JPS6283875A - 抗菌性および抗カビ性を有するフイルムの製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用性〕 本発明は、抗菌性および抗カビ性を有するフィルムまた
はシートに関し、詳しくは、フィルムまたはシートによ
り包装された内容物における細菌またはカビの生育およ
び増殖を阻止しうるフィルムまたはシートに関する。

本発明のフィルムまたはシートは食品、化粧品、医療材
料ま１こはその他の畑閑およびカビが生育しまたは増殖
しうる物品または材料の包装または保存に利用すること
ができる。

〔技術の′１１−９景および従来技術の説明〕食品、化
粧品または医療材料などの微生物の栄養譚となりつる物
質を含むものは、微生物の生育に適する条件に置かれる
と、その中に、細菌またはカビなどの微生物が生育した
り、増殖したりして、微生物の繁殖による損害を受は易
い。

このような微生物による損害を避けるために、これまで
は、滅菌したプラスチックスフィルムまたはシートに、
滅菌した材料または製品を包装するか、あるいは包装後
に滅菌をしたり、また塩化ビニリデンＭＢ脂のラップフ
ィルムによって、材料または製品を密着して包装し、そ
れによって微生物に対する空気の供給を勾断することが
行なわれている。しかしながら、これらの方法は、包装
を開いた後は、その開口から細菌またはカビなどの微生
物に汚染されることが多いので、必ずしも充分なもので
はない。

また食品、化粧品または医療材料に１安息香酸１デヒド
ロ酢酸、ソルビン酸またはパラオキレジ安、鬼香酸など
の防腐保存料を加えて、プラスチックスフィルムまたは
シートにより包装することも広く行なわれているが、こ
れらの防腐保存料には、人体に対する安全性が充分でな
いものがあり、その使用を制限する傾向が強くなってい
る。

一方、キトサンは、エビやカニなどの甲殻類の殻に含ま
れるキチンを脱アセチル化して得られる多糖類であって
、β−１，４結合によりＤ−グルコサミンが直鎖状に結
合した多糖類であり、キトサンを分解して得られる低重
合度のキトサンも知られている。キトサンを分解する方
法には、塩酸による加水分解法、亜硝酸による酸化分解
法、過酸化水翼による酸化分解法および塩素による酸化
分解法などの化学的な方法、および酵素（キトサナーゼ
）による方法があり、キトサナーゼを生産する微生物と
して、バチルスＲ−４、（トミナガおよびツジサカ：ビ
オヒミ力・工・ビオフイジ力・アクタ（Ｙ、　Ｔｏ＋ｎ
ｉｎａｇａ　＆　Ｙ、　Ｔｓｕｊｉｓａｋａ　：Ｂｉｏ
ｅｈｉｍｉｃａ　ｅｔ　Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃ３Ａｃｔａ
　）　第４１０巻、第１４５−１５５画（１９５７年）
〕、ペニシリウム・イム スランデイクム〔ディー・工賃・フェントン等：ジャー
ナル・オブ・ジェネラル・ミクロバイオ口ジー（ｏ、ｔ
、　Ｆｅｎｔｏｎ　ｅｔ　ａｔ　：　Ｊｏｕｒｎａｌ　
ｏｆＧｅｎｅｒａｌＭｌｃｒｏｂｌｏｌｏｇｙ）第１２
６巻、第１５１−＋６５百（１９８１年）〕、バチルス
９９−５（Ｉｆｉｉ内二日内層日本農芸化学会５９年度
大会、講演要旨集、第５５０頁）、ストレプトマイセス
阻６〔ジェイ・ニス・プライス等：ジャーナル・オブ・
バクテリオロジ−（Ｊ、Ｓ、　Ｐｒ１ｃｅ　ｅｔ　ａｌ
　：　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ
　）第１２４巻、第１５７４−１５８４　Ｗ−Ｍ　　（
特願昭６０−１２０６７３号）があり、β−１１４結合
グルコサミンにおける重合度が３〜７の低重合度のキト
サンのオリゴマーがフザリウム・ソラニ（Ｆｕｓａｒｉ
ｕｍ　５ｏｌａｎｉ　）に対する抗カビ性を有すること
も知られている。〔ディー・エフ・ケンドラ・アンド・
エル・ニー・ハドウイガ一二エクスベリメンタル・マイ
コロジー（Ｄ、Ｆ、　Ｋｅｎｄｒａ＆　Ｌ、Ａ、　Ｈａ
ｄｖｉｇｅｒ　：　Ｅｘｐｅｒｌｍｅｎｔａｌ　Ｍｙｃ
ｏｌｏｇＹ）　ｆｊｌｙ８巻、第２７６−２８１頁（１
９８４年）〕他方において、プラスチックスフィルムは
、薄くて丈夫であり、透湿性がほとんどなく、また通気
性も非常に小さく、さらに軟らかく、包装材料として非
常に優れたものであるが、印刷適性が皆無に近い材料で
あるために、プラスチックスフィルムに印刷を行なうた
めに、その表面の特性を変えるために、放電加工あるい
は酸化剤による処理などの表面加工が行なわれている。

