JPS63102673A - 氷核活性を有する微生物の回収方法 - Google Patents
氷核活性を有する微生物の回収方法Info
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- JPS63102673A JPS63102673A JP62236412A JP23641287A JPS63102673A JP S63102673 A JPS63102673 A JP S63102673A JP 62236412 A JP62236412 A JP 62236412A JP 23641287 A JP23641287 A JP 23641287A JP S63102673 A JPS63102673 A JP S63102673A
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Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/04—Preserving or maintaining viable microorganisms
-
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- C12N1/02—Separating microorganisms from their culture media
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- F26B5/10—Drying solid materials or objects by processes not involving the application of heat by centrifugal treatment the process involving freezing
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は氷核活性（ｉｃｅ ｎｕｃｌｅａｔｉｎｇ ａ
ｃｔｉｖｉｔｙ）を有する微生物を当該微生物を含む培
地から乾燥形態で回収する方法に関する。
ｃｔｉｖｉｔｙ）を有する微生物を当該微生物を含む培
地から乾燥形態で回収する方法に関する。
米国特許第４２００２２８号には雪を製造する方法が開
示されており、この方法によれば微生物が空気中に噴霧
される小滴中に含まれている。使用されている微生物は
氷核生成を促進することが知られている種類のものであ
る。その結果、通常の温度より可成り高い温度で雪を製
造することができる。
示されており、この方法によれば微生物が空気中に噴霧
される小滴中に含まれている。使用されている微生物は
氷核生成を促進することが知られている種類のものであ
る。その結果、通常の温度より可成り高い温度で雪を製
造することができる。
このプロセスに有用な代表的な微生物はシュードモナス
、更に詳しくはシュードモナス シリンゲ（Ｐｓｅｕｄ
ｏｍｏｎａｄｓ ７）である。
、更に詳しくはシュードモナス シリンゲ（Ｐｓｅｕｄ
ｏｍｏｎａｄｓ ７）である。
このプロセスをいかなる規模でも使用しようとすると、
多量の微生物を必要とすることは明白である。更に、微
生物は、その貯蔵、取扱及び運１殻輸送を容易にするた
めに、乾燥形層で得るのが好ましい。
多量の微生物を必要とすることは明白である。更に、微
生物は、その貯蔵、取扱及び運１殻輸送を容易にするた
めに、乾燥形層で得るのが好ましい。
微生物の回収に関しては、前記米国特許はホルマリンで
処理した濃縮培養物を凍結乾燥した旨開示されているだ
けでその詳細は不明である。
処理した濃縮培養物を凍結乾燥した旨開示されているだ
けでその詳細は不明である。
前記微生物の大量生産に公知の凍結乾燥方法を用いた場
合には、所望の氷核活性のものは得られないという問題
がある。醗酵プロセスによって醗酵悲濁液中に高活性の
ものが得られたとしても、当該活性の相当部分が多量の
物資を乾殻する間に消失する。その結果として、かかる
プロセスは微生物を商業的な量で妥当なコストで製造す
ることのできるものではない。
合には、所望の氷核活性のものは得られないという問題
がある。醗酵プロセスによって醗酵悲濁液中に高活性の
ものが得られたとしても、当該活性の相当部分が多量の
物資を乾殻する間に消失する。その結果として、かかる
プロセスは微生物を商業的な量で妥当なコストで製造す
ることのできるものではない。
本発明によれば、氷核活性（ｉｃｅ ｎｕｃｌｅａｔｉ
