JPS6284028A

JPS6284028A - 膜流動化のための脂質混合物

Info

Publication number: JPS6284028A
Application number: JP61175432A
Authority: JP
Inventors: マイア・シヤイニッツキー
Original assignee: Yeda Research and Development Co Ltd
Current assignee: Yeda Research and Development Co Ltd
Priority date: 1985-07-26
Filing date: 1986-07-25
Publication date: 1987-04-17
Also published as: NO862999L; FI863050A; CA1296640C; NO862999D0; AU6057986A; FI863050A0; EP0213724A1; AU594066B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】本発明は、生体膜流動性を増大する組成物、この組成物
の調製法、およびこの組成物を用いて、種々の疾患の治
療および予防に適用する方法に関するものである。

ヒトや哺乳動物の多くの疾患は、生体膜の流動性（これ
はマイクロ粘度の逆数、即ちμｍ１に当たる）の減少を
伴う。生体膜の流動性は、生体膜の構造および化学組成
によって決まるもので、特にコレステロール対リン脂質
のモル比（Ｃ／ＰＬ）、スピンゴメリン対レシチンのモ
ル比（Ｓ／Ｌ）およびホスホリピド・アシル鎖の不飽和
度とによって決まる（Ｓｈｉｎｉｔｚｋｙａｎｄ　Ｈｅ
ｎｋａｒｔ、Ｉ旦」胚」Ｌ旦、＋６０：１２Ｈ１９７９
）　１ｃｏｏｐｅｒ＋Ｊ、＋ｓｕ　ｒａｍｏｌ、５ｔｒ
ｕｃｔ、、　８：４１３　（１９７Ｂ）　’）。

膜流動性を伴う多くの疾患では、その発病が脂質の組成
、或ル）は新陳代謝の変化と関係がある（Ｃｏｏｐｅｒ
、　Ｎ、Ｅｎ　、Ｊ、Ｍｅｄ、、　２９７　　：３７０
１９７７））、　　これ等変化は多くの場合、種々の組
成物における膜脂質のマイクロ粘度の増大（これはＣ／
ＰＬ或いはＳ／Ｌの増大に原因する）と、或いは、ホス
ホリピド・アシル鎖の不飽和度の減少と、或いはこれ等
三原囚の何らかの組合せと相関関係がある。脂質の過酸
化現象は、また細胞膜蛋白質の動力学に影響し、その結
果明白な生理機能にも影響を与える（Ｓａｇａｉ　ａｎ
ｄ　Ｉｃｈｉｎｏｓｅ、　Ｌｉｆｅ　Ｓｅｉ、　２７：
７３Ｈ１９８０））。

次に脂質の不均衡を伴った疾患についての文献を幾つか
列挙するが、これ等すべての疾患は、脂質処理を容易に
施し得る。

（１）加齢および老化（Ｙａｍａｍｏｔｏ、　■此■、
　３　　：２８４（１９６８）　；Ｒｉｖｎａｙ他、、
Ｍｅｃｈ、Ａ　ｅ、Ｄｅｖ、、１０ニア１（１９７９）
；Ｈｅｒｏｎ他、、Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、　
Ｓｃｉ、ＵＳＡ、７７：７４６３（１９８０）。

Ａｒａｋｉ　ａｎｄ　Ｒｉｆｋｉｎｄ、Ｌｉｆｅ　Ｓｃ
ｉ、、２６：２２２３（１９８０）；Ｈ−ｅｒｓｈｋｎ
ｏｗｉ　ｔｙ他、、　Ｐｒｏ　ｒｅｓｓ　ｉｎ　Ｂｒａ
ｉｎ　Ｒ旦５ｅａｒｃｈ、−Ｅｌｓｅｖｉｅｒ−Ｎｏｒ
ｔｈ　Ｈｏ１ｌａｎｄ（ｉｎ　ｐｒｅｓｓ）；Ｒｏｎｓ
ｅｒ他、ＩＡｄｖル１ｉｄＲｅｓ、１０：２６２（１９
７２）（２）薬物やアルコール耽溺による禁断症状（Ｊ
−ｏｎｓｏｎ他、、Ｍｏｌ、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、、　
１５ニア３９（１９７９）；Ｃｈｉｎａｎｄ　Ｇｏｌｄ
ｓｔｅｉｎＳｃｔｅｎｃｅ＋　１９６：６８４（１９７
９）；Ｌｉｔｔｌｅ−Ｈｅｒｏｎ他、、　　Ｂｔｏｃｈ
ｅｍ、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、、印刷中（１９８２））。

（３）高脂質血症疾患、例えば高血圧症、アテローム動
脈硬化症、胆石、硬変、および肥満症（トｏｎｔｅｎａ
ｙ　他、、ＢｉりＪ咀シ１Ｂ徂恒工初且匹μリエ皿：６
６０（１９８１）；Ｃｏｏｐｅｒ、Ｎ、、Ｕｎ　１．Ｊ
、Ｍｅｄ、、　　２９７　：３７１（１９７７）　ＨＭ
−ｉｅｔｔｉｎｅｎ他、、Ｌａｎｃｅｔ、　２　：８３
５（１９７２））。

（４）精子子育症（旦匹社り紅凰、刹紅２５７　（１９
７９）　；Ｄａｖｉｓ、Ｐｒｏｃ、Ｓｏｃ、Ｅｘ　、Ｂ
ｉｏｌ、Ｍｅｄ、、　１５２：２５７（１９７６））。

（５）免疫機能低下、例えば加齢、肥満症、および成る
種のアレルギー症（Ｒｉｖｎａｙ他、、ル租拡１■より
ｅｖ、、　１２：１１９（１９８０）；Ｒｉｖｎａｙ他
、、聾■」且副肛、。

