−６０　（Ｉｎ　−２Ｈ
−ＣＣＨ２Ｃ）　−１，７２（ｍ、６Ｈ，α−ＣＨ１１
）、１．９０（ｍ＊６Ｈ，α−ＣＨ２）　ａ　２−２２
　（”　−１４Ｈ＊　Ｈｅｔ−ＣＨ２ａｎｄ　７１−　
ＣＨ２）　、　３−７１　（ｔ　、　２　Ｈ、ＣＨＩＮ
）。

４．０７　（ｍ　、　５　Ｈ、α−Ｈ）　、　４．３０
　（ｍ　、　Ｉ　Ｈ。

ＡｒＣ０２ＮＨＣＨ）　−５，７２（ａ　ｍ　２　Ｈｅ
　ＮＨ２）　−５−９０（８）　２　Ｈ＃　ＮＨｚ　）
　ｅ　７．５７　（（ｌ　ｅ　２　Ｈ＃　Ａｒ　）＃７
．９４　（ａ　、　２　Ｈ、Ａｒ　）　ｅ　８．１３　
（ｍ　＄　６　Ｈ。

α−ＮＨ）　ｅ　９．７　（ｂｒ　、　Ｉ　Ｈ、ＮＨ）
元素分析：　Ｃ？ＡＨ１１４Ｆ３ＮｌｌＯ１１２（ＭＷ
　１５６ロー７７　）　Ｋついて計算値ｃ　、　５６．７３　；　Ｈ、７，３３；　Ｎ　
、　９．８３夾測値Ｃ、５６，８６：　Ｈ、７，４２：
　Ｎ　、　９．７９ルタミルーＬ−ｒ−／’ルタミルー
Ｌ−ｒ−グルタ室温のＮ−（４−（Ｎ−（６−（２，４
−ジアミノ−１，６−シヒドロー６−オキソー５−ピリ
ミジニル）プロピル〕トリフルオロアセトアミド〕ペン
・戸イル〕−Ｌ−γ−グルタミル−Ｌ−１−グルタミル
−Ｌ−ｒ−グルタミル−Ｌ−γ−グルタミルーＬ−γ−
グルタミル−Ｌ−グルタミン酸へブタキス（ｔｅｒｔ−
ブチル）エステル０．３０９（０−２０ｒｒｍｏｌ）の
メタノール溶液４．０紅に逐次ジメチルアミン０−０４
５１　（１，０ｍｍｏｌ）および水０．４１を加えた。

窒素下に、黄色浴液を室温において１８時間攪拌した。

反応の進行はＨＰＬＣによって追跡した。溶媒を真空中
で回転蒸発によって除いて、Ｎ−（４−（Ｎ−（３−（
２，４−ジアミノ−１，６−シヒドロー６−オキンー５
−ピリミジニル）プロピル〕アミン〕ベンゾイル〕−Ｌ
−γ−グルタミルーし一γ−グルタミルーＬ−ｒ−グル
タミル−Ｌ−ｒ−グルタミル−Ｌ−ｒ−グルタミル−Ｌ
−グルタミン酸へブタキス（ｔ＋ｅｒｔ−デチル）エス
テル０．３０　＃　（理論の１００％）をベージュ色固
体として得た。８ｕｐｅ１ｃｏ　ＬＣ−８上でトリエチ
ルアミン０．１％を含有する８０％メタノール水浴液を
用い九ＨＰＬＣで、１個の主ピークを得た。Ｋ″−２，
４４：　ＴＬＣ（メタノール：酢酸エチル−１：４）　
　Ｒｆ−Ｑ、６（ＵＶおｊび７二スアルデヒド；　ＮＭ
Ｒ（ＤＭｓｏ−ａ、）　ａ　１．３８　（ｍ　。

６３Ｈ，０−ｔ−Ｂｕ）＊　１．６０（ｍ、２Ｈ＊ＣＣ
Ｈ２Ｃ）　、　１．７０　（ｍ　、　６　Ｈ、α−ＣＨ
ａ　）　Ｃ１，９０（ｍｓ６ａｅα−ＣＨ，）　、　２
．２０　（ｍ　。

１４　Ｈａ　Ｈａｔ−ＣＨ２ａｎｄ　７１−　ＣＨ２）
　ｅ　３−００　（”　＃２　Ｈ−ＣＨａ　）　ｅ　４
−０８　（”　＊　５　Ｈｅ　α−Ｈ）　Ｃ４，２６（
ｍ　、　Ｉ　Ｈ、ＡｒＣＯｇＮＨＣＨ）　、　５．７５
　（ｓ　。