ｎｇａｃｔｉｖｉｔｙ）を有する微生物を醗酵培地から
回収する方法が提供される。即ち、この方法は、醗酵培
地から氷核活性を有する微生物を回収するにあたり、 ａ）前記培地の温度を約１５℃以下とする工程、ｂ）温
度を約１５℃以下に保持しつつ、前記微生物の濃縮物、
好ましくは水分含量約１５〜２７重厘％の濃縮物を形成
せしめる工程、 Ｃ）前記濃縮物を微細流状の極低温液体中に通して前記
濃縮物の凍結ペレット、好ましくは径約２〜ｌＱｍｍの
ペレットを生成せしめる工程、そして ｄ）得られたペレットを２５℃より低い温度で凍結乾燥
する工程、 の各工程を含んで構成される。
ｎｇａｃｔｉｖｉｔｙ）を有する微生物を醗酵培地から
回収する方法が提供される。即ち、この方法は、醗酵培
地から氷核活性を有する微生物を回収するにあたり、 ａ）前記培地の温度を約１５℃以下とする工程、ｂ）温
度を約１５℃以下に保持しつつ、前記微生物の濃縮物、
好ましくは水分含量約１５〜２７重厘％の濃縮物を形成
せしめる工程、 Ｃ）前記濃縮物を微細流状の極低温液体中に通して前記
濃縮物の凍結ペレット、好ましくは径約２〜ｌＱｍｍの
ペレットを生成せしめる工程、そして ｄ）得られたペレットを２５℃より低い温度で凍結乾燥
する工程、 の各工程を含んで構成される。
本発明プロセスは、氷核活性（ＩＮＡ）を有する微生物
を含む、任意の懸濁液の乾燥後も氷核活性を保持させる
ことができる。前述の如く、かかる微生物の醗酵プロセ
ス自体は当業界において知られている。
を含む、任意の懸濁液の乾燥後も氷核活性を保持させる
ことができる。前述の如く、かかる微生物の醗酵プロセ
ス自体は当業界において知られている。
本発明によれば、氷核活性を宥する、任意の微生物を回
収することができる。適当な微生物とし３ナス（Ｐｓｅ
ｕｄｏｒｎｏｎａｄｓｉ属の微生物を例示することがで
きる。本発明において使用するのに有用な他の微生物と
しては、例えばエルウィナＥｒｕ＋１ｎａ）へルビコー
ラｈｅｒｂｉｃｏｌａ をあげることができる。
収することができる。適当な微生物とし３ナス（Ｐｓｅ
ｕｄｏｒｎｏｎａｄｓｉ属の微生物を例示することがで
きる。本発明において使用するのに有用な他の微生物と
しては、例えばエルウィナＥｒｕ＋１ｎａ）へルビコー
ラｈｅｒｂｉｃｏｌａ をあげることができる。
特に好ましい微生物はＰ、シリンゲ５ｒｉｎａｅ）＾Ｔ
ＣＣ５３，５４３〔ブダペスト条約に従って米国メリー
ランド州のロックビルの＾ＴＣＣ（Δｍｅｒｉｃａｎ
ＴｙｐｅＣｕｌｔｕｒｅ Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ）に１
９８６年９月２３日に寄託〕である。
ＣＣ５３，５４３〔ブダペスト条約に従って米国メリー
ランド州のロックビルの＾ＴＣＣ（Δｍｅｒｉｃａｎ
ＴｙｐｅＣｕｌｔｕｒｅ Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ）に１
９８６年９月２３日に寄託〕である。
本発明者は本発明に従って前記したような微生物を回収
することによって従来法に比較してＩＮＡの低下を抑え
ることができることを見出した。
することによって従来法に比較してＩＮＡの低下を抑え
ることができることを見出した。
本発明方法においては、その方法の実施の過程において
微生物の温度を実用上可能な出来るだけ低い温度に保持
することが重要である。特に好まし。
微生物の温度を実用上可能な出来るだけ低い温度に保持
することが重要である。特に好まし。
い方法は、醗酵培地の温度を先ず１５℃より低い温度に
低下させ、次に１５℃より低い温度を保持し乍ら培地を
濃縮して乾固物濃度が好ましくは１５〜２７重量％、更
に好ましくは２２重量％とする。
低下させ、次に１５℃より低い温度を保持し乍ら培地を
濃縮して乾固物濃度が好ましくは１５〜２７重量％、更
に好ましくは２２重量％とする。
次にこの濃縮培地を、液体窒素のような極低温液体中で
急速に凍結させる。
急速に凍結させる。
培地の濃縮は任意の慣用方法、例えばｒ過又は遠心分離
などによって実施することができる。ソリッドボウル（
ｓｏｌｉｄ ｂｏｗｌ）遠心分離又はディスクボウル（
ｄｉｓｃ ｂｏｕ＋Ｉ）連続遠心分離を用いることがで
きる。
などによって実施することができる。ソリッドボウル（
ｓｏｌｉｄ ｂｏｗｌ）遠心分離又はディスクボウル（
ｄｉｓｃ ｂｏｕ＋Ｉ）連続遠心分離を用いることがで
きる。
濃縮された培地は連続流（ｓｔｒｅａｍ）の状態で前記
極低温液体中に入れる。培地の連続流は極低温液体と会