刊ニアＨ１９７９））。

さて、脳の特異経路が手術による損傷または化学的病変
の結果として、シナプス膜のマイクロ粘度の増大するこ
とが報告されている（Ｈｅｒｏｎ他、。

Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、、ｉｎ　ｐｒｅ
ｓｓ（１９８２））、この発見には、他の変性疾患や基
質的損傷、例えばアルツハイマー病、パーキンソン症候
群、晩期ジスキネジー、ハンチントンコレラ、振ヰん、
運動失調、てんかん、および成る種の精神遅滞等に適用
されるかも知れない（Ｂｏｒｒｉ他、、籾■蛙江ｙ、１
７　：　１７２（１９６７）　；Ｈｏｏｇｈｗｉｎｋｅ
ｌ他、、初り岨す一、　１８：４０８（１９６８）；　
Ｕｅｎｏ他、、Ｊ、Ｎｅｕｒｏｌ、Ｓｃｉ、　５６：８
９（１９８２））、これ等すべての疾患は、原理的には
脂質処理によって治療可能であった。

さらに、成る種の精神障害、例えば録病、うつ病、およ
び精神分裂病は、脳におけるニュートフトランスミノタ
の折返し速度における化学的不均衡と関係している。ま
た、生物起源のアミン類（ドーパミン、ノルエピネフィ
リンおよびセロ１−ニン）が−次的に関係することを示
唆す証拠もある。

上記のトランスジッターの折返しと関係する受容体およ
び膜に結合する酵素は、膜流動性の変化によって変化す
るもので（ｌｌｅｒｓｈｋｏｕｒ　ｉ　ｔｙ他、、扛■
ム：　７４６３（１９８０）；Ｈｅｒｏｎ他、＋ｉｎ　
Ｒｅｃｅ　ｔｏｒｓ　ａｎｄ　ｔｈｅｉｒｎｅｕｒｏｔ
ｒａｎｓｍｉｔｔｅｒｓ、ｅｄｓ、Ｌｉｔｔａｕｅｒ他
、、Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ。

Ｌｏｄｏｎ　（１９８０）　；Ｈｅｒｏｎ他、、Ｅｕｒ
、Ｊ、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、、　７２　：３６１　（１
９８１）、それ故、また、脂質処理を施すべき疾患の範
晴に入る。

機能を脂質処理によって変えることは、インビトロでも
行ない得る。これはワクチン化に利用する目的からビー
ルス感染性を改変するのに適用される（Ｐａｌ他、、Ｂ
ｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒ　、　２０　：　５３０（１９８
１））。

および抗原性の改変にも適用される。（ＳｈｉｎｉＬｚ
ｋｙ　ａｎｄ　５ｏｕｒｏｕｊｏｎ、Ｐｒｏｃ、Ｎａｔ
ｌ、＾ｃａｄ、Ｓｃｉ、、ＵＳＡ＋７６：４４３Ｂ　（
１９７９））、後者は組織の拒絶反応を低減させて臓器
移植を容易にするものである。

従来、これ等疾患は、しばしば、レシチン（ホスファチ
ジルコリン）を患者のダイエツトに高含量に含ませ、与
えることによって治療された。しかし、大抵の症例にお
いては、食事に含まれたレシチンの効果は、特に、脂質
の不均衡を伴う症状を軽減するのにも、また膜脂質流動
性を正常に回復させるためにも効果のないことが認めら
れている。レシチンをダイエツトに何段階かで含有せし
めて投与したが、膜流動性に幾らか効果が認められたが
、残念なことに、しばしば患者の胃に対し副作用をひき
起こした。

現在なお、この分野では、膜流動性の増大効果を有する
特異的な、特に活性な脂質混合物の開発が待望されてい
る。

本発明により提供される組成物は、基本的には、中性脂
質約７重量部および燐脂質約３重量部とからなり、中性
脂質はグリセリド類であり、燐脂質はフォスファチジル
コリンとフォスファチジルエタノールアミンとからなる
ことを基本としている。

本発明はまた、この組成物の調整法と、この組成物を用
いて生体膜の流動性を増大する方法と、この調製物を用
いて膜のコレステロール含量を低Ｍする方法と、並びに
膜脂質の不均衡により媒介される病状、膜脂質処理を受
は易い状態、或いは膜マイクロ粘度の増大から結果する
病状に対する治療または防止するための方法とを提供す
るものである。

本発明の新規な組成物は、生体膜の流動性を増大するの
に驚くべき効果を発揮する特殊の脂質配合物である。

フォスファチジルコリン（レシチン）は天然産の普通の
膜流動化剤である。しかしながら、フオスファチジルコ
リンは、血液中に導入されると、安定した二重層を形成
するか、血清リポ蛋白質と合体するか、或いはこれ等両
方により細胞膜流動性にゆっくりと効果を及ぼすもので
ある。結果として、フォスファチジルコリンを単独で血
流に導入すると、そのほとんどは、細胞膜流動性に影響
を及ぼすことになる以前に、肝臓によって分解されてし
まう。

しかしながら、フォスファチジルコリンが膜と血清との
間での脂質交換過程を容易にする構造として、ゆるく合
体している時には、フオスファチジルコリンによる膜流
動化率が著しく増大されることが発見された。この構造
の形成は、本発明による特殊の脂質組成物によって最適
に行なわれる。

本発明による組成物の有効性は、特別な理論に縛られる
ことなく次のように解すべきと思われる。

即ち、水溶液（例えば血液）中でゆるく合体する脂質構
造が、本発明による組成物により形成され、これはイン
ビボでは十分安定に保持されて、膜コレステロールの転
位を容易にし、従って恐らく外来の燐脂質の細胞膜内・
＼の侵入をも容易にする効果があり、これにより本発明
の組成物の有効性が発揮されると解釈される。