本発明者の一人は、ポリマーについて永年研究を続けて
いるが、本発明者の他の一人が提供したキトサンおよび
キトサン分解物がプラスチックスフィルムに付着しうる
という意外なことを見出し、この知見に基づいて本発明
に到達した。

〔発明の目的および発明の要約〕

本発明のコ的は、抗菌性および抗カビ性を有するフィル
ムを提供することにあり、詳しくは、包装の内容物にお
ける細菌およびカビの発生を抑止しうるフィルムを提供
することにあり、さらに詳しくは、これらのフィルムを
簡便に製造しつる方法を提供することにある。

本発明は、フィルムの表面に、キトサンまたはキトサン
軽度分解物を付着することからなる抗菌性および杭カビ
性を有するフィルムの製造法である。

フィルムの表面へのキトサン軽度分解物の付着が、成形
直後のフィルムに行なわれることが好ましく、またキト
サン軽度分解物は、粉末状あるいは溶液状であってもよ
い。キトサン軽度分解物は、キトサンを１２０■−Ｄ−
グルコサミン／１ｇ・キトサンよりも大きくない生成還
元糖量にまで分解したものであることが好ましく、また
キトサンは、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　Ｓｐ、　）
　Ｎ［Ｌ　７−　Ｍ　　（微工研菌寄ｊＭ８１３９号）
により生産されたキトサナーゼによって分解されたもの
であることが好ましい。またキトサン軽度分解物の製造
に使用されるキトサンは、脱アセチル化度が５０〜１０
０％のものであることが好ましい。

フィルムに対するキトサン軽度分解物の付着は、凹版印
刷法によって行なうこともでき、キトサン軽度分解物を
付着するフィルムの表面に、放電加工による爲水化処理
または強酸化剤による表面処理をしておくこともでき、
プラスチックスフィルムにおけるプラスチックスは、ポ
リエチレン、ポリプロピレン、塩化ビニルｍ脂または塩
化ビニリデン樹脂を使用することができる。

〔発明の詳細な説明〕

本発明において使用するキトサン何度分解物は、キチン
の脱アセチル化物のキトサンを分解して得られる低分子
化物である。キトサンの分解は、公知の化学的方法また
はキトサナーゼによる酵素分解法のいずれによることも
できるが、バチルス陽。

７−Ｍ　（微工研菌寄第８１３９号）により生産された
キトサナーゼによって分解するのが好ましく、その原料
キトサンは、脱アセチル化度が５０〜１００％のものを
使用する。

キトサン軽度分解物をキトサナーゼによって製造するに
は、先ずキトサンを酸水溶液に溶解してキトサン溶液を
調製し、予め反応温度においてブレインキュベートし、
これに、予め反応温度においてブレインキュベートした
キトサナーゼ溶液を加え、３０〜８０℃（好ましくは４
０°Ｃ前後）の反応温度においてキトサンをキトサナー
ゼによって分解する。反応液のｐｇｇはキトサナーゼの
作用ｐＨにより異なるが、通常３〜９　（好ましくは６
前後）である。原料のキトサンとしてコロイダルキトサ
ンを使用する場合は、これを水に懸濁したものであって
もよい。キトサン溶液の調製に使用する酸は、キトサン
を溶解しうるものであれば、いかなるものであっても、
これを使用することができるが、塩酸または硝酸の希薄
溶液、ギ酸、酢酸、グルタミン酸またはアスコルビン酸
を使用するのが好ましい。

キトサンの分解の程度は、温度、ｐＨおよび反不時ｆ１
１５の反応条件によって変化するから、予備実験におい
て所望の分解度を得るのに必要な反応条件を求め、これ
によるのが好ましい。キトサンの分解度を、反応生成物
の生成還元ｆｌ’Ｊ看（＊ｐ・Ｄ−グルコサミン／［ト
キトナン）によって求めるのが簡便で、通常、生成還元
糖量が１２０■・Ｄ−グルコサミン／１，９・キトサン
よりも多くない程度にするのが好ましい。

キトサンの分解は、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　Ｓｐ
、　）４７　１１１（微工研菌寄第８１３９号）により
生産されたキトサナーゼによって行なうのが好ましい。

バチルスｌ虹７−Ｍは、長崎県南高来郡小浜町雲仙の原
生沼の土壌よりキチンまたはキトサンを唯一の炭素酩と
するｆ＠地に生育しうる細菌として分離されたバチルス
（Ｂａｃｉｌ、ｌｕｓ　ｓｐ−）　ＮＱ、７株を親株と
して、この親株をＮ−メチル−Ｎ’−ニトロソ−Ｎ−ニ
トロソグアニジン（ＮＴＧ）で処理して突然変異を誘発
させ、得られたストレプトマイシン耐性の変異株の中か
ら、高活性のキトサナーゼを生産しうるものとして分離
された変異株であって、微工研菌寄第８１３９号（ＦＥ
ＲＭＰ　−８１３９）として通商産業省微生物工業技術
研究所に寄託されている。

