JPS63107998A - リンパ節障害関連ウイルスに対するヒト単クロ−ン性抗体 - Google Patents

リンパ節障害関連ウイルスに対するヒト単クロ−ン性抗体

Info

Publication number
JPS63107998A
JPS63107998A JP62155247A JP15524787A JPS63107998A JP S63107998 A JPS63107998 A JP S63107998A JP 62155247 A JP62155247 A JP 62155247A JP 15524787 A JP15524787 A JP 15524787A JP S63107998 A JPS63107998 A JP S63107998A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
monoclonal antibody
lav
htlv
iii
cell line
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
JP62155247A
Other languages
English (en)
Other versions
JP2626680B2 (ja
Inventor
ジャネラ　マックルーア
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Genetic Systems Corp
Original Assignee
Genetic Systems Corp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Genetic Systems Corp filed Critical Genetic Systems Corp
Publication of JPS63107998A publication Critical patent/JPS63107998A/ja
Application granted granted Critical
Publication of JP2626680B2 publication Critical patent/JP2626680B2/ja
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
    • C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
    • C07K16/1036—Retroviridae, e.g. leukemia viruses
    • C07K16/1045—Lentiviridae, e.g. HIV, FIV, SIV
    • C07K16/1063—Lentiviridae, e.g. HIV, FIV, SIV env, e.g. gp41, gp110/120, gp160, V3, PND, CD4 binding site
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/02—Preparation of hybrid cells by fusion of two or more cells, e.g. protoplast fusion
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • AIDS & HIV (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 技術分野 本発明は一般にウィルス感染の診断および治療に有用な
、並びに生化学および組織学研究に有用な新規物質を提
供する免疫学的技術の使用に関する。より詳しくは、本
発明はリンパ節障害関連ウィルス、ＬＡＶ　／ＨＴＬＶ
　−ＩＩＩと反応できるヒト単クローン性抗体の製造お
よび確認に関する。
背景技術 後天性免疫不全症候群（エイズ）は日和見感染および一
定のまれな悪性に特徴がある細胞性免疫の伝播可能な低
下である。エイズに対する主な危険群には同性愛能動性
男性、静脈内薬物乱用者、輸血および血液製剤の受容者
、並びに高危険個体の異性愛相手および子供が含まれ、
密接接触または血液製剤により伝達される感染性因子の
包含を示唆する。
最近の証拠は疾患伝達に応答できる感染性因子がリンパ
節障害関連ウィルス（ＬＡＶ）（バーレイ−ジノウシ（
Ｂａｒｒｅ’　−５ｉｎｏｕｓｓｉ）　　ほか、サイエ
ンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）　、　　２２５　：　８４０　
　（１９８４）　）として知られ、ヒ）Ｔ細胞リンパ趨
向性ウィルス（ＨＴＬＶ−ＩＩＩ）、エイズ関連レトロ
ウィルス（ＡＲＶ）、免疫不全関連ウィルス（ＩＤＡＶ
）、またはヒト免疫不全ウィルス（ＨＩ　Ｖ）と称され
る新規なリンパ趨向性レトロウィルスであることを示す
。より最近のｆ−夕ｉ；！ＬＡＶ、ＨＴＬＶ　−Ｉ［、
Ａ　Ｒ”ｌヨびＩＤＡＶは実質的なヌクレオチド相同性
〔ウェインーホブソ７　（Ｗａ　１ｎ−Ｈｏｂｓｏｎ）
　　ほか、セル（Ｃｅｌｌ）。
１ユニ９　（１９８５）；ミュエシング（Ｍｕｅｓｉｎ
ｇ）ほか、ネーチ＋（Ｎａｔｕｒｅ）　、　３１３　：
　４５０　（１９８５）；サンチェツ・ペスカドール（
Ｓａｎｃｈｅｚ−Ｐｅｓｃａｄｏｒ）ほか、サイエンス
（Ｓｃｉｅｎｃｅ）　、　　２２７　：　４８４（１９
８５））を含む若干の重要な特性を共有し、同一ウィル
スの分離株と考えるべきであるけれども、ウィルス分離
株間に株から株変異が存在する可能性があることを示す
。実質的なヌクレオチド相同性を示すことに加えて、分
離株は形態学、細胞病理学、最適逆転写酵素活性に対す
る要件、および少くとも若干の抗原穫に関して類似する
〔レイビー（Ｌｅｖｙ）　　、前掲ニジユバｔ　ハ（Ｓ
ｃｈｕｐｂａｃｈ）ほか、サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ
）　、　　２２４　：　５０３（１９８４））。
血液製剤（血液、血清、血漿、およびそれらの分画）に
よるエイズウィルスの伝達可能性は血液製剤をスクリー
ンして提供者がウィルスにさらされたかまたは潜在性保
菌者かどうかを決定することを重要にする。εＬｒ５Ａ
　フォーマット中の破壊ウィルス抗原を用いた若干の製
品が現在この目的に市販されている。血液がＬＡＶ　／
ＨＴＬＶ　−Ｉに対する抗体を含む個体は「血清反応陽
性」といわれる。
これらの血清反応陽性提供者からの血液を検出により血
液供給から排除し、それにより疾患の蔓延を防ぐのに役
立てることができる。
ＬＡＶ　／ＨＴＬＶ　−ＩＩＩに対する抗体応答のない
ことが常に血液製剤の感染のないことを示すわけではな