２　Ｈｅ　ＮＨ２）　＊　５．９１　（ａ　−２Ｈ−Ｎ
’Ｈ２）　−６，２５（ｂｒ　、　Ｉ　Ｈ、ＡｒＮＨ）
　、　６．５２　（ｄ　ｔ　２Ｈ−Ａｒ　）　−７−６
５（ｄ　−２Ｈｅ　Ａｒ　）　＊　８−１４　（ｍ−６
Ｈ，Ｉ−ＮＨ）、９．７（ｂｒ、ＩＨ，ＮＨ）Ｎ−（４
−（Ｎ−（３−（２，４−ジアミノ−１，６−ジヒドｃ
Ｉ−６−オキソー５−ピリミジニル）プロぎル）アミノ
コベンゾイル）−Ｌ−ｒ−グルタミル−Ｌ−ｒ−グルタ
ミル−Ｌ−γ−グルタミルーＬ−ｒ−グルタミル＝−Ｌ
−ｒ−グルタミル−Ｌ−グルタミン酸へブタキス（ｔｅ
ｒｔ−ブチル）エステル０−３０　、！ｉ’　（０，２
０ｍｍｏｌ　）のトリフルオロ酢酸５，０紅混合物を、
室温において、０．７５時間攪拌した。得られた黄色浴
液を真空中で、ベージュ色の固体に回転蒸発し、続いて
、この固体を水５．０−に俗解した。水溶液を水で予め
平衡したＣ−１８のカラム（直列に接続した一連の５個
のＲａ１ｎｊｎ　５ｐｉｃｅカートリツジからなる）に
圧入した。生成物をアセトニトリル２０％で浴出する前
に、カラムを水５０酩で洗浄した。溶媒を回転蒸発およ
び凍結乾燥によって除いた。残留物を酢酸エチルと水の
１：１混合物の間に分配した。水層を凍結乾燥して、Ｎ
−［４−［Ｎ−［３−（２，４−ジアミノ−１，６−シ
ヒドロー６−オキンー５−ピリミジニル）ゾロぎル〕ア
ミノ〕ペン・戸イル〕−り一γ−グルタミルーＬ−ｒ−
グルタミル−Ｌ−γ−グルタミルーＬ−ｒ−グルタミル
−Ｌ−γ−グルタミルーＬ−グルタミン酸０．１２９　
（理論の５２％）を綿毛状白色粉末、融点２０４°　（
分解）として得た。Ｖｅｒｓａｐａｃｋ　Ｃ−１８（１
０ミクロン、４．６　Ｘ　２５０關）上で、ＣＦ３ＣＯ
２ＨＯ−２％を含有する１５％アセトニトリル水浴液を
用いたＨＰＬＣで、１個の主ピークを得た。

ｋ”　−０，７７１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ）６１．６０　
（ｍ　。

２Ｈ，ＣＣＨ２Ｃ）−１−１−７３（６Ｈ−α−ＣＨ２
）ｅｌ、９５（ｍ、６Ｈ，α−ＣＨ２）　ｔ　２−１９
　（ｍ　Ｃ１４Ｈｓ　Ｈｅｔ−ＣＨ２ａｎｄβ−ＣＨ，
）　、　３．００　（ｍ　。

２　Ｈ、ＣＨ２Ｎ　）　、　／、１３　（ｍ　、　５　
Ｈ、α−Ｈ）。

４．３０　（ｍ　、　Ｉ　Ｈ、ＡｒＣＯｇＮＨＣＨ）　
、　５．７７　（ｓ　。

２　Ｈ、ＮＨ２）　−５−９５（ｓ　、　２　Ｂ　、　
ＮＨｍ　）　−６，２０（ｂｒ　＃　Ｉ　Ｈ＃　ＡｒＮ
Ｈ）　ｅ　６．５３　（ｄ　Ｉ　２　Ｈ＃　Ａｒ）Ｃ７
，６８（ｄ、２Ｈ，Ａｒ）、８．１５（ｍ、６Ｈ。

