JPS63122700A - 生物学的親和性を有する多孔質固相およびその製法 - Google Patents
生物学的親和性を有する多孔質固相およびその製法Info
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明は生物学的親和性を有する多孔質固相、および生
物学的親和性を有する結合系の１穐またはそれ以上の結
合相手が結合している多孔質固相の製法（二関する。本
発明はさらに、その結合相手に対応する対の相手を結合
することへの、かくして調製された多孔質固相の使用（
＝も関する。
物学的親和性を有する結合系の１穐またはそれ以上の結
合相手が結合している多孔質固相の製法（二関する。本
発明はさらに、その結合相手に対応する対の相手を結合
することへの、かくして調製された多孔質固相の使用（
＝も関する。
生物学的親和性を有する結合系の結合相手が結合する多
孔質固相は多数知られており、ここで結合相手とは酵素
、レクチン、抗原、抗体または生物学的親和性を有する
その他の系の相手である。
孔質固相は多数知られており、ここで結合相手とは酵素
、レクチン、抗原、抗体または生物学的親和性を有する
その他の系の相手である。
結合相手が多孔質固相の材料（；吸着（二よるかまたは
共有により結合している、生物学的親和性を有する結合
相手を備えた多孔質固相は例えばヨー ロッパ特許−Ａ
−０，０６５，８１０号および米国特許第４，３６６，
２４１号（二記載されている。
共有により結合している、生物学的親和性を有する結合
相手を備えた多孔質固相は例えばヨー ロッパ特許−Ａ
−０，０６５，８１０号および米国特許第４，３６６，
２４１号（二記載されている。
さらに、結合相手が結合したラテックス粒子がフィルム
被覆中（−とり込まれた、生物学的親和性を有する結合
相手を含有する多孔質固相も存在する（ヨーロッパ特許
−Ａ−９７，９５２号および西ドイツ特許公開公報第３
．５２９．７２８号参照）。
被覆中（−とり込まれた、生物学的親和性を有する結合
相手を含有する多孔質固相も存在する（ヨーロッパ特許
−Ａ−９７，９５２号および西ドイツ特許公開公報第３
．５２９．７２８号参照）。
今、篇くべきこと（−１生物学的親和性を何する１種ま
たはそれ以上の異なる結合相手が結合した粒子が、等方
性多孔質、すなわち発泡した構造を有するか、または異
方性、すなわち繊維性構造を有する予め成形された物質
中（：これら粒子が固定される様式でとり込壕れうるこ
とが見出された。
たはそれ以上の異なる結合相手が結合した粒子が、等方
性多孔質、すなわち発泡した構造を有するか、または異
方性、すなわち繊維性構造を有する予め成形された物質
中（：これら粒子が固定される様式でとり込壕れうるこ
とが見出された。
本発明は生物学的親和性を有する１種筐たはそれ以上の
結合相手が結合した粒子の分散液または懸濁液を、繊維
からなる多孔質材料中にとり込み、そして次に分散剤゛
または懸濁剤を除去すること（＝より得られつる、生物
学的親和性を有する結合相手な含有する多孔質固相に関
゛Ｔる。
結合相手が結合した粒子の分散液または懸濁液を、繊維
からなる多孔質材料中にとり込み、そして次に分散剤゛
または懸濁剤を除去すること（＝より得られつる、生物
学的親和性を有する結合相手な含有する多孔質固相に関
゛Ｔる。
本発明はまた、生物学的親オＯ１！ｌｊ：を有する１釉
またはそれ以上の結合相手が結合した粒子の分散液また
は懸濁液を、多孔質材料中にとり込み、そして次（：分
散剤または懸濁剤を除去することを特徴とする、生物学
的親和性を有する結合相手を含有する多孔質固相の製法
（：も関する。
またはそれ以上の結合相手が結合した粒子の分散液また
は懸濁液を、多孔質材料中にとり込み、そして次（：分