い。ウィルスが、抗体陰性であると認められ臨床的に明
らかな徴候を何ら示さない個体から採取した血液試料か
ら培養された〔サローデイン（Ｓａｌａｈｕｃｌｄｉｎ
、　Ｓ、　Ｚ、）　　ほか、ランセット（Ｌａｎｃｅｔ
）ｉｉ：１４１８　（１９８４））。これらの感染性抗
体陰性血液製剤が血液供給に入るのを防ぐことが抗原捕
捉検定系に必要である。主ウィルス成分と反応性の単ク
ローン性抗体はそのような抗原検出の系に対する基礎を
与えることができる。
最近ＬＡＶ　／ＨＴＬＶ　−ＩＩＩのｐ２４コアタンパ
ク質およびそのタンパク質前駆物質と反応性のネズミ単
りローン性抗体およびエンベロープ糖タンパク質ｇｐ４
１と反応性のネズミ抗体が報告された〔ディφマルゾ舎
ベロネス（ｄｉ　Ｍａｒｚｏ　Ｖｅｒｏｎｅｓｅ）ほか
、プロシーデイングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデ
ミ−・オブ・サイエンス（Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、　Ａｃ
ａｄ。
Ｓｃｉ、）ＵＳＡ、８２：５１９９　（１９８５）；デ
ィ◆マルゾ・ベロネス（ｄｉ　Ｍａｒｚｏ　Ｖｅｒｏｎ
ｅｓｅ）ほか、サイｘ　ンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）　、　
　２２９　：　１４０２　（１９８５）　：］。
シャサグネ（Ｃｈａｓｓａｇｎｅ）　　ほか〔ジャーナ
ル・オブ・イムノロジー（Ｊ、　ｌｎｍｕｎｏｌ、）、
　１３６　：　１４４２（１９８６））もまたｐ２４お
よびその前駆物質に特異性のネズミ単りローン性抗体を
記載した。
これらの抗体は感染細胞中のコアタンパク質前駆物質の
最終ウィルスタンパク質へのプロセッシングをトレース
するために実験的に使用された。
これらの抗体陽性固体の検出が可能であり、これらの抗
原陽性の検出が可能であろうけれども、疾患に対する有
効な治療または予防手段はまだ認められていない。エイ
ズが異常にまん延し始め、急激な割合でなく、ウィルス
の伝播過程がなお疑わしいとしても、予防および（また
は）治療効果を有する組成物に対する技術的な要求が存
在する。
発明の開示 簡単に述べると、本発明は（１）　　ＬＡＶ　／ＨＴＬ
Ｖ　−■の抗原決定基と反応できるヒト単クローン性抗
体；（２）これらのヒト単クローン性抗体を生ずるイモ
ータル化細胞系；および（３）例えば生物学的試料中の
ＬＡＶ　／）ＩＴＬＶ　−ＩＩＩの存在の決定にヒトモ
ノクローナルを用いる方法を開示する。ここに記載する
他の方法には混合物からＬＡ−Ｖ　／ＨＴＬＶ　−ＩＩ
Ｉの特異抗原決定基を分離する操作が含まれる。さらに
、ＬＡＶ　／ＨＴＬＶ　−ＩＩＩの抗原決定基と反応で
きるヒト単クローン性抗体の治療有効量並びに生理学的
に許容される担体および（または）希釈剤を含む製剤組
成物が開示される。この特性を有する組成物は温血動物
におけるＬＡＶ　／ＨＴＬＶ　−ＩＩＩの感染性を有意
に低下させる方法に殊に有用である。
上記のよう１３本発明の１観点は生物学的試料中のＬＡ
Ｖ　／）ＩＴＬＶ　−ＩＩＩの存在を決定する方法を提
供する。該方法は一般に（ａ）　　ＬＡＶ／ＨＴＬＶ−
ＩＩＩの抗原決定基と反応できるヒト単クローン性抗体
を生物学的試料とともにインキュベートし、（ｂ）単ク
ローン性抗体と生物学的試料との間に形成された免疫複
合体の存在を検出し、それからＬＡＶ　／ＨＴＬＶ　−
ＩＩＩの存在を決定することを含む。標識または非標識
単クローン性抗体を用いることができる。
該方法は体分泌物、体液および組織標本を含む種々の生
物学的試料中のＬＡＶ　／Ｉ（ＴＬＶ　−Ｉｎの検出に
適用することができる。
本発明の他の観点は、上記のように、ＬＡＶ　／ＨＴＬ
Ｖ　−ＩＩＩの抗原決定基を含む混合物からＬＡＶ　／
ＨＴＬＶ　−ＩＩＩの特異抗原決定基を分離する方法を
提供する。該方法は（ａ）基質上の特異抗原決定基と反
応できるヒト単クローン性抗体を固定化し、（ｂ　）　
、ＬＡＶ　／ＨＴＬＶ　−ＩＩＩ抗原決定基を含む混合
物を、免疫複合体が抗体と特異抗原決定基との間に形成
されるような適当な条件下に、固定化した抗体と接触さ
せ、（Ｃ）免疫複合体を混合物から分離することを含む
。
本発明の他の観点は次の詳細な説明および図面を参照す
ると明らかになろう。
発明を実施するための最良の形態 本発明を示す前にここに用いる一定の用語の定義を示す
ことは発明の理解に有益であろう。
リンパ節障害関連ウィルス（ＬＡＶ）：ヒトＴリンパ趨
向性レトロウィルス 本発明の目的に対しウィルスが次の基準を実質的に満せ
ばＬＡＶと同一または等価であると思われる； （ａ）　　ウィルスがＴ’Ｊンバ球、殊にＴヘルツく一
細胞ｔ：ｃＤ　４４、パーナート（Ｂｅｒｎａｒｄ）ほ
か編、［白血球型判定（Ｌｅｕｃｏｃｙｔｅ　Ｔｙｐｉ
ｎｇ）　ｊ　、ニューヨーク、スプリンガー・フエルラ
ーク（ＳｐｒｉｎｇＶｅｒｌａｇＨｌ　９８４　）によ
る〕に趨向性である；ら）　ウィルスが感染ＣＤＪ＋細
胞に対しくＨＴＬＶ　−■および旦のような形質転換よ
りはむしろ）細胞変性である； （Ｃ）　　ウィルスが、Ｍ　ｇ　”　”依存性（最適濃
度５ｍＭ、最適ｐＨ７，８、アクチノマイシンＤによる
抑制性でない）であり、（ｄＴ）１２〜＋８を３’ＬＴ
Ｒからの逆転写にブライマーとして利用できるＲＮＡ依
存性ＤＮＡポリメラーゼ（逆転写酵素）をエンコードす
る； （６）　ウィルスがスクロース勾配中に約１．１６の密
度でバンドする、 （ｅ）　　ウィルスを〔３日〕ウリジンで標識できる；
（ｆ）　　ウィルスがＨＴＬＶ−Ｉ　／　ＩＩの科の一
員のウィルスと免疫学的およびヌクレオチド配列基準に
より区別される（この基準によりＩＩＴＬＶ　−ＩＩＩ
はＩ（ＴＬＶ−Ｉ／ｎ科の一員とは思われない〉　；（
鵠　ウィルスがＬＡＶのｇａｇおよびｅｎｖ領域により
エンコードされるタンパク質と免疫学的に実質的に交差
反応性である；および （社）　ウィルスがＬＡＶと実質的なヌクレオチド相同
性（７８〜１００％）およびアミノ酸配列相同性（９０
〜１００％）を共有する。
インターナショナル・コミッテイー・オン・ザ・クキソ
ノミー・オブ・ウィルス（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ
Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ　ｏｎ　ｔｈｅ　Ｔａｘｏｎｏｍｙ
　ｏｆ　Ｖｉｒｕｓｅｓ）　　のヒトレトロウィルス小
委員会はヒト免疫不全ウィルス（ＨＩＶ）の名称を推奨
し〔サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）。
２３２　：６９７　（１９８６））、従って、本発明の
目的に対してはしＡＶ　／ＨＴＬＶ　−ＩＩＩとＨＩＶ