本発明による特殊な脂質組成物は、基本的には、中性脂
質（ＮＬ）および燐脂質（Ｐ　Ｌ）とから７：３の重量
比でなり、燐脂質としてはフォスファチジルコリン（Ｐ
Ｃ）とフォスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）とか
ら主としてなっている。

燐脂質は、フォスファチジルコリンを約２重量部とフォ
スファチジルエタノールアミンを１重量部との比で本発
明の脂質組成物中に配合するのが有利で、この場合、脂
質組成物は、中性脂質、フォスファチジルコリンおよび
フォスファチジルエタノールアミンの重量比を基本的に
７：２：１とするものである。

フォスファチジルエタノールアミンは、脂質二重層を不
安定にすることが認められた天然燐脂質で、安定なフォ
スファチジルコリン・リポソーム類を破壊し得る。しか
し、フォスファチジルコリンとフォスファチジルエタノ
ールアミン混合物の単独では、水溶液中で沈澱する傾向
のあることが認められており、従って両化合物ともイン
ビボで、膜流動化剤として特に有用ではない。

本発明者は、水溶液中で安定な乳液が、フォスファチジ
ルコリンと、フォスファチジルエタノールアミンと、お
よび基本的にグリセリドからなる中性脂質とからなる組
成物でもって形成され得ることが発見された。水溶液中
に形成される、これ等脂質からなる安定乳液は、カイロ
シフロン様アセンブリーで、そこには、グリセリド類が
疎水性キャリアとして働（もので、これ等グリセリド類
の表面には、フォスファチジルコリン分子およびフォス
ファチジルエタノールアミン分子とが無作意的に散布し
ている。第１図を参照。

本発明の特殊な脂質組成物は、水溶液（例えば血液）中
に上述のカイロミクロン様アセンブリを形成すること、
並びに膜コレステロール含量の低減および／または膜流
動性の増大に特に強力な作用剤であることが認められた
。

本発明による組成物に含まれる脂質成分には天然起源の
もの、例えば卵黄、大豆、植物性および動物性物資、或
いはそれ等の混合物が好ましく、特に卵黄から取出した
ものが極めて好ましい。

本発明の脂質混合物中に利用される中性脂質類は、基本
的にはグリセリド類からなっている。この脂質混合物の
中性脂質類は少量の非必須脂質不純物を含有するのが良
いが、この不純物は、中性脂質類の分離中もグリセリド
類に随性したままである。また、これ等不純物には、例
えば、コレステロールを２〜３重量％と、フォスファチ
ジルコリンやフォスファチジルエタノールアミン以外の
燐脂質を１〜２重量％と含むのが良い。グリセリド類に
は、モノグリセリド類、ジグリセリド類およびトリグリ
セリド類が含まれるが、しかし、トリグリセリド類が他
の種のグリセリド類より大量（重量として）含まれるの
が好ましく、グリセリド類含量の５０％以上をトリグリ
セリド類とするのが特に好ましい。

本発明者は、かくして特に強力な脂質膜流動化剤の必須
成分として、中性脂質類と、および燐脂質としてのフォ
スファチジルコリンおよびフォスファチジルエタノール
アミンとが挙げられること、かつ中性脂ｉｔ類と燐脂質
類との配合量比を７：３とした場合に生体膜を流動化す
るのに特に有効であることを発見した。

生体膜の流動性は、経口、静脈注射、或いは局所投与に
よって生体内で増大が認められる。他方、生体外では、
膜を本発明の組成物と接触させることによって膜の流動
性が増大される。膜を本発明の組成物と接触させた場合
、結果として、膜のコレステロールレベルは低下し、他
方膜のフォスファチジルコリンレベルは増大し、かくし
て、膜流動性の増大がもたらされる。後述する実施例で
実証されたように、本発明の特殊な脂質組成物は、生体
膜の流動性を相当にかつ迅速に増大する。さらに、この
特殊組成物は、生体内では比較的安定で、かくして生物
内での膜流動性を効果的に増大するのに有効である。

本発明の組成物は、哺乳動物、例えばヒトの場合、膜脂
質の不均衡により媒介される病状、膜脂質操作を受は易
い状態、或いは膜マイクロ粘度の増大から結果する病状
等の治療または防止のために、生体内にて使用するのに
敵している。米国特許第４．４７４．７７３号（ここで
は、参考のため挙げた）に開示されているように、上述
の病状ないし状態には、下記のものが含まれる。

ａ）　若年および老年の種りの症状（例えば精神機能お
よび性衝動の消失、細菌感染抵抗の低下、等）。

ｂ）免疫系の機能傷害Ｃ）　アレルギーｄ）精神障害、例えば２極精神障害（躁うつ病）、精神
分裂症等。

ｅ）精神遅滞ｆ）神経性障害、例えばアルツハイマー病、パーキンソ
ン症候群、晩期ジスキネジー、ハンチングトンコレラ、
振せん、運動失調、てんかん、等。

ｇ）高脂質血症状態、例えば高血圧、アテローム性動脈
硬化症、胆石、硬変、肥満症等ｈ）　アルコールや他の
薬剤からの禁断症状ｉ）　アルコールや他の薬剤に対す
る耐容性。

本発明の組成物は、また老齢患者の正常な（但し若齢者
に比し弱い）免疫機能を強めるものである。

哺乳動物、例えばヒトの場合に、生体内に存在する膜の
インビボ治療のために、本発明の組成物を、生体膜の脂
質粒動性を増大するに十分な薬学的有効量にて投与され
て良い。