バチルスＮｏ、　７−　Ｈの菌学的性質は以下に示され
る。

Ａ、細胞の形態 （１）細胞の形および大きさ：短桿菌、（肉汁および肉
汁寒天斜面培養、３７″Ｃ，２４〜７２時間の培養） （２）細胞の多形性の有無：無し、 （３）運動性の有無：有り、 （肉汁寒天半流動高層穿刺培養） （４）胞子の有無：有り、内生胞子および裸の胞子、球
状、 〔トーナー（Ｄｏｒｎｅｒ　）の染色法およびウィッツ
（ＷＨｚ）変法〕 （５）ダラム染色性：＠性、 〔肉汁寒天斜面培養、３７℃、１８時間、ヒュッカー（
Ｈｕｃｋｅｒ　）の変法により染色〕肌各培地における
生育状態 （＋）肉汁寒天平板培養（３７℃、２４〜１６８時間）
糸状の周縁を何する円形で、隆起した乳白色のコロニー
を形成する。コロニーの表面は凹凸でやや光沢があり、
半透明である。時間の経過とともに盛上ってくる。色素
は生産しない。

（２）肉汁寒天斜面培養（３７６Ｃ１２４〜１６８時間
）拡布状に盛上った乳白色のコロニーを形成する。

コロニーは凸円形の隆起があり、光沢がある。生育は良
好で、時間とともに拡がってくる。色素は生産しない。

（３）肉汁液体培養（３７°Ｃ１２４〜１６８時間）：
表面に膜を形成しない。時間とともに全体的に濁ってく
る。底部にＸ状（顆粒状）の沈デンが形成され、徐々に
多くなってくる。

（４）因汁ゼラチン穿刺培＠（２５°Ｃ１２４〜１６８
時Ｉｆｆ）　　： 穿側線に沿って生育し、液化する。表面および内部は漏
［株］状に生育し、液化する。液化部分は口開する。

（５ン　リトマスミルり（３７℃、２４〜１６８時間ン
：２日後から上部が少しずつ波化し、４８目には色は完
全に変色し、酸性となった。凝固はしない。

時間の経過とともに、液化は進み、半透明になった。

Ｃ・生理学的性質 （１）硝酸塩の還元ニー （硝酸塩肉汁培地、３７℃、２４〜１２０時間）（２）
脱窒反応ニー （＠形らの方法、発酵管を使用、３７°０１２４〜１２
０時間） （３）ＭＲテスト：＋ （３７℃、２４〜１６８時間） （４）ＶＰテスト（アセチルメチルカルビノール生成試
験：＋ （３７℃、２４〜１６８時間） （５）インドールの生成ニー （３７℃、２４〜１６８時間） （６）硫化水素の生成ニー （ＴＳ４寒天法、３７°０１２４〜１６８時間）（７ン
デン粉のｔｘＪ水分解：＋ （３７°Ｃ１２４〜１６８時間） （８）クエン酸の利用 （コーザーの培地、３７°０１２４〜１６８時ｆ［）：
　− （クリステンセンの培地、３７°Ｃ１２４〜１６８時間
）：＋ （９）無機窒素源の利用（３７°Ｃ１２４〜１６８時間
） 硝酸塩：未定、 アンモニウム塩：未定、 （１０）色素の生成 （マンニット・酵母エキス寒天斜面培ａ）：〔キング（
Ｋｉｎｇ　）　　Ａ寒天斜面培地コニ−（１１）蛍光の
有無：無し く１２）ウレアーゼ：＋ （クリステンセンーウレア寒天培地、３７℃、２４〜１
６８時間） （１３）オキシダーゼ二十 （肉汁寒天培地、３７°０１２４〜４８時間）（１４）
カタラーゼ：十 （肉汁寒天培地、３７°Ｃ１２４〜４８時間）（１５）
生育の範囲：　（肉汁寒天培ａ）温度：未定、 ｐＨ：　５〜１０゜ 添加食塩濃度：未定、 （！６）酸素に対する態度：好気性 （１％グルコース肉汁高層寒天培地、３７℃、２４〜７
２時間） （１７’）　　Ｏ−Ｆテスト〔ヒュー−ライフソン（ｌ
ｌｕｇｈ　−Ｌｅｉｆｓｏｎ　）法、３７６Ｃ，Ｄ−グ
ルコース〕　：発酵的に酸を生成する。

（ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｖｅ　） （ｔｓ）ｍ類からの酸およびガスの生成の有無（３７°
０１２４〜１６８時間）： Ｗ　類　　　　　酸　　　ガス Ｄ−グルコース　　＋　　　− ０−マンノース　　−− Ｄ−ガラクトース　−　　　− Ｄ−フラクトース　＋　　　− し−アラビノース　−− Ｄ−キシロース　　−− Ｄ−ソルビツト　　−− Ｄ−マンニット　　−− イノジット　　　　−− マルトース　　　　＋　　　　− サッカロース　　　＋　　　　− ラクトース　　　　−− デン粉　　　　　　十　　　− セルロース　　　　−− グリセリン　　　−− 以上の菌学的性質について、バージエイス・マニュアル
・オブ・デターミネイティブ・バクテリオロジー（Ｂｅ
ｒｇｅｙ’　ｓ　Ｍａｎｕａｌ　ａｔ　ｏｅｔｅｒｍｔ
ｎａｔｔｖｅＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ　）の第８版（
１９７４年）を検索したところ、Ｎａ７−Ｍ株はバチル
ス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　）属に属するのが相当であるこ
とがわかった。