とが等しいと思われる。
本発明によれば、新規なハイブリッド細胞がヒト免疫不
全ウィルス、ＬＡＶ／ＨＴＬＶ−ＩＩＩ、０）９　”／
バク質およびタンパク質前駆物質の特異的確認に提供さ
れる。主題細胞は生殖系ＤＮＡがヒト免疫不全ウィルス
臨床分離株の若干またはすべてに共通の、しかし他のヒ
トレトロウィルス例えばＨＴＬＶ　−■およびＨＴＬＶ
−ＩＥ上に見出されないエピトープに対する結合部位を
有する抗体をエンコードするように転移した確認可能染
色体を有する。これらのヒト単クローン性抗体は診断お
よび治療を含む種々の方法に用いることができる。
単クローン性抗体の調製はＬＡＶ　／ＨＴＬＶ　−ＩＩ
Ｉの抗原上のエピトープに特異性の抗体をコードする核
酸配列の発現をイモータル化することにより行なうこと
ができる。典型的には、単クローン性抗体はＬＡＶ　／
ＨＴＬＶ　−ＩＩＩに暴露されているかまたは暴露され
たヒト提供者から得られたＢリンパ球細胞の細胞誘導エ
プスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）形質転換により生
成される。そのように生成された抗体分泌細胞系は二倍
体積型を有し、エプスタイン・バー核抗原陽性であり、
種々の亜型例えばＩｇＧ　　Ｌ　ＩｇＧ　　２、ＩｇＧ
　　３およびＩｇＧ　　４を含むＩｇＧ。
ＩｇＭＳＩｇＡまたは■ｇＤアイソタイプの単クローン
性抗体を分泌する連続増殖リンパ芽球様細胞として確認
される。細胞誘導形質転換法それ自体は米国特許第４．
４６４．４６５号明細書に詳細に記載され、該明細書は
ここに参照される。単クローン性抗体はそのまままたは
フラグメント例えばＦｖ、　Ｆａｂ。
Ｆ（ａｂ’）２として、しかし通常そのまま使用できる
。
あるいは、抗体を生成する細胞系を適当に薬物標識した
ヒト骨髄腫細胞、マウス骨髄腫細胞またはヒ）　＋Ｊン
バ芽球様細胞とと）　Ｂ　リンパ球との間の細胞融合に
より生成させ、ヒトハイブリッド細胞系を得ることがで
きる。
本発明の細胞系はヒト単クローン性抗体の直接生成以外
の用途を見出すことができる。該細胞系は他の細胞（例
えば適当に薬物標識したヒト骨髄腫細胞、マウス骨髄腫
細胞またはヒトリンパ芽球様細胞）と融合させてハイブ
リドーマを生成させ、従って単クローン性抗体をエンコ
ードする遺伝子の伝達を与えることができる。あるいは
、該細胞系は免疫グロブリンをエンコードする染色体源
として用いることができ、それを分離し、融合以外の技
術により細胞に伝達することができる。さらに、単クロ
ーン性抗体をエンコードする遺伝子を分離し、組換えＤ
ＮＡ技術により種々の宿主中の特異免疫グロブリンの生
成に用いることができる。
殊に、メツセンジャーＲＮΔからｃＤＮＡライブラリー
を作ることにより免疫グロブリンをコードし、イントロ
ンを含まない単個ＤＮＡクローンを分離し、適当な原核
または真核発現ベクター中へ入れ、次に最終バルク生産
のために宿主中へ形質転換することができる。
リンパ芽球様またはハイブリッド細胞系はクローン化し
、普通の方法で、ＬＡＶ　／ＨＴＬＶ　−１ウイルスタ
ンパク質、組換え体融合タンパク質、または合成ペプチ
ドに結合できることが検出される細胞上澄み中の抗体を
スクリーンすることができる。
適当なハイブリッド細胞系は次いで試験管内で伸長させ
、または腹水液の生成のために適当な宿主の腹腔内へ注
入することができる。ＬＡＶ　／ＨＴＬＶ　−■ウィル
スに対して特異性であると知られた本発明の抗体を持つ
ことにより、上澄みをコンペティティブアッセイにおい
て主題単クローン性抗体で競争的にスクリーンすること
ができる。従って、ハイブリッド細胞系は特定抗原に対
して特異的な本抗体の有効性に基いて種々の源から容易
に生成させることができる。
本発明の単クローン性抗体はｇｐ４１、エンベロ−プ領
域からのＬＡＶ　／ＨＴＬＶ　−ＩＩＩの発現融合タン
パク質および合成抗原、に対する特異性のために殊に有
用である。
該単クローン性抗体はまた種々の試験管内利用性を見出
すことができる。例としては、ウィルスが感染培養リン
パ球中に存在するかどうかを間接免疫螢光法により検出
するために単クローン性抗体を用いることができる。ウ
ィルスタンパク質またはウィルスタンパク質の部分を破
壊した精製ウィルス調製物から、またはこれらのタンパ
ク質が成分である複合混合物から除去することができる
。
これらの特異ウィルスタンパク質は支持体物質例えば高
分子管、ビーズ、多糖粒子などに対する単クローン性抗
体の結合により除去することができる。結合の方法は当
該技術分野に於いてはよく知られている、例えばシャー
川ほか（Ｓｃｈａｌｌ　ａｎｄＴｅｎｏｓｏ）、ｒ１９
８０年代の臨床研究室技術（Ｃ１ｉｎｉｃａｌしａｂｏ
ｒａｔｏｒｙ　　Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ　　ｆｏｒ　　
ｔｈｅ　　１９８０’Ｓ）Ｊ　　：　　１２ニー（１９
８０）、アラン・アール・リス社（ＡｌａｎＲｌＬｉｓ
ｓ　Ｉｎｃ、）　参照。混合物を結合が生ずることがで
きる条件下に固定化抗体と結合させる。免疫複合体は支
持体に適する方法により残余混合物から分離される。こ
れらの方法は当該技術分野に於いてはよく知られている
。次いで分離されたタンパク質を免疫複合体の形成に好
ましくない条件の使用により抗体から脱離させることが
できる。
診断目的に対して単クローン性抗体は標識し、または非
標識であることができる。典型的には、診断検定はＬＡ
Ｖ　／ＨＴＬＶ　−ＩＩＩ抗原に対する単クローン性抗
体の結合による複合体の形成を検出することを伴なう、
非標識のときに抗体は凝集検定における使用が見出され
る。さらに、非標識抗体は単クローン性抗体例えば免疫
グロブリンに対する特異抗体と反応性の他の標識抗体（
第２抗体）と組合せて使用することができる。あるいは
、単クローン性抗体を直接標識することができる。種々
の標識例えば放射性核種、螢光体、酵素、酵素基質、酵
素補助因子、酵素抑制因子、リガンド（殊にハプテン）
などを用いることができる。多くの型の免疫検定法を利
用でき、若干の例として、米国特許第３．８１７．８２
７号；第３．８５０．７５２号；第３．９０１．６５４
号：第３．９３５．０７４号；第３．９８４．５３３号
；第３．９９６．３４５号；第４．０３４．０７４号お
よび第４．０９８．８７６号明細書に記載されたものが
含まれ、それらのすべてがここに参照される。
通常、本発明の単クローン性抗体は酵素免疫検定に使用
され、主題抗体または異なる種からの第２抗体が酵素に
結合される。ＬＡＶ　／ＨＴＬＶ　−ＩＩＩ抗原を含む
生物学的試料例えばヒト血清またはウィルス細胞培養上
澄みを主題抗体と結合させると、結合は抗体と所望エピ
トープを発現する分子との間に起る。そのようなタンパ
ク質またはウィルス粒子は次いで非結合試薬および添加