うと、小さな滴状となり、２速に凍結してペレット、好
ましくは約２〜１０ｍｍサイズのペレットとなる。前記
濃縮培養培地に顕似の液体を極低温液体中に導入する装
置及び方法は当業者の知るところであり、例えば米国特
許第３２２８８３８号、同第３９２８５６６号、同第４
０７７２２７号及び同第４４７９３６３号などに記載さ
れている通りである。
極低温液体中に入れる。培地の連続流は極低温液体と会
うと、小さな滴状となり、２速に凍結してペレット、好
ましくは約２〜１０ｍｍサイズのペレットとなる。前記
濃縮培養培地に顕似の液体を極低温液体中に導入する装
置及び方法は当業者の知るところであり、例えば米国特
許第３２２８８３８号、同第３９２８５６６号、同第４
０７７２２７号及び同第４４７９３６３号などに記載さ
れている通りである。
前記ペレットは次いで極低温液体から回収して慣用方法
で好ましくは水分含量約２〜８重量％に、凍結乾燥する
。出来るだけＩＮＡを保持するために、凍結乾燥プロセ
スの間、生成物の温度を２５℃又はそれ以下に、好まし
くは１５℃又はそれ以下に保持するのが好ましい。本発
明者らは、生成物の温度を高くすると、ＩＮＡが一部失
なわれることを見出した。例えば生成物温度を３０〜５
０℃にすると、ＩＮＡ損失が３０〜７０％となる。
で好ましくは水分含量約２〜８重量％に、凍結乾燥する
。出来るだけＩＮＡを保持するために、凍結乾燥プロセ
スの間、生成物の温度を２５℃又はそれ以下に、好まし
くは１５℃又はそれ以下に保持するのが好ましい。本発
明者らは、生成物の温度を高くすると、ＩＮＡが一部失
なわれることを見出した。例えば生成物温度を３０〜５
０℃にすると、ＩＮＡ損失が３０〜７０％となる。
以下の例においてはＩＮＡは慣用技術を用いて計算した
。ＩＮＡは複数個の微生物を含む水滴（１０μｍ）をパ
ラフィン被覆アルミ箔上に置き、これを−５℃の恒温浴
中に入れることによって求めた。この方法の詳細は、例
えば文１Ｖａｌｉ。
。ＩＮＡは複数個の微生物を含む水滴（１０μｍ）をパ
ラフィン被覆アルミ箔上に置き、これを−５℃の恒温浴
中に入れることによって求めた。この方法の詳細は、例
えば文１Ｖａｌｉ。
Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏ
ｆ ＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＲｅｓｕｌｔｓ ｏｎ
ｔｈｅ ｌｌｅｔｅｒｏｇｅｎｏｕｓ Ｆｒｅｅｚｉｎ
）（ｏｒＳｕｐｅｒｃｏｏｌｅｄ Ｌｉｑｕｉｄｓ、
Ｊ、 Ａｔｏｍｓ Ｓｃｉ、 ２８．４０２〜４０９頁
（１９７１年）に記載されている。以下の例において記
載したＩＮＡは、乾燥微生物１ｇ当りの氷核形成サイト
の数である。本発明の目的に対して、乾燥することなく
醗酵器から直接サンプリングしたサンプルを用いて測定
したＩＮＡを「醗酵器Ｉ Ｎ Ａ Ｊと称し、回収した
乾燥製品を用いて測定したＩＮＡを「回収ＩＮＡＪと称
す。
ｆ ＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＲｅｓｕｌｔｓ ｏｎ
ｔｈｅ ｌｌｅｔｅｒｏｇｅｎｏｕｓ Ｆｒｅｅｚｉｎ
）（ｏｒＳｕｐｅｒｃｏｏｌｅｄ Ｌｉｑｕｉｄｓ、
Ｊ、 Ａｔｏｍｓ Ｓｃｉ、 ２８．４０２〜４０９頁
（１９７１年）に記載されている。以下の例において記
載したＩＮＡは、乾燥微生物１ｇ当りの氷核形成サイト
の数である。本発明の目的に対して、乾燥することなく
醗酵器から直接サンプリングしたサンプルを用いて測定
したＩＮＡを「醗酵器Ｉ Ｎ Ａ Ｊと称し、回収した
乾燥製品を用いて測定したＩＮＡを「回収ＩＮＡＪと称
す。
以下余白
〔実施例〕
鮭１
マンニトール、酵母エキス及び硫酸マグネシウムを含む
栄養培地を含んだアガーブレー１〜上に、シュードモナ
ス シリンゲ ΔＴＣＣＮａ ５３，５４３をしま状又
は線状にうえた。温度２６℃で４８時間経過後、プレー
トの半分を同様な培地を含む５００Ｊフラスコ中に接種
するのに用いた。
栄養培地を含んだアガーブレー１〜上に、シュードモナ
ス シリンゲ ΔＴＣＣＮａ ５３，５４３をしま状又
は線状にうえた。温度２６℃で４８時間経過後、プレー
トの半分を同様な培地を含む５００Ｊフラスコ中に接種
するのに用いた。
温度２６°Ｃで１２時間経過後、前記液状接種物を１０
０リツトルの醗酵培地に接種するのに用いた。
０リツトルの醗酵培地に接種するのに用いた。
この培地の組成は、約８０ｇ／ｌのマンニトール、約２
０ｇ／／の酵母エキス、約１ｇ／ｌの硫酸マグネシウム