バチルスｆｆ１７−Ｍにより生産されたキトサナーゼの
＃素化学的性質は以下に示すとおりである。

（１）作　用： キトサンに作用し、分子の内部鎖から任意にβ−１，４
結合を分解して、主としてキトサンオリゴｔＪ！！（Ｃ
；ＩｅＮ）　　（ｎ＝２〜８）　（２量体〜８量体）を
生成する。キトサンオリゴ糖は高速液体クロマト・グラ
フィーを用いてキトサン分解液から分離することができ
る。この分解液におけるキトサンの分解度は約４５％で
ある。カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）にも作用
し、ある程度はこれを分解するが、キチンには全く作用
しない。

（２）作用温度範囲および最適作用温度：可溶性キトサ
ンを基質とした場合、８０℃まで作用し、最適作用温度
は５０℃である。

ｐＨ６，０において１０分間反応させた場合の温度と比
活性の関係を第１図に示す。

（３）作用ｐＨ範囲および最適ｐＨ： ｐｉ（３〜９の範囲において作用し、最ａｐｌはｐｏ　
６である。

１％可溶性キトサン１　ａｔに各ｐｔｔの緩衝液２九ｔ
および酵素液１　ｍｌを加えた反応液を３７°Ｃにおい
て１０分間反応させた場合のｐＨと醇業の比活性の関係
を第２図に示す。

（４）熱安定性： ５０°Ｃにおける１５分間の保温まで、はぼ安定で、６
０°Ｃにおける１５分間の加熱により、酵素の約４０％
が失活し、７０°Ｃにおける１５分間の加熱により、完
全に失活した。

温度と比活性の関係を第３図に示す。

（５）ｐＨ安定性： ０．１Ｍ緩衝液中で３０６Ｃにおいて２時間放置した後
、残存する酵素活性を測定したが、ｐＨ５〜１１の範囲
において安定であった。ｐＨ１０〜１１において安定で
あることは、バチルスＮ［Ｌ７−Ｍにより生産されたキ
トサナーゼの大きな特徴の一つである。ｐＨと比活性の
関係を第４図に示す。

（６）阻害剤： バチルスＮｏ、　７−　Ｈにより生産されたキトサナ−
ゼは、ｌ×１０Ｍの終濃度のＨｇＣ１、ＰｂＣｌ　　Ｓ
ＡｇＮ０　　、およびＰＣＭＨの存在によりはば１００
％が阻害された。

（７）基質特異性： 種々の基質を使用し、基質の終濃度を０．２５％とした
時に、酵素反応液４ｒｒＬｌ当り酵素蛋白質１ｒｎ９に
よって１時間後に遊離する全還元糖とへキソサミンのｆ
ｔ　（ＴＬＩ　／　ｍｇ蛋白質／時）を測定したうその
結果が第１表に示される。

（以下余白） 第１表　基質特異性 注）　※：ライシッヒ（Ｒｅｔ３５ｔｇ　）法による。

バチルスＮｏ、　７−　Ｈにより生産されたキトサナー
ゼは、コロイダルキトサン、可溶性キトサンおよびグラ
イコールキトサンをよく分解し、カルボキシメチルセル
ロース（ＣＭＣ）も若干分解したが、粉末キトサンには
作用しなかった。またコロイダルキチン、グライコール
キチン、粉末キチンおよびメチルセルロースは全く分解
しなかった。

（８）分子量： ５Ｏ５−ポリアクリルアミド電気泳動法により分子量を
測定した結果を第５図に示す。第５図において（○）は
バチルスＮ［Ｌ７−Ｈにより生産されたキトサナーゼの
分子量であって、約４１　、０００である。

セファデックスＧ　−１００を用いたゲル濾過法により
分子量を測定した結果を第６図に示す。第６図において
（○）はバチルス％７−Ｈにより生産されたキトサナー
ゼの分子量であって、約３０，０００である。

（９）酵素力価の測定法： １ｇの粉末キトサン（２８メツシユ）を５０７Ｌｌの０
．１Ｍ酢酸水溶液に溶解し、０．１Ｍ酢酸ナトリウム水
溶液でｐＨ６，０に調整した後、０．１　Ｍ酢酸綴衝液
（ｐＨ：　６．０）を加えて、全容を１００心にして、
基質の１％可溶性キトサン溶液を調製する。

３７℃において５分間ブレインキュベートした基質の１
％可溶性キトサン溶液Ｉ　！／に、同様にブレインキュ
ベートした酵素液１Ｍを加え、３７℃において正確に１
０分間酵素反応を行なわせる。その後反応液を３分間煮
沸して酵素反応を停止させ、反応液中に生成した還元筒
を定量する。