された第２抗体く酵素で標識された）から分離すること
ができる。
その後抗原に対し特異的に結合した抗体−酵素結合体の
存在を測定する。当業者によく知られた他の普通の技術
もまた用いることができる。
しＡＶ　／ＨＴＬＶ　−Ｉ！Ｉ感染またハＬＡＶ　／Ｈ
ＴＬＶ　−１抗原の存在に対する検出に主題抗体を用い
るキットもまた供給することができる。従って本発明の
主題単クローン性抗体組成物は通常凍結乾燥形態で、単
独またはＬＡＶ　／Ｉ（ＴＬＶ−ＩＩＩの他のエピトー
プに特異性の他の抗体とともに提供することができる。
標識に結合させるかまたは未結合であることができる抗
体はキット中に緩衝剤例えばトリス、リン酸塩、炭酸塩
など、安定剤、殺生物剤、不活性タンパク質例えばウシ
血清アルブミン、などとともに含まれる。一般に、これ
らの物質は活性抗体の量を基にして約５重量％未満で存
在し、通常、また抗体濃度を基にして少くとも約０．０
０１重量％の全量で存在する。しばしば活性成分を希釈
する不活性増量剤または賦形剤を含むことが望ましく、
賦形剤は全組成物の約１〜９９重量％存在することがで
きる。単クローン性抗体に結合できる第２の抗体を用い
る場合に、これは通常別個のバイアル中に存在する。第
２抗体は典型的には標識に結合され、上記抗体配合物と
類似の方法で配合される。
先に示したように、抗原の検出はＬＡＶ　／ＨＴＬＶ　
−Ｌ■ウィルスによる感染の存在の診断に有用である。
種々の生物学的試料中のウィルスの存在の検出もまた達
成することができる。生物学的試料には血清、唾液、精
液、組織生検試料（脳、皮膚、リンパ節、膵臓など）、
細胞培饗上澄み、破壊したウィルスおよび細菌発現系な
どが含まれるが、しかしそれらに限定されない。ウィル
スの存在はヒト単クローン性抗体を生物学的試料ととも
に免疫複合体を形成させる条件下にインキュベートし、
次いで複合体の形成を検出することにより試験される。
ＩＢ様に右いて、複合体の形成は単クローン性抗体に結
合できる第２の抗体の使用により検出され、それは典型
的には標識に結合され、前記抗体配合物と類似の方法で
配合される。
当業者は、本発明の単クローン性抗体がまた多くの方法
、例えばアフィニティークロマトグラフィー、種々の天
然存在ＬＡＶ　／ＨＴＬＶ　−ＩＩＩ抗原の精製、並び
に種々の発現系〔すなわち、大腸菌（Ｂ、　ｃｏｌｉ）
、ワクチニア、チャイニーズハムスター卵巣細胞など）
からの発現、組織学染色試薬などの方法が使用出来るこ
とを認識するであろう。一般に「イムノロジカル−メソ
ーズ（Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｍｅｔｈｏｄｓ）
Ｊ、Ｖｏｌ、　Ｉおよび■、レフコビッツほか（Ｌｅｆ
ｋｏｖｉｔｓ。
１、ａｎｄ　Ｐｅｒｎｉｓ、　Ｖ、）絹、アカデミツク
・プレス（Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、　Ｎｅｗ　
Ｙｏｒｋ）、（１９７９および１９８１）；　ｒハンド
ブック・オブ・エクスペリメンタルーイム１０ジー（Ｈ
ａｎｄｂｏｏｋ　ｏｆ　ＢｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＩｍ
ｍｕｎｏｌｏｇｙ）　Ｊ、ウェア（Ｗｅｉｒ、　Ｄ、　
）　［、ブラックウェル・サイエンティフィック・パブ
リケーション（Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ　５ｃｉｅｎｔｉｆ
ｉｃ　Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ、　Ｓｔ、Ｌｏｕｉｓ。
ＭＯ＞（１９７８）が参照され、それらはともにここに
参照される。
治療には、適轟な生物学的性質を有する抗体は直接治療
薬として有用である。あるいは抗体を毒素に結合して抗
毒素を形成し、あるいは放射性物質または薬物に結合さ
せて放射性薬物または製剤を形成することができる。抗
体の抗毒素および放射性薬物を製造する方法はよく知ら
れている〔例えばカンサー・トリートメント・レポート
（ＣａｎｃｅｒＴｒｅａｔｍｅｎｔ　Ｒｅｐｏｒｔｓ）
、６８　；３１７　　（１９８４）参照〕。結合した抗
体は生理学的に許容される担体例えば無菌水、生理食塩
水、緩衝塩水と混合される。アジュバント例えば水酸化
アルミニウムもまた使用することができる。
本発明の他の特徴および利点は本発明の実施例として記
載される次の実験の記載から明らかになろう。この実施
例は例示として、示されているものであり、限定として
示されているものではない。
実施例 この実施例はＬＡＶウィルスタンパク質と反応するヒト
単クローン性抗体の製造およびイムノプロットおよび酵
素結合抗体免疫検定における合成ペプチドおよび細菌発
現融合タンパク質を用いるこれらの抗体の確認のための
方法を示す。
健康なエイズ陽性血液提供者から得た末梢血液試料をヒ
）Ｂ細胞源として役立てた。単核細胞はフィコール・パ
ック（Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐｏｑｕｅ）　　の標準遠心分離
法により分離し、カルシウム／マグネシウムを含まない
リン酸塩緩衝食塩水（ＰＢＳ）中で２回洗浄した。
単核細胞は変形Ｅ−ロゼツト操作を用いてＴ細胞から減
耗させた。簡単に述べると、初めに２０％ウシ胎仔血清
（ＦＣＳ）を含むＰＢＳ中に４℃で細胞をＩ　Ｘ　１０
’　細胞／ｍの濃度に再！ｇ濁した。
次いでこの懸濁液１皺を１７Ｘ１００ｍｍポリスチレン
丸底管に入れ、イスコツ（ｒｓｃｏｖｅ）変性ダルベツ
コ培地（イスコツ培地）中の１０％（Ｖ／Ｖ）溶液から
ｌＸｌ０’　の２−アミノ−イソチウロニウムプロミド
（ＡＥＴ）処理ヒツジ赤血球細胞を加えた。懸濁液は４
℃で５〜１０分間非常に穏やかに混合し、次いでＥ−ロ
ゼツト細胞を４℃で２５００×ｇで８分間フィコール・
バック上の遠心分離により除去した。界面にバンドする
Ｅ−ロゼツト陰性末梢血液単核細胞（Ｅ−ＰＢＭＣ）を
捕集し、イスコツ培地中で１回洗浄し、１５％（ｖ／ｖ
）ＦＣＳ、Ｌ−グルタミン（２ミリモル／１）、ペニシ
リン（１００１０／Ｍ）、ストレプトマイシン（１０゜
ｎ７ｍ）、ヒボキサンチン（ＩＸＩＯ−’Ｍ）、アミノ
プテリン（４Ｘ１０−’Ｍ）およびチミジン（１，６Ｘ
　１０−’Ｍ）を含むＰＢＳ中に再懸濁した。
この培地は以下ＨＡＴ培地として示す。
Ｅ−ＰＢＭＣの細胞誘導形質転換はこれらの細胞と形質
転換細胞系との共培養により行なった。形質転換細胞系
はＧ　Ｍ　１５００１Ｊンパ芽球様細胞系のメタンスル
ホン酸エチル（ＥＭＳ）変異誘発により誘導し、次いで
細胞をヒボキサンチン−グアニンホスホリボシルトラン
スフェラーゼ（ＩＩＧＰＲＴ）欠損、従ってＨＡＴ感受
性にするため３ＯＮ／”Ｉｆの６−チオグアニンの存在