及び０．１ｇ／ｌの植物ベースの発泡抑制剤ストラクト
ール（Ｓｔｒｕｋｔｏｌ＞ （米国５ｔｒｕｋｔｏｌ
Ｃｏｒｐ、より市販）を含むものであった。
０ｇ／／の酵母エキス、約１ｇ／ｌの硫酸マグネシウム
及び０．１ｇ／ｌの植物ベースの発泡抑制剤ストラクト
ール（Ｓｔｒｕｋｔｏｌ＞ （米国５ｔｒｕｋｔｏｌ
Ｃｏｒｐ、より市販）を含むものであった。
醗酵温度は２１℃にコントロールした。醗酵の間、系の
ｐＨを４Ｎ硫酸及び２Ｎ水酸［ヒナトリウムでコントロ
ールした。即ち、ｐＨが６．６に近づいたら硫酸を添加
し、ｐＨが５．６に近づいたら水酸１ヒナトリウムを添
加した。溶解酸素は３０％飽和より上に維持し、前記発
泡抑制剤は発泡をコントロールするのに必要な場合に添
加した。
ｐＨを４Ｎ硫酸及び２Ｎ水酸［ヒナトリウムでコントロ
ールした。即ち、ｐＨが６．６に近づいたら硫酸を添加
し、ｐＨが５．６に近づいたら水酸１ヒナトリウムを添
加した。溶解酸素は３０％飽和より上に維持し、前記発
泡抑制剤は発泡をコントロールするのに必要な場合に添
加した。
２４時間経過後、細胞塊は１リットル当り１８ｇ（乾燥
細胞）に到達し、醗酵器ＩＮＡは３．７０Ｘ １０”て
あった。
細胞）に到達し、醗酵器ＩＮＡは３．７０Ｘ １０”て
あった。
醗酵液体培地（ｂｒｏｔｈ）を５℃に冷却し、温度を５
℃に保持し乍ら遠心分離した。固形物を回収し、固形分
含量２２％のスラリーとした。このスラリーを液体窒素
を含む容器中に流した。液体窒素中に入る流れ（ストリ
ーム）の直径は約１〜４１であった。このようにして得
られたペレットを集めて凍結乾燥した。凍結乾燥プロセ
スの間、生成物の温度が２１℃を超えないようにした。
℃に保持し乍ら遠心分離した。固形物を回収し、固形分
含量２２％のスラリーとした。このスラリーを液体窒素
を含む容器中に流した。液体窒素中に入る流れ（ストリ
ーム）の直径は約１〜４１であった。このようにして得
られたペレットを集めて凍結乾燥した。凍結乾燥プロセ
スの間、生成物の温度が２１℃を超えないようにした。
乾燥品の回収Ｉ Ｎ Ａは１．２６ｘ １０”であった
。
。
健λ
本例は比較例である。
即ち、凍結乾燥工程の間、生成物の温度が約３５℃であ
った以外は例１と同様にして凍結乾燥品を得た。このも
のの回収ＩＮＡは０．２５Ｘ１０”であった。
った以外は例１と同様にして凍結乾燥品を得た。このも
のの回収ＩＮＡは０．２５Ｘ１０”であった。
倒＝し
本例は比較例である。
醗酵後、醗酵培地を温度２１℃に保ち、濃縮及びペレッ
ト化工程の前に室温（２５℃）で４時間保持した以外は
例１と同様にして凍結乾燥品を得た。
ト化工程の前に室温（２５℃）で４時間保持した以外は
例１と同様にして凍結乾燥品を得た。
回収ＩＮＡは０．３６ｘ １０”であった。
鮭よ
本例は比較例である。
例１の醗酵培地を浅いパン中に深さ約２．５４ｃｍに注
いだ０次に、これらのパンを培地が完全に凍結して凍結
培地のスラブが形成されるまでフリーザー（−６℃）中
に置いた。次にこれらのパンを凍結乾燥工程に入れて生
成物温度を２１°Ｃより低く保持した。得られた乾燥品
の回収ＩＮＡは０．４０ｘ １０”であった。
いだ０次に、これらのパンを培地が完全に凍結して凍結
培地のスラブが形成されるまでフリーザー（−６℃）中
に置いた。次にこれらのパンを凍結乾燥工程に入れて生
成物温度を２１°Ｃより低く保持した。得られた乾燥品
の回収ＩＮＡは０．４０ｘ １０”であった。
得られた結果を以下の表に卵める。
以下余白
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、醗酵培地から氷核活性を有する微生物を回収するに
あたり、 ａ）前記培地の温度を約１５℃以下とする工程、ｂ）温
度を約１５℃以下に保持しつつ、前記微生物の濃縮物を
形成せしめる工程、 ｃ）前記濃縮物を微細流状の極低温液体中に通して前記
濃縮物の凍結ペレットを生成せしめる工程、そして ｄ）得られたペレットを２５℃より低い温度で凍結乾燥
する工程、 の各工程を含む氷核活性を有する微生物の回収方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US06/910,552 US4706463A (en) | 1986-09-23 | 1986-09-23 | Recovery of microorganism having ice nucleating activity |