本発明の組成物は、薬学的に受容可能なキャリア、例え
ば食塩水中に懸濁した後、哺乳動物に非経口投与、例え
ば静脈注射または潅注によって、上述の病状または状態
の治療または防止のために、投与されて良い。本発明の
組成物は、哺乳動物に経口投与されて良く、この場合、
薬学的に受容れられる既知キャリアにおいて錠剤または
カプセルの形で投与されて良いのはもちろんであるが、
例えば食料物質のようなキャリア中に、例えばダイエツ
トの添加剤として経口投与されて良い。本発明の組成物
をダイエツトに添加して（即ち食物をキャリアとして）
投与する場合、この組成物の膜流動化能をできるだけ増
大するのには、ダイエツトに他の種の脂質を含まないこ
とが好ましい。該組成物を含むダイエツト補助剤の例に
はゼラチンカプセルや食品バーが挙げられる。なお、本
発明の組成物は、非脂質液中に溶解後に消費が行われる
ように、他と分離して詰めることが可能である。

本発明の組成物は、また乾燥皮膚、湿疹、その他の皮膚
病の治療に敵している。この場合、該組成物は、例えば
クリーム、軟膏、パッチなどのキャリアに混じて局所に
適用される。

生体膜の流動性は、生体外でも、膜を本発明の組成物と
接触させることによって増大させ得る。

生体外での膜処理の例には、精子子育症の治療、ｍ織移
植の容易化、およびワクチン化に利用のためにビールス
感染性の改変等が含まれる。

本発明の実施の態様によれば、本発明による組成物は、
薬学的に受容できるキャリアおよび中性脂質類と燐脂質
類との７：３重量比部合物とからなり、中性脂質類は基
本的にはグリセリド類であり、燐脂質は基本的にフォス
ファチジルコリンとフォスファチジルエタノールアミン
とからなっている。ＭＲ脂質はフォスファチジルコリン
を約２重量部とフォスファチジルエタノールアミンを約
１重量部の比とするのが有効である。

本発明は、さらに生体膜からコレステロールを抽出し、
かつ膜流動性を増大するのに効果のある・組成物の調製
法に関するもので、これは、中性脂質類を約７重量部と
、燐脂質類を約３重量部とを混合することからなり、こ
の場合、中性脂質類は基本的にはグリセリド類であり、
そして燐脂質類は基本的にフォスファチジルコリンとフ
ォスファチジルエタノールアミンとからなっている。該
組成物の燐脂質類は、フォスファチジルコリンを約２重
量部と、フォスファチジルエタノールアミンを約１重量
部の成分比とするのが有利である。

フォスファチジルコリン、フォスファチジルエタノール
アミン、および中性脂質類（主にグリセリド類）は、市
場で購入でき、上述したように混合される。中性脂質類
は、また代、りに、天然物質（例えば卵黄）から、例え
ば後述する実施例１に従って調製することが可能である
。

次に、本発明を実施例についてさらに詳細に説明するが
、これ等実施例は限定的なものであることを意図するも
のではない。

フォスファチジルコリン（Ｐ　Ｃ）およびフォスファチ
ジルエタノールアミン（ＰＥ）、これ等はいずれも雌に
わとりの卵黄から得られ、純度は９９％以上で、Ｌｉｐ
ｉｄ　Ｐｒｏｄｕｃｔｓ社（Ｎｕｔｆｉｅｌｄ　’、、
英国）から購入した。

卵黄からの中性脂質（ＮＬ）は次の方法で単離された。

１匹の雌にわとりからの卵黄（約２０ＩＩ１１）を先ず
１８０ｍ１ｌのインプロパツールと混合し、室温で１時
間放置後、２００ｍｊ！のクロロホルムを添加して、さ
らに１時間混合した。生成した沈澱物を濾過により除去
し、全脂質抽出物を上澄液の蒸発によって回収した。次
いで脂質分を５０ｍ６の温エタノールに溶解し、１１の
ＩＭＫｃｊ！水溶液と、分液ロート内で混合した。中性
脂肪の上層を分離し、蒸溜水で２回洗滌した後、凍結乾
燥した。さらに薄層クロマトグラフィおよび化学分析と
によって、グリセリド類（はとんどトリグリセリド）が
９０％以上、コレステロールが２−３％および燐脂質が
１−２％である結果が得られた。

このようにして調製した中性脂質を７重量部、購入した
ホスファチジルコリンを２重量部、および購入したホス
ファチジルエタノールアミンを１重量部とを混合して、
本発明の７　：　２　：　１ｍｍ切物調製した。

さらにまた、上述と同一の原料物質を用い、混合比の異
なる組成物を幾つか調製し、本発明の組成物との比較に
供した。この比較結果は、後続の実施例において説明す
る。

々のＷ　　の　ヒの　六本発明の（７：２：１）組成物と、混合比の異なる他の
組成物との効果比較のために、これ等脂質含有組成物を
ヒトの赤血球およびリンパ球と反応させた。

これ等脂質含有組成物反応のすべておいて、ポリビニー
ルピロリドン＜ｐ　ｖ　ｐ、分子量：　４０．０００．
　Ｓｉｇｍａ社製）を疏水性のキャリアとして用いた。

またＰＶＰ溶媒として、Ｐ　Ｖ　Ｐ３．５％：牛血清ア
ルブミン１％、およびグルコース０．５％を含む燐酸塩
緩衝食塩水（ｐＨ７，４）　　（Ｐ　Ｂ　Ｓ）が用いら
れた。３Ｈ−水化硼素ナトリュウム（２０Ｃｉ／ｍｍｏ
ｌ）および３Ｈ−コレステロール（４０Ｃｉ／ｍｍｏｌ
）はＡｍｅｒｓｈａｍ社から購入された。