下に選したエプスタイン・バー核抗原（ＩＥＢＮＡ）　
　陽性ヒトリンパ芽球様細胞系であった。この細胞系は
ＬＡ２細胞系により示され、１９８２年３月２９日にア
メリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（Ａ、Ｔ
、　Ｃ，Ｃ，）　　ｌ：ＡＴＣＣＮαＣＲＬ　８１１９
のもとで寄託された。対数増殖期中のＩＡ２細胞はＨＡ
Ｔ培地中に懸濁し、次いでＥ−ＰＢＭＣと混合する。細
胞混合物を８個の丸底９６ウエルマイクロタイタープレ
ート〔コスタ−（Ｃｏｓｔａｒ）　　３７９９　：］中
へ２００Ａ毎ウエ／Ｌ／の容積で７２．０００細胞／ウ
エルの濃度でプレートし、３７℃で６％Ｃ０２を含む増
湿雰囲気中でインキコベートした。培養を第５右よび第
８日にフィードし上澄みの半分を新ＨＡＴ培地に代える
ことによりボストブレーティングした。ウェルは１日置
きに倒立顕微鏡上で細胞増殖の徴候について観察した。
培養後１４日にウェルの１００％が増殖細胞を含むこと
、および第２１日にウェルの大部分が除去および抗ＬＡ
Ｖ抗体に対する上澄みの試験に十分な密度の細胞を含ん
だことが観察された。
上澄みは標準ＥＬＩＳＡ法を用いて抗ＬＡＶ抗体の存在
に対してスクリーンした。
簡単に述べると、イムロン（Ｉｍｍｕｌｏｎ）　Ｉｆプ
レート〔ダイナチク（Ｄｙｎａｔｅｃｈ）　　製〕を炭
酸塩／炭酸水素塩緩衝、ｐＨ９，６中の破壊全ウィルス
でコートし、−夜４℃でインキコベートした。リン酸塩
緩衝食塩水０．０５％ツイーン２０（ＰＢＳ−ツイーン
）で洗浄し、次いでプロット（Ｂｌｏｔｔｏ　）　　（
Ｐ　ＢＳ、ｐＨ７，２，５％（Ｗ／Ｖ）脱脂粉乳、０．
０１％（Ｖ／Ｖ）チメロサルを含む〕で室温で６０分間
ブロックした。次いでプレートを３回ＰＢＳ−ツイーン
で洗浄し、乾燥させた。増殖クローンを有するウェルか
らの上澄みを、コートしブロックしたプレートに加え、
３７℃で４５分間インキニペートシ、次に再びＰＢＳ−
ツイーンで３回洗浄した。ペルオキシダーゼ−ヤギ抗ヒ
トＩｇＧ　　［Ｐ　Ｂ　Ｓ−ツイーン中に１　：２，０
００希釈、アンティボディーズ社（Ａｎｔ’１ｂｏ−ｄ
ｉｅｓ　Ｉｎｃ、）製〕を加えた（１０／’／ウエル）
。インキュベーションは３７℃で４５分間であり、上記
のように洗浄した。酵素基質、０−フェニレンジアミン
および過酸化水素、を加え、プレートを暗所中室温で３
０分間インキニベートした。反応を３　Ｎ−）１２ＳＯ
，で停止させ、自動マイクロプレートリーダーを用いて
定量した。
培養上澄みを分析すると抗ＬＡＶ抗体を含む１つのウェ
ル（ＬＴＩ　／４１−Ｈｌ　）が確認された。この上澄
みはさらにイムノプロット、免疫沈降および融合タンパ
ク質とのＢＬＩＳ＾により確認した。このクローンから
の抗体はプロットによりｇｐ４１と、巳ＬＩＳＡ　によ
りＥＮＶ−３、ペプチド３９およびペプチド７９と反応
性であると認められた。細胞系ＬＴＩ　／４ｌ−Ｈｌは
ＡＴＣＣに受託番号ＣＲＬ−９１２８として寄託された
。
これらの抗原は、一様に抗体陽性提供者からの血清によ
り認められ、疾患の過程中に存在するＬＡＶ　／）ＩＴ
ＬＶ　−Ｉの領域からであるので重要である〔サルンガ
ダラン（Ｓａｒｎｇａｄｈａｒａｎ）　　ほか、サイエ
ンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）　、　　２２４　：　５０６　
　（１９８４）　　；サファイ（Ｓａｆａｉ）ほか、ラ
ンセット（Ｌａｎｃｅｔ）１９８４−Ｉ、１９３８　（
１９８４））。
タンパク質ＥＮＶ−３は塩基対７１７８〜７６９８〔ウ
エインーホブソン（Ｗａ　１ｎ−Ｈｏｂｓｏｎ）ほか、
セル（Ｃｅｌｌ）、４４：９　（１９８５）による番号
材〕のＬＡＶ（７）領域であルｐＢＮＶ−３（ＡＴＣＣ
受託＃５３０７２）からの細菌発現融合タンパク質であ
る（第１図および第２図）。
ペプチド３９は右よび塩基対７５１６〜７５９３の領域
をエンコードすると規定され、次のアミノ酸配列を有す
る合成ポリペプチドであり、次の配列内に含まれるオリ
ゴペプチドは配列： ＡＲＧ−ＩＬ［Ｅ−ＬＢＵ−ＡＬＡ−ＶＡＬ−ＧＬＩＩ
−ＡＲＧ−ＴＹＲ−ＬＢＵ−ＬＹＳ−ＡＳＰ−ＧＬＮ−
ＧＬＮ−ＬＢＵ−Ｌ８Ｕ−ＧＬＹ−４ＬＢ−ＴＲＰ−Ｇ
ＬＹ−ＣＹＳ−３ＥＲ−ＧＬＹ−ＬＹＳ−ＬＢＵ−ＩＬ
［ニーＣＹＳ−Ｘ（ただし、ＸはＯＨまたはＮＨ，であ
る）内に線状エピトープを含む。
表ＩはＬＡＶ　／ＨＴＬＶ　−ＩＩＩに対する抗体の検
出のためのＩＥＬ［ＳＡ　におけるペプチド３９と全ウ
ィルス溶解物との比較を示す。
表　　１ １８９２　　　健康異性愛者　　　　　　ｎ、ｄ、　　
　　　　ｎ、ｄ、’　　　　０．０４５６３９　　　健
康異性愛者　　　　　　０．１２３　　　　血清反応陽
性　　０．０３８でない １、　英国出願第８３　／２４８００号（１９８３年９
月１５日提出）に記載のように調製。
２、　放射性標識ＬＡＶ抗原はＲＩＰＡ緩衝液〔ギリー
ド（Ｇｉｌｅａｄ）　　ほか、ネーチ＋　（Ｎａｔｕｒ
ｅ）　（１９７６）２６４：２６３〕中で破壊し、次い
でヒト血清と反応させた。生じた免疫複合体はスタヒロ
コッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ
　ａｕｒｅｕｓ）吸着剤〔ケスラー（Ｋｅｓｓｌｅｒ）
　、ジャーナル−オブ・イムノロジー（Ｊ、Ｉｍｍｕｎ
ｏｌｏｇｙ）　（１９７５）。
１１５：１６１７）に対する結合により分離し、次いで
多数回洗浄した。免疫沈降抗原はＳＤＳポリアクリルア
ミドゲル電気泳動〔レームリ（Ｌａｅｍｍｌｉ）、ネー
チャ（Ｎａｔｕｒｅ）　　（１９７０）。
２２７：６８０）、次いでフルオログラフィーにより分
析した。ｐ２５またはｇｐ４３バンドの存在は血清反応
陽性としての試料の確認に必要かつ十分であると思われ
た。
３、ＬＡＳ＝リンパ節障害症候群 ４、　　Ｎ、　Ｄ、＝測定せず。
ペプチド７９は約塩基対７５４３〜７５９３の領域をエ
ンコードすると規定され、次のアミノ酸配列： Ｙ−ＬＹＳ−ＡＳＰ−ＧＬＮ−ＧＬＮ−ＬＥＵ−ＬＥ［
Ｊ−ＧＬＹ−ＩＬＥ−ＴＲＰ−ＧＬＹ−ＣＹＳ−３ＥＲ
−ＧＬＹ−ＬＹＳ−Ｌ［！ｔｌ−１．ＬＥ−ＣＹＳ−Ｘ
。
（ただし、Ｘ（壬ＯＨまたはＮＨ２であり、ＹはＴＹＲ
またはＣＹＳである） 内に線状エピトープをコードするオリゴペプチドを含む
。
表２はペプチド７９を用いたＬＡＶ　／ＨＴＬＶ　−Ｉ
ＩＩに対する抗体の検出に対するＥＬＩＳＡの結果を示
す。
表　　　２ ＬＡＶに対する抗体の検出のためのＥＬＩＳＡ検定にお
けるペプチド７９ カットオフ　　　　　　　　　　　０．３０ウエスター
ンブロツテイング ウェスターンイムノブロッティング１こよる確言忍は精
製ＬＡＶウィルスおよび組換え体融合タンパク質を抗原
として用いてクローン上澄みで行なった。これらの抗原