α−Ｈ）Ｉ　）　、　１２−４　（ｂｒ　、　Ｃ０ＯＨ
信号）プラス０．２５　ｍｏｂ　Ｉｌｉ；ｔＯＡｃ　（
１，１８ｔ　、　　２−００　ａ　、　　４−０３ｑ　
）元素分析：　Ｃ４４ＨｓｏＮｚｌＯ２ｚ−２−５Ｈ２Ｏ
，０，２５ＥｔＱＡｃ（ＭＷ　１１４５．０８　）につ
いて計算値ｃ　、　４７．２０　；　Ｈ、５，８１；　Ｎ　
、　１３．４６笑測値Ｃ、４７，３５；　Ｈ、５，６１
：　Ｎ　、　１３．２０本発明の化合物の抗腫瘍活性評
価に用いた試験は、本質的に国立癌研究所、瘤治僚部、
開発治療計画の腫瘍委員会、（ｔｈｅ　Ｔｕｍｏｒ　Ｐ
ａｎｅｌ　ｏｆ　ｔｈｅＤｅＶｍｌＯｐｍｅｎｆ＋ａｌ
　　Ｔｈｅｒａｐｅｕｔユｃｓ　　Ｐｒｏｇｒａｍ　　
５Ｄｉｖｉｓｉｏｎ　　ｏｆ　　Ｃａｎｃｅｒ　　Ｔｒ
ｅａｔｍｅｎｔ　　、ＮａｔｉｏｎａｌＣａｎｃｅｒ　
Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ　）、Ａ　Ｇｏｌｄｉｎら、メソツ
ズ・イン・キャンサー・リサーチ（Ｍｅｔｈｏｄｓ　１
ｎＣａｎｃｅｒ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　）、第１６巻、１
６５頁、アカデミツク・プレス（１９７９）に用いられ
たものである。用量水準および計画について若干の改変
を行って試験効率を増大した。

体重が、２０ｇ周りの範囲６ｇ内にある同性のｃＤ２−
Ｆｘ−マウスをこの試験に用いる。対照および試験動物
に対して、０日に１０６生Ｐ３８８１０腫瘍細胞の懸濁
液を腹腔内注射する。各試験において、化付物のＬＤ２
ｏを１まとめにする数種の用量水準′ｔ−肝価する。各
用量水準群は６匹の動物を含む。供試化合物は、トウイ
ーン８０　０．０５係を含有する生理食塩水でまたはデ
キストロース５％を含有する蒸留水でａＩｉｌｙし、次
いで腫瘍移植について示した計画通りに腹腔内投与する
。投与量は、個々の動物の体ムによって〜／ゆ基準であ
る。各動物の死亡日を記録し、各群について中央値を確
認し、しかも延命率％（ＩＬＳ％）を治療群対対照群の
生存時間比から計算する。活性の判定基準は２０％に等
しいかまたは大きいＩＬＳ％である。

本試験に含まれる本発明の化合物は例１の化合物、すな
わちＮ−（４−（５−（２，４−ジアミノ−１，６−シ
ヒドロー６−オキンー５−ピリミジニル）−ゾロピルア
ミノ〕ベンゾイル〕−Ｌ−グルタミン酸であ）、シかも
結果は下記の通りである。

１８２１日、５日、９日　　　　　　＋２０７．５　１
日、２日および６日　　　＋４０に１日２回５　　　１日、２日および３日　　　＋６５に１日２回２．５　１日、２日および６日　　　＋２０に１日２回５　　　１日および３日に　　　　　＋６０毎時８用量１０　　　１日〜４日に４時間　　　　＋８０毎に３用
量２０　　１日および３日に　　　　　＋６０毎時８用蓋５　　１日〜４日に４時間　　　　＋２２毎に６用量使用した２種の常用指示細胞系は１）ヒト胸骨髄からの
アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（Ａｍ
ｅｒｉｃａｎ　Ｃｕ１ｔｕｒｅ　Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ
　（ＡＴＣＣ））菌株ＣＣＬ　１８．１からのデトロイ
ト（Ｄｅｔ、ｒｏｉｔ　）９８ｇの２回クローン誘導体
Ｄ９８および２）マウス結合組織からのＮＣＴＣ９２９
（ＡＴＣＣＣＣＬｌ　、）ａ　Ｃ３Ｖ′Ａｎからのクロ
ーン綽導体りである。ＬおよびＤ９８細胞についての接
種同定は夫々、１．０×１０５個／　ｃｒｎ”およびＩ
　Ｘ　１０”個／　ＣＩ＋！”である。

対照細胞は、イーグルＭＥＭ（アール塩、馬血清１０％
、ペニシリンＧカリウム１００単位／μおよびストレプ
トマイシン１００μ＆／Ｉｕ）において増殖させ、しか
も試験期間内に少なくとも２個の倍加を示筋なけれはな
らない。試験板に同様童の細胞を接種し、次いで供試化
合物を添加した同じ培地で増殖させる。全細胞計数は、
２０時間〜２６時間に１回の培地交換を行って培養７０
時間〜７６時間後電子細胞カウンターを用いて行う。