各脂質は、エタノールの１：１００希釈液によりＰＶＰ
溶媒へ導入し、他方、対照としてのＰＶＰ溶媒には１％
エタノールを含有せしめた。

ヒトの赤血球およびリンパ球は２、標準Ｆｉｃｏｌｌ−
Ｈｙｐａｑｕｅ沈降法（例えば、Ｂｏｙｕｍ　％　Ａ、
＋５ｃａｎ、Ｊ、ｃｌｉｎ。

Ｉｎｖｅｓｔ、　、　２１：１７７：８９　　［１９６
８］を参照）によって、新鮮ヘパリン加血液から単離し
た。次いで、ＰＢＳで２回洗滌し、各々を、０．５ｍｇ
／ｍβ脂質を含有するＰＶＰ溶媒当り、赤血球の場合は
５Ｘ１０’個、リンパ球の場合は３Ｘ１０６個含まれる
ようにして、各反応液を、ゆるく栓をしたガラスビン中
に入れて、３７℃で攪拌しながら保温した。反応した赤
血球またはリンパ球は、ＰＢＳで１回洗滌され、次いで
０．２５Ｍ　ＣａＢｒで、さらに再びＰＢＳで洗滌され
た。０．２５Ｍ　ＣａＢｒでの洗滌では、これ等細胞に
微量接着している脂質の除去されるのが認められたが、
これは３Ｈ−ＮＬ、’Ｈ−ＰＣおよび３Ｈ−ＰＥをそれ
ぞれ含有する脂質組成物の場合でも実証された。

細胞に対する３Ｈ−コレステロールの標識は、１０μｌ
ｍｅ、３Ｈ−コレステロールを含むＰＶＰ溶媒との保温
が、上述の条件の下で行われ、ついで膜コレステロール
の約１％増大が達成されるまで続行した。

１．６−ジフェニール・１，３．５−ヘキサイトリン（
ＤＰＥ）をプローブとして用いた、定常状態螢光デポラ
リゼーション標準法を、膜流動性の測定に用いた。（例
えば、５ｈｉｎｉｔｚｋｙ＋Ｍ、、Ｂａｒｅｎｈｏｌｚ
　Ｙ、、Ｂｉｏｃｈｉｍ、Ｂｉｏ　ｈ　ｓ。

歓旦、　５１５　：３６７−３９４　［１９７８］　、
および５ｈｉｎｉｔｚｋｙ、Ｍ、　；Ｙｕｌｉ、　　　
１．、　　Ｃｈｅｍ、　　ｈ　　ｓ、Ｌｉ　　ｉｄｓ、
　　３０：２６１−２８２　　［１９８２コ　）　。

最終希釈が１：２００の赤血球膜または無傷のリンパ球
（２Ｘ１０６／ｍ氾）；濃度のＰＢＳ液がＤ　Ｐ　Ｉで
標識され、螢光ボラリゼーション度（Ｐ）を、既知の方
法（Ｓｈｉｎｉｔｚｋｙ、Ｍ、＋Ｉｎｂａｒ、Ｍ、、Ｂ
ｉｏｃｈｉｍ、Ｂｉｏ　ｈｉｓ。

紅圏、４３３：１３３−４９　　［１９７６］で測定し
た。膜脂質のマイクロ粘度を大約表示するのに、実験的
に求めたスケール［２Ｐ／　（０，４６−Ｐ）　］を用
いた。

非浸透性の試薬２．４．６−ドリニトロベンゼンスルホ
ン酸（ＴＮＢＳ）が、脂質アセンブリの外表面における
ＰＥの利用性を測定するのに用いられた。

ＰＢＳ液中の脂質組成物（０，５ｍｇ／ｍ　１　）が、
０．１χトリトンｘ−ｉｏｏが存在する場合と、存在し
ない場合とで、５分間音波破砕された。この洗剤は、脂
質アセンブリの破壊のために、浸透性の混合ミセルを形
成するのに適用された。１００ｍｇ／＋ｍｆｆ　ＴＮＢ
　Ｓ　（無色のナトリュウム塩、Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　Ｏ
ｒｇａｎｉｃｓ　Ｉｎｃ、製）水溶液１０μｌを各組成
物１ｍｌに添加し、他の１ｍｌサンプル（比較物として
役立つ）中には１０μｌの水が添加された。室温で２時
間保温後、ＴＮＢＳ標識されたサンプルの、波数４２０
　ｎｍでの光学密度を、トリトンＸ−１００の存在する
場合と、存在しない場合とにおいて、参照サンプルとの
比較で、３回繰返しテストにより、測定された。０．Ｏ
ＰＢＳｌｏ、０゜ｔｒｉｔｏｎ比はＴＮＢＳ標識のため
に利用されるＰＥのフラクションとしたものである。

種々のＮＬ−ＰＣ−ＰＥ組成物の膜流動化力価がヒトの
赤血球およびリンパ球それぞれについてテストを行った
。これ等組成物は、すべて０．５ｔａｇ／ｌａ　１用い
られ、燐脂質ＰＣ，ＰＥ　（２／１）およびＮＬとから
なり、但し、ＮＬの含有量は段階的に増大した。

両種細胞のそれぞれについて得られた結果は、第２図お
よび第３図に示される。

第２図は、種々のＮＬ−ＰＣ−ＰＥ組成物（０，５ｍｇ
／ｍ　ｌ　）と共に、３５℃で１８時間保温後における
ヒトの赤血球膜（５・１０？球／ｍ１）の流動化の結果
を示す。これは、１０名からの膜サンプルについて得ら
れたＤＰＨ螢光ボラリゼーション度（Ｐ）の平均値およ
び標準偏差値が示されている。同一の条件下（）でＰＣ
のみで得られた結果は、比較のために示したものである
。