は初めに勾配ゲル電気泳動く７．０〜１５．０％）によ
り分離し、２５ｍＭＵン酸ナトリウム（ｐｔｌ　７．０
　）中、２５Ｖで４時間電気泳動によりニトロセルロー
ス膜（ＮＣＭ）に移した。移した後ＮＣＭをＰＢＳ−ツ
イーン中で室温で１時間ブロックした。ＮＣＭをＰＢＳ
−ツイーン中に希釈したヤギ抗ヒトＩｇＧ−西洋ワサビ
ペルオキシダーゼとともに室温で１時間インキュベート
した。次にこれをＰＢＳ−ツイーン中で洗浄し、次に西
洋ワサビペルオキシダーゼ発色溶液〔バイオ・ラド・ラ
ボラトリーズ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉ
ｅｓ、　　Ｒｉｃｈｍｏｎｄ。
ＣＡ）製〕中に２０分間浸漬した。反応は脱イオン水中
へ浸漬することにより停止させた。単クローン性抗体反
応性は陽性対照として精製破壊ウィルスとの標準陽性血
清反応試験と比較した。
免疫沈降 放射免疫沈降に対するウィルス抽出物は組織培養中の連
続継代による溶菌増殖に適応させたＬＡＶ／ＨＴＬＶ〜
■のＬＡＶ　１分離株で感染したＣＥＭ細胞（ＡＴＣＣ
＃ＣＣＬ　１１９）から調製した。初期細胞変性効果が
明らかになったとき、細胞を”（Ｓ）メチオニン（５０
μＣｉ／１ｌｆ）または３〔Ｈ〕グルコサミン（２５μ
Ｃｉ／ｌ’ｆ）を含む標識化培地に移し、次いで細胞の
大部分が溶解するまで２４時間インキュベートしてウィ
ルスを培養上澄み中へ脱離させた。細胞を含まない培養
上澄みからウィルスをペレットになしく１００．０００
　　Ｘ　ｇで１時間）、洗剤抽出物ヲＰ−ＲＩＰＡａ！
衡液（１，０％　ｌ−！ｌ　トンメ−１００，１，０％
デオキシコール酸、０．１％ＳＤＳ、および１．０％ア
プロチニンを含むリン酸塩緩衝食塩水）中に調製した。
同様に抽出物を非感染細胞からＰＢＳ中で１回洗浄した
後調製した。免疫沈降検定は培養上澄みとともに氷上で
１時間インキコベートシた１０〇−抽出物容積で行なっ
た。１．０％卵白アルブミンを含むＰ−ＲＩＰＡ中に再
懸濁したイムツブレシピチン（１００＃’　；　ＢＲＬ
）を各管に加工、さらに３０分間インキニベートした。
結合した複合体を洗浄し、ＳＯＳ　−ＰＡＧＥ　（７，
０〜１５．０％勾配ゲル）により分離した。電気泳動後
、細胞を固定化し、ｘ　７ハンｙ、　（ｅｎｈａｎｃｅ
）　（Ｎ　Ｅ　Ｎ　）中に浸漬し、乾燥し、コダック（
Ｋｏｄａｋ）　Ｅ　Ｘ　−５フイルムに暴露した。
陽性および陰性対照として全ＬＡＶ　／ＨＴＬＶ　−Ｉ
ＩＩウィルスタンパク質を免疫沈降した参照陽性血清を
模ａ感染した細胞の培養上澄みからの”（Ｓ〕メチオニ
ン標識抽出物および”（Ｓ）メチオニン標識ウィルス抽
出物と反応させた。
酵素結合抗体免疫吸着検定 抗体ＬＴＩ　／４ｌ−ＨｌをさらにεＬＩＳＡ　により
確認した。方法は上に記載したとおりであるが、しかし
細菌発現融合タンパク質および合成ペプチドを破壊全ウ
ィルスの代りに抗原として用いる。
間接免疫螢光検定 間接免疫螢光検定はアセトン固定化および生細胞で行な
った。ＬＡＶ感染ＣＥ　Ｍ細胞から調製したアセトン固
定化スライドは培養上澄みとともに３７℃で１時間イン
キュベートしたが、生細胞は細胞をプレートし、固定化
する前に培養上澄みとともに４℃で１時間インキュベー
トした。両方法において、反応性細胞はフルオレセイン
インチオシアネート標識抗ヒ目ｇＧ　　（アンティボデ
ィーズ社（Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ　Ｉｎｃ、）製〕で検
出した。
中和検定は単クローン性抗体で、１００＃’の抗体上澄
みまたは対照血清中のウィルスの系列希釈により行なっ
た。ウィルスの１＝５希釈の組を９６ウエルマイクロタ
イタープレートを用いて調製した。ＬＴＩ　／４ｌ−Ｈ
１抗体で試験したものは既知中和活性を有する熱性活性
化ＬＡＶ血清反応陽性血清（培地中１：１０希釈）、熱
不活性化正常ヒト血清（培地中１＝１０希釈）、無関係
ヒト単クローン性抗体産生細胞系からの上澄み、および
対照培地であった。これらの調製物は使用前に０．４５
μフイルターで濾過した。約２．５Ｘ１０’組織培養感
染量（ＴＣＩＤ　）のウィルス濃度を系列希釈の始めに
用いた。抗体およびウィルスは３７℃で１時間インキュ
ベートした。第２の９６ウエルプレートは１５０バ中の
Ｉ　Ｘ　１０’細胞／ウエルにプレートしたＣＢＭ−Ｆ
細胞で調製し、次いで抗体−ウィルス混合物５０バ／ウ
エル（第１カラム中に約Ｉ　Ｘ　１０’ＴＣＩＤ）を接
種した。第２プレートは３７℃で２４〜４８時間インキ
ュベートシ、その時間で上澄みのすべてを除去した。新
培地（２００ｐｉ）を加え、プレートをさらに７〜１４
日間、２４〜４８時間毎に再フィードしてインキュベー
トした。
第７．１０および１４日に細胞を回収し、免疫螢光法に
よりウィルス発現について検定する。
ウェルＬＴＩ　／４ｌ−Ｈ１からの特異抗体産生細胞の
クローニングは細胞を、上記方法により検定してすべて
のクローン性上澄みがイムノプロットでき、ｇｐ４１を
免疫沈降し、ＥＬｒＳＡ　ｌ、：よりｐＥＮＶ−３、ペ
プチド３９およびペプチド７９と陽性反応を与える抗体
を生ずるまで数回の限界希釈クローニングにかけること
により行なった。クローニングは継代培養に記載したフ
ィーダー細胞を用いた。これらの方法により連続（イモ
ータル）であり、上記特性を有するヒト単クローン性抗
体を分泌するクローン化形質転換ヒト細胞系が達成され
た。この例において、細胞系およびそれが生ずる抗体は
同一名称を備えている。
中和は他の方法により行なうことができる。培養上澄み
をアミコン・セントリコン（＾ｍ１ｃｏｎ　−Ｃｅｎｔ
ｒｉｃｏｎ）マイクロコンセントレータ−で５倍濃縮後
または非ａｗ１で用いた。希釈系列は初期１：５希釈、
次に培地（ＲＰＭＩ　１６４０．１５％ウシ胎仔血清、
４０％熱不活性化ヒト血清）中に希釈した濃縮または非
濃縮培養上澄み２５バを用いる二倍系列希釈で構成した
。培地中に１：４００または１＋６００に希釈したウィ
ルス（ＩＸＩＯ’　〜ｌＸ１０６組織培養感染単位／璽
）を、構成した希釈系列に全量５０／’まで加えた。試
料を均温室中で３７℃で４５分間インキュベートした。
感染性は処理ウィルスのＭＴ−２細胞、ＬＡＶ　／ＨＴ
ＬＶ　−ＩＩＩ感染に高感受性のＨＴＬＶ−Ｊをもつ細
胞系、を感染する能力により試験した。ＭＴ−２細胞は
コスタ−（Ｃｏｓｔａｒ）　平底９６ウエルプレート中
に培地１００／’中のＩ×１ＯＳ細胞／ウェルでプレー
トした。。プレートは処理ウィルス２０バを各ウェルに
加える前に３７℃で４５分間インキュベートした。５〜
７日後、ＭＴ−２細１１包をＬＡＶ　／ＨＴＬＶ−■感
染の標識であるシンシチウム形成について試験した。
【図面の簡単な説明】
第１図はｐＥＮＶ−３中のＬＡＶ挿入物の起源の例示で
あり、第２図はＥＮＶ−３のアミノ酸配列の例示である
。