散剤または懸濁剤を除去することを特徴とする、生物学
的親和性を有する結合相手を含有する多孔質固相の製法
（：も関する。
本発明はさら（＝、生物学的親和性を有する対応する対
の相手の分離および検出のため、ならびに溶解された形
態の結合相手の検出のための装置（二おける、生物学的
親和性を有する結合相手を含有するかかる多孔質固相の
使用にも関する。
の相手の分離および検出のため、ならびに溶解された形
態の結合相手の検出のための装置（二おける、生物学的
親和性を有する結合相手を含有するかかる多孔質固相の
使用にも関する。
多孔質材料は種々の形状に形成されうる。例をあげれば
、球、円筒および平面状構造物、例えば羊毛、膜および
紙である。
、球、円筒および平面状構造物、例えば羊毛、膜および
紙である。
多孔質構造物は発泡させることによるか、あるいは合成
、半合成または天然の重合体の溶液または分散液の沈殿
浴を用いて沈殿させることによるか、あるいは膜形成性
重合体の溶液から溶媒を蒸発させること（＝よるか、の
みならずまた以下（二あげる重合体から調製される繊維
の圧縮成形（−より製造されうる。
、半合成または天然の重合体の溶液または分散液の沈殿
浴を用いて沈殿させることによるか、あるいは膜形成性
重合体の溶液から溶媒を蒸発させること（＝よるか、の
みならずまた以下（二あげる重合体から調製される繊維
の圧縮成形（−より製造されうる。
診断剤用の多孔質固相を調製するには、羊毛、紙、また
はセルロース製またはセルロース訪導体製のスポンジ、
ならびにまたはセルロース訪導体製またはポリアミド製
の膜が好ましい。
はセルロース製またはセルロース訪導体製のスポンジ、
ならびにまたはセルロース訪導体製またはポリアミド製
の膜が好ましい。
粒子は、全体に硬質重合体から成るか、または核が硬質
重合体から成るラテックス粒子であることができる。か
かる重合体の例をあげれば、懸濁重合または乳化重合に
より製造されうる重合体例えばポリスチレンまたはポリ
アクリレートである。
重合体から成るラテックス粒子であることができる。か
かる重合体の例をあげれば、懸濁重合または乳化重合に
より製造されうる重合体例えばポリスチレンまたはポリ
アクリレートである。
親水性の外殻を備えた、コア／外殻構造を有するラテッ
クスが好ましい。
クスが好ましい。
ラテックスの表面（二は生物学的親和性を有する結合相
手が吸着；二よるかまたは好ましくは共有により結合し
ており、ここで結合相手はレセプター、レクチン、スタ
フィロコッカス・オーレクス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃ
ｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）のプロティンＡ、ストレプトコ
ッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）のプロティンＧ
、抗原、ハプテン、抗体、酵素またはその阻害剤でおる
ことができる。
手が吸着；二よるかまたは好ましくは共有により結合し
ており、ここで結合相手はレセプター、レクチン、スタ
フィロコッカス・オーレクス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃ
ｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）のプロティンＡ、ストレプトコ
ッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）のプロティンＧ
、抗原、ハプテン、抗体、酵素またはその阻害剤でおる
ことができる。
これら粒子はまた安定化された細胞または細胞フラグメ