第３図は、ＮＬ−ＰＣ−ＰＥ組成物、或いはｐｃ（）　
　（０，５ｍｇ／ｎ＋　１　）を用い、３７℃で３時間
は保温後に、ヒトのリンパ球１ｔ！（３・１０６細胞／
　ｍ　ｌ　）の流動化を示す。結果は第２図に示した通
りである。

第２図および第３図に示したように、赤血球およびり゛
ンパ球の膜流動化は互いに非常に類似しており、かつＮ
Ｌ−ＰＣ−ＰＥ（７：　２　：　１）組成物（組成物７
２７）は最も強力な膜流動化剤である。

種々の脂質組成物の他にはフォ〜スファチジルコリン単
独を、実施例１にて調製した（７　：　２　：　１）組
成物と、マウス胸腺の血漿膜からコレステロールの抽出
率に対する効果について比較を行なった。２　Ｈ−コレ
ステロールを外部溶媒との交換によって細胞血漿膜へ混
入した。脂質を含む溶媒と共に保温による放射能計数の
減少率を測定した。その結果を第４図に示す。

対照実験（脂質との反応は行なわない。第４図の上側パ
ネル）では、３Ｈ−コレステロールの低減率が、対照媒
体との交換率−これがベースラインとして取られるべき
である。−を表示する。これ等の結果は、３回繰返しテ
ストの平均値および標準偏差値で示した。

第４図は、本発明の（７：　２　：　１）組成物がテス
ト組成物の細胞膜からの過剰コレステロールの抽出率に
最も有効である。

実施例■と同様の方法にて、（７：２：１）組成物の流
動効果を、フォスファチジルコリン単独のそれと、ヒト
のリンパ球を用いて比較した。第５図は、ヒトリンパ球
を（７：　２　：　１）組成物（０，５ｍｇ／ｍ　ｌ　
）と共に室温で、種々の時間保温して、ＰＣと比較で、
上記細胞の流動化の増大結果が示されている。対照溶媒
を用いての結果も一緒に示しである。

第５図に示すように、（７：　２　：　１）組成物は、
室温でさえ、比較的短時間の保温期間内にその効果を媒
介し、かつＰＣ単独の場合と較べて著しく強力である。

実施例■と同様にして、膜内に３Ｈ−コレステロールを
有するヒトの末梢血液リンパ球を、種々のＮＬ−ＰＣ−
ＰＥ組成物と共に３７℃で保温した。ｐｃ−ＰＥの（２
：１）混合物を、ＰＬの段階的増大量と混合して、テス
トを行い比較した。細胞ボピュレーシランについての放
射能を保温開始時と３時間保温後と測定し、その結果を
、それから時間における１分当りのカウントの比として
表示される。

第６図に示されるように、（７：　２　：　１）組成物
が、すべての他のテスト組成物と較べて、コレステロー
ル抽出にとって最も強力である。

若い（３−５ケ月令）ラットおよび老（２２−２４ケ月
令）ラットの免疫能に対する（７：２：１）組成物ダイ
エツトの影響を対照物を用いて検査した。

ダイエツトはＰｕｒｉｎａ　ｃｈｏｗ”±（７：　２　
：　ｌ）組成物４−６重量％からなり、１ケ月にわたっ
て投与した。

肺臓細胞の細胞分裂刺激を、ＣｏｎＡを有する個々のラ
ットについて決定された。ラットから取出した肺臓細胞
の細胞分裂応答について、３Ｈ−チミジン摂取のＣｏｎ
Ａ刺激によって、インビトロで検査した。

この結果は、個々のラットについて、３回繰返しテスト
の平均値および標準偏差値でもって第７図に示した。

第７図に示されるように、標準ダイエツトを与えられた
老ラットから取出した肺臓細胞は、若いう・７トからの
肺臓細胞と比較して、細胞分裂刺激に対する応答がかな
り低い。老ラフ）（７：２：１）組成物ダイエツトを与
えた場合、肺臓細胞の応答は、若いラットに見られると
同じレベルまでに５倍に増大された。若いラットから取
出した肺細胞は、（７：２：１）組成物ダイエツトによ
って僅かしか活性化されなかった。同様な結果はアウス
およびラットから取出したリンパ節細胞についても得ら
れた。

（７：２：１）組成物ダイエツトによる免疫能の全体回
復テストを、病原菌感染からの老ラットの生残りの増大
によって行った。感染病に対処する老ラットの平均能力
は（７：２：１）組成物ダイエツトによって著しく増大
し、若いラットのそれに類似のレベルに達した。

この免疫学的試験には、年齢が７５才以上の、免疫抑制
されたが、基質的疾病は示さず、免疫抑制薬を投与され
ていない人達を対象とした。末梢血液リンパ球の細胞分
裂応答能の試験は、基本となる免疫能を十分に判定する
ために、試験に入る前の３週間以内に三回以上、各被験
者について行った。（７：２：１）組成物を１０−１５
ｇ添加されたダイエツトを毎朝、数週間にわたり摂取し
、末梢血液リンパ球の細胞分裂に対する応答試験を数日
毎に行った。