Claims (27)

    【特許請求の範囲】
  1. （１）ＬＡＶ／ＨＴＬＶ−IIIの抗原決定基と反応でき
    るヒト単クローン性抗体であって、細胞系ＬＴ１／４１
    −Ｈ１により生成される抗体の前記抗原決定基に対する
    結合をブロックするヒト単クローン性抗体。
  2. （２）エンベロープが糖タンパク質ｇｐ４１上のエピト
    ープを結合するヒト単クローン性抗体。
  3. （３）エピトープがｐＥＮＶ−３によりエンコードされ
    るポリペプチドにより規定される、特許請求の範囲第（
    ２）項記載のヒト単クローン性抗体。
  4. （４）エピトープがペプチド３９により規定される、特
    許請求の範囲第（２）項記載のヒト単クローン性抗体。
  5. （５）エピトープがペプチド７９により規定される、特
    許請求の範囲第（２）項記載のヒト単クローン性抗体。
  6. （６）ＬＡＶ／ＨＴＬＶ−IIIの抗原決定基と反応でき
    るヒト単クローン性抗体を生成するイモータル化細胞系
    であって、細胞系がＬＡＶ／ＨＴＬＶ−IIIの抗原決定
    基に対する抗体を生成できるヒトＢリンパ球と、ヒト骨
    髄腫細胞、マウス骨髄腫細胞、およびヒトリンパ芽球様
    細胞からなる群から選ばれる細胞とのハイブリッドであ
    るイモータル化細胞系。
  7. （７）ＬＡＶ／ＨＴＬＶ−IIIの抗原決定基と反応でき
    るヒト単クローン性抗体を生成するイモータル化細胞系
    であって、細胞系がＬＡＶ／ＨＴＬＶ−IIIの抗原決定
    基に対する抗体を生成でき、エプスタイン・バーウイル
    ス形質転換細胞で形質転換されたヒトＢリンパ球細胞を
    含むイモータル化細胞系。
  8. （８）細胞系ＬＴ１／４１−Ｈ１。
  9. （９）特許請求の範囲第（８）項記載の細胞系により生
    成された単クローン性抗体。
  10. （１０）検出できるシグナルを与えることができる標識
    を付けられた、特許請求の範囲第（１）項記載のヒト単
    クローン性抗体。
  11. （１１）生物学的試料中のＬＡＶ／ＨＴＬＶ−IIIの存
    在を検出する方法であって、 ＬＡＶ／ＨＴＬＶ−IIIの抗原決定基と反応できるヒト
    単クローン性抗体を生物学的試料とともにインキュベー
    トし、 前記単クローン性抗体と前記生物学的試料との間に形成
    された免疫複合体の存在を検出し、それからＬＡＶ／Ｈ
    ＴＬＶ−IIIの存在を決定する、ことを含む方法。
  12. （１２）単クローン性抗体が細胞系ＬＴ１／４１−Ｈ１
    により生成される抗体の前記決定基に対する結合をブロ
    ックする、特許請求の範囲第（１１）項記載の方法。
  13. （１３）単クローン性抗体がエンベロープ糖タンパク質
    ｇｐ４１上のエピトープを結合する、特許請求の範囲第
    （１１）項記載の方法。
  14. （１４）単クローン性抗体が細胞系ＬＴ１／４１−Ｈ１
    により生成される、特許請求の範囲第（１１）項記載の
    方法。
  15. （１５）単クローン性抗体が標識を付けられる、特許請
    求の範囲第（１１）項記載の方法。
  16. （１６）標識が放射性核種、螢光体、酵素、酵素基質、
    酵素補助因子、酵素抑制因子およびリガンドからなる群
    から選ばれる、特許請求の範囲第（１５）項記載の方法
    。
  17. （１７）検出の段階が酵素反応、螢光、放射能、細胞溶
    解またはルミネセンス発光による、特許請求の範囲第（
    １１）項記載の方法。
  18. （１８）生物学的試料が体分泌物、体液および組織標本
    からなる群から選ばれる、特許請求の範囲第（１１）項
    記載の方法。
  19. （１９）ＬＡＶ／ＨＴＬＶ−IIIの抗原決定基と反応で
    きるヒト単クローン性抗体の治療有効量並びに生理学的
    に許容される担体および（または）希釈剤を含む製剤組
    成物。
  20. （２０）単クローン性抗体が細胞系ＬＴ１／４１−Ｈ１
    により生成される抗体の前記抗原決定基に対する結合を
    ブロックする、特許請求の範囲第（１９）項記載の製剤
    組成物。
  21. （２１）単クローン性抗体がエンベロープ糖タンパク質
    ｇｐ４１上のエピトープを結合する、特許請求の範囲第
    （１９）項記載の製剤組成物。
  22. （２２）単クローン性抗体が細胞系ＬＴ１／４１−Ｈ１
    により生成される、特許請求の範囲第（１９）項記載の
    製剤組成物。
  23. （２３）ＬＡＶ／ＨＴＬＶ−IIIの抗原決定基を含み、
    その分画が特異抗原決定基を含む混合物から問題のＬＡ
    Ｖ／ＨＴＬＶ−IIIの特異抗原決定基を分離する方法で
    あって、 基質上の特異抗原決定基と反応できるヒト単クローン性
    抗体を固定化し、 ＬＡＶ／ＨＴＬＶ−III抗原決定基を含む混合物を、免
    疫複合体が抗体と特異抗原決定基との間に形成されるよ
    うな適当な条件下に、固定化抗体と接触させ、 免疫複合体を混合物から分離する、 ことを含む方法。
  24. （２４）単クローン性抗体が細胞系ＬＴ１／４１−Ｈ１
    により生成される抗体の前記抗原決定基に対する結合を
    ブロックする、特許請求の範囲第（２３）項記載の方法
    。
  25. （２５）単クローン性抗体がエンベロープ糖タンパク質
    ｇｐ４１上のエピトープを結合する、特許請求の範囲第
    （２３）項記載の方法。
  26. （２６）単クローン性抗体が細胞系ＬＴ１／４１−Ｈ１
    により生成される、特許請求の範囲第四項記載の方法。
  27. （２７）温血動物におけるＬＡＶ／ＨＴＬＶ−IIIの感
    染性を有意に低下させる方法であって、 ＬＡＶ／ＨＴＬＶ−IIIの抗原決定基と反応できるヒト
    単クローン性抗体並びに生理学的に許容される担体およ
    び（または）希釈剤を含む組成物の治療有効量を動物に
    投与することを含む方法。
JP62155247A 1986-06-23 1987-06-22 リンパ節障害関連ウイルスに対するヒト単クローン性抗体 Expired - Lifetime JP2626680B2 (ja)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US87757986A 1986-06-23 1986-06-23
US877579 1986-06-23