ントから成ることもできる。
ントから成ることもできる。
かかる細胞またはフラグメントは特異的に結合しうる成
分を担持するのが好ましく、それら成分の例をあげれば
、Ｆｃ部分を介して抗体に結合するレセプター例えばス
タフィロコッカス・オーレウスのプロティン人または０
群または０群のストレプトコッカスのプロティンＧ、レ
クチン、抗原、ハプテン、抗体、ならびにプロティン人
を介して結合した抗体、酵素またはその阻害剤である。
分を担持するのが好ましく、それら成分の例をあげれば
、Ｆｃ部分を介して抗体に結合するレセプター例えばス
タフィロコッカス・オーレウスのプロティン人または０
群または０群のストレプトコッカスのプロティンＧ、レ
クチン、抗原、ハプテン、抗体、ならびにプロティン人
を介して結合した抗体、酵素またはその阻害剤である。
特に好ましいのは、 １３．Ｗ、 Ｋｅｓｓｌｅｒ氏（
ｒＪ、 Ｉｍｍｕｎｏｌ、Ｊ １１５．１６１７〜１６
２４（１９７５））により記載されるような、抗体が結
合したＣ０ＷＡＮ Ｉ菌株のスタフィロコッカス・オー
レウスの全細胞または膜の７２グメントである。
ｒＪ、 Ｉｍｍｕｎｏｌ、Ｊ １１５．１６１７〜１６
２４（１９７５））により記載されるような、抗体が結
合したＣ０ＷＡＮ Ｉ菌株のスタフィロコッカス・オー
レウスの全細胞または膜の７２グメントである。
本発明による方法は、粒子の分散液または懸濁液を前記
した多孔質材料に付与すること（二よるか、または浸漬
することにより導入し、そして次にその際とり込まれた
液体を蒸発させて除去することにより実施されうる。細
孔寸法および粒径、ならび（：粒子数および多孔質マト
リックスの鎗は、それぞれの試験構造物（二とって必要
な、マトリックス中への液体流れが妨げられないよう１
；調整される。
した多孔質材料に付与すること（二よるか、または浸漬
することにより導入し、そして次にその際とり込まれた
液体を蒸発させて除去することにより実施されうる。細
孔寸法および粒径、ならび（：粒子数および多孔質マト
リックスの鎗は、それぞれの試験構造物（二とって必要
な、マトリックス中への液体流れが妨げられないよう１
；調整される。
膜の場合、細孔寸法０．１〜１２μｍおよび粒径０．０
１〜１μｍが好ましい。適用される粒子分散液または懸
濁液は濃度１〜１００ ’ｉｔ／Ｌを有する。懸濁液は
滴下（−よるか、ピペットで移すことによるかまたはポ
ンプおよびカニユーレを用いることにより点または線状
に支持体に付与されうる。
１〜１μｍが好ましい。適用される粒子分散液または懸
濁液は濃度１〜１００ ’ｉｔ／Ｌを有する。懸濁液は
滴下（−よるか、ピペットで移すことによるかまたはポ
ンプおよびカニユーレを用いることにより点または線状
に支持体に付与されうる。
乾燥は空気中に放置するか、または常圧または真空下に
開放系または閉鎖系中室温または高められた温度で空気
を吹きつけることにより行われる。乾燥条件、特に許容
される熱負荷は粒子に結合した活性成分の安定性により
決定される。
開放系または閉鎖系中室温または高められた温度で空気
を吹きつけることにより行われる。乾燥条件、特に許容
される熱負荷は粒子に結合した活性成分の安定性により
決定される。
本発明（：より調製される固相は例えば酵素、抗体、抗
原またはハプテン固相のような生物学的活性を有する固
相として使用されうる。これらは並列ゾーン、上下ゾー
ンまたは並列と上下の混合ゾーンを有する診断用テスト
エレメント（ユ使用されるのが好ましい。
原またはハプテン固相のような生物学的活性を有する固
相として使用されうる。これらは並列ゾーン、上下ゾー
ンまたは並列と上下の混合ゾーンを有する診断用テスト
エレメント（ユ使用されるのが好ましい。
以下の笑施例において、ラテックスおよび細胞性同相の