対照対化合物の濃度の係をプロットして、用量反応曲線
を作製する。

この試験に含まれる本発明の化合物および結果を下記に
示す。

倒置の　　濃度　　対照　　濃度　　対照１　　　０．
１１　　　５０　　　０．０８８　　５０２　　　３、
　　　　５０　　　０．４　　　５０３　　　０．２１
　　　５０　　　０．０１８　　５０４　　　０．７　
　　５０　　　０．４　　　５０５　　　７、　　　　
５０　　　０．７５　　５０従って、前記データーから
、本発明の化合物は、リンパ球白血病Ｐ　３８８１０お
よび細胞培養細胞毒試験の両者において活性であり、ま
たそのことから化合物は抗腫瘍活性を有し、かつ腫瘍増
殖を阻害できることが結論できる。

Ｃ０細胞毒活性の逆転前記のように、腫瘍増殖の治療または予防において、患
者に解毒剤または救急剤を投与する必要があろう。これ
について、カルシウムロイコボリン、ヒボキサンチンお
よびＡＩＣＡＨの効力は、例１および６の化合物を用い
てマウスＬ細胞について示された。結果は下記の通りで
ある。

対照　　　　　　　　１００例１の化合物（１１４０例１の化合物＋ヒボキサンチン（１）　　　　　１００
対照　　　　　　　　１００例１の化合物（１）　　　　　　　　　　　　　　３６
例１の化合物子〇ａロイコボリン（１）　　　　　９４
対　　照　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　１００例３の化合物（ｆｔｉ）　　　　　　　
　　　　　　　３７例３の化合物＋ＡＩＣＡＲＧｙ）　
　　　　　　　　１００例６の化合物＋ヒポキサンチン
（ｉｔ）　　　　　１００例３の化合物子〇ａロイコポ
リン（１）　　　　　１００ｍ反：　　（ｌｌ−２ｘ　
１０−７Ｍ　ｍ　−３，７Ｘ　１０−５Ｍ（ｉｉｌ）　
−４ｘ　１０−８Ｍ　　　Ｏｗｌ　−１００ｘ　１０−
６Ｍ従って前記のデーターから、カルシウムロイコボリ
ンおよびヒボキサンチンの各々は、例１の化合物の細胞
毒性を逆転でき、しかもカルシウムロイコボリン、ヒボ
キサンチンおよびＡＩＣＡＨの各々は例３の化合物の細
胞毒性を逆転できることが結論できる。

凍結ブイヨン培養物を、試験用の１００変色単位の所定
力価に希釈する。微生物を血清、グルコース、フェノー
ルレッド、アンピシリン、酢酸タリウムおよび酵母エキ
ストラクトを添加した。

Ｄｉｆｃｏ　ＰＰＬＯブイヨンベースにおいて増殖させ
る。

培養は６２℃において行う。前記培地において供試化合
物の種々の濃度による培養は、ウェルプレートにおいて
行い、しかも増殖の一定時間１でに変色を生じる量のス
ピロプラズマ・シトリ＃ｌ胞を加える。変色を生じ得な
いかまたは変色の２日の遅れを与える化合物の最低濃度
は最小阻止濃度を示す。

この試験に含まれる本発明の化合物および結果は下記の
通シである。

１　　　　　　　　　０．０１２０．１６０．１従って、前記のデーターから、例１〜例３の化合物はマ
イコプラズマのスピロプラズマ・シトリに対して活性で
あることが結論できる。