この条件において１４モルのグルコサミンに相当する還
元筒を遊離させる酵素量を、１単位（ｕｎｉｔ）のキト
サナーゼ活性とする。

本発明において、抗菌性および抗カビ性を有するフィル
ムを製造する場合のフィルムに付着するためのキトサン
またはキトサン軽度分解物は、溶液状または粉末状のい
ずれの形においても使用することができ、溶液状のキト
サンまたはキトサン軽度分解物を使用する場合は、フィ
ルムの表面にスプレーまたは霧吹きによって吹き付ける
かまたはフィルムをキトサンまたはキトサン軽度分解物
の溶液に浸漬した後、乾熾し、粉末状のキトサンまたは
キトサン軽度分解物を使用する場合は、この粉末をフィ
ルムの表面にふりかけることにより付着する。またキト
サンまたはキトサン軽度分解物は、凹版印刷法によって
フィルムの表面に付着することもできる。凹版印刷法に
よる場合は、キトサンまたはキトサン軽度分解物の溶液
に、増粘剤を加えて印刷できるようにする。増粘剤とし
ては、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、カルボキシメ
チルセルロース（ＣＭＣ）、酢酸ビニルエマルジョン、
アクリロニトリルエマルジョン、ゼラチン、コラーゲン
、寒天、デン粉またはデキストリンを使用することがで
きる。また凹版印刷法によってキトサンまたはキトサン
軽度分解物を付着する場合、フィルムの表面に対して、
放電加工による親水化処理をするか、または強酸化剤に
よる表面処理をすることが好ましく、これらの表面処理
によって、キトサンまたはキトサン軽度分解物の付着性
が向上し、特にプラスチックスフィルムにおいては、そ
の向上が著るしい。

キトサン軽度分解物を付着するフィルムは、プラスチッ
クスフィルム車体の他に、プラスチックスシート、プラ
スチックスフィルムのラミネート紙および生体系材料と
しては、たとえばコラーゲンフィルムを使用することが
でき、プラスチックスとしては、ポリ塩化ビニリデン、
ポリ塩化ビニル、ポリエチレン、ポリプロピレン、これ
らのコポリマー、これらの架橋物などを使用することが
できる。

キトサンまたはキトサン軽度分解物の粉末を使用する場
合、成形直後のプラスチックスフィルムにキトサンまた
はキトサン軽度分解物の粉末をふりかけると、キトサン
またはキトサン軽度分解物の付着性が向上する。

キトサンまたはキトサン軽度分解物は、少なくともｏ、
ｔｇ／ｉ（好ましくは、０．５９／ｒｎ”＞の量におい
てフィルムの表面に付着する。これによって、そのフィ
ルムにより包装された内容物における細菌およびカビの
生育および増殖を抑制することができる。

〔発明の効果〕

本発明によって製造されたフィルムは、フィルム自体が
抗菌性および抗カビ性を有するだけでなく、これにより
包装された内容物における細菌およびカビの生育および
増殖を抑制し、それによって包装製品を長斯間保存する
ことができる。そしてその細菌およびカビの生育および
増殖を抑制する効果は、持続的であるから、包装製品を
開封した後でも、その内容物に細菌およびカビの発生す
ることがない。

さらに、キトサンまたはキトサン軽度分解物は、古くか
ら食用に供されていたキチンに由来するものであって、
人畜に有害なものではない。

以下において本発明を参考例および実施例によってさら
に詳しく説明する。

参考例１ （種培養の調製） ２５０ｍｌｌ容三角フラスコに、酵母エキス帆８％、ペ
プトン０．４％、肉エキス０．２％、コロイダルキｈ　
４ｔ　：／　０．５％を含ＯＭ’体培地（ｐｕ　：　７
．２）　　５０ｍ７！を入れ、常法により殺菌した後、
これに予め液体ＩＰ（養したバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕ
ｓ　ｓｐ、）　Ｎｏ、　７−Ｍ　　（ＦＥＲＭ　Ｐ　−
８１３９）を襞間し、３０’（：において、１日間振ど
う培養した。

（酵素生産用培養液の調製） ５１容三角フラスコ２本に、上記と同一の組成の面体培
地をそれぞれｌｌずつ入れ、常法により殺菌した後、こ
れに上記で得られた種培養液４０第１を接即し、３０°
Ｃにおいて、４日間振とう培養した。培養液を６．００
Ｏｒ＋ｐ＋Ｉｌにおいて遠心分離して、菌体を除去し、
得られた上澄液のキトサナーゼの活性を前記の酵素力価
の測定法によって測定した。上澄液！　ｒｒＬｉ１当り
０．９９　単位ひあった。

（酵素液のｆ＃製） 上記で得られた上澄液を混合し、与られた混合Ｉ！１．
８１１に固体硫安１．０１５ｇ（硫安８０％飽和に相当
する）を加え、濾過し、得られた沈デン物を蒸留水に溶
解し、１７７第１とした。この酵素液を蒸留水、引き続
いて、０．０２　Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７６，０）に対
して透析した後、得られた酵素液を、予め０．０２　Ｍ
リン酸緩衝液で平衡化したＣＭ−セファデックスＣ−５
０を充填したカラム（２，６ｃｍ（径）×４５信（長さ
）〕に流してキトサナーゼを吸着させた。はとんどの不
Ｉｆｌｌ白質は素通り区分に集まっていた。このカラム
を０．０２間リす酸！１１７Ｉｐｉ３５０ｒｒ＋Ｊで洗
浄した後、０〜０．５Ｍの塩化ナトリウムで直線的濃度
勾配により酵素出自質を溶出した。