製造、ならびに並置された機能ゾーンを有する診断用テ
ストエレメント（＝おけるその使用を示す。その場合固
相は酵素固相および抗体固相である。
製造、ならびに並置された機能ゾーンを有する診断用テ
ストエレメント（＝おけるその使用を示す。その場合固
相は酵素固相および抗体固相である。
これら実施例（：より本発明の目的をさら（二説明する
が、本発明はそれらに限定されるものではない。
が、本発明はそれらに限定されるものではない。
実施例 １
グルコースオキシダーゼを含有する多孔質固相ヨーロッ
パ特許Ａ−０，０８０，６１４号実施例２ｂに記載され
るようにして調製された、アセタール基を有するラテッ
クスｓｏ’ｐ７ｔを含有する分散液３−をＩＮＨＣｔ５
００μｔおよび２００１１／ｌのツイーン（Ｔｗｅｅｎ
）■−２０３００μｔの水溶液と２０℃で１時間インキ
ュベーションした。次に１ＮＮａＯＨ２５０μｍおよび
Ｎａ２ＨＰＯ４の飽和溶液を添加すること：二よりｐＨ
６，５に調整した。次にｐＨ７，２の燐酸塩緩衝された
生理食塩溶液（ＰＨ８）中の、活性２５０ Ｕ ／ｍｙ
を有するグルコースオキシダーゼ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅ
ｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ社製、純度等級１、オーダーＡｌ
Ｏ３１３９）の１９／を溶液１．５ｍ７、およびＰＨ６
中のナトリウムシアノホウ水素化物の５ ？／Ｌ溶液ｔ
５−を加え、この混合物を４℃で１５時間放置した。次
にＨＣｌを用いてｐｉ（ｓ、 ５ Ｅ調整した０、５モ
ル／１のエタノールアミンｔ２−および２５ ｆ／ｌの
ナトリウムホウ水素化物溶液３．０−を加え、そしてこ
の混合物を４℃でさら（＝１時間放置した。遠心分離し
たのち、沈降物をＰＨ６中に２ ｔ／ｌのツイーン２０
を用いて再懸濁させると、ラテックス／グルコースオキ
シダーゼ接合体の分散液１５ｄｉが得られた。
パ特許Ａ−０，０８０，６１４号実施例２ｂに記載され
るようにして調製された、アセタール基を有するラテッ
クスｓｏ’ｐ７ｔを含有する分散液３−をＩＮＨＣｔ５
００μｔおよび２００１１／ｌのツイーン（Ｔｗｅｅｎ
）■−２０３００μｔの水溶液と２０℃で１時間インキ
ュベーションした。次に１ＮＮａＯＨ２５０μｍおよび
Ｎａ２ＨＰＯ４の飽和溶液を添加すること：二よりｐＨ
６，５に調整した。次にｐＨ７，２の燐酸塩緩衝された
生理食塩溶液（ＰＨ８）中の、活性２５０ Ｕ ／ｍｙ
を有するグルコースオキシダーゼ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅ
ｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ社製、純度等級１、オーダーＡｌ
Ｏ３１３９）の１９／を溶液１．５ｍ７、およびＰＨ６
中のナトリウムシアノホウ水素化物の５ ？／Ｌ溶液ｔ
５−を加え、この混合物を４℃で１５時間放置した。次
にＨＣｌを用いてｐｉ（ｓ、 ５ Ｅ調整した０、５モ
ル／１のエタノールアミンｔ２−および２５ ｆ／ｌの
ナトリウムホウ水素化物溶液３．０−を加え、そしてこ
の混合物を４℃でさら（＝１時間放置した。遠心分離し
たのち、沈降物をＰＨ６中に２ ｔ／ｌのツイーン２０
を用いて再懸濁させると、ラテックス／グルコースオキ
シダーゼ接合体の分散液１５ｄｉが得られた。
Ｍａｃｈｅｒｅｙ ｕｎｄ Ｎａｇｅ１社（西ドイツ、
Ｄｔｉｒｅｎ ）製のＰ紙（製品番号２１５）の小片を
ラテックス／グルコースオキシダーゼ接合体の分散液４
０μｔ／１２を用いて浸漬しそして次に２０〜５０℃で