（７：２：１）組成物ダイエツトの摂取を停止して、７
日後に細胞分裂刺激に対する影響について測定した。３
名の被験者について得られた典型的な結果を第８〜第１
０図に示したが、これ等はＰＨ３刺激に対する末梢血液
リンパ球の反応性に関しての被験者が（７：２：１）組
成物ダイエツト摂取期間の前中後それぞれについての結
果を説明している。第８〜１０図に示すように（７：２
：１）組成物ダイエツト摂取の数日後に、細胞分裂に応
じた有意な増大が観察された。３週間後には、若いラッ
トの場合に認められた典型的なレベルに達した。（７：
２：１）組成物ダイエツトの摂取停止後、リンパ球応答
能は、最初の基本レベルの近くにまで低下した。

【図面の簡単な説明】

第１図は、本発明の組成物が水溶液に分散した時に形成
されるカイロミクロン様粒子アセンブリの概略拡大図で
あり、第２図は、ヒトの赤血球膜の膜流動化に対する種
々の脂質混合物の影響を示すグラフ図であり、第３図は
ヒトのリンパ球膜の膜流動化に対する種々の脂質混合物
の影響を示すグラフ図であり、第４図は、マウス胸腺細
胞を用いて種々の脂質混合物のコレステロール除去実験
の結果を示したグラフ図であり、第５図は、フォスファ
チジルコリンのヒトリンパ球膜の流動化に対する影響を
本発明の組成物と比較して示したグラフ図であり、第６
図はヒトリンパ球からのコレステロール除去に対する種
々の脂質混合物の影響を示すグラフ図であり、第７面は
ラット免疫応答能に対する、本発明の組成物を含むダイ
エツトの効果を示すグラフ図であり、第８図は、第１ヒ
ト被験者の免疫応答能に対する、本発明の組成物を含む
ダイエツトの効果を示すグラフ図であり、第９図は、第
２ヒト被験者の免疫及応答能に対する、本発明の組成物
を含むダイエツトの効果を示すグラフ図であり、および
第１０図は、第３ヒト被験者の免疫応答能に対する、本
発明の組成物を含むダイエツトの効果を示すグラフ図で
ある。