Claims

【特許請求の範囲】

（１）式（ I ） ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒ＾１は水素、Ｃ＿１＿〜＿４アルキル、アセ
チルまたはホルミルであり、Ｒ＾２およびＲ＾３は同一
または異なって、水素またはＣ＿１＿〜＿４アルキルで
あり、Ｒ＾４はＮＲ＾１＾１Ｒ＾１＾２であり、Ｒ＾１
＾１、Ｒ＾１＾２、Ｒ＾５およびＲ＾６は同一または異
なって、水素、Ｃ＿１＿〜＿４アルキルまたはＣ＿１＿
〜＿１＿２アシルであり、Ｒ＾７、Ｒ＾８、Ｒ＾９およ
びＲ＾１＾０は同一または異なって、水素、ハロ、Ｃ＿
１＿〜＿４ハロアルキル、Ｃ＿１＿〜＿４アルキルおよ
びＣ＿１＿〜＿４アルコキシであり、かつｎは２、３、
４または５であり、ｍは０または１〜６の整数である）の化合物またはその塩。
（２）ＮＲ＾１がＮＨまたはＮＣＨＯである、特許請求
の範囲第１項に記載の化合物。
（３）Ｒ＾４およびＮＲ＾５Ｒ＾６の両者がＮＨ＿２で
ある、特許請求の範囲第１項に記載の化合物。
（４）Ｒ＾２、Ｒ＾３、Ｒ＾７、Ｒ＾８、Ｒ＾９および
Ｒ＾１＾０がすべて水素である、特許請求の範囲第１項
に記載の化合物。
（５）ｎが３または４である、特許請求の範囲第１項に
記載の化合物。
（６）ｍが０である、特許請求の範囲第１項に記載の化
合物。
（７）Ｎ−〔４−〔３−（２，４−ジアミノ−１，６−
ジヒドロ−６−オキソ−５−ピリミジニル）プロピルア
ミノ〕−ベンゾイル〕−Ｌ−グルタミン酸、Ｎ−〔４−〔３−（２，４−ジアミノ−１，６−ジヒド
ロ−６−オキソ−５−ピリミジニル）−Ｎ−メチル−プ
ロピルアミノ〕ベンゾイル〕−Ｌ−グルタミン酸、Ｎ−〔４−〔３−（２，４−ジアミノ−１，６−ジヒド
ロ−６−オキソ−５−ピリミジニル）−Ｎ−ホルミル−
プロピル−アミノ〕ベンゾイル〕−Ｌ−グルタミン酸、Ｎ−〔４−〔２−（２，４−ジアミノ−１，６−ジヒド
ロ−６−オキソ−５−ピリミジニル）エチルアミノ〕−
ベンゾイル〕−Ｌ−グルタミン酸、Ｎ−〔４−〔２−（２，４−ジアミノ−１，６−ジヒド
ロ−６−オキソ−５−ピリミジニル）エチル−Ｎ−メチ
ルアミノ〕ベンゾイル〕−Ｌ−グルタミン酸またはその塩。
（８）特許請求の範囲第１項に記載の化合物またはその
医薬的に許容し得る塩およびその医薬的に許容し得る担
体を含む、医薬製剤。
（９）動物に、特許請求の範囲第１項に記載の化合物の
治療的または予防的に有効量を投与することを特徴とす
る、該動物における腫瘍増殖の治療または予防方法。
（１０）式（II） ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒ＾１は水素またはＣ＿１＿〜＿４アルキルで
あり、Ｒ＾２、Ｒ＾３、Ｒ＾７、Ｒ＾８、Ｒ＾９および
Ｒ＾１＾０かつｎおよびｍは特許請求の範囲第１項に定
義された通りであり、基Ｒ＾５、Ｒ＾６、Ｒ＾１＾１、
Ｒ＾１＾２の１つはＣ＿１＿〜＿１＿２アシルであり、
他の基Ｒ＾５、Ｒ＾６、Ｒ＾１＾１およびＲ＾１＾２は
同一または異なって、水素またはＣ＿１＿〜＿１＿２ア
シルである）の化合物を脱アシルし、その後任意に（ｉ
）式（ I ）の生成化合物において、Ｒ＾１が水素の場
合、Ｒ＾１がホルミルである式（ I ）の相当する化合
物を製造するように化合物をホルミル化し、および／ま
たは（ｉｉ）式（ I ）の生成化合物のＲ＾２、Ｒ＾３
、Ｒ＾５、Ｒ＾６、Ｒ＾１＾１およびＲ＾１＾２を他の
Ｒ＾２、Ｒ＾３、Ｒ＾５、Ｒ＾６、Ｒ＾１＾１およびＲ
＾１＾２に変換し、次いで任意に塩を形成することを特
徴とする、特許請求の範囲第１項に記載の式（ I ）の
化合物の製造方法。
（１１）癌の治療に用いる、特許請求の範囲第１項に定
義された、式（ I ）の化合物またはその塩。
（１２）式（II）、（III）、（IV）または（Ｖ） ▲数式、化学式、表等があります▼（II） ▲数式、化学式、表等があります▼（III）▲数式、化
学式、表等があります▼（IV） ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｖ）（式中、Ｒ＾１、Ｒ＾２、Ｒ＾３、Ｒ＾５、Ｒ＾６、Ｒ
＾７、Ｒ＾８、Ｒ＾９、Ｒ＾１＾０、Ｒ＾１＾１、Ｒ＾
１＾２およびｎは特許請求の範囲第１項に定義された通
りであり、かつＲ＾１＾３はＣ＿１＿〜＿４アルキルで
ある）の新規な化学中間体。
（１３）薬剤の製造に使用する、特許請求の範囲第１項
に定義された、式（ I ）の化合物またはその塩。