乾燥した。同様の方法で米国、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社の
製品番号５ＣＷＰを有するセルロース混合エステル製の
膜をこの分散液１０μｔ／ｃＩｍ２で浸炭して乾燥した
。
Ｄｔｉｒｅｎ ）製のＰ紙（製品番号２１５）の小片を
ラテックス／グルコースオキシダーゼ接合体の分散液４
０μｔ／１２を用いて浸漬しそして次に２０〜５０℃で
乾燥した。同様の方法で米国、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社の
製品番号５ＣＷＰを有するセルロース混合エステル製の
膜をこの分散液１０μｔ／ｃＩｍ２で浸炭して乾燥した
。
実施例 ２
ヒトのミオグロビンに対する抗体を含有する多孔質固相
２．１ 実施例１の方法（二従って操作するが、但し
グルコースオキシダーゼの溶液の代り；ニヒトミオグロ
ビンに対する抗体を有する家兎ＩｇＧの２、０ ｍｙ／
−溶液１．５−を用いることにより、ヒトミオグロビン
に対する抗体を有する家兎ＩｇＧとラテックスとの接合
体を洲製した。多孔質固相は実施例１（：記載のように
して調製した。
グルコースオキシダーゼの溶液の代り；ニヒトミオグロ
ビンに対する抗体を有する家兎ＩｇＧの２、０ ｍｙ／
−溶液１．５−を用いることにより、ヒトミオグロビン
に対する抗体を有する家兎ＩｇＧとラテックスとの接合
体を洲製した。多孔質固相は実施例１（：記載のように
して調製した。
２．２ スタフィロコッカス・オーレウス（ＣＯＷＡ
ＮＩ株）の細胞とヒトミオグロビンに対する抗体との接
合体を以下のようにして調製した。
ＮＩ株）の細胞とヒトミオグロビンに対する抗体との接
合体を以下のようにして調製した。
９ｆ／ＬのＮａＣｔを含有するｐＨ７，４の０．０５モ
ル／Ｌ燐酸ナトリウム緩衝水溶液中のスタフィロコッカ
ス・オーレウス細胞の１００５’／１Ｍ？ｌ液５〇−中
にヒトミオグロビン（二対する抗体を含有する家兎のＩ
ｇＧ２ｆ／を溶液１６−を加えた。
ル／Ｌ燐酸ナトリウム緩衝水溶液中のスタフィロコッカ
ス・オーレウス細胞の１００５’／１Ｍ？ｌ液５〇−中
にヒトミオグロビン（二対する抗体を含有する家兎のＩ
ｇＧ２ｆ／を溶液１６−を加えた。
この懸濁液を１時間攪拌した。次（：抗体を負荷した細
胞を遠心分離およびデカンテーションにより上澄み液か
ら分離した。細旭を前記緩衝液４５−中（：再懸濁させ
、そして抗体を細厄：二共有結合させるため１ニ一定し
て攪拌しながら前記緩衝液中のグルタルジアルデヒドの
２２／を溶液５［］Ｔｎｔで処理し、そして１時間攪拌
後に前記緩衝液中の５ Ｏｆ！／ｌ を硫酸ナトリウム
溶液５〇−で処理した。
胞を遠心分離およびデカンテーションにより上澄み液か
ら分離した。細旭を前記緩衝液４５−中（：再懸濁させ
、そして抗体を細厄：二共有結合させるため１ニ一定し
て攪拌しながら前記緩衝液中のグルタルジアルデヒドの
２２／を溶液５［］Ｔｎｔで処理し、そして１時間攪拌
後に前記緩衝液中の５ Ｏｆ！／ｌ を硫酸ナトリウム
溶液５〇−で処理した。
さら（＝１時間攪拌したのち、遠心分離およびデカンテ
ーションにより細胞を上澄み液から分離した。このＩＩ
ｔＩ廊を−（７，４の０．０５モル／を燐酸ナトリウム
緩衝水溶液２０ＯＷｔｔ中に再懸濁しそして遠心分離お
よびデカンテーション（：より洗浄緩衝液から分離する
こと（＝より洗浄した。
ーションにより細胞を上澄み液から分離した。このＩＩ
ｔＩ廊を−（７，４の０．０５モル／を燐酸ナトリウム
緩衝水溶液２０ＯＷｔｔ中に再懸濁しそして遠心分離お
よびデカンテーション（：より洗浄緩衝液から分離する
こと（＝より洗浄した。
かくして処理された細胞をＰＢＳ中（＝２０ ｆ／Ｌと
なるよう（＝再懸濁させそしてこの懸濁液を実施例１に
おけるようにしてＰ紙に付与して乾燥することにより、