次にキトサナーゼ活性を示した第２１８〜２４０のワラ
クシ５ンを合し、これをダイアフローメンブレンフィル
ターＰＨ−１０（アミコン社製品）を用いた限外濾過装
置で１７倍に濃縮し、このｍ縮液に、セファデックスｃ
　−ｔｏｏを用いるゲル濾過を行なった。

このゲル濾過のキトサナーゼ活性を示した第５０〜６３
のフラクシ菖ンを合し、再びＣＭ−セファデックスＣ−
５０によるカラムクロマトグラフィーを行なった。前回
と同じ条件で酵素を吸着し、０〜０．５Ｍの塩化ナトリ
ウムで直線的濃度勾配により酵素出自質を溶出したつ このカラムクロマトグラフィーにおいて２〜４２　ｕｎ
ｉｔ　／　ｍｌのキトサナーゼ活性を示すワラクシ３ン
が得られたつ 参考例２　（キトサン軽度分解物の調製）２００　Ｊ容
三角フラスコにキトサン（脱アセチル化度＝９９％）１
ｇを入れ、これに蒸留水５０イを加え、さらにＩＮ酢酸
９−を加え、充分に撹拌して溶解した。これに１Ｍ酢酸
ナトリウム水溶液を加えて、ｐＨを６．０に調整した後
、蒸留水を加えて、全１量を１００−にした。参考例１
で俗だキトサナーゼ溶液に蒸留水を加えて、キトサナー
ゼ活性を０．５　ｕｎｉｔ　／−に調整し、得られたキ
トサナーゼ溶液２−を前記で得たキトサン溶液に加え、
反応液を３７℃のインキュベーターに入れ、３７℃にお
いて３時間反応させた後、反応液の入った三角フラスコ
をＰルとう浴に浸漬し、５分間煮ＮＪＢ　シて、反応を
停止し、キトサン軽度分解物溶液を得た。

このキトサン軽度分解物溶液のジャーレス（５ｈａｌｅ
ｓ　）　１１法〔ティー・イモト：アグリヵルチュラル
・バイオロジカル・ケミストリ（ｒ、　Ｉｍｏｔｏ　：
　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　ＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＣ
ｈｅｍｉｓｔｒｙ　）第３５巻ｊＪ　１１５４−１１５
６　ｍ（１９７１年）〕による生生成還元量は８′ｍｇ
・Ｄ−グルコサミン／Ｉｇ・キトサンであった。

実施例！ キトサンｆ１．度分解物の粉末をプラスチックスフィル
ム面にふりかけて抗菌性および抗カビ性を有するフィル
ムを調製した。

塩化ビニル樹脂（商品名：カネビニル５１００Ｉ　。

鐘渕化学社製品）　　ｉｏｏ重噛部、ジオクチルフタレ
ート（商品名：ｏｏｐ、三建化工社製品）２５重量部、
熱安定剤（商品名：ｐｏ−ｓ、昭島化学社製品）１重量
部およびステアリン酸（？４ｒＩ剤）０．３重機部の混
合物を１６０°Ｃの加熱ロールにおいて５分間混練した
後、カレンダーロールによって、１７５６Ｃにおいて加
熱圧延して、厚さＱ、Ｑ５ｍの塩化ビニルＭＮフィルム
を成形した。カレンダーロールと冷却ロールの中間で、
参考例２で得られたキトサン軽度分解物溶液をＩＴα霧
乾爆して得られたキトサン軽度分解物の粉末を、粉ふり
装＠（ｍｌ磁石により振動しながら粉体を散布する装置
）より１ｍ”ｅｌｏ、５ｇの割合で、塩化ビニルＭＢＰ
ｓフィルムに散布しながら塩化ビニルｍ脂フィルムを冷
即し、巻取ロールに巻取った。このフィルムには、１ｄ
当り０．５ｇのキトサン軽度分解物が付着していた。

この塩化ビニル樹脂フィルムを使用し、その内面にキト
サン軽度分解物が付着した袋（１０ｃｍＸ１０−）を製
作した。

これとは別に、肉エキスｌｏｇ、ペプトン１０ｇおよび
塩化ナトリウム５ｇを蒸留水に溶解し、ｐＨを６．０に
ｌｊｓ整した後、蒸留水を加え、全量を１０００−にし
て、ブイヨン培地を調製した。

このブイヨン培地ＩＯ−を先に製作したキトサン軽度分
解物の付着した塩化ビニル樹脂フィルムの袋に取り、滅
菌した後、エシェリヒア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉ
ａ　ｃｏｌｔ　）を接種し、３０°Ｃにおいて２４時間
培養した。

前記の塩化ビニル樹脂フィルムの袋の製作において、キ
トサン軽度分解物の粉末を散布せずに成形した塩化ビニ
ル樹脂フィルムの袋を、対照試料として製作し、前記と
同様にして、エシェリヒア・コリを接種し、培養した。