| US910552 | 1986-09-23 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS63102673A true JPS63102673A (ja) | 1988-05-07 |
| JPH0632604B2 JPH0632604B2 (ja) | 1994-05-02 |
Family
ID=25428981
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62236412A Expired - Lifetime JPH0632604B2 (ja) | 1986-09-23 | 1987-09-22 | 氷核活性を有する微生物の回収方法 |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4706463A (ja) |
| EP (1) | EP0261623B1 (ja) |
| JP (1) | JPH0632604B2 (ja) |
| KR (1) | KR960010904B1 (ja) |
| AT (1) | ATE84311T1 (ja) |
| AU (1) | AU589273B2 (ja) |
| CA (1) | CA1277273C (ja) |
| DE (1) | DE3783414T2 (ja) |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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-
1986
- 1986-09-23 US US06/910,552 patent/US4706463A/en not_active Expired - Lifetime
-
1987
- 1987-08-27 CA CA000545478A patent/CA1277273C/en not_active Expired - Lifetime
- 1987-09-21 EP EP87113771A patent/EP0261623B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1987-09-21 AT AT87113771T patent/ATE84311T1/de not_active IP Right Cessation
- 1987-09-21 DE DE8787113771T patent/DE3783414T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1987-09-22 JP JP62236412A patent/JPH0632604B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1987-09-23 KR KR1019870010544A patent/KR960010904B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1987-09-23 AU AU78931/87A patent/AU589273B2/en not_active Expired
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Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU7893187A (en) | 1988-03-31 |
| DE3783414D1 (de) | 1993-02-18 |
| ATE84311T1 (de) | 1993-01-15 |
| US4706463A (en) | 1987-11-17 |
| EP0261623B1 (en) | 1993-01-07 |
| JPH0632604B2 (ja) | 1994-05-02 |
| KR880004081A (ko) | 1988-06-01 |
| CA1277273C (en) | 1990-12-04 |
| AU589273B2 (en) | 1989-10-05 |
| KR960010904B1 (ko) | 1996-08-13 |
| EP0261623A3 (en) | 1990-05-02 |
| EP0261623A2 (en) | 1988-03-30 |
| DE3783414T2 (de) | 1993-07-15 |
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