固相を調製した。
なるよう（＝再懸濁させそしてこの懸濁液を実施例１に
おけるようにしてＰ紙に付与して乾燥することにより、
固相を調製した。
実施例 ３
実施例２．１記載の多孔質固相を含有する、ミオグロビ
ン測足用テストエレメント ３．１ミオグロビンベルオキ７ダーゼ接合体電気泳動上
単一なヒトミオグロビンおよび、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ
Ｍａｎｎｈｅｉｍ社製、オーダー４４１３４７０号の
ペルオキシダーゼを用いた。Ｎ−ガンマ−マレイミドブ
チリルオキシスクシンイミド（ＧλｆＢｓ）はＢｅｈｒ
ｉｎｇ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ社から得、そしてＴａ
ｎｉｍｏｒ１氏他のｒＪ 、１ｍｍ、 Ｍｅｔｈ−Ｊ
６２＊ １２３〜１３１（１９８３）Ｅ記載されるよう
にしてヒトミオグロビンと反応させた。２−イミノチオ
ラン塩ｔｆ！塩（Ｒｉｇｍａ？ｊｊＪ、カタログＩＥ＝
工６２５６）をＫｉｎｇ氏他（＝より記載されるよう）
ニジて（ｒＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙＪ１７、１４９９
〜１５０６（１９７８））ペルオキシダーゼと反応させ
た。ヒトミオグロビンを有する（）ＭＢ８とイオノチオ
ラン−ペルオキシダーゼとの反応生成物から、Ｔａｎｉ
ｍｏｒｉ氏他により記載されるよう（＝シて接合体が調
製された。この粗製接合体をウルトロゲル（Ｕｌｔｒｏ
ｇｅｌ） ＡＣＡ ４４ （ＬＫＢ社製）でのゲルクロ
マトグラフィーにより精製した。
ン測足用テストエレメント ３．１ミオグロビンベルオキ７ダーゼ接合体電気泳動上
単一なヒトミオグロビンおよび、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ
Ｍａｎｎｈｅｉｍ社製、オーダー４４１３４７０号の
ペルオキシダーゼを用いた。Ｎ−ガンマ−マレイミドブ
チリルオキシスクシンイミド（ＧλｆＢｓ）はＢｅｈｒ
ｉｎｇ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ社から得、そしてＴａ
ｎｉｍｏｒ１氏他のｒＪ 、１ｍｍ、 Ｍｅｔｈ−Ｊ
６２＊ １２３〜１３１（１９８３）Ｅ記載されるよう
にしてヒトミオグロビンと反応させた。２−イミノチオ
ラン塩ｔｆ！塩（Ｒｉｇｍａ？ｊｊＪ、カタログＩＥ＝
工６２５６）をＫｉｎｇ氏他（＝より記載されるよう）
ニジて（ｒＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙＪ１７、１４９９
〜１５０６（１９７８））ペルオキシダーゼと反応させ
た。ヒトミオグロビンを有する（）ＭＢ８とイオノチオ
ラン−ペルオキシダーゼとの反応生成物から、Ｔａｎｉ
ｍｏｒｉ氏他により記載されるよう（＝シて接合体が調
製された。この粗製接合体をウルトロゲル（Ｕｌｔｒｏ
ｇｅｌ） ＡＣＡ ４４ （ＬＫＢ社製）でのゲルクロ
マトグラフィーにより精製した。
ヒトミオグロビン１分子当り約１〜２分子のにルオキシ
ダーゼが結合したフラクションを試験（二用いた。この
接合体をＢｅｈｒｉｎｇｗｅｒｋｅ社裂オーダー＆ Ｏ
８Ｄ社製ｎｚｙｇｎｏｓｔ＠ ＩｇＥインキュベーショ
ン用培地を用いてピロガロール単位１００／−となるま
で希釈した。
ダーゼが結合したフラクションを試験（二用いた。この
接合体をＢｅｈｒｉｎｇｗｅｒｋｅ社裂オーダー＆ Ｏ
８Ｄ社製ｎｚｙｇｎｏｓｔ＠ ＩｇＥインキュベーショ
ン用培地を用いてピロガロール単位１００／−となるま
で希釈した。
５．２ テストエレメントの構成成分の調製３．２．
１テトラメチルベンジジンおよびグルコースを含有する