培養後の塩化ビニル樹脂フィルムの袋の中のブイヨン培
地における澗りの発生を肉眼で観察した。

対照試料では、総べてのブイヨンＩＩ！ｌ１ｔＩに濁り
が発生して、エシェリヒア・コリが生育し、増殖してい
たのに対して、キトサン軽度分解物が付着した実施例１
の塩化ビニルｍ脂フィルムの袋では、総べてのブイヨン
培地に濁りが発生しておらず、エシェリヒア・コリの生
育および増殖がなかった。

実施例２ キトサン軽度分解物の溶液をプラスチックスフィルム面
にスプレーして、抗菌性および抗カビ性を有するフィル
ムを調製した。

ポリエチレン樹脂　（商品名：スミカセンＬ１住友化学
社製品）を押出機に供給し、Ｔダイより押出して、厚さ
０．０３１１１１のポリエチレンフィルムを成形し、Ｔ
ダイと冷却ロールの中間において、参考例２で得られた
キトサン軽度分解物の溶液をポリエチレンフィルムの上
面に５ｇ／−の割合でスプレーした後、８０°Ｇの温風
をポリエチレンフィルム面に吹き付けて、キトサン軽度
分解物が０．２／ｌ／ｍ”の量において付着したポリエ
チレンフィルムを得た。

このポリエチレンフィルムを使用し、キトサン軽度分解
物が内面に付着した袋（ｔｏｃｍｘｔｏα）を製作した
。

前記のポリエチレンフィルムの袋の製作において、キト
サン軽度分解物の溶液をスプレーせずに成形したポリエ
チレンフィルムを使用し、キトサン軽度分解物の付着し
ていないポリエチレンフィルムの袋を、対照試料として
製作した。

これらの袋を使用し、実施例１と同様にして、ブイヨン
培地におけるエシェリヒア・コリの生育および増殖の試
験を行ない、それぞれの袋の中のブイヨン培地における
濁りの発生を肉眼で観察し、実施例２のキトサン軽度分
解物の付着したポリエチレンフィルムを使用した袋では
、エシェリヒア・コリの生育および増殖が見られなかっ
たのに対して、対照試料の袋では、エシェリヒア・フリ
の生育および増殖が観察された。

実施例３ キトサン軽度分解物の溶液を、凹版印刷法によってプラ
スチックスフィルム面に付着し、抗菌性および抗カビ性
を有するフィルムを調製した。

参考例２で得られたキトサン軽度分解物の溶液１００−
に１５％ポリビニルアルコール水溶液〔商品名：デンカ
ボールＢ２０、電気化学工業（株）製品〕２０ａｇを加
えて、溶液の粘度を１０，０００　ｅｐ（２０°Ｃ）に
調整し、キトサン軽度分解物の印刷用溶液を得た。

実施例１の塩化ビニルＭＨ脂フィルムの成形において、
カレンダーロールと冷却ロールの間におけるキトサン軽
度分解物の粉末の散布を行なうことなく、塩化ビニル樹
脂フィルムを成形し、キトサン軽度分解物が付着してい
ない塩化ビニル樹脂フィルムを調製し、これを幅１０ｍ
および長さ５ｍに裁断し、グラビア印刷機において、前
に調製したキトサン軽度分解物の印刷用溶液を塩化ビニ
ル樹脂フィルムの裁断片の表面に印刷した東、８０℃の
温風を印刷面に吹き付け、キトサン軽度分解物が０．５
ｆｌ／−の量において付着した塩化ビニルＭ脂フィルム
を得た。

この塩化ビニル樹脂フィルムおよびキトサン軽度分解物
が付着していない塩化ビニル樹脂フィルムを使用し、実
施例！と同様にして、エシェリヒア・フリの生育および
増殖を試験し、実施例Ｉと同様に、キトサン軽度分解物
の付着しない塩化ビニルｔｌｄＢフィルムの対照試料で
は、エシェリヒア・コリの生育および増殖が見られたの
に対し、キトサン軽度分解物の付着した実施例３の試料
では、エシェリヒア・コリの生育および増殖が観察され
なかったという結果を得た。

参考例３　（コラーゲンフィルムの調製）牛皮の真皮コ
ラーゲンを水酸化カルシウムの飽和溶液に２日間浸漬し
て、コラーゲン以外のものを除去した後、塩酸を加えて
、中和した。中和後の真皮を１〜２ｄに細切した後、ｐ
Ｈ３の塩酸に浸漬して、コラーゲンを膨潤し、これを機
械的に粉細して、個々のコラーゲン繊維にまでほぐした
。

この液のコラーゲン濃度を３％に調節した後、よく混合
して、脱泡し、コラーゲンフィルム製造原−液を調製し
た。

この原液を環状ノズルを有する押出機より飽和食塩水の
凝固液に押し出して、固化し、円筒状のフィルムを１％
アンモニア水で中和した後、水洗して、コラーゲンフィ
ルムを調製した。

実施例４ １％グリセリン水溶液に、参考例２のキトサン軽度分解
物を０．１％の濃度に溶解し、このキトサン軽度分解物
溶液に、参考例３で得た円筒状のコラーゲンフィルムに
浸漬した後、コラーゲンフィルムを引き上げ、円筒状の
コラーゲンフィルム内に空気を吹き込み、乾燥して、キ
トサン軽度分解物が０．Ｉｊｌ／−の量において付着し
たコラーゲンフィルムを得た。