Claims

【特許請求の範囲】

（１）約７重量部の中性脂質と、約３重量部のリン脂質
とから主としてなり、前記中性脂質が主としてグリセリ
ドからなり、かつ前記リン脂質が主としてホスファチジ
ルコリンおよびホスファチジルエタノールアミンからな
っている組成物。
（２）前記リン脂質が、約２重量部のホスファチジルコ
リンおよび約１重量部のホスファチジルエタノールアミ
ンの比率で存在している特許請求の範囲第１項記載の組
成物。
（３）前記リン脂質および前記中性脂質が天然資源から
誘導される特許請求の範囲第１項記載の組成物。
（４）前記リン脂質および前記中性脂質が天然資源から
誘導される特許請求の範囲第２項記載の組成物。
（５）前記天然資源が卵黄、大豆もしくはそれらの混合
物である特許請求の範囲第３項記載の組成物。
（６）前記天然資源が卵黄、大豆もしくはそれらの混合
物である特許請求の範囲第４項記載の組成物。
（７）前記天然資源が卵黄である特許請求の範囲第３項
記載の組成物。
（８）前記天然資源が卵黄である特許請求の範囲第４項
記載の組成物。
（９）前記グリセリドがトリグリセリドからなる特許請
求の範囲第１項記載の組成物。
（１０）前記グリセリドがトリグリセリドからなる特許
請求の範囲第２項記載の組成物。
（１１）前記グリセリド中、トリグリセリドが他のタイ
プのグリセリドよりも多い量で存在する特許請求の範囲
第１項記載の組成物。
（１２）前記グリセリド中のトリグリセリドが他のタイ
プのグリセリドよりも多い量で存在する特許請求の範囲
第２項記載の組成物。
（１３）前記グリセリドの５０％以上がトリグリセリド
である特許請求の範囲第１１項記載の組成物。
（１４）前記グリセリドの５０％以上がトリグリセリド
である特許請求の範囲第１２項記載の組成物。
（１５）前記中性脂質が卵黄の一成分からなり、前記一
成分が約９０重量％のグリセリドと、約２から約３重量
％のコレステロールと、約１から約２重量％のリン脂と
からなっている特許請求の範囲第５項記載の組成物。
（１６）前記中性脂質が卵黄の一成分からなり、前記一
成分が約９０重量％のグリセリドと、約２から約３重量
％のコレステロールと、約１から約２重量％のリン脂と
からなっている特許請求の範囲第６項記載の組成物。
（１７）前記グリセリドの５０％以上がトリグリセリド
である特許請求の範囲第１５項記載の組成物。
（１８）前記グリセリドの５０％以上がトリグリセリド
である特許請求の範囲第１６項記載の組成物。
（１９）特許請求の範囲第１項記載の組成物を生物学的
膜に接触させての膜の流動性を増大させる方法。
（２０）特許請求の範囲第２項記載の組成物を生物学的
膜に接触させてこの膜の流動性を増大させる方法。
（２１）特許請求の範囲第１項記載の組成物を生物学的
膜に接触させてこの膜の流動性を増大させる方法。
（２２）特許請求の範囲第２項記載の組成物を生物学的
膜に接触させてこの膜の流動性を増大させる方法。
（２３）温血動物中に存在する生物学的膜の流動性を増
大させる方法であって、温血動物に、特許請求の範囲第
１項記載の組成物を、前記生物学的膜の脂質流動性を増
大させるのに充分な薬学的有効量で投与することからな
る方法。
（２４）温血動物中に存在する生物学的膜の流動性を増
大させる方法であって、温血動物に、特許請求の範囲第
２項記載の組成物を、前記生物学的膜の脂質流動性を増
大させるのに充分な薬学的有効量で投与することからな
る方法。
（２５）前記組成物が前記温血動物に、膜脂質不均衡に
よって仲介される状態、膜脂質処置に対して従順な状態
、もしくは膜の微量粘度の増大から生じる状態の治療も
しくは予防のために投与される特許請求の範囲第２３項
記載の方法。
（２６）前記組成物が前記温血動物に、膜脂質不均衡に
よって仲介される状態、膜脂質処置に対して従順な状態
、もしくは膜の微量粘度の増大から生じる状態の治療も
しくは予防のために投与される特許請求の範囲第２４項
記載の方法。
（２７）前記状態が、ａ）老化および老衰の種々の症状（たとえば精神機能およびリビドの減退、細菌汚染に対する易損性の増大など）、ｂ）免疫系の機能障害、ｃ）アレルギーｄ）両極作用障害（躁うつ）および精神分裂病などのような精神障害、ｅ）遅鈍、ｆ）アルツハイメル病、パーキンソン症候群、晩発性運動障害、ハンチングトン舞踏病、振せん、運動失調症、てんかんなどのような神経障害、ｇ）高血圧症、アテローム性動脈硬化症、胆石、硬度および肥満症などのような過脂質状態、ｈ）アルコールその他の薬剤からの禁断症、ｉ）アルコ
ールその他の薬剤に対する耐性、ｊ）湿疹、乾燥皮ふな
どのような皮ふ障害、である特許請求の範囲第２５項記
載の方法。
（２８）前記状態が、ａ）老化および老衰の種々の症状（たとえば精神機能およびリビドの減退、細菌汚染に対する易損性の増大など）ｂ）免疫系の機能障害、ｃ）アレルギー、ｄ）両極作用障害（躁うつ）および精神分裂病などのような精神障害、ｅ）遅鈍、ｆ）アルツハイメル病、パーキンソン症候群、晩発性運動障害、ハンチングトン舞踏病、振せん、運動失調症、てんかんなどのような神経障害、ｇ）高血圧症、アテローム性動脈硬化症、胆石、硬変および肥満症などのような過脂質状態、ｈ）アルコールその他の薬剤からの禁断症、ｉ）アルコ
ールその他の薬剤に対する耐性、ｊ）湿疹、乾燥皮ふな
どのような皮ふ障害、である特許請求の範囲第２６項記
載の方法。
（２９）前記方法が前記組成物の経口投与を含む特許請
求の範囲第２３項記載の方法。
（３０）前記方法が前記組成物の経口投与を含む特許請
求の範囲第２４項記載の方法。
（３１）前記方法が前記組成物の経口投与を含む特許請
求の範囲第２５項記載の方法。
（３２）前記方法が前記組成物の経口投与を含む特許請
求の範囲第２６項記載の方法。
（３３）前記方法が前記組成物の経口投与を含む特許請
求の範囲第２７項記載の方法。
（３４）前記方法が前記組成物の経口投与を含む特許請
求の範囲第２８項記載の方法。
（３５）前記組成物が、薬学的に受容できるキャリア中
で非経口的に投与される特許請求の範囲第２３項記載の
方法。
（３６）前記組成物が、薬学的に受容できるキャリア中
で非経口的に投与される特許請求の範囲第２４項記載の
方法。
（３７）前記組成物が、薬学的に受容できるキャリア中
で非経口的に投与される特許請求の範囲第２５項記載の
方法。
（３８）前記組成物が、薬学的に受容できるキャリア中
で非経口的に投与される特許請求の範囲第２６項記載の
方法。
（３９）前記組成物が、薬学的に受容できるキャリア中
で非経口的に投与される特許請求の範囲第２７項記載の
方法。
（４０）前記組成物が、薬学的に受容できるキャリア中
で非経口的に投与される特許請求の範囲第２８項記載の
方法。
（４１）前記組成物が、薬学的に受容できるキャリア中
で局所的に投与される特許請求の範囲第２７項記載の方
法。
（４２）前記組成物が、薬学的に受容できるキャリア中
で局所的に投与される特許請求の範囲第２８項記載の方
法。
（４３）前記生物学的膜を前記組成物に接触させて、男
子不妊症を治療し、組織移植を容易にし、あるいは接種
に使用するためにウィルス感染性を変調させる特許請求
の範囲第１９項記載の方法。
（４４）前記生物学的膜を前記組成物に接触させて、男
子不妊症を治療し、組織移植を容易にし、あるいは接種
に使用するためにウィルス感染性を変調させる特許請求
の範囲第２０項記載の方法。
（４５）薬学的に受容できるキャリアと、約７重量部の
中性脂質と、約３重量部のリン脂質とからなり、このリ
ン脂質がホスファチジルコリンとホスファチジルエタノ
ールアミンとから主としてなり、かつ前記中性脂質が主
としてグリセリドからなっている特許請求の範囲第１項
記載の組成物。
（４６）薬学的に受容できるキャリアと、約７重量部の
中性脂質と、約２重量部のホスファチジルコリンと、約
１重量部のホスファチジルエタノールアミンとからなり
、前記中性脂質が主としてグリセリドからなっている特
許請求の範囲第２項記載の組成物。
（４７）生物学的膜の流動性を増大させるのに有効な組
成物を製造する方法であって、約７重量部の中性質と約
３重量部のリン脂質とを混合する工程を備え、前記リン
脂質がホスファチジルコリンおよびホスファチジルエタ
ノールアミンから主としてなり、かつ前記中性脂質が主
としてグリセリドからなっている方法。
（４８）約７重量部の中性脂質と、約２重量部のホスフ
ァチジルコリンと、約１重量部のホスファチジルエタノ
ールアミンとを混合する工程を備え、前記中性脂質が主
としてグリセリドからなっている特許請求の範囲第４７
項記載の方法。