ビスコース羊毛 西ドイツ、ＷｉｅｓｂａｄｅｎのＫａｌｌｅ社製の、坪
量１４０〜１９ＣＪｆ／ｍ２を有するビスコース羊毛を
、この羊毛がそれ以上溶液を吸収できなくなるまでテト
ラメチルベンジジンジ塩酸塩３７５寓ｇ／ ｔおよびＤ
−グルコース５ａｙ７ｔを含有する水溶液で浸漬した。
１テトラメチルベンジジンおよびグルコースを含有する
ビスコース羊毛 西ドイツ、ＷｉｅｓｂａｄｅｎのＫａｌｌｅ社製の、坪
量１４０〜１９ＣＪｆ／ｍ２を有するビスコース羊毛を
、この羊毛がそれ以上溶液を吸収できなくなるまでテト
ラメチルベンジジンジ塩酸塩３７５寓ｇ／ ｔおよびＤ
−グルコース５ａｙ７ｔを含有する水溶液で浸漬した。
この羊毛を２０〜５０℃で乾燥しそして１０１０Ｘ５の
小片に切断した。
小片に切断した。
３．２．２ ミオグロビン−ペルオキシダーゼ接合体お
よびグルコースオキシダーゼを含有する紙 Ｍａｃｈｅｒｅｙ ｕｎｄ Ｎａｇｅ１社製の黒１号戸
紙の５０×５値に切断されたものに、相互に離れた２つ
の領域に実施例６．１記載のミオグロビン−はルオキ７
ダーゼ接合体の溶液５μｔを１回、そして２００Ｕ／−
のグルコースオキシダーセ溶液５μｔを１回言浸させた
。その際、紙の湿潤する領域が５〜６−離れているよう
１：適用部位が選択された。このＦ紙を２０〜５０℃で
乾燥した。
よびグルコースオキシダーゼを含有する紙 Ｍａｃｈｅｒｅｙ ｕｎｄ Ｎａｇｅ１社製の黒１号戸
紙の５０×５値に切断されたものに、相互に離れた２つ
の領域に実施例６．１記載のミオグロビン−はルオキ７
ダーゼ接合体の溶液５μｔを１回、そして２００Ｕ／−
のグルコースオキシダーセ溶液５μｔを１回言浸させた
。その際、紙の湿潤する領域が５〜６−離れているよう
１：適用部位が選択された。このＦ紙を２０〜５０℃で
乾燥した。
３．２．３ ミオグロビン（二対する抗体を含有する紙
実施例２．１記載の多孔質固相を１１０Ｘ５の小片：二
切断した。
実施例２．１記載の多孔質固相を１１０Ｘ５の小片：二
切断した。
３．２．４非含浸紙
５ｃｈｌｅｉｃｈｅｒ ｕｎｄ ５ｃｈｕｅ１１社製の
紙（製品番号２６６８／８ ”）を２０×６−の長方形
に切断した。
紙（製品番号２６６８／８ ”）を２０×６−の長方形
に切断した。
３．３ テストエレメントの製造
両面粘着テープを用いて、長方形のそれぞれ１つをその
狭い方の側で下記の順序でポリエステルフィルム上（＝
連続して吸収性接触状に接着させた。
狭い方の側で下記の順序でポリエステルフィルム上（＝
連続して吸収性接触状に接着させた。
ａ）実施例３．２．１によるビスコース羊毛、ｂ）グル
コースオキシダーゼを含有する領域が多孔質固相にｌｉ
４接するよう配置された、実施例３，２．２記載の紙、 Ｃ）実施例５．２．３記載の多孔質固相、およびｄ）実
施例３．２．４記載の紙。
コースオキシダーゼを含有する領域が多孔質固相にｌｉ
４接するよう配置された、実施例３，２．２記載の紙、 Ｃ）実施例５．２．３記載の多孔質固相、およびｄ）実
施例３．２．４記載の紙。
３．４ テストエレメントの機能検査Ｅｎｚｙｇｎｏ
ｓ ｔ■ＩｇＥ希釈緩衝液中のヒトミオグロビン１０．
１００．１０００およびｉ ｏ ｏ ｏ ｏ ｍｙ７−
を含有する溶液それぞれ１００μｔを各テストエレメン
トめビスコース羊毛上（二付与し、１２〜１３分後に多
孔質固相上に生成した着色の強度を、血液中のグルコー
ス含蓄に関して検量されＱｕｅｌｌｓ社製５ａｎｏｑｕ
ｅｌｌ■反射光度計を用いて測定して、下記測定値が得
られた。
ｓ ｔ■ＩｇＥ希釈緩衝液中のヒトミオグロビン１０．
１００．１０００およびｉ ｏ ｏ ｏ ｏ ｍｙ７−
を含有する溶液それぞれ１００μｔを各テストエレメン
トめビスコース羊毛上（二付与し、１２〜１３分後に多