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JPS63107998A true JPS63107998A (ja) 1988-05-12
JP2626680B2 JP2626680B2 (ja) 1997-07-02

Family

ID=25370267

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP62155247A Expired - Lifetime JP2626680B2 (ja) 1986-06-23 1987-06-22 リンパ節障害関連ウイルスに対するヒト単クローン性抗体

Country Status (12)

Country Link
EP (1) EP0251612B1 (ja)
JP (1) JP2626680B2 (ja)
KR (1) KR910001808B1 (ja)
AT (1) ATE103002T1 (ja)
AU (1) AU614714B2 (ja)
CA (1) CA1339830C (ja)
DE (1) DE3789333T2 (ja)
DK (1) DK169582B1 (ja)
ES (1) ES2050114T3 (ja)
IE (1) IE63109B1 (ja)
IL (1) IL82926A (ja)
PT (1) PT85149B (ja)

Families Citing this family (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4879212A (en) * 1986-04-02 1989-11-07 United Biomedical Inc. Peptide composition and method for the detection of antibodies to HTLV-III
US5166050A (en) * 1986-08-20 1992-11-24 Bristol-Myers Squibb Company Monoclonal antibodies and peptides useful in treating and diagnosing HIV infections
NZ221440A (en) * 1986-08-20 1991-11-26 Genetic Systems Corp Composition containing monoclonal antibodies/peptides useful in treating and diagnosing hiv infections
FI872409A0 (fi) * 1987-05-29 1987-05-29 Labsystems Oy Foerfarande foer detektering av hiv-1 motkroppar.
WO1989004370A1 (en) * 1987-11-13 1989-05-18 Cl-Pharma Aktiengesellschaft Human monoclonal anti-hiv-i-antibodies
IL88963A (en) * 1988-01-27 1996-05-14 Iaf Biochem Int Circular synthetic peptides and their mixtures for the detection of VIH antibodies and for the formation of vaccines
US5298419A (en) * 1988-03-31 1994-03-29 The Arizona Board Of Regents On Behalf Of The University Of Arizona Human hybridomas and monoclonal antibodies which bind both gp41 and gp120 envelope proteins of human immunodeficiency virus
CA1339775C (en) * 1988-06-10 1998-03-24 Shuzo Matsushita Antibody 0.5b to hiv-i gp 120 modified with toxic substance
JPH0292298A (ja) * 1988-09-30 1990-04-03 Olympus Optical Co Ltd Ｈｉｖ構成蛋白に対するモノクローナル抗体
US5731189A (en) * 1989-02-28 1998-03-24 New York University Human monoclonal antibodies to human immunodeficiency virus
EP0418347A4 (en) * 1989-02-28 1994-12-14 Univ New York Human monoclonal antibodies to human immunodeficiency virus
WO1990010457A1 (en) * 1989-03-14 1990-09-20 New York University Method of treating hiv infections using immunotoxins
US6248574B1 (en) * 1989-12-13 2001-06-19 Avigdor Shaffermann Polypeptides selectively reactive with antibodies against human immunodeficiency virus and vaccines comprising the polypeptides
EP0438332B1 (fr) * 1990-01-16 1998-04-08 Orgenics Ltd. Peptides dérivant de la glycoprotéine d'enveloppe de virus HIV, leurs applications à la détection d'une infection due à ces virus et à la vaccination contre le SIDA
FR2657017B1 (fr) * 1990-01-16 1995-08-18 Clonatec Sa Peptides derivant de la glycoproteine d'enveloppe du virus-hiv-1, leurs applications a la detection d'une infection due a ce virus et a la vaccination contre le sida.
DE19809785C2 (de) * 1998-03-08 2000-02-10 Wolfgang Bergter Radioimmunpharmakon zur Behandlung der HIV-1-Infektion
US6680209B1 (en) * 1999-12-06 2004-01-20 Biosite, Incorporated Human antibodies as diagnostic reagents
US8367038B2 (en) 2004-05-23 2013-02-05 HMI Medical Innovations, LLC Therameutin modulators
US8431110B2 (en) 2005-05-23 2013-04-30 Hmi Medical Innovations, Llc. Compounds and method of identifying, synthesizing, optimizing and profiling protein modulators
WO2017093985A1 (en) 2015-12-05 2017-06-08 Centre Hospitalier Universitaire Vaudois Hiv binding agents

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4520113A (en) * 1984-04-23 1985-05-28 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Serological detection of antibodies to HTLV-III in sera of patients with AIDS and pre-AIDS conditions

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9328391B1 (en) * 1984-08-22 2016-05-03 The United States Of America As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Cloning and expression of HIV-1 DNA
IE64785B1 (en) * 1985-04-08 1995-09-06 Genetic Systems Corp Expression of immunologically reactive viral proteins
FR2580177B2 (fr) * 1985-04-15 1989-06-02 Pasteur Institut Antigenes apparentes a la glycoproteine d'enveloppe du virus du sida, notamment precurseurs de cette glycoproteine, procedes d'obtention de ces antigenes et moyens mis en oeuvre dans ces procedes, applications de ces antigenes a la preparation de compositions immunogenes ou pour le diagnostic du sida ou des affections qui lui sont apparentees
DE3650175T3 (de) * 1985-04-29 2007-09-06 Bio-Rad Laboratories, Inc., Hercules Synthetische antigene zum nachweis von aids.
JP2702911B2 (ja) * 1985-09-11 1998-01-26 ユナイテツド・バイオメデイカル・インコ−ポレ−テツド 合成ペプチド、並びにそれを用いたエイズおよびプリ・エイズの検出方法
US4772547A (en) * 1986-02-03 1988-09-20 Hoffmann-La Roche Inc. HTLV-III envelope peptides
US4904581A (en) * 1986-05-06 1990-02-27 Epitope, Inc. Method of detecting AIDS virus infection
AU8127187A (en) * 1986-12-03 1988-06-09 Ici Australia Operations Proprietary Limited Mine roof supporting element

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4520113A (en) * 1984-04-23 1985-05-28 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Serological detection of antibodies to HTLV-III in sera of patients with AIDS and pre-AIDS conditions

Also Published As

Publication number Publication date
IE63109B1 (en) 1995-03-22
PT85149A (en) 1987-07-01
DE3789333D1 (de) 1994-04-21
DE3789333T2 (de) 1994-07-07
IL82926A (en) 1991-07-18
AU7451287A (en) 1987-12-24
CA1339830C (en) 1998-04-21
KR910001808B1 (ko) 1991-03-26
KR880000585A (ko) 1988-03-28
ES2050114T3 (es) 1994-05-16
EP0251612B1 (en) 1994-03-16
IE871587L (en) 1987-12-23
EP0251612A3 (en) 1990-05-23
PT85149B (pt) 1990-07-31
ATE103002T1 (de) 1994-04-15
DK169582B1 (da) 1994-12-12
JP2626680B2 (ja) 1997-07-02
IL82926A0 (en) 1987-12-20
AU614714B2 (en) 1991-09-12
EP0251612A2 (en) 1988-01-07
DK304087A (da) 1987-12-24
DK304087D0 (da) 1987-06-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US5087557A (en) Human monoclonal antibody to lymphadenopathy-associated virus
JP2626680B2 (ja) リンパ節障害関連ウイルスに対するヒト単クローン性抗体
Gorny et al. Generation of human monoclonal antibodies to human immunodeficiency virus.
JP2729212B2 (ja) Ｈｉｖの精製単離されたレトロウィルス
JPH05506573A (ja) ＨＩＶ―１糖タンパクに反応性を有するＩｇＧ―１ヒトモノクローナル抗体およびその使用方法
FI86377B (fi) Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt aktiva humana monoklonala antikroppar eller deras bindande fragment.
US4722888A (en) Cell line producing human monoclonal antibody which binds to HTLV-I producing cells
US5854400A (en) Monoclonal antibodies which neutralize HIV-1 infection
US5695927A (en) Monoclonal antibodies specific for HIV and the hybridomas for production thereof
JPH02107196A (ja) 抗ＨＩＶ―１ｐ２４マウスモノクローナル抗体、その産生細胞株およびそれを用いたイムノアッセイ法
US5104790A (en) Monoclonal antibodies to specific antigenic regions of the human immunodeficiency virus and methods for use
Cotropia et al. A human monoclonal antibody to HIV-1 gp41 with neutralizing activity against diverse laboratory isolates
Foung et al. Human monoclonal antibodies to human cytomegalovirus
Alsmadi et al. Antibody-dependent cellular cytotoxicity directed against cells expressing human immunodeficiency virus type 1 envelope of primary or laboratory-adapted strains by human and chimpanzee monoclonal antibodies of different epitope specificities
CA2117378C (en) Htlv-i/htlv-ii assay and method
CA1339363C (en) Monoclonal antibodies to specific antigenic regions of the human immunodeficiency virus and methods for use
US5691135A (en) Immunoglobulin superantigen binding to gp 120 from HIV
Hansen et al. A human‐human hybridoma producing cytotoxic antibody to HLA‐B15, cross‐reacting with B17, B5, B35 and B18
AU651794B2 (en) Human monoclonal antibodies to human immunodeficiency virus
Nara Deceptive imprinting: insights into mechanisms of immune evasion and vaccine development.
Prigent et al. Production and characterization of human monoclonal antibodies against core protein p25 and transmembrane glycoprotein gp41 of HIV-1
AU625720B2 (en) Monoclonal antibodies to specific antigenic regions of the human immunodeficiency virus and methods for use
JPH05506843A (ja) 抗―炭水化物抗体及び炭水化物抗原に作用する後天性免疫不全症候群（ａｉｄｓ）及びａｉｄｓ関連複合体（ａｒｃ）の薬剤及び治療法
JP2003146999A (ja) Ｈｉｖ−２型ヒトレトロウイルスのトランスメンブランエンベロープ糖タンパク質の抗原、及び、該抗原に免疫類似性を有する抗原
LI et al. Rapid generation of antibodies against the HTLV-II external envelope protein by growth of mouse plasmacytomas in SCID mice