このキトサン軽度分解物の付着したコラーゲンフィルム
と参考例３のコラーゲンフィルムについて抗菌性および
抗カビ性の試験を行なった〇参考例３のコラーゲンフィ
ルムでは、ＫＢ閑およびカビの生育および増殖が認めら
れたが、実施例４のキトサン軽度分解物の付着したコラ
ーゲンフィルムでは、細菌およびカビの生育および増殖
は認められなかった。

実施例５ 参考例３で得た円筒状のコラーゲンフィルムに、実施例
４と同様にして得たキトサン軽度分解物の０・５％溶液
を霧吹きによって吹き付けた後、風乾して、キトサン軽
度分解物がｏ、ｚｇ７ｒｔｒ”の量において付着したコ
ラーゲンフィルムを得た。

このキトサン軽度分解物の付着したコラーゲンフィルム
と参考例３のコラーゲンフィルムについて抗菌性および
抗カビ性の試験を行なったが、実施例５のキトサン軽度
分解物の付着したコラーゲンフィルムには、抗菌性およ
び抗カビ性が認められた。

【図面の簡単な説明】

ｇｔ図は、バチルス阻７−　Ｈにより生産されたキトサ
ナーゼにおける温度と比活性の関係を示す図表、第２図
は、バチルス陽、７−■により生産されたキトサナーゼ
におけるｐｉｆと比活性の関係を示す図表、第３図は、
バチルスに７−Ｈにより生産されたキトサナーゼにおけ
る温度と比活性の関係を示す図表、第４図は、バチルス
Ｎｏ、７−Ｈにより生産されたキトサナーゼにおけるｐ
Ｈと比活性の関係を示す図表、第５図は、バチルスＮａ
７−Ｈにより生産されたキトサナーゼの電気泳動法によ
る分子量を示す図表、そして第６図は、バチルス１’ｈ
７−Ｈにより生産されたキトサナーゼのゲル濾過法によ
る分子量を示す図表である。 出願人　片倉チッカリン株式会社 （ほか１名） 代理人　弁理士　律　［Ｅ　　　昭 ＰＭ 第２８ Ｈ ￥ｒ１４図

Claims (11)

【特許請求の範囲】
1. （１）フィルムにキトサンまたはキトサン軽度分解物を
   付着することを特徴とする抗菌性および抗カビ性を有す
   るフィルムの製造法。
2. （２）フィルムが、成形直後のものであることを特徴と
   する特許請求の範囲第１項に記載の抗菌性および抗カビ
   性を有するフィルムの製造法。
3. （３）キトサンまたはキトサン軽度分解物が、粉末状で
   あることを特徴とする特許請求の範囲第２項に記載の抗
   菌性および抗カビ性を有するフィルムの製造法。
4. （４）キトサンまたはキトサン軽度分解物が、溶液状で
   あることを特徴とする特許請求の範囲第２項に記載の抗
   菌性および抗カビ性を有するフィルムの製造法。
5. （５）キトサンまたはキトサン軽度分解物の付着が、凹
   版印刷法により行なわれることを特徴とする特許請求の
   範囲第１項または第２項に記載の抗菌性および抗カビ性
   を有するフィルムの製造法。
6. （６）キトサン軽度分解物が、キトサンを１２０ｍｇ・
   Ｄ−グルコサミン／１ｇ・キトサンよりも多くない生成
   還元糖量にまで分解されたものであることを特徴とする
   特許請求の範囲第１項ないし第５項のいずれかに記載の
   抗菌性および抗カビ性を有するフィルムの製造法。
7. （７）キトサン軽度分解物が、バチルスＮｏ．７−Ｍ（
   微工研菌寄第８１３９号）により生産されたキトサナー
   ゼによるキトサンの分解によって得られたものであるこ
   とを特徴とする特許請求の範囲第１項ないし第６項のい
   ずれかに記載の抗菌性および抗カビ性を有するフィルム
   の製造法。
8. （８）フィルムが、放電加工による親水化処理をしたも
   のであることを特徴とする特許請求の範囲第５項ないし
   第７項のいずれかに記載の抗菌性および抗カビ性を有す
   るフィルムの製造法。
9. （９）フィルムが、強酸化剤による表面処理をしたもの
   であることを特徴とする特許請求の範囲第３項ないし第
   ７項のいずれかに記載の抗菌性および抗カビ性を有する
   フィルムの製造法。
10. （１０）フィルムが、プラスチックスフィルムであって
    、塩化ビニル樹脂フィルム、ポリエチレンフィルム、ポ
    リプロピレンフィルムおよび塩化ビニリデン樹脂フィル
    ムからなる群より選択されたものであることを特徴とす
    る特許請求の範囲第１項ないし第９項のいずれかに記載
    の抗菌性および抗カビ性を有するフィルムの製造法。
11. （１１）フィルムが、コラーゲンフィルムであることを
    特徴とする特許請求の範囲第１項ないし第１０項のいず
    れかに記載の抗菌性および抗カビ性を有するフィルムの
    製造法。