孔質固相上に生成した着色の強度を、血液中のグルコー
ス含蓄に関して検量されＱｕｅｌｌｓ社製５ａｎｏｑｕ
ｅｌｌ■反射光度計を用いて測定して、下記測定値が得
られた。
実施例１記載のラテックス書＝結合したグルコースオキ
シダーゼが実施例５．２．２記載のようにして多孔質固
相として固定された場合および抗体がストレプトコッカ
ス・オーレクスの細胞（＝結合されそして実施例２．２
１＝相当して多孔質固相に固定された場合（−も、同様
の方法で機能しうるテストエレメントが製造できた。
シダーゼが実施例５．２．２記載のようにして多孔質固
相として固定された場合および抗体がストレプトコッカ
ス・オーレクスの細胞（＝結合されそして実施例２．２
１＝相当して多孔質固相に固定された場合（−も、同様
の方法で機能しうるテストエレメントが製造できた。
時的；出願人 ベーリングヴエルケ・アクチェンゲセ
ルシャフト 外２名
ルシャフト 外２名
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １）生物学的親和性を有する１種またはそれ以上の結合
相手が結合した粒子の分散液または懸濁液を、繊維から
なる多孔質材料中にとり込み、そして次に分散剤または
懸濁剤を除去することにより得られる、生物学的親和性
を有する結合相手を含有する多孔質の固相。 ２）生物学的親和性を有する１種またはそれ以上の結合
相手が結合した粒子の分散液または懸濁液を、多孔質材
料中にとり込み、そして次に分散剤または懸濁剤を除去
することを特徴とする、生物学的親和性を有する結合相
手を含有する多孔質固相の製法。 ３）多孔質材料が紙であることを特徴とする、特許請求
の範囲第２項記載の方法。 ４）多孔質材料が膜であることを特徴とする、特許請求
の範囲第２項記載の方法。 ５）多孔質材料が羊毛であることを特徴とする、特許請
求の範囲第２項記載の方法。 ６）多孔質材料の中空空洞がガス発生により生成される
ことを特徴とする、特許請求の範囲第２項記載の方法。 ７）粒子がラテックス粒子であることを特徴とする、特
許請求の範囲第２項記載の方法。 ８）生物学的親和性を有する結合相手が粒子に共有給台
されていることを特徴とする、特許請求の範囲第２項記
載の方法。 ９）粒子がスタフィロコッカス・オーレウスのプロテイ
ンＡで被覆されるか、またはＣＯＷＡＮＩ菌株のスタフ
ィロコッカス・オーレウスの細胞であり、そして免疫グ
ロブリンがその粒子に結合されていることを特徴とする
、特許請求の範囲第２項記載の方法。 １０）粒子がＣ群またはＧ群のストレプトコッカスのプ
ロテインＧで被覆されており、そして免疫グロブリンが
その粒子に結合されていることを特徴とする、特許請求
の範囲第２項記載の方法。 １１）生物学的親和性を有する対応する対の相手の分離
および検出のため、ならびに溶解された形態の結合相手
の検出のための装置における特許請求の範囲第２項記載
の方法により調製された多孔質固相の使用。
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| KR100239949B1 (ko) * | 1991-10-11 | 2000-01-15 | 스프레이그 로버트 월터 | 연속 다공성 매트릭스에 혼입된 공유 반응성 입자(covalently reactive particles incorporated in a continuous porous matrix) |
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| CA1314813C (en) | 1993-03-23 |
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